PL218295B1 - Pochodne ekteinascydyny, kompozycja je zawierająca oraz ich zastosowanie - Google Patents

Pochodne ekteinascydyny, kompozycja je zawierająca oraz ich zastosowanie

Info

Publication number
PL218295B1
PL218295B1 PL367940A PL36794002A PL218295B1 PL 218295 B1 PL218295 B1 PL 218295B1 PL 367940 A PL367940 A PL 367940A PL 36794002 A PL36794002 A PL 36794002A PL 218295 B1 PL218295 B1 PL 218295B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
compound
nmr
mhz
tgi
cdcl
Prior art date
Application number
PL367940A
Other languages
English (en)
Other versions
PL367940A1 (pl
Inventor
Valentin Martinez
Pilar Gallego
Carmen Cuevas
Simon Munt
Ignacio Manzanares
Original Assignee
Pharma Mar
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pharma Mar filed Critical Pharma Mar
Publication of PL367940A1 publication Critical patent/PL367940A1/pl
Publication of PL218295B1 publication Critical patent/PL218295B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D515/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen, oxygen, and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D515/22—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen, oxygen, and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains four or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/438—The ring being spiro-condensed with carbocyclic or heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/4985—Pyrazines or piperazines ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Compounds Of Unknown Constitution (AREA)

Description

Niniejszy wynalazek dotyczy pochodnych ekteinascydyn, zwłaszcza ekteinascydyny 736 (Et-736), kompozycji farmaceutycznych, które je zawierają oraz ich zastosowania jako związków przeciwnowotworowych.
Stan techniki
Ekteinascydyny są wyjątkowo silnymi środkami przeciwnowotworowymi wyizolowanymi z osłonie morskich Ecteinascidia turbinata. Szereg ekteinascydyn ujawniono uprzednio w literaturze patentowej i naukowej. Na przykład:
Opis patentowy USA nr 5.256.663 ujawnia kompozycję farmaceutyczną zawierającą treść wyekstrahowaną z tropikalnego morskiego bezkręgowca, Ecteinascidia turbinata, i określa ją jako ekteinascydyny oraz ujawnia zastosowanie takich kompozycji jako środków przeciwbakteryjnych, przeciwwirusowych i/lub przeciwnowotworowych, u ssaków.
Opis patentowy USA nr 5.089.273 ujawnia nowe kompozycje zawierające treść wyekstrahowaną z tropikalnego morskiego bezkręgowca, Ecteinaseidia turbinata, i określa ją jako ekteinascydyny 729, 743, 745, 759A, 759B i 770. Związki te są użyteczne jako środki przeciwbakteryjne i/lub przeciwnowotworowe u ssaków.
Opis patentowy USA 5.149.804 ujawnia ekteinascydyny 722 i 736 (Et 722 i 736) wyizolowane z karaibskiej osłonicy Eeteinaseidia turbinata oraz ich struktury. Et 722 i 736 chroni myszy w bardzo małych stężeniach in vivo przed chłoniakiem P388, czerniakiem B16 i rakiem płuc Lewisa.
Opis patentowy USA nr 5.478.932 ujawnia ekteinascydyny wyizolowane z karaibskiej osłonicy Ecteinascidia turbinata, które zapewniają in vivo ochronę przed heteroprzeszczepem chłoniaka P388, czerniaka B16, mięsaka jajnika M5076, raka płuc Lewisa oraz raka LX-1 ludzkich płuc i MX-1 ludzkiego sutka.
Opis patentowy USA nr 5.654.426 ujawnia kilka ekteinascydyn wyizolowanych z karaibskiej osłonicy Ecteinascidia turbinata, które zapewniają ochronę in vivo przed heteroprzeszczepem chłoniaka P388, czerniaka B16, mięsaka jajnika M5076, raka płuc Lewisa oraz raka LX-1 ludzkich płuc i MX-1 ludzkiego sutka.
Opis patentowy USA nr 5.721.362 ujawnia sposób syntezy prowadzący do otrzymania związków ekteinascydynowych oraz strukturalnie pokrewnych. Opis patentowy USA nr 6.124.292 ujawnia serię nowych związków zbliżonych do ekteinascydyn. WO 0177115, WO 0187894 i WO 0187895 ujawniają nowe związki syntetyczne z serii ekteinascydyn, ich syntezę oraz właściwości biologiczne.
Patrz również: Corey, E.J., J. Am. Chem. Soc., 1996, 118 str. 9202-9203; Rinehart i współpr., Journal of Natural Products, 1990, “Bioactive Compounds from Aquatic and Terrestrial Sources”, wol. 53, str. 771-792; Rinehart i współpr., Pure and Appl. Chem., 1990, “Biologically active natural products”, wol. 62, str. 1277-1280; Rinehart i współpr., J. Org. Chem., 1990, “Ecteinascidins 729, 743, 745, 759A, 759B, and 770: potent Antitumour Agents from the Caribbean Tunicate Ecteinascidia turninata”, wol. 55, str. 4512-4515; Wright i współpr., J. Org. Chem., 1990, “Antitumour Tetrahydroisoquinoline Alkaloids from the Colonial ascidian Ecteinascidia turbinata”, wol. 55, str. 4508-4512; Sakai i współpr., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1992, “Additional anitumor ecteinascidins from a Caribbean tunicate: Crystal structures and activities in vivo”, wol. 89, 11456-11460; Science 1994, “Chemical Prospectors Scour the Seas for Promising Drugs”, wol. 266, str, 1324; Koenig, K.E., “Asymmetric Synthesis”, wyd. Morrison, Academic Press, Inc., Orlando, FL, wol. 5, 1985, str. 71; Barton i współpr., J. Chem Soc. Perkin Trans., 1, 1982, “Synthesis and Properties of a Series of Sterically Hindered Guanidine bases”, str. 2085; Fukuyama i współpr., J. Am. Chem. Soc., 1982, “Stereocontrolled Total Synthesis of (+)Saframycin B”, wol. 104, str. 4957; Fukuyama i współpr., J. Am. Chem. Soc., 1990, “Total Synthesis of (+) - Saframycin A”, wol. 112, str. 3712; Saito i współpr., J. Org. Chem., 1989, “Synthesis of Saframycins. Preparation of a Key tricyclic Lactam Intermediate to Saframycin A”, wol. 54, 5391; Still i współpr., J Org. Chem., 1978, “Rapid Chromatographic Technique for Preparative Separations with Moderate Resolution”, wol. 43, str. 2923; Kofron, W.G.; Baclawski, L.M., J. Org. Chem., 1976, wol. 41, 1879; Guan i współpr., J. Biomolec. Struc. & Dynam., wol. 10, str. 793-817(1993); Shamma i współpr., “Carbon-13 NMR Shift Assignments of Amines and Alkaloids”, str. 206 (1979); Lown i współpr., Biochemistry, 21, 419-428(1982); Żmijewski i współpr., Chem. Biol. Interactions, 52, 361-375(1985); Ito, CRC Crit. Rev. Anal. Chem., 17, 65-143(1986); Rinehart i współpr., “Topics in Pharmaceutical Sciences 1989”, str. 613-626, D. D. Breimer, D. J. A. Cromwelin, K. K. Midha, wyd., Amsterdam Medical Press B. V., Noordwijk, The Netherlands (1989); Rinehart i współpr., “Biological Mass Spectrometry”,
PL 218 295 B1
233-258 wyd. Burlingame i współpr., Elsevier Amsterdam (1990); Guan i współpr., Jour. Biomolec. Struct. & Dynam., wol. 10 str. 793-817 (1993); Nakagawa i współpr., J. Amer. Chem. Soc., 111: 2721-2722 (1989); Lichter i współpr., “Food and Drugs from the Sea Proceedings” (1972), Marine Technology Society, Washington, D.C. 1973, 117-127; Sakai i współpr., J. Amer. Chem. Soc., 1996, 118, 9017; Garcia-Rocha i współpr., Brit. J. Cancer, 1996, 73: 875-883; oraz Pommier i współpr., Biochemistry, 1996, 35: 13303-13309.
W 2000 opublikowano półsyntetyczny sposób wytwarzania związków ekteinascydynowych i struktur pokrewnych, takich jak ftalascydyna, wychodząc z naturalnych alkaloidów bis(tetrahydroizochinolinowych), takich jak saframycyna i antybiotyki safracynowe dostępne z różnych bulionów hodowlanych; patrz Manzanares i współpr., Org. Lett., 2000, “Synthesis of Ecteinascidin Et-743 and Phthalascidin Pt-650 from Cyanosafracin B”, wol. 2, nr 16, str. 2545-2548; oraz międzynarodowe zgłoszenie patentowe WO 00 69862.
Ekteinascydyna 736 została odkryta 736 przez Rinehart'a i cechuje się obecnością jednostki tetrahydro-3-karbolinowej zamiast tetrahydroizochinolinowej zazwyczaj znajdującej się w związkach ekteinascydynowych izolowanych ze źródeł naturalnych. Patrz na przykład Sakai i współpr., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1992, “Additional antitumor ecteinascidins from a Caribbean tunicate: Crystal structures and activities in vivo”, wol. 89, 11456-11460.
Et-736
WO 9209607 zastrzega ekteinascydynę 736 jak również ekteinascydynę 772 z wodorem w miejscu metylu na azocie typowym dla pierścieni C i D ekteinascydyny 736 i O-metyloekteinascydynę 736 z metoksylem w miejscu hydroksylu w pierścieniu C ekteinascydyny 736.
Niezależnie od pozytywnych wyników uzyskanych w zastosowaniach klinicznych w chemioterapii, pozostaje otwarte pole do badań w dziedzinie związków ekteinascydynowych w zakresie identyfikacji nowych związków o optymalnych cechach cytotoksyczności i selektywności względem nowotworów oraz o zmniejszonej toksyczności ogólnoustrojowej i o ulepszonych właściwościach farmakokinetycznych.
Istota wynalazku
Niniejszy wynalazek jest nakierowany na związki o wzorze ogólnym I:
w którym grupa R1 jest wybrana z grupy obejmującej OH, OR', halogen oraz C1-C3 alkil, w którym R' oznacza C1-C3 alkil, który może być opcjonalnie podstawiony grupą fenylową;
w którym grupa R2 jest grupą o wzorze C(=O)R', w którym R' oznacza C1-C3 alkil;
w którym R3 oznacza H;
PL 218 295 B1 w którym R4 jest wybrana z grupy obejmującej H i C1-C3 alkil; w którym R5 jest wybrana z grupy obejmującej H i C1-C3 alkil; w którym X oznacza OH lub CN;
w którym m oznacza 0, lub 1; oraz w którym n oznacza 1.
W innym aspekcie, wynalazek dotyczy kompozycji farmaceutycznych zawierających substancję czynną wraz z farmaceutycznie dopuszczalnym rozcieńczalnikiem, gdzie jako substancję czynną kompozycja zawiera związek o wzorze I.
W innym aspekcie, wynalazek dotyczy zastosowania związków o ogólnym wzorze I do wytwarzania lekarstwa do leczenia raka.
Ujmując w jednej grupie, wynalazek dostarcza związki o wzorze I, w których:
R1 jest wybrane z grupy obejmującej OH, OR', halogen oraz C1-C3 alkil, gdzie R' oznacza C1-C3 alkil, który może być opcjonalnie podstawiony grupą fenylową;
R2 oznacza grupę o wzorze C(=O)R', gdzie R' oznacza C1-C3 alkil;
R3 oznacza H;
R4 jest wybrana z grupy obejmującej H i C1-C3 alkil;
R5 jest wybrana z grupy obejmującej H i C1-C3 alkil;
X oznacza OH lub CN; m oznacza 0, lub 1; oraz n oznacza 1.
Odpowiednie podstawniki halogenowe w związkach według niniejszego wynalazku obejmują F, Cl, Br i I.
Grupy alkilowe według wynalazku mają od 1 do 3 atomów węgla. Metyl, etyl i propyl łącznie z izopropylem są szczególnie korzystnymi grupami alkilowymi w związkach według niniejszego wynalazku. Używany niniejszym termin alkil, o ile nie zaznaczono inaczej, dotyczy zarówno cyklicznych jak i acyklicznych grup, aczkolwiek grupy cykliczne zawierają co najmniej trzy węglowe człony pierścienia.
Niniejszym odniesienie do podstawionych grup R' w związkach według niniejszego wynalazku dotyczy fragmentu alkilowego, który w grupach o wzorach OR' może być dodatkowo podstawiony w jednej lub większej liczbie dostępnych pozycji przez jedną lub większą liczbę odpowiednich grup, takich jak aryl karbocykliczny mający 6 lub więcej atomów węgla, zwłaszcza fenyl, zaś w grupach o wzorach C(=O)R' obejmuje C1 do C3 alkil.
Nie wyczerpując zakresu wynalazku, korzystne związki według niniejszego wynalazku są określone jednym lub większą liczbą poniższych znaczeń:
R1 oznacza korzystnie hydroksyl; halogen, zwłaszcza F, metyl, metoksyl lub benzyloksyl;
R2 oznacza grupę o wzorze C(=O)R', zwłaszcza acetyl;
R3 oznacza korzystnie H;
R4 oznacza korzystnie H lub metyl;
R5 oznacza korzystnie H lub metyl;
X oznacza korzystnie hydroksyl lub grupę cyjankową; m oznacza korzystnie 1, zaś n oznacza korzystnie 1.
Związki, w których R1 oznacza grupę obejmującą OH, OR', halogen oraz C1-C3 alkil, w którym R' oznacza C1-C3 alkil, który może być opcjonalnie podstawiony grupą fenylową; wodoru stanowią jedną klasę korzystnych związków. Patrz na przykład związki 27 do 36. Związki te mają wyższą czynność, szersze okno terapeutyczne i ulepszone właściwości farmakokinetyczne. Korzystnymi podstawnikami są metoksyl, metyl, hydroksyl, benzyloksyl, fluor.
Związki, w których R5 nie oznacza wodoru są kolejną klasą korzystnych związków. Patrz na przykład związki 37 do 44. Związki te mają tendencję do słabszej czynności (cytotoksyczności), ale mają niższą toksyczność i ulepszone parametry farmakokinetyczne. Jeśli R5 nie oznacza wodoru, to generowane jest centrum chiralne i odkryliśmy, że występują różnice w czynności pomiędzy diastereoizomerami.
Związki, w których R2 oznacza ester lub eter są również korzystnymi związkami. Ogólnie, mają ulepszone właściwości toksykologiczne, a zatem dają szersze okno terapeutyczne. Spośród nich najbardziej korzystne są związki z estrem lub węglanem w tej pozycji, a w szczególności węglany. Estry z rozbudowanymi grupami (długie reszty alifatyczne lub aromatyczne) dają lepsze rezultaty. Pośród
PL 218 295 B1 węglanów, najbardziej korzystnymi podstawnikami dla tych pozycji są tert-butoksykarbonyl (tBOC) i winyloksykarbonyl (VOC).
Występują związki, które mają dobre właściwości ADME (absorpcji-dystrybucji-metabolizmu-wydalania), które są dobrym wskaźnikiem farmakokinetyki.
Jak wspomniano powyżej, związki według niniejszego wynalazku, korzystnie te z rozbudowanymi grupami podstawników, mają dobre okno terapeutyczne i estryfikacja fenoli różnymi kwasami i węglanami prowadzi do ogólnego zwiększenia właściwości farmaceutycznych: następuje znaczące zmniejszenie toksyczności wątrobowej i dobry profil interakcji Iekowo-Iekowych, ponieważ te pochodne nie wykazują inhibitowania cytochromu mając ponadto wyższą stabilność metaboliczną.
Otrzymano szereg związków przeciwnowotworowych i uważa się, że znacznie więcej związków można wytworzyć zgodnie z rozwiązaniem według niniejszego wynalazku.
Czynności przeciwnowotworowe tych związków obejmują leukemie, raka płuc, raka okrężnicy, raka nerki, raka prostaty, raka jajnika, raka piersi, mięsaki i czerniaki.
Inna szczególnie korzystna realizacja według niniejszego wynalazku dotyczy kompozycji farmaceutycznych użytecznych jako środki przeciwnowotworowe, które zawierają jako składnik czynny związek lub związki według wynalazku, jak również sposobów przygotowania tych kompozycji.
Przykłady kompozycji farmaceutycznych obejmują jakiekolwiek stałe (tabletki, pigułki, kapsułki, granulaty itd.) Iub ciekłe (roztwory, zawiesiny lub emulsje) z odpowiednimi kompozycjami do podawania doustnego, miejscowego lub pozajelitowego.
Podawanie związków lub kompozycji według niniejszego wynalazku może następować dowolnym sposobem, takim jak infuzja dożylna, w preparacie doustnym, poprzez podawanie dootrzewnowe i dożylne.
Związki i kompozycje według niniejszego wynalazku mogą być stosowane z innymi lekami zapewniając terapię skojarzoną. Inne leki mogą stanowić część tej samej kompozycji lub być dostarczone w odrębnej kompozycji do podawania w tym samym czasie lub w innym czasie. Rodzaj tego innego leku nie szczególnie ograniczony, a odpowiednimi kandydatami są:
a) leki o działaniu antymitotycznym, zwłaszcza te, które są adresowane do elementów cytoszkieletowych, a tym modulatorów mikrotubuli, takie jak leki taksanowe (takie jak taksol, paklitaksel, taksoter, docetaksel), podofilotoksyny lub alkaloidy barwinka (winkrystyna, winblastyna);
b) leki antymetabolitowe, takie jak 5-fluorouracyl, cytarabina, gemcytabina, analogi purynowe (takie jak pentostatyna, metotreksat);
c) środki alkilujące, takie jak iperyty azotowe (takie jak cyklofosfamid lub ifosfamid);
d) leki adresowane do DNA, takie jak leki antracyklinowe, adriamycyna, doksorubicyna, farmorubicyna lub epirubicyna;
e) leki adresowane do topoizomeraz, takie jak etopozyd;
f) hormony oraz agoniści lub antagoniści hormonów, takie jak estrogeny, antyestrogeny (tamoksyfen i związki pokrewne) oraz androgeny, flutamid, leuprorelina, goserelina, cyprotron lub oktreotyd;
g) leki, które są adresowane do transdukcji sygnałowej komórek nowotworowych, a w tym pochodne przeciwciał, takie jak herceptyna;
h) środki alkilujące, takie jak leki platyny (cis-platyna, karboplatyna, oksaliplatyna, paraplatyna) lub nitrozomoczniki;
i) leki potencjalnie oddziaływujące na przerzuty nowotworowe, takie jak inhibitory metaloproteaz substancji międzykomórkowej;
j) środki terapii genowej i antysensowej;
k) terapeutyki z przeciwciałami;
I) inne związki bioaktywne pochodzenia morskiego, zwłaszcza didemniny, takie jak aplidyna;
m) analogi steroidowe, zwłaszcza deksametazon;
n) leki przeciwzapalne, zwłaszcza deksametazon; oraz
o) środki przeciwwymiotne, zwłaszcza deksametazon.
Jeszcze inną szczególnie korzystną realizację według niniejszego wynalazku stanowią półprodukty syntetyczne związków według niniejszego wynalazku, szczegółowo przedstawione poniżej.
Na koniec niniejszy wynalazek obejmuje sposoby syntetyczne, niżej przedstawione.
Szczegółowy opis korzystnych realizacji
Korzystne związki według niniejszego wynalazku obejmują następujące związki:
PL 218 295 B1
PL 218 295 B1
PL 218 295 B1
HO
Przykłady grup zabezpieczających grupę aminową i inne podstawniki są podane w WO 0069862, na który opis powołujemy się.
Niniejsze zgłoszenie zastrzega pierwszeństwo z brytyjskiego zgłoszenia patentowego. Powołujemy się na wszelkie ujawnienia powołane w opisie brytyjskiego zgłoszenia z pierwszeństwem, a które nie znalazły się w niniejszym zgłoszeniu.
Ponadto powołujemy się na każdy spośród WO 0069862, WO 0177115, WO 0187894 i WO 0187895 co do omówienia podstawników, odpowiadających podstawnikom według niniejszego wynalazku. Jakiekolwiek określenia podane w tych uprzednich zgłoszeniach co do szczególnego podstawnika mogą być zaadaptowane dla podstawnika w związku według niniejszego wynalazku.
Ponadto, nie zastrzegamy jakiegokolwiek ze związków ujawnionych w uprzednich zgłoszeniach, a w tym WO 9209607, i wyraźnie wykluczamy jakiekolwiek takie związki. Powołujemy się na każde z uprzednich zgłoszeń co do wyrażenia jakiegokolwiek wykluczenia, które może być konieczne.
W międzynarodowym zgłoszeniu patentowym WO 0069862 ujawniono związek 36 (półprodukt do przekształcenia cyjanosafracyny B w ekteinascydynę 743).
Ten półsyntetyczny półprodukt służy jako materiał wyjściowy do syntezy ekteinascydyny 736, kolejnego członka rodziny naturalnie występujących ekteinascydyn o potencjalnej terapeutycznej czynności przeciwnowotworowej.
Korzystny sposób wytwarzania ekteinascydyny 736 i związków pokrewnych z różnymi podstawnikami w jednostce tetrahydro-e-karboliny i w pozycji 18(-OR4) przedstawiono poniżej, na następującym schemacie reakcji
Schemat 1
PL 218 295 B1
Jak zilustrowano na schemacie 1, półprodukt 36 można przekształcić w ET-736 (lub pochodną z innym podstawnikiem) w dwóch etapach.
Pierwszym etapem wytwarzania korzystnych związków typu I według niniejszego wynalazku ze związku 36 jest wprowadzenie jednostki tetrahydro-p-karboliny w reakcji z odpowiednią aminą pierwszo- lub drugorzędową.
Drugi etap polega na przekształceniu grupy CN w grupę OH w reakcji z azotanem srebra w ACN/H2O.
Możliwe jest również otrzymanie nowych pochodnych z różnymi grupami podstawiającymi (-OR4, pozycja 18 i =NR5) poprzez reakcje acylowania lub alkilowania z korzystnych związków I. We wszystkich tych przypadkach R1 i R2 w materiale wyjściowym oznacza atom wodoru.
Z tego samego półproduktu i drogą reakcji alkilowania bromkiem allilu lub reakcji acylowania z chloromrówczanem winylu można otrzymać N i O allilowane oraz N i O winylowane pochodne. Wszystkie te związki w reakcji z azotanem srebra prowadzą do finalnych produktów, gdzie grupa CN zostaje przekształcona w grupę OH.
Specjalista w dziedzinie łatwo dostrzeże, że przedstawiony schemat reakcji może być modyfikowany z użyciem szerokiej gamy podstawionych amin pierwszorzędowych z wytworzeniem serii podstawionych pochodnych ekteinascydyny 736 i związki wytworzone w ten sposób winny być uważane za stanowiące część niniejszego wynalazku.
W szczególności warunki reakcji mogą być modyfikowane, aby dopasować do innych kombinacji grup podstawników w jednostce tetrahydro-p-karboliny.
Korzystny sposób wytwarzania ekteinascydyny 694 i związków pokrewnych z różnymi podstawnikami w pozycji 5 i 18(-OR6 i -OR7) przedstawiono poniżej na następującym schemacie reakcji.
Et-736 Et-694
Na schemacie 2 hydroliza grupy acetylowej w C-5 w warunkach zasadowych umożliwia otrzymanie półproduktu z grupą hydroksylową w tej pozycji. Z tego związku drogą reakcji acylowania bezwodnikami, chlorkami kwasowymi lub kwasami karboksylowymi otrzymuje się nowe pochodne monoO-podstawione oraz mono i di-O-podstawione (w C-5 i C18). Reakcję przekształcenia grupy CN w OH przeprowadza się w klasycznych warunkach (azotan srebra w CH3CN/H2O). Z drugiej strony, Et-694 można otrzymać z Et-736 drogą hydrolizy grupy acetylowej w C-5 za pomocą KOH/MeOH.
Specjalista w dziedzinie łatwo dostrzeże, że przedstawiony schemat reakcji może być modyfikowany przy użyciu szerokiej gamy podstawionych amin pierwszorzędowych z wytworzeniem serii podstawionych pochodnych ekteinascydynowych 736-CN.
W szczególności warunki reakcji mogą być modyfikowane, aby dopasować do innych kombinacji grup podstawników w jednostce tetrahydro-p-karboliny w pozycjach C-5 i C-18.
Niniejszy wynalazek jest dalej zilustrowany w odniesieniu do poniższych przykładów, które ułatwiają zrozumienie wynalazku.
PL 218 295 B1
Część eksperymentalna
Schemat 1
Metoda 1. Do roztworu 1 równoważnika materiału wyjściowego w kwasie octowym (5,33 E-5M) pod argonem w temperaturze pokojowej dodaje się 3,5 równoważnika tryptaminy. Mieszaninę reakcyjną miesza się przez 24 godziny, a następnie odparowuje kwas octowy. Dodaje się wodny nasycony roztwór NaHCO3 i mieszaninę ekstrahuje CH2CI2, i warstwy organiczne suszy Na2SO4. Chromatografia typu flash dostarcza czyste związki.
Metoda 2. Do roztworu 1 równoważnika związku 1 w CH2CI2 (0,032M) pod argonem w temperaturze pokojowej dodaje się 2 równoważniki Et3N i 2 równoważniki chlorku butyrylu lub bezwodnika Boc (3 równoważniki) lub chloromrówczan winylu. Reakcję śledzi się za pomocą TLC i zadaje wodnym nasyconym roztworem NaHCO3, ekstrahuje CH2CI2, i warstwy organiczne suszy Na2SO4. Chromatografia typu flash dostarcza czyste związki.
Metoda 3. Do roztworu 1 równoważnika związku 1 w DMF (0,032M) pod argonem w temperaturze pokojowej dodaje się 3 równoważniki Cs2CO3 i 3 równoważniki bromku allilu. Reakcję śledzi się za pomocą TLC i zadaje wodnym nasyconym roztworem NaHCO3, ekstrahuje CH2CI2, i warstwy organiczne suszy Na2SO4. Chromatografia typu flash dostarcza mieszaninę dwóch czystych związków: związku 24 (Et-736-CN-AII) i związku 25 (Et-736-CN-diAII).
Metoda 4. Do roztworu 1 równoważnika materiału wyjściowego w CH3CN/H2O 3:2 (0,009M) dodaje się 30 równoważników AgNO3. Po 24 godzinach reakcje zadaje się mieszaniną 1:1 nasyconych roztworów solanki i NaHCO3, miesza przez 10 minut i rozcieńcza i ekstrahuje CH2CI2. Warstwę organiczną suszy się Na2SO4. Chromatografia dostarcza czyste związki.
Metoda 1:
Związek 1: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,74(S, 1H); 7,38(d, 1H); 7,25(d, 1H); 7,08(t, 1H) 7,00(t, 1H); 6,66(s, 1H); 6,22(d, 1H); 6,02(d, 1H) 5,79(s, 1H); 5,08(d, 1H); 4,55(s, 1H); 4,32(s, 1H) 4,27(d, 1H); 4,21(s, 1H); 4,19(d, 1H); 3,81(s, 3H); 3,44-3,40(m, 2H); 3,18-2,78(m, 4H); 2,71-2,51 (m, 3H); 2,37(s, 3H); 2,26(s, 3H); 2,21(s, 3H); 2,06(s, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 171,7, 168,9, 148,2, 145,9, 143,2, 141,3, 140,5, 135,7, 130,8, 130,6, 129,5, 127,0, 122,2, 120,9, 120,8, 119,5, 118,6, 118,4, 113,8, 111,1, 110,5, 102,2, 62,5, 61,5, 60,8, 60,5, 59,7, 55,9, 54,8, 42,1, 41,7, 40,0, 39,5, 29,9, 24,0, 21,7, 20,8, 16,1,9,9.
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H41N5O8S: 763,3; znaleziono (M+H+): 764,2.
MeO
Związek 2: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,64(s, 1H); 7,12(d, 1H); 6,81(d, 1H); 6,73(dd, 1H);
6,65(s, 1H) 6,19(s, 1H); 6,00(s, 1H); 5,79(s, 1H); 5,0(d, 1H); 4,54(s, 1H); 4,30(s, 1H); 4,27(d, 1H);
4,20(s, 1H); 4,18(d, 1H); 3,80(s, 3H); 3,78(s, 3H); 3,43-3,40(m, 2H); 3,18-2,77(m, 4H); 2,66-2,49 (m, 3H); 2,37(s, 3H); 2,34-2,20(m, 1H); 2,26(s, 3H); 2,21 (s, 3H); 2,05(s, 3H).
PL 218 295 B1 13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 171.4, 168,6, 153,7, 148,0, 145,6, 142,9, 141,0, 140,2, 131,1,
130,6, 130.5, 129,2, 127,0, 120,6, 120,5, 118,2, 113,6, 111,9, 111,6, 110,0, 102,0, 100,3, 62,3, 61,2, 60,5, 60,2, 59,4, 55,7, 54,6, 54,5, 41,8, 41,4, 39,7, 39,2, 31,5, 29,6, 23,8, 22,6, 21,5, 20,5, 15,8, 14,4, 9,7. ESI-MS m/z: obliczono dla C42H43N5O9S: 793,3; znaleziono (M+H+): 794,7.
Związek 3: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,85(s, 1H); 7,45-7,36(m, 5H); 7,01(t, 1H); 6,91(t, 1H); 6,65-6,63(m, 2H); 5,87(s, 1H); 5,77(s, 1H); 5,63(s, 1H); 5,13(s, 2H); 5,05(d, 1H); 4,53(s, 1H); 4,27-4,19(m, 4H); 3,80(s, 3H); 3,46-3,39(m 2H); 3,06-2,79(m, 4H); 2,68-2,50(m 2H); 2,42-2,20(m, 1H); 2,36 (s, 3H); 2,27(s, 3H); 2,20(s, 3H); 2,03(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C48H47N5O9S: 869,3; znaleziono (M+H+): 870,3.
BnO
Związek 4: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,36(s, 1H); 7,44-7,25(m 5H); 7,13(d, 1H); 6,91(d, 1H) 6,82(dd, 1H); 6,65(s, 1H); 6,21(d, 1H); 6,01(d, 1H); 5,80(s, 1H); 5,08(d, 1H); 5,03(s, 2H); 4,55(s, 1H); 4,31(s, 1H); 4,27(d, 1H); 4,20-4,10(m, 3H); 3,81(s, 3H); 3,44-3,40(m 2H); 3,18-2,77(m, 4H); 2,60-2,46(m, 2H); 2,37(s, 3H); 2,35-2,19(m, 1H); 2,26(s, 3H); 2,21(s, 3H); 2,06(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C48H47N5O9S: 869,3; znaleziono (M+H+): 870,3.
Me
Związek 5: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,63(s, 1H); 7,15-7,11(m, 2H); 6,91 (dd, 1H); 6,65 (s, 1H); 6,21(d, 1H); 6,01(s, 1H); 5,78(s, 1H); 5,07(d, 1H); 4,54(s, 1H); 4,31(s, 1H); 4,27(d, 1H); 4,21-4,16(m, 2H); 3,81(s, 3H); 3,44-3,40(m, 2H); 3,17-2,77(m, 4H); 2,66-2,46(m, 3H); 2,31(s, 6H); 2,26(s, 3H);
2,21(s, 3H); 2,06(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H43N5O8S: 777,3; znaleziono (M+Na+): 800,7.
PL 218 295 B1
HO
Związek 6: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,66(s, 1H); 6,95(d, 1H); 6,64(s, 2H); 6,56(dd, 1H); 6,15(s, 1H); 5,97(s, 1H); 5,81(s, 1H); 5,06(d, 1H); 4,53(s, 1H); 4,29(s, 1H); 4,26(d, 1H); 4,19(s, 1H); 4,17(d, 1H); 3,80(s, 3H); 4,41-3,39(m, 2H); 3,12-2,73(m, 4H); 2,55-2,27(m, 3H); 2,36(s, 3H); 2,25 (s, 3H); 2,20(s, 3H); 2,04(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H41N5O9S: 779,3; znaleziono (M+H+): 780,3.
Związek 7: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3) NH δ 7,75(s, 1H); 7,26(dd, 1H); 6,93(dd, 1H) 6,76(ddd, 1H); 6,65(s, 1H); 6,22(d, 1H); 6,01(d, 1H); 5,79(s, 1H); 5,08(d, 1H); 4,55(s, 1H); 4,31(s, 1H); 4,25(d, 1H); 4,20(s, 1H) 4,18(dd, 1H); 3,80(s, 3H); 3,43-3,40(m, 2H) 3,18-2,77(m, 4H); 2,64-2,50(m, 3H); 2,36(s, 3H); 2,26(s, 3H); 2,21 (s, 3H); 2,06(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H40FN5O8S: 781,3; znaleziono (M+H+): 782,3.
HO
Związek 8: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,93(d, 1H); 6,80(s, 1H); 6,73(s, 1H); 6,67(dd, 1H); 6,46(s, 1H); 6,20(s, 1H); 6,06(s, 1H); 5,72(s, 1H); 4,96(d, 1H); 4,45(s, 1H); 4,37(d, 1H); 4,25(d, 1H); 4,05-4,01(m, 2H); 3,79(s, 3H); 3,63(d, 1H); 3,39(d, 1H); 3,03-3,91(m, 2H); 2,76-2,34(m, 5H); 3,30(s, 3H); 2,28(s, 3H); 2,21(s, 3H); 2,18(s, 3H); 2,04(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H43N5O9S: 793,3; znaleziono (M+H+): 794,3.
PL 218 295 B1
Związek 9: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,63(s, 1H); 7,24(d, 1H); 6,75(d, 1H); 6,66(dd, 1H);
6,65(s, 1H); 6,20(s, 1H) 6,00(s, 1H); 5,79(s, 1H); 5,07(d, 1H) 4,54(s, 1H); 4,31(s, 1H); 4,27(d, 1H)
4,20(d, 1H); 4,17(dd, 1H); 3,80(s, 3H) 3,71(s, 3H); 3,43-3,40(m, 2H); 3,16-2,78(m, 4H); 2,64-2,49 (m, 3H); 2,36(s, 3H); 2,25(s, 3H); 2,21 (s, 3H); 2,06(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H43N5O9S: 793,3; znaleziono (M+H+): 794,3.
Związek 10: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,76(s, 1H); 7,14(dd, 1H); 7,00(dd, 1H); 6,81(ddd, 1H); 6,65(s, 1H); 6,21(d, 1H); 6,00(d, 1H); 5,79(s, 1H); 5,07(d, 1H); 4,55(s, 1H); 4,31(s, 1H); 4,27(dd, 1H); 4,20(d, 1H); 4,18(dd, 1H); 3,80(s, 3H); 3,44-3,40(m, 2H); 3,16-2,77(m, 4H); 2,64-2,44(m, 3H); 2,37 (s, 3H); 2,26(s, 3H); 2,21(s, 3H); 2,05(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H40FN5O8S: 781,3; znaleziono (M+H+): 782,1.
Związek 11: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3), δ 7,48(s, 1H); 7,22(d, 1H); 6,96-6,88(m, 2H) 6,65(s, 1H); 6,15(d, 1H); 6,04(d, 1H); 5,78(s, 1H); 5,09(d, 1H); 4,55(s, 1H) 4,28-4,20(m, 3H); 3,81(s, 3H) 3,42(d, 1H); 3,12-2,78(m, 4H); 2,69-2,43(m, 3H); 2,37(s, 3H); 2,36(s, 3H); 2,28(s, 3H); 2,21(s, 3H); 2,06(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H43N5O8S: 777,3; znaleziono (M+H+): 778,3.
HO
Związek 12 (pierwszy izomer): 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,68(s, 1H); 7,05(d, 1H); 6,63-6,57(m, 3H); 6,22(d, 1H); 6,02(d, 1H); 5,73(S, 1H); 5,12(d, 1H); 4,58(s, 1H); 4,36(s, 1H); 4,34-4,22(m, 3H);
3,80(s, 3H); 3,47-3,42(m, 2H); 3,05-2,86(m, 2H); 2,67-2,35(m, 2H); 2,32-2,05(m, 3H); 2,31(s, 3H);
2,28(s, 3H); 2,15(s, 3H); 2,03(s, 3H); 1,07(d, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H43N5O9S: 793,2; znaleziono (M+H+): 794,2.
PL 218 295 B1
Związek 13 (drugi izomer): 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,54(s, 1H); 7,08(d, 1H); 6,73(d, 1H);
6,63(dd, 1H); 6,57(s, 1H); 6,20(d, 1H); 6,00(d, 1H); 5,74(s, 1H); 5,02(d, 1H); 4,60(s, 1H); 4,33(s, 1H);
4,27(d, 1H); 4,22(d, 1H); 4,12(dd, 1H); 3,80(s, 3H); 3,44-3,32(m, 3H); 3,05-2,89(m, 2H); 2,49-2,03 (m, 4H); 2,32(s, 3H); 2,24(s, 3H); 2,18(s, 3H); 2,07(s, 3H); 1,21(d, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H43N5O9S: 793,2; znaleziono (M+H+): 794,2.
Związek 14 (pierwszy izomer): 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,98(s, 1H); 7,40(dd, 1H); 6,18(t, 1H); 7,04(t, 1H); 6,82(s, 1H); 6,16(d, 1H); 6,01(d, 1H); 5,74(s, 1H); 4,95(d, 1H); 4,64(s, 1H); 4,40(s, 1H); 4,30-4,24(m, 3H); 3,62(s, 3H); 3,56(d, 1H); 3,50(d, 1H); 3,12-2,89(m, 4H); 2,75-2,51(m, 3H); 2,43 (s, 3H); 2,38-2,30(m, 2H); 2,26(s, 3H); 2,19(s, 3H); 2,08(s, 3H); 2,00(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H43N5O8S: 777,2; znaleziono (M+H+): 778,2.
Związek 15 (drugi izomer): 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,36(d, 1H); 7,15-7,06(m, 2H); 7,01 (ddd, 1H); 6,93(s, 1H); 6,47(s, 1H); 6,22(d, 1H); 6,09(d, 1H); 5,72(s, 1H); 4,97(d, 1H); 4,46(s, 1H); 4,40(d, 1H); 4,26(dd, 1H); 4,03(dd, 1H); 4,02(s, 1H); 3,80(s, 3H); 3,63(d, 1H); 3,39(d, 1H); 3,00-2,92(m, 2H); 277-2,54(m, 4H); 2,30(s, 3H); 2,26-2,25(m, 2H); 2,23(s, 6H); 2,19(s, 3H); 2,05(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H43N5O8S: 777,2; znaleziono (M+H+): 778,2.
Związek 16 (pierwszy izomer): 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,82(s, 1H); 7,14(dd, 1H); 6,96(dd, 1H); 6,82(ddd, 1H); 6,61(s, 1H); 6,23(d, 1H); 6,02(d, 1H); 5,72(s, 1H); 5,12(d, 1H); 4,59(s, 1H); 4,37 (s, 1H); 4,32-4,25(m, 3H); 3,80(s, 3H); 3,48-3,43(m, 2H); 3,05-2,86(m, 4H); 2,78-2,70(m, 1H); 2,602,34-(m, 3H); 2,31 (s, 3H); 2,27(s, 3H); 2,16(s, 3H); 2,03(s, 3H); 1,12(d, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H42FN5O8S: 795,3; znaleziono (M+H+): 796,2.
Związek 17 (drugi izomer): 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,65(s, 1H); 7,18(dd, 1H); 6,99(dd, 1H); 6,83(ddd, 1H); 6,58(s, 1H); 6,22(d, 1H); 6,01(d, 1H); 5,74(s, 1H); 5,03(d, 1H); 4,61(s, 1H); 4,34(s, 1H); 4,27(d, 1H); 4,22(d, 1H); 4,14-4,10(m, 1H); 3,80(s, 3H); 3,44(d, 2H); 3,38-3,30(m, 1H); 3,06-2,99(m, 2H); 2,50(dd, 1H); 2,43(d, 1H); 2,32(s, 3H); 2,24(s, 3H); 2,18(s, 3H); 2,16-2,11(m, 2H); 2,08(s, 3H); 1,20 (d, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H42FN5O8S: 795,3; znaleziono (M+H+): 796,2.
PL 218 295 B1
Związek 18 (pierwszy izomer): 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,83(s, 1H); 7,34(d, 1H); 7,24(d, 1H);
7,09(ddd, 1H); 7,00(ddd, 1H); 6,62(s, 1H); 6,24(d, 1H); 6,03(d, 1H); 5,73(s, 1H); 5,13(d, 1H); 4,59 (s, 1H); 4,38(s, 1H); 4,33-4,27(m, 3H); 3,80(s, 3H); 3,48-3,43(m, 2H); 3,06-2,87(m, 2H); 2,78-2,72 (m, 1H); 2,61-2,24(m, 4H); 2,32(s, 3H); 2,27(s, 3H); 2,16(s, 3H); 2,03(s, 3H); 1,13(d, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H43N5O8S: 777,2; znaleziono (M+H+): 778,2.
Związek 19 (drugi izomer): 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,66(s, 1H); 7,37(d, 1H); 7,28(d, 1H); 7,10(ddd, 1H); 7,00(ddd, 1H); 6,58(s, 1H); 6,24(d, 1H); 6,02(d, 1H); 5,75(s, 1H); 5,03(d, 1H); 4,61(s, 1H); 4,35(s, 1H); 4,28(dd, 1H); 4,23(d, 1H); 4,15-4,08(m, 1H); 3,81(s, 3H); 3,44(d, 2H); 3,38-3,32(m, 1H); 3,07-2,90(m, 2H); 2,58(dd, 1H); 2,45(d, 1H); 2,33(s, 3H); 2,27-2,12(m, 2H); 2,24(s, 3H); 2,19(s, 3H); 2,08(s, 3H); 1,20(d, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H43N5O8S: 777,2; znaleziono (M+H+): 778,2.
Metoda 2:
Związek 20: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,70(s, 1H); 7,38(d, 1H); 7,25(d, 1H); 7,10(ddd, 1H); 7,02(ddd, 1H); 7,01(s, 1H); 6,24(d, 1H); 6,03(d, 1H); 5,09(d, 1H); 4,44(s, 1H); 4,33(s, 1H); 4,22-4,18(m, 2H) 3,81(d, 1H); 3,77(s, 3H); 3,48-3,44(m, 2H); 3,19-2,81(m, 4H); 2,70-2,48(m, 3H); 2,62(t, 2H); 2,37(s, 3H); 2,34-2,15(m, 2H); 2,29(s, 3H); 2,18(s, 3H); 2,04(s, 3H); 1,95-1,82(m, 2H); 1,10(t, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C45H47N5O8S: 833,3; znaleziono (M+H+): 834,2.
Związek 21: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,70(s, 1H); 7,38(d, 1H); 7,24(d, 1H); 7,09(ddd, 1H); 7,00(ddd, 1H); 6,99(s, 1H); 6,22(d, 1H); 6,02(d, 1H); 5,08(d, 1H); 4,48(s, 1H); 4,32(s, 1H); 4,25-4,21 (m, 2H) 3,81(s, 3H); 3,46-3,44(m, 2H); 3,18-2,79(m, 4H); 2,72-2,43(m, 3H); 2,36(s, 3H); 2,31(s, 3H); 2,20(s, 3H); 2,08(s, 3H); 1,54(s, 9H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C46H49N5O10S: 863,3; znaleziono (M+H+): 864,2.
Związek 22: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,70(s, 1H); 7,38(d, 1H); 7,26-6,99(m, 5H); 6,24(d, 1H); 6,03(d, 1H); 5,09(d, 1H); 5,00(dd, 1H); 4,71(dd, 1H); 4,48(s, 1H); 4,33(s, 1H); 4,24-4,21(m, 2H) 3,95 (d, 1H); 3,81(s, 3H); 3,48-3,45(m, 2H); 3,18-2,81(m, 4H); 2,72-2,45(m, 3H); 2,38(s, 3H); 2,34(s, 3H); 2,30-2,11(m, 2H); 2,20(s, 3H); 2,08(s, 3H).
PL 218 295 B1
ESI-MS m/z: obliczono dla C44H43N5O10S: 833,3; znaleziono (M+H+): 834,2.
Związek 23: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,38(d, 1H); 7,20-7,13(m, 3H); 7,07-6,98(m, 2H); 6,88(s, 1H); 6,66(s, 1H); 6,18(d, 1H); 6,12(d, 1H); 4,95(dd, 1H); 4,79(d, 1H); 4,78(dd, 1H); 4,68(dd, 1H); 4,46(dd, 1H); 4,40(d, 1H); 4,34-4,18(m, 3H) 3,97(d, 1H); 3,89(d, 1H); 3,85(s, 3H); 3,61(d, 1H); 3,41 (d, 1H); 3,17-2,98(m, 3H); 2,76-2,42(m, 4H); 2,37(s, 3H); 2,32(s, 3H); 2,18(s, 3H); 2,13(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C47H45N5O12S: 903,2; znaleziono (M+H+): 926,1.
Metoda 3:
Związek 24: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,71 (s, 1H); 7,38(d, 1H); 7,24(d, 1H); 7,09(ddd, 1H); 7,00(ddd, 1H); 6,86(8, 1H); 6,22(d, 1H) 6,16-6,04(m, 1H); 6,02(d, 1H); 5,47(dd, 1H) 5,26(dd, 1H); 5,09(d, 1H); 4,83(dd, 1H); 4,52(s 1H); 4,36(dd, 1H); 4,32(s, 1H); 4,24-4,19(m, 3H) 3,84(s, 3H); 3,45-3,41 (m, 2H); 3,18-2,79(m, 4H); 2,73-2,47(m, 3H) 2,33(s, 3H); 2,31-2,26(m, 1H); 2,24(s, 3H); 2,21(s, 3H); 2,06(s, 3H) 2,03(d, 1H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C44H45N5O8S: 803,3; znaleziono (M+H+): 804,3
Związek 25: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,39(d, 1H); 7,25-7,23(m, 1H); 7,09-6,98(m, 3H); 6,80(s, 1H); 6,14-6,00(m, 1H); 6,10(d, 1H); 6,02(d, 1H); 5,60-5,40(m, 1H); 5,45(dd, 1H) 5,25(dd, 1H); 5,02-4,95(m, 2H); 4,81 (dd, 1H) 4,73-4,62(m, 1H); 4,55(s, 1H); 4,37-4,16(m, 6H) 3,84(s, 3H); 3,51(d, 1H); 3,45-3,38(m, 2H); 3,05-2,89(m, 3H); 2,70-2,50(m, 3H); 2,33-2,16(m, 2H); 2,31(s, 3H); 2,23(s, 3H); 2,21(s, 3H); 2,03(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C47H49N5O8S: 843,3; znaleziono (M+H+): 844,2
Metoda 4:
PL 218 295 B1
Związek 26: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,70(8, 1H); 7,38(d, 1H); 7,24(d, 1H); 7,08(t, 1H);
7,00(t, 1H); 6,67(s, 1H); 6,20(d, 1H); 5,99(d, 1H); 5,74(s, 1H); 5,20(d, 1H); 4,82(s, 1H); 4,34-4,38(m, 3H);
4,16-4,10(m, 2H); 3,81(s, 3H); 3,49(d, 1H); 3,22-3,13(m, 2H); 3,00(d, 1H); 2,88-2,79(m, 2H); 2,712,52(m, 3H); 2,37(s, 3H); 2,28-2,24(m, 1H); 2,25(s, 3H);2,19(s, 3H); 2,05(s, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 171,4, 168,7, 147,8, 145,4, 142,8, 141,0, 140,6, 135,4, 131,2,
130,9, 129,0, 126,8, 121,8, 121,3, 120,9, 119,1, 118,3, 118,1, 115,5, 112,8, 110,8, 110,1, 101,7, 81,9,
62,3, 61,8, 60,2,57,6, 57,4, 55,8, 54,9, 42,1, 41,2, 39,7, 39,2, 31,5, 23,5, 22,6, 21,5, 20,5, 15,8, 14,0, 9,6.
ESI-MS m/z: obliczono dla C40H42N4O9S: 754,3; znaleziono (M- H2O+H+): 737,2.
MeO
Związek 27: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,59(s, 1H); 7,13(d, 1H); 6,81(s, 1H); 6,73(dd, 1H); 6,67(s, 1H); 6,19(d, 1H); 5,99(d, 1H); 5,74(s, 1H); 5,19(d, 1H); 4,82(s, 1H); 4,49-4,47(m, 2H); 4,16-4,09(m, 2H); 3,81(s, 3H); 3,79(s, 3H); 3,50-3,45(m, 2H); 3,24-3,13(m, 2H); 3,02(d, 1H); 2,88-2,79(m, 2H); 2,67-2,48(m, 3H); 2,37(s, 3H); 2,30-2,24(m, 1H); 2,25(s, 3H); 2,19(s, 3H); 2,04(s, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 171,6, 154,0, 148,1, 145,6, 143,1, 141,3, 140,9, 131,9, 131,4,
130,8, 129,3, 127,4, 121,5, 121,2, 115,7, 113.1, 112,1, 111,8, 110,1, 102,0, 100,6, 82,1, 62,6, 62,0,
60,5, 57,9, 57,6, 56,1, 56,0, 55,2, 42,4, 41,5, 40,0, 39,4, 31,8, 29,9, 23,8, 22,8, 21,8, 20,8, 16,0,
14,6,9,9.
ESI-MS m/z: obliczono dla C40H42N4O9S: 784,4; znaleziono (M-H2O+H+): 767,2.
Związek 28: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,81(s, 1H); 7,43-7,36(m, 5H); 7,01 (d, 1H); 6,91(t, 1H); 6,66(s, 1H); 6,63(d, 1H); 5,84(8, 1H); 5,75(s, 1H); 5,60(s, 1H); 5,20-5,09(m, 3H); 4,78(s, 1H); 4,49(d, 1H); 4,44(s, 1H); 4,16(s, 1H); 4,14-4,12(m, 1H); 3,81(s, 3H); 3,52(d, 1H); 3,47(s, 2H); 3,22-2,80(m, 5H); 2,68-2,51(m, 2H); 2,36(s, 3H); 2,39-2,21(m, 1H); 2,27(s, 3H); 2,18(s, 3H); 2,02(s, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 171,4, 148,0, 145,6, 145,2, 143,1, 141,1, 140,8, 137,3, 131,6,
130,7, 129,3, 128,8, 128,5, 128,2, 128,0, 126.2, 121,4, 121,3, 119,8, 118,1, 115,5, 113,0, 111,8, 111,0, 103,8, 101,8, 82,1, 70,6, 62,9, 61,9, 60,5, 58,0, 57,7, 56,1, 55,1, 42,3, 41,5, 40,0, 39,5, 29,9,
23,9, 22,0, 20,7, 16,0, 9,8.
ESI-MS m/z: obliczono dla C47H48N4O10S: 860,3; znaleziono (M-H2O+H+): 843,3.
ΒπΟ
\-0 OH
PL 218 295 B1
Związek 29: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3) δ 7,59(s, 1H); 7,44-7,25(m, 5H); 7,13(d, 1H) 6,91(s, 1H);
6,82(d, 1H); 6,66(s, 1H); 6,19(s 1H); 5,98(s, 1H); 5,75(s, 1H); 5,19(d, 1H) 5,03(s, 2H); 4,82(s, 1H);
4,49-4,47(m, 2H); 4,17-4,09(m, 2H); 3,81(s, 3H); 3,49-3,47(m 2H); 3,24-2,80(m, 5H); 2,64-2,50(m, 3H);
2,37(s, 3H); 2,25(s, 3H) 2,19(s, 3H);2,05(s, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 171,4, 168,6, 153,2, 148,1, 145,7, 143.1, 141,3, 140,9, 137,9, 131,0, 129,7, 128,6, 127,9, 127,8, 127,4, 121.2, 115,7, 112,8, 111,8, 110,2, 102,3, 102,0, 82,1, 71,1,
62,5, 62,0, 60,5, 58,0, 57,6, 56,1, 55,2, 42,4, 41,5, 40,0, 39,4, 32,1, 29,9, 29,5, 23,8, 22,9,21,8, 20,8, 16,0, 14,6, 9,9.
ESI-MS m/z: obliczono dla C47H48N4O10S: 860,3; znaleziono (M-H2O+H+): 843,3.
Me
Związek 30: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,61(s, 1H); 7,16-7,11(m, 2H); 6,91(d, 1H); 6,67(s, 1H); 6,20(d, 1H); 5,99(d, 1H); 5,75(s, 1H); 5,20(d, 1H); 4,82(s, 1H); 4,49(d, 1H); 4,35(s, 1H); 4,16(d, 2H); 4,11(dd, 1H); 3,81(s, 3H); 3,48(s, 1H); 3,23-2,79(m, 5H); 2,67-2,47(m, 3H); 2,37(s, 6H); 2,25(s, 3H); 2,19(s, 3H); 2,05(s, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 174,5, 171,6, 168,9, 148,1, 145,6, 143,1, 141,3, 140,9, 134,0,
131,2, 128,6, 127,3, 123,6, 121,5, 121,2, 118,3, 115,7, 109,9, 102,0, 82,1, 62,6, 62,0, 60,5, 57,9, 57,7,
56,1, 56,2, 42,4, 41,5, 40,0, 39,4, 29,9, 23,8, 21,7, 21,6, 20,8, 16,0, 9,9.
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H44N4O9S: 768,3; znaleziono (M-H2O+H+): 751,3.
HO
\-O OH
Związek 31: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,60(s, 1H); 7,00(d, 1H); 6,69(d, 1H); 6,66(s, 1H); 6,69(dd, 1H); 6,16(s, 1H); 5,96(s, 1H); 5,78(s, 1H); 5,19(d, 1H); 4,82(s, 1H); 4,49(d, 1H); 4,46(s, 1H); 4,17(d, 1H); 4,10(d, 1H); 3,81(s, 3H); 3,72-3,59(m, 2H); 3,64(d, 2H); 3,50(d, 1H); 3,23-2,76(m, 4H); 2,55-2,29(m, 3H); 2,37(s, 3H); 2,25(s, 3H); 2,19(s, 3H); 2,03(s. 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 171,3, 166,9, 149,2, 147,9, 145,4, 142,9, 141,0, 140,7, 131,2,
130,7, 127,5, 121,2, 120,9, 115,5, 111,5, 103,1, 101,8, 81,9, 62,3, 61,8, 60,3, 57,7, 57,4, 55,8, 54,9,
42,1,41,2, 39,6, 39,1,29,6, 23,5, 22,6, 21,4, 20,5, 15,8, 14,1, 9,6.
ESI-MS m/z: obliczono dla C40H42N4O10S: 770,3; znaleziono (M-H2O+H+): 753,3.
PL 218 295 B1
Związek 32: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,72(s, 1H); 7,27(dd, 1H); 6,94(dd, 1H); 6,76(ddd,
1H); 6,66(s, 1H); 6,20(s, 1H); 5,99(s, 1H); 5,75(s, 1H); 5,19(d, 1H); 4,83(s, 1H); 4,49(d, 1H); 4,16-4,09(m, 2H); 3,81(s, 3H); 3,50-3,48(m, 1H); 3,48(s, 1H); 3,22-2,79(m, 5H); 2,65-2,51 (m, 3H); 2,37(s, 3H);
2,25(s, 3H); 2,19(s, 3H); 2,05(s, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 171,5, 169,0, 148,1, 145,7, 143,1, 141,3, 140,9, 131,5, 129,3,
123,7, 121,5, 121,1, 119,3, 119,1, 118,3, 115,7, 110,4, 108,2, 107,8, 102,0, 97,8, 97,5, 82,1, 62,4,
62,1, 60,5, 57,9, 57,6, 56,1, 55,1, 42,4, 41,5, 39,9, 39,4, 29,9, 23,8, 21,7, 20,8, 16,0, 9.9,
ESI-MS m/z: obliczono dla C40H41FN4O9S: 772,3; znaleziono (M-H2O+H+): 755,3.
HO
Związek 33: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 6,85(d, 1H); 6,80(s, 1H); 6,71-6,64(m, 2H); 6,48(s, 1H); 6,18(s, 1H); 6,02(s, 1H); 5,74(s, 1H); 5,03(d, 1H); 4,88(d, 1H); 4,39(d, 1H); 4;36(s, 1H); 4,16(d, 1H); 3,98(ddm 1H); 3,80(s, 3H); 3,71(d, 1H); 3,48(s, 1H); 3,22(d, 1H); 2,93-2,83(m, 2H); 2,73-2,39(m, 4H); 2,29(s, 3H); 2,28-2,05(m, 1H); 2,26(s, 3H); 2,22(s, 3H); 2,18(s, 3H); 2,03(s, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 168,9, 149,3, 147,6, 145,5, 142,7, 141,6, 140,7, 131,3, 131,1,
129,3, 126,9, 121,2, 115,7, 111,9, 111,0, 110.7, 103,1, 102,0, 83,4, 69,8, 63,7, 60,2, 58,5, 57,7, 55,1,
54,7, 59,5, 43,1,41,4, 40,6, 35,0, 29,6, 24,6, 22,6, 21,1,20,2, 15,5, 9,7.
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H44N4O10S: 784,3; znaleziono (M-H2O+H+): 767,3.
Związek 34: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,58(s, 1H); 7,23(d, 1H); 6,76(d, 1H); 6,67(dd, 1H); 6,19(d, 1H); 5,98(d, 1H); 5,74(s, 1H); 5,20(d, 1H); 4,82(s, 1H); 4,49(d, 1H); 4,47(s, 1H); 4,16(d, 1H); 4,10(dd, 1H); 3,81(s, 3H); 3,78(s, 3H); 3,51-3,47(m, 1H); 3,22-2,80(m, 5H); 2,65,2,50(m, 3H); 2,36(s, 3H); 2,25(s, 3H); 2,19(s, 3H); 2,05(s, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 171,7, 168,9, 156,5, 148,1, 145,6, 143.1, 141,3, 140,9, 136,5,
131,5, 129,8, 129,3, 121,6, 121,5, 121,2, 119.2, 115,8, 113,1, 110,3, 109,3, 102,2, 94,9, 82,2, 62,5, 62,0, 60,5, 57,9, 57,7, 56,1, 55,8, 55,2, 42,3, 41,5, 40,0, 39,5, 29,9, 23,8, 21,8, 20,8, 16,0, 9,9.
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H44N4O10S: 784,3; znaleziono (M-H2O+H+): 767,3.
PL 218 295 B1
Związek 35: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,73(s, 1H); 7,15(dd, 1H); 7,00(dd, 1H); 6,81(ddd,
1H); 6,67(s, 1H); 6,20(d, 1H); 5,99(d, 1H); 5,76(s, 1H); 5,19(d, 1H); 4,83(s, 1H); 4,49(d, 2H); 4,17 (d, 1H); 4,12(dd, 1H); 3,81(s, 3H); 3,65-3,64(m, 1H); 3,50(d, 1H); 3,24-2,12(m, 2H); 3,00(d, 1H); 2,892,80(m, 2H); 2,66-2,45(m, 3H); 2,37(s, 3H); 2,25(s, 3H); 2,20(s, 3H); 2,05(s, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 171,4, 169,0, 159,4, 156,3, 148,1, 145,7, 143,1, 141,3, 140,9, 138,0, 132,2, 129,4, 127,4, 127,3, 121,4, 121,4, 121,2, 118,2, 115,7, 113,1, 111,8, 111,7, 110,4,
110,1, 103,7, 103.4, 102,0, 82,1, 62,5, 62,1, 60,5, 57,9, 57,6, 56,1, 55,1, 42,3, 41,4, 39.9, 39,4, 29,9,
23,8, 21,7, 20,8, 16,0, 9,9.
ESI-MS m/z: obliczono dla C40H41FN4O9S: 772,2; znaleziono (M-H2O+H+): 755,2.
Związek 36: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,47(s, 1H); 7,22(d, 1H); 6,95-6,87(m, 2H); 6,66(s, 1H); 6,13(d, 1H); 6,01(d, 1H); 5,76(s, 1H); 5,20(d, 1H); 4,84(s, 1H); 4,49(d, 1H); 4,46(s, 1H); 4,18-4,14 (m, 2H); 3,81(s, 3H); 3,54(d, 1H); 3,48(s, 1H); 3,22(d, 1H); 3,20-2,80(m, 4H); 2,70-2,42(m, 3H); 2,36 (s, 6H); 2,27(s, 3H); 2,18(s, 3H); 2,05(s, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 171,3, 169,0, 148,0, 145,6, 143,1, 141.4, 140,9, 135,3, 131,5,
131,1, 130,7, 129,4, 126,6, 122,8, 121,8, 121,3, 119.9, 119,6, 118,1, 116,3, 115,8, 102,0, 82,1, 62,1,
60,5, 58,0, 57,8, 56,1, 55,1, 42,4, 41,5, 40,1, 39,6, 29,9, 23,9, 21,9, 20,7, 16,6, 16,0, 9,9.
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H44N4O9S: 768,2; znaleziono (M-H2O+H+): 751,2.
HO
Związek 37 (pierwszy izomer): 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,70(s, 1H); 7,06(d, 1H); 6,67-6,61 (m, 3H); 6,20(d, 1H); 5,98(d, 1H); 5,70(s, 1H); 5,20(d, 1H); 4,86(s, 1H); 4,53(d, 1H); 4,48(s, 1H); 4,18(s, 1H); 3,80(s, 3H); 3,72-3,54(m, 4H); 3,24-3,22(m, 1H); 3,01-2,56(m, 5H); 2,31 (s, 3H); 2,27(s, 3H); 2,15(s, 3H); 2,02(s. 3H); 1,10(d, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H44N4O10S: 784,3; znaleziono (M-H2O+H+): 767,3.
Związek 38 (drugi izomer): 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,51 (s, 1H); 7,10(d, 1H); 6,75(d, 1H); 6,64(dd, 1H); 6,59(s, 1H); 6,19(d, 1H); 5,97(d, 1H); 5,71(s, 1H); 5,15(d, 1H); 4,84(s, 1H); 4,53-4,50 (m, 2H); 4,16(s, 1H); 4,04(dd, 1H); 3,80(s, 3H); 3,65-3,63(m, 1H); 3,51-3,49(m, 1H); 3,40-2,36(m, 1H); 3,24-3,21(m, 1H); 3,03-2,84(m, 2H); 2,50-2,41(m, 2H); 2,32(s, 3H); 2,23(s, 3H); 2,16(s, 3H); 2,06 (s. 3H); 1,20(d, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H44N4O10S: 784,3; znaleziono (M-H2O+H+): 767,3.
PL 218 295 B1
Związek 39 (pierwszy izomer): 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 8,09(s, 1H); 7,41 (d, 1H) 6,13(d, 1H); 5,98(d, 1H); 5,69(s, 1H); 5,02(d, 1H) 4,88(s, 1H); 4,55-4,16(m, 4H); 3,64-3,56(m, 1H) 3,61(s, 3H); 3,31-3,29(m, 1H); 3,22-2,80(m, 3H) 2,68-2,46(m, 3H); 2,41(s, 3H); 2,27(s, 3H); 2,20(s, 3H); 2,07(s, 3H) 1,99(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H44N4O9S: 768,2; znaleziono (M-H2O+H+): 751,2.
Związek 40 (drugi izomer): 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,36(d, 1H); 7,12-7,05(m, 2H); 7,00(ddd, 1H); 6,92(s, 1H); 6,48(s, 1H); 6,20(d, 1H); 6,06(d, 1H); 5,70(s, 1H); 5,04(d, 1H); 4,88(s, 1H); 4,39-4,36(m, 1H); 4,15(d, 1H); 3,98(dd, 1H); 3,80(s, 3H); 3,72-3,64(m, 2H); 3,21(d, 1H); 2,95-2,84 (m, 2H); 2,73-2,55(m, 4H); 2,29( s, 3H); 2,26(s, 3H); 2,23(s, 3H); 2,18(s, 3H); 2,03(s, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 169,1, 167,5, 147,9, 145,7, 142,9, 141,9, 140,9, 136,0, 131,6,
129,4, 126,5, 122,5, 122,1, 121,5, 119,5, 118,7, 116,0, 111,5, 110,6, 102,2, 83,7, 63,9, 60,4, 58,8,
57,9, 55,4, 54,9, 49,7, 43,4, 41,7, 40,8, 32,1, 29,5, 24,9, 22,9, 21,5, 20,5, 15,8, 14,3, 9.9,
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H44N4O9S: 768,2; znaleziono (M-H2O+H+): 751,2.
Związek 41 (pierwszy izomer): 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,84(s, 1H); 7,13(dd, 1H); 6,96(dd, 1H); 6,81 (ddd, 1H); 6,62(s, 1H); 6,20(d, 1H); 5,99(d, 1H); 5,70(s, 1H); 5,19(d, 1H); 4,86(s, 1H); 4,52(d, 1H); 4,50(s, 1H); 4,16(d, 1H); 3,80(s, 3H); 3,53(d, 1H); 3,49-3,48(m, 1H); 3,23(d, 1H); 3,002,71(m, 3H); 2,62-2,41(m, 2H); 2,31(s, 3H); 2,27(s, 3H); 2,14(s, 3H); 2,02(s, 3H); 1,13(d, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 170,5, 168,9, 159,4, 156,2, 147,6, 145,8, 143,0, 141,2, 133,2,
132.2, 131,7, 131,1, 129,2, 129,0, 127,3, 121,7, 115,6, 111,7, 111,6, 110,3, 109,9, 103,7, 103,4, 102,0, 81,8, 64,0, 62,0, 60,5, 58,0, 56,1, 55,3, 44,0, 42,4, 41,5, 38,1, 32,1, 29,5, 24,0, 22,9, 21.7, 20,7,
16.2, 14,3, 9,9.
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H43FN4O9S: 786,2; znaleziono (M-H2O+H+): 769,3.
Związek 42 (drugi izomer):1 H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,62(s, 1H); 7,18(dd, 1H); 6,99(dd, 1H); 6,82(ddd, 1H); 6,59(s, 1H); 6,20(d, 1H); 5,98(d, 1H); 5,71(s, 1H); 5,15(d, 1H); 4,85(s, 1H); 4,52(s, 1H); 4,50(d, 1H); 4,16(d, 1H); 4,05(dd, 1H); 3,80(s, 3H); 3,50-3,48(m, 1H); 3,42-3,36(m, 1H); 3,23(d, 1H); 3,00-2,81(m, 2H); 2,50(dd, 1H); 2,44(d, 1H); 2,32(s, 3H); 2,24(s, 3H); 2,16(s, 3H); 2,07(s, 3H); 1,23 (d, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 171,9, 168,7, 156,2, 147,8, 145,6, 143,3, 141,8, 140,9, 132,7,
131,4, 131,1, 129,4, 129,0, 121,8, 121,4, 115,8, 113,1, 111,9, 111,8, 110,4, 110,0, 103,7, 103,4,
102,0, 81,9, 63,4, 61,8, 60,6, 58,0, 56,2, 55,2, 46,6, 42,3, 41,5, 41,0, 32,1, 29,5, 23,9, 22,9, 21.9, 20,7,
16,1, 14,3, 9,9.
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H43FN4O9S: 786,2; znaleziono (M-H2O+H+): 769,3.
PL 218 295 B1
Związek 43 (pierwszy izomer): 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,85(s, 1H); 7,33(d, 1H); 7,23(d, 1H); 7,07(1, 1H); 6,99(t, 1H); 6,63(s, 1H); 6,22(d, 1H); 6,00(d, 1H); 5,70(s, 1H); 5,20(d, 1H); 4,86(s, 1H); 4,52(d, 1H); 4,48(s, 1H); 4,16(d, 1H); 3,80(S, 3H); 3,53(d, 1H); 3,22(d, 1H); 3,01-2,73(m, 3H); 2,62-2,48(m, 2H); 2,39-2,17(m, 1H); 2,31( s, 3H); 2,27(s, 3H); 2,14(s, 3H); 2,02(s, 3H); 1,14(d, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 170,6, 168,8, 147,6, 145,7, 143,0, 141,2, 135,7, 131,8, 131,3,
129,2, 127,0, 122,0, 121,8, 121,7, 119,3, 118,5, 115,6, 111,0, 110,2, 102,0, 81,8, 64,0, 61,9, 60,5,
58,1, 58,0, 56,1, 55,3, 44,0, 42,4, 41,5, 38,1, 32,1, 29,5, 24,0, 22,9, 21,8, 20,7, 16,2, 14,3, 9,9.
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H44N4O9S: 768,2; znaleziono (M-H2O+H+): 751,3.
Związek 44 (drugi izomer): 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,62(s, 1H); 7,36(d, 1H); 7,27(d, 1H); 7,09(t, 1H); 7,00(t, 1H); 6,59(s, 1H); 6,21(d, 1H); 5,98(d, 1H); 5,71(s, 1H); 5,15(d, 1H); 4,84(s, 1H); 4,51(d, 2H); 4,17-4,16(m, 1H); 4,05(dd, 1H); 3,80(s, 3H); 3,49-3,48(m, 1H); 3,42-3,38(m, 1H); 3,24-3,22(m, 1H); 3,03-2,81 (m, 2H); 2,57(dd, 1H); 2,46(d, 1H); 2,32( s, 3H); 2,24(s, 3H); 2,17-2,12(m, 1H); 2,16(s, 3H); 2,07(s, 3H); 1,23(d, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H44N4O9S: 768,2; znaleziono (M-H2O+H+): 751,3.
Związek 45: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,69(s, 1H); 7,38(d, 1H); 7,24(d, 1H); 7,09(ddd, 1H); 7,03(s, 1H); 7,00(ddd, 1H); 6,22(d, 1H); 6,00(d, 1H); 5,20(d, 1H); 4,83(s, 1H); 4,50(s, 1H); 4,38(s, 1H); 4,33(s, 1H); 4,12(dd, 1H); 3,77(s, 3H); 3,68-3,66(m, 1H); 3,51-3,49(m, 1H); 3,24-2,85(m, 4H); 2,70-2,49(m, 2H); 2,62(t, 2H); 2,37( s, 3H); 2,28(s, 3H); 2,15(s, 3H); 2,06(s, 3H); 1,94-1,83(m, 2H); 1,10(t, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C44H48N4O10S: 824,3; znaleziono (M-H2O+H+): 807,2.
Związek 46: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,67(s, 1H); 7,38(d, 1H); 7,24(d, 1H); 7,09(ddd, 1H);
7,00(ddd, 1H); 7,00(s, 1H); 6,21(d, 1H); 6,00(d, 1H); 5,20(d, 1H); 4,83(s, 1H); 4,51(d, 1H); 4,39(s, 1H);
4,15(d, 1H); 3,81(s, 3H); 3,52(d, 1H); 3,26(d, 1H); 3,19-3,11(m, 1H); 3,06-2,81(m, 3H); 2,72-2,44 (m, 3H); 2,36(s, 3H); 2,31(s, 3H); 2,17(s, 3H); 2,03(s, 3H); 1,54(s, 9H).
PL 218 295 B1 13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 171,5, 169,2, 151,4, 148,2, 145,7, 144,4, 141,3, 140,9, 135,7,
131,4, 131,1, 130,9, 127,4, 127,1, 124,4, 122,1, 121,5, 119,4, 118,7, 115,6, 111,1, 102,0, 83,3, 81,8,
62,8, 61,9, 60,2, 57,8, 56,3, 56,1,42,3, 41,5, 39,8, 39,4, 29,9, 27,8, 23,6, 21,7, 20,5, 16,0, 14,3, 9,9.
ESI-MS m/z: obliczono dla C45H50N4O11S: 854,3; znaleziono (M-H2O+H+): 837,2.
Związek 47: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,68(s, 1H); 7,38(d, 1H); 7,24(d, 1H); 7,19(dd, 1H); 7,10(ddd, 1H); 7,06(s, 1H); 7,00(ddd, 1H); 6,21(d, 1H); 6,01(d, 1H); 5,20(d, 1H); 5,00(dd, 1H); 4,83 (s, 1H); 4,70(dd, 1H); 4,51(s, 1H); 4,40(d, 1H); 4,15(dd, 1H); 3,83(dd, 1H); 3,82(s, 3H); 3,53(d, 1H); 3,28-3,03(m, 3H); 2,94-2,83(m, 2H); 2,72-2,46(m, 3H); 2,38(s, 3H); 2,33(s, 3H); 2,17(s, 3H); 2,07 (s, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 171,5, 169,0, 150,8, 148,0, 145,8, 144.0, 143,1, 141,3, 140,9,
135,7, 130,8, 128,2, 127,1, 122,2, 120,0, 119.5, 118,7, 115,5, 113,3, 111,1, 110,5, 102,1, 98,7, 81,9,
62,8, 62,0, 60,5, 57,7, 56,2, 56,0, 42,3, 41,8, 39,9, 39,5, 32,1, 29,5, 23,7, 21,8, 20,5, 16,0, 14,3, 9,9.
ESI-MS m/z: obliczono dla C43H44N4O11S: 824,2; znaleziono (M-H2O+H+): 807,2.
Związek 48: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,70(s, 1H); 7,37(d, 1H); 7,24(d, 1H); 7,08(ddd, 1H); 7,00(ddd, 1H); 6,87(s, 1H); 6,20(d, 1H); 6,17-6,05(m, 1H); 5,99(d, 1H); 5,47(dd, 1H); 5,25(dd, 1H); 5,21(d, 1H); 4,82(s, 1H); 4,81(dd 1H); 4,50(d, 1H); 4,44(s, 1H); 4,36(dd, 1H) 4,13(dd, 1H); 4,11(s, 1H); 3,84(s, 3H); 3,51(d, 1H); 3,24-3,00(m, 3H) 2,89-2,80(m, 2H); 2,73-2,48(m, 3H); 2,33(s, 3H); 2,31-2,26(m, 1H) 2,23(s, 3H); 2,19(s, 3H); 2,05(s, 3H).
13C-NMR (75 MHz, CDCI3): δ 171,3, 168,6, 150,5, 148,6, 145,3, 140,9, 140,6, 135,5, 134,6, 131,0, 130,7, 126,7, 124,7, 121,7, 121,3, 119.0, 118,3, 116,2, 118,4, 110,8, 109,9, 101,7, 81,6, 72,6,
62,4, 61,6, 59.3, 57,6, 57,5, 55,9, 55,1,42,0, 41,3, 39,4, 39,0, 29,2, 23,5, 22,5, 21,4, 20.3, 15,7, 14,0, 9.
ESI-MS m/z: obliczono dla C43H46N4O9S: 794,3; znaleziono (M-H2O+H+): 777,2.
PL 218 295 B1
Związek 49: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,60(s, 1H); 7,42-7,39(m, 2H); 7,09-7,00(m, 2H) 5,99(s, 1H); 5,52-5,43(m, 2H); 5,24(d, 1H) 5,11(d, 1H); 4,96(d, 1H); 4,80-4,32(m, 6H); 4,13-4,10 (m, 2H); 3,81(s, 3H); 3,58-3,56(m, 1H); 3,46-3,40(m, 1H); 3,24-3,20(m, 1H); 2,99-2,87(m, 2H); 2,67-2,53(m, 2H); 2,31(s, 3H); 2,23(s, 3H); 2,19(s, 3H); 2,02(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C46H50N4O9S: 834,3; znaleziono (M-H2O+H+): 817,2.
Schemat 2
Do roztworu Et-736-CN in THF/H2O 3:1 (0,027M) dodaje się 15 równoważników KOH. Mieszaninę reakcyjną miesza się w temperaturze pokojowej przez 5 godzin. Po upływie tego okresu reakcję zadaje się wodnym, nasyconym roztworem NaCI i ekstrahuje CH2CI2. Warstwę organiczną suszy się Na2SO4. Chromatografia dostarcza czysty związek 50.
1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,59(s, 1H); 7,40(d, 1H); 7,25(d, 1H); 7,11(ddd, 1H); 7,02(ddd, 1H); 6,67(s, 1H); 6,16(d, 1H); 5,93(d, 1H); 5,90(s, 1H); 5,62(s, 1H); 5,06(d, 1H); 4,46(d, 1H); 4,36 (s, 1H); 4,31(dd, 1H); 4,19(d, 1H); 4,12(dd, 1H); 3,82(s, 3H); 3,55(d, 1H); 3,42(d, 1H); 3,20-2,80 (m, 4H); 2,69-2,53(m, 3H); 2,38(s, 3H); 2,21(s, 3H); 2,18(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C39H39N5O7S: 721,3; znaleziono (M+H+): 722,2.
Pochodne Et-694:
Metoda 5: Do roztworu 1 równoważnika Et-694-CN, związku 50 w CH2CI2 (0,032M) pod argonem w temperaturze pokojowej dodaje się 2 równoważniki pirydyny i 2 równoważniki chlorku kwasowego, chloromrówczanu lub bezwodnika. Reakcję śledzi się za pomocą TLC i zadaje nasyconym wodnym roztworem NaHCO3, ekstrahuje CH2CI2 i warstwy organiczne suszy Na2SO4. Chromatografia typu flash dostarcza czyste związki.
Związek 51: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,65(s, 1H); 7,40(d, 1H); 7,26(d, 1H); 7,12(s, 1H); 7,11 (ddd, 1H); 7,04(ddd, 1H); 6,30(d, 1H); 6,19(d, 1H); 5,10(d, 1H); 4,40-4-30(m, 2H); 4,23-4,16(m, 1H); 3,76(s, 3H); 3,50-3,44(m, 2H); 3,19-3,13(m, 2H); 3,03-2,83(m, 2H); 2,66-2,47(m, 3H); 2,40(s, 3H); 3,36-2,22(m, 2H); 2,16(s, 3H);2,07(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C43H38F7N5O8S: 917,2; znaleziono (M+H+): 918,1.
PL 218 295 B1
Związek 52: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,72(d, 1Η), 7,38(d, 1H), 7,26(d, 1H), 7,10(t, 1H), 7,00(t, 1H), 6,65(s, 1H), 6,24(d, 1H), 6,02(d, 1H), 5,74(s, 1H), 5,08(d, 1H), 4,54(szeroki s, 1H), 4,33(s, 1H), 4,27(d, 1H), 4,21(s, 1H), 4,20(d, 1H), 3,80(s, 3H), 3,43(m, 2H), 3,20-2,81(m, 4H), 2,64-2,58(m, 3H), 2,53(t, 2H), 2,37(s, 3H), 2,26(m, 1H), 2,21(s, 3H), 2,05(s, 3H), 1,74(sekst., 2H), 1,01(t, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C43H45N5O8S: 791,3; znaleziono (Μ+Η+): 792,2.
Związek 53: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,71 (s, 1H), 7,39(d, 1H), 7,26(d, 1H), 7,11(t, 1H), 7,02(t, 1H), 6,66(s, 1H), 6,26(s, 1H), 6,04(s, 1H), 5,80(s, 1H), 5,09(d, 1H), 4,52(szeroki s, 1H), 4,34(s, 1H), 4,27(d, 1H), 4,22(d, 1H), 4,20(m, 1H), 3,82(s, 3H), 3,79(m, 2H), 3,42(m, 2H), 3,16(m, 1H), 3,07-2,81(m, 5H), 2,64-2,50(m, 3H), 2,37(s, 3H), 2,25(m, 1H), 2,21(s, 3H), 2,08(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H42CIN5O8S: 811,2; znaleziono (M+H+): 812,2.
Związek 54: Produkt ten otrzymano z użyciem 4 równoważników chlorku cynamoilu i 4 równoważników pirydyny.
1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,83(d, 1H), 7,75(s, 1H), 7,58(m, 2H), 7,46(m, 3H), 7,39(d, 1H), 7,27(d, 1H), 7,11(t, 1H), 7,02(t, 1H), 6,61(s, 1H) 6,58(d, 1H), 6,26(s, 1H), 6,05(s, 1H), 5,52(s, 1H), 5,09(d, 1H), 4,60(szeroki s, 1H), 4,37(s, 1H), 4,27(d, 1H), 4,25(s, 1H), 4,23(m, 1H), 3,47(s, 3H), 3,45(m, 2H), 3,15(m, 1H), 3,04(d, 1H), 2,96(m, 1H), 2,84(m, 1H), 2,70-2,53(m, 3H), 2,33(m, 1H), 2,29(s, 3H), 2,21(s, 3H), 2,12(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C48H45N5O8S: 851,3; znaleziono (M+H+): 852,2.
Związek 55: Produkt ten otrzymano z użyciem 6 równoważników chloromrówczanu allilu i 6 równoważników pirydyny.
1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,74(s, 1H), 7,39(d, 1H), 7,25(d, 1H), 7,10(t, 1H), 7,01(t, 1H),
6,65(s, 1H), 6,25(s, 1H), 6,03(s, 1H), 5,90(ddd, 1H), 5,78(s, 1H), 5,37(d, 1H), 5,24(d, 1H), 5,08(d, 1H),
PL 218 295 B1
4,61(m, 3H), 4,32(s, 1H), 4,28(d, 1H), 4,22(s, 1H), 4,20(d, 1H), 3,80(s, 3H), 3,42(m, 2H), 3,18(m, 1H), 3,09-2,81(m, 3H), 2,59(m, 3H), 2,37(s, 3H), 2,26(m, 1H), 2,21(s, 3H), 2,12(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C43H43N5O9S: 805,3; znaleziono (M+H+): 806,3
Związek 56: Produkt ten otrzymano z użyciem 3 równoważników bezwodnika trifluorooctowego i 3 równoważników pirydyny.
1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,66(s, 1H), 7,40(d, 1H), 7,26(d, 1H), 7,11(t, 1H), 7,02(t, 1H), 6,65(s, 1H), 6,31(d, 1H), 6,08(d, 1H), 5,74(s, 1H), 5,11(d, 1H), 4,55(s, 1H), 4,36(s, 1H), 4,28(d, 1H), 4,25(s, 1H), 4,23(d, 1H), 3,79(s, 3H), 3,46(m, 2H), 3,15(m, 1H), 3,09-2,46(m, 6H), 2,36(s, 3H), 2,23 (s, 3H), 2,20(m, 1H), 2,01(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H38F3N5O8S: 817,2; znaleziono (M+H+): 818,2
Związek 57: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,74(s, 1H), 7,40(d, 1H), 7,27(d, 1H), 7,11(t, 1H), 7,02(t, 1H), 6,65(s, 1H), 6,23(s, 1H), 6,02(s, 1H), 5,74(s, 1H), 5,09(d, 1H), 4,66(s, 1H), 4,32-4,21 (m, 4H), 3,81(s, 3H), 3,40(m, 2H), 3,21-2,86(m, 3H), 2,80(m, 1H), 2,64(m, 3H), 2,37(s, 3H), 2,29 (m, 1H), 2,21(s, 3H), 2,11(s, 3H), 1,45(s, 9H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C44H47N5O9S: 821,3; znaleziono (M+H+): 822,0.
Związek 58: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,72(s, 1H), 7,39(d, 1H), 7,26(d, 1H); 7,11(t, 1H), 7,02(t, 1H), 6,99(s, 1H); 6,24(s, 1H), 6,03(s, 1H), 5,09(d, 1H), 4,61(s, 1H), 4,30(S, 1H), 4,20(m, 2H), 3,98(s, 1H), 3,83(s, 3H), 3,45(m, 2H), 3,21-2,90(m, 3H), 2,80(m, 1H), 2,59(s, 3H), 2,36(s, 3H), 2,31 (m, 1H), 2,20(s, 3H), 2,12(s, 3H), 1,54(s, 9H), 1,45(s, 9H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C49H55N5O11S: 921,4; znaleziono (M+H+): 922,3.
Pochodną mono-Boc w C-5 otrzymano z 6 równoważnikami bezwodnika Boc i 6 równoważnikami pirydyny. Przy użyciu takich warunków wyizolowano jako produkt uboczny śladowe ilości pochodnej di-Boc na C-5 i C-18. Ten ostatni związek można otrzymać jako produkt główny, jeśli reakcję prowadzi się z TEA jako zasadą.
PL 218 295 B1
Związek 59: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,71(s, 1H); 7,39(d, 1H), 7,26(d, 1H), 7,10(t, 1H); 7,04(t, 1H), 6,95(dd, 1H), 6,65(s, 1H), 6,26(s, 1H), 6,04(s, 1H), 5,78(s, 1H), 5,09(d, 1H), 4,99(dd, 1H), 4,63(s, 1H), 4,60(dd, 1H), 4,33(s, 1H), 4,29(d, 1H), 4,22(s, 1H), 4,21(d, 1H), 3,78(s, 3H), 3,42(m, 2H), 3,21-2,79(m, 4H), 2,63(m, 3H), 2,37(s, 3H), 2,27(m, 1H), 2,22(s, 3H); 2,13(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H41N5O9S: 791,3; znaleziono (M+H+): 792,1.
Związek 60: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,70(s, 1H), 7,40(d, 1H), 7,26(d, 1H), 1H), 7,18(dd, 1H), 7,11(t, 1H), 7,05(s, 1H), 7,02(t, 1H), 6,97(dd, 1H), 6,27(s, 1H), 6,05(s, 1H), 5,10(d, 1H), 5,09-5,00(m, 1H), 5,05(s, 1H), 1H), 4,72(dd, 1H), 4,60(dd, 1H), 4,56(s, 1H), 4,33(s, 1H), 4,22(m, 2H), 3,97(d, 1H), 3,78(s, 3H), 3,46(m, 2H), 3,18(m, 1H), 3,11(d, 1H) 2,97(dd, 1H), 2,85(m, 1H), 2,71-2,51(m, 3H), 2,37(s, 3H), 2,32(m, 1H), 2,21(s, 3H), 2,16(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C45H43N5O11S: 861,3; znaleziono (M+H+): 862,7.
Metoda 6: Do roztworu 1 równoważnika Et-694-CN, związku 50, w CH2CI2 (0,032M) pod argonem w temperaturze pokojowej dodaje się 2 równoważniki kwasu, 2 równoważniki EDC.HCI i 2 równoważniki DMAP. Reakcję śledzi się za pomocą TLC i zadaje wodnym nasyconym roztworem NaHCO3, ekstrahuje CH2CI2 i warstwy organiczne suszy Na2SO4. Chromatografia typu flash dostarcza czyste związki.
Związek 61: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,70(s, 1Η), 7,39(d, 1H), 7,26(d, 1H), 7,11(t, 1H), 7,00(t, 1H), 6,65(s, 1H), 6,23(s, 1H), 6,03(s, 1H), 5,72(s, 1H), 5,09(d, 1H), 4,57(szeroki s, 1H), 4,33 (s, 1H), 4,26(d, 1H), 4,21(s, 1H), 4,19(d, 1H), 3,80(s, 3H), 3,44(m, 2H), 3,16(m, 1H), 3,03(d, 1H), 3,00-2,89(m, 2H), 2,68-2,52(m, 3H), 2,54(t, 2H), 2,37(s, 3H), 2,31(m, 1H), 2,21 (s, 3H), 2,04(s, 3H), 1,65(m, 2H), 1,29(m, 8H), 0,87(m, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C47H53N5O8S: 847,4; znaleziono (M+H+): 848,3.
PL 218 295 B1
Metoda 4: Do roztworu 1 równoważnika materiału wyjściowego w CH3CN/H2O 3:3 (0,009M) dodaje się 30 równoważników AgNO3. Po 24 godzinach reakcję zadaje się mieszaniną 1:1 wodnych nasyconych roztworów solanki i NaHCO3, miesza przez 10 minut i ekstrahuje CH2CI2. Warstwy organiczne suszy się Na2SO4. Chromatografia dostarcza czyste związki.
Związek 62: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,65(s, 1H); 7,40(d, 1H); 7,25(d, 1H), 7,10(ddd, 1H); 7,01 (ddd, 1H); 6,66(s, 1H); 6,27(d, 1H); 6,04(d, 1H); 5,69(s, 1H); 5,23(d, 1H); 4,85(s, 1H); 4,51(d, 1H); 4,47(s, 1H); 4,19(s, 1H); 4,15(dd, 1H); 3,78(s, 3H); 3,52-3,50(m, 1H); 3,26-3,14(m, 2H); 3,04-2,80 (m, 3H); 2,72-2,47(m, 3H); 2,36(s, 3H); 2,20(s, 3H); 2,05(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H39F7N4O9S: 908,3; znaleziono (M+H+): 909,2.
Związek 63: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,71(d, 1Η), 7,38(d, 1H), 7,26(d, 1H), 7,09(t, 1H), 7,03(t, 1H), 6,67(s, 1H), 6,21(d, 1H), 5,99(d, 1H), 5,71(szeroki s, 1H), 5,18(d, 1H), 4,83(s, 1H), 4,50 (d, 1H), 4,46(szeroki s, 1H), 4,17(d, 1H), 4,12(d, 1H), 3,81(s, 3H), 3,51(d, 1H), 3,24-3,18(m, 2H), 3,00(d, 1H), 2,85(m, 2H), 2,70-2,50(m, 5H), 2,37(s, 3H), 2,27(m, 1H), 2,19(s, 3H), 2,04(s, 3H), 1,74(sekstet, 2H), 1,01(t, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H46N4O9S: 782,3; znaleziono (M+H+): 783,2.
Związek 64: 1H-NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7,71(s, 1H), 7,39(d, 1H), 7,25(d, 1H), 7,10(t, 1H), 7,01(t, 1H), 6,66(s, 1H), 6,22(s, 1H), 6,00(s, 1H), 5,90(ddd, 1H), 5,74(szeroki s, 1H), 5,37(d, 1H), 5,22(t, 1H), 4,83(s, 1H), 4,59(m, 2H), 4,49(s, 1H), 4,29(dd, 1H), 4,15(m, 2H), 3,80(s, 3H), 3,65(m, 1H), 3,51(m, 2H), 3,18(m, 1H), 3,09-2,81(m, 3H), 2,59(m, 3H), 2,37(s, 3H), 2,26(m, 1H), 2,21(s, 3H), 2,12(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C42H44N4O10S: 796,3; znaleziono (M+H+): 797,0.
PL 218 295 B1
Związek 65: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,74(s, 1H), 7,40(d, 1H), 7,27(d, 1H), 7,11(t, 1H), 7,02(t, 1H), 6,65(s, 1H), 6,23(s, 1H), 6,02(s, 1H), 5,74(szeroki s, 1H), 5,20(d, 1H), 4,82(s, 1H), 4,58 (s, 1H), 4,49(m, 1H), 4,13(m, 2H), 3,81(s, 3H), 3,49(m, 1H), 3,21(m, 2H), 3,02(d, 1H), 2,80(m, 3H), 2,64(m, 2H), 2,37(s, 3H), 2,29(m, 1H), 2,21(s, 3H), 2,11(s, 3H), 1,45(s, 9H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C43H48N4O10S: 812,3; znaleziono (M+H+): 813,0.
Związek 66: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,71(s, 1H), 7,39(d, 1H), 7,26(d, 1H); 7,11(t, 1H), 7,02(t, 1H), 6,99(s, 1H), 6,21(s, 1H), 6,00(s, 1H), 5,19(d, 1H), 4,80(s, 1H), 4,51(m, 2H), 4,16(m, 2H), 3,83(s, 3H), 3,54(m, 1H), 3,28-3,04(m, 3H), 2,92-2,78(m, 2H), 2,59(m, 3H), 2,36(s, 3H), 2,31(m, 1H), 2,18(s, 3H), 2,11(s, 3H), 1,54(s, 9H), 1,45(s, 9H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C48H56N4O12S: 912,4; znaleziono (M+H+): 913,1.
Związek 67: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,70(s, 1H), 7,39(d, 1H), 7,26(d, 1H), 7,10(t, 1H), 7,01(t, 1H), 6,95(dd, 1H), 6,66(s, 1H), 6,24(s, 1H), 6,01(s, 1H), 5,75(s, 1H), 5,21(d, 1H), 4,99(dd, 1H), 4,84(s, 1H), 4,58(dd, 1H), 4,55(s, 1H), 4,51(s, 1H), 4,20(s, 1H), 4,15(d, 1H), 3,78(s, 3H), 3,49(m, 1H), 3,21 (m, 2H), 3,00(d, 1H), 2,86(m, 2H), 2,59(m, 3H), 2,37(s, 3H), 2,27(m, 1H), 2,20(s, 3H), 2,12(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C41H42N4O10S: 782,3; znaleziono (M+H+): 783,1
PL 218 295 B1
Związek 68: 1H-NMR (300 MHz, CDCI3): δ 7,67(s, 1H), 7,39(d, 1H), 7,24(d, 1H), 7,17(dd, 1H), 7,10(t, 1H), 7,05(s, 1H), 7,02(t, 1H), 6,97(dd, 1H), 6,24(s, 1H), 6,02(s, 1H), 5,21(d, 1H), 5,06(dd, 1H), 5,01(dd, 1H), 4,83(s, 1H); 4,72(dd, 1H), 4,60(dd, 1H), 4,51(s, 1H), 4,48(s, 1H), 4,15(dd, 1H), 3,86 (d, 1H), 3,78(s, 3H), 3,54(d, 1H), 3,28-3,18(m, 2H), 3,07(d, 1H), 2,94-2,84(m, 2H), 2,67-2,52(m, 3H), 2,37(s, 3H), 2,32(m, 1H), 2,18(s, 3H), 2,14(s, 3H).
ESI-MS m/z: obliczono dla C44H44N4O12S: 852,3; znaleziono (M+H+): 853,5.
Oznaczenie biologiczne - skriningowe badanie czynności przeciwnowotworowej
Oznaczenia te mają na celu przerwanie rozwoju hodowli komórek nowotworowych in vitro wsku
tek ciągłego eksponowania komórek na testowaną próbkę. Linie komórkowe
Nazwa NrATCC Gatunek Tkanka Charakterystyka
P-388 CCL-46 mysz płyn puchliny brzusznej nowotwór limfoidalny
K-562 CCL-243 człowiek leukemia erytroleukemia (choroba di Gugliemo) (wysięk opłucnowy)
A-549 CCL-185 człowiek płuco rak płuc „NSCL”
SK-MEL-28 HTB-72 człowiek czerniak czerniak złośliwy
HT-29 HTB-38 człowiek okrężnica gruczolakorak okrężnicy
LoVo CCL-229 człowiek okrężnica gruczolakorak okrężnicy
LoVo-Dox człowiek okrężnica gruczolakorak okrężnicy (MDR)
SW620 CCL-228 człowiek okrężnica gruczolakorak okrężnicy (przerzut do węzłów chłonnych)
DU-145 HTB-81 człowiek prostata rak prostaty, bez receptorów androgenowych
LNCaP CR L-1740 człowiek prostata gruczolakorak prostaty, z receptorami androgenowymi
SK-BR-3 HTB-30 człowiek sutek gruczolakorak sutka, Her2/neu+, (wysięk opłucnowy)
MCF-7 HTB-22 człowiek sutek gruczolakorak sutka, (wysięk opłucnowy)
PL 218 295 B1
MDA-MB- HTB-26 231 człowiek sutek gruczolakorak Her2/neu+, (wysięk opłucnowy) sutka,
IGR0V-1 człowiek jajnik gruczolakorak jajnika
IGROV-ET człowiek jajnik gruczolakorak jajnika,
scharakteryzowany jako komórki (ET-743)-opome
SK-OV-3 HTB-77 człowiek jajnik gruczolakorak jajnika (złośliwa puchlina brzuszna)
OVCAR-3 HTB-161 człowiek jajnik gruczolakorak jajnika
HeLa CCL-2 człowiek szyjka rak nabłonkowy szyjki
HeLa-APL CCL-3 człowiek szyjka rak nabłonkowy szyjki, scharakteryzowany jako komórki aplidyno-oporne
A-498 HTB-44 człowiek nerka rak nerki
PANC-1 CRL-1469 człowiek trzustka rak nabłonkowy trzustki
HMEC1 człowiek śródbłonek
Oznaczenie kolorymetryczne inhibitowania rozwoju komórek
Zaadaptowano oznaczenie typu kolorymetrycznego, z użyciem reakcji sulforodaminowej (SRB), do ilościowego pomiaru rozwoju i żywotności komórek [postępowanie według techniki ujawnionej przez Philip Skehan i współpr. (1990), New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer drug screening, J. Natl. Cancer Inst., 82: 1107-1112]
W tym sposobie oznaczenie wykorzystuje się 96-studzienkowe mikropłytki do hodowli, o śre-dnicy 9 mm (Faircloth, 1988; Mosmann, 1983). Większość linii komórkowych uzyskano z Amerykańskiego Zbioru Typowych Hodowli (ATCC) pochodzących od różnych rodzajów ludzkich raków.
Komórki utrzymywano w RPMI 10% FBS uzupełnionym 0,1 g/l penicyliny i 0,1 g/l siarczanem streptomycyny, a następnie inkubowano w 37°C, przy 5% CO2 i wilgotności 98%. Do eksperymentów komórki zebrano z hodowli bliskich zlewania się z użyciem trypsyny i ponownie zawieszono w świeżym środowisku, przed posiewaniem.
3
Komórki posiewano w 96-studzienkowych płytkach mikrotitracyjnych po 5 x 103 komórek na studzienkę w porcjach 195 μΙ środowiska, i pozostawiono do rozwijania się do przyrośnięcia do powierzchni płytki na 18 godzin w środowisku pozbawionym leku. Następnie dodano próbki w porcjach po 5 μ, w zakresie od 10 do 10-8 μg/ml rozpuszczone w DMSO/EtOH/PBS (0,5:0,5:99). Po 48 godzinnej ekspozycji, mierzono działanie przeciwnowotworowe według metodologii SRB: komórki utrwalono dodając 50 μΙ zimnego 50% wag./obj. kwasu trichlorooctowego (TCA) i inkubowano przez 60 minut w 4°C. Płytki przemyto wodą dejonizowaną i wysuszono. Jedną setną μΙ roztworu SRB (0,4% wag./obj. w 1% kwasie octowym) dodano do każdej studzienki mikrotitracyjnej i inkubowano przez 10 minut w temperaturze pokojowej. Niezwiązaną SRB usunięto przemywając 1% kwasem octowym. Odczytano gęstości optyczne automatycznym spektrofotometrycznym czytnikiem płytek dla jednej długości fali 490 nm.
Obliczono wartości średniej +/- SD dla trzech studzienek. Możliwe jest wyliczenie niektórych parametrów reakcji komórkowych: Gl = inhibitowanie rozwoju, TGI = całkowite inhibitowanie rozwoju (efekt cytostatyczny) i LC = śmiertelność komórek (efekt cytotoksyczny).
PL 218 295 B1
Otrzymane wyniki pozwalają przewidywać użyteczność określonego leku jako potencjalnego środka do leczenie raka. Przy tej technice, wyselekcjonowano związki, które wykazywały Gl50 mniejsze od 10 μg/mΙ do dalszych badań, dane Gl50 pozwalają przewidywać, że lek nie tylko będzie cytostatykiem, ale również potencjalnie jest zdolny do ograniczania rozwoju nowotworu.
Dane czynności (w molach)
Związek 1
A549 IC50 1.31E-09
HT29 1.31E-09
Związek 2 Związek 3 Związek 4 Związek 5 Związek 6 Związek 7
Gieo S,30E-10 3,45E-07 2.30E-06 1.29E-08 5.13E-09 7.67E-07
4549 TGI B.3OE-O9 3.45E-06 5.90E-06 1.29E-07 5,13E-08 1.28E-07
lc6Q 5.30E-05 5.75E-05 1.15E-05 1.29E-05 1,28E-05 1.28E-06
GI50 1,26 E-09 2.30E-07 2.30E-06 1.29E-08 5.13E-09 6,39E-08
HT29 TGI 1,26E-09 2.30E-07 2,30E-06 1.29E-08 5.13E-09 S,39E-08
LC50 5.30E-05 5.75E-05 1,15E-05 5.14E-06 5.13E-06 1,28E-06
H-MEC-1 θι» TGI LC50
Związek 8 Związek 9 Związek 10 Związek 11 Związek 12 Związek 13
A549 GI50 TG! LC50 2,52E-09 1,01 E-08 1.26E-05 2.52E-08 1,01E-07 8,82E-06 3,91 E-08 1.28E-07 1,28E-05 1,89E-08 5,Q0E-08 1.29E-07 7.28E-09 3,35E-08 1.26E-05 5,31 E-09 5,79E-08 1.26E-05
HT29 GI50 TGI LC5Q 2.52E-09 2.52E-09 5,04E-06 3J8E-07 3.78E-07 1,26E-05 4,03E-G8 1.28E-05 1,28E-05 3,09E-08 1.29E-07 1.29E-05 1.37E-08 1.26E-07 1.26E-05 3,33E~07 1.26E-06 1.26E-05
H-MEC-1 Gbo TG! LCso
Związek 15 Związek 16 Związek 17 Związek 18 Związek 19 Związek 20
4549 GI50 TGI 4,78E-09 1,31 E-08 3,67E-08 1,28E-07 5.39E-09 4,41 E-08 S.77E-09 1.29E-07 3.27E-09 1.29E-08 3,30E-07 1.20E-06
PL 218 295 B1
LCso 1,27E-06 4.44E-06 6.67E-06 1.29E-05 1.29E-05 5,77E-06
ΗΤ29 GI50 4,16E-09 1,31 E-08 1.31E-05 4.28E-08 1.28E-07 1.28E-05 2,22E-08 1.28E-08 1.28E-05 5.62E-09 1.29E-07 1.29E-05 4.45E-09 1.29E-O7 1.29ΕΌ5 5,96E-O7 1,20E-05 1.20E-05
TGI
LCso
H-MEC-1 GUo
TGI
LCso
Związek 21 Związek 22 Związek 23 Związek 24 Związek 25 Związek 50
A549 Giga 7.58E-07 6,99E-06 1.16E-05 3.93E-08 1,20E-07 1,20E-05 1.18E-07 1.26E-06 1.11E-05 1.24E-05 1.24E-05 1.24E-05 1.18E-05 1.18E-O5 1.18E-05 4.16E-07 5,93E-07 1,39E-06
TGI
LC50
HT29 GUo 1.18E-06 1.16E-05 1.16E-05 1.20E-07 5.70E-06 1.20E-05 2.47E-07 1,11E-05 1.11E-05 1.24E-05 1.24E-05 1.24E-05 1.18E-05 1.18E-05 1.18E-05 5,93E-07 5,93E-07 S.93E-06
TGI
LC5a
H-MEC-1 GI50 TGI
LCso
Związek 52 Związek 53 Związek 54 Związek 55 Związek 56 Związek 58
A549 Ciso TGI LCso 4.70E-08 1.28E-07 9.43E-04 2,61 E-07 7.84E-07 1.22E-05 1.10E-07 3,53E-07 1.10E-06 4.95E-08 3,11 E-07 1.10E-05 9,3QE-09 2,36E-07 3,79E-06 8,91 E-08 1.34E-06 1.08E-05
HT29 Gigo TGI LCso 7.93E-08 1.26E-05 1.26E-05 3.09E-07 1.23E-06 1.23E-05 1.30E-07 5,41 E-07 3.37E-06 8.20E-08 1.24E-06 1.24E-05 4.74E-08 1.22E-05 1.22E-05 2.30E-07 1.08E-05 1,Q8E-05
H-MEC-1 GSso TGI LCso 3.47E-07 6.95E-09 1.28E-08 1.32E-07 1.23E-05 1.23E-05 5.48E-10 1.13E-09 6.68E-09 4,17E-09 9.65E-09 3.78E-07 1.G2E-08 1.08E-05 1.08E-05
Związek 59 Związek 61 Związek 63 Związek 64 Związek 65 Związek 66
Λ549 Glso TGI LCso 2,66E-09 2.26E-06 4.98E-06 1.18E-05 1.18E-05 1.18E-05 3.12E-09 9,53E-09 3.03E-06 1,64E~09 5.83E-09 1.10E-07 2.05E-09 5.30E-09 4,79E-08 2.09E-08 5.75E-08 3.76E-07
PL 218 295 B1
ΗΤ29 gi50 3.80E-09 1.84E-08 1.26E-05 1.18E-05 1.18E-05 1.18E-05 3.88E-09 1,28E-08 1,28E-05 1.91E-09 1,25E-08 1.25E-05 8.56E-10 2,05E-08 1,23E-05 2.80E-08 1.13E-07 1.10E-05
TGI
LC50
H-MEC-1 gi60 4.00E-09 1,26E-08 1, 1,26E-05 3,94E-07 8,05E~07 3.40E-06 2.72E-O9 1.28E-08 1 1.28E-05 3,10E-10 1.25E-08 1.25E-05 5.13E-10 4.35E-08 1 s23E-05 2.07E-08 8.04E-08 1,10E-05
TGI
LCso
Związek 67
4549 gi50 4.55E-10 2,86E-09 1.28E-07
TGI
lc50
HT29 GI50 1.90E-09 1,28E-07 1,28E-05
TGt
LC50
H-MEC-1 Gigo 5.21E-10 1.28E-07 1.28E-05
TGI
LCso
Związek 14 Związek 26 Związek 27 Związek 28 Związek 29 Związek 30
A549 Siec 2.64E-07 8.25E-07 Ss86E-O6 2.65E-09 3.97E-09 1,32E-08 2.55E-10 8.92E-10 3.37E-09 3.48E-09 4.65E-08 3.48E-G8 2,32E~08 3.48E-08 9.29E-08 3.90E-11 2,60E-10 1.04E-09
TGI
LC50
HT29 Gls0 4,18E-07 1.59E-06 1.29E-05 3.97E-09 7,95E-09 1,32E-08 2.55E-10 7.64E-10 1.15E-09 1,16E-08 6,97E-08 1.05E-07 2.32E-08 6,97 E-08 1,05E-07 1.G4E-10 3,90E~10 1.04E-09
TGI
LC50
SW-620 Gigo 2,65E-09 7.95E-09 7.95E-O8 2.55E-10 6,37E-10 1.15E-09 S.97E-09 2.32E-08 9.29E-08 2.32E-08 6.97E-08 1.06E-07 2.60E-11 3,90E-10 1.30E-09
TG!
LC50
MEL-28 Gigo 1.98E-07 5.19E-07 2.37E-06 2.65E-09 5.30E-09 1.06E-08 2.55E-10 6,37E-10 1,27E*O9 2.32E-08 3.48E-08 8,13E-08 2,32E-08 3.48E-08 8.13E-08 2.60E-11 1,3QE-10 S.50E-10
TGI
LC50
OVCAR Glso
TGI
PL 218 295 B1
LCsq
4498 GI50 2,65E-O9 5,62E-O9 2.65E-O8 2.55E-10 5.10E-10 1.27E-09 3.48E-09 1.16E-08 5,81 E-O8 3.48E-09 1.16E-08 1.16E-07 1.30E-10 5(20E-1G 2.60E-09
TGI
LC50
DU145 GI50 9.4SE-08 1.39E-06 1.29E-05 2,65E-09 3.97E-O9 1.06E-08 2.55E-11 8(92E-11 3,82E-09 2.32E-09 3.48E-09 9.29ΕΌ9 2.32E-08 3.48E-08 9,29E-Q8 1.30E-11 3.90E-11 1.30E-10
TGI
LC50
MCF Gigo 2.65E-09 5.30E-09 1.19E-08 2.55E-10 1.27E-09 1.1SE-08 5,81 E-O9 2.32E-08 1.16E-07 2,32E-08 3.48E-08 1.16E-07 2.60E-10 3,90E-10 2.60E-09
TGI
LCjo
MB231 GI50 2.S5E-09 5.30E-09 1.32E-08 2.55E-10 6.37E-09 1.27E-08 3,48E-09 9,29E-09 1.16E-07 2,32E-08 4,65E-08 1.16E-07 2.60E-12 1.30E-10 3,90E-09
TGI
LC50
H-MEC-1 GI50
TGS
LC50
LNCAP Giso 6,12E-08 1.77E-07 5.35E-07
TGI
LC50
SK-0V3 Glso
TGI
LCS0
IGROV GI50 2.26E-07 7.44E-07 5.14E-06
TGI
LC50
JGROV- ET gi50 5.69E-07 1.30E-06 1.29E-05
TGI
LC50
SK-BR3 Glso TGI 2.17E-07 5,37E-07 1.62E-06
LC50
K562 GI50 4,47E-08 1.74E-07
TGI
PL 218 295 B1
LC50 1,29E-Q8
PANC-1 Gigo 2,76E-07 8,25E-07 1.29E-05
TGl
LCgg
LOVO Glso 1,41E-07 3.93E-07 1.10E-06
TGl
LCgo
LOVO- DOX Gigo 5,84E-07 3.84E-06 1,29E-05
TGl
lc50
HELA Glso 1.14E-07 3.1OE-O7 8.10E-07
TGl
LCgo
HELA- APL Giga 2,43E-07 4,88E-07 9.80E-07
TGl
LC50
Związek 31 Związek 32 Związek 33 Związek 34 Związek 35 Związek 36
A549 GI50 2.59E-09 5,19E-09 3,89E-08 3.88E-09 2.59E-08 9,O8E-O8 3.82E-1O 1,27E-09 5.10E-09 5.10E-09 2.55E-G8 8.92E-G8 3,03E-G9 7.65E-09 4,09E-Q8 2.84E-08 5.07E-08 9.09E-08
TGl
LC50
HT29 Glso 3.89E-09 7.78E-09 1.30E-08 7,76E-09 2,59£-Q8 1.03E-07 2.55E-10 7,64E-1G 1.15E-09 7.64E-09 2,54E-G9 1t15E-08 4.19E-09 1.32E-08 1,29E-05 S.18E-08 1.87E-07 1.30E-05
TGl
LC50
SW-620 Glso 2.59E-09 3,89E-09 1.17E-08 5.17E-O9 2.59E-08 1.29E-07 2.55E-10 1.15E-09 1.02E-08 1 ,G2E-08 3.82E-08 1.02E-07
TGl
LC50
MEL-28 GI50 ł.j*J2?ŁZ· 3,89E-Q9 1.04E-08 (.Μ, «||><ΓΤ^ |||||— Ł.Jljry 1,03E-Q8 2,59E-08 2.55E-10 S.37E-10 1.15E-O9 3.82E-09 1,27E-08 B.37E-08 2J8E-G9 7.16E-09 4.70E-08 2.16E-09 5.23E-09 1.26E-08
TGl
LC50
OVCAR Glso
TGl
A498 Glso 2.59E-O9 2.59E-09 2,55E-10 3.82E-09
PL 218 295 B1
TGI 6.49E-09 1.30E-08 9.06E-09 5,17E-08 5.1OE-1O 1.27E-09 1.27E-08 6,37E-Q8
DU145 Gigo 1,30E-09 3,89E-O9 9,08E~09 1.29E-09 2.59E-09 3.88E-O9 3.82E-10 8.92E-10 3,82E-09 2,55 E-09 3.82E-09 1.02E-08 3,83E-09 1,20E-08 1,29E-05 5,41 E-G9 3.39E-03 1,30E-05
TGI
LCgo
MCF Gigo 2,59E-09 5,19E-09 1.17E-08 9.06E-09 2.59E-08 1.29E-07 1,02E-09 2,55E-09 115E-08 5,1OE-O9 2.55E-G8 1.27E-07
TGI
I**»CfZ50
MB231 Gigo 1.30E-09 5,19E-09 1,3GE-08 2,59 E-09 9.06E-09 9.06E-G8 2,55E-10 1.27E-09 1,27E-08 3.82E-09 1.02E-08 1,27E-Q7
TGI
LCso
H-MEC-1 GISq 2,6OE-O9 3.04E-08 1.29E-05 8,43 E-08 7.83E-07 1.30E-G5
TGI lc50
LNCAP GUo 6.16E-1O 2.50E-09 7.48E-09 5.14E-09 9.48E-09 2,51 E-08
TGI
LC5Q
SK-0V3 Gigo 4.37E-09 1.46E-08 1.29E-05 5.07E-08 2.05E-07 1,30E-05
TGI
LCgo
IGROV Ciso 3.45E-09 7.72E-O9 3.38E-O6 3J2E-O9 7,21 E-09 2,71 E-08
TGI
LCso
1GROV- ET Gigo 5153E-09 2.35E-O8 1.29E-05 5,03E-08 1.03E-G7 1.30ΕΌ7
TGI L.C50
SK-BR3 GI50 TGI 2,21 E-09 B.55E-09 1.09E-06 1.18E-08 3.20E-08 8.64E-08
LCso
K562 Gigo 1.14E-09 2.67E-09 1,02E-08 5.15E-09 9.92E-09 1.09E-07
TGI
LCso
PANC-1 Gl§0 4,52E-09 4,21 E-08
PL 218 295 B1
Związek 37 Związek 38 Związek 39 Związek 40 Związek 41 Związek 42
Α549 3!~o 4.23E-09 2 17E-08 1,38E-07 2,38E-09 R 9AF-nq 1,156-08 4.67E-08 8.74E-08 2,32E-06 2,41 E-09 4,11 E-09 7.02E-09 1.98E-08 4.68E-08 1,10E-07 2.20E-08 4,09E-08 7,59E-08
γθ|
Csa
ΗΤ29 Gigo 3,71E-09 1.40E-08 1.27E-05 4.20E-09 1.69E-08 1,27E-05 4,85E-08 1,73E-05 Τ30Ε-05 3,26E~G9 1.06E-08 1.30E-05 5 θθΕ-09 S.07E-08 1.27E-05 3,41 E-08 1.42E-07 1,27E-05
TGI
-Cso
SW-620 GI5o
TGI
-C;o
MEI-28 GI50 2.40E-09 0,OZtZVi7 3.35E-08 2.73E-09 5.33E-09 1.04E-08 3.47E-08 6,91 E-08 1,81E-07 1.96E-08 4,70E~08 1,12E-07 6.72E-09 2.66E-08 1.02E-07 4,04E-1Q 9.77E-10 S,19E-09
TGI
-C50
OVCAR gi50
TGI
.C50
A498 Citso
TGI
-C50
PL 218 295 B1
DU145 Gbo 4.60E-09 1.06E-08 1.27E-05 2.04E-09 6.8OE-O9 1.27E-05 5.59ΕΌ8 2.03E-06 1.30E-05 2,35E-09 6,41 E-09 Jt Λ» |Η» /Λ/'·' 2,45E-uo 3.49E-09 8,37E-09 9,90E-06 3,51 E-09 7.97E-09 1.27E-08
TG!
lc50
MCF Gbo
TG! LC50
MB231 Gbo
TG!
LC50
H-MEC-1 Gbo 2.22E-09 3.58E-08 1.27E-05 3Ό6Ε-Ο9 8.93E-O9 1.27E-05 5,81 E-08 1,46E-06 1.30E-05 2,45E-09 5,31 E-09 1.15E-08 4.68E-09 4.08E-08 1.27E-05 4,04E-08 2.47E-07 1.27E-05
TG!
LC50
LNCAP Gbo 2.60E-10 8,56E-1O 4.75E-09 2.00E-10 7,21 E-1O 3,07E-09 2.05E-08 4,41 E-08 9.47E-08 1.02E-09 2.48E-09 5.88E-09 2,62E-09 5,17E-O9 1.02E-08 3,74E-09 6,61 E-09 1.17E-08
TGI
LC50
SK-OV3 Gbo 3.57E-09 1,07E-08 1.27E-05 2,5SE-09 7.13E-09 1,27E~G5 5.24E-08 3,19E-07 1.30E-05 2.9GE-09 6.28Ε-0Θ 1.30E-08 3.85E-09 9.82E-09 1.27E-05 7.37E-O9 7,92E-07 1,27E-05
TG!
LC6o
!GROV Gbo 2,82E-09 7,O6E-O9 6.13E-07 7,57E-10 2.89E-09 8.40E-09 4,30E-08 B.15E-08 2.32E-06 1,96E-09 4.17E-09 8.86E-09 1.94E-09 4.14E-09 8.86E-09 2,44E-09 5,12E~09 1,07E-08
TGI
LG50
!GROV- ET Gbo 3,76E-08 1,19E-07 1,27E-05 1.57E-08 6.59E-08 6,51 E-06 8,25E-Q8 4,04E-06 1.30E-05 2.42E-09 8,66E-09 4.80E-06 3.14E-09 2.00E-08 3.86E-06 4,32E-08 9.42E-08 1.27E-05
TGI
LC50
SK-BR3 GI50 2,96E-09 6,80E-09 1,41 E-07 1.07E-09 3,38E-09 9.54E-09 4.99E-08 1.10E-07 9,44E-07 2.56E-09 6,50E~09 2,80E-08 2.33E-09 6.86E-09 3.83E-08 6.63E-09 2.44E-08 8.73E-O8
TGI
LG50
K562 GI50 4.92E-10 1.36E-09 1,27E-08 4.22E-10 8.18E-10 3.15E-09 2,51 E-08 4.46E-08 7,92E-O8 8.43E-10 6,87E-09 8.00E-08 1.10E-10 2.19E-09 5,57E-09 4.77E-09 9.15E-09 2,81 E-06
TGI
LG50
PANC-1 Gbo 3.12E-09 1,18E-08 3.02E-G6 3.22E-09 8,37E-09 4,28E-07 6,01 E-08 9.22E-07 1.30E-05 2,82E-09 7,17E-09 1,28E-07 1.08E-08 4.89E-08 5.06E-07 1.69E-08 8,25E-08 1.27E-05
TG!
LC50
PL 218 295 B1
LOVO Glso 2.92E-O9 8,97E-09 1,27E~Q5 3.55E-09 1,03E-08 1,27E~05 3,21 E-08 S.22E-08 1,20E-07 2,51 E-G9 5,98E-09 2,38E-G8 4,42E-09 2.44E-08 4.1OE-O7 1.35E-08 4.37E-08 1.27E-07
TGI
LhCjjg
δ* 2§ Glso 6.17E-08 4.10E-07 1.27E-05 5.53E-08 8.42E-07 1,27E“05 2,34E-O7 9.94E-07 1.30E-05 3.04E-08 9.12E-08 5,5^ E—07 3,05E-G8 9.99E-08 1.27E-05 4,59E-G8 2.05E-07 1.27E-05
TGI
LC50
HELA Glso
TGI LC5o
HELA- APL i..........—....................... GUo
TGI
LCgo
Związek 43 Związek 44 Związek 45 Związek 46 Związek 47 Związek 48
A549 GI50 5.12E-09 2.74E-08 6.89E-08 3.33E-08 3.33E-08 5.56E-07
TGI 1,08E-08 4.76E-08 3,01 E-07 6J8E-08 7,50E-08 1.09E-06
LC60 3.28E-08 8.23E-08 4.47E-06 3.35E-07 1.33E-06 1,26E-05
HT29 GI50 4.64E-08 5.98E-08 8.78E-08 4,44E-G8 3.88E-08 5,01 E-07
TGI 1.04E-07 4.59E-07 1.21E-06 1,22E-06 1.21E-05 1,26E-06
lc50 1.30E-05 1.30E-05 1.21E-05 1,17E-05 1.21E-05 1,26E-05
SW-620 GI50
TGI
LC50
MEL-28 Glso 3.08E-07 2.63E-09 3,07 E-08 1,24E-08 4.26E-09 3,59E-07
TGI 5,81 E-07 5.22E-09 7,03 E-08 4,07E-08 1 ,ΟΟΕ-08 7.12E-07
LC50 1,09E-06 1,03E-Q8 3.78E-07 1.53E-07 2,07E-07 3.09E-06
OVCAR Glso
TGI
LCgo
A498 Glso
TGI
LCso
DU145 Glso 4.76E-09 6.54E-09 3.92E-08 6,48E-09 |5,46E-09 6.97E-07
TGI 9,04E-09 1.18E-08 9,54E-08 4,61 E-08 j2,Q6E-08 1.08E-05
PL 218 295 B1
LC50 1,30E-08 1.30E-05 1,21 E-05 1.17E-05 1,21 E-05 1.26E-05
MCF GtS0
TGI
MB231 GUo
TGI
LC50
H-MEC-1 gi50 1.18E-08 7.53E-08 4,79E-08 2.60E-08 6.78E-09 5,7QE-07
1.77E-07 1,31 E-06 8,41 E-06 1,17E-06 1.50E-07 1.26E-05
LCgo 1.30E-05 1.30E-05 1,21 E-05 1,17E-05 1,21 E-05 1.26E-05
LNCAP GISq 2.02E-09 4,30E-09 3.83E-09 1,17E-10 2.65E-09 2,16E-07
TGI 3.76E-09 B.84E-09 1,21 E-08 3.25E-09 5.08E-09 4.28E-07
LC§0 7.OGE-O9 3,11E-08 4,82 E-08 1.75E-08 9.76E-09 8.45E-07
SK-0V3 GI50 3.39E-09 3.75E-08 4,06E-08 3.06E-08 8.98E-09 5.50E-07
TGI 7.17E-09 1,31 E-07 1.24E-07 2.00E-06 2.88E-07 1.12E-06
LC50 1.30E-08 1.30E-05 1,21 E-05 1.17E+05 1,21 E-05 1,26E-05
IGROV Gigo 2.73E-09 4.29E-09 4.35E-08 2,32E-08 1.06E-08 4,21 E-07
TGI 5.20E-09 1.22E-08 9.49E-08 5.40E-08 4.07E-08 8,32E-07
LC50 9.88E-09 9.30E-08 2.24E-06 1,92E-07 9,09E-07 5.62E-06
IGROV- ET GI50 9.10E-09 jjecz: fto Zti30iZwO 2 33.0 07 4.95E-08 S.97E-08 8.76E-07
TGI 2,35E-08 7.06E-08 2.56E-06 1.29E-07 3,61 E-06 1.26E-05
L»Cz50 1.30E-05 1.30E-07 1,21 E-05 7.35E-06 1,21 E-05 1,26E-05
SK-BR3 Gigo 3,77E-09 1.27E-08 6.68E-08 1.63E-08 7.56E-09 6,11 E-07
TGI 8.65E-09 4,27E-08 2.50E-07 5,84E-08 3.47E-08 1.69E-06
LCgo 4,11 E-08 1.77E-07 1,21 E-06 4.12E-07 6.93E-07 1,15E-05
K562 GI50 2,51 E-09 3.94E-09 2.13E-08 1.22E-G6 1,31 E-08 5,01 E-07
TGI 4.88E-G9 938E-09 5.45E-08 2.02E-06 2,11 E-06 1.76E-06
LC50 9.49E-09 1.07E-07 2.10E-07 3.38E-06 6,32 E-06 3,55E-06
PANC-1 GI50 5.28E-09 5.67E-08 2.86E-08 4,11 E-08 4.24E-08 7,06E-07
TGI 1.15E-08 1,55E»07 1.15E-06 2.58E-07 1,70E-06 1,21 E-05
LC50 3,90E-08 1.30E-05 1,21 E-05 1.17E-05 1,21 E-05 1.26E-05
LOVO GI50 3.50E-09 2.71E-08 4,29E-08 1.56E-08 S,26E-09 3.22E-07
TGI 8,32 E-09 5,10E-08 1.17E-07 5.70E-08 4.64E-08 6,28E-07
PL 218 295 B1
LCjo 3.89E-08 9,61 E-08 1.21E-05 1.17E-05 1,21E-O5 1.22E-06
LOVO- DOX Glso 3.98E-08 9.10E-08 3.49E-07 3.82E-08 4.07E-08 1,35E-06
TGl 1.06E-07 8.53E-07 1,03E-06 2,41 £-07 1.17E-07 6,21 E-06
LCso 1.30E-05 1,30E-05 1.21E-O5 1,17E-05 1.21E-05 1.26E-05
Gigo
HELA TGl
LCso
HELA- APL Gigo
TGl
LC50
Związek 49 Związek 51 Związek 57 Związek 62 Związek 68
A54$ Gbo 2,S4E-06 4.97E-06 9.37E-06 2,67E-08 6,11 E-08 1.29E-O6 1.03E-07 5,O7E-O7 1.22E-05 8.80E-09 3,3OE-O8 7J0E-08 2.83E-08 4.95E-08 1.01E-07
TGl
LC50
HT29 GI50 4,50E-06 1.26E-05 1,26E-G5 3,82E-08 1,31 E-06 1,11E-05 1,65E-07 1,41 E-06 1.22E-05 1.10E-08 6,6OE-O8 9.90E-08 3.17E-07 9,59E-08 1.17E-05
TGl
LCso
SW-620 GI50 2,20E-08 5,50E-08 1.10E-07
TGl LC50
MEL-28 GI50 2.84E-08 5,03E-08 8.93E-08 S.47E-08 2.09E-07 S.62E-O7 3,30E-09 1.10E-09 3,30E~08 7.52E-09 2,24E-08 B.72E-08
TGl
LCsg
OVCAR Glso
TGl
LC5o
A498 Glso 3.30E-09 4,40E-09 1.10E-08
TGl
LC50
DU145 GI50 4,83E-08 3.23E-07 1.12E-05 4.77E-08 1.84E-06 1,22E-O5 2.20E-09 4,40E-09 9.90E-09 2.99E-08 8,65E-08 1,03E-05
TGl
LCso
MCF Gigo 2.20E-09
PL 218 295 B1
TGf 9,9OE*O9 1,10E*07
LCgo
ΜΒ231 Gigo 1,10E-09 5.50E-09 3,3QE~G8
TGI
LCgo
H-MEC-1 Glso 1,9SE-06 4.12E-06 8.54E-06
TGI
LCso
LNCAP Glso 1,31 E-08 2.70E-08 5.48E-08 3,33E-08 7.17E-O8 2.32E-08 1.15E-08 2,66E-08 5.13E-O8
TGI
LCso
SK-0V3 Glso
TGI
LCso
IGROV Glso 3.23E-08 6.33E-08 3.55E-06 7.18E-O8 4,60E-07 7.43E-06 2.17E-O8 6,16E-08 1.09E-G6
TGI
LCgo
IGROV~ET Glso 2.63E-07 7,47E-06 1.12E-05 3.94E-07 1.15E-06 1.22E-05 3,08E-08 S.89E-08 2.OSE-O7
TGI
LCgo
SK-BR3 Gigo 3,98E-08 9.93E-08 3.11E-06 S,76E-08 3.13E-07 7.99E-06 2,90E-08 S.09E-08 2.06E-07
TGI
LCso
K562 Glso 1,65E-08 4,62 E-08 1.14E-07 4.77E-08 4.66E-07 1,22E-Q5 2.04E-08 4,47E-08 9.75E-08
TGI
LCso
PANC-1 Gfso 4,19E-08 1.33E-07 2.00E-06 1.13E-07 S.62E-07 1.22E-05 4,81 E-08 1.25E-07 1.17E-05
TGI
LCgo
LOVO Gigo 2,11 E-08 3.88E-08 7,10E-08 ?,30E-Q8 2.57E-07 9.05E-07 2,71 E-08 4.97E-08 9,13E-08
TGI
LC50
LOVO- GI50 3,81 E-07 4,87E-07 1.12E-07
PL 218 295 B1
DOX TGI LGgo 3,09E-06 1J2E-05 B.70E-06 1.22E-05 7,43E-07 1.17E-05
HELA Glso TGI LCgo 2.40E-08 4.85E-08 9,80E-08 4.37E-08 1.46E-07 S.52E-07 3,25E-08 8,03E-08 1.12E-07
HELA-APL GI5o TGI LCgo 2,91 E-08 4,97E-08 8.46E-08 6,14E-08 2,03E-07 8.50E-07 3.70E-08 6.19E-08 1,03E-07
Dane toksyczności
Oceny toksyczności dokonano metodami ujawnionymi w Toxicology in vitro, 15 (2001) 571-577, J. Luber Narod i współpr..Evaluation of the use of in vitro metodologies as tools for screening new compounds for potential in vivo toxicity”.
Metody
Celem dokonania oceny toksyczności leków względem normalnych komórek użyto płytki 96-studzienkowe pokryte z gęstością po 5000 komórek na studzienkę (z wyjątkiem FDC-P1, które pokryto po 12000 komórek na studzienkę) normalnych linii komórkowych (ATCC, tablica 1) utrzymywanymi według wytycznych ATCC: AML-12, normalne komórki wątroby myszy; NRK-52E, normalne komórki nerki szczura; L8, normalne komórki mięśni szkieletowych szczura; FDC-1, normalne komórki szpiku myszy; oraz H9c2 (2-1) normalne komórki mięśnia sercowego szczura. Komórki na każdej płytce pozostawiono do osadzenia przez noc, a następnie dodano testowany lek. Ponadto przygotowano hodowle pierwotnych neuronów z całego mózgu (przodomózgowie i pień mózgowy) i rdzenia kręgowego embrionu (dzień e-17) z użyciem opracowanych metod (Federoff i Richardson, 1997). Do każdej studzienki (100 μΙ środowiska) dodano 10 μΙ leku w środowisku w różnych stężeniach (1x1010-0,01 mg/ml finalnego stężenia), a następnie inkubowano przez noc w 37°C przy 5% CO2. Po 24 przeprowadzono poniższe oznaczenia. Wszystkie eksperymenty powtórzono co najmniej 3 razy powtarzając oznaczenie dwa razy.
1. Oznaczenie MTS (w wodzie CeIITiter 96) przeprowadzono według wskazówek producenta (Promega) (dla wszystkich rodzajów komórek). Żywotność komórek (czynność mitrochondrialna) określono na podstawie enzymatycznej konwersji substratu formazanowego.
Związek nr Wątroba Serce Szpik Kościec Nerka
1 2 3 4 5 6
26 1,06E-06 6,43E-07 1,03E-07 3,71E-08 4,60E-08
27 1,48E-08 9,93E-08 1,75E-08 1,54E-08 1,01E-08
28 1,42E-07 1,84E-07 2,00E-07 1,45E-07 8,37E-08
29 1,59E-08 7,22E-08 1,79E-08 3,29E-07 1,94E-08
30 2,72E-07 5,06E-07 7,58E-09 2,51E-08 4,19E-09
31 1,89E-08 6,65E-08 3,18E-08 1,35E-08 4,27E-08
32 6,00E-07 2,42E-07 5,25E-07 1,51E-08 1,45E-07
33 1,05E-08 1,27E-06 1,92E-08 1,41E-08 7,78E-09
34 2,55E-06 4,96E-07 1,15E-05 1,48E-08 2,74E-07
35 4,88E-08 1,93E-08 4,08E-08 3,07E-08 3,42E-08
36 3,19E-07 8,86E-07 2,05E-07 2,71E-08 3,56E-07
37 5,46E-09 1,74E-08 4,59E-09 2,22E-08 2,92E-08
PL 218 295 B1 cd. tabeli
1 2 3 4 5 6
38 1,39E-10 2,96E-09 9,66E-11 1,29E-08 9,85E-08
39 1,14E-06 NT 4,10E-07 4,58E-07 9,88E-05
40 3,86E-08 NT 4,08E-08 2,11E-07 2,95E-08
41 6,30E-08 3,49E-08 1,39E-07 2,39E-07 1,89E-08
42 1,86E-07 1,42E-07 6,41 E-08 3,37E-08 1,12E-09
43 7,57E-08 9,42E-08 6,23E-08 1,60E-07 4,38E-08
44 4,33E-07 5,20E-06 1,21E-07 4,02E-08 4,15E-07
46 5,01E-08 3,51E-08 1,17E-07 2,16E-07 4,01E-08
47 3,04E-08 7,36E-08 6,76E-08 2,57 E-08 3,15E-08
Oszacowanie profilu ADME-TOX związków in vitro
Współczynnik podziału (log D)
Współczynnik podziału związku chemicznego stanowi termodynamiczną miarę jego zrównoważenia hydrofilowo-lipofilowego. Lipofilowość stanowi podstawowy czynnik strukturalny, który wpływa na zachowanie farmakokinetyczne i farmakodynamiczne związków. Współczynnik podziału pomiędzy wodę i 1-oktanol jest najczęściej używaną miarą lipofilowości związku chemicznego.
Pomiar współczynnika podziału oszacowano na podstawie zminiaturyzowanej procedury wytrząsania w kolbie. Jako fazę wodną użyto bufor (Dulbecco PBS, pH 7,40). Testowany związek rozpuszczono w DMSO w stężeniu 100 μΜ. Finalne stężenie DMSO (1%) w trakcie rozekstrahowywania w oktanolu-buforze jest bardzo małe, aby uniknąć wpływu na podział. Ilość związku w fazie buforu określono za pomocą HPLC z diodowym układem detekcji po równowagowaniu fazy przez 60 minut. Ilość związku w fazie oktanolowej obliczono odejmując ilość związku w buforze od całkowitej ilości związku, którą określono z próbki kalibracyjnej.
Log D obliczono jako Iog10 ilości związku w fazie oktanolowej podzielonej przez ilość związku w fazie buforu. Efektywny zakres mikro-oznaczenia log D wynosi w przybliżeniu -0,5 do +4,5.
Oznaczenie absorpcji jelitowej in vitro
Przepuszczalność nabłonka jelitowego stanowi zasadniczą cechę, która determinuje szybkość i stopień absorpcji u człowieka, a zatem i biodostępność potencjalnego leku. Oznaczenie przepuszczalności Caco-2 umożliwia szybkie dokonanie oceny przepuszczalności membrany, a zatem pomaga uszeregować związki w kategorii potencjalnego stopnia ich absorpcji.
Linia komórkowa Caco-2 jest linią komórkową gruczolakoraka ludzkiej okrężnicy różnicująca się w hodowli i odzwierciedlającą wyściółkę nabłonkową ludzkiego jelita cienkiego. Jest szeroko stosowana jako model nabłonka jelitowego in vitro dla skriningu transportu leku i przepuszczalności nowoodkrytych związków.
Pozorne współczynniki przepuszczalności (Papp) określono w kierunku szczytowo-do-bocznopodstawnego (A-do-B) poprzez monowarstwy komórkowe (subklon TC-7 Caco-2) hodowane na poliwęglanowych membranach filtracyjnych. Związki testowano przy 50 μΜ przy finalnym stężeniu DMSO 1%. Próbki analizowano za pomocą HPLC-MS lub HPLC-MS/MS.
Związek testowany dodano od strony szczytowej i określano Papp na podstawie szybkości pojawiania się związku testowanego po stronie bocznopodstawnej po 2 godzinnym inkubowaniu. W każdym oznaczeniu jako próby kontrolne testowano dwa związki wzorcowe, propranolol (silnie przenikający) i ranitydynę (słabo przenikającą). Wyniki z tego oznaczenia mogą być użyte do uszeregowania związków w kategorii potencjalnego stopnia ich absorpcji. Związki o Papp równym lub wyższym od 20x 10-6 cm/s mogą być uważane za silnie przenikające i prawdopodobnie będą „ograniczane nie przez przepuszczalność”. Związki o Papp niższym od 5 x 10-6 cm/s są uważane za słabo przenikające i prawdopodobnie będą „ograniczane przez przepuszczalność”. Związki o Papp wyższym od 5 x 10-6, ale niższym od 20 x 10-6 cm/s są uważane za średnio przenikające.
Metabolizm
Metabolizm wątrobowy jest podstawową determinantą zachowania farmakokinetycznego, i szybki metabolizm pierwszego przejścia jest główną przyczyną niskiej biodostępności. Zebrane mikrosomy wątrobowe i rekombinacyjne cytochromy P450 są stosowane do oceny metabolizmu najlep46
PL 218 295 B1 szych, wiodących i nowych związków farmaceutycznych. Wyniki badań skriningu metabolizmu są użyteczne do:
- określania początkowej szybkości metabolizacji związków,
- badania głównych dróg metabolizmu leków,
- przewidywania in vivo zachowania farmakokinetycznego,
- badania potencjalnych interakcji Iekowo-Iekowych.
Stabilność metaboliczną określono z użyciem homogenatu ludzkiej wątroby S9, który wykazuje czynność zarówno enzymów mikrosomowych jak i cytosolowych. Związek testowany rozcieńczono w metanolu (0,625%) i acetonitrylu (0,625%) w stężeniu 1 μΜ i inkubowano w ludzkim płynie wątrobowym (1 mg/ml protein) przez 60 minut w 37°C. Pola pod pikami odpowiadającymi wszystkim analitom (produktom metabolizcznym) określono za pomocą HPLC-MS/MS. Zarejestrowano pola powierzchni i proporcje pól powierzchni pików analitów względem wewnętrznego standardu dla każdego analitu. Proporcja związku prekursorowego pozostałego po 60 minutach i ilość pozostająca w czasie zero, wyrażona w procentach, została podana jako stabilność metaboliczna. Wyższe wartości oznaczają wyższą stabilność metaboliczną.
Inhibitowanie cytochromów P450 (CYP450)
Cytochromy P450 stanowią grupę pokrewnych enzymów, przede wszystkim zlokalizowanych w wątrobie i odpowiedzialnych za metabolizm leków. Inhibitowanie takowych CYP przez leki wiąże się z interakcjami Iekowo-Iekowymi i toksycznością.
CYP3A4 jest najbardziej typową postacią enzymów CYP3A znajdowanych u dorosłych i stanowi postać angażowaną w większość interakcji lekowych. CYP2D6 metabolizuje ponad 25% klinicznie użytecznych środków medycznych.
Celem oznaczenia inhibitowania CYP2D6, związek testowano dwukrotnie w 10 μΜ przy finalnym stężeniu 0,25% albo metanolu albo acetonitrylu w obecności fluorescencyjnego substratu AMMC (3-[2-N,N-dietylo-N-metyloammonio)etylo]-7-metoksy-4-metylokumaryna) w stężeniu 1,5 μΜ). Konwersję AMMC do AHMC (3-[2-N,N-dietylo-N-metyloammonio)etylo]-7-hydroksy-4-metylokumaryny) określano spektrofluorometrycznie po inkubowaniu z enzymem przez 450 minut w 37°C.
Celem oznaczenia inhibitowania CYP3A4, związek testowano dwukrotnie w 10 μΜ przy finalnym stężeniu 0,25% albo metanolu albo acetonitrylu w obecności fluorescencyjnego substratu BFC (50 μΜ). Konwersję BFC (7-benzyloksy-4-trifluorometylokumaryna) do HFC (7-hydroksy-4-trifluorometylokumaryna) określano spektrofluorometrycznie po inkubowaniu z enzymem przez 30 minut w 37°C.
W obu oznaczeniach, intensywność fluorescencji mierzoną w t = 0 odjęto od tej zmierzonej po odpowiednim czasie inkubowania. Proporcję sygnału do szumu obliczono porównując fluorescencję inkubowanych próbek zawierających związek testowany z próbkami kontrolnymi zawierającymi same podłoże rozpuszczalnikowe. Obliczono procent czynności kontrolnej i podano jako procent inhibitowania.
Ocena bezpieczeństwa in vitro. Żywotność komórek
Potencjał toksyczności związków badano in vitro z użyciem pierwotnych ludzkich hepatocytów (HEPG2). Związki testowano w 30 μΜ dwukrotnie przy finalnym stężeniu DMSO 1%. Po 24 godzinnym inkubowaniu w 37°C, żywotność komórek określono na podstawie konwersji utlenionego błękitu alarmar (resazuryny) do zredukowanej postaci błękitu alarmar (resorufiny). Jako związek wzorcowy użyto chlorpromazynę. Wyniki wyrażono jako procent inhibitowania wartości kontrolnych.
Wyniki badania ADME-TOX
Związek Względna powierzchnia podstawowego piku (czystość chromatograficzna) Rozpuszczalność Dulbecco PBS pH 7,4 Log D n-oktanol/ Dulbecco PBS pH 7,4 Przenikanie A do B komórki TC 7
1 2 3 4 5
31 97,4 18,28 3,61 <0,32
35 99,0 <1 est >5,0 PD
26 (ET-736) 62,9 <1 est >5,0 PD
27 84,9 2,99 >5,0 <1,18
34 98,6 17,65 >5,0 5,00
PL 218 295 B1 cd. tabeli
1 2 3 4 5
33 82,6 68,94 3,50 7,77
28 88,8 <1 est >4,6 ND
29 97,5 1,59 >4,9 ND
30 100,0 2,24 >4,9 ND
32 92,8 14,28 >4,3 PD
36 98,4 26,03 >4,4 PD
43 96,0 5,85 >4,5 ND
44 97,4 20,69 >4,9 PD
41 92,9 <1est >4,5 ND
42 96,8 10,37 >4,8 PD
46 95,9 1,37 >5,0 PD
47 87,4 <1 est >5,0 PD
Związek Stabilność metaboliczna (% pozostały) CYP2D6 (% inhibitowania) CYP2D6 (% inhibitowania) Żywotność komórek (% inhibitowania)
31 17 - 84 22
35 4 - 24 23
26 (ET-736) 3 12 45 -
27 7 13 53 -
34 24 28 80 45
33 10 28 84 32
28 33 34 79 17
29 9 27 55 29
30 6 - 25 -
32 9 12 83 39
36 2 15 78 33
43 3 - 15 -
44 4 16 72 73
41 7 16 22 16
42 5 19 78 67
46 7 16 60 33
47 5 10 38 18
PL 218 295 B1

Claims (17)

1. Związek o wzorze ogólnym I:
n(Rl)
Me ^-0
X w którym grupa R1 jest wybrana z grupy obejmującej OH, OR', halogen oraz C1-C3 alkil, w którym R' oznacza C1-C3 alkil, który może być opcjonalnie podstawiony grupą fenylową;
w którym grupa R2 jest grupą o wzorze C(=O)R', w którym R' oznacza C1-C3 alkil; w którym R3 oznacza H;
w którym R4 jest wybrana z grupy obejmującej H i C1-C3 alkil; w którym R5 jest wybrana z grupy obejmującej H i C1-C3 alkil; w którym X oznacza OH lub CN;
w którym m oznacza 0, lub 1; oraz w którym n oznacza 1.
2. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że R1 oznacza hydroksyl, fluor, metyl, metoksyl lub benzyloksyl, a n oznacza 1.
3. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że R2 oznacza acetyl.
4. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że R4 oznacza wodór lub metyl.
5. Związek według zastrz. 1, znamienny tym, że R5 oznacza wodór lub metyl, a m jest 1.
6. Związek według któregokolwiek z zastrz. od 1 do 5, znamienny tym, że X oznacza hydroksyl.
7. Związek według któregokolwiek z zastrz. od 1 do 5, znamienny tym, że X oznacza grupę cyjankową.
8. Związek według zastrz. 1 o wzorze:
Me
9. Związek według zastrz. 1 o wzorze:
M
Me
Ó
ÓH
PL 218 295 B1
10. Związek według zastrz. 1 o wzorze:
11. Związek według zastrz. 1 o wzorze:
HO
12. Związek według zastrz. 1 o wzorze:
13. Związek według zastrz. 1 o wzorze:
PL 218 295 B1
14. Związek według zastrz. 1 o wzorze:
16. Związek według zastrz. 1 o wzorze:
17. Kompozycja farmaceutyczna zawierająca substancję czynną wraz z farmaceutycznie dopuszczalnym rozcieńczalnikiem, znamienna tym, że jako substancję czynną zawiera związek określony w zastrzeżeniach 1-16.
18. Zastosowanie związku o ogólnym wzorze I określonego dowolnym z zastrz. od 1 do 16 do wytwarzania lekarstwa do leczenia raka.
PL367940A 2001-08-07 2002-08-06 Pochodne ekteinascydyny, kompozycja je zawierająca oraz ich zastosowanie PL218295B1 (pl)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB0119243.4A GB0119243D0 (en) 2001-08-07 2001-08-07 Antitumoral analogs of ET-743
PCT/GB2002/003592 WO2003014127A1 (en) 2001-08-07 2002-08-06 Antitumoral analogs

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL367940A1 PL367940A1 (pl) 2005-03-07
PL218295B1 true PL218295B1 (pl) 2014-11-28

Family

ID=9919954

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL367940A PL218295B1 (pl) 2001-08-07 2002-08-06 Pochodne ekteinascydyny, kompozycja je zawierająca oraz ich zastosowanie

Country Status (23)

Country Link
US (1) US7763615B2 (pl)
EP (3) EP1414828B9 (pl)
JP (2) JP4684552B2 (pl)
KR (1) KR20040032150A (pl)
CN (1) CN100334094C (pl)
AT (1) ATE374777T1 (pl)
AU (1) AU2002313540B2 (pl)
CA (1) CA2455768C (pl)
CY (1) CY1107830T1 (pl)
DE (1) DE60222775T2 (pl)
DK (1) DK1414828T3 (pl)
ES (1) ES2294151T3 (pl)
GB (1) GB0119243D0 (pl)
HK (1) HK1065786A1 (pl)
HU (1) HU229779B1 (pl)
IL (2) IL160051A0 (pl)
MX (1) MXPA04001240A (pl)
NO (1) NO337476B1 (pl)
NZ (1) NZ530837A (pl)
PL (1) PL218295B1 (pl)
PT (1) PT1414828E (pl)
RU (1) RU2283842C2 (pl)
WO (1) WO2003014127A1 (pl)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0202544D0 (en) * 2002-02-04 2002-03-20 Pharma Mar Sa The synthesis of naturally occuring ecteinascidins and related compounds
ES2523580T3 (es) 2008-01-11 2014-11-27 Albany Molecular Research, Inc. Piridoindoles substituidos con (1-Azinona)
JP2012532144A (ja) * 2009-07-01 2012-12-13 アルバニー モレキュラー リサーチ， インコーポレイテッド アジノン置換アゼピノ［ｂ］インドールおよびピリド−ピロロ−アゼピンｍｃｈ−１拮抗薬、ならびにその作製方法および使用
WO2011003012A1 (en) * 2009-07-01 2011-01-06 Albany Molecular Research, Inc. Azinone-substituted azapolycycle mch-1 antagonists, methods of making, and use thereof
WO2011003021A1 (en) * 2009-07-01 2011-01-06 Albany Molecular Research, Inc. Azinone-substituted azabicycloalkane-indole and azabicycloalkane-pyrrolo-pyridine mch-1 antagonists, methods of making, and use thereof
WO2011003007A1 (en) * 2009-07-01 2011-01-06 Albany Molecular Research, Inc. Azabicycloalkane-indole and azabicycloalkane-pyrrolo-pyridine mch-1 antagonists, methods of making, and use thereof
CN107033164A (zh) * 2010-05-25 2017-08-11 法马马有限公司 制备海鞘素化合物的合成方法
KR20170096224A (ko) * 2010-11-12 2017-08-23 파르마 마르 에스.에이. 항종양 알칼로이드를 이용한 병용요법
CN103229503B (zh) 2010-11-26 2016-06-29 日本电气株式会社 图像编码设备、图像解码设备、图像编码方法、图像解码方法和程序
US8993765B2 (en) 2010-12-21 2015-03-31 Albany Molecular Research, Inc. Tetrahydro-azacarboline MCH-1 antagonists, methods of making, and uses thereof
US8697700B2 (en) 2010-12-21 2014-04-15 Albany Molecular Research, Inc. Piperazinone-substituted tetrahydro-carboline MCH-1 antagonists, methods of making, and uses thereof
WO2017067670A1 (en) 2015-10-23 2017-04-27 Pharmathen S.A. A novel process for the preparation of tryptamines and derivatives thereof
JOP20190254A1 (ar) * 2017-04-27 2019-10-27 Pharma Mar Sa مركبات مضادة للأورام
TWI824043B (zh) * 2018-10-25 2023-12-01 西班牙商瑪製藥股份有限公司 藥物抗體共軛物
AU2020342483A1 (en) 2019-09-03 2022-04-14 Pharma Mar, S.A. Lurbinectedin in the treatment of malignant mesothelioma
CN112574234B (zh) * 2019-09-27 2022-05-24 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种海鞘素衍生物的制备方法
CA3158733A1 (en) * 2019-11-21 2021-05-27 Pilar Calvo Methods of treating small cell lung cancer with lurbinectedin formulations
WO2021228414A1 (en) 2020-05-14 2021-11-18 Pharma Mar, S.A. Methods of treating small cell lung cancer with lurbinectedin formulations
MA56827B2 (fr) 2019-11-21 2023-09-27 Pharma Mar Sa Procédés de traitement du cancer du poumon à petites cellules avec des formulations de lurbinectédine
PE20230785A1 (es) 2020-04-21 2023-05-11 Pharma Mar Sa Conjugados de anticuerpos de farmacos
TW202144369A (zh) * 2020-04-26 2021-12-01 大陸商江蘇恆瑞醫藥股份有限公司 海鞘素類衍生物及其製備方法與醫藥用途
JP2023541010A (ja) 2020-09-04 2023-09-27 ファルマ、マール、ソシエダード、アノニマ ルルビネクテジンと免疫チェックポイント阻害剤との組合せ
WO2022101255A1 (en) 2020-11-10 2022-05-19 Pharma Mar, S.A. Lurbinectedin and irinotecan combinations
WO2023031960A1 (en) * 2021-08-31 2023-03-09 Natco Pharma Limited Novel crystalline polymorph of lurbinectedin and improved process for the preparation of lurbinectedin
EP4430075A1 (en) 2021-11-08 2024-09-18 Pharma Mar S.A. Lurbinectedin and atezolizumab combinations
CN115246846B (zh) * 2021-11-19 2024-10-01 江苏慧聚药业股份有限公司 卢比替定新晶型及其制备
CN115304619A (zh) * 2022-04-08 2022-11-08 上海皓元医药股份有限公司 一种卢比替定的晶型及其制备方法
CN114940682A (zh) * 2022-05-18 2022-08-26 博瑞制药(苏州)有限公司 芦比替定的晶型及其制备方法和用途
WO2024186263A1 (en) * 2023-03-07 2024-09-12 Axcynsis Therapeutics Pte. Ltd. Antibody-drug conjugates comprising trabectedin and lurbinectedin derivatives
WO2024188978A1 (en) 2023-03-10 2024-09-19 Pharma Mar, S.A. Lurbinectedin as mcl-1 inhibitor and combinations thereof for use in treating cancer

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS59225189A (ja) 1983-06-03 1984-12-18 Shionogi & Co Ltd キノナミン誘導体およびその製造法
JPS6084288A (ja) 1983-10-13 1985-05-13 Shionogi & Co Ltd シアノキノナミンアセテ−ト類およびその製造法
US5149804A (en) * 1990-11-30 1992-09-22 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Ecteinascidins 736 and 722
WO1987007610A2 (en) 1986-06-09 1987-12-17 University Of Illinois Ecteinascidins 729, 743, 745, 759a, 759b and 770
US5256663A (en) * 1986-06-09 1993-10-26 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Compositions comprising ecteinascidins and a method of treating herpes simplex virus infections therewith
US5089273A (en) 1986-06-09 1992-02-18 Board Of Trustees Of The University Of Illinois Ecteinascidins 729, 743, 745, 759A, 759B and 770
US5478932A (en) * 1993-12-02 1995-12-26 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Ecteinascidins
US5721362A (en) 1996-09-18 1998-02-24 President And Fellows Of Harvard College Process for producing ecteinascidin compounds
US5985876A (en) 1997-04-15 1999-11-16 Univ Illinois Nucleophile substituted ecteinascidins and N-oxide ecteinascidins
WO1999051238A1 (en) * 1998-04-06 1999-10-14 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Semi-synthetic ecteinascidins
JP4583598B2 (ja) 1998-05-11 2010-11-17 ファルマ・マール・ソシエダード・アノニマ エクテイナシジン７４３の代謝産物
US6124292A (en) * 1998-09-30 2000-09-26 President And Fellows Of Harvard College Synthetic analogs of ecteinascidin-743
MY130271A (en) 1999-05-14 2007-06-29 Pharma Mar Sa Hemisynthetic method and new compounds
US6686470B2 (en) * 2000-01-19 2004-02-03 The Trustees Of Columbia University In The City Of New York Compounds of the saframycin-ecteinascidin series, uses, and synthesis thereof
BRPI0110024B8 (pt) 2000-04-12 2021-05-25 Pharma Mar Sa derivados de ecteinascidina antitumorais, composição farmacêutica que os compreende e uso dos mesmos
MXPA02011319A (es) * 2000-05-15 2003-06-06 Pharma Mar Sa Analogos antitumorales de ecteinascidina 743.

Also Published As

Publication number Publication date
IL160051A (en) 2012-01-31
NZ530837A (en) 2005-07-29
KR20040032150A (ko) 2004-04-14
PT1414828E (pt) 2007-12-27
DK1414828T3 (da) 2008-02-04
IL160051A0 (en) 2004-06-20
EP1414828B1 (en) 2007-10-03
MXPA04001240A (es) 2004-06-03
RU2004106617A (ru) 2005-04-10
ES2294151T3 (es) 2008-04-01
EP2270018A1 (en) 2011-01-05
CN1564822A (zh) 2005-01-12
HUP0401174A3 (en) 2005-12-28
NO337476B1 (no) 2016-04-18
DE60222775D1 (de) 2007-11-15
HK1065786A1 (en) 2005-03-04
WO2003014127A1 (en) 2003-02-20
GB0119243D0 (en) 2001-10-03
JP2011026331A (ja) 2011-02-10
US20060128711A1 (en) 2006-06-15
CA2455768A1 (en) 2003-02-20
ATE374777T1 (de) 2007-10-15
DE60222775T2 (de) 2008-07-17
PL367940A1 (pl) 2005-03-07
CY1107830T1 (el) 2013-06-19
EP1414828A1 (en) 2004-05-06
HUP0401174A2 (hu) 2005-09-28
EP1806349A1 (en) 2007-07-11
AU2002313540B2 (en) 2008-05-22
JP2005501093A (ja) 2005-01-13
JP4684552B2 (ja) 2011-05-18
US7763615B2 (en) 2010-07-27
EP1414828B9 (en) 2008-02-20
HU229779B1 (en) 2014-07-28
NO20040961L (no) 2004-03-05
RU2283842C2 (ru) 2006-09-20
CN100334094C (zh) 2007-08-29
CA2455768C (en) 2011-10-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
PL218295B1 (pl) Pochodne ekteinascydyny, kompozycja je zawierająca oraz ich zastosowanie
AU2002313540A1 (en) Antitumoral analogs
AU784249C (en) Antitumoral ecteinascidin derivatives
US8076337B2 (en) Antitumoral derivatives of ET-743
EP2305689B1 (en) The synthesis of naturally occuring ecteinascidins and related compounds
AU2002317967A1 (en) New antitumoral derivatives of ET-743