KR101135193B1 - 나노리포좀으로 안정화된 리소포스파티딜콜린과 노루풀 추출물을 함유하는 주름 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 나노리포좀으로 안정화된 리소포스파티딜콜린과 노루풀 추출물을 함유하는 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 리소포스파티딜콜린과 노루풀 추출물은 나노리포좀에 의해 내포되어 있도록 형성되어 피부침투 효과가 크게 증가되며, 상기 피부의 주름을 개선시키고 탄력을 증진시키는 효과가 매우 향상되며, 제형의 안정성도 크게 개선된 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

리소포스파티딜콜린, 노루풀 추출물, 주름개선, 피부노화방지, 나노리포좀, 화장료, 조성물

Description

나노리포좀으로 안정화된 리소포스파티딜콜린과 노루풀 추출물을 함유하는 주름 개선용 화장료 조성물{Cosmetic Composition containing Lysophosphatidylcholine and Astilbe chinensis var Extracts stabilized with nanoliposome for improving skin wrinkle}

본 발명은 나노리포좀으로 안정화된 리소포스파티딜콜린과 노루풀 추출물을 함유하는 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 리소포스파티딜콜린과 노루풀 추출물은 나노리포좀에 의해 내포되어 있도록 형성되어 피부침투 효과가 크게 증가되며, 상기 피부의 주름을 개선시키고 탄력을 증진시키는 효과가 매우 향상되며, 제형의 안정성도 크게 개선된 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.

화장품은 우리 일상 생활과 깊이 관련되어 있으며 많은 사람들이 사용하고 있다. 인류의 문명이 발달하기 전 화장의 목적은 자연으로부터 신체를 보호하는 것이었으나, 과학과 문명의 발달과 더불어 화장의 목적은 신체를 청결하게 하고 아름답게 하며, 또한 노화를 지연시켜 아름답고 쾌적한 생활을 하게 하는 것으로 바뀌었다. 화장품의 기능은 청결과 미적 기능뿐만 아니라, 공해 물질과 스트레스, 자외 선 등의 외적인 요인과 면역세포의 기능저하, 세포 활성의 저하 등의 내적 요인에 기인한 자유 라디칼(Free Radical), 활성산소, 과산화물 등에 의한 단백질, 핵산, 세포막 지질 파괴 등의 피부 노화의 원인을 제거하거나 억제하는 것이다. 또한, 소비자의 고기능 화장품에 대한 욕구를 충족시키기 위한 미백, 피부주름 개선 및 억제, 그리고 자외선 차단 기능을 갖는 화장품들이 계속해서 개발되고 있다. 그 중에서도 특히 주름 개선 및 억제 제품은 보다 젊음을 유지하려는 소비자의 많은 관심을 받는 대상이다.

원래 노화 현상에 의한 주름은 피부 진피층의 콜라겐과 탄력 섬유의 소실로 인해 피부 표면에 생기는 골이라고 정의 할 수 있다. 피부 주름은 진피층에 존재하는 콜라겐 교원섬유에 의해 결정되는데, 콜라겐 분자는 섬유 아세포에서 생성되어 진피층으로 분비 된 후, 자동회합에 의해 콜라겐 섬유로 형성된다(Implant dentistry. 2002. 11(3):280-285). 콜라겐 섬유는 피부 진피층에서 피부의 기계적 견고성, 조직의 결합력, 세포와의 부착 및 세포 분화 등에 관여한다 (Journal of the American Academy of Dermatology, 2001, 17(4):610-613). 이러한 콜라겐이 내적 요인 및 외적 요인에 의해 생성이 감소하거나 변형이 지속적으로 축적되게 되면 주름생성의 원인이 된다 (Clinics in geriatric medicine, 2001, 17(4):617-630).

콜라겐은 연령이 증가할수록, 그리고 자외선에 노출이 많이 될수록 양적 감소를 보인다. 콜라겐은 형태와 구조적 특징에 따라서 분류되는데 이들 중에서, 가장 특징이 잘 알려진 것은 타입 I, II, III 그리고 IV이다. 콜라겐 타입 I과 III는 진피층의 세포간질의 구성성분을 이루고 콜라겐 타입 IV는 DEJ (Dermal Epidermal Junction)의 주요 구성물질이 된다. DEJ는 피부의 표피층과 진피층 사이에 위치하여 두 층간의 물질 투과와 수송을 조절해주며 인접한 피부세포의 분화를 조절하며 피부의 견고성을 유지시켜준다. 피부의 주요 구조적 성분인 콜라겐과 엘라스틴은 자연적 또는 외부 자극에 의해 구조가 변성되거나 생합성량이 감소하게 되는데 이로 인해 피부 노화가 가속화된다. 또한 콜라게네이즈의 발현량과 활성 역시 피부 노화를 가속화 시키는 주요 요인이다.

콜라겐 합성 촉진물질로 기존에 레티노인산(retinoic acid), 표피성장인자(Epidermal growth factor: EGF), TGF(trans forming growth factor, 형질전환성장인자; Cardinale G. et al., Adv. Enzymol., 41, p. 425, 1974), 동물 태반 유래의 단백질(JP8-231370), 베툴린산(betulinic acid(JP8-208424)), 클로렐라 추출물(JP9-40523, JP10-36283, 섬유아세포 증식 촉진작용) 등이 알려져 있다. 특히 표피성장인자는 상피세포, 내피세포 및 섬유아세포 세포증식의 강력한 촉진제로 작용하며, 상피세포 결손 시 상피세포의 이동과 증식을 촉진시키기 때문에 상처치유 효과가 우수하다. 또한 레티놀은 콜라겐 합성과 분해억제에 매우 효과적으로 피부주름 개선 효과는 미국 특허 제4,603,146호 및 제4,877,805호 등에 명시되어 있다. 그러나 레티노인산의 경우 불안정하고, 피부 적용 시 자극, 발적 등의 안전성 문제로 사용량의 제한이 있으며, 클로렐라 추출물 등은 효과가 미미하여 실질적으로 피부의 콜라겐 합성을 촉진하여 피부 기능 개선 효과를 기대할 수 없다. 따라서, 생체에 안전하고 기존의 콜라겐 합성능 촉진 물질보다 효과가 높은 새로운 콜라겐 합성 촉진제의 개발이 절실히 요망되고 있다.

본 발명자들은 피부 주름 개선을 위한 다양한 생약재 추출물을 연구한 결과 노루풀 추출물이 피부 주름 개선에 효과가 있음을 확인할 수 있었고, 리소포스파티딜콜린과 노루풀 추출물을 나노리포좀으로 안정화한 결과 진피표피경계부(Dermal-Epidermal Junction) 강화 효과가 있고 피부세포 증식효과, 콜라겐 합성 증진 효과, 콜라게네이즈 생성 억제 효과 및 항산화 효능이 있어 주름 개선에 시너지 효과가 있음을 발견하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 나노리포좀으로 안정화한 리소포스파티딜콜린 및 노루풀 추출물을 함유하여 피부 주름 개선에 시너지 효과가 있는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명에 따른 피부 주름 개선용 화장료 조성물은 나노리포좀으로 안정화된 리소포스파티딜콜린과 노루풀 추출물을 함유한다.

상기 노루풀 추출물은 나노리포좀 총중량에 대하여 0.001~50.0 중량%로 함유된 것을 특징으로 한다.

상기 나노리포좀은 화장료 조성물 총중량에 대해서 0.001~30 중량%인 것을 특징으로 한다.

상기 나노리포좀의 입자 지름은 30 ~ 70nm이고, 또한 상기 리소포스파티딜콜린은 나노리포좀 총 중량에 대하여 2-8 중량%인 것을 특징으로 한다.

상기 화장료 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패취, 또는 분무제의 제형 중에 선택되는 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 한다.

본 발명은 나노리포좀으로 안정화된 리소포스파티딜콜린(Lysophosphatidylcholine)과 노루풀(Astilbe chinensis var. davidii) 뿌리 추출물을 함유하여 주름 개선 상승효과를 가지는 화장료 조성물에 관한 것이다. 상기 조성물은 피부 내 콜라겐 IV, 콜라겐 VII, Laminin 의 합성을 증가시켜 진피표피경계부(Dermal-Epidermal Junction)를 강화시키며, 피부세포 증식효과 및 콜라겐 합성 증진 효과, 콜라게네이즈 생성 억제 효과가 우수하여 피부의 주름을 개선시키는 데 매우 큰 효과를 도모한다.

본 발명에 따른 피부 주름 개선용 화장료 조성물은 나노리포좀으로 안정화한 리소포스파티딜콜린 및 노루풀 추출물을 함유하여 피부 세포의 증식 촉진, 섬유아세포의 콜라겐 합성 촉진 및 분해를 억제시켜 피부의 주름 개선에 시너지 효과가 있다.

본 발명에서 이용되는 노루풀(Astilbe chinensis var. davidii)은 범의귀과에 속하는 여러해살이풀로서 전국의 산골짜기에서 흔히 볼 수 있고 높이는 30-70cm이고 긴 갈색털이 있으며, 근경은 굵고 옆으로 짧게 뻗는다. 잎은 3개씩 2-3회 갈라지며, 작은 잎은 타원형, 길이 3-8cm 나비 2-4cm, 종이처럼 얇고 가장자리에 겹톱니 또는 결각상의 톱니가 있고 잎자루가 길다. 꽃은 7-8월에 피고 홍자색, 줄기 끝의 원추꽃차례에 길이 30cm 정도로서 많은 꽃이 달리고, 화축에는 갈색 털이 많고, 꽃받침은 5개로 갈라지고 갈라진 조각은 달걀모양이며 꽃잎은 5개로서 선형이고 수술은 10개이며 암술대는 2개이고 삭과는 길이 3-4mm이다.

이 생약의 전초(全草)를 소승마((小升麻), Astilbes Herba)라하고 뿌리는 적승마((赤升麻), Astilbe Radix)라고 해서 약용에 이용되는데 혈액순환을 좋게 하고, 어혈(瘀血)을 풀어주며, 열을 내리고, 독을 풀어주며, 경련을 멎게 하고, 통증을 멎게 하는 효능이 있어서 과로로 오는 병, 근육과 뼈마디가 시리고 아픈 증상, 타박상, 관절통, 수술 후 통증, 뱀에게 물린 독을 푸는 데 사용한다(한국의 약용식물, 교학사, 2000, p204, 배기환저). 민간에서는 적승마(赤升麻)라 불리는 이것의 근경을 해열, 진통, 소염 등에 사용하였고 소승마(小升麻)라고 불리는 땅 위에서 자라는 부분은 해열, 진해 작용이 있으므로 감기로 인한 열, 기침, 두통과 몸살 기운이 있을 때 처방하고 사용되었다. 현재 보고 된 바에 의하면 전초에는 시안화수소산, 꽃에는 케르세틴 그리고 근경에는 베르게닌과 탄닌 성분이 함유되어 있는 것으로 알려져 있다. 이 속(屬)에 속하는 식물로는 그 밖에 진퍼리노루풀(A. divaricata), 숙은노루풀(A. koreana), 외잎승마(A. simplicifolia) 등이 있다.

본 발명에 이용한 리소포스파티딜콜린은 인지질의 일종으로 글리세롤 골격을 가진 1자리의 하이디록시기에 아실기가 에스터 결합한 것과 2자리에 결합한 것이며, 포스파티딜콜린의 포스포리파아제 A에 의한 가수분해 생성물 중 하나로서, 리소포스파티딜콜린은 진피표피경계부(Dermal-Epidermal Junction) 강화 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

한편, 본 발명에 의한 노루풀 추출물은 다음과 같이 제조할 수 있다.

노루풀을 물로 깨끗이 세척한 후, 그늘에서 건조한다. 건조한 노루풀을 추출용기에 넣고, 적당량의 추출 용매에 적절한 온도에서 일정 시간 추출한다. 상기 추출물은 여과되고, 진공회전증발기 등을 이용하여 농축될 수 있다.

상기 추출 용매로는 물(정제수), 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 극성용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 에탄올을 첨가하여 열수 추출하는 것을 특징으로 한다.

상기 추출 용매의 양은 생약 건조 중량의 2 ~ 10 배로 한다.

상기 추출 방법은 중탕 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출 등의 추출 방법을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 중탕 추출의 추출방법으로 1회 내지 5회 추출될 수 있다.

상기 침적 온도는 30 ~ 70℃ 이며, 보다 바람직하게는 40 ~ 60℃이며, 가장 바람직하게는 50℃ 정도로 유지하는 것이 부패, 변색 및 변취의 예방에 가장 효과적이다.

상기 침적 시간은 5 ~ 20 시간이며, 바람직하게는 10 시간이다.

상기 노루풀 추출물을 수득한 후, 거름종이 등을 이용하여 고형분을 제거하고, 현탁액을 원심분리 시키고, 상층액을 감압 여과할 수 있다.

상기 여과된 추출물을 진공회전농축기로 20 ~ 100℃, 바람직하게는 50 ~ 70℃에서 감압농축할 수 있다.

본 발명에 의한 노루풀 추출물은 피부 세포의 증식 촉진 및 섬유아세포의 콜 라겐 합성 촉진 및 분해를 억제 하여 피부의 주름 개선의 용도를 나타낸다. 이와 같은 사실은 하기의 실시예에 명시되어 있다.

본 발명에서는 노루풀 추출물을 나노리포좀으로 안정화 시킨 것을 조성물 총중량에 대하여 0.001~30.0중량%의 양으로, 바람직하게는 0.01~10.0중량%의 양으로 배합하여 화장료 조성물을 구성하였다.

본 발명에서 상기 노루풀 추출물은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.001 ~ 50 중량% 함유될 수 있다.

본 명세서에서, 용어 “나노리포좀”은 통상적인 리포좀의 형태를 갖는 것으로서 평균 입자 지름이 1 ~ 100 nm인 리포좀을 의미한다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 나노리포좀의 평균 입자 지름은 30 ~ 70 nm이다. 상기 나노리포좀의 평균 입자 지름이 70 nm를 초과하는 경우에는 본 발명에서 달성하고자 하는 기술적 효과 중 피부침투의 개선 및 제형 안정성의 개선이 매우 미약하다.

본 발명의 나노리포좀은 폴리올, 계면활성제, 인지질, 지방산 및 물을 포함하는 혼합물에 의해 제조되며, 1가 알코올 (예: 에탄올 등)을 이용하지 않는다는 것이 특징이다.

본 발명의 나노리포좀에 이용되는 폴리올은 특히 제한되지 않으며, 바람직하게는 프로필렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 메틸프로판디올, 이소프렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 에리스리톨, 자이리톨 및 솔비톨을 포함하며, 가장 바람직하게는 프로필렌글리콜이다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대 하여 10 ~ 80 중량%, 바람직하게는 30 ~ 70 중량%이다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 계면활성제는 당업계에 공지된 어떠한 것도 사용할 수 있으며, 예를 들어, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 양성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용될 수 있고, 바람직하게는 음이온성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용된다. 음이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알킬아실글루타메이트, 알킬포스페이트, 알킬락틸레이트, 디알킬포스페이트 및 트리알킬포스페이트를 포함한다. 비이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알콕시레이티드알킬에테르, 알콕시레이티드알킬에스테르, 알킬폴리글리코사이드, 폴리글리세릴에스테르 및 슈가에스테르를 포함한다. 가장 바람직하게는, 비이온성 계면활성제에 속하는 폴리솔베이트류가 이용된다. 계면활성제의 사용량은, 일반적으로 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.1 ~ 10 중량%이고, 바람직하게는 0.5 ~ 5.0 중량%이다.

나노리포좀의 제조에 이용되는 또 다른 성분인 인지질은 양쪽친화성 지질로 이용된 것으로서, 천연 인지질 (예: 난황 레시틴 또는 대두 레시틴, 스핑고마이엘린) 및 합성 인지질 (예: 디팔미토일포스파티딜콜린 또는 수첨 레시틴)을 이용할 수 있으나, 바람직하게는 리소포스파티딜콜린(lysophosphatidylcholine)이 적합하다. 상기 리소포스파티딜콜린은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.5～10 중량%, 바람직하게는 2～5 중량%를 사용한다.

본 발명의 나노리포좀 제조에 이용되는 지방산은 고급 지방산으로서, 바람직 하게는 C_12-22 알킬 체인의 포화 또는 불포화 지방산으로서, 예컨대, 라우린산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아린산, 올레산 및 리놀레산을 포함한다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.05 ~ 3.0 중량%이고, 바람직하게는 0.1 ~ 1.0 중량%이다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 물은 일반적으로 탈이온화된 증류수이며, 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 5.0 ~ 40 중량%이다.

나노리포좀의 제조는 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 이루어질 수 있으나, 가장 바람직하게는 상기 성분들을 포함하는 혼합물을 고압 호모게나이저에 적용하여 제조된다. 고압 호모게나이저에 의한 나노리포좀의 제조는 소망하는 입자 크기에 따라 다양한 조건 (예: 압력, 횟수 등)으로 실시할 수 있으며, 바람직하게는 600 ~ 1200 bar 압력 하에서 1 ~ 5회 고압 호모게나아저를 통과하도록 하여 나노리포좀을 제조한다.

이렇게 제조된 나노리포좀 시스템은 여러 종류의 난용성 물질을 녹임과 동시에 불안정한 물질을 안정화시켜 피부침투효과를 극대화 하는 장점을 가지고 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 리소포스파티딜콜린 및 노루풀 추출물을 포함하는 나노리포좀 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 조성물은 상기 나노리포좀으로 안정화한 리소포스파티딜콜린 및 노루풀 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

본 발명의 나노리포좀으로 안정화한 리소포스파티딜콜린 및 노루풀 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물로 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 본 발명의 나노리포좀으로 안정화한 노루풀 추출물을 함유하는 화장품 이외에도 피부 과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱(conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 나노리포좀으로 안정화 한 리소포스파티딜콜린 및 노루풀 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트 화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 각종 크림, 에센스, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형을 포함한다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[제조예 1]노루풀 추출물의 제조

노루풀 50 g을 파쇄기에 곱게 파쇄하여 100% 에탄올 500ml에 침지시켜 50℃ 수욕조에서 10시간 동안 온탕하였다. 얻어진 추출액을 실온으로 냉각시키고 거름종이로 여과하여 여과액을 취하였다. 질소를 사용하여 여과액에서 에탄올을 증발시켜 농축한 다음, 이를 10% 에탄올에 녹여 추출물을 제조하였다.

[제조예 2] 노루풀 추출물을 함유하는 나노리포좀의 제조

나노리포좀은 리소포스파티딜콜린의 유무에 따른 차이를 비교하기 위해 하기 표 1의 조성으로 A상에 B상을 첨가하고, 균일하게 습윤 시킨 후 C 상을 첨가하고 70 ~ 80℃까지 가열 혼합하였다. 이 용액을 600 ~ 1000 bar의 조건으로 고압 호모게나이저에 2 ~ 4회 통과 시킨 후 냉각하여 지름 30 ~ 70 nm 입자 크기의 나노리포좀을 얻었다.

		실시예	비교예1	비교예2	비교예3
상	성 분	함량 (중량%)	함량 (중량%)	함량 (중량%)	함량 (중량%)
A	글리세린	To 100	To 100	To 100	To 100
B	리소포스파티딜콜린	5.0	5.0	-	-
	디팔미토포스파티딜콜린	-	-	5.0	5.0
	유동 파라핀	1.0	1.0	1.0	1.0
	마카다미아 넛 오일	1.0	1.0	1.0	1.0
	스쿠알란	1.0	1.0	1.0	1.0
	디메치콘	1.0	1.0	1.0	1.0
	이소프로필 미리스테이트	1.0	1.0	1.0	1.0
	소듐스테아로일 락테이트	0.5	0.5	0.5	0.5
	폴리솔베이트-80	0.5	0.5	0.5	0.5
	스테아린산	0.5	0.5	0.5	0.5
C	노루풀 추출물	20.0	-	20.0	-
	수산화 칼륨	적량	적량	적량	적량
	정제수	5.0	5.0	5.0	5.0

[실험예 1]세포증식효과

상기 제조예 2의 나노리포좀에 대한 피부 세포(skin cell) 증식효과를 보기위해 인체 정상 섬유아세포(Fibroblast)를 96-웰 마이크로 플레이트(96-well microplate)의 각 웰(Well)에 1X10⁴ 세포가 되도록 접종하여 디엠이엠(DMEM : Dulbecco's Modified Eagle's Medium)배지에서 24시간 배양한다. 배양 후 상기에서 제조한 노루풀 추출물의 나노리포좀의 최종 농도 500㎍/㎖ 되도록 조정한 혈청이 없는 디엠이엠 배지로 교체한 후 24시간 더 배양한다. 배양 후 MTT(3-(4,5-디메틸씨아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움,3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)2,5-diphenyl tetrazolium: 5㎎/㎖) 용액 10㎕을 첨가하여 4시간 방치 후 반응액을 제거한다. 각 웰당 100㎕의 디메틸 설폭사이드용액을 가하여 염색된 세포를 용해시킨 후 마이크로 플레이트 리더로 570㎚ 에서의 흡광도를 측정하였다.

상기 과정을 실시하여 하기 수학식 1로부터 세포증식효과를 구해 그 결과를 표 2 에 나타내었다.

세포증식효과(%) = {(추출물처리시의 흡광도-대조군의 흡광도)/대조군의 흡광도} X 100

시료	세포증식효과(%)
실시예	37.4
비교예 1	10.5
비교예 2	24.7
비교예 3	9.5

상기 표 2에 의하면, 노루풀 추출물이 함유된 나노리포좀에서 노루풀 추출물이 함유되지 않은 나노리포좀보다 세포증식효과가 뛰어난 것을 확인하였으며, 특히 노루풀 추출물에 합성 인지질 중의 일종인 디팔미토일포스파티딜콜린을 함유한 비교예 2에 비하여 리소포스파티딜콜린과 노루풀 추출물을 이용한 실시예에서 가장 세포증식효과가 뛰어나 피부 주름 개선에 상당한 효과가 있음을 발견할 수 있었다.

[실험예 2]인공피부에서 피부 구성 물질의 변화

본 발명의 리소포스파티딜콜린과 노루풀 추출물을 안정화한 나노리포좀을 함유한 화장료에 대한 collagen type-4,7, MMP-1 및 laminin 등의 피부구성 성분의 변화를 측정하였다. 피부 등가물 (Dermal Equivalent: DE)을 이용하여 측정했으며, 피부 등가물은 인체 정상 섬유아세포 1 × 10⁵ 세포/㎖ (한국세포주은행)를 인체의 결합조직을 이루는 섬유조직과 유사한 겔 구조의 3 mg/㎖ 콜라겐 수용액:5 × DMEM : 2.2% 소듐바이카보네이트와 200 mM Hepes 완충액이 포함된 0.05 N 수산화나트륨이 7:2:1로 혼합된 배지에 접종하여, 5% CO₂, 37℃에서 7일 동안 배양한 것이다. 이를 3 ㎛ 다공성폴리카보네이트 (porous polycarbonate) 재질로 된 막 (membrane)에 의해 안쪽과 바깥쪽이 구분된 플레이트의 안쪽에 넣고 섬유아세포가 배양된 Derma Equivalent(DE) 표면 위에 표피각질형성세포 (Epidermal Keratinocyte) 1 X 10⁵ cell/㎖ 세포를 접종하여 EGF와 BPE가 함유된 K-SFM 배지를 안쪽과 바깥쪽에 넣고 7일 동안 배양하였다.

그 후 플레이트 안쪽의 배지를 버려 공기가 배양세포의 표면에 접촉되도록 하고 바깥쪽에 10% FBS가 함유된 K-SFM과 EGF가 들어있지 않은 DMEM이 동량으로 혼합된 배지를 넣고 2주간 배양하여 다층의 표피와 진피가 형성된 인공피부를 얻었다. 여기에 제조예 2에서 형성된 실시예 및 비교예 1내지 3을 배양액에 첨가하여 인공피부 조직에 적용하여 2주 배양 후 ELA방법을 이용하였으며 각각의 kit를 이용하여 분석을 수행하였다.

피부 구성 물질의 변화 (%)

	Collagen I	Collagen Ⅳ	Collagen Ⅶ	MMP-1	Laminin
무처리군	100	100	100	100	100
실시예	136	132	142	82	141
비교예 1	111	119	125	102	132
비교예 2	127	117	116	85	122
비교예 3	103	102	105	98	112

상기 표 3에 의하면, 리소포스파티딜콜린과 노루풀 추출물이 함께 사용된 실시예에서 두 물질의 상승작용에 의해 더욱 뛰어난 생합성 능력을 보이는 것을 확인하여 뛰어난 주름 개선 효과가 있음을 확인할 수 있다.

[제조예 3] 실시예 및 비교예

본 발명의 노루풀 추출물을 안정화한 나노리포좀을 함유하는 조성물 (실시예 2, 실시예 3, 실시예 4, 실시예 5), 나노리포좀 형태가 아닌 노루풀 추출물을 함유하는 조성물(실시예 1) 및 둘 다 함유하지 않은 조성물(비교예 1)을 다음 조성으로 제조하였다.

성 분		비교예 4	실시예 2	실시예 3	실시예 4	실시예 5	비교예5
		함량 (중량%)	함량 (중량%)	함량 (중량%)	함량 (중량%)	함량 (중량%)	함량 (중량%)
노루풀 추출물 (제조예 1)		2.0	-	-	-	-	-
나노리포좀 (실시예)		-	10.0	-	-	-	-
나노리포좀 (비교예 1)		-	-	10.0	-	-	-
나노리포좀 (비교예 2)		-	-	-	10.0	-	-
나노리포좀 (비교예 3)		-	-	-	-	10.0	-
A	세토스테아릴알콜	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
	글리세릴스테아레이트	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5	1.5
	마이크로크리스탈린	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7	0.7
	스쿠알란	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
	유동파라핀	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
	트리옥타노인	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0	5.0
	폴리솔베이트	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2	1.2
	솔비탄스테아레이트	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
	토코페롤아세테이트	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2	0.2
	마이크로메치콘	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0	3.0
	BHT	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
B	글리세린	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0	4.0
	1,3-부틸렌글리콜	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0	2.0
	EDTA-2Na	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05	0.05
	정제수	To 100	To 100	To 100	To 100	To 100	To 100
향, 방부제		적량	적량	적량	적량	적량	적량

[실험예 3]주름 개선 임상효과

본 발명의 노루풀 추출물을 안정화한 나노리포좀을 함유하는 화장료에 대한 피부주름개선 임상효과를 측정하였다. 40세 이상의 여성 60명을 4그룹(A,B,C,D,E 및 F)으로 나누어 A그룹을 대상으로 비교예4를, B그룹을 대상으로 실시예2를, C그룹을 대상으로 실시예 3, D그룹을 대상으로 실시예 4, E그룹을 대상으로 실시예 5, F그룹을 대상으로 비교예 5를 각각 주름이 있는 눈가를 중심으로 12주간 도포(2회/일, 0.2g/회) 한 후, 숙련자의 객관적 평가와 피검자의 주관적 평가를 다음의 7등급으로 분류하여 평가함으로써 피부주름의 개선정도 (ΔW)를 측정하였다.

또 미세주름측정기인 스킨 비지오메터(Skin Visiometer SV 600 FireWire, CK Electronic GmbH)와 탄력측정기인 큐토메터(Cutometer MPA 580, CK Electronic GmbH)를 이용하여 피부의 주름개선 효과와 탄력성을 측정하였다.

*피부 주름 평가 기준

매우 심하게 악화	-3
악화	-2
약간 악화	-1
변화 없음	0
약간 개선	1
개선	2
매우개선	3

숙련자의 객관적 평가

	평균주름 개선정도(△W)
	비교예4		실시예2		실시예3		실시예4		실시예 5		비교예 5
	T0	T12	T0	T12	T0	T12	T0	T12	T0	T12	T0	T12
피검자1	0	1	0	3	0	1	0	3	0	1	0	1
피검자2	0	2	0	1	0	2	0	2	0	1	0	0
피검자3	0	2	0	2	0	1	0	2	0	2	0	0
피검자4	0	1	0	3	0	2	0	2	0	1	0	1
피검자5	0	1	0	2	0	2	0	1	0	1	0	1
피검자6	0	3	0	2	0	1	0	3	0	1	0	1
피검자7	0	2	0	3	0	1	0	2	0	0	0	1
피검자8	0	3	0	3	0	2	0	2	0	1	0	0
피검자9	0	1	0	3	0	2	0	2	0	1	0	1
피검자10	0	2	0	3	0	2	0	2	0	0	0	1
△W(T12-T0)	1.8		2.5		1.6		2.1		0.9		0.7

피검자의 주관적 평가

구분	평균주름 개선정도(△W)
	비교예4		실시예2		실시예3		실시예 4		실시예 5		비교예 5
	T0	T12	T0	T12	T0	T12	T0	T12	T0	T12	T0	T12
피검자1	0	1	0	3	0	1	0	3	0	2	0	1
피검자2	0	2	0	3	0	2	0	1	0	1	0	0
피검자3	0	2	0	3	0	2	0	2	0	1	0	1
피검자4	0	2	0	2	0	2	0	2	0	1	0	1
피검자5	0	1	0	3	0	1	0	2	0	1	0	1
피검자6	0	2	0	2	0	1	0	2	0	2	0	1
피검자7	0	2	0	3	0	2	0	2	0	0	0	1
피검자8	0	3	0	2	0	1	0	3	0	1	0	1
피검자9	0	1	0	3	0	2	0	3	0	0	0	0
피검자10	0	2	0	3	0	1	0	3	0	1	0	1
△W(T12-T0)	1.8		2.7		1.5		2.3		1.0		0.8

시험결과 12주 후, 노루풀 추출물을 함유한 실시예1과 실시예2, 실시예4에서 평균 주름 개선정도가 숙련자의 객관적 평가와 피검자의 주관적 평가가 비교예에 비해서 현저한 주름 개선 효과가 있는 것으로 확인하였으며, 리소포스파티딜콜린이 함유된 실시에3에서 또한 주름 개선 효과가 있는 것으로 확인하였다. 더욱이, 리소포스파티딜콜린과 노루풀 추출물이 같이 사용된 실시예2에서 두 물질의 상승효과에 의한 가장 뛰어난 주름 개선 효과를 나타내었다.

구분		주름개선효과		탄력효과
		주름의 평균깊이(%)	거칠기평균(%)	피부흡착도(%)
비교예4	T0	100.0	100.0	100.0
	T12	80.4	71.6	68.2
실시예2	T0	100.0	100.0	100.0
	T12	64.5	51.1	53.9
실시예3	T0	100.0	100.0	100.0
	T12	82.2	84.4	83.9
실시예4	T0	100.0	100.0	100.0
	T12	76.8	65.2	62.8
실시예5	T0	100.0	100.0	100.0
	T12	92.5	92.1	88.9
비교예5	T0	100.0	100.0	100.0
	T12	98.2	95.8	96.7

주름의 평균깊이는 주름을 측정하고자 하는 부위에 실리콘고무를 이용하여 만든 표본을 5등분하고 각각 5군데에서 주름 높이의 최고점과 최저점의 차이에 대한 평균값을 나타낸다. 거칠기 평균은 표본에서 전체 주름깊이의 평균값에서 개개 측정부위(전체를 255개의 측정부위 점으로 나눔)에서의 주름깊이 차이에 대한 평균값을 나타낸다. 주름의 평균깊이와 거칠기 평균의 수치는 낮게 나타날수록 주름이 작게 형성되는 것으로서 피부 노화도가 작은 것을 의미하게 되어 바람직하다.

상기 표 7 나타난 결과로부터, 적용전/후의 상대적인 수치 계산을 통해 살펴보면 노루풀 추출물이 함유된 비교예 4, 실시예2, 실시예4의 주름의 평균깊이, 거칠기 및 피부흡착도에서 비교예에 비해 매우 높은 개선 효과를 보였으며, 리소포스파디딜콜린이 함유된 실시예3 역시 비교예에 비해 우수한 효과를 갖는 것을 확인하였다.

결과적으로 상기 표 7에 나타난 결과를 통해 확인할 수 있는 사실은 노루풀 추출물과 노루풀 추출물을 나노리포좀으로 안정화 시킨 것을 함유하는 화장료는 피부주름개선효과와 탄력효과를 증진시키는 것으로서, 피부노화방지의 우수한 효과를 발휘하고 있음을 알 수 있었고, 특히 실시예 2와 같이, 리소포스파티딜콜린을 이용한 나노리포좀에서는 상승작용을 보여 더욱 뛰어난 주름개선 효과를 얻을 수 있었다.

앞선 실험예의 결과를 근거로 하여 본 발명의 리소포스파티딜콜린과 노루풀 추출물을 나노리포좀으로 안정화 시킨 것을 함유하는 화장료 조성물을 조성하여 제시한다. 그러나 본 발명의 조성물을 하기의 제형예들로 한정하고자 하는 것은 아니다.

[제형예 1]유연 화장수

나노리포좀으로 안정화 한 노루풀 추출물을 함유한 유연 화장수의 제형예는 다음 표 8의 조성과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량%)
나노리포좀(실시예2)	1.00
1,3-부틸렌글리콜	1.00
디소듐이디티에이	0.05
알란토인	0.10
디포타슘글리시리제이트	0.05
시트릭애씨드	0.01
소듐시트레이트	0.02
글리세레스-26	1.00
알부틴	2.00
하이드로제네이티드캐스터오일	1.00
에탄올	30.00
보존제	미량
착색제	미량
착향제	미량
정제수	잔량

[제형예 2]영양 크림

나노리포좀으로 안정화 한 노루풀 추출물을 함유한 영양크림의 제형예는 다음 표 9의 조성과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량%)
나노리포좀(실시예 2)	2.0
1,3-부틸렌 글리콜	7.0
글리세린	1.0
D-판테놀	0.1
식물 추출물	3.2
마그네슘알루미늄실리케이트	0.3
PEG-40 스테아레이트	1.2
스테아릭애씨드	2.0
폴리소르베이트 60	1.5
친유형글리세릴스테아레이트	2.0
소르비탄세스퀴올리에이트	1.5
세테아릴알코올	3.0
미네랄오일	4.0
스쿠알란	3.8
카르릴릭/카프릭트리글리세라이드	2.8
식물성 오일	1.8
디메치콘	0.4
디포타슘글리시리제이트	미량
알란토인	미량
소듐 히아루로네이트	미량
토코페릴아세테이트	적량
트리에탄올아민	적량
보존제	적량
착향제	적량
정제수	잔량

Claims (6)

1. 나노리포좀으로 안정화된 리소포스파티딜콜린과 나노리포좀으로 안정화된 노루풀 추출물을 함유하는 피부 주름 개선용 화장료 조성물.
2. 제 1 항에 있어서, 상기 노루풀 추출물은 나노리포좀 총중량에 대하여 0.001~50.0 중량%로 함유된 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
3. 제 1항에 있어서, 상기 나노리포좀은 화장료 조성물 총중량에 대해서 0.001~30 중량%인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
4. 제 1 항에 있어서, 상기 나노리포좀의 입자 지름은 30 ~ 70nm인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
5. 제 1 항에 있어서, 상기 리소포스파티딜콜린은 나노리포좀 총 중량에 대하여 2-8 중량%인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
6. 제 1 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 화장수, 에센스, 로션, 크림, 팩, 젤, 연고, 패취, 또는 분무제의 제형 중에 선택되는 하나의 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.