ES2393317T3 - Medio exento de proteínas animales para el cultivo de células - Google Patents

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Abstract

Un medio de cultivo celular exento de proteínas animales que comprende al menos una poliamina y almenos un hidrolizado de proteínas derivado del grupo formado por vegetales y levaduras, en el que la poliaminaestá presente en el medio de cultivo en una concentración que varía entre 2 y 5 mg/L y el hidrolizado de proteínasestá presente en una concentración que varía desde el 0,05 % (p/v) hasta el 0,25 % (p/v).

Description

CAMPO DE LA INVENCIÓN
La presente invención se refiere a un medio de cultivo celular exento de proteínas animales que comprendeuna poliamina y un hidrolizado derivado de vegetales y/o de levaduras. La invención también se refiere a procesosde cultivo exentos de proteínas animales, en los que las células pueden ser cultivadas, propagadas y pasadas sin añadir proteínas animales complementarias al medio de cultivo. Estos procesos son útiles para cultivar células, talescomo células recombinantes o células infectadas con un virus, y para producir productos biológicos medianteprocesos de cultivo celular.
ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
Para el cultivo de células, particularmente de células eucariotas, y más específicamente células de mamífero, existe una necesidad constante de usar medios de cultivo especiales que hacen disponibles las sustancias nutrientes de crecimiento que son necesarias para un crecimiento eficaz de las células y para laproducción de las proteínas o de los virus que se desean. Para la producción eficaz de productos biológicos, talescomo virus o proteínas recombinantes, es importante que se alcance una densidad celular óptima, así como que seaumente la propia expresión de proteínas para obtener un rendimiento máximo del producto.
Las formulaciones de medios de cultivos celulares se han complementado con diversos aditivos, que incluyen componentes no definidos tales como suero bovino fetal (fetal calf serum, FCS), diversas proteínas derivadas de animales y/o hidrolizados de proteínas de origen bovino.
En general, el suero o las sustancias derivadas del suero, tales como la albúmina, la transferrina o lainsulina, pueden contener agentes no deseados que pueden contaminar los cultivos celulares y los productosbiológicos obtenidos a partir de los mismos. Adicionalmente, los aditivos derivados de suero humano deben serensayados para comprobar todos los virus conocidos, incluyendo hepatitis y VIH, que pueden ser transmitidos por elsuero. Además, el suero bovino y los productos derivados del mismo son portadores de un riesgo de contaminaciónpor BSE. Además, todo los productos derivados de suero pueden estar contaminados por constituyentesdesconocidos. En el caso del suero o de aditivos proteicos que derivan de seres humanos o de otras fuentesanimales en cultivos celulares, existen numerosos problemas (por ejemplo, la calidad variable de la composición delos diferentes lotes y el riesgo de contaminación por micoplasma, virus o BSE), particularmente si las células se usan para la producción de fármacos o de vacunas para su administración a seres humanos.
Por lo tanto, se han realizado muchos intentos para proporcionar sistemas hospedadores y condiciones decultivo eficaces que no requieran suero ni otros compuestos proteicos animales. El medio simple exento de sueroincluye típicamente medio basal, vitaminas, aminoácidos o sales orgánicas o inorgánicas, y opcionalmente componentes adicionales para hacer el medio nutricionalmente complejo.
Se sabe que los hidrolizados de soja son útiles para los procesos de fermentación y pueden mejorar elcrecimiento de muchos organismos de cultivo difícil, levaduras y hongos. El documento WO 96/26266 describe quelos digeridos papaicos de harina de soja son una fuente de carbohidratos y de nitrógeno y muchos de los componentes pueden usarse en un cultivo tisular. Franek y col. (Biotechnology Progress (2000) 16, 688 – 692) describen los efectos promotores del crecimiento y de la productividad de fracciones peptídicas definidas del hidrolizado de soja.
El documento WO 96/15231 desvela un medio exento de suero formado por medio sintético mínimoesencial y extracto de levadura para la propagación de células de vertebrados y procesos de producción de virus. Enel documento WO 98/15614. Se desvela una formulación de medio compuesta por medio de un cultivo de células basal que comprende un péptido de arroz y un extracto de levadura, y la digestión enzimática de los mismos, y/o unlípido vegetal para el crecimiento. En el documento WO 01/23527 se desvela un medio que comprende un hidrolizado de soja purificado para el cultivo de células recombinantes. El documento WO 00/03000 desvela un medio que comprende un hidrolizado de soja y un extracto de levadura, pero también requiere la presencia deformas recombinantes de proteínas animales, tales como factores de crecimiento.
El documento WO2004/005493 describe un medio de cultivo celular exento de proteínas animales quecomprende una combinación de péptidos no derivados de animales procedentes de hidrolizado de soja e hidrolizadode levadura animal. El documento WO01/11021 se refiere a un clon celular recombinante estable que es estable enun medio que no contiene suero y proteínas durante al menos 40 generaciones. El documento FR72.29396 describeun medio de cultivo para la selección de bacterias en el que el medio está exento de proteínas animales. El documento WO02/24876 se refiere a un proceso para aislar virus procedentes de varias fuentes y para producirvacunas antigripales de virus vivos atenuados en un cultivo celular Vero exento de suero en unas condiciones en lasque se minimizan o se evitan alteraciones en los antígenos de superficie del virus debido a la selección adaptativa.
El documento EP-A-0 481 791 describe un medio de cultivo bioquímicamente definido para cultivar célulasCHO modificadas genéticamente que está exento de proteínas, lípidos y carbohidratos aislados a partir de una fuente animal, que comprende además una insulina recombinante o un análogo de insulina, del 1 % al 0,025 % p/vde digerido de papaína de peptona de soja y putrescina. El documento WO 98/08934 describe un cultivo celular eucariota exento de suero que comprende péptidos de hidrolizado de soja (1 – 1000 mg/L), de 0,01 a 1 mg/L deputrescina y varios componentes derivados de animales, incluyendo albúmina, fetuína, varias hormonas y otrasproteínas. En este contexto, también debería mencionarse que también se sabe que la putrescina está contenida enmedios estándar tales como DMEM/Ham's F12 a una concentración de 0,08 mg/L.
Sin embargo, los medios conocidos en el estado de la técnica son a menudo nutricionalmente insuficientesy/o deben ser complementados con complementos proteicos derivados de animales o versiones recombinantes deproteínas, tales como insulina, factor de crecimiento insulinoide u otros factores de crecimiento.
Por lo tanto, existe una necesidad actual de aumentar el rendimiento de la proteína recombinanteexpresada o de cualquier otro producto de expresión, y de la tasa de crecimiento específica de las células, y deproporcionar un medio de cultivo celular óptimo completamente exento de proteínas animales para la producción deproductos biológicos, tales como los usados como productos farmacéuticos o como vacunas en seres humanos.
Sobre la base de extractos de peptona de soja (también denominado "hidrolizados de soja") se han desarrollado medios que no contienen proteínas animales. Sin embargo, la calidad de los lotes disponibles comercialmente de hidrolizados de soja varía extremadamente y, como resultado, existen amplias variaciones en laproducción de proteínas recombinantes o de productos víricos (una variación de hasta en un factor de 3) en funciónde los lotes de hidrolizado de soja usados ("variación interlote"). Este inconveniente afecta a la proliferación de lascélulas, así como a la expresión proteica de cada célula.
Por lo tanto, hay una necesidad de un medio de cultivo celular exento de proteínas animales que estécompletamente exento de proteínas animales y supere al menos uno de los problemas mencionados anteriormente.
RESUMEN DE LA INVENCIÓN
Un objeto de la presente invención es proporcionar un medio de cultivo celular exento de proteínasanimales que no contenga ninguna proteína complementaria añadida derivada de una fuente animal ni/o proteínas animales recombinantes, que permita un crecimiento celular eficaz y en particular la producción proteica, con unacalidad continua con respecto a la cantidad de expresión por célula. Un objeto adicional de la presente invención esproporcionar un procedimiento para cultivar células y un procedimiento para la expresión eficaz de proteínas recombinantes que están exentas de proteínas animales.
Otro objeto de la presente invención es reducir el hidrolizado derivado de vegetales y/o de levaduras conobjeto de superar los efectos inhibidores que impactarían negativamente sobre el rendimiento de la producción deun producto recombinante o vírico deseado. Sorprendentemente se encontró que los hidrolizados eran la causa delas variaciones interlote en la producción.
El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la invención comprende al menos unapoliamina y un hidrolizado derivado de vegetales y/o de levaduras, en el que la poliamina se origina preferiblemente a partir de una fuente distinta al hidrolizado de proteínas.
Sorprendentemente, la adición de al menos una poliamina, en particular la adición de putrescina, al mediode cultivo celular exento de proteínas animales, proporciona el efecto ventajoso no sólo de promocionar elcrecimiento celular, sino en particular de aumentar la expresión de proteínas por célula, y en particular, la expresiónde proteínas recombinantes por célula.
Además, el medio exento de proteínas animales según la presente invención proporciona un crecimientocelular uniforme y un aumento en el rendimiento de los productos deseados, particularmente de proteínas objetivotales como proteínas recombinantes, independientemente de la calidad o de las variaciones del lote del hidrolizado de proteínas, en particular de los hidrolizados vegetales, en el medio de cultivo celular exento de proteínas animales.La complementación específica de un medio de cultivo celular con poliaminas y un hidrolizado derivado de vegetales y/o de levaduras actúa sinérgicamente para aumentar el crecimiento celular, la productividad específica celular y ladensidad celular final.
Por lo tanto, el medio exento de proteínas animales según la presente invención es más favorable para la expresión de proteínas recombinantes y la tasa de crecimiento celular en comparación con los medios conocidos enla materia. Adicionalmente, el medio exento de proteínas animales según la presente invención permite la reducciónde la cantidad de hidrolizado de proteínas que se debe añadir a un volumen dado del medio de cultivo celular.
BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS
La Figura 1 muestra una gráfica que compara (A) la productividad volumétrica de FVIII-CoA (expresada en[U/L/D] = unidades de FVIII COA por L de volumen de reactor por día y (B) la tasa de crecimiento específica (I expresada en [d-1] = 1 por día) de células GD8/6 en función del medio usado para el cultivo, que fueron complementadas con diferentes lotes (K119-1, K138-1, M022963, M024423, M022453) de hidrolizados de soja (0,4% (p/v)).
La Figura 2 muestra una tabla que compara la productividad volumétrica de FVIII-CoA de células GD8/6crecidas en medios con diferentes concentraciones de hidrolizado de soja.
La Figura 3 muestra una tabla que compara la productividad volumétrica de FVIII-CoA de células GD8/6 en función del medio usado para el cultivo, que fueron complementados con diferentes lotes (K119-1, K138-1, M022963, M024423, M022453) de hidrolizados de soja (0,25 % (p/v)) (A) en ausencia de putrescina, y (B) enpresencia de 1 mg/L de putrescina · 2 HCl.
La Figura 4 muestra una gráfica que compara las tasas de crecimiento específicas de células GD8/6 enfunción del medio usado para el cultivo, que fueron complementados con 5 lotes diferentes (K119-1, K138-1, M022963, M024423, M022453) de hidrolizados de soja (0,25 % (p/v)) (A) en ausencia de putrescina, y (B) enpresencia de 1 mg/L de putrescina · 2 HCl.
La Figura 5 muestra una tabla que compara la productividad volumétrica de FVIII-CoA (QP [U/L/D]) y la tasa de crecimiento específica (I [d-1]) de células GD8/6 y su desviación estándar crecidas en medio con 5 lotesdiferentes seleccionados (K119-1, K138-1, M022963, M024423, M022453) de hidrolizados de soja (0,4 % (p/v) o0,25 % (p/v)) con los mismos hidrolizados de soja (0,25 % (p/v)) con y sin putrescina · 2 HCl a 1 mg/L.
La Figura 6 muestra una tabla que describe las concentraciones medias de putrescina encontradas enhidrolizados de soja (0,4 % (p/v) en medio de cultivo celular) procedentes de diferentes fabricantes.
La Figura 7 muestra una tabla que compara el efecto del hidrolizado de soja ((0,4 % (p/v)) y del hidrolizadode soja (0,25 % (p/v)) + 1,8 mg/L de putrescina · 2 HCl sobre la productividad volumétrica (QP expresada en [mgIgG1/L de volumen del reactor/día] y la productividad específica celular (qp [Ig lgG1/células 10E06/d]) en células ARH77 que secretan un anticuerpo monoclonal.
La Figura 8 muestra una gráfica que compara el efecto del hidrolizado de soja (0,25 % (p/v)) y del hidrolizado de soja (0,25 % (p/v)) + 1 mg/L de putrescina (1,8 mg/L de putrescina · 2 HCl) sobre la productividad específica celular de eritropoyetina (EPO) de células BHK recombinantes (producción de EPO (unidades) / consumode glucosa (g).
La Figura 9 muestra una tabla que compara el efecto de la putrescina, la ornitina y la espermina sobre unamplio intervalo de concentraciones (0 – 18 mg/L) sobre el crecimiento específico (I, absoluto, I relativo) y laproductividad celular específica (Qp absoluta, Qp relativa) de células GD8/6 cultivadas en medio BAV que contiene un 0,0 % de hidrolizado de soja y ninguna amina, o en medio BAV que contiene una concentración reducida dehidrolizado de soja del 0,25 % complementada con poliaminas en el intervalo de concentraciones indicado anteriormente. BAV – SP al 0,25 % = medio BAV que contiene un 0,25 % de hidrolizado de soja; BAV – SP al 0,4 % = medio BAV que contiene un 0,4 % de hidrolizado de soja; BAV sin soja ni poliaminas = medio BAV que nocontiene ni hidrolizado de soja ni poliaminas.
DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
La invención se establece en las reivindicaciones.
Un aspecto de la invención se refiere a un medio de cultivo celular exento de proteínas animales quecomprende al menos una poliamina y un hidrolizado derivado de vegetales y/o de levaduras, en una concentraciónlo suficientemente reducida con objeto de evitar los potenciales efectos inhibidores del hidrolizado.
El término "poliamina" se refiere a cualquiera de un grupo de compuestos orgánicos formados por carbono, nitrógeno e hidrógeno, y que contienen dos o más grupos amino. Por ejemplo, el término engloba moléculaselegidas del grupo formado por cadaverina, putrescina, espermidina, espermina, agmatina y ornitina.
Salvo que se indique de otro modo, los valores de concentración indicados a lo largo de este documento se refieren a la forma de base libre del (los) componente(s).
En el medio de cultivo celular exento de proteínas animales descrito en este documento, la concentraciónde la poliamina está presente en una concentración que varía desde aproximadamente 0,5 mg/L hastaaproximadamente 30 mg/L, más preferiblemente desde aproximadamente 0,5 mg/l hasta aproximadamente 20 mg/L, incluso más preferiblemente desde aproximadamente 0,5 mg/L hasta aproximadamente 10 mg/L, más preferiblemente desde aproximadamente 2 mg/L hasta aproximadamente 8 mg/L, muy preferiblemente desdeaproximadamente 2 hasta aproximadamente 5 mg/L en el medio.
La concentración total del hidrolizado de proteínas derivadas de vegetales y/o levaduras en el medio decultivo celular exento de proteínas animales descrito en este documento es de aproximadamente el 0,05 % hastaaproximadamente el 5 % (p/v), más preferiblemente de aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 2 %(p/v), más preferiblemente de aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 1 % (p/v), más preferiblementede aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 0,5 % (p/v), muy preferiblemente de aproximadamente el0,05 % hasta aproximadamente que el 0,25 % (p/v); es decir, si el medio contiene un hidrolizado de proteínasderivado de vegetales y de levaduras, la concentración total se calcula sumando los valores de concentración de cada uno de los componentes del hidrolizados de proteínas contenido en el medio.
El término "medio de cultivo celular exento de proteínas animales" según la presente invención se refiere aun medio que no contiene proteínas ni/o componentes proteicos procedentes de eucariotas pluricelulares novegetales. Las proteínas típicas que se evitan son las que se encuentran en el suero y en sustancias derivadas delsuero, tales como albúmina, transferrina, insulina y otros factores de crecimiento. El medio de cultivo celular exentode proteínas animales también está exento de cualquier producto purificado derivado de animales y de productosderivados de animales recombinantes, así como de digeridos proteicos y extractos de los mismos o de extractoslipídicos o componentes purificados de los mismos. Las proteínas animales y los componentes proteicos deben distinguirse de las proteínas no animales, pequeños péptidos y oligopéptidos obtenibles a partir de plantas(habitualmente de 10 – 30 aminoácidos de longitud), tales como la semilla de soja, y de eucariotas inferiores, talescomo levaduras, que pueden incluirse en el medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la invención.
El medio de cultivo exento de proteínas animales según la invención puede basarse en cualquier medio basal tal como DMEM, Ham's F12, medio 199, McCoy o RPMI conocidos generalmente por el trabajador experto. Elmedio basal puede comprender varios ingredientes, incluyendo aminoácidos, vitaminas, sales orgánicas e inorgánicas, y fuentes de carbohidratos, estando presente cada ingrediente en una cantidad que sustente el cultivode una célula que generalmente es conocido por el experto en la materia. El medio puede contener sustanciasauxiliares, tales como sustancias tamponantes como bicarbonato sódico, antioxidantes, estabilizantes para contrarrestar el estrés mecánico, o inhibidores de la proteasa. Si se requiere puede añadirse como agenteantiespumante un tensioactivo no iónico, tal como mezclas de polietilenglicoles y propilenglicoles (por ejemplo, Pluronic F68 ®, SERVA).
La poliamina empleada para el medio de cultivo exento de proteínas animales según la invención puedeelegirse del grupo formado por cadaverina, putrescina, espermidina, espermina, agmatina, ornitina y combinaciones de las mismas. Muy preferiblemente, el medio de cultivo exento de proteínas animales contiene ornitina, putrescina y espermina.
En una forma de realización preferida del medio de cultivo exento de proteínas animales, la poliaminacontrola la síntesis de ADN y de ARN, la proliferación celular, la diferenciación celular, la estabilización de lamembrana y/o la protección antioxidante del ADN. La putrescina, la espermidina, la espermina y la ornitina sonejemplos de poliaminas que muestran estas funciones. Otro ejemplo de una poliamina es la cadaverina.
En otra forma de realización preferida del medio de cultivo exento de proteínas animales, la poliamina seorigina a partir de una fuente distinta al hidrolizado de proteínas.
En el medio de cultivo celular exento de proteínas animales según se describe en este documento, lapoliamina está presente en una concentración que varía desde aproximadamente 0,5 hasta aproximadamente 30mg/L, más preferiblemente desde aproximadamente 0,5 mg/L hasta aproximadamente 20 mg/L, incluso más preferiblemente desde aproximadamente 0,5 mg/L hasta aproximadamente 10 mg/L, más preferiblemente desdeaproximadamente 2 mg/L hasta aproximadamente 8 mg/L, muy preferiblemente desde aproximadamente 2 hastaaproximadamente 5 mg/L en el medio, y el hidrolizado de proteínas derivado de plantas y/o de levaduras que está presente en el medio en una concentración que varía desde aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el5 % (p/v), más preferiblemente aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 2 % (p/v), más preferiblemente aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 1 % (p/v), más preferiblementeaproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 0,5 % (p/v), muy preferiblemente aproximadamente el 0,05% hasta aproximadamente el 0,25 % (p/v).
El hidrolizado de proteínas derivado de vegetales usado para el medio de cultivo celular exento deproteínas animales según la invención se elige preferiblemente del grupo formado por un hidrolizado de cereales y/oun hidrolizado de soja. El hidrolizado de soja puede ser un hidrolizado de soja altamente purificado, un hidrolizadode soja purificado o un hidrolizado de soja en bruto.
El término "hidrolizado" incluye cualquier digerido enzimático de un extracto vegetal o de levadura. El "hidrolizado" puede ser adicionalmente digerido enzimáticamente, por ejemplo, mediante papaína, y/o formadomediante autolisis, termolisis y/o plasmolisis. Los hidrolizados que se van a usar según la presente invencióntambién están disponibles comercialmente, tales como HyPep 1510®, Hy-Soy®, Hy-Yeast 412® y Hi-Yeast 444®, defuentes tales como Quest International, Noruega, NY, OrganoTechnie, S.A. Francia, Deutsche Hefewerke GmbH,Alemania, o DMV Intl. Delhi, NY. Algunas fuentes de extractos de levadura y de hidrolizados de soja también sedesvelan en los documentos WO 98/15614, WO 00/0300O, WO 01/23527 y US 5.741.705.
Los hidrolizados se purifican preferiblemente a partir de la fracción en bruto, ya que las impurezas podríaninterferir con un cultivo eficaz. La purificación puede llevarse a cabo mediante ultrafiltración o con cromatografía deSephadex, por ejemplo, con Sephadex 25 o Sephadex G10 o materiales equivalentes, cromatografía de intercambioiónico, cromatografía de afinidad, cromatografía de exclusión por tamaños o cromatografía en fase inversa. Lasfracciones pueden contener hidrolizados con un peso molecular definido, preferiblemente de hasta aproximadamente 1000 Dalton, más preferiblemente de hasta aproximadamente 500 Dalton, muy preferiblemente dehasta aproximadamente 350 Dalton. Al menos aproximadamente el 90 % del hidrolizado tiene preferiblemente unpeso molecular de hasta aproximadamente 1000 Dalton. El peso molecular medio de los hidrolizados está preferiblemente entre aproximadamente 220 y aproximadamente 375 Daltons. El valor del pH del hidrolizado debería estar en el intervalo de desde aproximadamente 6,5 hasta aproximadamente 7,5. El contenido total en nitrógenoestá preferiblemente entre aproximadamente el 5 y aproximadamente el 15 %, y el contenido en cenizas es preferiblemente de hasta aproximadamente el 20 %. El contenido en aminoácidos libres está preferiblemente entre aproximadamente el 5 % y aproximadamente el 30 %. El contenido en endotoxinas es preferiblemente menor deaproximadamente 500 U/g.
La invención también proporciona un procedimiento para usar al menos una poliamina para su adición a unmedio de cultivo celular exento de proteínas animales que contiene un hidrolizado de proteínas derivado de vegetales y/o de levaduras, para aumentar el rendimiento de la expresión de proteínas en las células cultivadas. Lapoliamina puede estar presente en el medio de cultivo descrito en este documento en una concentración total quevaría desde aproximadamente 0,5 hasta aproximadamente 30 mg/L, más preferiblemente desde aproximadamente0,5 mg/L hasta aproximadamente 20 mg/L, incluso más preferiblemente desde aproximadamente 0,5 mg/L hasta aproximadamente 10 mg/L, más preferiblemente desde aproximadamente 2 mg/L hasta aproximadamente 8 mg/L,muy preferiblemente desde aproximadamente 2 hasta aproximadamente 5 mg/L en el medio. Preferiblemente, lapoliamina se elige del grupo formado por cadaverina, putrescina, espermidina, espermina, agmatina, ornitina y combinaciones de las mismas. Preferiblemente, el hidrolizado de proteínas derivado de vegetales y/o de levadurasestá presente en el medio en una concentración que varía desde aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 5 % (p/v), más preferiblemente aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 2 %(p/v), más preferiblemente aproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 1 % (p/v), más preferiblementeaproximadamente el 0,05 % hasta aproximadamente el 0,5 % (p/v), muy preferiblemente aproximadamente el 0,05% hasta aproximadamente el 0,25 % (p/v).
La presente invención se refiere adicionalmente a un procedimiento para cultivar células, que comprendelas etapas:
al menos una poliamina y un hidrolizado derivado de vegetales y/o de levaduras. Preferiblemente, la poliamina se
(a)
proporcionar un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la invención, y
(b)
propagar las células en el medio para formar un cultivo celular.
En una forma de realización preferida, el medio de cultivo celular exento de proteínas animales comprende
origina a partir de una fuente distinta al hidrolizado de proteínas.
La presente invención no se limita a ningún tipo de célula. En una forma de realización preferida de lainvención, las células usadas son, por ejemplo, células de mamífero, células de insecto, células de ave, célulasbacterianas, células de levadura. Las células pueden ser, por ejemplo, células madre o células recombinantestransformadas con un vector para la expresión génica recombinante, o células transfectadas con un virus para producir productos víricos. Las células también pueden ser, por ejemplo, células que producen una proteína deinterés sin una transformación recombinante, por ejemplo, un linfocito B que produce un anticuerpo, que puede sertransformado a un estado inmortalizado, por ejemplo, mediante una infección vírica como la infección por el virus deEpstein Barr. Las células también pueden ser, por ejemplo, células primarias, por ejemplo, células embrionarias depollo, o líneas celulares primarias. Se prefieren las células que se usan para la producción de virus in vitro. En una forma de realización preferida las células pueden ser células BSC, LLC-MK, células CV-1, células COS, célulasVERO, células MDBK, células MDGK, células CRFK, células RAF, células RK, células TCMK-1, células LLCPK, células PK15, células LLC-RK, células MDOK, células BHK-21, células CHO, células NS-1, células MRC-5, células WI-38, células BHK, células 293, células RK y células embrionarias de pollo.
Las células que pueden usarse según la presente invención pueden cultivarse mediante un procedimiento elegido del grupo de cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivo quimioestático,todos los cuales generalmente son conocidos en la materia.
La presente invención se refiere adicionalmente a un procedimiento para expresar una proteína objetivo talcomo una proteína heteróloga o autóloga, o una proteína recombinante, que comprende las etapas de:
a) hacer crecer un cultivo de células en un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según lapresente invención; e
b) introducir en las células una secuencia de ácidos nucleicos que comprende una secuencia codificante parala proteína objetivo;
c) seleccionar las células portadoras de la secuencia de ácido nucleico; e
d) inducir selectivamente la expresión de la proteína objetivo en las células.
En una forma de realización preferida, el medio de cultivo celular exento de proteínas animales comprendeal menos una poliamina y un hidrolizado derivado de vegetales y/o de levaduras. Preferiblemente, la poliamina seorigina a partir de una fuente distinta al hidrolizado de proteínas.
La secuencia de ácidos nucleicos que comprende una secuencia codificante para la proteína objetivo puedeser un vector. El vector puede ser un virus o un plásmido. La secuencia codificante para una proteína objetivo puede ser un gen específico o una parte biológica funcional del mismo. En una forma de realización preferida, la proteínaobjetivo es al menos una parte biológicamente activa de un factor de coagulación sanguínea tal como el Factor VIII oal menos una parte biológicamente activa de una proteína implicada en la producción de eritrocitos y en la angiogénesis, tal como la eritropoyetina, o un anticuerpo monoclonal.
Preferiblemente, el ácido nucleico comprende adicionalmente otras secuencias adecuadas para la expresión controlada de una proteína objetivo, tales como secuencias promotoras, como potenciadores, cajas TATA, sitios de inicio de la transcripción, policonectores, sitios de restricción, secuencias de poli-A, secuencias deprocesado de proteínas, marcadores de selección y similares, que son generalmente conocidas por el experto en lamateria.
Son muy preferidas las siguientes líneas celulares transformadas con un vector recombinante para laexpresión de los productos respectivos: células CHO para la producción del factor de coagulación recombinante VIII, células BHK para la producción de eritropoyetina recombinante, virus de Epstein Barr transformado, linfocitos Bhumanos inmortalizados para la producción de anticuerpos humanos.
La presente invención se refiere adicionalmente a un procedimiento para producir un virus o una parte deun virus, que comprende las etapas de:
a) hacer crecer un cultivo de células en un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según lapresente invención; e
b) infectar las células con un virus;
c) seleccionar las células infectadas por el virus; e
d) incubar las células para propagar el virus.
En una forma de realización preferida, el medio de cultivo celular exento de proteínas animales comprendeal menos una poliamina y un hidrolizado derivado de vegetales y/o de levaduras. Preferiblemente, la poliamina seorigina a partir de una fuente distinta al hidrolizado de proteínas.
El virus usado en el procedimiento según la invención puede ser cualquier virus patógeno, de mamífero, preferiblemente un virus humano, tal como una vacuna de un virus atenuado, por ejemplo, vacunas contra la viruela, coronavirus, preferiblemente virus del SARS, por ejemplo, para la producción de vacunas frente al SARS, ortomioxivirus, preferiblemente virus de la gripe, por ejemplo, para la producción de vacunas contra la gripe,paramixovirus, retrovirus, virus de la gripe A o B, virus de Ross River, flavivirus, preferiblemente virus del Nilooccidental o virus de la FSME (es decir, virus de la encefalitis transmitida por garrapatas), por ejemplo, para la producción de las respectivas vacunas, picornavirus, arenavirus, herpesvirus, poxvirus o adenovirus.
El virus puede ser un virus natural, un virus atenuado, un virus reagrupado o un virus recombinante o combinaciones de los mismos, por ejemplo, atenuado y recombinante. Además, en lugar de los actuales virionesque se están usando para infectar células con un virus, puede usarse un clon infeccioso de un ácido nucleico.También pueden usarse viriones escindidos.
El procedimiento para expresar una proteína o para producir un virus puede usarse para producir composiciones inmunógenas que comprenden un virus o un antígeno vírico.
Las células usadas para el procedimiento para producir un virus pueden elegirse del grupo formado porcélulas de mamífero, células de insecto, células de ave, células bacterianas y células de levadura. Preferiblemente,las células se cultivan mediante un procedimiento elegido del grupo formado por cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivo quimioestático.
Las combinaciones preferidas de células con virus para producir un virus o una parte de un virus son célulaVero / vacuna atenuada, célula Vero / vacuna, célula Vero / Hepatitis A, célula Vero / virus de la gripe, célula Vero /virus del Nilo occidental, célula Vero / virus del SARS, células embrionarias de pollo / virus de la FSME.
La presente invención se refiere adicionalmente a un procedimiento para usar el medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la invención para cultivar células que expresan una proteína objetivo.
La presente invención se ilustrará ahora adicionalmente en los siguientes ejemplos, sin estar limitada a los mismos.
EJEMPLOS
Ejemplo 1 (medio BAV)
Se preparó un medio exento de proteínas animales con medio basal DMEM / HAM's F12 (1:1) complementado con sales inorgánicas, aminoácidos, vitaminas y otros componentes (Life technologies, 32500Powder). También se añadieron L-glutamina (600 mg/L), ácido ascórbico (20 IM), etanolamina (25 IM), Synperonic® (SERVA) (0,25 g/L), selenito sódico (50 nM). Adicionalmente el medio de cultivo celular fue complementado con aminoácidos esenciales. Además se añadieron concentraciones variables de hidrolizado desoja (Quest Technologies, NY o DMV Intl., NY) en un intervalo del 0,0 – 1,0 % y concentraciones variables de poliaminas (0 – 10 mg/L) (Figuras 1 – 9)
Ejemplo 2
Se hicieron crecer cultivos celulares de células de mamífero recombinantes (por ejemplo, células CHO que expresan de forma estable el Factor VIII = células GD8/6) en suspensión en un cultivo quimioestático en biorreactores de 10 L. Las condiciones de cultivo de 37 °C, saturación de oxígeno del 20 % y pH de 7,0 a 7,1 se mantuvieron constantes. Los cultivos se complementaron con un suministro constante de medio BAV según sedefine en el Ejemplo 1 complementado adicionalmente con hidrolizados de soja en el intervalo del 0,1 – 1,0 % y/o laadición de putrescina · 2 HCl en el intervalo de 0-1 mg/L (cotéjese la Figura 1 – 5),
Se llevaron a cabo experimentos a pequeña escala con células GD8/6 en cultivo de suspensión en matraces de agitación Techne a un volumen de trabajo de 200 ml en modo de reabastecimiento de lote a 37 °C, sincontrol del pH ni de la pO2. Los cultivos se complementaron con medio BAV según se define en el Ejemplo 1 sin elcomplemento de hidrolizado de soja ni poliaminas, o complementado con hidrolizado de soja en el intervalo del 0,1 –0,4 % y/o putrescina · 2 HCl, ornitina · HCL, espermina · 4 HCl en el intervalo de 0 – 18 mg/L (equivalente a 0 – 10mg/L de la poliamina sin HCl (cotéjese la Figura 9).
Ejemplo 3 (cotéjense las Figuras 1 a 5 7, y 9)
Se determinaron los recuentos celulares a partir de las células en suspensión o de las células inmovilizadasmediante el recuento con una cámara de recuento CASY® según describen Scharfe y col., (Biotechnologie en LaborPraxis 10: 1096 – 1103 (1988)) o mediante extracción con ácido cítrico y tinción fluorescente de los núcleos, seguidopor un recuento con un NodeoCounter ® (Chemometec, DK). La tasa de crecimiento específica (I) se calcula a partir del incremento de las densidades celulares (Xt) y/o la tasa de dilución (D) del estado estacionario de los cultivosquimioestáticos de las suspensiones de células a lo largo de un determinado intervalo de tiempo (t):
I = D + ln (Xt/X0) / t
Ejemplo 4
Se midió la actividad del Factor VIII (FVIII) (cotéjense las Figuras 1 a 5 y 9) mediante un ensayocromogénico (Chromogenic, Suecia). La actividad de la eritropoyetina (cotéjese la Figura 8) y el título de anticuerposmonoclonales (cotéjese la Figura 7) se midieron mediante sistemas de ensayo ELISA.
La productividad volumétrica se calcula a partir de la cantidad de unidades de actividad o de títulos de antígeno rendidos por litro de volumen de reactor por día (U/L/d o mg/L/d) en los respectivos sistemas de producción.
La productividad específica celular se define como la cantidad específica de proteína producida (U o Ig) pornúmero de células por día (cotéjense las Figuras 7 y 9) o como la cantidad específica de proteína producida (U)producida por cantidad de D-glucosa consumida por las células (cotéjese la Figura 8).
Ejemplo 5
Se suministraron células GD8/6 con medio BAV que contenía un 0,4 % (p/v) de diferentes lotes dehidrolizado de soja. La productividad volumétrica del FVIII varió desde aproximadamente 600 hasta 1800 U/L/d, y lastasas de crecimiento específicas variaron desde 0,35 hasta 0,52 I[d-1] entre los diferentes lotes (cotéjese la Figura1). Esto indica que los lotes de hidrolizado de soja a la concentración del 0,4 % no permiten un crecimiento uniformede las células GD8/6, posiblemente debido a la sustancias inhibidoras que afectan a la tasa de crecimiento específica (I) que están contenidas en los hidrolizados de soja.
Ejemplo 6
Se suministraron células GD8/6 con medio BAV que contenía diferentes concentraciones del lote delhidrolizado de soja M022257 (en el intervalo de 0,15 – 1,0 % p/v). La productividad volumétrica del FVIII varió desde 500 hasta 1,100 U/L/d y alcanzó una productividad óptima de 1,100 U/L/d a una concentración de hidrolizado de sojadel 0,4 % (p/v) (cotéjese la Figura 2).
Ejemplo 7
Se suministraron células GD8/6 con medio BAV que contenía un 0,25 % (p/v) de los mismos 5 lotes diferentes de hidrolizado de soja descritos en el Ejemplo 5 (Figuras 3A y 4A) y un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de sojade los mismos lotes de hidrolizado de soja complementados adicionalmente con 1 mg/L de putrescina · 2 HCl(Figuras 3B y 4B), respectivamente. La productividad volumétrica del FVIII varió desde 1700 U/L/d hasta 500 U/L/d en las células crecidas en medio BAV-SP que contenía un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja de diferentes lotes de hidrolizado de soja (Figura 3A). La tasa de crecimiento específica variaba desde 0,58 hasta 0,24 I[d-1], lo queindicaba que la reducción en la concentración del hidrolizado de soja no conduce a una mejor o más constante tasade crecimiento de las células (Figura 4A).
Por el contrario, únicamente se observaron variaciones menores en la productividad volumétrica del FVIII (Figura 3B) y en las tasas de crecimiento específicas (Figura 4B) entre los mismos lotes de hidrolizado de soja en lascélulas crecidas en medio BAV que contiene un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja cuando se complementaba con 1mg/L de putrescina · 2 HCl. La adición de 1 mg/L de putrescina · 2 HCl compensa aproximadamente la reducción deesta poliamina mediante la reducción en la concentración del hidrolizado de soja desde el 0,4 % (p/v) hasta el 0,25% (p/v). A partir de esto puede concluirse que no es la concentración de la propia poliamina sino la adición de lapoliamina en combinación con la reducción de las concentraciones de hidrolizado de soja lo que conduce a una reducción de las sustancias inhibidoras que reducen el crecimiento y la productividad (véase el Ejemplo 5). Adicionalmente, la adición de putrescina también conduce a un aumento mayor que proporcional en la productividadvolumétrica del FVIII debido a un aumento en la productividad específica celular del FVIII (Figura 5).
Por lo tanto, la adición de putrescina a un medio de cultivo celular exento de proteínas animales no sólopromueve la tasa de expresión proteica de las células cultivadas, sino que también reduce la cantidad de hidrolizado vegetal que debe incluirse en el medio de cultivo con objeto de obtener el mismo crecimiento celular. Comoresultado, el medio de cultivo se ve menos afectado por la variación interlote en la calidad del hidrolizado vegetal, y por lo tanto se consigue una mejora global en las condiciones de cultivo celular.
Ejemplo 8
La Figura 5 comprende el análisis estadístico de los Ejemplos mostrados en las Figuras 1, 2 y 4: las célulasGD8/6 se complementaron con medio BAV que contenía un 0,4 % (p/v) de hidrolizado de soja o un 0,25 % (p/v) o un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja y 1 mg/L de putrescina · 2 HCl. Las desviaciones estándar se calculan basándose en cinco lotes seleccionados de hidrolizados de soja (K119-1, K138-1, M022963, MD24423, M022453).La productividad volumétrica y específica celular del FVIII y la tasa de crecimiento específica con un 0,25 % (p/v) dehidrolizado de soja era menor que con un 0,4 % (p/v) de hidrolizado de soja, lo que confirma el óptimo representadoen la Figura 2. Sin embargo, la productividad volumétrica y específica celular del FVIII y la tasa de crecimiento específica aumenta en el medio de cultivo celular que contiene un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja + 1 mg/L de putrescina · 2 HCl. Además, la desviación estándar calculada a partir de cinco lotes diferentes de hidrolizados desoja está significativamente reducida (cotéjese la Figura 5 [QP [U/L/D] = productividad volumétrica; qp [mU/106 células/día] = productividad específica celular),
Ejemplo 9
Los Ejemplos 7 y 8 muestran que la putrescina es un compuesto activo que sustenta el crecimiento celular,y más específicamente, la expresión de proteínas. Por lo tanto, se analizó cuantitativamente la concentración deputrescina procedente de diferentes lotes de hidrolizado de soja de 2 proveedores diferentes (Quest y DMV)mediante un método por HPLC y se evaluó estadísticamente. La concentración en los medios de cultivo celularpreparados con el hidrolizado de soja de ambos proveedores fue de aproximadamente 2,3 mg/L de putrescina,cuando se añadía hidrolizado de soja al medio a una concentración del 0,4 % (p/v) (cotéjese la Figura 6).
Ejemplo 10
Se hicieron crecer células ARH77 (línea celular linfoblastoide humana que expresa de forma estable hlgG)en un cultivo por perfusión tras la inmovilización sobre microportadores macroporosos en el tanque de un biorreactor de 80 L agitado a 37 °C, pH 7,0 – 7,2 y pO2 del 20 – 80 % de saturación de aire, abastecido con medio BAV quecontiene un 0,4 % (p/v) de hidrolizado de soja o un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja + 1,8 mg/L de putrescina · 2HCl. Se calcularon las medias aritméticas y las desviaciones estándar a partir de los datos puntuales que representaban los estados estacionarios para las respectivas formulaciones de medio. La hlgG volumétricaproductividad volumétrica / productividad específica celular en medio BAV complementado con un 0,4 % (p/v) dehidrolizado de soja era menor que el medio BAV complementado con un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja + 1,8
mg/L de putrescina · 2 HCl. Este experimento indica que la composición del medio según la presente invención escapaz de promover también la expresión de anticuerpos monoclonales a partir de una línea celular transformada.Además, la composición específica del medio también puede usarse en cultivos por perfusión (cotéjese la Figura 7).
Ejemplo 11
Se hicieron crecer hasta confluencia células BHK recombinantes en un medio que contenía suero bovino fetal al 5 % (v/v). Las células se lavaron con un medio exento de proteínas y se incubaron durante 3 días en medio BAV complementado con un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja o un 0,25 % (p/v) de hidrolizado de soja + 1,8 mg/Lde putrescina · 2 HCl (Figura 8). Dado que en este experimento no se realizó ningún recuento celular, se midió latasa de consumo de glucosa (g/L) durante tres días para probar la biomasa equivalente en el sistema de cultivo. Laactividad de la EPO (mU/ml) se correlacionó con la tasa de consumo de glucosa (g/L) durante tres días. La adiciónde putrescina proporciona un aumento del 16 % en la productividad de EPO en comparación con un medio BAV complementado simplemente con un 0,25 % (p/v) de peptona de soja. Este experimento también indica que la composición del medio según la presente invención es capaz de promover la expresión de diferentes proteínasrecombinantes.
Ejemplo 12
Para probar el efecto específico de la putrescina, la ornitina y la espermina en un amplio intervalo deconcentraciones (de 0 – 18 mg/L equivalentes a 0-10 mg/L de la poliamina sin HCL) se lleva a cabo un experimentoen el que las células GD8/6 se incubaron en matraces de agitación Techne a 1 – 1,5 E06 células / ml en medio BAVque contenía un 0,25 % y un 0,4 % de hidrolizado de soja sin poliaminas, y en medio BAV que contenía la reducidaconcentración de hidrolizado de soja del 0,25 % con las poliaminas en el intervalo de concentraciones mencionadoanteriormente. Las tres poliaminas del intervalo de concentraciones investigado dieron como resultado un aumentosignificativo en la productividad específica celular (expresado en mU/106 células / día) en comparación con laformulación del medio no complementado con un 0,25 % de hidrolizado de soja, o la concentración aumentada del0,4 %. El aumento en la productividad específica celular claramente no se correlaciona con un aumento en la tasade crecimiento específica, lo que confirma el efecto específico sobre la tasa de expresión del FVIII recombinante de las células GD8/6 (Figura 9).
Por ejemplo, la presente descripción se refiere a los siguientes puntos:
1.
Un medio de cultivo celular exento de proteínas animales que comprende al menos una poliamina y almenos un hidrolizado de proteínas derivado del grupo formado por vegetales y levaduras.
2.
El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, en el que la poliamina está presente en el medio de cultivo en una concentración que varía desde aproximadamente 0,5 hasta aproximadamente 10 mg/L.
3.
El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, en el que la poliamina se elige del grupo formado por cadaverina, putrescina, espermidina, espermina, agmatina, ornitina y una combinación de lasmismas.
4.
El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, en el que la poliamina esputrescina en una concentración que varía desde aproximadamente 0,5 hasta aproximadamente 10 mg/L, y elhidrolizado de proteínas es hidrolizado de soja en una concentración que varía desde aproximadamente el 0,05 %(p/v) hasta aproximadamente el 5 % (p/v)
5.
El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, en el que la poliamina se originaa partir de una fuente distinta a un hidrolizado de proteínas.
6.
El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, en el que la poliamina estápresente en el medio de cultivo en una concentración que varía desde aproximadamente 0,5 hasta 30 mg/L.
7.
El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, en el que el hidrolizado de proteínas está presente en el medio de cultivo en una concentración total que varía desde aproximadamente el 0,05 % (p/v) hasta aproximadamente el 5 % (p/v) para todos los hidrolizados de proteínas.
8.
El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, en el que el hidrolizado de proteínas deriva de una planta elegida del grupo formado por cereales y soja.
9.
Un procedimiento para cultivar células, que comprende las etapas de:
(a)
proporcionar un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1, y
(b)
propagar las células en el medio para formar un cultivo celular.
10.
El procedimiento según el punto 9, en el que las células se eligen del grupo formado por células demamífero, células de insecto, células de ave, células bacterianas y células de levadura.
11.
El procedimiento según el punto 9, en el que las células se cultivan mediante un procedimiento elegido delgrupo formado por cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivo quimioestático.
12.
Un procedimiento para expresar una proteína objetivo, que comprende las etapas de:
a) proporcionar un cultivo de células que se han hecho crecer en un medio de cultivo celular exento
de proteínas animales según el punto 1;
b) introducir en las células una secuencia de ácidos nucleicos que comprende una secuencia que codifica para la proteína objetivo; c) seleccionar las células portadoras de la secuencia de ácidos nucleicos; e d) inducir selectivamente la expresión de la proteína objetivo en las células.
13.
El procedimiento según el punto 12, en el que las células se eligen del grupo formado por células demamífero, células de insecto, células de ave, células bacterianas y células de levadura.
14.
El procedimiento según el punto 12 en el que la combinación de célula / proteína objetivo se elige del grupoformado por células CHO / factor de coagulación VIII, células BHK / eritropoyetina, virus de Epstein Barr transformado, linfocitos B humanos inmortalizados / anticuerpos humanos.
15.
El procedimiento según el punto 12, en el que las células se cultivan mediante un procedimiento elegido delgrupo formado por cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivo quimioestático.
16.
Un procedimiento para producir un virus, que comprende las etapas de:
a) proporcionar un cultivo de células que se han hecho crecer en un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según el punto 1; b) infectar las células con el virus; c) seleccionar las células infectadas por el virus; e d) incubar las células para propagar el virus.
17.
El procedimiento según el punto 16, en el que las células se eligen del grupo formado por células demamífero, células de insecto, células de ave, células bacterianas y células de levadura.
18.
El procedimiento según el punto 16, en el que la combinación de célula / virus se elige del grupo formadopor célula Vero / vacuna atenuada, célula Vero / vacuna, célula Vero / Hepatitis A, célula Vero / virus de la gripe,célula Vero / virus del Nilo occidental, célula Vero / virus del SARS y células embrionarias de pollo / virus de laFSME.
19.
El procedimiento según el punto 16, en el que las células se cultivan mediante un procedimiento elegido delgrupo formado por cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivo quimioestático.

Claims (16)

  1. REIVINDICACIONES
    1.
    Un medio de cultivo celular exento de proteínas animales que comprende al menos una poliamina y almenos un hidrolizado de proteínas derivado del grupo formado por vegetales y levaduras, en el que la poliaminaestá presente en el medio de cultivo en una concentración que varía entre 2 y 5 mg/L y el hidrolizado de proteínasestá presente en una concentración que varía desde el 0,05 % (p/v) hasta el 0,25 % (p/v).
  2. 2.
    El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la reivindicación 1, en el que la poliamina seelige del grupo formado por cadaverina, putrescina, espermidina, espermina, agmatina, ornitina y una combinaciónde las mismas.
  3. 3.
    El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en elque el medio de cultivo contiene ornitina, putrescina y espermina.
  4. 4.
    El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la reivindicación 1, en el que la poliamina seorigina a partir de una fuente distinta al hidrolizado de proteínas.
  5. 5.
    El medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la reivindicación 1, en el que el hidrolizadode proteínas deriva de una planta elegida del grupo formado por cereales y soja.
  6. 6.
    Un procedimiento para cultivar células, que comprende las etapas de:
    (a)
    proporcionar un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la reivindicación 1, y
    (b)
    propagar las células en el medio para formar un cultivo celular.
  7. 7.
    El procedimiento según la reivindicación 6, en el que las células se eligen del grupo formado por células demamífero, células de insecto, células de ave, células bacterianas y células de levadura.
  8. 8.
    El procedimiento según la reivindicación 6, en el que las células se cultivan mediante un procedimientoelegido del grupo formado por cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivoquimioestático.
  9. 9.
    Un procedimiento para expresar una proteína objetivo, que comprende las etapas de:
    a) hacer crecer un cultivo de células en un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según lareivindicación 1; b) introducir en las células una secuencia de ácidos nucleicos que comprende una secuencia que codifica para
    la proteína objetivo; c) seleccionar las células portadoras de la secuencia de ácidos nucleicos; e d) inducir selectivamente la expresión de la proteína objetivo en las células.
  10. 10.
    El procedimiento según la reivindicación 9, en el que las células se eligen del grupo formado por células demamífero, células de insecto, células de ave, células bacterianas y células de levadura.
  11. 11.
    El procedimiento según la reivindicación 9 en el que la combinación de célula / proteína objetivo se elige del grupo formado por células CHO / factor de coagulación VIII, células BHK / eritropoyetina, virus de Epstein Barr transformado, linfocitos B humanos inmortalizados / anticuerpos humanos.
  12. 12.
    El procedimiento según la reivindicación 9, en el que las células se cultivan mediante un procedimientoelegido del grupo formado por cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivoquimioestático.
  13. 13.
    Un procedimiento para producir un virus, que comprende las etapas de:
    a) hacer crecer un cultivo de células en un medio de cultivo celular exento de proteínas animales según la reivindicación 1; b) infectar las células con el virus; c) seleccionar las células infectadas por el virus; e d) incubar las células para propagar el virus.
  14. 14.
    El procedimiento según la reivindicación 13, en el que las células se eligen del grupo formado por células demamífero, células de insecto, células de ave, células bacterianas y células de levadura.
  15. 15.
    El procedimiento según la reivindicación 13, en el que la combinación de célula / virus se elige del grupoformado por célula Vero / vacuna atenuada, célula Vero / vacuna, célula Vero / Hepatitis A, célula Vero / virus de lagripe, célula Vero / virus del Nilo occidental, célula Vero / virus del SARS y células embrionarias de pollo / virus de laFSME.
  16. 16.
    El procedimiento según la reivindicación 13, en el que las células se cultivan mediante un procedimiento elegido del grupo formado por cultivo discontinuo, cultivo discontinuo alimentado, cultivo por perfusión y cultivoquimioestático.
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Families Citing this family (72)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20060094104A1 (en) 2004-10-29 2006-05-04 Leopold Grillberger Animal protein-free media for cultivation of cells
US20070212770A1 (en) * 2006-01-04 2007-09-13 Baxter International Inc. Oligopeptide-free cell culture media
AU2007263280B2 (en) 2006-06-20 2012-09-13 Transgene S.A. Process for producing poxviruses and poxvirus compositions
TW201516149A (zh) 2006-09-13 2015-05-01 Abbvie Inc 細胞培養改良
US8911964B2 (en) 2006-09-13 2014-12-16 Abbvie Inc. Fed-batch method of making human anti-TNF-alpha antibody
JPWO2008047596A1 (ja) * 2006-10-18 2010-02-25 不二製油株式会社 冷凍耐性ある酵母
WO2008154014A2 (en) * 2007-06-11 2008-12-18 Amgen Inc. A method for culturing mammalian cells to improve recombinant protein production
US8637312B2 (en) * 2008-01-09 2014-01-28 Cellca Gmbh Mammalian culture media with polyamine and iron
US9458422B2 (en) * 2008-01-25 2016-10-04 University Of Maryland Composition of matter and method for stimulating the growth of beneficial microorganisms
WO2009132195A1 (en) * 2008-04-23 2009-10-29 Michigan State University Immortal avian cell line and methods of use
TW201012930A (en) 2008-06-16 2010-04-01 Intervet Int Bv Method of replicating viruses in suspension
US8821480B2 (en) * 2008-07-16 2014-09-02 Intuitive Surgical Operations, Inc. Four-cable wrist with solid surface cable channels
PL2268823T3 (pl) * 2008-08-28 2012-03-30 Novartis Ag Wytwarzanie skwalenu z wykorzystaniem drożdży nadprodukujących skwalen
CN102257005A (zh) 2008-10-20 2011-11-23 雅培制药有限公司 在抗体纯化过程中的病毒灭活
CN105111309A (zh) 2008-10-20 2015-12-02 Abbvie公司 使用a蛋白亲和层析分离和纯化抗体
JP5719301B2 (ja) * 2008-11-12 2015-05-13 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ 血清不含インスリン不含で第ｖｉｉ因子を産生する方法
KR101737645B1 (ko) 2008-12-30 2017-05-18 박스알타 인코퍼레이티드 알킬-아민-ｎ-옥시드 (ａａｎｏｘ)를 사용하는 세포 성장 증진 방법
CN101851608B (zh) * 2009-03-31 2012-09-05 北京清大天一科技有限公司 一种悬浮培养bhk21细胞生产狂犬病病毒的方法
KR101574056B1 (ko) 2009-07-31 2015-12-02 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 Ａｄａｍｔｓ 단백질 발현을 위한 세포 배양 배지
ES2865250T3 (es) 2009-09-21 2021-10-15 Takeda Pharmaceuticals Co Formulaciones de ADAMTS13 líquidas y liofilizadas estabilizadas
BR112013000512A2 (pt) 2010-07-08 2016-05-17 Baxter Healthcare Sa método para produzir uma composição de adamts 13 (ra13) recombinante, sobrenadante de cultura de célula, e , composição adamts13 recombinante (ra13)'
TW201213342A (en) 2010-09-17 2012-04-01 Baxter Int Stabilization of immunoglobulins and other proteins through aqueous formulation with sodium chloride at weak acidic to neutral pH
EP3260132B1 (en) 2010-10-27 2022-02-09 Takeda Pharmaceutical Company Limited Fviii peptides for immune tolerance induction and immunodiagnostics
CN102127525B (zh) * 2010-12-27 2013-06-05 吉林亚泰生物药业股份有限公司 流感病毒疫苗株在Vero细胞上的适应方法
US10669522B2 (en) 2011-02-07 2020-06-02 Life Technologies Corporation Compositions and methods for stabilizing susceptible compounds
EP2702077A2 (en) 2011-04-27 2014-03-05 AbbVie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
ES2682249T3 (es) 2011-06-10 2018-09-19 Baxalta GmbH Tratamiento de una enfermedad de la coagulación mediante la administración de VWF recombinante
WO2013158279A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Protein purification methods to reduce acidic species
US9067990B2 (en) 2013-03-14 2015-06-30 Abbvie, Inc. Protein purification using displacement chromatography
WO2013158273A1 (en) 2012-04-20 2013-10-24 Abbvie Inc. Methods to modulate c-terminal lysine variant distribution
WO2013176754A1 (en) 2012-05-24 2013-11-28 Abbvie Inc. Novel purification of antibodies using hydrophobic interaction chromatography
US9512214B2 (en) 2012-09-02 2016-12-06 Abbvie, Inc. Methods to control protein heterogeneity
AU2013309506A1 (en) 2012-09-02 2015-03-12 Abbvie Inc. Methods to control protein heterogeneity
JP2015531244A (ja) 2012-10-15 2015-11-02 ブリストル−マイヤーズ スクイブ カンパニーＢｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ Ｓｑｕｉｂｂ Ｃｏｍｐａｎｙ タンパク質を製造するための哺乳動物細胞培養方法
SG11201507230PA (en) 2013-03-12 2015-10-29 Abbvie Inc Human antibodies that bind human tnf-alpha and methods of preparing the same
WO2014159579A1 (en) 2013-03-14 2014-10-02 Abbvie Inc. MUTATED ANTI-TNFα ANTIBODIES AND METHODS OF THEIR USE
US9217168B2 (en) 2013-03-14 2015-12-22 Momenta Pharmaceuticals, Inc. Methods of cell culture
WO2014151878A2 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Abbvie Inc. Methods for modulating protein glycosylation profiles of recombinant protein therapeutics using monosaccharides and oligosacharides
US9017687B1 (en) 2013-10-18 2015-04-28 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same using displacement chromatography
AR095196A1 (es) 2013-03-15 2015-09-30 Regeneron Pharma Medio de cultivo celular libre de suero
EP3052640A2 (en) 2013-10-04 2016-08-10 AbbVie Inc. Use of metal ions for modulation of protein glycosylation profiles of recombinant proteins
US9085618B2 (en) 2013-10-18 2015-07-21 Abbvie, Inc. Low acidic species compositions and methods for producing and using the same
US8946395B1 (en) 2013-10-18 2015-02-03 Abbvie Inc. Purification of proteins using hydrophobic interaction chromatography
US9181337B2 (en) 2013-10-18 2015-11-10 Abbvie, Inc. Modulated lysine variant species compositions and methods for producing and using the same
WO2015073884A2 (en) 2013-11-15 2015-05-21 Abbvie, Inc. Glycoengineered binding protein compositions
US10527551B2 (en) 2013-12-30 2020-01-07 Baxalta Incorporated Method of predicting a performance characteristic of a plant or yeast hydrolysate and its use
CN106282090B (zh) * 2015-06-08 2021-07-13 齐鲁制药有限公司 一种驯化后的cho-s细胞系及其培养方法与应用
TW202340452A (zh) 2015-08-04 2023-10-16 美商再生元醫藥公司 補充牛磺酸之細胞培養基及用法
CN105385731B (zh) * 2015-12-25 2018-10-30 上海莱士血液制品股份有限公司 一种表达重组八因子的灌注培养方法
EP3299454A1 (en) * 2016-09-21 2018-03-28 Deutsches Krebsforschungszentrum Optimized method for large scale production of parvovirus h-1 in an essentially serum-free medium
CN106635953B (zh) * 2016-12-13 2021-02-19 昆明润什生物科技有限公司 无血清无蛋白细胞培养基
JP6258536B1 (ja) 2017-03-03 2018-01-10 協和発酵キリン株式会社 ダルベポエチン組成物の製造方法およびダルべポエチン産生細胞の培養方法
US20190010531A1 (en) * 2017-07-06 2019-01-10 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Cell culture process for making a glycoprotein
WO2019010497A1 (en) 2017-07-07 2019-01-10 Baxalta Incorporated TREATMENT OF GASTROINTESTINAL BLEEDING IN PATIENTS WITH A SEVERE FORM OF VON WILLEBRAND'S DISEASE BY RECOMBINANT VWF ADMINISTRATION
EP3648787A1 (en) 2017-07-07 2020-05-13 Baxalta Incorporated Treatment of patients with severe von willebrand disease undergoing elective surgery by administration of recombinant vwf
BR112020019057A2 (pt) 2018-03-21 2020-12-29 Baxalta Incorporated Método para obter uma composição, e, composição farmacêutica.
PL3781943T3 (pl) 2018-04-20 2022-08-01 Janssen Biotech, Inc Kwalifikacja kolumny chromatograficznej w sposobach produkcji w celu wytwarzania kompozycji przeciwciał anty-il12/il23
MA54248A (fr) 2018-11-13 2021-09-22 Janssen Biotech Inc Régulation de métaux traces pendant la production d'anticorps anti-cd38
EA202192140A1 (ru) 2019-02-01 2021-12-15 Такеда Фармасьютикал Компани Лимитед СПОСОБЫ ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ЛЕЧЕНИЯ РЕКОМБИНАНТНЫМ ФВ (рФВ)
CN113825765A (zh) 2019-03-14 2021-12-21 詹森生物科技公司 用于制备抗il12/il23抗体组合物的制造方法
US20220153830A1 (en) 2019-03-14 2022-05-19 Janssen Biotech, Inc. Manufacturing Methods for Producing Anti-TNF Antibody Compositions
JP2022547556A (ja) 2019-09-11 2022-11-14 武田薬品工業株式会社 フォン・ヴィレブランド因子と補体ｃ１ｑの複合体に関連する治療法
CZ308590B6 (cs) * 2019-09-25 2020-12-16 Výzkumný ústav mlékárenský s.r.o. Hypoalergenní veganské médium pro kultivaci bakterií mléčného kvašení
MY193349A (en) 2019-12-06 2022-10-06 Regeneron Pharma Anti-vegf protein compositions and methods for producing the same
AU2021216945A1 (en) 2020-02-04 2022-09-01 Takeda Pharmaceutical Company Limited Treatment of menorrhagia in patients with severe von Willebrand Disease by administration of recombinant VWF
BR112022019817A2 (pt) 2020-04-02 2022-12-06 Takeda Pharmaceuticals Co Variante de adamts13, composições e usos das mesmas
EP4043551A1 (en) 2021-02-12 2022-08-17 Bühler AG Nutrient media for cell culture containing plant protein hydrolysates
KR102392018B1 (ko) * 2021-05-24 2022-04-27 한국해양과학기술원 스피룰리나 가수분해물을 포함하는 세포 배양용 배지 조성물 및 이의 제조방법
WO2023281463A1 (en) 2021-07-09 2023-01-12 Janssen Biotech, Inc. Manufacturing methods for producing anti-tnf antibody compositions
IL309987A (en) 2021-07-09 2024-03-01 Janssen Biotech Inc Production methods for the production of anti-IL12/IL23 antibody compositions
US20230332084A1 (en) 2022-03-02 2023-10-19 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Bioreactor for antibody production
WO2024039216A1 (ko) * 2022-08-19 2024-02-22 셀미트주식회사 동물세포 또는 동물 세포주의 배양방법

Family Cites Families (79)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AT165999B (de) 1947-06-26 1950-05-25 Delle Atel Const Electr Einirchtung zum Schutz von Drehstrommotoren gegen Überstrom
FR2196386A1 (en) * 1972-08-17 1974-03-15 Cudennec Alain Culture media selection - for identification of unknown bacteria
US4443540A (en) * 1980-05-09 1984-04-17 University Of Illinois Foundation Protein hydrolysis
DK207980A (da) * 1980-05-13 1981-11-14 Novo Industri As Fremgangsmaade til fremstilling af et skumnings- eller emulgeringsmiddel paa sojaproteinbasis
AU559856B2 (en) 1982-10-02 1987-03-19 Anderson Group Plc Line pans
JPS59187511A (ja) 1983-04-06 1984-10-24 株式会社日本バノツク 自動結束機
US4767704A (en) * 1983-10-07 1988-08-30 Columbia University In The City Of New York Protein-free culture medium
NZ210501A (en) * 1983-12-13 1991-08-27 Kirin Amgen Inc Erythropoietin produced by procaryotic or eucaryotic expression of an exogenous dna sequence
IL74909A (en) 1984-04-20 1992-01-15 Genentech Inc Preparation of functional human factor viii and dna sequences,expression vectors,transformed microorganisms and cell lines used therein
WO1986004920A1 (en) 1985-02-13 1986-08-28 Biotechnology Research Partners, Limited Human metallothionein-ii promoter in mammalian expression system
US4978616A (en) * 1985-02-28 1990-12-18 Verax Corporation Fluidized cell cultivation process
US5250421A (en) * 1986-01-03 1993-10-05 Genetics Institute, Inc. Method for producing factor VIII:C-type proteins
DE3787805T2 (de) 1986-08-04 1994-02-10 Univ New South Wales Kensingto Serumfreies gewebekulturmedium, das ein polymerzellenschutzmittel enthält.
JPH01503679A (ja) 1987-06-30 1989-12-14 アムジエン・インコーポレーテツド カリクレインの生産
JP2507882B2 (ja) 1988-02-17 1996-06-19 工業技術院長 外部増殖因子非依存性増殖良好細胞株の製造法
US6048728A (en) * 1988-09-23 2000-04-11 Chiron Corporation Cell culture medium for enhanced cell growth, culture longevity, and product expression
US5573937A (en) * 1989-12-07 1996-11-12 Snow Brand Milk Products Co., Ltd. Serum free culture medium
SE465222C5 (sv) 1989-12-15 1998-02-10 Pharmacia & Upjohn Ab Ett rekombinant, humant faktor VIII-derivat och förfarande för dess framställning
JPH0789954B2 (ja) 1990-01-22 1995-10-04 アメリカ合衆国 細胞の保存と増殖のための二酸化炭素―非依存性増殖培地
JP2844484B2 (ja) 1990-02-22 1999-01-06 味の素株式会社 組換え蛋白質の生産方法
JP2859679B2 (ja) 1990-03-01 1999-02-17 協和醗酵工業株式会社 新規細胞株
US5378612A (en) * 1990-05-11 1995-01-03 Juridical Foundation The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute Culture medium for production of recombinant protein
JP2696001B2 (ja) 1991-04-15 1998-01-14 財団法人化学及血清療法研究所 組換え蛋白質産生用培地
US5122469A (en) * 1990-10-03 1992-06-16 Genentech, Inc. Method for culturing Chinese hamster ovary cells to improve production of recombinant proteins
GB9022545D0 (en) * 1990-10-17 1990-11-28 Wellcome Found Culture medium
AU643077B2 (en) 1990-10-19 1993-11-04 Unilever Plc Detergent compositions
JPH04228066A (ja) 1990-10-23 1992-08-18 Rikagaku Kenkyusho 外来遺伝子発現用培養細胞
EP0531562A1 (de) * 1991-09-11 1993-03-17 Doerr, Hans-Wilhelm, Prof. Dr. med. Kultivierung von Säugetierzellen
JPH05123178A (ja) 1991-11-01 1993-05-21 Ajinomoto Co Inc Ｌ−フエニルアラニンの製造法
JPH06217759A (ja) 1993-01-25 1994-08-09 Sapporo Breweries Ltd 酵母プロトプラストの再生用培地と再生方法
DE4313620A1 (de) 1993-04-26 1994-10-27 Biotechnolog Forschung Gmbh Hamsterzellinien und Verfahren zur Glykoproteingewinnung
AU7895898A (en) 1993-04-26 1998-10-08 Hans Wolf Mammal cell lines and method of obtaining glycoproteins
GB9311132D0 (en) * 1993-05-28 1993-07-14 Eisai London Res Lab Ltd Control of cell death
US5405637A (en) 1993-06-30 1995-04-11 Bristol-Myers Squibb Company Milk protein partial hydrolysate and infant formula containing same
JP2766165B2 (ja) 1993-08-02 1998-06-18 株式会社バイオポリマー・リサーチ バクテリアセルロースの製造方法
US5719050A (en) * 1993-12-24 1998-02-17 Eiken Chemical Co., Ltd. Animal cell culturing media containing N-acetyl-L-glutamic acid
EP0666312A1 (en) * 1994-02-08 1995-08-09 Wolfgang A. Renner Process for the improvement of mammalian cell growth
US5789247A (en) * 1994-04-01 1998-08-04 Ballay; Annick Expression in non-tumoral human lymphoblastoid lines with an integrative vector
EP0733100A1 (de) 1994-09-09 1996-09-25 Wolfgang A. Renner Chemisches verfahren zur förderung der proliferation von tierischen zellen
US6146873A (en) * 1994-11-10 2000-11-14 Baxter Aktiengesellschaft Production of orthomyxoviruses in monkey kidney cells using protein-free media
EP1213030B1 (en) 1994-11-10 2009-04-22 Baxter Healthcare SA Method for producing biologicals in protein-free culture
AT403167B (de) 1994-11-14 1997-11-25 Immuno Ag Selektion und expression von fremdproteinen mittels eines selektions-amplifikations-systems
EP0799310A1 (en) 1994-12-16 1997-10-08 Novartis AG Production of recombinant secretory component
CA2211630A1 (en) 1995-02-23 1996-08-29 Quest International B.V. Peptides for tissue and cell culture media
US5741705A (en) * 1995-02-23 1998-04-21 Quest International Flavors & Food Ingredients Company, Division Of Indopco, Inc. Method for in vitro cell growth of eucaryotic cells using low molecular weight peptides
AU6125396A (en) 1995-06-07 1996-12-30 Novartis Ag Serum-free media for primitive hematopoietic cells and metho ds of use thereof
AUPN442295A0 (en) 1995-07-26 1995-08-17 Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation Regulated autocrine growth of mammalian cells
US5851800A (en) * 1996-05-14 1998-12-22 Pharmacia & Upjohn Ab Process for producing a protein
JP2000517188A (ja) 1996-08-30 2000-12-26 ライフ テクノロジーズ，インコーポレイテッド 無血清哺乳動物細胞培養培地およびその使用
US20040171152A1 (en) * 1996-10-10 2004-09-02 Invitrogen Corporation Animal cell culture media comprising non-animal or plant-derived nutrients
ATE399855T1 (de) 1996-10-10 2008-07-15 Invitrogen Corp Tierzellkulturmedium mit pflanzlichen nährstoffen
FR2755976B1 (fr) * 1996-11-15 1999-01-15 Idm Immuno Designed Molecules Nouveaux complexes d'acides nucleiques et de polymere substitue par des residus entrainant la destabilisation des membranes cellulaires
US5804420A (en) 1997-04-18 1998-09-08 Bayer Corporation Preparation of recombinant Factor VIII in a protein free medium
ATE488574T1 (de) 1997-05-28 2010-12-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Verfahren zur herstellung eines immunogenen faktors von corynebacterium diphtheriae unter verwendung eines kulturmediums mit hefeextrakt als aminosäurenquelle und ohne proteinkomplexe tierischer herkunft
US6475725B1 (en) * 1997-06-20 2002-11-05 Baxter Aktiengesellschaft Recombinant cell clones having increased stability and methods of making and using the same
AT407255B (de) * 1997-06-20 2001-02-26 Immuno Ag Rekombinanter zellklon mit erhöhter stabilität in serum- und proteinfreiem medium und verfahren zur gewinnung des stabilen zellklons
CN1151258C (zh) 1997-07-23 2004-05-26 罗切诊断学有限公司 通过内源基因活化制备促红细胞生成素
FR2775983B1 (fr) 1998-03-13 2000-11-10 Pasteur Merieux Serums Vacc Milieu et procede de propagation et de multiplication virales
WO1999057246A1 (en) 1998-05-01 1999-11-11 Life Technologies, Inc. Animal cell culture media comprising non-animal or plant-derived nutrients
US6537782B1 (en) * 1998-06-01 2003-03-25 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Media for culturing animal cells and process for producing protein by using the same
EP0965583A1 (en) * 1998-06-15 1999-12-22 Transgene S.A. Polyamine compounds and compositions containing them useful for the transfer of active substances into a cell
US6406909B1 (en) 1998-07-10 2002-06-18 Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha Serum-free medium for culturing animal cells
AT409379B (de) * 1999-06-02 2002-07-25 Baxter Ag Medium zur protein- und serumfreien kultivierung von zellen
DK1200561T3 (da) 1999-08-05 2006-10-16 Baxter Ag Rekombinant stabil celleklon, dens fremstilling og anvendelse
NZ529329A (en) 1999-08-25 2005-06-24 Immunex Corp Compositions and methods for improved cell culture
KR100369788B1 (ko) 1999-09-03 2003-01-29 동아제약 주식회사 재조합 인간 에리트로포이에틴의 제조방법
BRPI0109494B8 (pt) * 2000-03-22 2021-05-25 Octagene Gmbh muteína de fator viii, sequência de dna, vetor, processo para produção da muteína de fator viii, composição farmacêutica e uso da muteína do fator viii
DE10015688A1 (de) 2000-03-29 2001-10-18 Siemens Ag Verfahren und Vorrichtung zum Zünden mindestens eines Zündelements für ein Rückhaltemittel in einem Kraftfahrzeug
US6596526B1 (en) 2000-06-09 2003-07-22 Baxter Aktiengesellschaft Furin polypeptides with improved characteristics
EP1358319B1 (en) * 2000-09-25 2009-06-17 Polymun Scientific Immunbiologische Forschung GmbH Live influenza vaccine and method of manufacture
EP1208966A1 (en) 2000-11-27 2002-05-29 Cheng-Kun Liao Manufacturing process of patio tabletop glass with broken protection
DE10059175A1 (de) 2000-11-29 2002-06-20 Siemens Ag Verfahren und Vorrichtung zur Anrufumleitung mittels eines Stellvertreters in einem Kommunikationssystem
CN1309825C (zh) 2001-10-02 2007-04-11 诺和诺德医疗保健公司 在真核细胞中生产重组蛋白的方法
AU2003249990B2 (en) * 2002-07-09 2007-06-28 Takeda Pharmaceutical Company Limited Animal protein free media for cultivation of cells
JP4709552B2 (ja) * 2003-02-19 2011-06-22 邦康 早田 Ｌｆａ−１抑制剤、及びその用途
KR20040088169A (ko) * 2003-04-09 2004-10-16 주식회사 제일생명공학서비스 동물세포 배양용 무혈청 배지
EP1673452B1 (en) 2003-10-10 2015-12-23 Novo Nordisk Health Care AG Method for large-scale production of a polypeptide in eukaryote cells
TWI384069B (zh) 2004-08-27 2013-02-01 Pfizer Ireland Pharmaceuticals 多胜肽之製法
US20060094104A1 (en) 2004-10-29 2006-05-04 Leopold Grillberger Animal protein-free media for cultivation of cells

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