ES2269180T3

ES2269180T3 - Utilizacion de un producto de aceite vegetal como agente para aumentar la sintesis de los lipidos cutaneos.

Info

Publication number: ES2269180T3
Application number: ES00964325T
Authority: ES
Inventors: Philippe Msika; Antoine Piccirilli
Original assignee: Laboratoires Expanscience SA
Current assignee: Laboratoires Expanscience SA
Priority date: 1999-09-22
Filing date: 2000-09-20
Publication date: 2007-04-01
Anticipated expiration: 2020-09-20
Also published as: EP1707189A2; EP1707189B1; EP1707189B2; TWI238724B; ATE334653T1; US20090286871A1; US8147883B1; KR20020047180A; EP1214051A1; EP1707189A3; FR2798591A1; ES2460965T5; WO2001021150A1; DE60029801D1; DE60029801T2; EP1214051B1; ES2460965T3; FR2798591B1; US8053003B2; HK1095283A1

Abstract

Utilización de lípidos furánicos de aceite vegetal para la preparación de una composición dermatológica destinada al tratamiento de pieles sensibles, pieles irritadas, pieles reactivas, pieles atópicas, descamación cutánea, prurito, ictiosis, acné, xerosis, dermatitis atópica, o capas epidérmicas de la capa córnea o de la granulosa de pieles que hayan sido sometidas a una radiación actínica, en particular una radiación UV.

Description

Utilización de un producto de aceite vegetal como agente para aumentar la síntesis de los lípidos cutáneos.

La presente invención se refiere a la utilización de un producto de aceite vegetal como agente para aumentar la síntesis de los lípidos cutáneos, en particular lípidos de la barrera cutánea epidérmica, en o para la preparación de una composición cosmética, farmacéutica o dermatológica. La invención da a conocer asimismo un método de tratamiento cosmético con una composición cosmética, farmacéutica o dermatológica para aumentar la síntesis de los lípidos cutáneos, en particular lípidos de la barrera cutánea epidérmica, y a la utilización del producto vegetal como aditivo alimentario.

La piel está principalmente constituida de tres capas, la epidermis, la dermis y la hipodermis.

La capa más externa, la epidermis, se caracteriza por una organización en capas que corresponden a un estado de diferenciación creciente de los queratinocitos, de la zona más profunda (capa basal) hasta la zona más superficial (capa córnea) en el seno de la cual elementos anucleados (corneocitos) están incluidos en una estructura lipídica extracelular multilaminar, el cemento intercornecitario, responsable de la función de barrera hídrica de la piel y de protección contra las agresiones exteriores.

Los cuerpos laminares o de Oddland, segregados por la capa granulosa, capa intermedia entre la capa basal y la capa córnea, contiene colesterol, fosfolípidos y glucosilceramidas, así como hidrolasas selectivas. Estas enzimas convierten los fosfolípidos y las glucosilceramidas en ácidos libres y en ceramidas que forman, con el colesterol y el sulfato de colesterol, las bicapas laminares intracelulares de la capa córnea. Las ceramidas participan de manera preponderante en la formación de la barrera constituida por la capa córnea, y en la regulación de los flujos hídricos, rigidizando las laminas. Se observa en particular una disminución importante del contenido en, y del tipo de, ceramida en la dermatitis atípica (o eccema atópico) o el acné (ceramida 1) y en las pieles secas y pruritos de las personas de edad avanzada. El sulfato de colesterol, vía una sulfatasa específica, está en equilibrio con el colesterol (agente de fluidez de las capas). Tienen un papel importante en la cohesión de los corneocitos, y por lo tanto en la descamación cutánea, así como en el bienestar cutáneo.

La alteración de esta barrera cutánea provocada por agresiones exteriores (rayos UV, viento, frío, detergentes, etc.), por el fenómeno natural e inexorable del envejecimiento y/o por disfunciones patológicas o no (pieles sensibles, irritadas, o reactivas) se traduce mediante una perturbación de la homeostasis epidérmica que es deseable poder prevenir y/o tratar tanto en el plano cosmético como farmacéutico y en particular dermatológico.

Por ejemplo, el artículo de Ruby Ghadially et al., "Decreased Epidermal Lipid Síntesis Accounts for Altered Barrier Function in Aged Mice", The Journal Of Investigate Dermatology, Vol. 106, nº 5, mayo de 1996, explica que una barrera cutánea alterada así como un contenido anormal en lípidos en una epidermis vieja de ratón puede explicarse mediante una síntesis alterada de los lípidos epidérmicos.

Por lo tanto, existe una necesidad de poder estimular la síntesis de los lípidos cutáneos, en particular de los lípidos de la barrera epidérmica, a fin de poder, en particular, restaurar la función de barrera cutánea de la epidermis y/o luchar contra los diversos trastornos cutáneos relacionados con una bajada de las síntesis de los lípidos cutáneos, en particular de los lípidos de la barrera cutánea epidérmica.

Se ha encontrado ahora de manera muy sorprendente e inesperado que la utilización de algunos aceites vegetales permite aumentar ventajosamente la síntesis de los lípidos cutáneos, en particular de los lípidos de la barrera cutánea epidérmica.

Así, la presente invención se refiere a la utilización de lípidos furánicos de aceites vegetales como agente para aumentar la síntesis de los lípidos cutáneos, en particular de los lípidos de la barrera cutánea epidérmica conocidos por el experto en la técnica, tal como los mencionados aquí arriba, en o para la preparación de una composición que contiene un medio cosmético, farmacéutico o dermatológico aceptable.

Así, la presente invención tiene por objeto la utilización de lípidos furánicos de aceite vegetal para la preparación de una composición dermatológica destinada al tratamiento de pieles sensibles, pieles irritadas, pieles reactivas, pieles atípicas, de la descamación cutánea, del prurito, de la ictiosis, del acné, de la xerosa, de la dermatitis atípica, o de las capas epidérmicas de la capa córnea o de la granulosa de pieles que hayan sufrido una radiación actínica, en particular una radiación UV. Los lípidos cutáneos se eligen, entre otros, entre los lípidos epidérmicos del grupo que consiste en colesterol, sulfato de colesterol, ceramidas 1 y 2 y mezclas de estos últimos.

Entre los aceites vegetales que se pueden usar, se pueden citar en particular el aceite de girasol, palma, palmista, coco, pepitas de uvas, mostaza negra, adormidera, manteca de carita, almendra dulce, soja, aguacate, cacahuete, algodón, sésamo, oliva, maíz, cacao, ricino, Ben, lino, colza, achiote, gérmen de trigo, cardo lanudo, nuez, avellana y nabina.

Mediante la expresión "lípidos furánicos de aceite vegetal", se entiende según la invención, compuestos que comprende una cadena principal lineal hidrocarbonada de C_{11}-C_{19}, saturada o que comprende una o varias instauraciones etilénicas o acetilénicas, y un grupo 2-furanilo en uno de sus extremos. Entre los lípidos furánicos de aceite vegetal que se pueden usar según la invención, se prefieren, muy particularmente, los lípidos furánicos de aguacate. En efecto, el aguacate comprende lípidos particulares de tipo furánicos, cuyo componente principal es un furano linoleico:

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Los derivados furánicos del aceite de aguacate se han descrito en particular en Farines, M. et al., 1995, J. of Am. Oil Chem. Soc. 72, 473, y se sabe que permiten estimular el metabolismo de la piel y de las mucosas (documento EP 0775480A), en particular mediante proliferación de las células cutáneas, y mediante la síntesis de proteínas, ADN y colágeno. Hoy en día, está bien establecido que la presencia de estos compuestos furánicos en las hojas o frutos depende no sólo de la variedad (siendo las variedades Hass y Fuerte las más ricas en compuestos furánicos), sino también del modo de obtención del aceite o de otro extracto del aguacate (extracto hexánico o etanólico de las hojas de aguacate).

En efecto, se sabe que estos lípidos furánicos son metabolitos de compuestos inicialmente presentes en el fruto y en las hojas que, bajo el efecto del calor, se deshidratan y se ciclan en derivados furánicos.

Por ejemplo, el furano linoleico proviene de la transformación térmica del precursor siguiente:

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Mediante la expresión "lípidos furánicos de aguacate", se entiende en particular según la invención los componentes que corresponden a la fórmula:

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en la que R es una cadena lineal hidrocarbonada de C_{11}-C_{19}, preferentemente C_{13}-C_{17}, saturada o que comprende una o varias instauraciones etilénicas o acetilénicas.

Los procedimientos conocidos para la obtención de estos compuestos específicos a partir del fruto o del aceite de fruto del aguacate se resumen a la cromatografía preparativa, o bien a procedimientos industriales que permiten obtener estos lípidos furánicos en mezcla con otros compuestos insaponificables de aguacate, con un contenido máximo en lípidos furánicos comprendido, en el mejor de los casos, entre 50 y aproximadamente 65% en peso solamente.

Un nuevo procedimiento de preparación de estos lípidos furánicos del aguacate ha sido objeto del depósito de una solicitud de patente este mismo día. Esencialmente, consiste en un procedimiento de extracción selectiva de los lípidos furánicos de aguacate, caracterizado porque comprende las etapas que consisten en preparar un insaponificable de aguacate, y después en someter el insaponificable de aguacate a una etapa de destilación molecular utilizando medios de temperatura ajustados para una temperatura comprendida entre 100 y 160ºC, y medios de presión ajustados para una presión comprendida entre 10^{-3} y 5.10^{-2} mmHg.

Esta etapa de destilación molecular que usa condiciones de temperatura y presión específicas, constituye una característica esencial de este procedimiento, en combinación con la etapa previa de preparación del insaponifi-
cable.

Se pueden utilizar distintos métodos para concentrar la fracción insaponificable de un aceite vegetal: cristalización en frío, extracción líquido-líquido, destilación molecular.

Se prefiere particularmente la destilación molecular, siendo realizada preferentemente a una temperatura comprendida entre aproximadamente 180 y aproximadamente 260ºC, manteniendo una presión comprendida entre aproximadamente 10^{-3} y aproximadamente 10^{-2} mmHg, y preferentemente del orden de 10^{-3} mmHg. La concentración de insaponificable del destilado puede alcanzar 60%.

Esta destilación molecular, así como cualquier otra destilación molecular para la preparación de los productos vegetales a utilizar según la invención, se realiza preferentemente utilizando un dispositivo elegido entre los destiladores moleculares de tipo centrífugo o los dispositivos moleculares de tipo película raspada.

Los destiladores moleculares de tipo centrífugo son conocidos por el experto en la técnica. Por ejemplo, la solicitud EP 0.493.144 describe un destilador molecular de este tipo. De manera general, el producto a destilar se extiende en fina capa sobre la superficie calentada (superficie caliente) de un rotor cónico que gira a gran velocidad. El recinto de destilación se pone a vacío. En estas condiciones, hay evaporación y no ebullición, desde la superficie caliente, de los constituyentes del insaponificable, siendo la ventaja que el aceite y el insaponificable (siendo estos productos considerados como frágiles) no se degradan durante la evaporación.

Los destiladores moleculares de tipo película raspada, igualmente conocidos por el experto en la técnica, comprenden una cámara de destilación dotados de un raspador giratorio, que permite la extensión continua sobre la superficie de evaporación (superficie caliente) del producto a destilar. Los vapores de producto se condensan mediante un dedo refrigerado, puesto en el centro de la cámara de destilación. Los sistemas periféricos de alimentación y de vacío son muy parecidos a los de un destilador centrífugo (bombas de alimentación, bombas a vacío con paletas y con difusión de aceite, etc.). La recuperación de los residuos y de los destilados en balón de vidrio, se realiza mediante escurrimiento gravitacional.

El contenido más importante de insaponificable en el aceite de aguacate con relación a otros aceites vegetales se explica, en particular, por la presencia, en el insaponificable de aceite de aguacate, de constituyentes que, generalmente, no se encuentran en el insaponificable de numerosos otros aceites vegetales tales como compuestos furánicos y alcoholes grasos polihidroxilados y que, ellos solos, representan más de 50% del insaponificable. Los productos propios de este insaponificable de aguacate se pueden repartir en dos fracciones químicas llamadas "fracción I" y "fracción II". Los compuestos activos para la utilización según la invención se encuentran presentes en la fracción H y sus precursores. La fracción H aparece en primer lugar en un cromatógrafo en fase gaseosa del insaponificable de aceite de aguacate.

Según la invención, el producto vegetal, tal como se ha descrito anteriormente, se utiliza según una proporción comprendida entre aproximadamente 0,01 y 100% en peso, preferentemente entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 10% en peso, con relación al peso total de la composición.

El medio cosmético, farmacéutico o dermatológicamente aceptable para la utilización según la invención puede ser cualquier medio adaptado para las formas galénicas conocidas por el experto en la técnica, a la vista de una administración por vía tópica oral, entérica o parenteral.

Particularmente, este medio puede ser una disolución aceitosa, una emulsión de agua en aceite, una emulsión de aceite en agua, una microemulsión, un gel aceitoso, un gel anhidro, una dispersión de vesículas, de microcápsulas o de micropartículas.

Preferentemente, la composición para la utilización según la invención se adapta para una administración mediante aplicación tópica.

El efecto ventajoso de aumento de la síntesis de los lípidos cutáneos, en particular de los lípidos de la barrera cutánea epidérmica, permite prevenir y/o tratar; en otros términos, permite el tratamiento de las alteraciones de la barrera
cutánea formada principalmente por capas epidérmicas de la capa córnea y granulosa, tal como se explica aquí arriba.

Así, la composición se puede destinar al tratamiento de pieles secas que hayan sufrido radiaciones actínicas, en particular radiaciones U.V. tal como la radiación solar o la radiación de una lámpara U.V., por ejemplo durante una sesión de bronceado artificial.

La composición se puede asimismo destinar al tratamiento de la ictiosis, del acné, de la xerosis, de la dermatitis atópica (o eccema atópico), de los trastornos cutáneos relacionados con una bajada de los contenidos en lípidos cutáneos, en particular de los lípidos de la barrera cutánea epidérmica, de los trastornos de la cohesión de los corneocitos y de la descamación cutánea, de pieles sensibles, irritadas y reactivas, y del prurito.

La presente invención describe asimismo un método de tratamiento cosmético de los trastornos relacionados con el envejecimiento de la piel, de las mucosas contiguas y/o de los fáneros, caracterizado porque se aplica sobre la piel, las mucosas contiguas y/o los fáneros, una composición que contiene por lo menos un producto de aceite vegetal en un medio cosméticamente aceptable tales como se describen aquí arriba.

Por otra parte, la invención describe un método de tratamiento cosmético de los trastornos relacionados con la desecación de la piel, de las mucosas contiguas y/o de los fáneros, caracterizado porque se aplica sobre la piel, las mucosas contiguas y/o los fáneros, una composición que contiene por lo menos un producto de aceite vegetal en un medio cosméticamente aceptable tales como se describen aquí arriba.

La invención describe también un método de tratamiento cosmético de los trastornos de la piel, de las mucosas contiguas y/o de los fáneros, que resultan de una exposición a radiaciones actínicas, en particular radiaciones U.V., caracterizado porque se aplica sobre la piel, las mucosas contiguas y/o los fáneros, una composición que contiene por lo menos un producto de aceite vegetal en un medio cosméticamente aceptable tales como se describen aquí
arriba.

En estos métodos de tratamiento cosméticos, el producto vegetal está presente en la composición según una proporción comprendida entre aproximadamente 0,01 y 100% en peso, preferentemente entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 10% en peso, con relación al peso total de la composición.

La presente invención describe igualmente una composición cosmética, farmacéutica o dermatológica para aumentar la síntesis de los lípidos cutáneos, en particular de los lípidos de la barrera cutánea epidérmica, caracterizada porque comprende por lo menos un producto de aceite vegetal en un medio cosmética, farmacéutica o dermatológicamente aceptable, tales como se describen aquí arriba.

Preferentemente, en esta composición, el producto de aceite vegetal está presente en la composición según una proporción comprendida entre aproximadamente 0,01 y 100% en peso, preferentemente entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 10% en peso, con relación al peso total de la composición.

Finalmente, la invención tiene también por objeto la utilización de por lo menos un producto de aceite vegetal, tal como se describe aquí arriba, como aditivo en un alimento para el ser humano y/o el animal.

En esta utilización alimentaria, el producto de aceite vegetal está presente en el alimento según una proporción comprendida entre aproximadamente 0,1 y aproximadamente 20% en peso, con relación al peso total del alimento.

Los ejemplos siguientes están destinados a ilustrar la presente invención y no deben en ningún caso ser interpretados como limitativos.

Por lo menos que se precise de otra forma, los porcentajes indicados en los ejemplos siguientes son porcentajes en peso.

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Ejemplo 1 Preparación de productos de aceite vegetal y su utilización según la invención en forma de emulsiones de aceite en agua

Las composiciones 1.1 a 1.3 y la composición placebo siguientes se han preparado cada una de la siguiente manera:

Los componentes que constituyen la fase acuosa (agua y glicerina) se disponen en baño maría a 75ºC. Los componentes de la fase grasosa, con excepción del SEPIGEL 305, de la SILICONE SF 1202 y del producto de aceite vegetal (respectivamente preparados a continuación con la denominación de "Oleodestilado de girasol-1", "Insaponificables-1" y "Lípidos-1"), se disponen en baño maría a 75ºC. Justo antes de realizar la emulsificación, se añade a la fase grasosa la SILICONE 1202 y el producto de aceite vegetal respectivo. Después, se realiza la emulsión bajo turbina con velocidad lenta mediante incorporación de la fase grasosa en la fase acuosa. Cuando la preparación llega a la temperatura de 60ºC, se añade el SEPIGEL 305 bajo turbina con velocidad elevada. Después, se deja enfriar la composición a reposo hasta temperatura ambiente, antes de su utilización en los ensayos descritos a
continuación.

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1.1) Composición comparativa 1.1: Utilización de un oleodestilado de aceite de girasol

Se prepara un oleodestilado de girasol mediante destilación molecular en un destilador molecular de tipo centrífugo de un aceite de girasol alimentario del comercio. Las condiciones de destilación son las siguientes:

-: temperatura 220ºC;

-: presión de 10^{-3} mmHg;

-: porcentaje de destilación: 6,7% en peso;

-: caudal de alimentación: 18 kg/h.

El destilado obtenido, el oleodestilado de girasol, presenta un contenido en insaponificable de aproximadamente 6,2% en peso, estando la parte restante compuesta por los triglicéridos de aceite de girasol. El oleodestilado así obtenido se denomina "Oleodestilado de girasol-1".

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1.2) Composición comparativa 1.2: utilización de una mezcla de un insaponificable de aguacate y de soja

Se utiliza la mezcla de insaponificable de aceites de aguacate y de soja tal como se comercializan por la compañía Laboratoires Pharmascience bajo la denominación de "Piascledine 300®" que consiste en una mezcla de 33,3% en peso de insaponificable de aguacate y de 66,6% en peso de insaponificable de soja, con relación al peso total de la mezcla (estando los 0,1% restantes constituidos de sílice coloidal y de butilhidroxitolueno). Esta mezcla se denomina a continuación "Insaponificables-1".

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1.3) Composición 1.3: utilización de lípidos furánicos de aguacate

Se prepara un insaponificable de aguacate tal como se describe en la patente FR-2.678.632. Su composición es la siguiente:

-	Alcoholes grasos polihidroxilados	24,3%
-	Lípidos furánicos	55,5%
-	Esteroles	3,1%
-	Escualeno	1,4%
-	Otros	15,7%	(1)

(1) Ácidos grasos libres, hidrocarburos, tocoferoles, cetonas grasas y pigmentos pesados

Se somete este insaponificable a una destilación molecular con la ayuda del destilador molecular de película rascada comercializado por la compañía Leybold bajo la denominación "KDL4". Las condiciones de destilación son las siguientes:

-: temperatura de la superficie caliente: 108ºC

-: presión: 10^{-3} mmHg

-: velocidad de rotación del eje: 240 v/min.

-: Caudal de insaponificable de aguacate: 400 ml/h.

Rendimiento de destilado: 48,6%

Composición del destilado:

-	alcoholes grasos polihidroxilados:	n.m.
-	lípidos furánicos	99,1%
-	esteroles	n.m.
-	escualeno	n.m.
-	otros	0,9%	(1)

(1) ácidos grasos libres, hidrocarburos y cetonas grasosas ("n.m".: no medible, es decir un contenido menor
\hskip0.4cm que 0,05%).

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Por lo tanto, se trata de un destilado muy rico en lípidos furánicos en la medida en la que el contenido de estos últimos exceda 99%. Este destilado se denomina a continuación "Lípidos-1"

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1.4) Composición placebo

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Ejemplo 2 Evaluación in vitro del efecto de las composiciones 1.1, 1.2, 1.3 y placebo sobre el metabolismo de los lípidos epidérmicos en un modelo organotípico de piel humana entera en cultivo

A continuación, se utilizan las abreviaturas siguientes:

: EGF: factor de crecimiento epidérmico;

: CCM: cromatografía de capa fina;

: MCF: medio de cultivo de los disco de piel humana;

: MIF: medio de incubación de los discos de piel humana;

: PBS: tampón de fosfato salino.

El objeto de este estudio es estudiar el efecto de las cuatro composiciones 1.1, 1.2, 1.3 y placebo descritas aquí arriba sobre el metabolismo de los lípidos epidérmicos.

El estudio se realiza in vitro en un modelo organotípico de piel humana entera en cultivo. Se utilizan dos técnicas sucesivamente:

-: medir la incorporación de acetato radiomarcado de carbono 14 en el totum de los lípidos epidérmicos neosintetizados;

-: analizar en cromatografía de capa fina para separar las principales clases de lípidos epidérmicos radiomarcados neosintetizados.

El efecto de los productos en el ensayo se compara al observado en presencia del factor de crecimiento epidérmico (EGF), diluido en el medio de cultivo de los discos de piel humana, y en presencia de una formulación cosmética comercializada que contiene ácido láctico. El EGF y el ácido láctico estimulan ambos, de manera conocida, la síntesis de las ceramidas mediante los queratinocitos (Ponec M., Gibas S., Weerheim A., Kempenaar J., Mulder A. y Mommaas A.M. - Epidermal gowth factor and temperature regulate keratinocytes differenciation - Arch. Dermatol. Res., 1997, 289, 317-326; y Rawlings A.V., Davies A., Carlomusto M., Pillai S. Áng. K., Kosturbo R., Verdejo P., Feinberg C., Nguyen L. y Chandar P. - Effect of lactic acid isomers on keratinocyte ceramide synthesis, stratum corneum lipid levels and stratum corneum barrier function - Arch. Dermatol. Res., 1996, 288, 383-390).

1) Materiales y método 1.1) Productos de ensayo, productos de referencia y reactivos

Se han preparado las composiciones 1.1, 1.2, 1.3 y placebo tal como se describe aquí arriba. El EGF provenía de R&D SYSTEMS. La formulación cosmética que contiene ácido láctico, denominada a continuación "ácido láctico", se compró en la red de distribución de grandes superficies.

La disolución de enjuagado de los discos de piel humana después de la incubación es el tampón PBS: NaCl 8 g/l; Na_{2}HPO_{4} 1,15 g/l; KH_{2}PO_{4} 0,2 g/l; KCl 0,2 g/l; CaCl_{2} 0,1 g/l; MgCl_{2} 0,1 g/l; pH 7,4.

Los otros reactivos, de calidad analítica, provienen de CARLO ERBA, GIBCO y SIGMA, salvo indicación contraria.

1.2) Sistema de ensayo

Se recogió un fragmento de piel humana tras una operación de una plastia abdominal. Ésta se realizó en una mujer de 24 años (sujeto 10129). Se cortaron discos de piel de 8 mm de diámetro con la ayuda de un sacabocados.

Los discos de piel se depositan en bote. Los botes se disponen en pocillos de cultivo que contiene el medio MCF, compuesto del medio MEM/M199 (3/4, 1/4; v/v) al que se le ha añadido penicilina (50 Ul/ml), estreptomicina (50 \mug/ml), bicarbonato de sodio (0,2%, p/v) y SVF (2%, v/v).

1.3) Incubación de los productos de ensayo y de los productos de referencia con el sistema de ensayo

Los productos en ensayo se ensayan no diluidos. Se depositan en el centro de cada disco de piel humana, a razón de 10 mg/cm^{2}. El medio de incubación de los discos de piel humana (medio MIF) está compuesto del medio MCF que contiene 1 \muCi/ml de acetato marcado con carbono 14 (AMERSHAM, actividad específica: 57 mCi/mmoles).

El EGF se ensaya con 10 ng/ml en el medio MIF. Se utiliza el ácido láctico en aplicación tópica (10 mg/cm^{2}).

Los discos de piel humana se incuban en presencia de los productos de ensayo y de los productos de referencia durante 18 horas a 37ºC en una atmósfera húmeda que contiene 5% de CO_{2}.

Se incuban discos de piel testigo en paralelo, en ausencia de productos de ensayo y de producto de referencia.

Cada condición experimental se realiza por cuadriplicado.

Se utiliza la escala de tiempo siguiente:

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1.4) Evaluación de los efectos 1.4.1) Neosíntesis de los lípidos epidérmicos totales

Al final de la incubación, los discos de piel humana se enjuagan con abundante tampón PBS. La epidermis de cada disco de piel se disocia de la dermis mediante un choque térmico controlado (agua MilliQ, 2 min., 62ºC). La epidermis así disociada se digiere mediante tripsina (ICN, 1%, p/v) durante una noche a 37ºC. La disociación celular se facilita mediante acción de los ultrasonidos.

Los lípidos neosintetizados, marcados con carbono 14, se extraen mediante partición entre una fase orgánica (metanol/cloroformo, 1/4, v/v) y una fase acuosa (cloruro de potasio 0,25 M). La fase orgánica se evapora con nitrógeno, y los restos se recogen en una mezcla cloroformo/metanol, 2/1 (v/v).

La radioactividad de cada muestra, que corresponde a la cantidad de acetato incorporado en los lípidos neosintetizados, se mide mediante centelleo de líquidos.

Los resultados se expresan en cpm/mg de epidermis.

1.4.2) Naturaleza de los lípidos epidérmicos neosintetizados

A partir de las muestras de lípidos extraídos, se depositan alícuotas de 20 \mul, que corresponden a 3700 cpm, sobre placas de cromatografía de sílice 60 (MERCK).

Éstas se desarrollan en tres solventes sucesivos:

-: cloroformo/acetona/metanol, 38/2/10 (v/v/v),

-: cloroformo/acetona/metanol, 40/5/5 (v/v/v),

-: cloroformo/acetato de etilo/éter/metanol, 36/10/3/1 (v/v/v/v).

Este sistema permite separar el sulfato de colesterol, los cerebrósidos, las ceramidas, el colesterol y los tri- + di-glicéridos. Los lípidos más polares, llamados a continuación "lípidos polares", siguen en el punto de depósito.

Después, las placas de sílice se exponen con películas para autorradiografía durante 15 días (AMERSHAM, Hyperfilm beta max).

La posición de las distintas clases de lípidos - lípidos polares, sulfato de colesterol, cerebrósidos, ceramidas 1 y 2, colesterol y tri- + di-glicéridos - se determina con la ayuda de los estándares apropiados.

La radioactividad de los puntos, separados y revelados gracias a la autorradiografía, se calcula con un analizador de radioactividad argón-metano sobre capa fina (BERTHOLD). Los resultados se expresan en porcentajes de la radioactividad de los lípidos totales neosintetizados y depositados sobra la CCM.

1.5) Tratamiento de datos

Los grupos de datos (grupo testigo y grupos tratados) se comparan mediante análisis de la varianza con un factor (ANOVA 1, p<0,05), seguido por un ensayo de Dunnett.

2) Resultados

Después de una noche de incubación en presencia de los discos de piel humana, las composiciones de ensayo y las composiciones de referencia no tienen efecto significativo sobre la neosíntesis de los lípidos epidérmicos totales (tabla 3.1). Por el contrario, modifican de manera notable la proporción de los distintos lípidos epidérmicos en este totum:

-: el EGF al 10 ng/ml disminuía en 46% la neosíntesis del sulfato de colesterol, y aumentaba en 55% la neosíntesis de la ceramida 2 (tabla 3.2);

-: el ácido láctico aumenta en un factor de 1,59 la neosíntesis de los cerebrósidos (tabla 3.2);

-: la composición 1.1 aumenta en un factor de 2,26 y de 4,61 la neosíntesis respectiva de las ceramidas 1 y 2, en un factor de 5,04 la neosíntesis del colesterol. Disminuye en 73% la neosíntesis de los tri- y di-glicéridos (tabla 3.3);

-: la composición 1.2 aumenta en un factor de 1,32 la neosíntesis del sulfato de colesterol, en un factor de 2,47 y de 2,51 la neosíntesis respectiva de las ceramidas 1 y 2, en un factor de 4,62 la neosíntesis del colesterol. Disminuye en un 77% la neosíntesis de los tri- y di-glicéridos (tabla 3.2);

-: la composición 1.3 aumenta en un factor de 1,24 la neosíntesis del sulfato de colesterol, en un factor de 1,59 y de 3,66 la neosíntesis respectiva de las ceramidas 1 y 2, en un factor de 4,14 la neosíntesis del colesterol. Disminuye en un 84% la neosíntesis de los tri- y di-glicéridos (tabla 3.2);

-: la composición placebo disminuye en un 59% la síntesis de los tri- y di-glicéridos (tabla 3.3) sin provocar aumento significativo de los distintos lípidos epidérmicos analizados.

En conclusión, en las condiciones experimentales elegidas, las composiciones 1.1, 1.2, 1.3 y placebo no tienen efecto significativo sobre la neosíntesis de los lípidos epidérmicos totales.

Por el contrario, éstas modifican de manera significativa la proporción de las distintas clases de los lípidos epidérmicos separados en cromatografía de capa fina en el totum.

Éstas disminuyen la neosíntesis de los tri- y di-glicéridos a favor de otros lípidos epidérmicos.

La composición 1.1 aumenta la neosíntesis del colesterol (sin modificación de la neosíntesis del sulfato de colesterol), y la neosíntesis de las ceramidas.

Las composiciones 1.2 y 1.3 aumentan la neosíntesis del sulfato de colesterol y del colesterol, y la neosíntesis de las ceramidas.

La composición placebo no provoca aumento significativo de los distintos lípidos epidérmicos analizados.

3) Tablas de resultados TABLA 3.1 Efecto de las composiciones 1.1, 1.2, 1.3 y placebo, así como del EGF y de una formulación cosmética que contiene ácido láctico, sobre la neosíntesis de los lípidos epidérmicos totales en discos de piel humana entera, después de 18 horas de incubación

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9

Los resultados se expresan en cpm/mg de epidermis.

En negrita: media y desviación típica

En itálica: porcentaje del grupo testigo

\text{*}: media significativamente diferente del grupo testigo (p<0,05)

TABLA 3.2 Efecto de las composiciones 1.2 y 1.3, así como del EGF y de una formulación cosmética que contiene ácido láctico, sobre la neosíntesis de los lípidos polares, del sulfato de colesterol, de los cerebrósidos, de las ceramidas 1 y 2, del colesterol y de los tri- + di-glicéridos en discos de piel humana entera, después de 18 horas de incubación

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10

Los resultados se expresan en porcentaje de lípidos totales radiomarcados depositados sobre la CCM.

En negrita: media y desviación típica

En itálica: porcentaje del grupo testigo

\text{*}: media significativamente diferente del grupo testigo (p<0,05)

TABLA 3.3 Efecto de las composiciones 1.1 y placebo sobre la neosíntesis de los lípidos polares, del sulfato de colesterol, de los cerebrósidos, de las ceramidas 1 y 2, del colesterol y de los tri- + di-glicéridos en discos de piel humana entera, después de 18 horas de incubación

11

En negrita: media y desviación típica

En itálica: porcentaje del grupo testigo

\text{*}: media significativamente diferente del grupo testigo (p<0,05).

Claims

1. Utilización de lípidos furánicos de aceite vegetal para la preparación de una composición dermatológica destinada al tratamiento de pieles sensibles, pieles irritadas, pieles reactivas, pieles atópicas, descamación cutánea, prurito, ictiosis, acné, xerosis, dermatitis atópica, o capas epidérmicas de la capa córnea o de la granulosa de pieles que hayan sido sometidas a una radiación actínica, en particular una radiación UV.

2. Utilización según la reivindicación 1, caracterizada porque los lípidos furánicos de aceite vegetal son lípidos furánicos del aguacate.

3. Utilización según la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque la composición está destinada a una aplicación tópica.

4. Utilización según la reivindicación 1 ó 2, caracterizada porque la composición está destinada a una administración oral.