ES2294151T3 - Analogos antitumorales. - Google Patents
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Abstract
Un compuesto de fórmula:
Description
Análogos antitumorales.
La presente invención se refiere a derivados de
las ecteinascidinas, particularmente ecteinascidina 736
(ET-736), composiciones farmacéuticas que las
contienen y su uso como compuestos antitumorales.
Las ecteinascidinas son agentes antitumorales
sumamente potentes aislados del tunicado marino Ecteinascidia
turbinata. Anteriormente se han descrito varias ecteinascidinas
en la bibliografía de patentes y científica. Ver por ejemplo:
- -
- Patente de EE.UU. No. 5256663, que describe composiciones farmacéuticas que comprenden materia extraída del invertebrado marino tropical, Ecteinascidia turbinata, y designadas allí como ecteinascidinas, y el uso de tales composiciones como agentes antibacterianos, antivirales, y/o antitumorales en mamíferos.
- -
- Patente de EE.UU. No. 5089273, que describe composiciones nuevas de materia extraída del invertebrado marino tropical, Ecteinascidia turbinata, y designadas allí como ecteinascidinas 729, 743, 745, 759A, 759B y 770. Estos compuestos son útiles como agentes antibacterianos y/o antitumorales en mamíferos.
- -
- Patente de EE.UU. No. 5149804 que describe las ecteinascidinas 722 y 736 (Et's 722 y 736) aisladas del tunicado del Caribe Ecteinascidia turbinata y sus estructuras. Las Et's 722 y 736 protegen ratones in vivo a concentraciones muy bajas contra el linfoma P388, el melanoma B16, y el carcinoma de pulmón de Lewis.
- -
- Patente de EE.UU. No. 5478932, que describe ecteinascidinas aisladas del tunicado del Caribe Ecteinascidia turbinata, que proporcionan protección in vivo contra el linfoma P388, el melanoma B16, el sarcoma de ovario M5076, el carcinoma de pulmón de Lewis, y los xenoinjertos de carcinoma humano de pulmón LX-1 y mamario humano MX-1.
- -
- Patente de EE.UU. No. 5654426, que describe varias ecteinascidinas aisladas del tunicado del Caribe Ecteinascidia turbinata, que proporcionan protección in vivo contra el linfoma P388, el melanoma B16, el sarcoma de ovario M5076, el carcinoma de pulmón de Lewis, y los xenoinjertos de carcinoma humano de pulmón LX-1 y mamario humano MX-1.
- -
- Patente de EE.UU. No. 5721362 que describe un proceso sintético para la formación de compuestos de ecteinascidina y estructuras relacionadas.
- -
- Patente de EE.UU. No. 6124292 que describe una serie de compuestos nuevos tipo ecteinascidina.
- -
- WO 0177115, WO 0187894 y WO 0187895, que describen nuevos compuestos sintéticos de la serie de ecteinascidina, su síntesis y sus propiedades biológicas.
Ver también: Corey, E.J., J. Am. Chem.
Soc. 1996, 118 pp 9202-9203; Rinehart, et
al., Journal of Natural Products, 1990, "Bioactive
Compounds from Aquatic and Terrestrial Sources", vol. 53, pp.
771-792; Rinehart et al., Pure and Appl.
Chem., 1990, "Biologically active natural products", vol.
62, pp. 1277-1280; Rinehart et al., J.
Org. Chem., 1990, "Ecteinascidins 729, 743, 745, 759A, 759B,
and 770: potent Antitumour Agents from the Caribbean Tunicate
Ecteinascidia turbinata", vol 55, pp.
4512-4515; Wright et al., J. Org.
Chem., 1990, "Antitumour Tetrahydroisoquinoline Alkaloids from
the Colonial ascidian Ecteinascidia turbinata", vol. 55,
pp. 4508-4512; Sakai et al., Proc. Natl.
Acad. Sci. USA 1992, "Additional antitumor ecteinascidins
from a Caribbean tunicate: Crystal structures and activities in
vivo", vol. 89, 11456-11460; Science
1994, "Chemical Prospectors Scour the Seas for Promising
Drugs", vol. 266, pp.1324; Koenig, K.E., "Asymmetric
Synthesis", ed. Morrison, Academic Press, Inc., Orlando, FL,
vol. 5, 1985, p.71; Barton et al., J. Chem. Soc. Perkin
Trans. 1, 1982, "Synthesis and Properties of a Series of
Sterically Hindered Guanidine bases", pp. 2085; Fukuyama et
al., J. Am. Chem. Soc., 1982, "Stereocontrolled Total
Synthesis of (+)-Saframycin B" vol 104, pp. 4957;
Fukuyama et al., J. Am. Chem. Soc., 1990, "Total
Synthesis of (+)-Saframycin A" vol 112, pp. 3712;
Saito et al., J. Org. Chem., 1989, "Synthesis of
Saframycins. Preparation of a Key tricyclic Lactam Intermediate to
Saframycin A", vol. 54, 5391; Still et al., J. Org.
Chem., 1978, "Rapid Chromatographic Technique for Preparative
Separations with Moderate Resolution", vol. 43, p. 2923; Kofron,
W.G.; Baclawski, L.M., J. Org. Chem., 1976, vol. 41, 1879;
Guan et al. J. Biomolec. Struc. & Dynam., vol.
10, pp. 793-817 (1993); Shamma et al.,
"Carbon-13 NMR Shift Assignments of Amines and
Alkaloids", p. 206 (1979); Lown et al.,
Biochemistry, 21, 419-428 (1982); Zmijewski
et al., Chem. Biol. Interactions, 52,
361-375 (1985); Ito, CRC Crit. Rev. Anal.
Chem., 17, 65-143 (1986); Rinehart et
al., "Topics in Pharmaceutical Sciences 1989", pp.
613-626, D.D. Breimer, D.J.A. Cromwelin, K.K. Midha,
Eds., Amsterdam Medical Press B.V., Noordwijk, Países Bajos (1989);
Rinehart et al., "Biological Mass Spectrometry",
233-258 eds. Burlingame et al., Elsevier
Amsterdam (1990); Guan et al., Jour. Biomolec. Struct.
& Dynam., vol. 10 pp. 793-817 (1993);
Nakagawa et al., J. Amer. Chem. Soc. 111:
2721-2722 (1989); Lichter et al., "Food
and Drugs from the Sea Proceedings" (1972), Marine Technology
Society, Washington, D.C. 1973, 117-127; Sakai
et al., J. Amer. Chem. Soc., 1996, 118, 9017;
García-Rocha et al., Brit. J. Cancer,
1996, 73: 875-883; y Pommier et al.,
Biochemistry 1996, 35: 13303-13309.
En 2000, se describió un proceso hemisintético
para la formación de compuestos de ecteinascidina y estructuras
relacionadas tal como ftalascidina partiendo de alcaloides de
bis(tetrahidroisoquinolina) naturales tal como la
saframicina y antibióticos de safracina disponibles de diferentes
medios de cultivo; Ver Manzanares et al., Org. Lett., 2000,
"Synthesis of Ecteinascidin ET-743 and
Phthalascidin Pt-650 from Cyanosafracin B", Vol.
2, No. 16, pp. 2545-2548; y Solicitud de Patente
Internacional WO 00 69862.
Proc. Natl. Acad. Sci. USA vol. 96 pp.
3496-3501 se ocupa de la ftalascidina, un agente
antitumoral sintético con una potencia y modo de acción comparables
a la ecteinascidina 743.
La ecteinascidina 743 fue descubierta por
Rinehart y presenta una unidad de
tetrahidro-\beta-carbolina en
lugar de la unidad de tetrahidroisoquinolina encontrada con más
frecuencia en los compuestos ecteinascidina aislados de fuentes
naturales; Ver por ejemplo Sakai et al., Proc. Natl. Acad.
Sci. USA 1992, "Additional antitumor ecteinascidins from a
Caribbean tunicate: Crystal structures and activities in
vivo", vol. 89, 11456-11460.
\vskip1.000000\baselineskip
WO 9209607 reivindica la ecteinascidina 736, así
como la ecteinascidina 722 con hidrógeno en lugar de metilo en el
nitrógeno común a los anillos C y D de la ecteinascidina 736 y
O-metilecteinascidina 736 con metoxi en lugar de
hidroxi en el anillo C de la ecteinascidina 736.
A pesar de los resultados positivos obtenidos en
las aplicaciones clínicas en quimioterapia, la búsqueda en el campo
de los compuestos de ecteinascidina está aún abierta a la
identificación de nuevos compuestos con características óptimas de
citotoxicidad y selectividad hacia el tumor y con una toxicidad
sistémica reducida y propiedades farmacocinéticas mejoradas.
La presente invención se dirige a los compuestos
de la reivindicación 1. Estos compuestos son parte de una clase de
compuestos de la fórmula general I:
\vskip1.000000\baselineskip
en donde los grupos sustituyentes
para R_{1}, R_{2}, R_{3}, R_{4} y R_{5} se seleccionan
cada uno independientemente del grupo que consiste en H, OH, OR',
SH, SR', SOR', SO_{2}R', C(=O)R', C(=O)OR',
NO_{2}, NH_{2}, NHR', N(R')_{2},
NHC(O)R', CN, halógeno, =O, alquilo de
C_{1}-C_{18} sustituido o no sustituido,
alquenilo de C_{2}-C_{18} sustituido o no
sustituido, alquinilo de C_{2}-C_{18} sustituido
o no sustituido, arilo sustituido o no sustituido, heterocíclico
sustituido o no
sustituido;
en donde X se selecciona independientemente de
OR', CN, (=O), ó H;
en donde cada uno de los grupos R' se selecciona
independientemente del grupo que consiste en, H, OH, NO_{2},
NH_{2}, SH, CN, halógeno, =O, C(=O)H, C(=O)CH_{3},
CO_{2}H, alquilo de C_{1}-C_{18} sustituido o
no sustituido, alquenilo de C_{2}-C_{18}
sustituido o no sustituido, alquinilo de
C_{2}-C_{18} sustituido o no sustituido, arilo
sustituido o no sustituido;
en donde m es 0, 1 ó 2; y
en donde n es 0, 1, 2, 3 ó 4.
En otro aspecto, la invención se refiere a
composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la
reivindicación 1.
En otro aspecto, la invención se refiere al uso
de compuestos de la reivindicación 1 en el tratamiento del
cáncer.
Por la presente se proporciona información sobre
la clase de compuestos de la fórmula general I. Los grupos alquilo
tienen preferiblemente de 1 a 24 átomos de carbono. Una clase más
preferida de grupos alquilo tiene de 1 hasta alrededor de 12 átomos
de carbono, aún más preferiblemente de 1 hasta alrededor de 8 átomos
de carbono, todavía más preferiblemente de 1 hasta alrededor de 6
átomos de carbono, y lo más preferiblemente 1, 2, 3 ó 4 átomos de
carbono. Otra clase más preferida de grupos alquilo tiene de 12
hasta alrededor de 24 átomos de carbono, aún más preferiblemente de
12 hasta alrededor de 18 átomos de carbono, y lo más preferiblemente
13, 15 ó 17 átomos de carbono. Grupos alquilo particularmente
preferidos son metilo, etilo y propilo, incluyendo isopropilo. Como
se utiliza aquí, el término alquilo, a menos que se modifique de
otra manera, se refiere a grupos tanto cíclicos como no cíclicos,
aunque los grupos cíclicos comprenderán miembros de anillos de al
menos tres carbonos.
Los grupos alquenilo y alquinilo preferidos
tienen uno o más enlaces insaturados y de 2 hasta alrededor de 12
átomos de carbono, más preferiblemente de 2 hasta alrededor de 8
átomos de carbono, aún más preferiblemente de 2 hasta alrededor de
6 átomos de carbono, incluso más preferiblemente 1, 2, 3, ó 4 átomos
de carbono. Los términos alquenilo y alquinilo como se utilizan
aquí se refieren a grupos tanto cíclicos como no cíclicos, aunque
grupos no cíclicos lineales o ramificados son en general más
preferidos.
Los grupos alcoxi preferidos incluyen grupos que
tienen uno o más enlaces de oxígeno y de 1 hasta alrededor de 12
átomos de carbono, más preferiblemente de 1 hasta alrededor de 8
átomos de carbono, y aún más preferiblemente de 1 hasta alrededor
de 6 átomos de carbono, y los más preferiblemente 1, 2, 3 ó 4 átomos
de carbono.
Los grupos alquiltio preferidos tienen uno o más
enlaces tioéter y de 1 hasta alrededor de 12 átomos de carbono, más
preferiblemente de 1 hasta alrededor de 8 átomos de carbono, y aún
más preferiblemente de 1 hasta alrededor de 6 átomos de carbono.
Los grupos alquiltio que tienen 1, 2, 3 ó 4 átomos de carbono son
particularmente preferidos.
Los grupos alquilsulfinilo preferidos incluyen
aquellos grupos que tienen uno o más grupos sulfóxido (SO) y de 1
hasta alrededor de 12 átomos de carbono, más preferiblemente de 1
hasta alrededor de 8 átomos de carbono, y aún más preferiblemente
de 1 hasta alrededor de 6 átomos de carbono. Los grupos
alquilsulfinilo que tienen 1, 2, 3 ó 4 átomos de carbono son
particularmente preferidos.
Los grupos alquilsulfonilo preferidos incluyen
aquellos grupos que tienen uno o más grupos sulfonilo (SO_{2}) y
de 1 hasta alrededor de 12 átomos de carbono, más preferiblemente de
1 hasta alrededor de 8 átomos de carbono, y aún más preferiblemente
de 1 hasta alrededor de 6 átomos de carbono. Los grupos
alquilsulfonilo que tienen 1, 2, 3 ó 4 átomos de carbono son
particularmente preferidos.
Los grupos aminoalquilo preferidos incluyen
aquellos grupos que tienen uno o más grupos amino primario,
secundario y/o terciario, y de 1 hasta alrededor de 12 átomos de
carbono, más preferiblemente de 1 hasta alrededor de 8 átomos de
carbono, aún más preferiblemente de 1 hasta alrededor de 6 átomos
de carbono, incluso más preferiblemente 1, 2, 3 ó 4 átomos de
carbono. Los grupos amino secundarios y terciarios son generalmente
más preferidos que los grupos amino primarios.
Los grupos heterocíclicos adecuados incluyen
grupos heteroaromáticos y heteroalicíclicos. Los grupos
heteroaromáticos adecuados contienen uno, dos o tres heteroátomos
seleccionados de átomos de N, O ó S e incluyen, por ejemplo,
cumarinilo incluyendo 8-cumarinilo, quinolinilo
incluyendo 8-quinolinilo, piridilo, pirazinilo,
pirimidilo, furilo, pirrolilo, tienilo, tiazolilo, oxazolilo,
imidazolilo, indolilo, benzofuranilo y benzotiazol. Los grupos
heteroalicíclicos adecuados contienen uno, dos o tres heteroátomos
seleccionados de átomos de N, O ó S e incluyen, por ejemplo grupos
tetrahidrofuranilo, tetrahidropiranilo, piperidinilo, morfolino y
pirrolindinilo.
Los grupos arilo carbocíclicos adecuados
incluyen compuestos de anillos individuales o múltiples, incluyendo
compuestos de anillos múltiples que contienen grupos arilo separados
y/o fusionados. Los grupos arilo carbocíclicos típicos contienen de
1 a 3 anillos separados o fusionados y de 6 hasta alrededor de 18
átomos de carbono en los anillos. Específicamente los grupos arilo
carbocíclicos preferidos incluyen fenilo incluyendo fenilo
sustituido tal como fenilo 2-sustituido, fenilo
3-sustituido, fenilo 2,3-sustituido,
fenilo 2,5-sustituido, fenilo
2,3,5-sustituido y
2,4,5-sustituido, incluyendo donde uno o más de los
sustituyentes del fenilo es un grupo que atrapa electrones tal como
halógeno, ciano, nitro, alcanoilo, sulfinilo, sulfonilo y similares;
naftilo incluyendo 1-naftilo y
2-naftilo; bifenilo; fenantrilo; y antracilo.
Las referencias dadas aquí para sustituir a los
grupos R' se refieren a grupos específicos, típicamente alquilo o
alquenilo, que pueden ser sustituidos en una o más posiciones
disponibles por uno o más grupos adecuados, por ejemplo, halógeno
tal como fluoro, cloro, bromo y yodo; ciano; hidroxilo; nitro;
azido; alcanoilo tal como un grupo alcanoilo de
C1-6 tal como acilo y similares; carboxamido, grupos
alquilo incluyendo aquellos grupos que tienen de 1 hasta alrededor
de 12 átomos de carbono o de 1 hasta alrededor de 6 átomos de
carbono y más preferiblemente 1-3 átomos de
carbono; grupos alquenilo y alquinilo incluyendo grupos que tienen
uno o más enlaces insaturados y de 2 hasta alrededor de 12 átomos
de carbono o de 2 hasta alrededor de 6 átomos de carbono; grupos
alcoxi que tienen aquellos que tienen uno o más enlaces de oxígeno y
de 1 hasta alrededor de 12 átomos de carbono o de 1 hasta alrededor
de 6 átomos de carbono; ariloxi tal como fenoxi; grupos alquiltio
incluyendo aquellos grupos que tienen uno o más enlaces tioéter y de
1 hasta alrededor de 12 átomos de carbono o de 1 hasta alrededor de
6 átomos de carbono; grupos alquilsulfinilo incluyendo aquellos
grupos que tienen uno o más enlaces sulfinilo y de 1 hasta
alrededor de 12 átomos de carbono o de 1 hasta alrededor de 6 átomos
de carbono; grupos alquilsulfonilo incluyendo aquellos grupos que
tienen uno o más enlaces sulfonilo y de 1 hasta alrededor de 12
átomos de carbono o de 1 hasta alrededor de 6 átomos de carbono;
grupos aminoalquilo tal como grupos que tienen uno o más átomos de
N y de 1 hasta alrededor de 12 átomos de carbono o de 1 hasta
alrededor de 6 átomos de carbono; arilo carbocíclicos que tienen 6 ó
más carbonos, particularmente fenilo (por ejemplo, siendo R un
grupo bifenilo sustituido o no sustituido); y aralquilo tal como
bencilo; grupos heterocíclicos incluyendo grupos heteroalicíclicos
y heteroaromáticos, especialmente con 5 a 10 átomos en los anillos
de los cuales de 1 a 4 son heteroátomos, más preferiblemente grupos
heterocíclicos con 5 ó 6 átomos en los anillos y 1 ó 2 heteroátomos
o con 10 átomos en los anillos y de 1 a 3 heteroátomos.
Los grupos R' preferidos están presentes en los
grupos de fórmula R', COR', OCOR' e incluyen alquilo o alquenilo,
que pueden estar sustituidos en una o más posiciones disponibles por
uno o más grupos adecuados, por ejemplo, halógeno tal como fluoro,
cloro, bromo y yodo, especialmente \omega-cloro o
perfluoro; grupos aminoalquilo tal como grupos que tienen uno o más
átomos de N y de 1 hasta alrededor de 12 átomos de carbono o de 1
hasta alrededor de 6 átomos de carbono, y especialmente incluyendo
aminoácidos, notablemente glicina, alanina, arginina, asparagina,
ácido asparagínico, cisteína, glutamina, ácido glutámico, histidina,
isoleucina, leucina, lisina, metionina, fenilalanina, prolina,
serina, treonina, triptófano, tirosina o valina, especialmente
formas protegidas de tales aminoácidos; arilo carbocíclicos que
tienen 6 ó más carbonos, particularmente fenilo; y aralquilo tal
como bencilo; grupos heterocíclicos incluyendo grupos
heteroalicíclicos y heteroaromáticos, especialmente con 5 a 10
átomos en los anillos de los cuales de 1 a 4 son heteroátomos, más
preferiblemente grupos heterocíclicos con 5 ó 6 átomos en los
anillos y 1 ó 2 heteroátomos o con 10 átomos en los anillos y de 1 a
3 heteroátomos, los grupos heterocíclicos están opcionalmente
sustituidos con uno o más de los sustituyentes permitidos para R' y
especialmente amino tal como dimetilamino o con ceto.
Los compuestos donde R1 no es hidrógeno tienen
mayor actividad, un margen terapéutico más amplio y propiedades
farmacocinéticas mejoradas.
Los compuestos donde R5 no es hidrógeno son otra
clase de compuestos preferidos. Ver por ejemplo los compuestos 37,
38 y 42. Estos compuestos tienden a ser menos activos (citotóxicos)
pero tienen menor toxicidad y propiedades farmacocinéticas
mejoradas. Cuando R_{5} no es hidrógeno se genera un centro
quiral, y se ha encontrado que hay diferencias en la actividad
entre los diastereoisómeros.
Los compuestos en donde R_{2} es un éster, en
general, tienen propiedades toxicológicas mejoradas y de este modo
dan un margen terapéutico más amplio.
Hay compuestos que tienen buenas propiedades
ADME
(absorción-distribución-metabolismo-excreción)
que son buenos indicadores de la farmacocinética.
Como se ha mencionado anteriormente, los
compuestos de la presente invención, preferiblemente aquellos con
grupos sustituyentes voluminosos, tienen un margen terapéutico bueno
y la esterificación de los fenoles con diferentes ácidos y
carbonatos, da como resultado un aumento general de las propiedades
farmacéuticas: hay un descenso significativo en la toxicidad en
hepatocitos, y también un buen perfil en las interacciones
droga-droga ya que estos derivados no muestran
inhibición de citocromo teniendo además mayor estabilidad
metabólica.
Se han preparado varios compuestos antitumorales
activos y se cree que se pueden formar muchos más compuestos según
las enseñanzas de la presente divulgación.
Las actividades antitumorales de estos
compuestos incluyen leucemias, cáncer de pulmón, cáncer de colon,
cáncer de riñón, cáncer de próstata, cáncer de ovario, cáncer de
mama, sarcomas y melanomas.
Otra forma de realización especialmente
preferida de la presente invención son composiciones farmacéuticas
útiles como agentes antitumorales que contienen como principio
activo un compuesto o compuestos de la invención, así como los
procesos para su preparación.
Ejemplos de composiciones farmacéuticas incluyen
cualquier sólido (comprimidos, píldoras, cápsulas, gránulos, etc.)
o líquido (soluciones, suspensiones o emulsiones) con composiciones
adecuadas para la administración oral, tópica o parenteral.
La administración de los compuestos o
composiciones de la presente invención puede ser cualquier método
adecuado, tal como infusión intravenosa, preparación oral,
intraperitoneal y preparación intravenosa.
Los compuestos y composiciones de esta invención
se pueden utilizar con otras drogas para proporcionar una terapia
de combinación. Las otras drogas pueden formar parte de la misma
composición, o proporcionarse como una composición separada para
administrar al mismo tiempo o a un tiempo diferente. La identidad de
la otra droga no está particularmente limitada, y los candidatos
adecuados incluyen:
- a)
- drogas con efectos antimitóticos, especialmente aquellas que tienen como objetivo elementos del citoesqueleto, incluyendo moduladores de microtúbulos tal como drogas de taxano (tal como taxol, paclitaxel, taxotere, docetaxel), podofilotoxinas o alcaloides de la vinca (vincristina, vinblastina);
- b)
- drogas antimetabolitos tal como 5-fluoroacilo, citarabina, gemcitarabina, análogos de purina tal como pentostatina, metotrexato;
- c)
- agentes alquilantes tal como mostazas de nitrógeno (tal como ciclofosfamida o ifosfamida);
- d)
- drogas que tienen como objetivo el ADN tal como drogas antraciclinas, adriamicina, doxorubicina, farmorubicina o epirubicina;
- e)
- drogas que tienen como objetivo las topoisomerasa tal como etopósido;
- f)
- hormonas y agonistas o antagonistas de hormonas tal como estrógenos, antiestrógenos (tamoxifeno y compuestos relacionados) y andrógenos, flutamida, leuprorelina, goserelina, ciproterona u octreotido;
- g)
- drogas que tienen como objetivo la transducción de señales en células tumorales incluyendo derivados de anticuerpos tal como herceptina;
- h)
- drogas alquilantes tal como drogas de platino (cis-platino, carboplatino, oxaliplatino, paraplatino) o nitrosoureas;
- i)
- drogas que afectan potencialmente a la metástasis de tumores tales como inhibidores de metaloproteinasas de matriz;
- j)
- terapia génica y agentes antisentido;
- k)
- anticuerpos terapéuticos;
- l)
- otros compuestos bioactivos de origen marino, notablemente didemninas tal como aplidina;
- m)
- análogos de esteroides, en particular dexametasona;
- n)
- drogas anti-inflamatorias, en particular dexametasona; y
- o)
- drogas antieméticas, en particular dexametasona.
Otra forma de realización especialmente
preferida de la presente invención son los intermediarios
sintéticos de los compuestos de la presente invención según se
describe en detalle a continuación.
\vskip1.000000\baselineskip
En la solicitud de patente internacional WO
0069862 se divulga el compuesto 36 (un intermediario en la
conversión de cianosafracina B a ecteinascidina 743).
Este intermediario hemisintético ha servido como
material de partida para la síntesis de la ecteinascidina 736, un
miembro más de la familia de las ecteinascidinas naturales con
actividad terapéutica antitumoral potencial.
El método preferido de producir compuestos
relacionados con la ecteinascidina 736 con diferentes sustituyentes
en la unidad
tetrahidro-\beta-carbolina y en la
posición 18 (-OR_{4}) se describe a continuación en el siguiente
esquema de reacción.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Esquema
1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Como se ilustra en el Esquema 1, el
intermediario 36 se puede convertir en ET-736 (o un
derivado sustituido) en dos pasos.
El primer paso para producir los compuestos tipo
I preferidos de la presente invención a partir del compuesto 36 es
la introducción de la unidad de
tetrahidro-\beta-carbolina
mediante reacción con la correspondiente amina primaria o
secundaria.
El segundo paso es la transformación del grupo
CN en un grupo OH mediante reacción con nitrato de plata en
ACN/H_{2}O.
También es posible obtener nuevos derivados con
grupos sustituyentes diferentes (-OR_{4}, posición 18 y
=NR_{5}) a través de reacciones de acilación o alquilación a
partir de los compuestos I preferidos. En todos estos casos R_{1}
y R_{2} en el material de partida es un átomo de hidrógeno. A
partir del mismo intermediario y a través de una reacción de
alquilación con bromuro de alilo o una reacción de acilación con
vinilcloroformiato se pueden obtener derivados N y O alílicos y N y
O vinilos. Todos estos compuestos mediante reacción con nitrato de
plata llevan a los productos finales en donde el grupo CN se
transforma en un grupo OH.
Como apreciará fácilmente el experto en la
materia, el esquema de reacción descrito aquí se puede modificar
mediante el uso de un amplio rango de aminas primarias sustituidas
para producir una serie de derivados de ecteinascidina 736
sustituidos para generar compuestos que son parte de esta
invención.
En particular las condiciones de reacción se
pueden variar para adaptar otras combinaciones de los grupos
sustituyentes en la unidad de
tetrahidro-\beta-carbolina.
El método preferido de producción de
ecteinascidina 694 y compuestos relacionados con diferentes
sustituyentes en las posiciones 5 y 18 (-OR_{6} y -OR_{7}) se
describe a continuación en el siguiente esquema de reacción.
\newpage
Esquema
2
En el Esquema 2 la hidrólisis del grupo acetilo
en C-5 en condiciones básicas permite preparar el
intermediario con el grupo hidroxilo en esta posición. A partir de
este compuesto y mediante una reacción de acetilación con
anhidruros, cloruros ácidos o ácidos carboxílicos se preparan nuevos
derivados mono-O sustituidos y mono y
di-O sustituidos (en C-5 y
C-18). La reacción para transformar el grupo CN en
el OH se realiza en condiciones clásicas (nitrato de plata en
CH_{3}CN/H_{2}O). Por otra parte, Et-694 se
puede obtener a partir de Et-736 a través de la
hidrólisis del grupo acetilo en C-5 con
KOH/MeOH.
Como apreciará fácilmente el experto en la
materia, el esquema de reacción descrito aquí se puede modificar
mediante el uso de un amplio rango de aminas primarias sustituidas
para producir una serie de derivados sustituidos de ecteinascidina
736-CN para generar compuestos que son parte de esta
invención.
En particular las condiciones de reacción se
pueden variar para adaptar otras combinaciones de los grupos
sustituyentes en la unidad de
tetrahidro-\beta-carbolina y en
las posiciones C-5 y C-18.
La presente invención se ilustrará
adicionalmente con referencia a los siguientes ejemplos que ayudan
en el entendimiento pero que no se deben interpretar como
limitaciones de la misma. La numeración de los compuestos no es
totalmente secuencial, debido a las supresiones.
Esquema
1
Método 1.- A una solución de 1 equivalente de
material de partida en ácido acético (5.33 E-5M) se
le añadieron en atmósfera de argón a temperatura ambiente 3.5
equivalentes de triptamina. La mezcla de reacción se agitó durante
24 horas y después se evaporó el ácido acético. Se añadió una
solución acuosa saturada de NaHCO_{3} y la mezcla se extrajo con
CH_{2}Cl_{2} y las fases orgánicas se secaron sobre
Na_{2}SO_{4}. La cromatografía en columna rápida (flash) da
compuestos puros.
Método 2.- A una solución de 1 equivalente del
compuesto 1 en CH_{2}Cl_{2} (0.032 M) se le añadieron en
atmósfera de argón a temperatura ambiente 2 equivalentes de
Et_{3}N y 2 equivalentes de cloruro de butirilo o Boc anhídrido
(3 equivalentes) o vinilcloroformiato. La reacción se siguió
mediante TLC y se extinguió con una solución acuosa saturada de
NaHCO_{3}, se extrajo con CH_{2}Cl_{2} y las fases orgánicas
se secaron sobre Na_{2}SO_{4}. La cromatografía en columna
rápida (flash) da compuestos puros.
Método 3.- A una solución de 1 equivalente del
compuesto 1 en DMF (0.032 M) se le añadieron en atmósfera de argón
a temperatura ambiente 3 equivalentes de Cs_{2}CO_{3} y 3
equivalentes de bromuro de alilo. La reacción se siguió mediante
TLC y se extinguió con una solución acuosa saturada de NaHCO_{3},
se extrajo con CH_{2}Cl_{2} y las fases orgánicas se secaron
sobre Na_{2}SO_{4}. La cromatografía en columna rápida (flash)
da una mezcla de dos compuestos puros: el compuesto 24
(ET-736-CN-Al) y el
compuesto 25
(ET-736-CN-diAl).
Método 4.- A una solución de 1 equivalente de
material de partida en CH_{3}CN/H_{2}O 3:2 (0.009 M) se le
añadieron 30 equivalentes de AgNO_{3}. Después de 24 horas la
reacción se extinguió con una mezcla 1:1 de soluciones saturadas de
salmuera y NaHCO_{3}, se agitó durante 10 minutos y se diluyó y
extrajo con CH_{2}Cl_{2}. La fase orgánica se secó con
Na_{2}SO_{4}. La cromatografía da compuestos puros.
Método
1
Compuesto 1 (compuesto de
referencia):
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.74 (s, 1H); 7.38 (d, 1H); 7.25 (d, 1H); 7.08
(t, 1H); 7.00 (t, 1H); 6.66 (s, 1H); 6.22 (d, 1H); 6.02 (d, 1H);
5.79 (s, 1H); 5.08 (d, 1H); 4.55 (s, 1H); 4.32 (s, 1H); 4.27 (d,
1H); 4.21 (s, 1H); 4.19 (d, 1H); 3.81 (s, 3H);
3.44-3.40 (m, 2H); 3.18-2.78 (m,
4H); 2.71-2.51 (m, 3H); 2.37 (s, 3H); 2.26 (s, 3H);
2.21 (s, 3H); 2.06 (s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 171.7, 168.9, 148.2, 145.9, 143.2, 141.3,
140.5, 135.7, 130.8, 130.6, 129.5, 127.0, 122.2, 120.9, 120.8,
119.5, 118.6, 118.4, 113.8, 111.1, 110.5, 102.2, 62.5, 61.5, 60.8,
60.5, 59.7, 55.9, 54.8, 42.1, 41.7, 40.0, 39.5, 29.9, 24.0, 21.7,
20.8, 16.1, 9.9.
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{41}H_{41}N_{5}O_{8}S: 763.3 Determinada (M+H^{+}):
764.2.
Compuesto
2
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.64 (s, 1H); 7.12 (d, 1H); 6.81 (d, 1H); 6.73
(dd, 1H); 6.65 (s, 1H); 6.19 (s, 1H); 6.00 (s, 1H); 5.79 (s, 1H);
5.0 (d, 1H); 4.54 (s, 1H); 4.30 (s, 1H); 4.27 (d, 1H); 4.20 (s,
1H); 4.18 (d, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.78 (s, 3H);
3.43-3.40 (m, 2H); 3.18-2.77 (m,
4H); 2.66-2.49 (m, 3H); 2.37 (s, 3H);
2.34-2.20 (m, 1H); 2.26 (s, 3H); 2.21 (s, 3H); 2.05
(s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 171.4, 168.6, 153.7, 148.0, 145.6, 142.9,
141.0, 140.2, 131.1, 130.6, 130.5, 129.2, 127.0, 120.6, 120.5,
118.2, 113.6, 111.9, 111.6, 110.0, 102.0, 100.3, 62.3, 61.2, 60.5,
60.2, 59.4, 55.7, 54.6, 54.5, 41.8, 41.4, 39.7, 39.2, 31.5, 29.6,
23.8, 22.6, 21.5, 20.5, 15.8, 14.4, 9.7.
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{42}H_{43}N_{5}O_{9}S: 793.3 Determinada (M+H^{+}):
794.7.
Compuesto
3
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.85 (s, 1H); 7.45-7.36 (m,
5H); 7.01 (t, 1H); 6.91 (t, 1H); 6.65-6.63 (m, 2H);
5.87 (s, 1H); 5.77 (s, 1H); 5.63 (s, 1H); 5.13 (s, 2H); 5.05 (d,
1H); 4.53 (s, 1H); 4.27-4.19 (m, 4H); 3.80 (s, 3H);
3.46-3.39 (m, 2H); 3.06-2.79 (m,
4H); 2.68-2.50 (m, 2H); 2.42-2.20
(m, 1H); 2.36 (s, 3H); 2.27 (s, 3H); 2.20 (s, 3H); 2.03 (s,
3H).
\global\parskip0.950000\baselineskip
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{48}H_{47}N_{5}O_{9}S: 869.3 Determinada (M+H^{+}):
870.3.
Compuesto
5
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.63 (s, 1H); 7.15-7.11 (m,
2H); 6.91 (dd, 1H); 6.65 (s, 1H); 6.21 (d, 1H); 6.01 (s, 1H); 5.78
(s, 1H); 5.07 (d, 1H); 4.54 (s, 1H); 4.31 (s, 1H); 4.27 (d, 1H);
4.21-4.16 (m, 2H); 3.81 (s, 3H);
3.44-3.40 (m, 2H); 3.17-2.77 (m,
4H); 2.66-2.46 (m, 3H); 2.31 (s, 6H); 2.26 (s, 3H);
2.21 (s, 3H); 2.06 (s, 3H).
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{42}H_{43}N_{5}O_{8}S: 777.3 Determinada (M+Na^{+}):
800.7.
Compuesto
6
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.66 (s, 1H); 6.95 (d, 1H); 6.64 (s, 2H); 6.56
(dd, 1H); 6.15 (s, 1H); 5.97 (s, 1H); 5.81 (s, 1H); 5.06 (d, 1H);
4.53 (s, 1H); 4.29 (s, 1H); 4.26 (d, 1H); 4.19 (s, 1H); 4.17 (d,
1H); 3.80 (s, 3H); 4.41-3.39 (m, 2H);
3.12-2.73 (m, 4H); 2.55-2.27 (m,
3H); 2.36 (s, 3H); 2.25 (s, 3H); 2.20 (s, 3H); 2.04 (s, 3H).
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{41}H_{41}N_{5}O_{9}S: 779.3 Determinada (M+H^{+}):
780.3.
Compuesto
7
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.75 (s, 1H); 7.26 (dd, 1H); 6.93 (dd, 1H);
6.76 (ddd, 1H); 6.65 (s, 1H); 6.22 (d, 1H); 6.01 (d, 1H); 5.79 (s,
1H); 5.08 (d, 1H); 4.55 (s, 1H); 4.31 (s, 1H); 4.25 (d, 1H); 4.20
(s, 1H); 4.18 (dd, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.43-3.40 (m,
2H); 3.18-2.77 (m, 4H); 2.64-2.50
(m, 3H); 2.36 (s, 3H); 2.26 (s, 3H); 2.21 (s, 3H); 2.06 (s,
3H).
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{41}H_{40}FN_{5}O_{8}S: 781.3 Determinada (M+H^{+}):
782.3.
\global\parskip1.000000\baselineskip
Compuesto
8
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 6.93 (d, 1H); 6.80 (s, 1H); 6.73 (s, 1H); 6.67
(dd, 1H); 6.46 (s, 1H); 6.20 (s, 1H); 6.06 (s, 1H); 5.72 (s, 1H);
4.96 (d, 1H); 4.45 (s, 1H); 4.37 (d, 1H); 4.25 (d, 1H);
4.05-4.01 (m, 2H); 3.79 (s, 3H); 3.63 (d, 1H); 3.39
(d, 1H); 3.03-3.91 (m, 2H);
2.76-2.34 (m, 5H); 3.30 (s, 3H); 2.28 (s, 3H); 2.21
(s, 3H); 2.18 (s, 3H); 2.04 (s, 3H).
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{42}H_{43}N_{5}O_{9}S: 793.3 Determinada (M+H^{+}):
794.3.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
9
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.63 (s, 1H); 7.24 (d, 1H); 6.75 (d, 1H); 6.66
(dd, 1H); 6.65 (s, 1H); 6.20 (s, 1H); 6.00 (s, 1H); 5.79 (s, 1H);
5.07 (d, 1H); 4.54 (s, 1H); 4.31 (s, 1H); 4.27 (d, 1H); 4.20 (d,
1H); 4.17 (dd, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.71 (s, 3H);
3.43-3.40 (m, 2H); 3.16-2.78 (m,
4H); 2.64-2.49 (m, 3H); 2.36 (s, 3H); 2.25 (s, 3H);
2.21 (s, 3H); 2.06 (s, 3H).
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{42}H_{43}N_{5}O_{9}S: 793.3 Determinada (M+H^{+}):
794.3.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
11
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.48 (s, 1H); 7.22 (d, 1H);
6.96-6.88 (m, 2H); 6.65 (s, 1H); 6.15 (d, 1H); 6.04
(d, 1H); 5.78 (s, 1H); 5.09 (d, 1H); 4.55 (s, 1H); 4.34 (s, 1H);
4.28-4.20 (m, 3H); 3.81 (s, 3H); 3.48 (d, 1H); 3.42
(d, 1H); 3.12-2.78 (m, 4H);
2.69-2.43 (m, 3H); 2.37 (s, 3H); 2.36 (s, 3H); 2.28
(s, 3H); 2.21 (s, 3H); 2.06 (s, 3H).
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{42}H_{43}N_{5}O_{8}S: 777.3 Determinada (M+H^{+}):
778.3.
\newpage
Compuesto 12 (primer
isómero)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.68 (s, 1H); 7.05 (d, 1H);
6.63-6.57 (m, 3H); 6.22 (d, 1H); 6.02 (d, 1H); 5.73
(s, 1H); 5.12 (d, 1H); 4.58 (s, 1H); 4.36 (s, 1H);
4.34-4.22 (m, 3H); 3.80 (s, 3H);
3.47-3.42 (m, 2H); 3.05-2.86 (m,
2H); 2.67-2.35 (m, 2H); 2.32-2.05
(m, 3H); 2.31 (s, 3H); 2.28 (s, 3H); 2.15 (s, 3H); 2.03 (s, 3H);
1.07 (d, 3H).
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{42}H_{43}N_{5}O_{9}S: 793.2 Determinada (M+H^{+}):
794.2.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 13 (segundo
isómero)
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.54 (s, 1H); 7.08 (d, 1H); 6.73 (d, 1H); 6.63
(dd, 1H); 6.57 (s, 1H); 6.20 (d, 1H); 6.00 (d, 1H); 5.74 (s, 1H);
5.02 (d, 1H); 4.60 (s, 1H); 4.33 (s, 3H); 4.27 (d, 1H); 4.22 (d,
1H); 4.12 (dd, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.44-3.32 (m, 3H);
3.05-2.89 (m, 2H); 2.49-2.03 (m,
4H); 2.32 (s, 3H); 2.24 (s, 3H); 2.18 (s, 3H); 2.07 (s, 3H); 1.21
(d, 3H).
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{42}H_{43}N_{5}O_{9}S: 793.2 Determinada (M+H^{+}):
794.2.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 17 (segundo
isómero)
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.65 (s, 1H); 7.18 (dd, 1H); 6.99 (dd, 1H);
6.83 (ddd, 1H); 6.58 (s, 1H); 6.22 (d, 1H); 6.01 (d, 1H); 5.74 (s,
1H); 5.03 (d, 1H); 4.61 (s, 1H); 4.34 (s, 1H); 4.27 (d, 1H); 4.22
(d, 1H); 4.14-4.10 (m, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.44 (d,
2H); 3.38-3.30 (m, 1H); 3.06-2.99
(m, 2H); 2.50 (dd, 1H); 2.43 (d, 1H); 2.32 (s, 3H); 2.24 (s, 3H);
2.18 (s, 3H); 2.16-2.11 (m, 2H); 2.08 (s, 3H); 1.20
(d, 3H).
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{42}H_{42}FN_{5}O_{8}S: 795.3 Determinada (M+H^{+}):
796.2.
\newpage
Método
4
Compuesto 26 (compuesto de
referencia)
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.70 (s, 1H); 7.38 (d, 1H); 7.24 (d, 1H); 7.08
(t, 1H); 7.00 (t, 1H); 6.67 (s, 1H); 6.20 (d, 1H); 5.99 (d, 1H);
5.74 (s, 1H); 5.20 (d, 1H); 4.82 (s, 1H); 4.347-4.38
(m, 3H); 4.16-4.10 (m, 2H); 3.81 (s, 3H); 3.49 (d,
1H); 3.22-3.13 (m, 2H); 3.00 (d, 1H);
2.88-2.79 (m, 2H); 2.71-2.52 (m,
3H); 2.37 (s, 3H); 2.28-2.24 (m, 1H); 2.25 (s, 3H);
2.19 (s, 3H); 2.05 (s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 171.4, 168.7, 147.8, 145.4, 142.8, 141.0,
140.6, 135.4, 131.2, 130.9, 129.0, 126.8, 121.8, 121.3, 120.9,
119.1, 118.3, 118.1, 115.5, 112.8, 110.8, 110.1, 101.7, 81.9, 62.3,
61.8, 60.2, 57.6, 57.4, 55.8, 54.9, 42.1, 41.2, 39.7, 39.2, 31.5,
23.5, 22.6, 21.5, 20.5, 15.8, 14.0, 9.6.
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{40}H_{42}N_{4}O_{9}S: 754.3 Determinada
(M-H_{2}O+H^{+}): 737.2.
Compuesto
27
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.59 (s, 1H); 7.13 (d, 1H); 6.81 (s, 1H); 6.73
(dd, 1H); 6.67 (s, 1H); 6.19 (d, 1H); 5.99 (d, 1H); 5.74 (s, 1H);
5.19 (d, 1H); 4.82 (s, 1H); 4.49-4.47 (m, 2H);
4.16-4.09 (m, 2H); 3.81 (s, 3H); 3.79 (s, 3H);
3.50-3.45 (m, 2H); 3.24-3.13 (m,
2H); 3.02 (d, 1H); 2.88-2.79 (m, 2H);
2.67-2.48 (m, 3H); 2.37 (s, 3H);
2.30-2.24 (m, 1H); 2.25 (s, 3H); 2.19 (s, 3H); 2.04
(s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 171.6, 154.0, 148.1, 145.6, 143.1, 141.3,
140.9, 131.9, 131.4, 130.8, 129.3, 127.4, 121.5, 121.2, 115.7,
113.1, 112.1, 111.8, 110.1, 102.0, 100.6, 82.1, 62.6, 62.0, 60.5,
57.9, 57.6, 56.1, 56.0, 55.2, 42.4, 41.5, 40.0, 39.4, 31.8, 29.9,
23.8, 22.8, 21.8, 20.8, 16.0, 14.6, 9.9.
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{40}H_{42}N_{4}O_{9}S: 784.4 Determinada
(M-H_{2}O+H^{+}): 767.2.
Compuesto
28
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.81 (s, 1H); 7.43-7.36 (m,
5H); 7.01 (d, 1H); 6.91 (t, 1H); 6.66 (s, 1H); 6.63 (d, 1H); 5.84
(s, 1H); 5.75 (s, 1H); 5.60 (s, 1H); 5.20-5.09 (m,
3H); 4.78 (s, 1H); 4.49 (d, 1H); 4.44 (s, 1H); 4.16 (s, 1H);
4.14-4.12 (m, 1H); 3.81 (s, 3H); 3.52 (d, 1H); 3.47
(s, 2H); 3.22-2.80 (m, 5H);
2.68-2.51 (m, 2H); 2.36 (s, 3H);
2.39-2.21 (m, 1H); 2.27 (s, 3H); 2.18 (s, 3H); 2.02
(s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 171.4, 148.0, 145.6, 145.2, 143.1, 141.1,
140.8, 137.3, 131.6, 130.7, 129.3, 128.8, 128.5, 128.2, 128.0,
126.2, 121.4, 121.3, 119.8, 118.1, 115.5, 113.0, 111.8, 111.0,
103.8, 101.8, 82.1, 70.6, 62.9, 61.9, 60.5, 58.0, 57.7, 56.1, 55.1,
42.3, 41.5, 40.0, 39.5, 29.9, 23.9, 22.0, 20.7, 16.0, 9.8.
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{47}H_{48}N_{4}O_{10}S: 860.3 Determinada
(M-H_{2}O+H^{+}): 843.3.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
30
\vskip1.000000\baselineskip
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.61 (s, 1H); 7.16-7.11 (m,
2H); 6.91 (d, 1H); 6.67 (s, 1H); 6.20 (d, 1H); 5.99 (d, 1H); 5.75
(s, 1H); 5.20 (d, 1H); 4.82 (s, 1H); 4.49 (d, 1H); 4.35 (s, 1H);
4.16 (d, 2H); 4.11 (dd, 1H); 3.81 (s, 3H); 3.48 (s, 1H);
3.23-2.79 (m, 5H); 2.67-2.47 (m,
3H); 2.37 (s, 6H); 2.25 (s, 3H); 2.19 (s, 3H); 2.05 (s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 174.5, 171.6, 168.9, 148.1, 145.6, 143.1,
141.3, 140.9, 134.0, 131.2, 128.6, 127.3, 123.6, 121.5, 121.2,
118.3, 115.7, 109.9, 102.0, 82.1, 62.6, 62.0, 60.5, 57.9, 57.7,
56.1, 56.2, 42.4, 41.5, 40.0, 39.4, 29.9, 23.8, 21.7, 21.6, 20.8,
16.0, 9.9.
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{41}H_{44}N_{4}O_{9}S: 768.3 Determinada
(M-H_{2}O+H^{+}): 751.3.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
31
\vskip1.000000\baselineskip
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.60 (s, 1H); 7.00 (d, 1H); 6.69 (d, 1H); 6.66
(s, 1H); 6.69 (dd, 1H); 6.16 (s, 1H); 5.96 (s, 1H); 5.78 (s, 1H);
5.19 (d, 1H); 4.82 (s, 1H); 4.49 (d, 1H); 4.46 (s, 1H); 4.17 (d,
1H); 4.10 (d, 1H); 3.81 (s, 3H); 3.72-3.59 (m, 2H);
3.64 (d, 2H); 3.50 (d, 1H); 3.23-2.76 (m, 4H);
2.55-2.29 (m, 3H); 2.37 (s, 3H); 2.25 (s, 3H); 2.19
(s, 3H); 2.03 (s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 171.3, 166.9, 149.2, 147.9, 145.4, 142.9,
141.0, 140.7, 131.2, 130.7, 127.5, 121.2, 120.9, 115.5, 111.5,
103.1, 101.8, 81.9, 62.3, 61.8, 60.3, 57.7, 57.4, 55.8, 54.9, 42.1,
41.2, 39.6, 39.1, 29.6, 23.5, 22.6, 21.4, 20.5, 15.8, 14.1. 9.6.
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{40}H_{42}N_{4}O_{10}S: 770.3 Determinada
(M-H_{2}O+H^{+}): 753.3.
\newpage
Compuesto
32
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.72 (s, 1H); 7.27 (dd, 1H); 6.94 (dd, 1H);
6.76 (ddd, 1H); 6.66 (s, 1H); 6.20 (s, 1H); 5.99 (s, 1H); 5.75 (s,
1H); 5.19 (d, 1H); 4.83 (s, 1H); 4.49 (d, 1H);
4.16-4.09 (m, 2H); 3.81 (s, 3H);
3.50-3.48 (m, 1H); 3.48 (s, 1H);
3.22-2.79 (m, 5H); 2.65-2.51 (m,
3H); 2.37 (s, 3H); 2.25 (s, 3H); 2.19 (s, 3H); 2.05 (s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 171.5, 169.0, 148.1, 145.7, 143.1, 141.3,
140.9, 131.5, 129.3, 123.7, 121.5, 121.1, 119.3, 119.1, 118.3,
115.7, 110.4, 108.2, 107.8, 102.0, 97.8, 97.5, 82.1, 62.4, 62.1,
60.5, 57.9, 57.6, 56.1, 55.1, 42.4, 41.5, 39.9, 39.4, 29.6, 23.8,
21.7, 20.8, 16.0, 9.9.
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{40}H_{41}FN_{4}O_{9}S: 772.3 Determinada
(M-H_{2}O+H^{+}): 755.3.
Compuesto
33
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 6.85 (d, 1H); 6.80 (s, 1H);
6.71-6.64 (m, 2H); 6.48 (s, 1H); 6.18 (s, 1H); 6.02
(s, 1H); 5.74 (s, 1H); 5.03 (d, 1H); 4.88 (d, 1H); 4.39 (d, 1H);
4.36 (s, 1H); 4.16 (d, 1H); 3.98 (ddm, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.71 (d,
1H); 3.48 (s, 1H); 3.22 (d, 1H); 2.93-2.83 (m, 2H);
2.73-2.39 (m, 4H); 2.29 (s, 3H);
2.28-2.05 (m, 1H); 2.26 (s, 3H); 2.22 (s, 3H); 2.18
(s, 3H); 2.03 (s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 168.9, 149.3, 147.6, 145.5, 142.7, 141.6,
140.7, 131.3, 131.1, 129.3, 126.9, 121.2, 115.7, 111.9, 111.0,
110.7, 103.1, 102.0, 83.4, 69.8, 63.7, 60.2, 58.5, 57.7, 55.1, 54.7,
59.5, 43.1, 41.4, 40.6, 35.0, 29.6, 24.6, 22.6, 21.1, 20.2, 15.5,
9.7.
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{41}H_{44}N_{4}O_{10}S: 784.3 Determinada
(M-H_{2}O+H^{+}): 767.3.
Compuesto
34
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.58 (s, 1H); 7.23 (d, 1H); 6.76 (d, 1H); 6.67
(dd, 1H); 6.66 (s, 1H); 6.19 (d, 1H); 5.98 (d, 1H); 5.74 (s, 1H);
5.20 (d, 1H); 4.82 (s, 1H); 4.49 (d, 1H); 4.47 (s, 1H); 4.16 (d,
1H); 4.10 (dd, 1H); 3.81 (s, 3H); 3.78 (s, 3H);
3.51-3.47 (m, 1H); 3.22-2.80 (m,
5H); 2.65-2.50 (m, 3H); 2.36 (s, 3H); 2.25 (s, 3H);
2.19 (s, 3H); 2.05 (s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 171.7, 168.9, 156.5, 148.1, 145.6, 143.1,
141.3, 140.9, 136.5, 131.5, 129.8, 129.3, 121.6, 121.5, 121.2,
119.2, 115.8, 113.1, 110.3, 109.3, 102.2, 94.9, 82.2, 62.5, 62.0,
60.5, 57.9, 57.7, 56.1, 55.8, 55.2, 42.3, 41.5, 40.0, 39.5, 29.9,
23.8, 21.8, 20.8, 16.0, 9.9.
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{41}H_{44}N_{4}O_{10}S: 784.3 Determinada
(M-H_{2}O+H^{+}): 767.3.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto
36
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.47 (s, 1H); 7.22 (d, 1H);
6.95-6.87 (m, 2H); 6.66 (s, 1H); 6.13 (d, 1H); 6.01
(d, 1H); 5.76 (s, 1H); 5.20 (d, 1H); 4.84 (s, 1H); 4.49 (d, 1H);
4.46 (s, 1H); 4.18-4.14 (m, 2H); 3.81 (s, 3H); 3.54
(d, 1H); 3.48 (s, 1H); 3.22 (d, 1H); 3.20-2.80 (m,
4H); 2.70-2.42 (m, 3H); 2.36 (s, 6H); 2.27 (s, 3H);
2.18 (s, 3H); 2.05 (s, 3H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 171.3, 169.0, 148.0, 145.6, 143.1, 141.4,
140.9, 135.3, 131.5, 131.1, 130.7, 129.4, 126.6, 122.8, 121.8,
121.3, 119.9, 119.6, 118.1, 116.3, 115.8, 102.0, 82.1, 62.1, 60.5,
58.0, 57.8, 56.1, 55.1, 42.4, 41.5, 40.1, 39.6, 29.9, 23.9, 21.9,
20.7, 16.6, 16.0, 9.9.
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{41}H_{44}N_{4}O_{9}S: 768.2 Determinada
(M-H_{2}O+H^{+}): 751.2.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 37 (primer
isómero)
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.70 (s, 1H); 7.06 (d, 1H);
6.67-6.61 (m, 3H); 6.20 (d, 1H); 5.98 (d, 1H); 5.70
(s, 1H); 5.20 (d, 1H); 4.86 (s, 1H); 4.53 (d, 1H); 4.48 (s, 1H);
4.18 (s, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.72-3.54 (m, 4H);
3.24-3.22 (m, 1H); 3.01-2.56 (m,
5H); 2.31 (s, 3H); 2.27 (s, 3H); 2.15 (s, 3H); 2.02 (s, 3H); 1.10
(s, 3H).
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{41}H_{44}N_{4}O_{10}S: 784.3 Determinada
(M-H_{2}O+H^{+}): 767.3.
\vskip1.000000\baselineskip
Compuesto 38 (segundo
isómero)
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.51 (s, 1H); 7.10 (d, 1H); 6.75 (d, 1H); 6.64
(dd, 1H); 6.59 (s, 1H); 6.19 (d, 1H); 5.97 (d, 1H); 5.71 (s, 1H);
5.15 (d, 1H); 4.84 (s, 1H); 4.53-4.50 (m, 2H); 4.16
(s, 1H); 4.04 (dd, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.65-3.63 (m,
1H); 3.51-3.49 (m, 1H); 3.40-2.36
(m, 1H); 3.24-3.21 (m, 1H);
3.03-2.84 (m, 2H); 2.50-2.41 (m,
2H); 2.32 (s, 3H); 2.23 (s, 3H); 2.16 (s, 3H); 2.06 (s, 3H); 1.20
(s, 3H).
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{41}H_{44}N_{4}O_{10}S: 784.3 Determinada
(M-H_{2}O+H^{+}): 767.3.
\newpage
Compuesto 42 (segundo
isómero)
^{1}H-RMN (300 MHz,
CDCl_{3}): \delta 7.62 (s, 1H); 7.18 (dd, 1H); 6.99 (dd, 1H);
6.82 (ddd, 1H); 6.59 (s, 1H); 6.20 (d, 1H); 5.98 (d, 1H); 5.71 (s,
1H); 5.15 (d, 1H); 4.85 (s, 1H); 4.52 (s, 1H); 4.50 (d, 1H); 4.16
(d, 1H); 4.05 (dd, 1H); 3.80 (s, 3H); 3.50-3.48 (m,
1H); 3.42-3.36 (m, 1H); 3.23 (d, 1H);
3.00-2.81 (m, 2H); 2.50 (dd, 1H); 2.44 (d, 1H);
2.32 (s, 3H); 2.24 (s, 3H); 2.16 (s, 3H); 2.07 (s, 3H); 1.23 (s,
3H).
^{13}C-RMN (75 MHz,
CDCl_{3}): \delta 171.9, 168.7, 156.2, 147.8, 145.6, 143.3,
141.8, 140.9, 132.7, 131.4, 131.1, 129.4, 129.0, 121.8, 121.4,
115.8, 113.1, 111.9, 111.8, 110.4, 110.0, 103.7, 103.4, 102.0, 81.9,
63.4, 61.8, 60.6, 58.0, 56.2, 55.2, 46.6, 42.3, 41.5, 41.0, 32.1,
29.5, 23.9, 22.9, 21.9, 20.7, 16.1, 14.3, 9.9.
ESI-MS m/z: Calculada para
C_{41}H_{43}FN_{4}O_{9}S: 786.2 Determinada
(M-H_{2}O+H^{+}): 769.3.
La finalidad de estos ensayos es interrumpir el
crecimiento de un cultivo de células tumorales "in
vitro" por medio de una exposición continua de las células a
la muestra que se está probando.
Se ha adaptado un tipo de ensayo colorimétrico,
utilizando la reacción de sulforodamina B (SRB) para una medida
cuantitativa del crecimiento y viabilidad celulares [siguiendo la
técnica descrita por Philip Skehan et al., (1990) New
colorimetric cytotoxicity assay for anticancer drug screening, J.
Natl. Cancer Inst., 82: 1107-1112].
Esta forma del ensayo emplea microplacas de
cultivo celular de 96 pocillos de 9 mm de diámetro (Faircloth,
1998; Mosmann, 1983). La mayoría de las líneas celulares se
obtuvieron de la Colección de Cultivos Tipo de América (ATCC)
derivadas de diferentes tipos de cánceres humanos.
Las células se mantienen en RPMI 1640 con SBF al
10%, suplementado con penicilina 0.1 g/l y sulfato de estreptomicina
0.1 g/l e incubadas a 37ºC, CO_{2} al 5% y humedad del 98%. Para
los experimentos, las células se recogieron de cultivos
subconfluentes utilizando tripsina y se resuspendieron en medio
fresco antes de sembrarlas.
Las células se siembran en placas de
microtitulación de 96 pocillos, a 5x10^{3} células por pocillo en
alícuotas de 195 \mul de medio, y se dejan adherir a la
superficie de la placa haciéndolas crecer en medio sin drogas
durante 18 horas. Después, se añaden las muestras en alícuotas de 5
\mul en un intervalo de 10 a 10^{-8} \mug/ml, disueltas en
DMSO/EtOH/PBS (0.5:0.5:99). Después de 48 horas de exposición, el
efecto antitumoral se mide mediante la metodología SRB: las células
se fijan añadiendo 50 \mul de ácido tricloroacético (TCA) frío al
50% (peso/vol) e incubando durante 60 minutos a 4ºC. Las placas se
lavan con agua desionizada y se secan. Se añaden cien \mul de
solución de SRB (al 0.4% peso/vol en ácido acético al 1%) a cada
pocillo de microtitulación y se incuban durante 10 minutos a
temperatura ambiente. La SRB no unida se elimina lavando con ácido
acético al 1%. Las placas se secan al aire y el colorante unido se
solubiliza con tampón Tris. Las densidades ópticas se leen en un
lector de placas espectrofotométrico automatizado a una única
longitud de onda de 490 nm.
Se calculan los valores para la media +/- DE de
los datos de pocillos por triplicado. Se pueden calcular algunos
parámetros para las respuestas celulares: GI = inhibición del
crecimiento, TGI = inhibición total del crecimiento (efecto
citostático) y LC = muerte celular (efecto citotóxico).
Los resultados obtenidos pueden predecir la
utilidad de una cierta droga como un tratamiento anticáncer
potencial. Para esta técnica, se seleccionan compuestos que
muestran valores de GI_{50} menores de 10 \mug/ml para
continuar con estudios adicionales. Los datos de GI_{50} permiten
predecir que una droga no solo podría ser citostática, sino que
también podría tener potencial en términos de reducción de
tumores.
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La toxicidad se evaluó mediante los métodos
descritos en Toxicology in Vitro, 15 (2001)
571-577, J. Luber Narod et al.,
"Evaluation of the use of in vitro methodologies as tools
for screening new compounds for potential in vivo
toxicity".
Para evaluar la citotoxicidad de las drogas
hacia células normales, se utilizaron placas de 96 pocillos
sembradas a una densidad de 5000 células por pocillo (excepto para
FDC-P1 que se sembraron a 12000 células por pocillo)
con líneas de células normales (ATCC, Tabla 1) mantenidas según las
direcciones de la ATCC: AML-12, células de hígado
normal de ratón; NRK-52E, células de riñón normal de
rata; L8, células de músculo esquelético normal de rata;
FDC-P1, células troncales mielógenas normales de
ratón; y H9c2 (2-1), células de músculo cardiaco
normal de rata. Se dejo que las células se asentaran en cada placa
durante la noche antes de añadir la droga a ensayar. Además, se
prepararon cultivos primarios de neuronas a partir de cerebros
enteros (prosencéfalo y tronco del encéfalo) y médula espinal
embrionarios (día e-17) utilizando métodos
establecidos (Federoff y Richardson, 1997).
Se añadió a cada pocillo (100 \mul de medio)
10 \mul de droga en medio o concentraciones variables
(concentración final 1x10-10-0.01
mg/ml) y se incubó durante la noche a 37ºC con CO_{2} al 5%.
Después de 24 horas se realizaron los siguientes ensayos. Todos los
experimentos se repitieron al menos 3 veces y se ensayaron por
duplicado.
1. Se realizó el ensayo MTS (CellTiter 96
acuoso) según las direcciones del fabricante (Promega) (para todos
los tipos de células). Se determinó la viabilidad celular (actividad
mitocondrial) a través de la conversión enzimática del sustrato
formazán.
El coeficiente de partición de un compuesto
químico proporciona una medida termodinámica de su equilibrio de
hidrofilicidad-lipofilicidad. La lipofilicidad es un
factor estructural principal que influencia el comportamiento
farmacocinético y farmacodinámico de los compuestos. El coeficiente
de partición entre agua o tampón y 1-octanol es la
medida más ampliamente utilizada de la lipofilicidad de un compuesto
químico.
La medida del coeficiente de partición se evaluó
basada en un procedimiento de botella de agitación en miniatura. Se
utilizó tampón (PBS de Dulbecco, pH 7.40) como fase acuosa. Los
compuestos ensayados se disolvieron en DMSO, a una concentración de
100 \muM. La concentración final de DMSO (1%) durante la partición
octanol-tampón es muy baja para evitar sesgo en la
partición. La cantidad de compuesto en la fase de tampón se
determinó mediante HPLC con detección de haz de fotodiodo tras una
fase de equilibrio de 60 minutos. La cantidad de compuesto en la
fase de octanol se calcula restando la cantidad de compuesto en el
tampón de la cantidad total del compuesto, que se determina a
partir de una muestra de calibración.
Log D se calcula como el Log_{10} de la
cantidad de compuesto en la fase de octanol dividido por la cantidad
de compuesto en la fase de tampón. El intervalo eficaz del
microensayo de log D es aproximadamente de -0.5 a +4.5.
La permeabilidad del epitelio intestinal es una
característica crítica que determina la velocidad y alcance de la
absorción en humanos y finalmente la biodisponilbilidad del
candidato a fármaco. El ensayo de permeabilidad en
Caco-2 permite una evaluación rápida de la
permeabilidad de la membrana y ayuda de este modo a clasificar
compuestos en términos de su potencial de absorción.
La línea celular Caco-2 es una
línea de células de adenocarcinoma de colon humano que se
diferencia en cultivo y que se parece al revestimiento epitelial
del intestino delgado humano. Se ha utilizado ampliamente como un
modelo del epitelio intestinal in vitro para el transporte de
drogas y cribados de permeabilidad de compuestos descubiertos.
El coeficiente aparente de permeabilidad
(P_{app}) se determinó en la dirección apical a basolateral (A
hacia B) a través de monocapas de células (el subclón
TC-7 de Caco-2) cultivadas en
filtros de membrana de policarbonato. Los compuestos se ensayaron a
50 \muM a una concentración final de DMSO del 1%. Las muestras se
analizaron mediante HPLC-MS o
HPLC-MS/MS.
El compuesto a ensayar se añadió en el lado
apical y la P_{app} se determinó basada en la tasa de aparición
del compuesto a ensayar en el lado basolateral después de 2 horas de
incubación. En cada ensayo se examinan dos compuestos de
referencia, propranolol (altamente permeable) y ranitidina (poco
permeable), como controles. Los resultados de ensayo se pueden
utilizar para clasificar compuestos en términos de su potencial de
absorción. Los compuestos con una P_{app} igual o mayor de 20 x
10-6 cm/s se podrían considerar altamente permeables
y son probablemente "no limitados por permeabilidad". Los
compuestos con una P_{app} menor de 5 x 10-6 cm/s
se consideran poco permeables y son probablemente "limitados por
permeabilidad". Los compuestos con una P_{app} mayor de 5 x
10-6 cm/s pero menor de 20 x 10-6
cm/s se considera que tienen una permeabilidad media.
El metabolismo hepático es un determinante
principal del comportamiento farmacocinético, y un metabolismo de
primer paso rápido es una causa principal de biodisponibilidad baja.
Se utilizan conjuntos de microsomas de hígado y citocromos P450
recombinantes para la evaluación metabólica de compuestos activos,
cabezas de serie, y nuevos compuestos farmacéuticos. Los resultados
de los estudios de cribados metabólicos son útiles en:
- \bullet
- Determinar la velocidad inicial a la que los compuestos se metabolizan
- \bullet
- Investigar las vías principales del metabolismo de drogas
- \bullet
- Predecir el comportamiento farmacocinético in vivo
- \bullet
- Investigar el potencial para interacciones droga-droga
La estabilidad metabólica se determinó
utilizando homogenados de hígado humano S9 que incluyen tanto
actividades de enzimas microsomales como citosólicas. Los compuestos
a ensayar se diluyeron en metanol (0.625%) y acetonitrilo (0.625%)
a una concentración de 1 \muM y se incubaron con el conjunto de
hígados humanos (proteína = 1 mg/mL) durante 60 minutos a 37ºC. Las
áreas de los picos correspondientes a todos los analitos (productos
metabólicos) se determinaron mediante HPLC-MS/MS.
Las áreas se registraron y se determinó la proporción de las áreas
de los picos de analitos respecto a los estándares internos para
cada analito. La proporción del compuesto precursor restante
después de 60 minutos y la cantidad restante a tiempo cero,
expresadas como porcentaje, se describen como estabilidad
metabólica. Los valores mayores significan estabilidad metabólica
mayor.
Los citocromos P450 son un grupo de enzimas
relacionadas principalmente localizadas en el hígado y responsables
del metabolismo de drogas. Las inhibición de estos CYP por drogas
está relacionada con las interacciones droga-droga
y toxicidades.
CYP3A4 es la forma más común de las enzimas
CYP3A encontrada en adultos y es la forma implicada en la mayoría
de las interacciones de drogas. CYP2D6 metaboliza más del 25% de las
medicaciones clínicamente
útiles.
útiles.
Para el ensayo de inhibición de CYP2D6, los
compuestos se ensayan a 10 \muM por duplicado con una
concentración final del 0.25% tanto de metanol como de acetonitrilo
en presencia del sustrato fluorescente AMMC
(3-[2-N,N-dietil-N-metilamonio)etil]-7-metoxi-4-metilcumarina)
a la concentración de 1.5 \muM). La conversión de AMMC en AHMC
(3-[2-N,N-dietil-N-metilamonio)etil]-7-hidroxi-4-metilcumarina)
se determina por espectrofluorimetría después de incubar con la
enzima durante 450 minutos a 37ºC.
Para el ensayo de inhibición de CYP3A4, los
compuestos se ensayaron a 10 \muM por duplicado con una
concentración final del 0.25% tanto de metanol como de acetonitrilo
en presencia del sustrato fluorescente BCF (50 \muM). La
conversión de BFC
(7-benciloxi-4-trifluorometilcumarina)
en HFC
(7-hidroxi-4-trifluorometilcumarina)
se determinó por espectrofluorimetría tras incubación con la enzima
durante 30 minutos a 37ºC.
Para ambos ensayos, la intensidad de
fluorescencia medida a t = 0 se resta de la medida después del
tiempo de incubación apropiado. La relación de señal a ruido se
calcula comparando la fluorescencia en incubaciones que contienen
el compuesto a ensayar respecto a muestras controles que contienen
el mismo vehículo solvente. El porcentaje de la actividad control
se calcula y describe como porcentaje de inhibición.
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Se investigó el potencial tóxico de los
compuestos in vitro utilizando hepatocitos primarios humanos
(HEPG2). Los compuestos se ensayaron a 30 \muM por duplicado con
una concentración final de DMSO del 1%. Después de incubar durante
24 horas a 37ºC se determinó la viabilidad celular mediante la
conversión de azul alamar oxidado (resazurina) a azul alamar
reducido (resorufina). Como compuesto de referencia se utilizó
clorpromazina. Los resultados se expresan como porcentaje de
inhibición de los valores control.
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Claims (12)
1. Un compuesto de fórmula:
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ó
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2. Un compuesto según la reivindicación 1 de
fórmula (27):
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3. Un compuesto según la reivindicación 1 de
fórmula (30):
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\vskip1.000000\baselineskip
4. Un compuesto según la reivindicación 1 de
fórmula (31):
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
5. Un compuesto según la reivindicación 1 de
fórmula (33):
\vskip1.000000\baselineskip
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6. Un compuesto según la reivindicación 1 de
fórmula:
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\vskip1.000000\baselineskip
7. Un compuesto según la reivindicación 1 de
fórmula (2):
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
8. Un compuesto según la reivindicación 1 de
fórmula (5):
\vskip1.000000\baselineskip
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\vskip1.000000\baselineskip
9. Un compuesto según la reivindicación 1 de
fórmula (6):
\vskip1.000000\baselineskip
10. Un compuesto según la reivindicación 1 de
fórmula (8):
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
11. Una composición farmacéutica que contiene un
compuesto según cualquiera de las reivindicaciones anteriores junto
a un diluyente farmacéuticamente aceptable.
12. El uso de un compuesto según cualquiera de
las reivindicaciones 1 a 10 en la preparación de un medicamento
para el tratamiento del cáncer.
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