ES2325892T3 - Metodo para tratar la querato conjuntivitis con antagonistas receptores purinergicos. - Google Patents

Abstract

Preparación estéril adaptada para su administración tópica en el ojo, que comprende: - una cantidad efectiva de un compuesto que activa los receptores purinérgicos en tejidos lagrimales, seleccionándose dicho compuesto de un grupo consistente en uridina 5'' trifosfato como se describe en la fórmula I, dinucleótidos como los descritos en las fórmulas II, II(a) y II(b), derivados de adenosina 5''-trifosfato como se describen en la fórmula II y citidina 5''trifosfato como se muestra en la fórmula IV, así como sus análogos y derivados activos, y sus sales farmacológicamente aceptables; y - un vehículo fisiológicamente compatible seleccionado del grupo consistente en soluciones acuosas de electrolito, poliéteres, polivinilos, polímeros de ácido acrílico, lanolina y glucosaminoglicanos; -fomentando dicha preparación la secreción lagrimal de los tejidos lagrimales de un sujeto que precise dicho tratamiento:** ver fórmula** donde: X 1, X 2 y X 3 son independientemente O- o S-, R1 es O, imido, metileno o dihalometileno R2 es H o Br,** ver fórmula** donde X es oxígeno, imido, metileno o difluorometileno; n = 0 o 1; m = 0 o 1; n + m = 0, 1 o 2; y B son B'' independientemente un residuo de purina, como en la fórmula IIa, o un residuo de pirimidina, como en la fórmula IIb, enlazados a través de la posición 9- o 1-, respectivamente: ** ver fórmula** donde: R3 es hidrógeno o NHR, R 1 y R'' de los grupos 8-NHR se seleccionan en el grupo consistente en grupos hidrógeno, arilalquilo (C1-6) en los que el grupo arilo tiene opcionalmente grupos funcionales, alquilo, grupos alquilo con grupos funcionales, omega-A (alquil) CONH(alquil)- y omega-A(alquil) NHCO(alquil)- donde A es amino, mercapto, hidroxi o carboxil; R2 es O o está ausente; o R1 y R2 se toman de un anillo de imidazol en huso de 5 elementos, sustituido opcionalmente en las posiciones 4'' y 5''; donde: R4 es hidroxi, mercapto, amino, ciano, aralcoxi, C1-6 alcoxi, C1-6 alquilamino y dialquilamino, estando opcionalmente los grupos alquilo enlazados para formar un heterociclo; R 5 es hidrógeno, acilo, C 1-6 alquilo, aroilo, C 1-5 alcanoilo, benzoilo, o sulfonato; R6 es hidroxi, amino, mercapto, alcoxi, aralcoxi, C1-6-alquilotio, C1-5 amino disustituido, triazolil, alquilamino o dialquilamino, donde los grupos alquilo están opcionalmente enlazados para formar un heterociclo o están enlazados a N 3 para formar un anillo opcionalmente sustituido; R7 es hidrógeno, hidroxi, ciano, nitro, alquenil, con el grupo alquenil opcionalmente enlazado a través del oxígeno para formar un anillo opcionalmente sustituido en el carbono adyacente al oxígeno con grupos alquilo o arilo, alquinilo sustituido, halógeno, alquilo, alquilo sustituido, perhalometilo, C2-6 alquilo, C2-3 alquenilo o etenilo sustituido; o conjuntamente, R 6-R 7 pueden formar un anillo saturado o insaturado de 5 o 6 elementos enlazado mediante N u O en R 6, pudiendo contener dicho anillo sustitutos que comprenden diversas funciones; siempre que cuando R 8 sea un amino o amino sustituido, R7 es hidrógeno; y R 8 es hidrógeno, alcoxi, arylalcoxi, alquilotio, arilalquilotio, carbozamidometilo, carboximetilo, metoxi, metiltio, fenoxi o feniltío. ** ver fórmula** donde: X1, X2 y X3 se definen como en la fórmula I. R3 y R4 son H mientras que R1 es imido, metileno o diahalometileno, R2 no es nada y hay un doble enlace entre N- 1 y C-6, o R3 y R4 son H mientras que R1 es O, imido, metileno o diahalometileno, R2 es O, y hay un doble enlace entre N-1 y C-6, o R 3, R 4 y R 2 tomados en conjunto son -CH=CH-, formando un anillo desde N-6 a N-1 con un doble enlace entre N- 6 y C-6, y R1 es imido, metileno o diahalometileno; donde: R 1, X 1, X 2 y X 3 se definen como en la fórmula I. R5 y R6 son H mientras que R7 no es nada y existe un doble enlace entre N-3 y C-4, o R5, R6 y R7 tomados en su conjunto son -CH=CH-, formando un anillo desde N-3 a N-4 con un doble enlace entre N-4 y C-4 opcionalmente sustituido en la posición 4- o 5-del anillo eteno.

Description

Método para tratar la querato conjuntivitis con antagonistas receptores purinérgicos.

Introducción

La presente solicitud constituye una continuación parcial del documento de los Estados Unidos con el número de serie 08/797.472, presentada el 6 de febrero de 1997.

Campo técnico

La presente invención se refiere a un método para regular las secreciones en y en torno al ojo de un paciente mediante la administración de agonistas de los receptores purinérgicos, como diversos trifosfatos de uridina, adenina o citidina, así como otros compuestos fosfatados de nucleósidos.

La presente invención también se refiere a un método de mejorar el vaciado del sistema lagrimal mediante la administración de un agente farmacológico que aumenta la holgura mucociliar del conducto nasolacrimal de los mamíferos. Entre estos agentes se incluyen determinados trifosfatos de uridina, adenina o citidina, así como otros compuestos fosfatados de nucleósidos.

Antecedentes de la invención

Existen muchas situaciones en las que resulta terapéuticamente deseable aumentar la cantidad de fluido lacrimal producido por el ojo. La enfermedad del ojo seco es el término general de los síntomas provocados por anormalidades de la película lagrimal precorneal, caracterizados por una disminución de la producción de lágrimas o un aumento de la evaporación de la película lagrimal, junto con la enfermedad de la superficie ocular resultante. Aproximadamente 38 millones de americanos están afectados por algún tipo de desorden de sequedad ocular. Entre las afecciones que se clasifican bajo el término general "enfermedad del ojo seco" se encuentran: la querato conjuntivitis seca (KCS), la sequedad ocular relacionada con la edad, el síndrome de Stevens-Johnson, el Síndrome de Sjogren, la penfigoide ocular cicatrizal, la blefaritis, las lesiones corneales, infecciones, el síndrome de Riley-Day, la alácrima congénita, desórdenes o deficiencias nutricionales (incluyendo vitaminas), efectos secundarios farmacológicos, tensión ocular y destrucción glandular y de tejidos, exposición medioambiental al humo, contaminación, ambientes excesivamente secos, partículas transportadas por el aire, desórdenes autoinmunes y otros desórdenes inmunodeficientes, y pacientes comatosos incapaces de parpadear. La presente invención también podría resultar útil como solución de lavado o irrigación para individuos conscientes, durante las intervenciones quirúrgicas, o para el mantenimiento de los pacientes comatosos o aquellos que no pueden parpadear a causa de un bloqueo neuromuscular o pérdida de párpados.

Una película lagrimal precorneal sana realiza varias funciones de gran importancia: 1) proteger la córnea contra la desecación; 2) colaborar en la respuesta inmune a las infecciones; 3) aumentar la infiltración de oxígeno en la córnea; 4) permitir el movimiento deslizante del globo ocular y de las pestañas; y 5) ayudar a mantener la presión ocular mediante ósmosis. Existen dos estructuras responsables de mantener las propiedades de la película lagrimal - las glándulas lagrimales y la conjuntiva (la membrana mucosa que rodea parte del globo ocular y el interior de las pestañas). Estas estructuras mantienen la película lagrimal mediante la regulación del transporte de agua y electrolito y mediante la liberación de mucina por parte de las células calciformes.

El avance de la enfermedad provocada por la sequedad ocular se caracteriza por cuatro principales "hitos". El primero es el descenso de la producción de lágrimas. En el caso de los conejos, se ha demostrado que este descenso en la producción de lágrimas está relacionado con un aumento de la osmolaridad en las lágrimas. El segundo hito es la pérdida de células calciformes conjuntivas que contienen mucina. Esta disminución de la densidad de células calciformes se hace evidente al cabo de varias semanas desde el inicio de la disminución en la producción de lágrimas. El tercer hito en el avance del síndrome del ojo seco tiene lugar un año más tarde, cuando se observa descamación del epitelio corneal. El cuarto y último hito de la enfermedad es la desestabilización de la relación córnea/lágrima (J. Gilbard, CLAO Journal 22(2), 141-45 (1996)).

En la actualidad, el tratamiento farmacéutico del síndrome de ojo seco se limita mayoritariamente a la administración de lágrimas artificiales (solución salina) para rehidratar temporalmente los ojos. No obstante, el alivio es de corta duración y se precisa una dosificación frecuente. Además, las lágrimas artificiales suelen tener contraindicaciones e incompatibilidades con las lentes de contacto blandas M. Lemp., Cornea 9(1), S48-550 (1990)). La utilización de inhibidores de la fosfodiestarasa, como el 3-isobutil-1-metilxantina (IBMX) para estimular la secreción lagrimal se describe en la patente estadounidense Nº 4.753.945. En la actualidad se está investigando la efectividad de estos inhibidores de la fosfodiestarasa (J. Gilbard, et al., Arch. Ophthal, 112, 1614-16 (1994) y 109, 672-76 (1991); ídem, Inv. Ophthal. Vis. Sci. 31, 1381-88 (1990)). La estimulación de la secreción lagrimal mediante la aplicación tópica de melanocito estimulante de las hormonas se describe en la patente estadounidense Nº 4868154.

Existen muchas situaciones en las que resulta terapéuticamente deseable aumentar el vaciado del sistema lagrimal. El sistema lagrimal tiene dos componentes funcionales: el componente secretor, que produce lágrimas, y el componente excretor, que conduce las lágrimas hacia la nariz. Cuando el sistema de vaciado lagrimal no funciona adecuadamente, el resultado puede ser un lagrimeo excesivo (epífora), descarga mucopurulenta y dacriocistitis recurrente (C. Shermataro, et. al., JAOA, 94, 229 (1994)). De hecho, el lagrimeo es una de las quejas más repetidas que llevan al paciente a la consulta del oftalmólogo (S. T. Conway, Ophthal. Plas. Reconstr. Surg., 10, 185 (1994)).

La disfunción más corriente del sistema de vaciado lagrimal es la obstrucción del conducto nasolacrimal, con el resultado de estasis de las lágrimas en el saco lagrimal. La acumulación de fluido y moco tiene como resultado lagrimeo y expulsión de material mucopurulento, lo que hace que los párpados estén pegados al despertarse por la mañana. La falta de holgura del fluido lagrimal también provoca inflamación e infección crónica del saco y de los conductos lagrimales (K. J. Hyde, et. al., Ophthal., 95, 1447 (1988); J. A. Blicker, et. al., Ophthal. Plas. Reconstr. Surg., 9, 43 (1993); J. A. Mauriello Jr., et. al., Ophthal. Plast. Reconstr. Surg., 8, 13 (1992)).

La obstrucción del conducto nasolacrimal puede dividirse en dos clases etiológicas: obstrucción del conducto lagrimal adquirida primaria (PYO), que se caracteriza por hiperplasia y fibrosis del epitelio mucoso y la obstrucción del conducto lagrimal adquirida secundaria (SYO), provocada por cáncer, inflamación, infección, traumas y problemas mecánicos (G.B. Bartley, Ophthal. Plast. Reconstr. Surg., 8, 237 (1992)). La oclusión del conducto nasolagrimal es más corriente en mujeres de mediana edad y niños. De hecho, hasta un 20% de todos los niños resultan afectados por una obstrucción del conducto nasolagrimal, y la mayoría de ellos dejan de presentar síntomas cuando cumplen un año (J. D. H. Young, et. al., Eye, 10, 485 (1996)).

Los actuales tratamientos de la obstrucción del conducto nasolagrimal son en su mayoría procedimientos invasivos o quirúrgicos, cuya agresividad varía. La intervención puede consistir en la introducción de una sonda en el conducto mediante un catéter fino; no obstante, este procedimiento resulta difícil y delicado, y requiere formación y equipos especiales (J. Kassoff, et. al., Arch. Ophthal., 113, 1168 (1995); J. D. Griffiths, Patentes de los EE.UU. 4921485 (1990) y 5062831 (1991); B. B. Becker, et. al., Patentes de los EE.UU. 5021043 (1991) y 5169386 (1992)). En algunos casos, la intubación silástica del conducto nasolagrimal aumenta el vaciado de las lágrimas a través del conducto nasolagrimal (R. K. Dortzbach, et. al., Amer. J. Ophthal., 94, 585 (1982); H. Al-Hussain, et. al., Ophthal. Plas. Reconstr. Surg., 9, 32 (1993); J. S. Crawford, et. al. Patente de los EE.UU. 4380239 (1983); W. L. Ector, Jr., Patente de los EE.UU. 4658816 (1987)). Un procedimiento más agresivo consiste en una dacriocistorrinostomía que crea quirúrgicamente una nueva vía de vaciado por encima de la obstrucción, permitiendo la continuidad entre el saco lagrimal y la cavidad nasal (J. V. Linberg, et. al., Ophthal., 93, 1055 (1986); K. J. Tarbert, Ophthal., 102, 1065 (1995); F. E. O'Donnell, Jr., Patente de los EE.UU. 5345948 (1994)). También se ha observado que el masaje externo del conducto nasolagrimal aumenta el tiempo de tránsito lagrimal a través del conducto nasolagrimal (J. A. Foster, et. al., Ophthal. Plas. Reconstr. Surg., 12, 32 (1996)).

De este modo, como resultado de la ineficacia y de la incomodidad de las actuales terapias, los investigadores médicos han tratado de desarrollar alternativas al tratamiento de los desórdenes de ojo seco y los del conducto nasolagrimal. Se ha demostrado que la uridina 5' trifosfato (UTP) y la adenina 5' trifosfato (ATP) son potentes agonistas del P2Y2, receptores purinérgicos encontrados en la superficie del epitelio de las vías aéreas humanas. La activación de estos receptores purinérgicos P2Y2 provoca la secreción de cloruro y agua, lo que ayuda a hidratar las secreciones superficiales de las vías aéreas. La utilización de UTP y ATP para el tratamiento de los desórdenes pulmonares caracterizados por la retención de secreciones de mucosa pulmonar se describe en la patente estadounidense número 5.292.498. Debido a la capacidad demostrada de la UTP para aumentar la hidratación de las secreciones epiteliales de las vías aéreas, los solicitantes se sintieron motivados para investigar si la UTP y otros agonistas receptores purinérgicos P2Y2 y P2Y4 podrían también estimular la hidratación del epitelio ocular. Previamente se había demostrado que los receptores purinérgicos del tipo P2 en células acinares lagrimales de ratas y ratones respondían al ATP extracelular incrementando el calcio intracelular (I. Sasaki, et al., Febs Lett. 264, 130-34 (1990); idem, J. Physio. 447, 103-18 (1992); P. Vincent, J. Physiol. 449, 313-31 (1992); J. Gromada, et al., Eur J. Physiol. 429, 578 (1995); V. Lee, et al. Inv. Ophthal. Vis. Sci. 38(4) (1997) resumen). El solicitante ha descubierto que puede estimularse la secreción de lágrimas procedentes de tejidos lagrimales accesorios a través de P2Y2 y/o P2Y4, mecanismos en los que intervienen los receptores purinérgicos similares a los que producen la hidratación del epitelio de las vías aéreas. El solicitante también ha descubierto que los estimulantes del vaciado mucociliar, cuando se aplican por vía tópica al ojo o se inyectan en el sistema de vaciado nasolagrimal incrementan el caudal de lágrimas a través del conducto nasolagrimal, por lo que se alivian los síntomas asociados a la obstrucción del conducto nasolagrimal. La UTP y otros agonistas receptores purinérgicos, administrados tópica o sistémicamente, proporcionan un nuevo método de tratamiento de los desórdenes provocados por la sequedad ocular y la obstrucción del conducto nasolagrimal.

Resumen de la invención

Una preparación estéril adaptada para su administración por vía tópica en el ojo, y un método para estimular la secreción de lágrimas en un sujeto que precise dicho tratamiento. El método de la presente invención se puede utilizar para aumentar la producción de lágrimas por cualquier motivo, incluyendo, sin limitación, el tratamiento de la enfermedad del ojo seco. La enfermedad del ojo seco incluye la queratoconjuntivitis seca (KCS), la sequedad ocular relacionada con la edad, el síndrome de Stevens- Johnson, el Síndrome de Sjogren, la penfigoide ocular cicatrizal, la blefaritis, las lesiones corneales, infecciones, el síndrome de Riley-Day, la alácrima congénita, desórdenes o deficiencias nutricionales (incluyendo vitaminas), efectos secundarios farmacológicos, tensión ocular y destrucción glandular y de tejidos, exposición medioambiental al humo, contaminación, ambientes excesivamente secos, partículas transportadas por el aire, desórdenes autoinmunes y otros desórdenes inmunodeficientes, y pacientes comatosos incapaces de parpadear. La presente invención también podría resultar útil como solución de lavado o irrigación para individuos conscientes, durante las intervenciones quirúrgicas, o para el mantenimiento de los pacientes comatosos o aquellos que no pueden parpadear a causa de un bloqueo neuromuscular, daños nerviosos o pérdida de párpados. Se ha demostrado que el compuesto trifosafto de uridina (UTP) es un potente agonista de P2Y2 y P2Y4, receptores purinérgicos en preparaciones de tejido lagrimal. Además, se llevó a cabo un ejemplo in vivo de acuerdo con la invención en un modelo animal (conejo) de enfermedad del ojo seco.

También se describe un método para mejorar el vaciado del sistema lagrimal en sujetos que lo necesiten. El método de este aspecto de la invención puede utilizarse para aumentar la holgura del conducto nasolacrimal por cualquier motivo, incluyendo, sin limitación, el tratamiento de la obstrucción del conducto nasolagrimal. La obstrucción del conducto nasolagrimal se define de forma que incluya la obstrucción del conducto lagrimal adquirida primaria y secundaria, así como la obstrucción del conducto lagrimal pediátrica. La presente invención también puede resultar útil como solución de lavado o irrigación nasolagrimal en individuos conscientes o durante la cirugía o intubación del conducto nasolagrimal. Los compuestos revelados en este documento también pueden utilizarse con agentes mucolíticos, como desoxirribonucleasa, acetilcisteína y bromexina.

El método de la presente invención incluye la administración por vía tópica de un líquido o suspensión gelificada de P2Y2 y/o P2Y4, agonistas receptores purinergicos seleccionados a partir del grupo consistente en uridina trifosfato [UTP] y sus análogos, P^{1}PÇ^{4}-di(uridina-5')tetrafosfato [U_{2}P_{4}] y sus análogos, citidina 5'-trifosfato [CTP] y sus análogos, y análogos de adenosina 5'-trifosfato [ATP], administrándose las partículas de análogos de UTP, U_{2}P_{4}, CTP o ATP en una cantidad eficaz para estimular la secreción lagrimal o mejorar la holgura de los conductos nasolagrimales.

Un segundo aspecto de la presente invención consiste en el uso de un compuesto de fórmula I-IV para la fabricación de un medicamento para llevar a cabo un método de tratamiento terapéutico como el descrito anteriormente.

Un tercer aspecto de la presente invención es un compuesto farmacéutico que comprende un compuesto de Fórmula I, II, III o IV, en una solución portadora farmacéutica, en una cantidad efectiva para estimular la producción de lágrimas o aumentar la holgura de los conductos nasolagrimales en los sujetos que necesiten dicho tratamiento.

El documento DE 2330902 muestra compuestos farmacéuticos adecuados para la administración ocular tópica, que comprenden adenosina 5'-trifosfato (ATP). También se ha descrito un aumento de la secreción lagrimal en el ojo humano utilizando ATP para el tratamiento en el interior del ojo (Vovsi, B.M. et. al: "Importance of hydrodynamic indices for pathogenic treatment of penetrating wounds of the eye", Zdravookhr. Tadzh (URSS), 1974, 21/3, pp. 35-37).

Se han descrito los usos de los trifosfatos y dinucleótidos para el tratamiento de la discinesia ciliar (WO 97/35591), la sinusitis (WO 98/03177) y la neumonía (WO 98/03182).

Descripción detallada de la invención

La preparación estéril y el método de la presente invención pueden utilizarse para aumentar la producción lagrimal por cualquier motivo, incluyendo, sin limitación, el tratamiento de la enfermedad del ojo seco. La enfermedad del ojo seco incluye la queratoconjuntivitis seca (KCS), la sequedad ocular relacionada con la edad, el síndrome de Stevens-Johnson, el Síndrome de Sjogren, la penfigoide ocular cicatrizal, la blefaritis, las lesiones corneales, infecciones, el síndrome de Riley-Day, la alácrima congénita, desórdenes o deficiencias nutricionales (incluyendo vitaminas), efectos secundarios farmacológicos, tensión ocular y destrucción glandular y de tejidos, exposición medioambiental al humo, contaminación, ambientes excesivamente secos, partículas transportadas por el aire, desórdenes autoinmunes y otros desórdenes inmunodeficientes, y pacientes comatosos incapaces de parpadear. La presente invención también podría resultar útil como solución de lavado o irrigación para individuos conscientes, durante las intervenciones quirúrgicas, o para el mantenimiento de los pacientes comatosos o aquellos que no pueden parpadear a causa de un bloqueo neuromuscular, daños nerviosos o musculares o pérdida de párpados.

También se describe un método para la mejora del vaciado del sistema lagrimal en sujetos que precisan dicho tratamiento. El método de este aspecto de la invención puede utilizarse para aumentar la holgura del conducto nasolagrimal por cualquier motivo, incluyendo, sin limitación, el tratamiento de la obstrucción del conducto nasolagrimal. La obstrucción del conducto nasolagrimal se define de forma que incluya la obstrucción del conducto lagrimal adquirida primaria y secundaria, así como la obstrucción del conducto lagrimal pediátrica. La presente invención también puede resultar útil como solución de lavado o irrigación nasolagrimal en individuos conscientes o durante la cirugía o intubación del conducto nasolagrimal. Los compuestos revelados en este documento también pueden utilizarse con agentes mucolíticos, como desoxirribonucleasa, acetilcisteína y bromexina.

El solicitante ha descubierto que la uridina 5' trifosfato (UTP) es un potente agonista de los receptores purinérgicos que se encuentran en las glándulas lagrimales y en las preparaciones conjuntivales. El método de la presente invención representa una mejora con respecto al tratamiento de la enfermedad del ojo seco más corrientemente utilizado, es decir, las lágrimas artificiales (solución salina), ya que la UTP estimula la propia producción y secreción de lágrimas por parte del paciente, lo que mantiene sus características protectoras y lubricantes naturales. Asimismo, el método de la presente invención puede resultar útil incluso cuando las glándulas lagrimales están disfuncionales o ausentes. Además, el método de la presente invención puede resultar útil a la hora de aumentar la holgura de los conductos nasolagrimales obstruidos.

La presente invención se refiere principalmente al tratamiento de seres humanos, pero también puede utilizarse para el tratamiento de otros mamíferos, como perros y gatos, con fines veterinarios.

El término "uridina trifosfato", tal y como se utiliza en el presente documento, incluye las sales farmacológicamente aceptables del mismo, como (sin limitación) sales de metales alcalinos, como sodio o potasio; una sal de metal alcalinotérreo, como magnesio o calcio; o una sal de amonio o de tetralquilo de amonio, es decir, NX^{4+} (donde X es un alquil C_{1-4}). Las sales farmacológicamente aceptables son sales que mantienen la actividad biológica deseada del compuesto padre y no transmiten efectos toxicológicos no deseados.

El método de la presente invención incluye la administración por vía tópica de un líquido o suspensión gelificada de P2Y2 y/o P2Y4, agonistas receptores purinérgicos seleccionados a partir del grupo consistente en la fórmula general I, es decir, uridina trifosfato [UTP] y sus análogos, de la fórmula general II, es decir, P^{1}P^{4}-di(uridina-5')tetrafosfato [U_{2}P_{4}] y sus análogos, de la fórmula general III, es decir, citidina 5'-trifosfato [CTP] y sus análogos, y análogos de la fórmula general IV, es decir, adenosina 5'-trifosfato [ATP], administrándose las partículas de las fórmulas I, II, III o IV en una cantidad eficaz para estimular la secreción lagrimal o aumentar la holgura de los conductos nasolagrimales.

Los dinucleóticos anteriormente descritos figuran en la tabla I, junto con sus referencias correspondientes.

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TABLA I Los dinucleótidos en la literatura (Los números entre paréntesis corresponden a las referencias indicadas más abajo)

1

(1) M.A.G. Sillero et al., Eur. J. Biochem., 76, 331 (1977)

(2) C.G. Vallejo et al., Biochim. Biophys. Acta, 483, 304 (1976)

(3) H. Coste et al., J. Biol. Chem., 262, 12096 (1987)

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Compuestos activos de la Invención

El UTP y sus análogos se muestran en la fórmula general I

2

donde:

X_{1}, X_{2} y X_{3} son independientemente O- o S-. Preferiblemente, X_{2} y X_{3} son O-.

R_{1} es O, imido, metileno o dihalometileno (por ejemplo, diclorometileno o difluorometileno). Preferiblemente, R es oxígeno o imido.

R_{2} es H o Br. Preferiblemente, R_{2} es H. Concretamente, los compuestos preferidos de la Fórmula I son uridina 5' trifosfato (UTP) y uridina 5'-O-(3-tiotrifosfato) (UTPyS).

Un dinucleótido se muestra mediante la Fórmula general II.

3

donde:

X es oxígeno, imido, metileno o difluorometileno;

n = 0 o 1;

m = 0 o 1;

n + m = 0, 1 o 2; y

B y B' son cada uno de ellos independientemente un residuo de purina o un residuo de pirimidina, enlazados a través de la posición 9- o 1-, respectivamente. En el caso de que B y B' sean uracil, unido en la posición N-1 al grupo ribosil, el total de m + n puede entonces ser igual a 3 o 4 cuando X es oxígeno. Los grupos ribosil se encuentran en la configuración D-, como se muestra, pero también pueden adoptar las configuraciones L-, o D- y L-. La configuración preferida es la D-.

B son B' independientemente un residuo de purina, como en la Fórmula IIa, o un residuo de pirimidina, como en la Fórmula IIb, enlazados a través de la posición 9- o 1-, respectivamente. En el caso de que B y B' sean uracil, unido en la posición N-1 al grupo ribosil, el total de m + n puede entonces ser igual a 3 o 4 cuando X es oxígeno. Los grupos ribosil se encuentran en la configuración D-, como se muestra, pero también pueden adoptar las configuraciones L-, o D- y L-. La configuración preferida es la D-.

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4

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Los derivados sustituidos de la adenina incluyen adenina 1-óxido; 1, N6-(4- o 5-eteno sustituido) adenina; 6-adenina sustituida; u 8-aminoadenina sustituida, donde R' en los grupos 6- u 8-HNR' es uno de los siguientes: grupos arilalquilo (C_{1-6}) con el grupo arilo funcionalizado opcionalmente según se describe más adelante; alquilo; y grupos alquilo con grupos funcionales en ellos, como: ([6-aminohexil]carbamoilmetilo)-, y o-derivados aminoacilados (hydroxi, tiol y carboxi) en los que el grupo acilo es uno de los siguientes, sin limitación: acetilo, trifluroroacetilo, benzoilo, benzoilo sustituido, etc., o el grupo carboxílico se encuentra presente como su derivado de éster o amida, por ejemplo, el éster etilo o metilo o sus derivados metilo, etilo o benzamido. El grupo \omega-amino (hidroxi, tiol) puede estar alquilado con un grupo C_{1-4} alquilo.

Igualmente, B o B', o ambos, pueden ser una pirimidina con la fórmula general de la Figura IIb, enlazada a través de la posición 1-:

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5

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donde:

R_{4} es hidroxi, mercapto, amino, ciano, aralcoxi, C_{1-6} alcoxi, C_{1-6} alquilamino y dialquilamino, estando opcionalmente los grupos alquilo enlazados para formar un heterociclo;

R_{5} es hidrógeno, acilo, C_{1-6} alquilo, aroilo, C_{1-5} alcanoilo, benzoilo, o sulfonato;

R_{6} es hidroxi, amino, mercapto, alcoxi, aralcoxi, C_{1-6}-alquilotio, C_{1-5} amino disustituido, triazolil, alquilamino o dialquilamino, donde los grupos alquilo están opcionalmente enlazados para formar un heterociclo o están enlazados a N3 para formar un anillo opcionalmente sustituido;

R_{7} es hidrógeno, hidroxi, ciano, nitro, alquenil, con el grupo alquenil opcionalmente enlazado a través del oxígeno para formar un anillo opcionalmente sustituido en el carbono adyacente al oxígeno con grupos alquilo o arilo, alquinilo sustituido, halógeno, alquilo, alquilo sustituido, perhalometilo (por ejemplo, CF3), C2-6 alquilo, C2-3 alquenilo o etenilo sustituido, (por ejemplo, allilamino, bromo-vinilo y propenoato de etilo, o ácido propenoico), C22 alquinilo o alquinilo sustituido; o conjuntamente, R_{6}-R_{7} pueden formar un anillo saturado o insaturado de 5 o 6 elementos enlazado mediante N u O en R_{6}, pudiendo contener dicho anillo sustitutos que comprenden diversas funciones; siempre que cuando R_{8} sea un amino o amino sustituido, R_{7} es hidrógeno; y R_{8} es hidrógeno, alcoxi, arylalcoxi, alquilotio, arilalquilotio, carbozamidometilo, carboximetilo, metoxi, metiltio, fenoxi o feniltío.

En la estructura general de la Figura IIb que antecede, las líneas de puntos que figuran en las posiciones 2- a 6-indican la presencia de enlaces sencillos o dobles en dichas posiciones; las posiciones relativas de los enlaces sencillos o dobles están determinadas por el hecho de que los sustitutos R_{4}, R_{6} y R_{7} tienen capacidad de tautomerismo ceto-enol.

En las estructuras generales de las Figuras IIa y IIb que anteceden, los grupos acilo incluyen ventajosamente grupos alcanoílo o aroilo. Ventajosamente, los grupos alquilo contienen de 1 a 8 átomos de carbono, concretamente de 1 a 4 átomos de carbono opcionalmente sustituidos por uno o más sustitutos adecuados, como se describe más adelante. Los grupos arilo, incluyendo las porciones arilo de dichos grupos, como ariloxi, son preferiblemente grupos fenilo opcionalmente sustituidos por uno o más sustitutos adecuados, como se describe más adelante. Los grupos alquenilo y alquinilo mencionados anteriormente contienen ventajosamente de 2 a 8 átomos de carbono, y concretamente, de 2 a 6 átomos de carbono, por ejemplo, etenil o etinil, opcionalmente sustituidos por uno o más sustitutos adecuados, como se describe más adelante. Los sustitutos adecuados de los grupos alquilo, alquenilo, alquinilo y arilo, se seleccionan ventajosamente entre halógenos, hidroxi, C_{1-4} alcoxi, C_{1-4} alquilo, C_{7-12} arilalcoxi, carboxi, ciano, nitro, sulfonamido, sulfonato, fosfato, sulfónico amino y amino sustituido, donde el amino se sustituye aisladamente o en forma doble por un C_{1-4} alquilo, y cuando se sustituye en forma doble, los grupos alquilo están enlazados opcionalmente para formar un heterociclo.

Los análogos de ATP vienen indicados por la Fórmula General III:

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6

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donde:

R_{1}, X_{1}, X_{2} y X_{3} se definen como en la Fórmula I.

R_{3} y R_{4} son H mientras que R_{2} no es nada y hay un doble enlace entre N-1 y C-6 (adenina), o

R_{3} y R_{4} son H mientras que R_{2} es O y hay un doble enlace entre N-1 y C-6 (adenina 1-óxido), o

R_{3}, R_{4} y R_{2} tomados en conjunto son -CH=CH-, formando un anillo desde N-6 a N-1 con un doble enlace entre N-6 y C-6 (1,N6-etenoadenina).

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CTP y sus análogos se muestran mediante la Fórmula general IV:

600

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7

donde:

R_{1}, X_{1}, X_{2} y X_{3} se definen como en la Fórmula I.

R_{5} y R_{6} son H mientras que R_{7} no es nada y existe un doble enlace entre N-3 y C-4 (citosina), o

R_{5}, R_{6} y R_{7} tomados en su conjunto son -CH=CH-, formando un anillo desde N-3 a N-4 con un doble enlace entre N-4 y C-4 (3,N4-etenocitosina) opcionalmente sustituida en la posición 4- o 5-del anillo eteno.

Para simplificar, las fórmulas I, II, III y IV del presente documento muestran los compuestos activos en la configuración D- que se produce de forma natural, pero la presente invención también incluye compuestos con la configuración L- y mezclas de compuestos con las configuraciones D- y L-, a menos que se especifique en otra forma. Se prefiere la configuración D- que se produce de forma natural.

Los compuestos activos de la invención también pueden estar presentes bajo la forma de sus sales farmacológicamente aceptables, como, sin limitación, una sal de metales alcalinos, como sodio o potasio; una sal de metal alcalinotérreo, como manganeso, magnesio o calcio; o una sal de amonio o de tetralquilo de amonio, es decir, NX_{4}^{+} (donde X es C_{1-4}). Las sales farmacológicamente aceptables son sales que mantienen la actividad biológica deseada del compuesto padre y no transmiten efectos toxicológicos no deseados.

Métodos de administración

Los compuestos activos que se muestran en el presente documento pueden administrarse en los ojos de un paciente a través de cualquier medio adecuado, pero preferiblemente se administran mediante la administración de un líquido o suspensión gelificada del compuesto activo en forma de gotas, spray o gel. Alternativamente, los compuestos activos pueden aplicarse en el ojo mediante liposomas. Igualmente, los compuestos activos pueden infusionarse en la película lagrimal a través de un sistema bomba-catéter. Otra realización de la presente invención se refiere al compuesto activo contenido en un dispositivo para la liberación selectiva o continua, por ejemplo, membranas como, sin limitación, las utilizadas con el sistema Ocusert^{TM} (Alza Corp, Palo Alto, California). Como realización adicional, los compuestos activos pueden estar contenidos en, ser transportados por o fijados a lentes de contacto que se colocan en el ojo. Otra realización de la presente invención se refiere al compuesto activo contenido en un spray de líquido que puede aplicarse a la superficie ocular. Otra realización de la presente invención se refiere a la inyección del compuesto activo directamente en los tejidos lagrimales o en la superficie ocular.

La cantidad de compuesto activo incluida en la solución tópica es una cantidad suficiente para conseguir concentraciones de disolución del compuesto activo en la superficie ocular del sujeto, desde unos 10^{-7} moles/litro a unos 10^{-1} moles/litro, y más preferiblemente, desde unos 10^{-6} moles/litro a unos 10^{-1} moles/litro, a fin de estimular la secreción lagrimal o aumentar la holgura de los conductos nasolacrimales.

Dependiendo de la solubilidad de la fórmula específica del compuesto activo administrado, la dosis diaria para fomentar la secreción de lágrimas o aumentar la holgura del conducto nasolagrimal puede repartirse en una o varias dosis unitarias administradas. La dosis total diaria de UTP (por ejemplo) puede variar entre una concentración de 0,25 mg/ml a 50 mg/ml, dependiendo de la edad y de la situación del paciente. La dosis unitaria de UTP preferida actualmente varía entre 1 y 100 miligramos, a un régimen de 2 a 6 administraciones diarias.

Algunos compuestos de fórmula I, III y IV pueden fabricarse mediante métodos bien conocidos para cualquier persona versada en la materia; algunos de ellos están disponibles comercialmente, por ejemplo, en Sigma Chemical Company, PO Box 14508, St. Louis, MO 63178. Los compuestos de la Fórmula II pueden fabricarse de acuerdo con procedimientos conocidos o variaciones de los mismos, descritas por: P. Zamecnik, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 838-42 (1981); y K. Ng y L. E. Orgel, Nucleic Acids Res. 15(8), 3572-80 (1977).

La solución tópica que contiene el compuesto activo puede también contener un vehículo fisiológicamente compatible, como aquellos que pueden seleccionar las personas versadas en la técnica oftálmica utilizando criterios convencionales. Los vehículos pueden seleccionarse a partir de los vehículos oftálmicos conocidos, que comprenden, sin limitación, solución salina, poliéteres de agua, como polietileno glicol, polivinilos, como alcohol de polivinilo y povidona, derivados de la celulosa, como metilcelulosa e hidroxipropil metilcelulosa, derivados del petróleo, como aceite mineral y petrolato blanco, grasas animales, como la lanolina, polímeros de ácido acrílico, como gel de carboxipolimetileno, grasas vegetales, como aceite de cacahuete y polisacáridos, como dextranos, y glicosaminoglicanos, como hialuronato de sodio y sales como cloruro sódico y cloruro potásico.

Además del método tópico de administración descrito anteriormente, existen diversos métodos de administración sistémica de los compuestos activos de la presente invención. Uno de dichos medios implicaría una suspensión en aerosol de partículas respirables que incluyan el compuesto activo, y que son inhaladas por el paciente. El compuesto activo sería absorbido por el torrente sanguíneo a través de los pulmones, o entraría en contacto con los tejidos lagrimales a través de los conductos nasolagrimales, y posteriormente entraría en contacto con las glándulas lagrimales una cantidad farmacológicamente efectiva. Las partículas respirables pueden ser líquidas o sólidas, con un tamaño de partícula lo suficientemente reducido como para atravesar la boca y la laringe durante la inhalación; en general, se consideran respirables las partículas con un tamaño variable entre 1 y 10 micras, pero más preferiblemente entre 1 y 5 micras.

Otro medio de administración sistémica de los compuestos activos en los ojos del paciente implicaría la administración de un líquido o suspensión líquida en forma de gotas, lavado ocular o gotas nasales de una fórmula líquida o un spray nasal de partículas respirables inhaladas por el paciente. Los compuestos líquidos farmacéuticos del compuesto activo para la producción de un spray nasal o de gotas oculares pueden prepararse combinando el compuesto activo con un vehículo adecuado, como una solución estéril de agua exenta de pirógeno o solución salina, mediante técnicas conocidas por cualquier persona versada en la materia.

Otros medios de administración sistémica del compuesto activo implicarían la administración por vía oral, en la que los compuestos farmacéuticos que contienen compuestos de la Fórmula I, II, III o IV se encuentran en forma de tabletas, rombos, suspensiones acuosas o aceitosas, polvo o gránulos dispersables, emulsión, píldoras o cápsulas, jarabes o elixires. Los compuestos diseñados para uso oral pueden prepararse de acuerdo con cualquier método conocido por la técnica para la fabricación de compuestos farmacéuticos, y dichos compuestos pueden contener uno o más agentes seleccionados en el grupo, consistente en agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes colorantes y conservantes, para proporcionar unas preparaciones farmacéuticas elegantes y apetitosas. Las tabletas contienen el ingrediente activo mezclado con excipientes no tóxicos farmacológicamente aceptables adecuados para la fabricación de tabletas. Estos excipientes pueden ser, por ejemplo, disolventes inertes, como carbonato cálcico, carbonato sódico, lactosa, fosfato cálcico o fosfato sódico; agentes granulantes y desintegradores, como por ejemplo almidón de maíz, gelatina o acacia; y agentes lubricantes, como estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Las tabletas pueden estar no revestidas o estar revestidas mediante técnicas conocidas, para retrasar la desintegración y absorción en el tracto gastrointestinal, facilitando así una acción sostenida a lo largo de un período más prolongado. Por ejemplo, puede utilizarse un material retardante, como el monoestearato de gliceril o el diestearato de gliceril. Las fórmulas para uso oral también pueden presentarse como cápsulas de gelatina dura en las que el ingrediente activo se encuentra mezclado con un disolvente sólido inerte, como el carbonato cálcico, el fosfato cálcico o el caolín, o como cápsulas de gelatina blanda, en las que el ingrediente activo está mezclado con agua o con un medio oleoso, como aceite de cacahuete, parafina líquida o aceite de oliva.

Otros medios adicionales de administración sistémica del componente activo en el ojo del paciente implicarían que el compuesto activo tendría forma de supositorio, de tal forma que una cantidad terapéuticamente efectiva del compuesto alcance el ojo a través de la absorción y circulación sistémica.

Otros medios adicionales de administración sistémica del componente activo supondría la instalación directa intraoperativa de un gel, líquido, crema o suspensión líquida para obtener una cantidad terapéuticamente aceptable del compuesto activo.

Las personas versadas en la materia reconocerán que los materiales de partida pueden ser muy diversos, pudiendo utilizarse etapas adicionales para obtener los compuestos que comprende la presente invención, como se demostrará mediante los ejemplos siguientes. En algunos casos, la protección de determinadas funciones reactivas puede ser necesaria para conseguir algunas de las transformaciones que anteceden. En general, la necesidad de dichos grupos protectores será evidente para las personas versadas en la materia de la síntesis orgánica, así como las condiciones necesarias para añadir y eliminar dichos grupos.

La invención se ilustrará mediante los siguientes ejemplos, que no deben interpretarse como limitativos de la invención. Se han efectuado ejemplos in vivo de acuerdo con la invención en conejos con el síndrome de ojo seco. El síndrome del ojo seco se crea cerrando quirúrgicamente el conducto que transporta el fluido desde la glándula lacrimal principal hasta la película lagrimal, eliminando quirúrgicamente las glándulas nictitante y harderiana. Las personas versadas en la materia reconocerán que los resultados de las pruebas oftalmológicas llevadas a cabo en el modelo de conejo mencionado anteriormente están estrechamente correlacionados con los seres humanos afectados por la enfermedad del ojo seco, y por tanto, los resultados proporcionan una predicción adecuada de la eficacia terapéutica en seres humanos.

Ejemplo 1 Estimulación de la liberación de mucosa en preparaciones conjuntivas en ratas

Se sacrificó una serie de ratas macho Sprague-Dawley de 12 semanas de edad (Charles River Laboratories, Wilmington, MA) mediante inyección intraperitoneal de pentobarbital de sodio (1.300 mg/kg) y se depositó una gota de 20 \muL de lidocaína al 1% disuelta con solución tampón lagrimal (106,5 mM NaCl, 26,1 mM NaHCO_{3}, 18,7 mM KC1, 1,0 mM MgCl_{2}, 0,5 mM NaH_{2}PO_{4}, 1,1 mM CaCl_{2}, y 10 mM HEPES pH 7,45) en la superficie ocular durante 10 min. Se retiró de cada uno de los ojos la conjuntiva interior que se extiende desde el párpado hasta la córnea y el canto medio a lateral, colocándose en papel de filtro. Cada una de las conjuntivas se cortó a la mitad longitudinalmente y los cuatro fragmentos resultantes se incubaron en un medio de crecimiento de queratinocito (Clonetics Corp., San Diego, CA) con o sin agonista durante una hora a 4ºC en una solución de Karnovsky cuya fuerza se redujo a la mitad (glutaraldehído al 2,5% y paraformaldehído al 2% en una solución tampón de cacodilato, pH 7,4), incrustados en metacrilato, seccionándose en 3 piezas. Seis secciones de cada pieza de tejido se tiñeron con Azul Alciano (pH 5) y un reagente ácido periódico Schiffs (AB-PAS). Se contó el número de células calciformes que contenían mucosa de cada sección, utilizando microscopía óptica (microscopio estándar con un ocular indexado por retícula) a 160 aumentos. En el caso del cultivo de tejidos conjuntivos sin estimulación, las células calciformes tenían bordes definidos y estaban intensamente teñidas debido a los gránulos secretorios que contienen mucosa de la porción apical de cada célula calciforme. Gracias al estímulo, los gránulos de mucosa se liberan en el medio. Se midió y se calculó el promedio del número de células calciformes quiescientes con contenido de mucosa por área unitaria (0,16 mm^{2}). Un descenso en el número de células calciformes con contenido de mucosa por área unitaria indica un aumento de la secreción de mucosa, debido a que la tinción está causada por las células no secretadas. Los datos se expresan como la media del porcentaje del valor del tejido de control (sin tratar). El método de este ejemplo se ha adaptado de D. Dartt, et al., Exp. Eye Res., 63, 27 (1996), que queda incorporado a este documento por referencia.

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Ejemplo 2 Medida del Calcio intracelular

Se cargaron células conjuntivas de ratas cultivadas en cubreobjetos revestidos de vitrogen con una concentración final de 3 \muM de Fura-2/AM a 370ºC durante 30 minutos. A continuación, las células se lavaron en una solución ringer de NaCl y se montaron en una cámara para medir su fluorescencia. Para reducir las fugas de Fura-2 de la célula en el espacio extracelular y evitar la compartimentación de la sonda en función del tiempo, todas las medidas de [Ca^{2+}]_{i} se efectuaron a 250ºC. A esta temperatura, no se observaron puntos brillantes vesiculares que indicasen compartimentación de la sonda.

Las medidas de [Ca^{2+}]_{i} en células del epitelio conjuntivo de ratas se obtuvieron mediante un microspectrofluorómetro modular (SPEX Industries, Inc., Edison, NJ) acoplado a un microscopio Zeiss Axiovert IM 35. El sistema está equipado con una lámpara de xenón, un divisor de haz, dos monocromadores y un espejo chopper giratorio que permite la excitación de la fluorescencia celular a longitudes de onda alternantes de 340 y 380 nm (emisión > 450 nm). La señal fluorescente procedente de una sola célula se mide con un fotómetro equipado con un pinhole (diámetro del punto de 3-5 \mum) que excluye las señales procedentes de las células adyacentes.

Después de añadir el agonista, la señal fluorescente se apagó mediante una solución ringer de NaCl que contenía 1,5 x 10^{-4}M de digitonina y 10^{-3}M de MnCl_{2}. La señal restante en cada longitud de onda de excitación, equivalente a la fluorescencia de fondo en células no cargadas, se resta de los datos procedentes de las células cargadas Fura-2/AM antes de tomar la relación (340/380 nm). La relación 340 nm/380 nm se convierte a una medida real [Ca^{2+}] utilizando las normas externas de calibración y la fórmula obtenida por G. Grynkiewicz, et al. (J. Biol. Chem. 260, 3440-3450 (1985)), utilizada con dobles medidas de longitud de onda: [Ca^{2+}]_{i} = K [(R_{x} - R_{o})/(-R_{s} - R_{x})], representando R_{o} y R_{s} las relaciones a cero Ca^{2+} y Ca^{2+} de saturación, respectivamente. R_{x} representa la relación experimental. K es K_{d}/(F_{o}/F_{s}) , siendo K_{d} = 1,57 x 10^{-7} M at 25ºC la constante de disociación efectiva para Fura-2, y representando FO y Fs las intensidades de fluorescencia a 380 nm a Ca^{2+} cero y de saturación, respectivamente. El método utilizado en este ejemplo se ha adaptado de R. Boucher, et al., Patente estadounidense Nº 5.292.498, que queda incorporada a este documento por referencia.

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Ejemplo 3 Reversión de la aparición de la enfermedad del ojo seco en Conejos para KCS

Se generó una queratoconjuntivitis seca (KCS) en los ojos derechos de 8 conejos blancos de Nueva Zelanda mediante el cierre quirúrgico del conducto excretor de la glándula lagrimal, y retirando la membrana nictitante, la glándula nictitante y la glándula harderiana. Todos los conejos se dejaron sin tratar durante 8 semanas, confirmándose la KCS midiendo la elevada osmolaridad de la película lagrimal tomando muestras de lágrimas de 0,1-0,4 \muL como se ha descrito anteriormente (J. Gilbard, et al., Ophthalmol. 96, 677 (1978)). Se preparó una solución 3,0 mmol de UTP o análogo en una solución tampón isotónica preservada. Cuatro conejos se trataron con 1 gota (10 \muL) de UTP o solución analógica cuatro veces al día, excluyendo fines de semana. Los cuatro conejos restantes no tratados se utilizaron como animales de control. Tras el comienzo del tratamiento, se tomaron muestras de lágrimas de 0,1-0,4 \muL de todos los conejos, para efectuar medidas de osmolaridad los lunes por la mañana, con anterioridad a la primera dosis. Al cabo de 20 semanas, los animales se sacrificaron, y se midieron las densidades de las células calciformes tiñendo con azul alciano y reagente periódico ácido de Schiff (D. Dartt, et al., Exp. Eye Res. 67, 27 (1996)).

El estudio está diseñado para demostrar que el UTP y las soluciones análogas elevaban la osmolaridad de la película lagrimal y aumentaban la densidad de las células calciformes conjuntivas, invirtiendo de este modo la aparición de la enfermedad de la superficie ocular en el modelo de KCS en conejos. El método de este ejemplo se ha adaptado de J. P. Gilbard, Arch. Ophthalmol. 112, 1614 (1994), que queda incorporado a este documento por referencia.

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Ejemplo 4 Tolerancia Ocular Aguda en Conejos

Se formuló U_{2}P_{4} (P^{1},P^{4}-Di (uridina tetrafosfato), sal de tetrasodio) como una solución acuosa isotónica y se administró por vía tópica en los ojos de conejos albinos en una serie de experimentos que proporcionaron una amplia indicación de la seguridad ocular aguda de U_{2}P_{4}. Los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices de GLP. Se utilizó un test de Draize modificado para determinar si el U_{2}P_{4} es aceptable para su administración en el ojo.

Para estos estudios se utilizaron conejos albinos de Nueva Zelanda adultos, machos y sanos (entre 2 y 2,5 Kg). Los conejos se obtuvieron de Elevage Scientifique des Dombes (Chantillon sur Charlaronne, Francia). Los animales se sometieron a observación diaria en búsqueda de síntomas de enfermedad y para los experimentos se utilizaron exclusivamente animales sanos sin anormalidades oculares. Los animales se alojaron en jaulas estándar en una habitación en condiciones medioambientales controladas. Los animales tenían acceso libre a comida y agua a lo largo del estudio. El artículo de prueba de todos los estudios se formulaba diariamente en agua y NaCl para conseguir una solución isotónica.

Este experimento consistió en una prueba abierta en la que se administró U_{2}P_{4} a una concentración del 5,0% mediante múltiples instalaciones de 50 \mul (5 veces en 20 minutos) en el saco conjuntivo del ojo derecho de tres conejos. Se asignó a los animales un grado clínico de seguridad ocular para la conjuntiva, la córnea y el iris, de acuerdo con una escala Draize modificada a 0, 1, 2 y 3 horas tras su instalación. El ojo izquierdo recibió una instalación fisiológica salina y sirvió como control.

Los resultados de la seguridad ocular de U_{2}P_{4} a una concentración del 5,0% tan sólo mostraron un conejo (ambos ojos) con ligera rojez conjuntiva (grado 1 sobre una escala de 0-4 de aumento de la gravedad). El resto de grados de la conjuntiva, córnea e iris, en lo que respecta a la irritación, quemosis y humidificación fue de cero (Véase la tabla 2 del informe adjunto). Los resultados de la administración de placebo también fueron de cero en todos los casos, por lo que se consideró que la administración de U_{2}P_{4} en el ojo es segura.

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Ejemplo 5 Efectos de la anestesia corneal en conejos

Se formuló U_{2}P_{4} (P^{1},P^{4}-Di (uridina tetrafosfato), sal de tetrasodio) como una solución acuosa isotónica y se administró por vía tópica en los ojos de conejos albinos en una serie de experimentos que proporcionaron una amplia indicación de la seguridad ocular aguda de U_{2}P_{4}. Los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices de GLP.

Para estos estudios se utilizaron conejos albinos de Nueva Zelanda adultos, machos y sanos (entre 2 y 2,5 Kg). Los conejos se obtuvieron de Elevage Scientifique des Dombes (Chantillon sur Charlaronne, Francia). Los animales se sometieron a observación diaria en búsqueda de síntomas de enfermedad y para los experimentos se utilizaron exclusivamente animales sanos sin anormalidades oculares. Los animales se alojaron en jaulas estándar en una habitación en condiciones medioambientales controladas. Los animales tenían acceso libre a comida y agua a lo largo del estudio. El artículo de prueba de todos los estudios se formulaba diariamente en agua y NaCl para conseguir una solución isotónica.

se administró U_{2}P_{4} a una concentración del 5,0% mediante múltiples instalaciones de 50 \mul (5 veces en 20 minutos) en el saco conjuntivo del ojo derecho de tres conejos y se evaluaron los efectos anestésicos en la córnea mediante un estesiómetro de Cochet a los 5, 10, 20, 30, 40, 50 y 60 minutos con posterioridad a la última instalación. La anestesia corneal se evaluó por el número de estímulos mecánicos de la córnea necesarios para inducir un reflejo de parpadeo. El ojo izquierdo recibió una instalación fisiológica salina y sirvió como control.

Se demostró nuevamente la seguridad de la solución de U_{2}P_{4} al 5,0%, ya que no mostró efectos anestésicos en la córnea tras su administración en el ojo derecho de conejos albinos (véase la figura 1).

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Figura 1. Número de estímulos mecánicos necesarios para provocar un reflejo de parpadeo al cabo de cinco instalaciones de U_{2}P_{4} al 5,0%. Al compararse con la solución salina (ojo izquierdo), el U_{2}P_{4} no mostró efectos anestésicos en la córnea.

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Ejemplo 6 Secreción de lágrimas en conejos

Se formuló U_{2}P_{4} (P^{1},P^{4}-Di (uridina tetrafosfato), sal de tetrasodio) como una solución acuosa isotónica y se administró por vía tópica en los ojos de conejos albinos y se llevó a cabo una serie de experimentos de secreción de lágrimas como medida de eficacia en conejos normales.

Para estos estudios se utilizaron conejos albinos de Nueva Zelanda adultos, machos y sanos (entre 2 y 2,5 Kg). Los conejos se obtuvieron de Elevage Scientifique des Dombes (Chantillon sur Charlaronne, Francia). Los animales se sometieron a observación diaria en búsqueda de síntomas de enfermedad y para los experimentos se utilizaron exclusivamente animales sanos sin anormalidades oculares. Los animales se alojaron en jaulas estándar en una habitación en condiciones medioambientales controladas. Los animales tenían acceso libre a comida y agua a lo largo del estudio. El artículo de prueba de todos los estudios se formulaba diariamente en agua y NaCl para conseguir una solución isotónica.

Se instiló U_{2}P_{4} (50 \muL) a unas concentraciones de 0,5%m 5,0% y 8,5% 5 veces al día en el saco conjuntivo de ocho conejos en grupos independientes. La secreción de lagrimas se midió utilizando una tira de pruebas Schirmer al cabo de 0, 5, 15, 30 y 60 minutos tras la primera y la última instalación del día, los días 1, 7 y 14. Los resultados se compararon con los grupos de control a base de solución salina y sin tratar.

Las tres concentraciones de U_{2}P_{4} aumentaron la secreción de lágrimas en los ojos de los conejos a lo largo de un período de 60 minutos, en comparación con la solución salina de control (Véase la Figura 2).

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Figura 2. Efectos de secreción lagrimal al cabo de 60 minutos tras una sola dosis de U_{2}P_{4} a tres concentraciones en ojos de conejo, como se muestra en la Figura 2. Las tres concentraciones de U_{2}P_{4} incrementaron la secreción de lágrimas, comparado con la solución salina de control. Los datos se muestran como la media de ocho animales.

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La invención y la forma y el procedimiento de utilizarla se describirán de una forma tan completa, clara, concisa y exacta que permitirán su utilización a cualquier persona versada en la materia. Debe entenderse que cuanto antecede describe las realizaciones preferidas de la presente invención. Esta especificación concluye con las siguientes reivindicaciones, a fin de destacar especialmente y de forma distintiva el objeto de la invención.

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Referencias citadas en la descripción

La lista de referencias citada por el solicitante lo es solamente para utilidad del lector, no formando parte de los documentos de patente europeos. Aún cuando las referencias han sido cuidadosamente recopiladas, no pueden excluirse errores u omisiones y la OEP rechaza toda responsabilidad a este respecto.

Documentos de patente citado en la descripción

\bullet US 08797472 B [0001]

\bullet US 4658816 A, W. L. Ector, Jr. [0012]

\bullet US 4753945 A [0007]

\bullet US 5345948 A, F. E. O'Donnell, Jr. [0012]

\bullet US 4868154 A [0008]

\bullet US 5292498 A [0013] [0055]

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Claims (32)

1. Preparación estéril adaptada para su administración tópica en el ojo, que comprende:

- una cantidad efectiva de un compuesto que activa los receptores purinérgicos en tejidos lagrimales, seleccionándose dicho compuesto de un grupo consistente en uridina 5' trifosfato como se describe en la fórmula I, dinucleótidos como los descritos en las fórmulas II, II(a) y II(b), derivados de adenosina 5'-trifosfato como se describen en la fórmula II y citidina 5'-trifosfato como se muestra en la fórmula IV, así como sus análogos y derivados activos, y sus sales farmacológicamente aceptables; y

- un vehículo fisiológicamente compatible seleccionado del grupo consistente en soluciones acuosas de electrolito, poliéteres, polivinilos, polímeros de ácido acrílico, lanolina y glucosaminoglicanos;

-fomentando dicha preparación la secreción lagrimal de los tejidos lagrimales de un sujeto que precise dicho tratamiento:

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10

\vskip1.000000\baselineskip

donde:

X_{1}, X_{2} y X_{3} son independientemente O- o S-,

R_{1} es O, imido, metileno o dihalometileno

R_{2} es H o Br,

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11

\vskip1.000000\baselineskip

donde:

X es oxígeno, imido, metileno o difluorometileno;

n = 0 o 1;

m = 0 o 1;

n + m = 0, 1 o 2; y

\newpage

B son B' independientemente un residuo de purina, como en la fórmula IIa, o un residuo de pirimidina, como en la fórmula IIb, enlazados a través de la posición 9- o 1-, respectivamente:

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12

donde:

R_{3} es hidrógeno o NHR,

R_{1} y R' de los grupos 8-NHR se seleccionan en el grupo consistente en grupos hidrógeno, arilalquilo (C_{1-6}) en los que el grupo arilo tiene opcionalmente grupos funcionales, alquilo, grupos alquilo con grupos funcionales, \omega-A(alquil) CONH(alquil)- y \omega-A(alquil) NHCO(alquil)- donde A es amino, mercapto, hidroxi o carboxil;

R_{2} es O o está ausente; o

R_{1} y R_{2} se toman de un anillo de imidazol en huso de 5 elementos, sustituido opcionalmente en las posiciones 4' y 5';

\vskip1.000000\baselineskip

13

donde:

R_{4} es hidroxi, mercapto, amino, ciano, aralcoxi, C_{1-6} alcoxi, C_{1-6} alquilamino y dialquilamino, estando opcionalmente los grupos alquilo enlazados para formar un heterociclo;

R_{5} es hidrógeno, acilo, C_{1-6} alquilo, aroilo, C_{1-5} alcanoilo, benzoilo, o sulfonato;

R_{6} es hidroxi, amino, mercapto, alcoxi, aralcoxi, C_{1-6}-alquilotio, C_{1-5} amino disustituido, triazolil, alquilamino o dialquilamino, donde los grupos alquilo están opcionalmente enlazados para formar un heterociclo o están enlazados a N^{3} para formar un anillo opcionalmente sustituido;

R_{7} es hidrógeno, hidroxi, ciano, nitro, alquenil, con el grupo alquenil opcionalmente enlazado a través del oxígeno para formar un anillo opcionalmente sustituido en el carbono adyacente al oxígeno con grupos alquilo o arilo, alquinilo sustituido, halógeno, alquilo, alquilo sustituido, perhalometilo, C_{2-6} alquilo, C_{2-3} alquenilo o etenilo sustituido; o conjuntamente, R_{6}-R_{7} pueden formar un anillo saturado o insaturado de 5 o 6 elementos enlazado mediante N u O en R_{6}, pudiendo contener dicho anillo sustitutos que comprenden diversas funciones; siempre que cuando R_{8} sea un amino o amino sustituido, R_{7} es hidrógeno; y

R_{8} es hidrógeno, alcoxi, arylalcoxi, alquilotio, arilalquilotio, carbozamidometilo, carboximetilo, metoxi, metiltio, fenoxi o feniltío.

14

donde:

X_{1}, X_{2} y X_{3} se definen como en la fórmula I.

R_{3} y R_{4} son H mientras que R_{1} es imido, metileno o diahalometileno, R_{2} no es nada y hay un doble enlace entre N-1 y C-6, o

R_{3} y R_{4} son H mientras que R_{1} es O, imido, metileno o diahalometileno, R_{2} es O, y hay un doble enlace entre N-1 y C-6, o

R_{3}, R_{4} y R_{2} tomados en conjunto son -CH=CH-, formando un anillo desde N-6 a N-1 con un doble enlace entre N-6 y C-6, y R_{1} es imido, metileno o diahalometileno;

15

donde:

R_{1}, X_{1}, X_{2} y X_{3} se definen como en la fórmula I.

R_{5} y R_{6} son H mientras que R_{7} no es nada y existe un doble enlace entre N-3 y C-4, o

R_{5}, R_{6} y R_{7} tomados en su conjunto son -CH=CH-, formando un anillo desde N-3 a N-4 con un doble enlace entre N-4 y C-4 opcionalmente sustituido en la posición 4- o 5-del anillo eteno.

2. Preparación estéril de acuerdo con la reivindicación 1, en la que los grupos acilo de las fórmulas II y III incluyen grupos alquilo o arilo, teniendo los grupos alquilo de 1 a 4 átomos de carbono, y los grupos arilo que comprenden los componentes arilo de dichos grupos, como el ariloxi, son grupos fenilo, donde los grupos alquilo y arilo son sustituidos mediante unos sustitutos seleccionados a partir del grupo consistente en halógenos, hidroxi, C_{1-4} alquilo, C_{6-12} arilo, C_{6-12} arilalcoxi, carboxi, ciano, nitro, sulfonamido, sulfonato, fosfato, sulfónico amino y amino sustituido, donde el amino se sustituye aisladamente o en forma doble por un C_{1-4} alquilo, y cuando se sustituye en forma doble, los grupos alquilo están enlazados opcionalmente para formar un heterociclo.

3. Preparación estéril de acuerdo con la reivindicación 1, donde B y B' son uracilo enlazado en la posición N-1 al grupo ribosilo, y en la que el número total de fosfato puede equivaler a 3 o 4 cuando X es oxígeno.

4. Preparación estéril de acuerdo con la reivindicación 1, donde los grupos ribosilo están en la configuración D.

5. Preparación estéril de acuerdo con la reivindicación 1, donde los grupos ribosilo están en la configuración L.

6. Preparación estéril de acuerdo con la reivindicación 1, donde los grupos ribosilo están en la configuración D y L.

7. Preparación estéril de acuerdo con la reivindicación 1, donde el dinucleótido es P^{1}P^{4}di(uridina-5'-P^{2},P^{3})-metilenotetrafosfato.

8. Preparación estéril de acuerdo con la reivindicación 1, donde el dinucleótido es P^{1}P^{4}-di(uridina-5'-P^{2},P^{3})-difluorometilenotetrafosfato.

9. Preparación estéril de acuerdo con la reivindicación 1, donde el dinucleótido es P^{1}P^{4}-di(uridina-5'- P^{2},P^{3})-imidotetrafosfato.

10. Preparación estéril de acuerdo con la reivindicación 1, donde el dinucleótido es P^{1}P^{4}-di(4-tiouridina-5')-tetrafosfato.

11. Preparación estéril de acuerdo con la reivindicación 1, donde el dinucleótido es P^{1}P^{4}-di(3,N4-etenocitidina 5')-tetrafosfato.

12. Preparación estéril de acuerdo con la reivindicación 1, en la que dicho compuesto está en forma de partículas cuyo tamaño varía entre 1 y 10 micras.

13. Utilización de un compuesto seleccionado en un grupo consistente en uridina 5' trifosfato, dinucleótidos como los descritos en las Fórmulas II, IIa y IIb, citidina 5'-trifosfato, adenosina 5'-trifosfato y sus análogos y derivados activos para la fabricación de un medicamento para su administración ocular, para fomentar la secreción lagrimal activando los receptores purinérgicos de los tejidos lagrimales.

14. Utilización de acuerdo con la reivindicación 13, en la que dicho medicamento consiste en un vehículo de transporte para la administración tópica del compuesto seleccionado en un grupo consistente en gotas de líquidos, productos líquidos de lavado, geles, ungüentos, sprays y liposomas.

15. Utilización de acuerdo con la reivindicación 14, en la que el medicamento se encuentra en forma de una infusión para su administración por vía tópica en la superficie ocular mediante un dispositivo seleccionado de un grupo consistente en un sistema de bomba-catéter, un dispositivo de liberación continua o selectiva, o lentes de contacto.

16. Utilización de acuerdo con la reivindicación 13, en la que dicho medicamento es un líquido/suspensión líquida de dicho compuesto en forma de gotas nasales o un spray nasal, o un liquido nebulizado para su administración por vía oral o nasofaríngea.

17. Utilización de acuerdo con la reivindicación 16, en la que dicho medicamento se ofrece en una forma oral, inyectable o supositorio de dicho compuesto, o una instalación intraoperativa de un gel, una crema, un polvo, una espuma, cristales, liposomas, spray o suspensión líquida de dicho compuesto.

18. Utilización de acuerdo con la reivindicación 13, en la que dicho medicamento incluye una cantidad suficiente del compuesto para lograr unas concentraciones en las superficies oculares del paciente de entre 10^{-7} y 10^{-1} moles/litro.

19. Utilización de una formulación oftálmica que comprende:

- una cantidad efectiva de un compuesto que activa los receptores purinérgicos de los tejidos lagrimales, seleccionándose dicho compuesto de un grupo formado por dinucleótidos de uridina 5'-trifosfato adenosina 5'-trifosfato y citidina 5'-trifosfato, como se muestra en las fórmulas II, IIa y IIb, sus análogos activos y derivados, y sus sales farmacológicamente aceptables; y

- un vehículo fisiológicamente compatible seleccionado del grupo consistente en soluciones acuosas de electrolito, poliéteres, polivinilos, polímeros de ácido acrílico, lanolina y glucosaminoglicanos para la preparación de un medicamento que fomente el vaciado del conducto nasolagrimal.

20. Utilización de acuerdo con la reivindicación 13, en la que dicho medicamento se fabrica para el tratamiento ocular en conjunción con procedimientos quirúrgicos que comprenden la utilización de sondas, la intubación silástica o la dacriocistorinostomía.

21. Utilización de acuerdo con la reivindicación 13, en la que dicho medicamento se fabrica para el tratamiento ocular en conjunción con mucolíticos, como desoxirribonucleasa, acetilcisteína y bromexina.

22. Utilización de una formulación oftálmica que comprende:

- una cantidad efectiva de un compuesto que activa los receptores purinérgicos de los tejidos lagrimales, seleccionándose dicho compuesto de un grupo formado por dinucleótidos de uridina 5'-trifosfato adenosina 5'-trifosfato y citidina 5'-trifosfato, como se muestra en las fórmulas II, II y III, sus análogos activos y derivados, y sus sales farmacológicamente aceptables; y

\newpage

- un vehículo fisiológicamente compatible seleccionado del grupo consistente en soluciones acuosas de electrolito, poliéteres, polivinilos, polímeros de ácido acrílico, lanolina y glucosaminoglicanos para la preparación de un medicamento para la obstrucción pediátrica del conducto nasolagrimal.

23. Preparación estéril de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en la que el compuesto es uridina 5' trifosfato en una concentración de entre 0,25 mg/ml a 50 mg/ml.

24. Preparación estéril de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 12, en la que el compuesto es uridina 5' trifosfato en una concentración suficiente para proporcionar una dosis diaria de uridina 5' trifosfato de entre 1 y 100 mg.

25. Utilización de un compuesto que activa los receptores purinérgicos de los tejidos lagrimales de un paciente que precise dicho tratamiento, para la fabricación de una preparación para el tratamiento de las lesiones de la córnea, seleccionándose dicho compuesto de un grupo consistente en dinucleótidos de uridina 5'-trifosfato según se describe en las fórmulas II, IIa y IIb, citidina 5'-trifosfato, adenosina 5'-trifosfato y sus análogos activos y derivados.

26. Utilización de acuerdo con la reivindicación 25, en la que la preparación incluye uridina 5' trifosfato en una concentración de entre 0,25 mg/ml a 50 mg/ml y un vehículo fisiológicamente compatible para su administración oftálmica.

27. Utilización de acuerdo con la reivindicación 25, en la que la preparación incluye uridina 5' trifosfato en una concentración suficiente para proporcionar una dosis diaria de uridina 5' trifosfato de entre 1 y 100 mg y un vehículo fisiológicamente compatible adecuado para su administración oftálmica.

28. Preparación estéril de acuerdo con la reivindicación 1, en la que dicho compuesto es el dinucleótido descrito en las fórmulas II, II(a) o II(b).

29. Preparación estéril de acuerdo con la reivindicación 1, en la que dicho compuesto es P^{1},P^{4}-di(uridina 5'-)
tetrafosfato.

30. Preparación estéril de acuerdo con la Reivindicación 1, en la que dicho compuesto es P^{1},P^{4}-di(uridina 5'-)
tetrafosfato, sal de tetrasodio.

31. Utilización de acuerdo con la reivindicación 13, en la que dicho compuesto es el dinucleótido descrito en las fórmulas II, II(a) o II(b).

32. Utilización de acuerdo con la reivindicación 13, en la que dicho compuesto es P^{1},P^{4}-di(uridina 5'-)tetrafosfato o P^{1},P^{4}-di(uridina 5'-)tetrafosfato, sal de tetrasodio.