KR20000070848A

KR20000070848A - 퓨린 수용체 작용물질을 이용한 안구건조증의 치료방법

Info

Publication number: KR20000070848A
Application number: KR1019997007113A
Authority: KR
Inventors: 예륵사벤자민알.; 자코부스칼라엠.; 펜더개스트윌리엄; 리드아웃쟈넷엘.
Original assignee: 인스파이어 파마슈티컬스 인코퍼레이티드
Priority date: 1997-02-06
Filing date: 1998-02-06
Publication date: 2000-11-25
Also published as: CN1151775C; US6887858B1; US7759322B2; PT1003474E; US20100330164A1; HK1025915A1; NO993777D0; JP3652707B2; EP1003474B1; NZ337405A; US20080009463A1; JP5373576B2; CA2280183C; ATE428400T1; ZA98979B; US6916794B2; NO993777L; JP2010111676A; NO329118B1; JP2001504858A

Abstract

본 발명은 소정의 우리딘, 아데닌 또는 시티딘 트리포스페이트 뿐만 아니라 다른 뉴클레오시드 포스페이트 화합물과 같은 퓨린 수용체 작용물질을 투여하여 환자의 눈 속 및 눈 주위의 분비물을 조절하는 방법, 그 배합물 및 그의 제조방법에 관한 것으로서,

상기 방법은 누액 분비를 촉진하고, 눈물조직의 배액을 향상시키는데 유효한 양으로 우리딘 5'-트리포스페이트[UTP], 디뉴클레오티드, 시티딘 5'-트리포스페이트[CTP], 아데노신 5'-트리포스페이트[ATP] 또는 그의 약학적으로 이용가능한 유사체 및 유도체와 같은 퓨린 수용체 작용물질을 대상자의 안구표면에 투여하는 것을 포함하며,

약학적 배합물을 투여하는 방법은 액체, 겔, 크림 또는 콘택트렌즈 또는 선택적 방출막을 통한 국소투여; 또는 비점적 또는 스프레이, 분무기 또는 다른 장치에 의한 흡입, 경구형태(액체 또는 알약), 주입가능한 수술중 점안 또는 좌약형태에 의한 조직투여를 포함하는 것을 특징으로 한다.

Description

퓨린 수용체 작용물질을 이용한 안구건조증의 치료방법{METHOD OF TREATING DRY EYE DISEASE WITH PURINERGIC RECEPTOR AGONISTS}

서론

본 출원은 미국특허출원 제08/797,402호(1997년 2월 6일)의 일부연속출원이다.

눈에 의해 발생된 누액의 양을 증가시키는 것이 치료학적으로 바람직한 경우가 많다. 안구건조증은 눈물 발생의 감소 또는 눈물막 증발의 증가, 그리고 이에 따른 안구 표면 질병을 특징으로 갖는 전구각막 눈물막의 이상에 의해 발생된 징후를 총칭하는 용어이다. 약 3천 8백만의 미국인들이 여러 형태의 안구건조증에 걸려 있다. "안구건조증"에 의해 언급되는 징후중에는 건성각결막염(KCS), 나이에 따른 안구 건조, 스티븐스-존슨 증후군, 쇼그렌 증후군, 안구 반흔 유천포창, 안검염, 각막 손상, 감염, 릴리-데이 증후군, 선천성 무체증, 영양 장해 또는 결핍(비타민 포함), 약물 부작용, 안구 스트레스와 선(腺) 및 세포 손상, 스모그, 담배, 매우 건조한 공기에의 환경 노출, 풍매 분진, 자기 면역 및 다른 면역결핍 장해 및 눈을 깜박일 수 없는 혼수상태 환자들이 있다. 본 발명은 또한 의식이 있는 사람에게 수술 동안 또는 신경근 장애 또는 눈꺼풀 손실때문에 눈을 깜박일 수 없는 혼수상태 환자를 관리하기 위해 세정제 또는 세척제로서 유용할 수 있다.

건강한 전구각막 눈물막은 몇가지 중요한 기능, 1) 각막이 건조되는 것을 방지하고, 2) 감염에 대한 면역 반응에 도움을 주고, 3) 각막으로의 산소 투과를 향상시키고, 4) 안구 및 눈꺼풀을 매끄럽게 움직이게 하며, 5) 삼투를 통해 각막 압력을 유지하는데 도움을 주는 기능을 갖는다. 눈물막의 특성을 유지시키는 누선 및 결막(안구 및 속눈꺼풀의 일부를 감싸는 점막)의 2개의 구체가 있다. 이들 구체들은 물과 전해질 이동의 조절 및 배상세포에 의한 점액방출을 통해 눈물막을 유지한다.

안구건조증의 진행은 4개의 주요한 "징후"에 의해 특징지워진다. 첫번째 징후는 눈물발생의 감소이다. 토끼 모델에서, 눈물발생의 감소는 눈물 삼투성의 증가와 연관이 있는 것으로 나타났다. 두번째 징후는 점액을 함유하는 결막 배상세포의 손실이다. 배상세포 밀도의 감소는 눈물발생이 감소하기 시작한 후 몇주후에 명백해진다. 안구건조증의 진행에 있어서 세번째 징후는 각막 상피의 박리가 관찰된지 약 1년 후에 발생한다. 안구건조증의 네번째 및 마지막 징후는 각막-눈물 계면의 불안정화이다(제이. 길바드, CLAO Journal 22(2), 141-45(1996)).

현재, 안구건조증의 약물 치료는 대개 눈을 임시로 재수화하기 위한 인공 눈물(식염수)의 투여로 제한되어 있다. 그러나, 고통 완화는 잠깐이고, 빈번한 투여가 필요하다. 부가적으로, 인공 눈물은 종종 소프트 콘택트렌즈와 맞지 않으며, 금기시 되어있다(엠. 렘프, Cornea 9(1), S48-550(1990)). 눈물분비를 촉진하기 위해 3-이소부틸-1-메틸크산틴(IBMX)과 같은 포스포디에스테라제 억제인자를 사용하는 것이 미국특허 제4,753,945호에 개시되어 있다(출원인은 이것과 다른 모든 특허 문헌들이 본 명세서에 포함되도록 하였다). 이들 포스포디에스테라제 억제인자의 효과는 현재 연구되고 있다(제이. 길바드 외 다수, Arch. Ophthal, 112, 1614-16(1994)) 및 109, 672-76(1991); idem, Inv. Ophthal. Vis. Sci. 31, 1381-88(1990)). 통상 멜라닌세포 촉진 호르몬을 국소적으로 사용하여 눈물분비를 촉진하는 것은 미국특허 제4,868,154호에 개시되어 있다.

누액기관의 배액을 증가시키는 것이 치료학적으로 바람직한 경우가 많다. 누액기관은 눈물을 생성하는 분비 부분과, 눈물을 코로 배출하는 배액 부분의 두가지 기능적인 구성요소를 갖는다. 누액 배액 기관이 적절히 기능하지 않을 때, 그 결과 과도하게 눈물을 흘리거나(유류증), 점액농 유량증세 및 재발성 누광염이 일어날 수 있다(시. 세어마타로 외 다수, JAOA, 94, 229(1994)). 사실 눈물은 환자가 안과의사 사무실을 방문하는 가장 공통된 불편 중 하나이다(에스. 티. 콘웨이, Ophthal. Plas. Reconstr. Surg., 10, 185(1994)).

누액 배액 기관의 가장 공통된 기능장애는 눈물을 누액낭에 정지시키는 코눈물관 폐쇄이다. 유액과 점액의 축적은 점액농 물질의 급증과 눈물을 유발하여, 아침에 눈을 뜨면 눈꺼풀이 서로 달라 붙게한다. 또한 누액의 청소율 결여는 누낭 및 누관의 염증과 만성 감염을 유발한다(케이. 제이. 하이드 외 다수, Ophthal., 95, 1447(1988); 제이. 에이. 블리커 외 다수, Ophthal. Plas. Reconstr. Surg., 9, 43(1993); 제이. 에이. 모릴로 쥬니어., 외 다수, Ophthal. Plast. Reconstr. Surg., 8, 13(1992)).

코눈물관 폐쇄는 점막 상피의 섬유증과 과형성을 특징으로 하는 제1 후천성 코눈물관 폐쇄(PANDO)와, 암, 염증, 감염, 외상 및 기계적 문제에 의해 야기되는 제2 후천성 코눈물관 폐쇄(SANDO)의 2개의 병인학적 종류로 분류될 수 있다(지. 비. 바틀레이, Ophthal. Plast. Reconstr. Surg., 8, 237(1992)). 막힌 코눈물관은 중년 여성과 아이들에게 보다 흔하다. 사실, 모든 아이들의 20% 이하는 코눈물관 폐쇄에 걸려있고, 이들 대부분은 1살때까지는 증상이 나타나지 않는다(제이. 디. 에이치 외 다수, Eye, 10, 485(1996)).

현재 코눈물관 폐쇄의 치료는 대개 적극성에 있어서 다양한 침입적 또는 외과적 처리이다. 간섭은 미세한 카테테르(catheter)로 관을 정밀검사하는 형태를 취할 수 있으나, 이것은 전문 교육 및 설비가 요구되는 어렵고 미세한 처리이다(제이. 카소프 외 다수, Arch. Ophthal., 113, 1168(1995); 제이. 디. 그리피스, 미국특허 4921485(1990) 및 5062831(1991); 비. 비. 베커 외 다수, 미국특허 5021043(1991) 및 5169386(1992)). 몇몇 경우에, 코눈물관의 실라스틱(silastic) 삽관법이 코눈물관을 통한 눈물의 배액을 증가시킨다(알. 케이. 도르츠바흐 외 다수, Amer. J. Ophthal., 94, 585(1982); 에이치. 알-후사인 외 다수, Ophthal. Plas. Reconstr. Surg., 9, 32(1993); 제이. 에스. 크로포드 외 다수, 미국특허 4380239(1983); 더블유. 엘. 엑터 쥬니어, 미국특허 4658816(1987)). 보다 적극적인 처리는 누낭과 비강 사이에 연속성을 허용하기 위해 폐쇄위치 위에 새로운 배액 경로를 외과적으로 만드는 누낭비강문합술이다(제이. 브이. 린버그 외 다수, Ophthal., 93, 1055(1986); 케이. 제이. 타버트, Ophthal., 102, 1065(1995); 에프. 이. 오도넬 쥬니어, 미국특허 5345948(1994)). 또한 코눈물관에 대한 외부 마사지는 코눈물관을 통한 눈물 통과 시간을 증가시키는 것으로 나타났다(제이. 에이. 포스터 외 다수, Ophthal. Plas. Reconstr. Surg., 12, 32(1996)).

따라서, 현재 치료법의 비효율성과 불편함의 결과로서, 의료 연구자들은 안구건조 질병과 코눈물관 폐쇄의 치료에 대한 대안의 개발을 모색해왔다. 우리딘 5'-트리포스페이트(UTP)와 아데닌 5'-트리포스페이트(ATP)는 사람의 기도 상피 표면에 있는 P2Y₂퓨린 수용체의 강력한 작용물질인 것으로 나타났다. 이러한 P2Y₂퓨린 수용체의 활성화는 기도 표면 분비물을 수화하는데 도움을 주는 염화물 및 물 분비를 유발한다. 폐 점액 분비물의 분비정지를 특징으로 하는 폐질환을 치료할 목적으로 UTP 및 ATP를 사용하는 것은 미국특허 제5,292,498호에 개시되어 있다. 기도 상피 분비물의 수화를 증가시키는 UTP의 입증된 기능때문에 출원인은 UTP와 다른 P2Y₂및 P2Y₄퓨린 수용체 작용물질이 또한 안구 상피의 수화를 촉진할 수 있는지를 연구하는 것에 관심을 갖게 되었다. 이전에는 생쥐 및 마우스의 누액 소포 세포의 P2형 퓨린 수용체들이 세포외 칼슘을 증가시킴으로써 세포외 ATP와 반응한다고 확인되었다(아이. 사사키 외 다수, Febs Lett. 264, 130-34(1990); idem, J. Physiol. 447, 103-18(1992); 피. 빈센트, J. Physiol. 449, 313-31(1992); 제이. 그로마다 외 다수, Eur J. Physiol. 429, 578(1995); 브이. 리 외 다수, Inv. Ophthal. Vis. Sci. 38(4)(1997) 요약). 출원인은 기도 상피를 수화하는 것과 유사한 P2Y₂및/또는 P2Y₄퓨린 수용체-매개 기작을 통해 누액 부조직에서 눈물 분비가 촉진될 수 있다는 것을 발견하였다. 출원인은 또한 점액섬모 청소율의 촉진제는 눈에 국부적으로 가해지거나 코눈물 배액기관에 주입될 때 코눈물관을 통한 눈물의 흐름을 증가시키고, 따라서 코눈물관 폐쇄와 관련된 증상들을 경감시킨다는 것을 알았다. 국부적 또는 전체적으로 투여된 UTP 및 다른 퓨린 수용체 작용물질들은 안구건조증과 코눈물관 폐쇄를 치료하는 새로운 방법을 제공한다.

발명의 요약

이러한 치료를 필요로 하는 대상에서 눈물 분비를 촉진하는 방법이 개시된다. 본 발명의 방법은 안구건조증의 치료 등의 이유로 눈물 생성을 증가시키는데 사용될 수 있지만, 이에 한정되지는 않는다. 안구건조증은 건성각결막염(KCS), 나이에 따른 안구 건조, 스티븐스-존슨 증후군, 쇼그렌 증후군, 안구 반흔 유천포창, 안검염, 각막 손상, 감염, 릴리-데이 증후군, 선천성 무체증, 영양 장해 또는 결핍(비타민 포함), 약물 부작용, 안구 스트레스와 선(腺) 및 세포 손상, 스모그, 담배, 매우 건조한 공기에의 환경 노출, 풍매 분진, 자기 면역 및 다른 면역결핍 장해 및 눈을 깜박일 수 없는 혼수상태 환자들을 포함하는 것으로 규정된다. 본 발명은 또한 의식이 있는 사람에게 수술 동안 또는 신경근 장애, 근육 또는 신경 손상 또는 눈꺼풀 손실때문에 눈을 깜박일 수 없는 혼수상태 환자를 관리하기 위해 세정제 또는 세척제로서 유용할 수 있다. 화합물 우리딘 트리포스페이트(UTP)는 눈물조직 제조시 P2Y₂및 P2Y₄퓨린 수용체의 강력한 작용물질임을 알앗다. 게다가, 본 발명에 따른 생체내에서의 실시예가 안구건조증에 걸린 동물(토끼) 모델에 대해 실시된다.

상기 처리를 필요로 하는 대상에서 누액기관의 배액을 향상시키는 방법이 또한 개시된다. 본 발명의 상기 태양의 방법은 코눈물관 폐쇄의 치료 등의 이유로 코눈물관의 청소율을 향상시키는데 사용될 수 있지만, 이에 한정되지는 않는다. 코눈물관 폐쇄는 제1 및 제2 후천성 코눈물관 폐쇄와 소아 코눈물관 폐쇄를 모두 포함하는 것으로 규정된다. 본 발명은 또한 의식있는 사람에게, 또는 코눈물관 수술 또는 삽관법동안 코눈물 세정제 또는 세척용액으로서 유용하다. 여기에 개시된 화합물들은 또한 DN아제, 아세틸시스테인 및 브롬헥신과 같은 점액분해제와 조합하여 사용된다.

본 발명의 방법은 우리딘 트리포스페이트[UTP]와 그의 유사체, P¹P⁴-디(우리딘-5') 테트라포스페이트[U₂P₄]와 그의 유사체, 시티딘 5'-트리포스페이트[CTP]와 그의 유사체 및 아데노신 5'-트리포스페이트[ATP]로 구성된 군에서 선택된 P2Y₂및/또는 P2Y₄퓨린 수용체 작용물질의 액체 또는 겔 현탁액을 국부적으로 투여하는 것을 포함하고, UTP, U₂P₄, CTP 또는 ATP의 입자들은 눈물 분비를 촉진하거나 코눈물관의 청소율을 향상시키는데 유효한 양으로 투여된다.

본 발명의 제2 태양은 상기한 바와 같은 치료 방법을 실시하기 위한 약품을 제조하는데 화학식 Ⅰ-4의 화합물을 사용하는 방법이다.

본 발명의 제3 태양은 눈물 생성을 촉진하거나 이러한 처리를 필요로 하는 대상에서 코눈물관의 청소율을 향상시키는데 유효한 양으로 약학적 담체에서 화학식 Ⅰ, 2, 3 또는 4의 화합물을 포함하는 약학적 조성물이다.

본 발명은 소정의 우리딘, 아데닌 또는 시티딘 트리포스페이트 뿐만 아니라 다른 뉴클레오시드 포스페이트 화합물과 같은 퓨린 수용체 작용물질을 투여하여 환자의 눈 속 및 눈 주위의 분비물을 조절하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 포유동물의 코눈물관의 점액섬모 청소율을 향상시키는 약리학적 제제를 투여함으로써 눈물기관의 배액을 향상하는 방법에 관한 것이다. 이들 제제는 소정의 우리딘, 아데닌 및 시티딘 트리포스페이트 뿐만 아니라 다른 뉴클레오시드 포스페이트 화합물을 포함한다.

본 발명의 방법은 안구건조증의 치료 등의 이유로 눈물 생성을 증가시키기 위해 사용될 수 있지만 여기에 제한되지는 않는다. 안구건조증은 건성각결막염(KCS), 나이에 따른 안구 건조, 스티븐스-존슨 증후군, 쇼그렌 증후군, 안구 반흔 유천포창, 안검염, 각막 손상, 감염, 릴리-데이 증후군, 선천성 무체증, 영양 장해 또는 결핍(비타민 포함), 약물 부작용, 안구 스트레스와 선(腺) 및 세포 손상, 스모그, 담배, 매우 건조한 공기에의 환경 노출, 풍매 분진, 자기 면역 및 다른 면역결핍 장해 및 눈을 깜박일 수 없는 혼수상태 환자들을 포함하는 것으로 규정된다. 본 발명은 또한 의식이 있는 사람에게 수술 동안 또는 근육 또는 신경 손상, 신경근 장애 또는 눈꺼풀 손실 때문에 눈을 깜박일 수 없는 혼수상태 환자를 관리하기 위해 세정제 또는 세척제로서 유용할 수 있다.

상기 처리를 필요로 하는 대상에서 누액기관의 배액을 향상시키는 방법이 또한 개시된다. 본 발명의 상기 태양의 방법은 코눈물관 폐쇄의 치료 등의 이유로 코눈물관의 청소율을 향상시키는데 사용될 수 있지만, 이에 한정되지는 않는다. 코눈물관 폐쇄는 제1 및 제2 후천성 코눈물관 폐쇄와 소아 코눈물관 폐쇄를 모두 포함하는 것으로 규정된다. 본 발명은 또한 의식있는 사람에게, 또는 코눈물관 수술 또는 삽관법동안 코눈물 세정제 또는 세척용액으로서 유용하다. 여기에 개시된 화합물들은 또한 DN아제, 아세틸시스테인 및 브롬헥신과 같은 점액분해 작용제와 조합하여 사용된다.

출원인은 우리딘 5'-트리포스페이트(UTP)가 누선 및 결막 제조물에서 발견되는 퓨린 수용체를 위한 강력한 작용물질임을 알았다. 본 발명의 방법은 자연적인 보호 및 윤활특성을 유지하는 UTP가 환자의 눈물생산 및 분비를 촉진하기 때문에 현재 안구건조증을 치료하는데 가장 흔히 사용되는 - 인공눈물(즉, 식염수)을 향상시킨다. 더욱이, 본 발명의 방법은 누선이 기능장애이거나 또는 없는 경우에도 유용하다. 또한, 본 발명의 방법은 막힌 코눈물관의 청소율을 향상시키는데 유용하다.

본 발명은 원래 사람의 치료에 관계되는 것이긴 하지만, 수의목적으로 개 및 고양이 등과 같은 다른 포유동물을 대상으로 치료하는데도 사용될 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 "우리딘 트리포스페이트"란 용어는 나트륨 또는 칼륨과 같은 알킬 금속염; 마그네슘 또는 칼슘과 같은 알칼리토류 금속염; 또는 암모늄 또는 테트라알킬 암모늄염, 즉 NX₄ ⁺(여기서 X는 C_1-4알킬) 등의 약학적으로 허용가능한 그의 염을 포함하지만, 여기에 제한되지는 않는다. 약학적으로 허용가능한 염은 모화합물의 원하는 생물학적 활성은 유지하고, 원하지 않는 독물학적 효과를 갖지 않는 염이다.

본 발명의 방법은 화학식 1의 화합물, 즉 우리딘 트리포스페이트[UTP]와 그의 유사체, 화학식 2의 화합물, 즉 P¹P⁴-디(우리딘-5') 테트라포스페이트(U₂P₄)와 그의 유사체, 화학식 3의 화합물, 즉 시티딘 5'-트리포스페이트[CTP]와 그의 유사체, 및 화학식 4의 화합물, 즉 아데노신 5'-트리포스페이트[ATP]와 그의 유사체로 구성된 기에서 선택된 P2Y₂및/또는 P2Y₄퓨린 수용체 작용물질의 액체 또는 겔 현탁액을 국부적으로 투여하는 것을 포함하고, 화학식 1, 2, 3 또는 4의 입자들은 눈물 분비를 촉진하거나 코눈물관의 청소율을 향상시키는데 유효한 양으로 투여된다.

앞서 설명한 디뉴클레오티드는 그의 해당 참고문헌과 함께 표 1에 나타내었다.

문헌내 디뉴클레오티드(괄호안의 숫자는 아래 참고문헌의 숫자임)

Np₂N	Np₂N'	Np₃N	Np₃N'	Np₄N	Np₄N'
Ap₂A(4,1)Gp₂G(5,1)m⁷Gp₂m⁷G(5)	Ap₂NAD(6)Ap₂TAD(6)Ap₂C-NAD(6)Ap₂C-PAD(6)Ap₂BAD(6)m⁷Gp₂G(5)Up₂U(43)	Up₃U(1)Ap₃A(1,4,29)Xp₃X(1)m⁷Gp₃m⁷G(5)Gp₃G(1)	Ap₃T(20)m⁷Gp₃G(5)m^2,2,7Gp₃G(5)m^2,7Gp₃G(5)	Up₄U(2,3)Ap₄A(1,4,29)Cp₄C(3)Gp₄G(1,5)Xp₄X(1)Dp₄D(15)eAp₄eA(7)m⁷Gp₄m⁷G(5)	Ap₄U(3)Ap₄C(3)Ap₄G(3)Gp₄U(3)Gp₄C(3)Up₄C(3)Ap₄T(20)m⁷Gp₄G(5)m^2,7Gp₄G(5)m^2,2,7Gp₄G(5)

Np₅N	Np₅N'	Np₆N	Np₆N'	Np₈N
Ap₅A(4)	Ap₅T(20)	Ap₆A(4)	Ap₆T(20)	Ap₈A(4)

AppZppA	DppZppD	ApZppZpA	ApSpZpSpA
Z	Z	Z	Z
CH₂(8)CH₂CH₂(8)CHF(8)CF₂(8)CHCl(8)CCl₂(8)	CH₂(15)CH₂CH₂(15)CHF(15)CF₂(15)CHCl(15)CCl₂(15)	CH₂(8)CH₂CH₂(8)CHF(8)CF₂(8)CHCl(8)CCl₂(8)	CHF(8)CF₂(8)O(8)

A = 아데노신 eA = 에테노아데노신

U = 우리딘 m⁷G = 7-메틸구아노신

G = 구아노신 m^2,7G = 2,7-디메틸구아노신

T = 티미딘 m^2,2,7G = 2,2,7-트리메틸구아노신

X = 크산토신 NAD = 니코틴아미드 리보시드

TAD = 티아조퓨린 C-NAD = C-니코틴아미드 리보시드

BAD = 벤즈아미드 리보시드 C-PAD = C-피콜린아미드 리보시드

D = 2,6-디아미노퓨린 N = 뉴클레오시드

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(43)A. Kanavarioti 외 다수, Tett. Lett., 32, 6065(1991)

본 발명의 활성 조제물

UTP 및 그의 유사체는 하기 화학식 1로 나타낸다.

(상기 화학식 1에서,

X₁, X₂및 X₃은 각각 O^-또는 S^-이며, X₂및 X₃은 O^-인 것이 바람직하고,

R₁은 O, 이미도, 메틸렌 또는 디할로메틸렌(예를들어, 디클로로메틸렌 또는 디플루오로메틸렌)이며, R₁은 산소 또는 이미도인 것이 바람직하고,

R₂는 H 또는 Br이며, R₂는 H인 것이 바람직하다)

특히 바람직한 화학식 1의 화합물은 우리딘 5'-트리포스페이트(UTP) 및 우리딘 5'-O-(3-티오트리포스페이트)(UTPγS)이다.

디뉴클레오티드는 하기 화학식 2로 나타낸다.

(상기 화학식 2에서:

X 는 산소, 이미도, 메틸렌 또는 디플루오로메틸렌;

n = 0 또는 1;

m = 0 또는 1;

n+m = 0, 1 또는 2; 그리고

B 및 B'는 각각 9- 또는 1- 위치를 통해 결합된 퓨린 잔기 또는 피리미딘 잔기이다)

B 및 B'가 우라실인 경우에, N-1 위치에서 리보실 성분에 결합되며, X가 산소인 경우 m+n의 합은 3 또는 4이다. 상기 리보실 성분은 도시된 바와 같이, D-배위이지만, L- 또는 D- 및 L-배위일 수 있다. D-배위가 바람직하다.

B 및 B'는 각각 상기 9- 또는 1- 위치를 통해 결합된 화학식 2a의 퓨린 잔기 또는 화학식 2b의 피리미딘 잔기이다. B 및 B'가 우라실인 경우에, N-1 위치에서 상기 리보실 성분에 결합되며, m+n의 합은 X 가 산소인 경우 3 또는 4이다. 상기 리보실 성분은 도시된 바와 같이, D-배위이지만, L- 또는 D- 및 L-배위일 수 있다. 상기 D-배위가 바람직하다.

아데닌의 치환된 유도체는 아데닌 1-옥시드; 1,N6-(4-또는 5-치환된 에테노) 아데닌; 6-치환된 아데닌; 또는 8-치환된 아미노아데닌을 포함하며, 여기서 6- 또는 8-HNR' 기의 R'은: 하기와 같이 선택적으로 기능화된 아릴 성분을 갖는 아릴알킬(C_1-6)기; 알킬기; 또는 ([6-아미노헥실]카르바모일메틸)-, ω-아실화-아미노(히드록시, 티올 및 카르복시)알킬(C_2-10)- 및 ω-아실화-아미노(히드록시, 티올 및 카르복시) 유도체와 같은, 작용기를 갖는 알킬기에서 선택되며, 여기서 아실기는 아세틸, 트리플루오로아세틸, 벤조일, 치환된-벤조일 등(이것으로 제한되는 것은 아님)에서 선택되며, 카르복실 성분은 그의 에스테르 또는 아미드 유도체, 예를 들어 에틸 또는 메틸 에스테르 또는 그의 메틸, 에틸 또는 벤즈아미노 유도체로서 존재한다. 상기 ω-아미노(히드록시, 티올) 성분은 C_1-4알킬기로 알킬화될 수 있다.

마찬가지로, B 또는 B', 또는 둘 모두 1-위치를 통해 결합된, 화학식 2b의 피리미딘이다.

(상기 화학식 2b에서:

R₄는 히드록시, 메르캅토, 아미노, 시아노, 아랄콕시, C_1-6알콕시, C_1-6알킬아미노 및 디알킬아미노이고, 상기 알킬기는 선택적으로 결합되어 헤테로고리를 형성하고;

R₅는 수소, 아실, C_1-6알킬, 아로일, C_1-5알칸오일, 벤조일, 또는 설포네이트이고;

R₆은 히드록시, 아미노, 메르캅토, 알콕시, 아랄콕시, C_1-6알킬티오, C_1-5이치환된 아미노, 트리아졸일, 알킬아미노 또는 디아킬아미노이고, 여기서 알킬기는 선택적으로 결합되어 헤테로고리를 형성하거나 또는 선택적으로 N₃에 결합되어 선택적으로 치환된 고리를 형성하며;

R₇은 수소, 히드록시, 시아노, 니트로, 알케닐(여기서, 알케닐 성분은 산소를 통해 선택적으로 결합되어, 산소와 인접한 탄소상에서 알킬기 또는 아릴기로 선택적으로 치환된 고리를 형성함), 치환된 알키닐, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 퍼할로메틸(예를들어, CF₃), C_2-6알킬, C_2-3알케닐, 또는 치환된 에테닐(예를들어, 알릴아미노, 브롬비닐 및 에틸 프로페노에이트, 또는 프로펜산), C_2-3알키닐 또는 치환된 알키닐이며; 또는 R₆-R₇은 R₆에서 N 또는 O를 통해 결합된 5각 또는 6각 포화 또는 불포화 고리를 형성하며, 이러한 고리는 그 자신이 작용기를 포함하는 치환체를 포함하며; R₈이 아미노 또는 치환된 아미노인 경우, R₇은 수소이며; 그리고

R₈은 수소, 알콕시, 아릴알콕시, 알킬티오, 아릴알킬티오, 카르복시아미도메틸, 카르복시메틸, 메톡시, 메틸티오, 페녹시 또는 페닐티오이다)

상기 화학식 2b의 구조식에서, 2- 내지 6- 위치의 점선은 이들 위치 내에 단일결합 또는 이중결합이 있음을 가리키며; 상기 이중결합 또는 단일결합의 상대적 위치는 R₄, R₆및 R₇치환체가 케토-엔올 토토머화를 할 수 있는지에 의해 결정된다.

상기 화학식 2a 및 2b 의 구조식에서, 아실기는 알칸오일 또는 아로일기로 구성되는 것이 바람직하다. 상기 알킬기는 하기와 같이 하나 또는 그 이상의 적당한 치환체에 의해 선택적으로 치환되는 1 내지 8개의 탄소원자, 특히 1 내지 4개의 탄소원자를 포함하는 것이 바람직하다. 아릴옥시 등의 기의 아릴 성분을 포함하는 아릴기는 아래 설명된 바와 같이 하나 또는 그 이상의 치환체에 의해 선택적으로 치환된 페닐기인 것이 바람직하다. 앞서 언급한 알케닐 및 알키닐기는 아래 설명된 바와 같이 하나 또는 그 이상의 적당한 치환체에 의해 선택적으로 치환된, 예를들어 에테닐 또는 에티닐과 같은 2 내지 8개의 탄소원자, 특히 2 내지 6개의 탄소원자를 함유하는 것이 바람직하다. 상기 언급한 알킬, 알케닐, 알키닐 및 아릴기 상의 적당한 치환체는 할로겐, 히드록시, C_1-4알콕시, C_1-4알킬, C_7-12아릴알콕시, 카르복시, 시아노, 니트로, 설폰아미도, 설포네이트, 포페이트, 설폰기, 아미노 및 치환된 아미노에서 선택되는 것이 바람직하며, 여기서 상기 아미노는 C_1-4알킬에 의해 단일 또는 이중으로 치환되며, 이중으로 치환된 경우, 상기 알킬기는 선택적으로 결합되어 헤테로고리를 형성한다.

ATP 및 그의 유사체는 하기 화학식 3으로 나타낸다.

(상기 화학식 3에서:

R₁, X₁, X₂및 X₃은 화학식 1에서 정의된 것과 같고,

R₃및 R₄는 H인 반면에 R₂는 아무것도 아니며, N-1과 C-6(아데닌) 사이에는 이중결합이 있고, 또는

R₃및 R₄는 H인 반면에 R₂는 O이고, N-1과 C-6(아데닌 1-옥사이드) 사이에는 이중결합이 있고, 또는

서로 결합된 R₃, R₄및 R₂는 -CH=CH-이며, N-6과 C-6(I,N6-에테노아데닌)사이에 이중결합을 가지면서 N-6 에서 N-1까지 고리를 형성한다)

CTP 및 그의 유사체는 하기 화학식 4로 나타낸다:

(상기 화학식 4에서:

R₁, X₁, X₂및 X₃은 화학식 1에 정의된 바와 같고,

R₅및 R₆은 H인 반면에 R₇은 아무것도 아니며, N-3 와 C-4(시토신) 사이에는 이중결합이 있고, 또는

서로 결합된 R₅, R₆및 R₇은 -CH=CH-이며, 에테노 고리의 4- 또는 5- 위치에서 선택적으로 치환된 N-4와 C-4(3, N⁴-에테노시토신) 사이의 이중결합으로 N-3에서 N-4까지 고리를 형성한다)

간단하게, 본 명세서의 화학식 1, 2, 3 및 4는 자연적으로 발생되는 D-배위의 활성 화합물을 나타내었으나, 본 발명은 특정되지 않는다면, L-배위의 화합물, 및 D-배위 및 L-배위의 화합물의 혼합물을 포함한다. 자연적으로 발생되는 D-배위가 바람직하다.

본 발명의 활성 화합물은 나트륨 또는 칼륨 등의 알칼리 금속염; 망간, 마그네슘 또는 칼슘 등의 알칼리토류 금속염; 또는 암모늄 또는 테트라알킬 암모늄 염, 즉 NX₄ ⁺(여기서, X는 C_1-4임)와 같은 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 존재하는데, 이것으로 제한되는 것은 아니다. 약학적으로 허용가능한 염은 모화합물의 원하는 생물학적 활성은 보유하고 원하지 않는 독물학적 효과는 갖지 않는 염이다.

투여 방법

본 명세서에 개시된 활성 화합물은 적당한 수단에 의해 환자의 눈에 투여될 수 있지만, 점적, 스프레이 또는 겔 형태의 활성 화합물의 액체 또는 겔 현탁액을 투여함으로써 투약되는 것이 바람직하다. 대안으로, 활성 화합물은 리포좀을 통해 눈에 투여될 수 있다. 그리고, 활성 화합물은 펌프-카테테르(pump-catheter) 시스템을 통해 눈물막에 주입될 수 있다. 본 발명의 다른 구체예는, 연속적 또는 선택적-방출 장치, 예를들면 Ocusert^TMSystem(Alza Corp., Palo Alto. CA)제와 같은 막내에 포함되는 활성 화합물과 관련되어있다. 부가적인 구체예로써, 활성 화합물은 눈에 위치한 콘택트렌즈에 포함될 수 있으며, 그에 의해 운반되거나 그에 부착될 수 있다. 본 발명의 다른 구체예는 안구 표면에 가해질 수 있는 스펀지 또는 면봉에 함유된 활성 화합물과 관련되어있다. 본 발명의 또 다른 구체예는 안구 표면에 가해질 수 있는 액체 스프레이 내에 포함된 활성 화합물과 관련되어있다. 본 발명의 또 다른 구체예는 안구 표면위로 또는 눈물 조직으로 활성 화합물을 직접 주입하는 것과 관련되어있다.

국소용 용액에 포함된 활성 화합물의 양은, 코눈물관의 청소율을 향상시키거나 눈물 분비를 촉진하기 위해, 약 10^-7내지 약 10^-1Moles/ℓ, 더 바람직하게 약 10^-6내지 약 10^-1Moles/ℓ의, 피험자 안구 표면상에서 활성 화합물의 용해 농도를 얻기에 충분한 양이다.

투여된 활성 화합물의 특정 배합용해도에 따라, 코눈물관의 청소율을 향상시키거나 또는 눈물 분비를 촉진하기 위한 일용량은 하나 또는 다수 유닛 복용 투여량으로 나누어진다. UTP(예를들면)를 위한 전체 일용량은, 피험자의 연령 및 상태에 따라, 0.25㎎/㎖ 내지 50㎎/㎖의 농도 범위일 수 있다. UTP를 위한 통상 바람직한 UTP의 단위용량은 하루에 2 내지 6회, 약 1 내지 100㎎이다.

화학식 1, 3 및 4의 일부 화합물은 당업자에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있으며, 일부는 Sigma Chemical Company(PO Box 14508, St. Louis, MO 63178)제로 상업적으로 이용가능하다. 화학식 2의 화합물은 P. Zamecnik외 다수(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 838-42(1981); 및 K. Ng. 및 L. E. Orgel, Nucleic Acids Res.15(8), 3572-80(1977)에 의해 기술된 공지의 방법 또는 그의 변형법에 따라 제조될 수 있다.

활성 화합물을 포함하는 국소용 용액은 또한 안과 기술자가 종래 기준을 이용하여 선택할 수 있는 생리적으로 적합한 부형제를 포함할 수도 있다. 부형제는 식염수, 폴리에틸렌 글리콜과 같은 수용성 폴리에테르, 폴리비닐 알콜과 포비돈과 같은 폴리비닐, 메틸셀루로스 및 히드록시프로필 메틸셀룰로오스와 같은 셀룰로오스 유도체, 미네랄 오일 및 백색 석유(white petroleum)와 같은 석유 유도체, 라놀린과 같은 동물성 지방, 카르복시폴리메틸렌 겔과 같은 아크릴산의 중합체, 데스트란과 같은 다당류 및 땅콩 오일과 같은 식물성 지방, 및 염화나트륨 및 염화칼륨과 같은 염 및 히알루론산 나트륨과 같은 글리코스아미노클리칸을 포함하는 공지된 안과용 부형제로부터 선택되어질 수 있지만, 이에 한정되지는 않는다.

상기 국소용 투여방법에 부가하여, 본 발명의 활성 화합물을 체계적으로 투여하는 다양한 방법이 있다. 상기 수단은 활성 화합물을 포함하는 흡입가능한 입자의 에어로졸 현탁액과 관련있으며, 이를 피험자가 흡입한다. 활성 화합물은 폐를 통해 혈류로 흡수되거나 또는 코눈물관을 통해 눈물 조직에 접촉되고, 약학적으로 유효한 양으로 누선에 접촉된다. 흡입가능한 입자는 흡입시 후두 및 입을 통해 통과하기에 충분히 작은 입자 크기, 일반적으로 약 1 내지 10미크론, 바람직하게는 1 내지 5미크론의 범위의 액체 또는 고체이다.

피험자의 눈에 활성 화합물을 투여하는 다른 수단은 피험자가 흡입하는 흡입가능한 입자의 코 스프레이(nasal spray) 또는 액체 배합물의 코 점적 또는 눈 세척 또는 눈 점적 형태로 액체/액체 현탁액을 투여하는 방법과 관련되어있다. 코 스프레이 또는 코 또는 눈 점적을 형성하기 위한 활성 화합물의 액체 약학적 조성물은 당업자에 공지된 기술에 의해 멸균 식염수 또는 멸균 주사용 증류수와 같은 적당한 부형제와 활성 화합물을 조합시킴으로써 제조될 수 있다.

활성 화합물의 인체 투여를 위한 다른 방법은 경구 투여와 관련있고, 화학식 1, 2, 3 및 4의 화합물을 함유하는 약학적 조성물은 정제, 함당정제, 수성 또는 유성 현탁액, 분산가능한 분말 또는 과립, 유탁액, 경질 또는 연질의 캡슐, 또는 시럽 또는 엘릭시르의 형태로 있다. 경구용 조성물은 약학적 조성물의 제조분야에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있으며, 상기 조성물은 약학적으로 정밀하고 맛있는 제조물을 제공하기 위해, 감미료, 향미료, 착색제 및 방부제로부터 선택된 하나 또는 그 이상의 제재를 포함한다. 정제는, 정제를 제조하는데 적당한 무독성 약학적으로 허용가능한 부형제와 혼합한 유효성분을 포함한다. 상기 부형제는, 예를들면 탄산 칼슘, 탄산 나트륨, 락토오스, 인산 칼슘 또는 인산 나트륨과 같은 비활성 부형제; 옥수수 전분, 또는 알긴산과 같은 입화제 및 붕해제; 전분, 겔라틴 또는 아카시아와 같은 결합제; 및 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 또는 탈크와 같은 윤활제이다. 정제는 코팅되지 않거나 또는 위장관에서 붕괴와 흡수를 지연시키기 위한 기술에 의해 코팅되어, 오랜 기간동안 지효성을 제공한다. 예를들면, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트와 같은 시간지연물질이 사용될 수 있다. 경구용 배합물은, 유효성분이 탄산 칼슘, 인산 칼슘 또는 카올린과 같은 비활성 고체 부형제와 혼합될 경우 경질의 겔라틴 캡슐로, 또는 유효성분이 땅콩 오일, 액체 파라핀 또는 올리브 오일과 같은 오일 부질 또는 물과 혼합되는 경우 연질의 겔라틴 캡슐로 나타날수 있다.

피험자의 눈에 활성 화합물을 투여하는 다른 수단은 약학적으로 유효한 양의 화합물이 기관흡수 및 순환을 통해 눈에 도달하도록 하는 활성 화합물의 좌약 형태와 관련있다.

활성 화합물을 투여하는 또 다른 수단은 약학적으로 유효한 양의 활성 화합물을 겔, 크림, 또는 액체 현탁액 형태로 수술중 직접 점적하는 것과 관련있다.

당업자는 다음의 실시예에 의해 증명되는 바와 같이, 본 발명의 화합물을 제조하는데 추가의 단계가 적용되고, 출발물질이 다양하다는 것을 알 것이다. 어떤 경우에 임의의 반응성 작용기의 보호는 상기 변형을 얻기 위해 필요하다. 일반적으로 상기 보호기는 유기 합성 뿐만 아니라 상기 그룹을 제거하고 부착하기 위해 필요한 상황에 필요하다는 것은 당업자에게 명백할 것이다.

본 발명은 본 명세서에 개시된 특정 방법에 본 발명의 범위 또는 정신을 한정하는 것으로 간주되지 않는 다음의 실시예에 의해 더 상세히 설명된다. 생체내에서 본 발명에 따른 실시예는 건조한 눈을 가진 토끼로 실시하였다. 안구건조증은 유액을 주요 누선에서 눈물막까지 운반하는 관을 외부에서 폐쇄하고, 닉티탄과 하더씨 샘을 외과적으로 제거함으로써 발병된다. 상기 토끼 모델로 실시한 안과학적 실험결과가 안구건조증에 걸린 사람과 밀접한 상호관계를 갖는다는 것은 당업자에 인지되어, 상기 결과가 사람에 있어서 치료법 효능의 정확한 예보를 제공한다.

실시예 1

생쥐 결막 제조물내에서 점액방출의 촉진

12주된 수컷, 스프라그-도울리(Sprague-Dawlry) 생쥐(Charles River Laboratories, Wilmington, MA)를 펜토바비탈(1300㎎/㎏) 나트륨을 복강내로 주사하여 희생시키고, 눈물 버퍼(106.5mM NaCl, 26mM NaHCO₃, 18.7mM KCl, 1.0mM MgCl₂, 0.5mM NaH₂PO₄, 1.1mM CaCl₂및 10mM HEPES pH 7.45)로 희석된 1% 리도케인(lidocane)의 20μL 점적을 10분동안 안구 표면에 넣는다. 눈꺼풀로부터 각막까지 그리고 중앙으로부터 측안각까지 연장하는 하부 결막을 각 눈에서 제거하여 여과지에 놓는다. 각 결막은 세로 방향으로 반으로 자르고, 그 결과 생긴 네 개의 조각은 4℃의 반강도 카노프스키(Karnovsky) 용액(카코딜레이트산 완충액내 2.5% 글루타르알데히드와 2% 파라포름알데히드, pH 4)에서 1시간동안 작용물질과 함께 또는 없이 케라틴세포 성장배지(Clonetics Corp, San Diego, CA)에서 배양하고, 메트아크릴레이트에 넣고 3㎛의 조각으로 절단하였다. 조직의 각 조각중 6개의 조각은 알시안 블루(Alcian blue)(pH 5) 및 페리오드 산(periodic acid)-시프 시약(AB-PAS)으로 착색시킨다. 각 조각에서 배상세포를 포함하는 점액의 수는 160배율의 광학 현미경(접안렌즈 십자선환을 가리키는 사각형이 있는 표준 현미경)을 사용하여 은폐방법(masked fashion)으로 세었다. 무자극성 결막 조직배양액에서, 배상세포를 가장자리를 두르고, 각 배상세포의 정점부내 점액-함유 분비 과립으로 강하게 염색한다. 촉진으로 인해, 점액 과립은 배지로 방출된다. 각 유닛 영역(0.16㎟)당 휴지점액-함유 배상세포의 수를 세고 평균을 구한다. 유닛 영역당 점액-함유 배상세포 수의 감소는, 비분비 세포에 의해 염색되기 때문에, 점액 분비가 증가됨을 가리킨다. 데이터는 제어(비처리) 조직에서 값의 평균 퍼센트로 나타낸다. 본 실시예의 방법은 본원에 참조문헌으로 첨부된 D. Dartt외 다수, Exp. Eye Res. 63, 27(1996)에서 번안된다.

실시예 2

세포내 칼슘의 측정

덮개유리로 덮인 비트로겐(vitrogen)에서 생장한 쥐의 결막 세포를 37℃에서 30분동안 최종 농도 3μM Fura-2/AM에 담군다. 그후 상기 세포를 NaCl 링거액에서 세척하고, 형광 물질을 측정하기 위한 챔버내에 둔다. 세포에서 세포외 공간으로의 Fura-2 누출 속도를 감소시키고, 프로브의 시간-의존성 구분을 피하기 위해, 모든 [Ca²⁺]_i측정은 25℃에서 진행한다. 상기 온도에서, 프로브의 구분을 표시하는 소낭의 밝은 부분은 관찰되지 않는다.

생쥐 결막의 상피 세포에서, [Ca²⁺]_i의 측정치는, Zeiss Axiovert IM 35 현미경에서 부착된 모듈 현미분광형광분석기(SPEX Industries, Inc. Edison, NJ)로 얻어진다. 상기 시스템은 크세논 램프, 빔 스플리터, 두 개의 단색화 장치 및 340㎚와 380㎚(방출＞450㎚)의 파장에서 세포형광이 여기되도록 하는 회전 초퍼 거울을 구비한다. 단일 세포로부터의 형광 신호는 인접 세포로부터의 신호를 차단하는 핀홀(스폿직경 3-5㎛)을 구비한 광도계로 측정한다.

작용 물질을 가한 후, 형광 신호는 1.5×10^-4M 디기토닌과 10^-3M MnCl₂를 함유하는 NaCl 링거 용액에 의해 소광된다. 비부하 세포에서 바탕 형광과 동일한, 각 여기 파장에서의 잔여 신호는 비율(340/380㎚)이 되기전에 Fura-2/AM 부하 세포로부터의 데어터에서 제거된다. 340㎚/380㎚의 비율은, R_o와 R_s가 각각 제로 Ca²⁺에서의 비율과 포화 Ca²⁺를 나타내는, 이중 파장 측정식:[Ca²⁺]_i=K[(R_x-R_o)/(-R_s-R_x)]를 이용한, G. Grynkiewicz외 다수(J. Biol. Chem. 260, 3440-3450(1985))에 의해 유도되는 공식과 외부 보정 스탠다드를 이용하여 실제 [Ca²⁺]_i측정치로 전환된다. R_x는 실험 비율이다. K는 Kd가 Fura-2를 위한 유효분리상수로써 25℃에서 K_d=1.57×10^-7M이고, F_o와 F_s는 각각 380㎚에서 제로 Ca²⁺및 포화 Ca²⁺의 형광강도를 나타내는 K_d/(F_o/F_s)이다. 본 실시예의 방법은 이후에 참조로 언급된 R. Boucher외 다수의 미국특허 제5,292,498호에서 번안된다.

실시예 3

KCS용 토끼 모델에서 안구건조증 발현의 반전

건성각결막염(KSC)은 누선 배출관을 외부에서 폐쇄하고, 순막, 닉티탄 샘 및 하더씨 샘을 제거하여 8마리의 뉴질랜드산 백색 토끼의 우측 눈에서 발병시킨다. 모든 토기는 8주동안 치료하지 않은채 두었고, KCS는 상술된(J. Gilbard외 다수, Ophthalmol 96, 677(1978))바와 같이 0.1-0.4μL의 눈물 샘플을 취하여 상승된 눈물막 몰랄삼투압농도를 측정하여 확인한다. UTP 또는 그의 유사체의 3.0m㏖ 용액은 보존된 등장성 버퍼 용액에서 제조된다. 토끼중 4마리는 주말을 제외하고 하루에 4회 UTP 또는 유사체 용액 1점적(10μL)으로 처리한다. 나머지 처리되지 않은 4마리는 대조군이다. 치료를 시작한 후, 월요일 아침, 투여하기 전에 몰랄삼투압농도를 측정하기 위해 모든 토끼로부터 0.1-0.4μL의 눈물 샘플을 취한다. 20주째에 그 동물들은 희생되고, 알시안 블루 및 페리오드 산-시프 시약으로 염색하여 배상세포 밀도를 측정한다(D. Dartt외 다수, Exp. Eye Res. 67, 27(1996)).

상기 연구는 UTP와 유사체가 높은 눈물막 몰랄삼투압농도와 증가된 결막 배상세포 밀도를 감소시키고, 따라서 KCS용 토끼 모델에서 안구 표면 질병의 발현이 반전된다는 것을 입증하기 위해 계획된다. 본 실시예의 방법은 이후에 참조로 언급된 J.P. Gilbard. Arch. Opthalmol. 112, 1614(1994)로부터 번안된다.

실시예 4

토끼의 강한 안구 내성

U₂P₄(P¹, P⁴-디(우리딘 트리포스페이트), 테트라소듐염)을 등장성 수용액으로 배합하고, U₂P₄의 강한 안구 안전성을 광범위하게 표시하기 위해 일련의 실험에서 알비노 토끼의 눈에 국소적으로 투여하였다. 실험은 GLP 가이드라인에 따라 실시하였다. 변형된 Draize 테스트는 U₂P₄가 눈에 투여하기에 적합한지를 결정하기 위해 사용되었다.

건강한 수컷, 성체 알비노 뉴질랜드 토끼(2-2.5㎏범위)가 상기 연구를 위해 사용되었다. 토끼는 Elevage Scientifique des Dombes(Chantillon sur Charlaronne, France)에서 입수했다. 동물들은 매일 건강악화의 징후가 있는지 관찰하고, 안구에 이상이 없는 건강한 동물만을 실험에 사용하였다. 동물은 환경이 제어된 방 안의 표준 우리에 수용하였다. 동물은 연구하는 동안 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있었다. 연구를 위한 테스트 물질은 등장 용액으로 제조하기 위해 물과 NaCl에 매일 배합하였다. 상기 실험은 세 마리 토끼의 우측 눈의 결막낭으로 5.0% 농도의 U₂P₄를 다중 50μL 점안제(20분에 5회)에 의해 주입하는 공개 실험이었다. 동물은 최후 점안 후, 0, 1, 2 및 3시간에 변형된 Draize 스케일에 따라 결막, 각막 및 홍채에 대한 임상 안구 안전 등급이 할당되었다. 좌측 눈은 생리 식염수로 점안하고, 대조군으로 제공한다.

5.0% 농도의 U₂P₄에 대한 안구 안전결과는 아주 약간의 결막 충혈이 생긴(0-4 스케일의 증가 피해도에서 등급 1) 단지 한 마리의 토끼(양쪽 눈에서)에서 나타난다. 결막, 각막 및 홍채의 충혈, 결막 부종 및 유루에 대한 다른 등급은 제로이다(첨부된 표 2 참조). 위약투여 결과 또한 모든 경우에서 제로이다. 그러므로 U₂P₄는 눈에 투여하기에 안전한 것으로 간주된다.

실시예 5

토끼에서의 각막 마취 효과

U₂P₄(P¹, P⁴-디(우리딘 트리포스페이트), 테트라소듐염)을 등장성 수용액으로 배합하고, U₂P₄의 강한 안구 안전성을 광범위하게 표시하기 위해 일련의 실험에서 알비노 토끼의 눈에 국소적으로 투여하였다. 실험은 GLP 가이드라인에 따라 실시하였다.

건강한 수컷, 성체 알비노 뉴질랜드산 토끼(2-2.5㎏범위)가 상기 연구를 위해 사용되었다. 토끼는 Elevage Scientifique des Dombes(Chantillon sur Charlaronne, France)에서 입수했다. 동물들은 매일 건강악화의 징후가 있는지 관찰하고, 안구에 이상이 없는 건강한 동물만을 실험에 사용하였다. 동물은 환경이 제어된 방 안의 표준 우리에 수용하였다. 동물은 연구하는 동안 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있다. 연구를 위한 테스트 물질은 등장 용액으로 제조하기 위해 물과 NaCl에 매일 배합하였다.

세 마리 토끼의 우측 눈의 결막낭에 5.0%농도의 U₂P₄가 다중 50μL 점안(20분에 5회)에 의해 주입하고 각막 마취 효과는 최후 점안 후 5, 10, 20, 30, 40, 50 및 60분에 Cochet의 감각측정기로 측정하였다. 각막 마취는 안검 반사를 유도하는데 필요한 각막의 기계적 자극 수에 의해 평가했다. 좌측 눈은 생리 식염수로 점안하고 대조군으로 제공했다.

알비노 토끼의 우측 눈에 투여되는 경우 각막 마취효과가 전혀 나타나지 않기 때문에 U₂P₄5.0% 용액의 안정도는 추후에 증명된다(도 1 참조).

실시예 6

토끼의 눈물 분비

U₂P₄(P¹,P⁴-디(우리딘 테트라포스페이트), 테트라소듐염)을 등장성 수용액으로 배합하고 알비노 토끼의 눈에 국소적으로 투여하여, 정상 토끼에 있어서의 효능 척도로서 눈물 분비실험을 실시하였다.

건강한 수컷, 성체 알비노 뉴질랜드산 토끼(2-2.5㎏ 범위)가 이 연구에 사용되었다. 토끼는 Elevage Scientifique des Dombes(Chantillon sur Charlaronne, France)에서 입수했다. 동물들은 매일 건강 악화의 징후가 있는지 관찰하고, 안구에 이상이 없는 건강한 동물만을 실험에 사용하였다. 동물들은 환경조건이 제어되는 방안의 표준 우리내에 수용하였다. 동물들은 실험내내 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있었다. 모든 연구에서 등장용액을 만들기 위해 테스트 약품은 매일 물과 NaCl에 배합하였다.

각각 다른 그룹의 8마리 토끼의 결막낭으로 14일동안 하루에 5회씩 0.5%, 5.0% 및 8.5% 농도의 U₂P₄를 점안했다(50μL). 1일째, 7일째, 그리고 14일째에 그날의 처음과 마지막 점안후 0, 5, 15, 30 및 60분에 Schirmer 테스트 스트립을 이용하여 눈물분비를 측정했다. 그 결과는 식염수를 분리시키고, 처리되지 않은 대조군과 비교한다.

모든 3 농도의 U₂P₄는 식염수 대조군과 비교한 바와 같이 60분 주기동안 토끼눈내 눈물분비를 증가시켰다.

본 발명 및 그를 제조하고 이용하는 과정 및 방법은 당 기술분야의 당업자가 동일하게 만들고 이용할 수 있도록 전반적으로 명백하고 간결하며 정확한 용어로 설명된다. 본 발명의 바람직한 구체예를 기술하고, 청구의 범위에 기재된 바와 같은 본 발명의 진의 또는 범주에서 벗어나지 않는 범위에서 변경시킬 수 있다는 것을 알 수 있다. 본 발명에서 고려된 내용을 특별히 강조하고 명확하게 청구하기 위해, 다음의 청구의 범위로 본 명세서를 결론짓는다.

Claims

눈에 국소투여하기에 적합한 무균제제는:

눈물조직내 퓨린 수용체를 활성화시키는 유효량의 화합물; 및

수성 전해액, 폴리에테르, 폴리비닐, 아크릴산 중합체, 라놀린 및 글루코스아미노글리칸으로 구성된 그룹에서 선택된 생리적으로 적합한 부형제로 이루어지고,

상기 화합물은 화학식 1의 우리딘 5'-트리포스페이트, 표 1에 기록된 것과 화학식 2, 2a, 2b의 디뉴클레오티드, 화학식 3의 아데노신 5'-트리포스페이트, 화학식 4의 시티딘 5'-트리포스페이트 뿐만 아니라 그의 활성 유사체 및 유도체, 및 그의 약학적으로 허용가능한 염으로 구성된 그룹에서 선택되며,

상기 제제는 상기 치료가 필요한 피험자의 눈물조직으로부터 눈물분비를 촉진하는 것을 특징으로 하는 눈에 국소투여하기에 적합한 무균제제:

(화학식 1)

(상기 화학식 1에서,

X₁, X₂, X₃는 각각 독립적으로 O^-또는 S이며, 바람직하게, X₂및 X₃는 O^-이며,

R₁는 O, 이미도, 메틸렌 또는 디할로메틸렌(예를 들어, 디클로로메틸렌 또는 디플루오로메틸렌)이며, 바람직하게, R₁은 산소 또는 이미도이고,

R₂는 H 또는 Br이며, 바람직하게 R₂는 H이고, 특별히 바람직한 화학식 1의 화합물은 우리딘 5'-트리포스페이트(UTP) 및 우리딘 5'-O-(3-티오트리포스페이트) (UTPγS)이다)

(화학식 2)

(상기 화학식 2에서,

X는 산소, 이미도, 메틸렌, 또는 디플루오로메틸렌이고;

n = 0 또는 1;

m = 0 또는 1;

n + m = 0, 1 또는 2이며; 그리고

B 및 B'는 각각 독립적으로 9- 또는 1- 위치를 통해 결합된, 화학식 1a에서와 같은 퓨린 잔기 또는 화학식 1b에서와 같은 피리미딘 잔기이다)

(화학식 2a)

(상기 화학식 2a에서, 6- 또는 8-HNR' 기의 R'은: 하기와 같이 선택적으로 기능화된 아릴 성분을 갖는 아릴알킬(C_1-6)기; 알킬기; 또는 ([6-아미노헥실]카르바모일메틸)-, ω-아실화-아미노(히드록시, 티올 및 카르복시)알킬(C_2-10)- 및 ω-아실화-아미노(히드록시, 티올 및 카르복시) 유도체와 같은 작용기를 갖는 알킬기로 구성된 그룹에서 선택되며, 여기서 아실기는 아세틸, 트리플루오로아세틸, 벤조일, 치환된-벤조일 등으로 구성된 그룹에서 선택되며, 카르복실 성분은 그의 에스테르 또는 아미드 유도체로서 존재한다)

(화학식 2b)

(상기 화학식 2b에서,

R₄는 히드록시, 메르캅토, 아미노, 시아노, 아랄콕시, C_1-6알콕시, C_1-6알킬아미노 및 디알킬아미노이고, 상기 알킬기는 선택적으로 결합되어 헤테로고리를 형성하고;

R₅는 수소, 아실, C_1-6알킬, 아로일, C_1-5알칸오일, 벤조일, 또는 설포네이트이고;

R₆은 히드록시, 메르캅토, 알콕시, 아랄콕시, C_1-6알킬티오, C_1-5이치환된 아미노, 트리아졸일, 알킬아미노 또는 디아킬아미노이고, 여기서 알킬기는 선택적으로 결합되어 헤테로고리를 형성하거나 또는 선택적으로 N₃에 결합되어 선택적으로 치환된 고리를 형성하며;

R₇은 수소, 히드록시, 시아노, 니트로, 알케닐(여기서, 알케닐 성분은 산소를 통해 선택적으로 결합되어, 산소와 인접한 탄소상에서 알킬기또는 아릴기로 선택적으로 치환된 고리를 형성함), 치환된 알키닐, 할로겐, 알킬, 치환된 알킬, 퍼할로메틸(예를들어, CF₃), C_2-6알킬, C_2-3알케닐, 또는 치환된 에테닐(예를들어, 알릴아미노, 브롬비닐 및 에틸 프로페노에이트, 또는 프로펜산), C_2-3알키닐 또는 치환된 알키닐이며; 또는 R₆-R₇은 R₆에서 N 또는 O를 통해 결합된 5각 또는 6각 포화 또는 불포화 고리를 형성하며, 이러한 고리는 그 자신이 작용기를 포함하는 치환체를 포함하며; R₈이 아미노 또는 치환된 아미노인 경우, R₇은 수소이며; 그리고

R₈은 수소, 알콕시, 아릴알콕시, 알킬티오, 아릴알킬티오, 카르복시아미도메틸, 카르복시메틸, 메톡시, 메틸티오, 페녹시 또는 페닐티오이다)

(화학식 3)

(상기 화학식 3에서,

R₁, X₁, X₂및 X₃은 화학식 1에서 정의된 것과 같고,

R₃및 R₄는 H인 반면에 R₂는 아무것도 아니며, N-1과 C-6(아데닌) 사이에는 이중결합이 있고, 또는

R₃및 R₄는 H인 반면에 R₂는 O이고, N-1과 C-6(아데닌 1-옥시드) 사이에는 이중결합이 있고, 또는

서로 결합된 R₃, R₄및 R₂는 -CH=CH-이며, N-6과 C-6(I,N6-에테노아데닌)사이에 이중결합을 가지면서 N-6에서 N-1까지 고리를 형성한다)

(화학식 4)

(상기 화학식 4에서,

R₁, X₁, X₂및 X₃은 화학식 1에 정의된 바와 같고,

R₅및 R₆은 H인 반면에 R₇은 아무것도 아니며, N-3과 C-4(시토신) 사이에는 이중결합이 있고, 또는

서로 결합된 R₅, R₆및 R₇은 -CH=CH-이며, 에테노 고리의 4- 또는 5- 위치에서 선택적으로 치환된 N-4와 C-4(3, N⁴-에테노시토신) 사이의 이중결합으로 N-3에서 N-4까지 고리를 형성한다)
제 1 항에 있어서,

상기 생리학적으로 적합한 부형제는 수성 전해액, 폴리에테르, 폴리비닐, 아크릴산 중합체, 라놀린 및 글루코스아미노글리칸으로 구성되는 그룹에서 선택되는 것을 특징으로 하는 무균제제.
제 1 항에 있어서,

화학식 2 및 화학식 3의 아실기는 알킬 또는 아릴기로 이루어지고, 알킬기는 1 내지 4개의 탄소원자를 가지며, 아릴기는 아릴옥시가 페닐기인 경우 상기 기의 아릴 성분을 포함하고, 알킬 및 아릴기는 할로겐, 히드록시, C_1-4알킬, C_6-12아릴, C_6-12아릴알콕시, 카르복시, 시아노, 니트로, 설폰아미도, 설포네이트, 포스페이트, 설포닉, 아미노, 및 치환된 아미노로 구성된 그룹에서 선택되는 치환체로 치환되며, 상기 아미노는 C_1-4알킬에 의해 단일 또는 이중 치환되며, 이중 치환된 경우 알킬기는 결합되어 헤테로고리를 형성하는 것을 특징으로 하는 무균제제.
제 1 항에 있어서,

B 및 B'는 N-1 위치에서 리보실 성분에 결합된 우라실이고, m+n의 합은 X가 산소인 경우 3 또는 4인 것을 특징으로 하는 무균제제.
제 1 항에 있어서,

리보실 성분은 D-배위인 것을 특징으로 하는 무균제제.
제 1 항에 있어서,

리보실 성분은 L-배위인 것을 특징으로 하는 무균제제.
제 1 항에 있어서,

리보실 성분은 D-배위 및 L-배위인 것을 특징으로 하는 무균제제.
제 1 항에 있어서,

디뉴클레오티드는 P¹,P⁴-디(우리딘 5'-P²,P³-메틸렌테트라포스페이트)인 것을 특징으로 하는 무균제제.
제 1 항에 있어서,

디뉴클레오티드는 P¹,P⁴-디(우리딘 5'-P²,P³-디플루오로메틸렌테트라포스페이트)인 것을 특징으로 하는 무균제제.
제 1 항에 있어서,

디뉴클레오티드는 P¹,P⁴-디(우리딘 5'-P²,P³-이미도테트라포스페이트)인 것을 특징으로 하는 무균제제.
제 1 항에 있어서,

디뉴클레오티드는 P¹,P⁴-디(4-티오우리딘 5'-테트라포스페이트)인 것을 특징으로 하는 무균제제.
제 1 항에 있어서,

디뉴클레오티드는 P¹,P⁴-디(3,N⁴-에테노시티딘 5'-테트라포스페이트)인 것을 특징으로 하는 무균제제.
제 1 항에 있어서,

상기 화합물은 1 내지 10미크론 크기 범위의 입자 형태로 있는 것을 특징으로 하는 무균제제.
눈물조직으로부터 눈물분비를 촉진하는 처리가 필요한 피험자의 눈물조직내 퓨린 수용체를 활성화시키는 화합물을 포함하는 유효량의 제제를 눈에 투여하는 단계로 이루어지고, 상기 화합물은 우리딘 5'-트리포스페이트, 화학식 2, 2a 및 2b의 디뉴클레오티드, 시티딘 5'-트리포스페이트, 아데노신 5'-트리포스페이트, 및 그의 활성 유사체 및 유도체로 구성되는 그룹에서 선택되는 것을 특징으로 하는 눈물조직에서 눈물분비를 촉진하는 방법.
제 15 항에 있어서,

상기 투여는 용액의 점적, 안약, 겔, 연고, 스프레이 및 리포좀으로 구성되는 그룹에서 선택된 담체 부형제를 통해 상기 화합물을 국소투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 16 항에 있어서,

상기 국소투여는 펌프-카테테르 시스템, 연속 또는 선택적 배출장치 및 콘택트렌즈로 구성되는 그룹에서 선택된 장치에 의해 상기 안구 표면에 상기 화합물을 주입하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 15 항에 있어서,

상기 투여는 치료적으로 유효량의 상기 화합물이 조직흡수 및 순환에 의해 상기 피험자의 눈물조직에 접촉하도록 점비제 또는 코 스프레이 또는 분무액에 의한 상기 피험자의 입 또는 코인두 기도로 상기 화합물의 용액/용액 현탁액을 투여함으로써 상기 화합물을 조직투여하는 것을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제 18 항에 있어서,

상기 화합물의 조직투여는 치료적으로 유효량의 상기 화합물이 조직흡수 및 순환에 의해 상기 피험자의 눈물조직에 접촉하도록 경구 형태의 상기 화합물을 투여함으로써 실시되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 18 항에 있어서,

상기 화합물의 조직투여는 치료적으로 유효량의 상기 화합물이 조직흡수 및 순환에 의해 상기 피험자의 눈물조직에 접촉하도록 주사가능한 형태의 상기 화합물을 투여함으로써 실시되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 18 항에 있어서,

상기 화합물의 조직투여는 치료적으로 유효량의 상기 화합물이 조직흡수 및 순환에 의해 상기 피험자의 눈물조직에 접촉하도록 좌약 형태의 상기 화합물을 투여함으로써 실시되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 18 항에 있어서,

상기 화합물의 조직투여는 치료적으로 유효량의 상기 화합물이 조직흡수 및 순환에 의해 상기 피험자의 눈물조직에 접촉하도록 겔, 크림, 분말, 거품, 결정, 리포좀, 스프레이, 또는 액체현탁액 형태의 상기 화합물을 수술중 점적하여 투여함으로써 실시되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 15 항에 있어서,

상기 화합물은 상기 피험자의 안구 표면상에서 약 10^-7내지 약 10^-1moles/ℓ 농도를 이루기에 충분한 양으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
점안 배합물은:

눈물조직내 퓨린 수용체를 활성화시키는 유효량의 화합물; 및

수성 전해액, 폴리에테르, 폴리비닐, 아크릴산 중합체, 라놀린, 및 글루코스아미노글리칸으로 구성되는 그룹에서 선택된 생리학적으로 적합한 부형제로 이루어지고,

상기 화합물은 우리딘 5'-트리포스페이트, 아데노신 5'-트리포스페이트, 시티딘 5'-트리포스페이트, 화학식 1, 2 및 3의 디뉴클레오티드, 그의 활성 유사체 및 유도체, 및 그의 약학적으로 허용가능한 염으로 구성되는 그룹에서 선택되며,

상기 점안 배합물은 코눈물관 배액을 촉진하는 것을 특징으로 하는 점안 배합물.
제 15 항에 있어서,

상기 눈으로의 투여는 프로빙(probing), 실라스틱 삽관법 또는 누낭비강문합술을 포함하는 외과적 시술과 함께 실시되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 15 항에 있어서,

상기 눈으로의 투여는 DN아제, 아세틸시스테인 및 브롬헥신으로 이루어진 점액 용해제와 함께 실시되는 것을 특징으로 하는 방법.
점안 배합물은:

눈물조직내 퓨린 수용체를 활성화시키는 유효량의 화합물; 및

수성 전해액, 폴리에테르, 폴리비닐, 아크릴산 중합체, 라놀린, 및 글루코스아미노글리칸으로 구성되는 그룹에서 선택된 생리학적으로 적합한 부형제로 이루어지고,

상기 화합물은 우리딘 5'-트리포스페이트, 아데노신 5'-트리포스페이트, 시티딘 5'-트리포스페이트, 화학식 1, 2 및 3의 디뉴클레오티드, 그의 활성 유사체 및 유도체 및 그의 약학적으로 허용가능한 염으로 구성된 그룹에서 선택되며,

상기 점안 배합물은 소아과 코눈물관 폐쇄를 치료하는 것을 특징으로 하는 점안 배합물.