KR20100064451A

KR20100064451A - 레온토포딕산을 유효성분으로 함유하는 주름개선용 피부 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20100064451A
Application number: KR1020080122893A
Authority: KR
Inventors: 김한성; 안순애; 김덕희; 김진웅; 김한곤
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2008-12-05
Filing date: 2008-12-05
Publication date: 2010-06-15
Also published as: WO2010064878A2; WO2010064878A3; CN102238935A; CN102238935B

Abstract

레온토포딕산을 유효성분으로 함유하는 주름개선용 피부 화장료 조성물로서, 향상된 콜라게나아제 발현 억제효과, 콜라겐 생합성 촉진효과 및 주름개선효과를 나타내는 피부 화장료 조성물을 개시한다. 또한 나노 리포좀으로 안정화된 레온토포딕산을 함유하는 주름개선용 피부 화장료 조성물로서, 제형 안정성 및 경피 흡수능이 우수한 피부 화장료 조성물을 개시한다.

레온토포딕산, 나노리포좀, 콜라게나아제 발현 억제, 콜라겐 생합성 촉진, 주름개선, 에델바이스

Description

레온토포딕산을 유효성분으로 함유하는 주름개선용 피부 화장료 조성물{Composition for external skin application for improvement in wrinkle containing leontopodic acid}

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 레온토포딕산{Leontopodic acid; 2-[(3S)-3-hydroxybutanate]-3,4,5-tris-[(2E)-3-(3,4-dihydroxyphenyl)-2-propenoate]-D-glucaric acid} 을 유효성분으로 함유하는 주름개선용 피부 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 인체의 일차 방어막으로서 체내의 제기관을 온도 및 습도 변화와 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에도 중요한 역할을 하고 있다. 그러나 외부로부터 받는 과도한 물리적, 화학적 자극 및 스트레스, 영양결핍 등은 피부의 정상기능을 저하시키고, 탄력손실, 각질화, 주름생성 등의 피부 노화현상을 촉진시키게 되는데, 이러한 현상을 방지하고 보다 건강하고 탄력 있는 피부를 유지하기 위하여 종래 사용되던 화장료들은 대부분 효능이 미진하거나 피부 부작용을 유발하는 등 여러 가지 문제점을 가지고 있다.

피부 부작용을 유발하지 않으면서 피부 노화방지효과를 갖는 원료에 대한 연구가 활발히 진행되고 있던 중, 레온토포딕산을 화장료 등의 피부 화장료 조성물에 적용하여 우수한 피부 노화방지효과를 나타내는 것을 발견하였다.

레온토포딕산의 종래의 연구로는 항산화 효능과 DNA 손상 방어에 대한 효능(Leontopodic acid - a novel highly substituted glucaric acid derivative from Edelweiss (Leontopodium alpinum Cass.) and its antioxidative and DNA protecting properties. Tetrahedron, Volume 61, Issue 19, 9 May 2005, Pages 4621-4630)에 관한 연구가 있는바, 이는 본 발명의 콜라게나아제 발현 억제효과, 콜라겐 생합성 촉진효과를 통한 주름개선효과와는 전혀 다른 것이다.

본 발명은 상기한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로서, 본 발명의 목적은 주름개선효과가 우수한 레온토포딕산을 유효성분으로 함유시킴으로써 콜라게나아제 발현 억제효과, 콜라겐 생합성 촉진효과 및 주름개선효과가 우수한 주름개선용 피부 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 유효성분으로서 레온토포딕산을 함유하는 것을 특징으로 하는 주름개선용 피부 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 나노리포좀 내에 포집된 레온토포딕산을 함유하는 것을 특징으로 하는 주름개선용 피부 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 주름개선용 피부 화장료 조성물에 있어서, 상기 레온토포딕산은 전체 조성물의 총 중량을 기준으로 0.0001중량% 내지 10중량% 함유되는 것을 특징으로 한다.

또한, 상기 나노리포좀 내에 포집된 레온토포딕산은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 50 중량%로 함유됨을 특징으로 한다.

본 발명의 주름개선용 피부 화장료 조성물은 콜라게나아제 발현을 억제하고, 콜라겐 생합성을 촉진시키는 것을 특징으로 한다.

상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명의 레온토포딕산을 유효성분으로 함유한 주름개선용 피부 화장료 조성물은 콜라게나아제 발현 억제효과, 콜라겐 생합성 촉진효과 및 주름개선효과가 우수하다. 또한, 나노리포좀 내에 안정화된 레온토포딕산을 함유할 때 제형 안정성 및 경피 흡수능이 더욱 뛰어남을 알 수 있다.

본 발명은 유효성분으로서 레온토포딕산을 함유하는 것을 특징으로 하는 주름개선용 피부 화장료 조성물을 제공한다.

또한, 상기 나노리포좀 내에 포집된 레온토포딕산은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 50 중량%로 함유됨을 특징으로 한다

상기 레온토포딕산은 에델바이스에 다량 함유된 주요 성분 중의 하나이다. 에델바이스는 쌍떡잎식물 초롱꽃목 국화과의 여러해살이풀로 학명은 Leontopodium alpinum이다. 유럽 알프스 지역이 원산지이며 고산식물이다. 한국에는 이와 비슷한 솜다리, 산솜다리, 한라솜다리 등이 고산지대에서 자란다. 에델바이스는 예로부터 민간에서 복통, 편도선염, 기관지염, 암, 이질, 설사, 열병 등의 질병 치료제로 사용되어 왔다. 에델바이스는 알프스 환경의 강한 자외선, 과도한 온도 습도변화, 강한 바람 등 극한 환경에 노출된다. 에델바이스에는 페놀산, 리그난(lignans), 플라 보노이드, 세스퀴테르펜(sesquiterpenes), 벤조푸란, 피란 유도체, 폴리아세틸렌, 코우마린(coumarins), 디테르펜산(diterpene acids) 등 다양한 성분들이 함유되어 있다.

본 발명의 주름개선용 피부 화장료 조성물에 있어서, 상기 레온토포딕산은 에델바이스를 분쇄하는 단계(a); 상기 단계(a)의 분쇄물을 물, 탄소수 1∼4개의 무수 또는 함수 알코올, 및 아세톤으로 구성되는 용매 중 선택된 1 종이상으로 추출하는 단계(b); 및 상기 단계(b)의 추출물을 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 클로로포름, 및 헥산으로 구성되는 용매 중 선택된 1종이상으로 재추출하는 단계(c)에 의하여 얻어질 수 있고, 상기 탄소수 1∼4개의 무수 또는 함수 알코올은 메탄올, 에탄올, 1,3-부틸렌 글리콜, 노말 프로판올, 이소 프로판올 또는 노말 부탄올일 수 있고, 상기 단계(b) 및 단계(c)의 추출은 냉침, 페르콜레이션 또는 온침의 방법으로 행해질 수 있다.

본 발명의 주름개선용 피부 화장료 조성물에 있어서, 상기 나노리포좀은 평균 입자 지름이 10-500nm일 수 있다.

이하, 본 발명에 대하여 더욱 상세하게 설명한다.

본 발명의 일실시예에 의한 피부 화장료 조성물에 함유된 레온토포딕산은 에델바이스를 무수 또는 함수의 저급 알코올, 물 또는 아세톤에서 1차 추출한 후 에틸아세테이트, 디에틸에테르, 벤젠, 클로로포름, 헥산 등의 저극성 용매로 재추출 한 에델바이스 추출물로부터 제조되어, 함량이 증대되고 불순물이 제거되었으며 안정도가 향상되었다.

상기 레온토포딕산 제조방법을 더욱 상세하게 설명하면 다음과 같다. 그러나, 레온토포딕산 제조방법이 아래에 한정되지는 않는다.

우선, 에델바이스를 잘게 분쇄하고 추출 용매로서 극성용매인 물, 탄소수 1∼4개의 무수 또는 함수 저급 알코올(메탄올, 에탄올, 1,3-부틸렌 글리콜, 노말 프로판올, 이소 프로판올 또는 노말 부탄올 등), 물과 상기 저급 알코올의 혼합물, 아세톤, 또는 상기 용매들의 혼합물 등을 에델바이스 분쇄물 건조중량에 대해 중량비 5∼20배로 가하여 침적 추출, 여과, 및 감압농축한다.

그 후, 상기 농축액에 물을 가하여 분산시킨 후 분산액에 동량의 에틸아세테이트, 클로로포름, 디에틸에테르 등의 저극성 유기용매를 가하고 진탕한다. 진탕 후 유기층을 분리, 감압농축하여 활성이 우수한 에델바이스 추출물을 얻는다.

추출방법으로서 냉침 및 페르콜레이션을 사용하는 경우에는 약 12∼96 시간동안 추출하는 것이 바람직하며, 탄소수 1∼4개의 무수 또는 함수 저급 알코올, 에틸아세테이트 또는 디에틸에테르를 용매로 하여 4∼25℃ 상온에서 3∼20일 방치 숙성시켜서 유효활성성분을 추출할 수도 있다. 온침을 사용하는 경우에는 사용하는 용매 등의 종류와 온도에 따라서 상이하나 용매의 환류 온도에 가까운 온도로 5∼24시간 정도를 추출하는 것이 바람직하다.

상기의 방법으로 얻어진 레온토포딕산은 주름개선효과를 나타내며 피부 외용 연고나 로션 등의 피부 화장료로 제조되어 사람의 피부에 도포되었을 때에도 부작 용 없이 안전하고 효과가 뛰어난 피부 주름개선제로 사용될 수 있다.

상기와 같이 제조된 레온토포딕산은 전체 조성물의 총중량을 기준으로 0.0001∼10중량%, 바람직하게는 0.0005∼5.0중량%로 함유되는 것이 적당하다. 0.0001중량% 이하의 농도에서는 뚜렷한 효과를 기대할 수 없었고, 10.0중량% 이상의 농도에서는 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않았기 때문이다.

본 발명에서 나노리포좀은 리포좀의 형태를 갖는 것으로서 평균 입자 지름이 10-500nm인 리포좀을 의미한다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 나노리포좀의 평균 입자 지름은 50-300nm이다. 나노리포좀의 평균 입자 지름이 300nm를 초과하는 경우에는 본 발명에서 달성하고자 하는 기술적 효과 중 피부침투의 개선 및 제형 안정성의 개선이 매우 미약하다.

본 발명의 일실시예에 따라 레온토포딕산 추출물을 안정화하는데 사용되는 나노리포좀은 폴리올, 유성성분, 계면활성제, 인지질, 지방산 및 물을 포함하는 혼합물에 의해 제조된다.

본 발명의 일실시예의 나노리포좀에 이용되는 폴리올은 특히 제한되지 않으며, 바람직하게는 프로필렌글라이콜, 디프로필렌글라이콜, 1,3-부틸렌글라이콜, 글리세린, 메틸프로판디올, 이소프로필렌글라이콜, 펜틸렌글라이콜, 에리스리톨, 자일리톨, 솔비톨 및 이의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 10-80 중량%, 바람직하게는 30-70 중량%이다.

본 발명의 일실시예의 나노리포좀의 제조에 이용되는 유성(oil) 성분은 당업 계에 공지된 다양한 오일이 이용될 수 있으며, 바람직하게는 헥사데칸 및 파라핀 오일과 같은 하이드로카본계 오일, 에스테르계의 합성오일, 디메치콘 및 사이크로메치콘계와 같은 실리콘 오일, 해바라기유, 옥수수유, 대두유, 아보카도유, 참깨유 및 어유와 같은 동식물성 오일, 에톡시레이티드 알킬에테르계오일, 프로폭시레이티드 알킬에테르계오일, 피토스핑고신, 스핑고신 및 스핑가닌과 같은 스핑고노이드 지질, 세레브로사이드 콜레스테롤, 시토스테롤 콜레스테릴설페이트, 시토스테릴설페이트, C_10-40지방알콜 및 이의 혼합물이다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 1.0-30.0 중량%이고, 바람직하게는 3.0-20.0 중량%이다.

본 발명의 일실시예의 나노리포좀의 제조에 이용되는 계면활성제는 당업계에 공지된 어떠한 것도 사용할 수 있다. 예를 들어, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 양성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용될 수 있다. 바람직하게는 음이온성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제이다. 음이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알킬아실글루타메이트, 알킬포스페이트, 알킬락틸레이트, 디알킬포스페이트 및 트리알킬포스페이트를 포함한다. 비이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알콕시레이티드 알킬에테르, 알콕시레이티드 알킬에스테르, 알킬폴리글리코사이드, 폴리글리세릴에스테르 및 슈가에스테르를 포함한다. 특히 바람직한 계면활성제는 비이온성 계면활성제에 속하는 폴리솔베이트류이다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.1-10 중량%이고, 바람직하게는0.5-5.0 중량%이다.

본 발명의 일실시예의 나노리포좀의 제조에 이용되는 또 다른 성분인 인지질 은 양쪽친화성 지질이 이용되며, 천연 인지질 (예를들어, 난황 레시틴 또는 대두 레시틴, 스핑고마이엘린) 및 합성 인지질 (예를들어, 디팔미토일포스파티딜콜린 또는 수첨 레시틴)을 포함하며, 바람직하게는 레시틴이다. 특히, 대두 또는 난황에서 추출한 천연 유래의 불포화 레시틴 또는 포화 레시틴이 바람직하다. 통상적으로 천연 유래의 레시틴은 포스파티딜콜린의 양이 23-95%, 그리고 포스파디딜에탄올아민의 양이 20% 이하이다. 본 발명의 나노리포좀의 제조에 있어서, 레시틴의 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.5-20.0 중량%이며, 바람직하게는 2.0-8.0 중량%이다.

본 발명의 일실시예의 나노리포좀 제조에 이용되는 지방산은 고급 지방산으로서, 바람직하게는 C₁₂ _- ₂₂알킬 체인의 포화 또는 불포화 지방산으로서, 예컨대, 라우린산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아린산, 올레산 및 리놀레산을 포함한다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.05-3.0 중량%이고, 바람직하게는0.1-1.0 중량%이다.

본 발명의 일실시예의 나노리포좀의 제조에 이용되는 물은 일반적으로 탈이온화된 증류수이며, 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 5.0-40 중량%이다.

나노리포좀의 제조는 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 이루어질 수 있으나, 가장 바람직하게는 상기 성분들을 포함하는 혼합물을 고압 호모게나이저에 적용하여 제조된다. 고압 호모게나이저에 의한 나노리포좀의 제조는 소망하는 입자 크기에 따라 다양한 조건(예: 압력, 횟수 등)으로 실시할 수 있으며, 바람직하게는 600-1200 bar의 압력 하에서 1-5회 고압 호모게나아저를 통과하도록 하여 나노리포좀을 제조하는 것이다.

본 발명의 일실시예에 따른 나노리포좀에 의하여 안정화된 레온토포딕산은 제형 내 안정성 및 용해도 및 경피흡수율을 높일 수 있는 효과가 있다.

본 발명에 따른 조성물은 화장품학 및 피부과학적으로 허용가능한 매질 및/또는 기제를 함유한다. 이는 국소적용에 적합한 모든 제형으로, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀) 및/또는 비이온형의 소낭 분산제의 형태로, 또는 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 이들 조성물은 당해 분야의 통상적 방법에 따라 제조될 수 있다. 또한 본 발명에 따른 조성물은 폼의 형태로 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 사용될 수 있다.

본 발명의 조성물은 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 이들 보조제는 화장품학 또는 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입된다.

이하, 실시예, 실험예 및 제조예를 통하여 본 발명을 더 구체적으로 설명한다. 그러나 아래의 실시예, 실험예 및 제조예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 여기에 한정되지 않음을 밝혀둔다.

[실시예 1] 레온토포딕산의 제조

실온 음지에서 건조시킨 에델바이스(2kg)를 메탄올로 1주일씩 3회 반복 냉침 추출한 추출액을 모아 감압 농축하여 메탄올 추출물 160.5g을 얻었다. 얻어진 메탄올 추출물을 증류수로 현탁하여 헥산으로 분획하고(25.2g), 남은 물층을 다시 에틸아세테이트로 분획하여 아세토니트릴 분획물(20.4g)을 얻었고, 남은 물층을 다시 부탄올로 분획하여 부탄올 추출물(20.6g)을 얻었으며 최종적으로 물분획 40.6g을 얻었다.

다음으로, 지표물질이 함유된 상기 물 분획 40.6 g을 메탄올로 용해시킨 후 실리카겔을 충진시킨 유리 칼럼(φ 5 x 70cm, 7734, Merck사), 및 물, 아세토니트릴, 메탄올의 혼합용매를 이용하여 활성물질을 용출시켜 10개의 소분획을 얻었다. 이 중 지표물질이 함유된 소분획 7(1.153g)을 대상으로 2차 오픈 칼럼 크로마토그래피를 실시하였다. ODS를 유리 칼럼(φ 1.6 x 100 cm)에 충진하고 HPLC용 펌프를 이용하여 10% 아세토니트릴 수용액에서 30% 아세토니트릴 수용액까지 단계별로 사용하여 크로마토그래피를 실시하였고 이 중 지표물질이 함유된 소분획(1.79g)을 얻었다. 위에서 얻어진 지표물질 함유 소분획을 다시 세파덱스(Sephadex LH-20, Pharmacia Biotech사)가 충진된 유리칼럼(φ 1.0 x 50cm)에서 메탄올로 용출시켜 최종적으로 지표물질인 레온토포딕산(70mg)을 얻었다.

[실시예 2] 나노리포좀으로 안정화된 레온토포딕산의 제조

상기 레온토포딕산을 나노리포좀으로 안정화하기 위하여 글리세린 580g, 카프릴릭 카프릭 트리글리세라이드 200g, 인지질 50g, 콜레스테롤 20g을 혼합하여 교반기로 교반하면서 75℃까지 가온하여 혼합 용해한 후, 상기 실시예 1에서 얻은 레온토포딕산 고형분 50g을 가하여 완전히 용해시켰다. 여기에 정제수 100g을 서서히 가하여 혼합한 후 50℃에서 압력 1000 bar의 조건 하에서 고압유화장치(Microfluidizer M210EH, Microfluidics, USA)에 3회 통과시켜 레온토포딕산의 나노리포좀을 제조하였다. 이 리포좀의 입자크기는 대략 70nm이었다.

[실험예 1] 콜라겐 생합성 촉진 효과의 측정

상기 실시예 1 의 콜라겐 생합성 촉진 효과를 콜라겐 생합성을 촉진한다고 알려져 있는 토코페롤 및 EGCG와 비교하여 측정하였다.

먼저, 인간섬유아세포(fibroblast)(PromoCell, Germany)를 24 공(well)에 1 공 당 10⁵개씩 파종(seeding)하여 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 이를 24시간 동안 무혈청 DMEM 배지로 배양한 후 무혈청 배지에 녹여진 실시예 1, 토코페롤 및 EGCG를 각각 10^-4 몰농도로 처리하고 24시간 동안 CO₂ 배양기에서 배양하였다. 이들 의 상층액을 떠내어 프로콜라겐 형(I) 엘라이자(ELISA) 키트(procollagen type(I))를 이용하여 프로콜라겐(procollagen)의 증감여부를 보았다. 그 결과는 하기 표 1에 나타내었으며, 여기서 합성능은 비처리군을 100으로 하여 대비한 것이다.

처리군	합성능 (%)
실시예 1	134
비처리군	100
토코페롤	113
EGCG	120

상기 표 1에서 보여지는 바와 같이, 실시예 1의 콜라겐 생합성 효과가 증가하는 것으로 확인할 수 있었다.

[실험예 2: 콜라게나아제 발현 억제 효능 측정]

상기 실시예 1로 부터 얻은 레온토포딕산의 콜라게나아제 발현 억제 효능(생성 저해능)을 콜라게나아제 발현을 억제한다고 알려져 있는 레티노익산을 양성대조군으로 하여 하기와 같이 측정하였다.

먼저, 2.5%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM(Dulbecco's Modified Eagle's Media) 배지가 들어있는 96-공 평판배양기(96-well microtiter plate)에 인간의 섬유아세포를 5,000 세포/공(well)이 되도록 넣고, 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 후 무혈청 DMEM 배지에서 24시간 배양한 다음, 시험물질로 무혈청 DMEM 배지에 녹여진 상기 실시예 1, 레티노익산을 10^-4 몰농도로 24시간 동안 처리한 후, 세포배양액을 채취하였다.

이후, 채취한 세포배양액으로부터 콜라게나아제 측정기구(미국 아머샴파마샤 사)를 이용하여 콜라게나아제 생성 정도를 측정하였다.

먼저 콜라게나아제 1차 항체가 균일하게 도포된 96-공 평판(96-well plate)에 채취된 상기 세포배양액을 넣고 3시간 동안 항원-항체 반응을 항온조에서 실시하였다. 3시간 후 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96-공 평판(96-well plate)에 넣고 다시 15분간 반응시켰다. 15분 후 발색유발물질을 넣어 실온에서 15분간 발색을 유발시키고, 다시 1M 황산을 넣어 반응(발색)을 중지시키면 반응액의 색깔은 노란색을 띄며 반응 진행의 정도에 따라 노란색의 정도가 다르게 나타났다.

노란색을 띠는 96-공 평판(96-well plate)의 흡광도를 흡광계를 이용하여 405nm에서 측정하였고, 하기 수학식 1에 의해 콜라게나아제의 발현 정도를 계산하고 그 결과를 하기 표 2에 나타내었으며, 이는 비처리군의 콜라게나아제 발현 정도를 100으로 하여 대비한 것이다. 이때 시험물질을 처리하지 않은 군으로부터 채취된 세포배양액을 대조군으로 하였다.

콜라게나아제 발현 정도(%)= A/B × 100

A: 상기 시험물질 처리 세포군의 흡광도

B: 대조군의 흡광도

시험물질	콜라게나아제 발현 정도(%)
비처리군	100
레티노익산(양성대조군)	59.2
실시예 1	55.3

그 결과 상기 표 2에 보여지는 바와 같이, 상기 실시예 1에서 얻어진 레온토포딕산이 콜라게나아제 발현을 효과적으로 억제함을 확인할 수 있었다.

[실험예 3] 스쿠알렌 모노퍼옥시드로부터 유도된 주름의 생체 내(in vivo) 주름 개선 효과 측정

상기 실시예 1로부터 얻은 레온토포딕산을 활용하여 스쿠알렌 모노퍼옥시드로부터 유도된 주름의 개선 효과를 생체 내(in vivo)에서 측정하였다. 이 때, 스쿠알렌 모노퍼옥시드는 스쿠알렌에 UV를 조사한 후 메탄올로 추출하여 준비하였다.

먼저, 레온토포딕산의 주름 개선 효과를 평가하기 위하여 6주령의 암컷 SHR-1 헤어리스 마우스(Charles River, Japan) 30 마리를 준비하여 10 마리씩 시험군과 대조군으로 나누었다. 스쿠알렌 모노퍼옥시드를 일주일에 2회 4주 동안 처리하여 주름을 형성시켰으며, 스쿠알렌 모노퍼옥시드 처리 후 30분 후에, 1일 2회씩 4주간 레온토포딕산, 레티노익산 각각 0.1% 용액(용매로는 폴리에틸렌글리콜 400(PEG400))을 0.5 ㎖씩 도포하면서 주름 형성 억제 정도를 측정하였다. 주름 형성 억제 정도의 육안 평가를 위해 레플리카(replica)를 채취하여 분석하였고, 그 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1에서 정상은 무처리 대조군이고, SqOOH+PEG400은 스쿠알렌 모노퍼옥시드와 용매인 PEG400을 처리한 시험군이고, SqOOH+PEG400+레온토포딕산은 스쿠알렌 모노퍼옥시드와 레온토포딕산 용액을 처리한 시험군, SqOOH+PEG400+레티노익산은 스쿠알렌 모노퍼옥시드와 레티노익산 용액을 처리한 시험군이다.

그 결과 도 1에 나타낸 것처럼, 레온토포딕산 처리군에서는 스쿠알렌 모노퍼옥시드에 의해 유도된 주름에 대한 주름 개선 효과가 양성대조군으로 사용한 레티노익산 처리군에서보다 더욱 뛰어남을 확인할 수 있었다.

[실험예 4] UV로부터 유도된 주름에 대한 생체 내(in vivo) 주름개선효과 측정

UV로부터 유도된 주름에 대하여 레온토포딕산의 생체 내(in vivo) 주름 개선 효과를 확인하기 위하여, 무모 생쥐(hairless mouse)를 대상으로 다음과 같은 실험을 수행하였다. 먼저, 무모 생쥐 45마리를 항온 항습실에서 사육한 후, 각 군당 15마리씩 3군으로(UV 처리군; UV-레온토포딕산 처리군; UV-레티노익산 처리군) 나누었다. UV 처리군에는 담체(vehicle)인 1,3-PG(propylene glycol):EtOH=3:7 용액을 8주 동안 매일 100 ㎕씩, UV-레온토포딕산 처리군, UV-레티노익산 처리군에는 레온토포딕산, 레티노익산을 각각 담체 용액에 0.1％의 농도로 녹인 시료 용액을 각각 8주 동안 매일 100 ㎕씩 등 부위에 도포하고, UVB를 8주간 주 3회 3 MED(최소 홍반량, minimal erythema dose)의 양으로 조사하였다. 이 때, UV 조사는 주당 3회 실시하였고, 시료 용액은 매일 도포하였다. 8주 후, 실리콘을 이용하여 등 부위의 레플리카(replica)를 뜬 후 화상분석기(visiometer; SV600, Courage+Khazaka electronic GmbH, Germany)를 이용하여 주름의 깊이를 평가하였다. 그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, UV-레온토포딕산 처리군에서는 UV 처리군에 비하여 주름의 깊이가 완화되었음을 알 수 있고, 이는 양성대조군으로 사용한 레티노익산 처리군에서의 주름 완화 효과보다 더 우수한 것임을 확인하였다.

[실험예 5] 피부흡수량 측정

피부 흡수는 기네아피그 피부를 대상으로 프란츠 투과셀을 이용하여 측정하였다. 시험 직전, 기네아피그의 복부 부분 피부를 채취하여 평방 1㎠의 면적으로 절단한 후, 이를 투과경의 직경이 0.9㎝인 투과셀에 장치하고 클램프로 고정하였다. 피부의 한쪽면(donor 용기)은 실시예 1을 용매(알코올:부틸렌글리콜 7:3)에 1% 용해시킨 샘플과 실시예 2의 나노 리포좀으로 안정화된 레온토포딕산 0.2g을 도포하고, 반대쪽면(receptor 용기)은 정제수와 에탄올이 4:1의 중량비로 혼합된 용매와 접촉하도록 하였으며, 시험시 온도는 실제 피부 온도인 32℃를 유지하였다. 시험 시작 후, 일정 시간 간격으로 용매의 일부를 채취한 후, HPLC를 이용하여 피부에 흡수된 SDG와 SECO의 양을 측정하여 경과시간에 따른 도포 농도당 피부 흡수량(㎍/㎠/중량%)으로 나타내었으며, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.

- 컬럼 : C18(ODS)

- 용매 유속 : 1㎖/min

- 검출 UV : 280㎚

- 샘플 측정 농도 : 5㎎/㎖

- 샘플 주입량 : 10㎍

- 용리액 : 아세토니트릴(acetonitrile)/10mM H₃PO₄ = 30/70

시간	실시예 1	실시예 2
0	0	0
4	3.72	16.02
8	7.14	35.38
12	9.34	54.97

상기 표 3의 결과로부터 나노리포좀으로 안정화된 레온포딕산의 경피 흡수량이 우수함을 알 수 있다.

본 발명의 레온토포딕산을 함유하는 조성물의 제형은 임의로 선택할 수 있으며, 종래의 화장료 제형인 영양크림, 영양로션, 마사지크림, 영양에센스, 유연화장수 및 피부 화장료 중 연고 등 여러 가지 형태로 제조할 수 있다.

[제형예 1] 유연화장수(스킨로션)

하기에 기재된 조성으로 레온토포딕산을 함유하는 유연화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합성분	함량(중량%)
레온토포딕산	2.0
글리세린	3.0
부틸렌글리콜	2.0
프로필렌글리콜	2.0
카르복시비닐폴리머	0.1
PEG 12 노닐페닐에테르	0.2
폴리솔베이트 80	0.4
에탄올	10.0
트리에탄올아민	0.1
방부제, 색소 및 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 2] 영양 크림

하기에 기재된 조성으로 레온토포딕산을 함유하는 영양 크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합성분	함량(중량%)
레온토포딕산	2.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올리에이트	0.5
PEG60 경화피마자유	2.0
유동파라핀	10.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프락트리글리세라이드	5.0
글리세린	5.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소 및 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 3] 마사지크림

하기에 기재된 조성으로 레온토포딕산을 함유하는 마사지크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합성분	함량(중량%)
레온토포딕산	1.0
밀납	10.0
폴리솔베이트 60	1.5
PEG 60 경화피마자유	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	0.8
유동파라핀	40.0
스쿠알란	5.0
카프릴릭/카프릭트리글리세라이드	4.0
글리세린	5.0
부틸렌글리콜	3.0
프로필렌글리콜	3.0
트리에탄올아민	0.2
방부제, 색소 및 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 4] 팩

하기에 기재된 조성으로 레온토포딕산을 함유하는 팩을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합성분	함량(중량%)
레온토포딕산	1.0
폴리비닐알콜	13.0
소듐카르복시메틸셀룰로오스	0.2
글리세린	5.0
알란토인	0.1
에탄올	6.0
PEG 12 노닐페닐에테르	0.3
폴리솔베이트 60	0.3
방부제, 색소 및 향료	적량
정제수	잔량

[제형예 5] 젤

하기에 기재된 조성으로 나노리포좀으로 안정화된 레온토포딕산을 함유하는 젤을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합성분	함량(중량%)
나노리포좀으로 안정화된 레온토포딕산	5.0
에틸렌디아민초산나트륨	0.05
글리세린	5.0
카르복시비닐폴리머	0.3
에탄올	5.0
PEG 60 경화피마자유	0.5
트리에탄올아민	0.3
방부제, 색소 및 향료	적량
정제수	잔량

도 1은 스쿠알렌 모노퍼옥시드로부터 유도된 주름의 생체 내(in vivo) 주름 개선 효과를 나타내는 사진이다.

도 2는 UV로부터 유도된 주름에 대한 생체 내(in vivo) 주름 개선 효과를 나타내는 사진이다.

Claims

레온토포딕산을 유효성분으로서 함유하는 것을 특징으로 하는 주름개선용 피부 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 레온토포딕산은 전체 조성물의 총중량을 기준으로 0.0001중량% 내지 10중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 주름개선용 피부 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물은 콜라게나아제 발현을 억제하거나 콜라겐 생합성을 촉진시키는 것을 특징으로 하는 주름개선용 피부 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 레온토포딕산은 나노리포좀 내에 포집된 것을 특징으로 하는 주름개선용 피부 화장료 조성물.
제4항에 있어서, 상기 나노리포좀 내에 포집된 레온토포딕산은 조성물 총 중량에 대하여 0.001 내지 50중량% 함유되는 것을 특징으로 하는 주름개선용 피부 화장료 조성물.