KR100853120B1 - 나노리포좀에 안정화된 하고초 추출물을 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 나노리포좀에 안정화된 하고초(Prunella vulgaris) 추출물이 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 30중량% 함유된 것으로 엘라스틴 합성 촉진, 엘라스테이즈 활성 저해 및 항산화 작용에 의하여 피부의 주름을 개선하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물화장료 조성물에 관한 것으로서, 엘라스틴 생합성 촉진 및 엘라스테이즈 합성 저해 효과가 우수하여 피부의 주름을 개선하고 탄력을 유지해 주는 효과를 갖고, 항산화 효과도 우수하여 피부 세포 및 조직 손상을 방지하고 건강한 피부를 유지시켜 노화를 방지하는 효과를 얻을 수 있을 뿐만 아니라 나노리포좀으로 안정화되어 피부 침투 효과가 우수하여 일반적인 하고초 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 비하여 우수한 효과를 얻을 수 있었다.

하고초, 주름개선, 항산화, 피부노화, 나노리포좀, 화장료

Description

나노리포좀에 안정화된 하고초 추출물을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composions containing prunella vulgaris extracts stablized in nanoliposome}

본 발명은 나노리포좀에 안정화된 하고초 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 나노리포좀에 안정화된 하고초(Prunella vulgaris) 추출물이 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 30중량% 함유된 것으로 엘라스틴 합성 촉진, 엘라스테이즈 활성 저해 및 항산화 작용에 의하여 피부의 주름을 개선하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물화장료 조성물에 관한 것으로서, 엘라스틴 생합성 촉진 및 엘라스테이즈 합성 저해 효과가 우수하여 피부의 주름을 개선하고 탄력을 유지해 주는 효과를 갖고, 항산화 효과도 우수하여 피부 세포 및 조직 손상을 방지하고 건강한 피부를 유지시켜 노화를 방지하는 효과를 얻을 수 있을 뿐만 아니라 나노리포좀으로 안정화되어 피부 침투 효과가 우수하여 일반적인 하고초 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 비하여 우수한 효과를 얻을 수 있는 화장료 조성물에 관한 것이다.

화장품은 우리 일상 생활과 깊이 관련되어 있으며 많은 사람들이 사용하고 있다. 인류의 문명이 발달하기 전 화장의 목적은 자연으로부터 신체를 보호하는 것이었으나, 과학과 문명의 발달과 더불어 화장의 목적은 신체를 청결하게 하고 아름답게 하며, 또한 노화를 지연시켜 아름답고 쾌적한 생활을 하게 하는 것으로 바뀌었다. 화장품의 기능은 청결과 미적 기능뿐만 아니라, 공해 물질과 스트레스, 자외선 등의 외적인 요인과 면역세포의 기능저하, 세포 활성의 저하 등의 내적 요인에 기인한 자유 라디칼(Free Radical), 활성산소, 과산화물 등에 의한 단백질, 핵산, 세포막 지질 파괴 등의 피부 노화의 원인을 제거하거나 억제하는 것이다. 또한, 소비자의 고기능 화장품에 대한 욕구를 충족시키기 위한 미백, 피부주름 개선 및 억 제, 그리고 자외선 차단 기능을 갖는 화장품들이 계속해서 개발되고 있다. 그 중에서도 특히 주름 개선 및 억제 제품은 젊음을 유지하려는 소비자의 많은 관심을 받는 대상이다.

주름살은 특정 방향으로 근육이 오랜 기간 동안 반복하여 움직임으로써 형성되며 연령, 외부환경, 자외선 조사 등의 영향을 받는다. 이러한 인자에 의한 피부 세포의 손상은 여러 가지 노화 현상을 일으키는데, 진피 매트릭스를 구성하는 콜라겐, 엘라스틴, GAGs의 생성 및 분해가 원활히 일어나지 않아 매트릭스의 견고성이 떨어져 피부의 탄력이 떨어지고 주름이 생성된다.

현재, 주름 개선용 물질로는 레티놀, 아데노신, 동물태반유래 단백질, 클로렐라 추출물 등이 알려져 있다. 가장 잘 알려져 있는 레티놀은 콜라겐 합성을 촉진하는 물질이지만 불안정하고 피부 적용시 자극, 발적 등의 안전성 문제로 사용량의 제한이 있으며, 클로렐라 추출물 등은 효과가 미미하여 실질적으로 피부 주름 개선 효과를 기대하기가 어렵다고 알려져 있다.

한편, 피부는 자외선에 노출되어 있어 활성 산소종을 만드는 광화학적 반응들이 계속해서 일어나고 있으며, 이들 활성 산소종들은 피부 세포 및 조직 손상을 주도한다. 이들은 항산화 효소와 비효소적 항산화제들로 구성된 항산화 방어망을 파괴함으로써 산화제/항산화제 균형을 산화 상태 쪽으로 기울게 한다. 따라서 건강한 신체의 보호를 위해서는 생성된 활성산소를 효율적으로 방어할 수 있는 시스템이 화장품의 처방에 반드시 포함될 필요가 있다. 즉 산화제/항산화제 밸런스가 유지되는 피부의 항산화 방어 시스템 구축이 필요하다.

지금까지 항산화작용을 갖는 것으로 알려진 물질은 아스코르빈산(ascorbic acid), 디엘-알파토코페롤(dl-α-tocopherol), 베타카로틴(β-carotene), 디부틸히드록실톨루엔(BHT) 등이 있다. 그러나, 이러한 물질들은 합성품으로 사용되기 때문에 장기 사용시 또는 다량 사용시 피부 안전성의 문제를 일으킬 수 있으므로 보다 안전하고 유용하게 피부에 적용할 수 있는 새로운 항산화 화장료의 개발이 절실하게 요구되고 있다.
상기와 같은 하고초 추출물을 기미, 주근깨 등 피부 노폐물 제거용 미용 조성물(대한민국 공개특허 제10-2002-0093655호), 아토피성 피부염 치료용 화장료(대한민국 공개특허 제10-2003-0032631호), 미백용 화장료(대한민국 공개특허 제10-2005-0018321호) 등으로 사용하는 선행특허문헌이 공지되어 있다.
그러나, 하고초 추출물은 피부를 통하여 침투되기 어려워 그 효능이 발현이 용이하지 못한 단점이 있었다.

따라서, 본 발명의 목적은 상기한 바와 같은 종래 기술의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 피부에 자극 없이 안정하게 적용될 수 있는 생약 추출물로서 하고초 추출물을 나노리포좀에 안정화시켜 함유시킴으로써, 피부 침투 효과를 극대화하여 엘라스틴(elastin)의 합성 증가 및 엘라스테이즈(elastase)의 활성 억제를 통하여더욱 향상된 피부의 주름 개선 효과 및 항산화 효과를 가지는 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

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상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은, 피부의 주름을 개선하는 유효성분으로서 하고초 추출물이 피부 침투 효과가 증진되도록 나노리포좀에 안정화(포집)되어 함유된 화장료 조성물을 제공한다. 상기 하고초 추출물은 엘라스틴 합성 촉진, 엘라스테이즈 활성 저해, 및 항산화 작용을 위한 유효성분으로 함유되고, 상기 하고초 추출물은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.001중량% ~ 50.0중량%로 안정화(포집)되어 있는 것이 바람직하며, 이와 같이 하고초 추출물이 안정화(포집)된 나노리포좀은 조성물 총 중량에 대하여 0.001중량% ~ 30중량%로 함유된 것이 좋다.

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본 발명에 따르면, 상기 나노리포좀에 안정화된 하고초 추출물은 피부 자극이 없이 안정하며, 피부에 침투되어 엘라스틴의 합성을 증가시키고 엘라스테이즈의 활성을 억제하여 피부의 주름을 개선하며, 항산화 효과를 가져 피부 세포 및 조직 손상을 방지하고 건강한 피부를 유지시킨다.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

하고초는 꿀풀이라고도 불리며 꿀풀과의 여러해살이풀이다. 한국과 만주 등지에 자생하며, 다년생 초본으로 높이 20~30cm로 산야지 및 길가풀밭에서 자란다. 원줄기는 네모지고 전체에 백색털이 있고 꽃은 자주색으로 꽃이 밀착한다. 잎은 마주보며 장원형으로 가는 톱니가 있다. 꿀풀의 꽃이나 전초를 건조한 것을 한약으로 사용한다. 성분은 트리테르페노이드(triterpenoid), 올레아노릭산(oleanolic acid), 우르소릭산(ursolic acid), 루틴(rutin), 하이페로시드(hyperoside), 카페익산(caffeic acid) 등이 함유되어 있다. 민간에서는 강장, 고혈압, 자궁염, 월경불순, 이뇨, 안질, 갑상선종, 임질, 나력, 두창, 해열, 연주창, 한열왕래증 등에 쓰이고 방광하탈, 신장병, 적리, 건위, 히스테리, 폐병, 늑막염, 뇌염, 각기, 선암, 임파절종양 등 다양한 치료에 쓰인다. 또한, 결핵간균, 이질간균, 포도상구균, 용혈성 연쇄상구균 등 병원미생물의 생장을 억제하는 효과도 있다. <동의보감>에 따르면 요로결석에 효과가 있고 간과 담의 화열을 제거하여 안질환이나 두통, 어지러움을 개선시켜준다. <동의학 사전>에서는 해독작용과 강압작용, 이뇨작용, 억균작용등이 있다고 나와있고 연주창, 영류, 유서선염, 두창, 옹종, 간화, 부종, 대하, 고혈압, 폐결핵, 유행성간엽 등에 쓸수 있다고 한다. 중국에서 펴낸 <중약대사전>에서는 나력, 영류, 급성 유선염, 유암, 안구의 동통, 현기증 등에 효과가 있다고 나타나있다. <전남본초>에서 구안와사, 타박상이나 칼 등에 베인 상처의 치료에 효과가 있다고 하였으며, <한국본초도감>은 결핵성림프선염, 종기, 신경성 고혈압 등에 효과가 뛰어나다고 나타나있다.

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상기 하고초 추출물은 당업계에서 공지된 다양한 추출 방법을 이용하여 제조할 수 있으며, 예를 들어 다음과 같이 제조할 수 있다.

하고초를 물로 깨끗이 세척한 후, 그늘에서 건조한다. 건조한 하고초를 추출용기에 넣고, 적당량의 추출 용매에 적절한 온도에서 일정 시간 추출한다.

상기 추출 용매로는 물(정제수), 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 극성용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 에탄올을 첨가하여 열수 추출하는 것이 좋다. 상기 추출 용매의 양은 하고초 건조 중량의 2 ~ 10배로 하는 것이 좋으면, 상기 추출 방법은 중탕 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출 등의 추출 방법을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 중탕 추출 방법으로 1회 내지 5회 추출하는 것이 좋다. 이때, 중탕 추출의 침적 온도는 30 ~ 70℃로 할 수 있으며, 보다 바람직하게는 40 ~ 60℃이며, 가장 바람직하게는 50℃ 정도로 유지하는 것이 부패, 변색 및 변취의 예방에 가장 효과적이다. 그리고, 침적 시간은 5 ~ 20시간, 바람직하게는 10시간이 좋다.

위와 같이 하고초 추출물을 수득한 후에는 거름종이 등을 이용하여 고형분을 제거하고, 현탁액을 원심 분리시키고, 상층액을 감압 여과할 수 있다. 그리고, 상기 여과된 추출물을 진공회전농축기로 20 ~ 100℃, 바람직하게는 50 ~ 70℃에서 감압 농축할 수 있다.

본 발명에서 상기 하고초 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 것이면 본 발명에 포함하며, 또한 상기 하고초 추출물은 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다. 구체적으로, 본 발명에 사용되는 하고초 추출물은 추출 용매에 의한 추출물을 그대로 사용하거나, 추출한 후 정제 과정, 예를 들어 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막 등의 분리막을 막 분리, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등의 정제 과정을 추가적으로 실시하여 사용할 수 있다. 아울러, 상기 하고초 추출물은 감압 증류 및 동결 건조(또는 분무 건조 등) 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조된 다음, 조성물에 그대로 함유되거나, 또는 용매에 희석되어 함유될 수 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 위와 같은 하고초 추출물이 나노리포좀으로 안정화되어 피부 주름 개선 및 항산화를 위한 유효성분으로 함유된 것이면 본 발명에 포함한다. 이와 같이 하고초 추출물이 안정화(포집)된 나노리포좀은 조성물 총 중량에 대하여 0.001중량% ~ 30중량%(하고초 추출물 + 나노리포좀의 중량)로 함유된 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 0.01중량% ~ 10.0중량%로 함유된 것이 좋다. 또한, 상기 하고초 추출물은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.001중량% ~ 50중량%로 포집되는 것이 좋다.

본 명세서에서 사용되는 용어 "나노리포좀"은 제약, 화장품 및 식품 분야에서 생리활성 성분을 안정하게 전달하고, 침투 효과를 극대화하는 데에 사용되는 리포좀의 형태를 갖는 것으로서, 평균 입자 지름이 1 ~ 100nm(나노미터)인 리포좀을 의미한다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 나노리포좀의 평균 입자 지름은 30 ~ 70 nm인 것이 좋다. 상기 나노리포좀의 평균 입자 지름이 70 nm를 초과하는 경우에는 본 발명에서 달성하고자 하는 기술적 효과 중 피부 침투의 개선 및 제형 안정성의 개선이 매우 미약할 수 있다.

상기 나노리포좀은 폴리올, 계면활성제, 인지질, 지방산 및 물을 포함하는 혼합물에 의해 제조될 수 있으며, 상기 혼합물에는 1가 알코올(예: 에탄올 등)을 이용하지 않는다는 것이 좋다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 폴리올은 특별히 제한되지 않으며, 예를 들어 프로필렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 메틸프로판디올, 이소프렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 에리스리톨, 자이리톨 및 솔비톨 등로 이루어진 군중에서 선택된 하나 이상을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 프로필렌 글리콜을 사용하는 것이 좋다. 그리고, 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 10 ~ 80중량%, 바람직하게는 30 ~ 70중량%가 좋다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 계면활성제는 당업계에 공지된 어떠한 것도 사용할 수 있으며, 예를 들어, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 양성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용될 수 있고, 바람직하게는 음이온성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용된다. 음이온성 계면활성제의 구체적인 예로는 알킬아실글루타메이트, 알킬포스페이트, 알킬락틸레이트, 디알킬포스페이트 및 트리알킬포스페이트 등을 들 수 있다. 비이온성 계면활성제의 구체적인 예로는 알콕시레이티드알킬에테르, 알콕시레이티드알킬에스테르, 알킬폴리글리코사이드, 폴리글리세릴에스테르 및 슈가에스테르 등을 들 수 있다. 가장 바람직하게는, 비이온성 계면활성제에 속하는 폴리솔베이트류가 이용된다. 계면활성제의 사용량은, 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.1 ~ 10중량%이고, 바람직하게는 0.5 ~ 5.0중량%가 좋다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 또 다른 성분인 인지질은 양쪽친화성 지질로 이용된 것으로서, 천연 인지질(예: 난황 레시틴 또는 대두 레시틴, 스핑고마이엘린) 및 합성 인지질(예: 디팔미토일포스파티딜콜린 또는 수첨 레시틴)을 포함하며, 바람직하게는 레시틴이다. 보다 바람직하게는, 상기 레시틴은 대두 또는 난황에서 추출한 천연 유래의 불포화 레시틴 또는 포화 레시틴이다. 통상적으로 천연 유래의 레시틴은 포스파티딜 콜린의 양이 23 ~ 95%, 그리고 포스파디딜에탄올아민의 양이 20% 이하이다. 본 발명의 나노리포좀의 제조에 있어서, 레시틴의 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.5 ~ 20중량%이며, 바람직하게는 2 ~ 8중량%가 좋다.

본 발명의 나노리포좀 제조에 이용되는 지방산은 고급 지방산으로서, 바람직하게는 C12-22 알킬 체인의 포화 또는 불포화 지방산으로서, 예컨대, 라우린산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아린산, 올레산 및 리놀레산을 포함한다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.05 ~ 3.0중량%이고, 바람직하게는 0.1 ~ 1.0중량%가 좋다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 물은 일반적으로 탈이온화된 증류수이며, 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 5.0 ~ 40중량%이다.

위와 같은 나노리포좀의 제조는 다양한 방법을 통해 이루어질 수 있으나, 가장 바람직하게는 상기 성분들을 포함하는 혼합물과 하고초 추출물을 고압 호모게나이저에 적용하여 제조한다. 상기 고압 호모게나이저에 의한 나노리포좀의 제조는 소망하는 입자 크기에 따라 다양한 조건(예: 압력, 횟수 등)으로 실시할 수 있는 이점이 있다. 이때, 바람직하게는 600 ~ 1200 bar 압력 하에서 1 ~ 5회 고압 호모게나아저를 통과하도록 하여 나노리포좀을 제조하는 것이 좋다.

위와 같이 제조된 나노리포좀은 여러 종류의 난용성 물질을 녹임과 동시에 불안정한 물질을 안정화시켜 피부 침투 효과를 극대화하는 장점을 가지고 있다.

본 발명에 따른 화장료 조성물은 유효 성분으로서의 하고초 추출물(바람직하게는 하고초 추출물을 안정화(포집)한 나노리포좀) 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

또한, 본 발명에 따른 화장료 조성물은 당업계에서 일반적인 제형, 예를 들어 유화 제형이나 가용화 제형 등의 형태로 제조될 수 있다. 유화 제형으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등을 예로 들 수 있으며, 가용화 제형으로는 유연화장수를 예로 들 수 있다. 또한, 본 발명의 화장료 조성물은 화장품 이외에도 피부 과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱(conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 하고초 추출물(또는 나노리포좀으로 안정화한 하고초 추출물)에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제, 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 각종 크림, 에센스, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도, 패취, 분무제 등의 제형을 포함한다.

본 발명에 따르면, 하고초 추출물에 의해 주름개선 효과가 우수하다. 구체적으로, 전술한 바와 같이 하고초 추출물이 엘라스틴 생성을 촉진하고 엘라스테이즈 활성을 억제하며 피부 상태 개선(탄력)의 용도를 나타낸다. 또한, 세포증식 촉진 효과에 의해 피부의 주름을 개선하며 제형 내의 안정성이 우수하다. 그리고, 항산화 효과를 갖다. 또한, 상기 하고초 추출물이 나노리포좀에 안정화되어 함유된 경우, 피부 침투 효과가 증진되어 위와 같은 효과가 보다 상승된다. 이와 같은 효과는 하기의 실시예에서 확인할 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나, 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해시키기 위해 제공되는 것일 뿐, 이에 의해 본 발명의 기술적 범위가 한정되는 것은 아니다.

[ 제조예 1] 하고초 추출물의 제조

하고초 50 g을 파쇄기에 곱게 파쇄하여 100% 에탄올 200ml에 침지시켜 50℃ 수욕조에서 10시간 동안 온탕하였다. 이와 같이 얻어진 추출액을 실온으로 냉각시키고 거름종이로 여과하여 여과액을 취하였다. 다음으로 질소를 사용하여 여과액에서 에탄올을 증발시켜 농축한 다음, 이를 10% 에탄올에 녹여 추출물을 제조하였다.

[ 실험예 1] 세포 증식 효과

하고초 추출물의 피부 세포(skin cell) 증식효과를 보기 위해, 인체 정상 섬유아세포(Fibroblast)를 96-웰 마이크로 플레이트(96-well microplate)의 각 웰(Well)에 1X10⁴ 세포가 되도록 접종하여 디엠이엠(DMEM : Dulbecco's Modified Eagle's Medium)배지에서 24시간 배양하였다. 배양후 상기에서 제조한 제조예 1의 추출물을 최종 농도 50 ~ 500㎍/㎖ 되도록 조정한 혈청이 없는 디엠이엠 배지로 교체한 후 24시간 더 배양하였다. 이와 같이 배양 후 MTT(3-(4,5-디메틸씨아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움, 3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)2,5-diphenyl tetrazolium: 5㎎/㎖) 용액 10㎕을 첨가하여 4시간 방치 후 반응액을 제거하였으며, 각 웰당 100㎕의 디메틸 설폭사이드 용액을 가하여 염색된 세포를 용해시킨 후 마이크로 플레이트 리더로 570㎚ 에서의 흡광도를 측정하였다.

상기 과정을 실시하여 하기 수학식 1로부터 세포증식효과를 구해 그 결과를 하기 [표 1]에 나타내었다.

세포증식효과(%) = ((추출물처리시의 흡광도-대조군 흡광도)/ 대조군 흡광도) × 100

시료(㎍/㎖)	세포증식효과(%)
대조군	-
50	38.2
100	51.9
200	70.5
300	75.8
500	83.7

상기 [표 1]에 나타난 바와 같이, 하고초 추출물은 세포증식효과가 뛰어나 피부 주름 개선에 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

[ 실험예 2] 엘라스틴 합성 효과

10⁵ 개의 신생아 피부로부터 분리된 인체 정상 섬유아세포를 6-웰 플레이트에서 24 시간 배양한 후, 제조예 1의 추출물 시료를 50 ~ 500㎍/㎖로 처리하였다.

다음으로, 24~48 시간 배양한 후, 섬유아세포가 새롭게 합성 분비한 엘라스틴의 양을 상업적으로 입수 가능한 엘라스틴 키트(Fastin™ elastin assay kit)를 이용하여 측정하였고, 엘라스틴 량을 세포수 또는 단백질량으로 보정하였으며, 그 결과를 [표 2]에 나타내었다.

시료(㎍/㎖)	엘라스틴 합성증가(%)
대조군	-
50	18.9
100	34.2
200	65.2
300	79.8
500	85.4

상기 [표 2]에 나타난 바와 같이, 하고초 추출물은 엘라스틴 합성 증가에 우수한 효과를 보이고 있어 이를 통한 피부 주름개선 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

[ 실험예 3] 엘라스테이즈 활성 저해 효과

엘라스틴을 분해하는 효소인 엘라스테이즈가 활성을 나타내는 경우, 탄성 섬유인 엘라스틴이 분해되어 피부 주름 형성이 가속화된다. 따라서, 본 실험예에서는 제조예 1의 추출물의 엘라스테이즈 억제율을 측정하였다. 엘라스테이즈의 기질인 N-석시닐-(알라닌)-3-p-니트로아닐라이드가 분해되면 p-니트로아닐린이 되는데, 이것은 노란색을 띈다. 이 발색정도를 분광분석기를 이용하여 흡광도로 측정하여, 엘라스테이즈 활성 억제율을 평가하였다(The synthesis and analytical use of a high sensitive and convenient substrate of elastase, Biochemical Medicine 11, 350-357, 1974). 엘라스테이즈의 활성 억제율의 계산은 아래의 수학식 2를 이용하였으며, 세부적인 방법은 위 문헌에 기재된 대로 실시하였다. 그 결과를 하기 [표 3]에 나타내었다.

엘라스테이즈 활성 억제율(%) = ((1-B)/A) × 100
(위 식에서, A: 억제제 부재하의 OD 400, B: 억제제 존재하의 OD 400이다.)

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시료(㎍/㎖)	엘라스테이즈 합성저해효과(%)
대조군	-
50	10.3
100	22.6
200	40.2
300	62.5
500	70.5

상기 [표 3]에 나타난 바와 같이, 하고초 추출물은 엘라스테이즈 합성 저해 효과가 우수하여 이를 통해서 피부 주름 개선 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

[ 실험예 4] 항산화 효과

하고초 추출물의 항산화 효능을 확인하기 위하여, 자유 라디칼인 1,1-디페닐-2-피크릴히드라질(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl; 이하 DPPH)을 이용하였다. DPPH는 2 × 10^-4 M 농도가 되도록 에탄올에 용해시켜 사용하였다. DPPH 0.15 ㎖, 제조예 1의 추출물을 농도별로 각각 0.15 ㎖ 첨가하여 30분간 실온에서 반응시킨 후, 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. DPPH 소거 효과는, 아래의 수학식 3을 이용하여 계산된 DPPH 라디칼 소거활성 값으로 나타내었으며, 그 결과는 하기 [표 4]와 같다.

DPPH라디칼소거활성(%) = ((A control - B control) - (A sample - B sample)/A control - Bcontrol) × 100

(위 식에서, A control : 시료를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도

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A sample : 시료를 첨가한 반응군의 흡광도

B control : DPPH를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도

B sample : DPPH를 첨가하지 않은 반응군의 흡광도이다.)

시료(㎍/㎖)	DPPH 라디칼 소거활성(%)
대조군	-
50	10.27
100	25.84
200	50.27
300	74.25
500	88.12

상기 [표 4]에 나타난 바와 같이, 하고초 추출물은 항산화 효과가 우수하며 이를 통해서 피부 상태 개선에 효과적임을 확인할 수 있었다.

[ 제조예 2] 하고초 추출물을 포함하는 나노리포좀의 제조

하기의 [표 5]의 조성과 함량으로 나노리포좀을 제조하되, 먼저 하기 [표 5]의 A상에 B상을 첨가하고, 균일하게 습윤시킨 후, C 상을 첨가한 다음, 70 ~ 80℃까지 가열 혼합하였다. 그리고 상기 용액을 600 ~ 1000 bar의 조건으로 고압 호모게나이저에 2 ~ 4회 통과시킨 후, 냉각하여 지름 30 ~ 70 nm 입자 크기의 하고초 추출물이 안정화(포집)된 나노리포좀을 얻었다.

상	성 분	함량 (중량%)
A	글리세린	To 100
B	수첨 레시틴	5.0
	유동 파라핀	1.0
	마카다미아 넛 오일	1.0
	스쿠알란	1.0
	디메치콘	1.0
	이소프로필 미리스테이트	1.0
	소듐스테아로일 락테이트	0.5
	폴리솔베이트-80	0.5
	스테아린산	0.5
C	하고초 추출물	20.0
	수산화 칼륨	적량
	정제수	5.0

[실시예 및 비교예 1 ∼ 2]

제조예 1의 하고초 추출물을 함유하는 화장료 조성물(비교예 1)과, 제조예 2의 하고초 추출물을 안정화한 나노리포좀(나노리포좀에 하고초 추출물을 포집시킨 것)을 함유하는 화장료 조성물(실시예 1), 하고초 추출물이나 나노리포좀을 함유하지 않은 화장료 조성물(비교예 2)을 하기 [표 6]에 보인 성분과 함량으로 조성하여 제조하였다.

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성 분		비교예 1	실시예 1	비교예 2
		함량(중량%)	함량(중량%)	함량(중량%)
하고초 추출물(제조예 1)		2.0	-	-
나노리포좀(제조예 2)		-	10.0	-
A	세토스테아릴알콜	2.0	2.0	2.0
	글리세릴스테아레이트	1.5	1.5	1.5
	마이크로크리스탈린	0.7	0.7	0.7
	스쿠알란	5.0	5.0	5.0
	유동파라핀	3.0	3.0	3.0
	트리옥타노인	5.0	5.0	5.0
	폴리솔베이트	1.2	1.2	1.2
	솔비탄스테아레이트	0.5	0.5	0.5
	토코페롤아세테이트	0.2	0.2	0.2
	마이크로메치콘	3.0	3.0	3.0
	BHT	0.05	0.05	0.05
B	글리세린	4.0	4.0	4.0
	1,3-부틸렌글리콜	2.0	2.0	2.0
	EDTA-2Na	0.05	0.05	0.05
	정제수	To 100	To 100	To 100
향, 방부제		적량	적량	적량

[ 실험예 5] 피부 침투 효과

하고초 추출물을 나노리포좀으로 안정화한 것에 대한 피부 침투 효과를 알아보기 위해 피부 등가물 (Dermal Equivalent: DE)을 이용하여 다음과 같이 피부 침투 효과를 측정하였다.

피부 등가물은 인체 정상 섬유아세포 1 × 10⁵ 세포/㎖ (한국세포주은행)를 인체의 결합조직을 이루는 섬유조직과 유사한 겔 구조의 3mg/㎖ 콜라겐 수용액:5 × DMEM : 2.2% 소듐바이카보네이트와 200mM Hepes 완충액이 포함된 0.05N 수산화나트륨이 7:2:1로 혼합된 배지에 접종하여, 5% CO₂, 37℃에서 7일 동안 배양한 것을 사용하였다. 이를 3㎛ 다공성폴리카보네이트 (porous polycarbonate) 재질로 된 막 (membrane)에 의해 안쪽과 바깥쪽이 구분된 플레이트의 안쪽에 넣고 섬유아세포가 배양된 Derma Equivalent(DE) 표면 위에 표피각질형성세포(Epidermal Keratinocyte) 1 X 10⁵ cell/㎖ 세포를 접종하여 EGF와 BPE가 함유된 K-SFM 배지를 안쪽과 바깥쪽에 넣고 7일 동안 배양하였다. 그 후 플레이트 안쪽의 배지를 버려 공기가 배양세포의 표면에 접촉되도록 하고 바깥쪽에 10% FBS가 함유된 K-SFM과 EGF가 들어있지 않은 DMEM이 동량으로 혼합된 배지를 넣고 2주간 배양하여 다층의 표피와 진피가 형성된 인공피부를 얻었다. 그리고, 여기에 본 발명의 상기 실시예 1 및 실시예 2에 따른 조성물을 맨 위층의 인공피부 조직에 적용하여 4시간 배양 후 침투된 하고초 추출물의 양을 HPLC로 분석하였다. 그 결과를 하기 [표 7]에 나타내었다.

배지 중의 하고초 추출물의 양 (㎍/㎖)
비교예 1	실시예 1
3.5	35.9

상기 [표 7]에 나타난 바와 같이, 하고초 추출물을 안정화하여 나노리포좀 형태로 함유시킨 실시예 1은 하고초 추출물을 그대로 사용한 비교예 1에 비해 10배 이상의 피부 침투 효과가 우수함을 알 수 있었다. 이는 나노리포좀의 평균입자 크기가 30 ~ 70 nm로 아주 작아 피부 침투가 용이하기 때문인 것으로 판단된다.

[ 실험예 6] 주름 개선 임상 효과

본 발명에 따른 하고초 추출물을 함유하는 화장료에 대한 피부 주름 개선 임상효과를 알아보기 위해 다음과 같이 평가하였다.

40세 이상의 여성 30명을 3그룹(A,B 및 C)으로 나누어 A그룹을 대상으로 실시예 1을, B그룹을 대상으로는 실시예 2를, C그룹을 대상으로는 비교예를 각각 주름이 있는 눈가를 중심으로 12주간 도포(2회/일, 0.2g/회)하게 한 후, 숙련자의 객관적 평가와 피검자의 주관적 평가를 다음의 7등급으로 분류하여 평가함으로써 피부주름의 개선정도(ΔW)를 측정하였다. 그 결과는 하기 [표 8]에 나타내었다.

또한, 미세주름측정기인 스킨 비지오메터(Skin Visiometer SV 600 FireWire, CK Electronic GmbH)와 탄력측정기인 큐토메터(Cutometer MPA 580, CK Electronic GmbH)를 이용하여 피부의 주름개선 효과와 탄력성을 측정하였으며, 그 결과는 하기 [표 9]에 나타내었다.

* 피부 주름 평가 기준 등급

매우 심하게 악화	-3
악화	-2
약간 악화	-1
변화 없음	0
약간 개선	1
개선	2
매우개선	3

< 숙련자의 객관적 평가 결과 >

	평균주름 개선정도(△W)
	실시예1		실시예2		비교예
	T0	T12	T0	T12	T0	T12
피검자1	0	2	0	3	0	1
피검자2	0	3	0	3	0	0
피검자3	0	1	0	2	0	0
피검자4	0	2	0	3	0	0
피검자5	0	3	0	3	0	0
피검자6	0	2	0	2	0	1
피검자7	0	1	0	2	0	0
피검자8	0	2	0	2	0	0
피검자9	0	3	0	3	0	0
피검자10	0	3	0	3	0	1
△W(T12-T0)	2.2		2.6		0.3

< 피검자의 주관적 평가 결과 >

구분	평균주름 개선정도(△W)
	실시예1		실시예2		비교예
	T0	T12	T0	T12	T0	T12
피검자1	0	1	0	2	0	1
피검자2	0	3	0	3	0	0
피검자3	0	2	0	3	0	0
피검자4	0	3	0	3	0	0
피검자5	0	1	0	2	0	1
피검자6	0	3	0	3	0	0
피검자7	0	2	0	2	0	0
피검자8	0	3	0	3	0	1
피검자9	0	2	0	3	0	0
피검자10	0	2	0	2	0	1
△W(T12-T0)	2.2		2.6		0.4

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상기 [표 8] 및 [표 9]에 나타난 바와 같이, 시험결과 12주 후, 하고초 추출물을 함유한 비교예 1과 실시예 1은 평균 주름 개선정도가 숙련자의 객관적 평가와 피검자의 주관적 평가에 있어서 각각 2.2와 2.6으로 비교예에 비해서 현저한 주름 개선 효과가 있는 것으로 확인되었다(상기 [표 8] 및 [표 9]에서 T0는 적용 전, T12는 적용 12주 후를 나타낸다). 또한, 나노리포좀으로 안정화시킨 실시예 1이 비교예 1에 비해서 더욱 우수한 주름 개선 효과가 있는 것으로 확인되었다. 이는 피부 침투 효과가 우수하기 때문인 것으로 판단된다.

구분		주름개선효과		탄력효과
		주름의 평균깊이(%)	거칠기평균(%)	피부흡착도(%)
비교예 1	T0	100.0	100.0	100.0
	T12	75.5	62.4	66.5
실시예 1	T0	100.0	100.0	100.0
	T12	62.4	53.4	50.1
비교예 2	T0	100.0	100.0	100.0
	T12	99.1	96.4	97.5

상기 [표 10]에서 주름의 평균깊이는 주름을 측정하고자 하는 부위에 실리콘고무를 이용하여 만든 표본을 5등분하고 각각 5군데에서 주름 높이의 최고점과 최저점의 차이에 대한 평균값을 나타낸 것이다. 그리고, 거칠기 평균은 표본에서 전체 주름깊이의 평균값에서 개개 측정부위(전체를 255개의 측정부위 점으로 나눔)에서의 주름깊이 차이에 대한 평균값을 나타낸 것이다. 주름의 평균깊이와 거칠기 평균의 수치는 낮게 나타날수록 주름이 작게 형성되는 것으로서 피부 노화도가 작은 것을 의미하게 되어 좋은 것이다.

상기 [표 10]에 나타난 바와 같이, 비교예 1과 실시예 1의 적용 전/후의 상대적인 수치 계산을 통해 살펴보면, 주름의 평균깊이 값에서 적용 전을 100%로 보았을 때 비교예 1은 적용 후 22.1%로, 실시예 1은 적용 후 37.6%로 향상되었고, 거칠기 평균으로 살펴본 주름개선효과는 각각 37.6%, 46.6% 향상되었음을 알 수 있었다.

따라서, 본 발명에 의한 나노리포좀으로 안정화시킨 하고초 추출물 함유 화장료는 피부의 주름 개선 효과가 더욱 우수해지는 것을 알 수 있었다.

또한, 상기 [표 10]에서 피부흡착도는 큐토미터 측정기기내로 피부가 흡착된 길이(penetration depth of the skin into the aperture)를 나타내는 것으로서 흡착정도를 나타내며, 그 수치가 작을수록 바람직하다. 적용 전(T0)을 100%로 보았을 때, 비교예 1 및 실시예 1의 경우 적용 후(T12)의 값이 33.5%, 49.9%로 향상되어 피부의 탄력도가 상당한 정도로 개선되었음을 확인할 수 있었다.

이상의 결과를 통해 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따라서 하고초 추출물을 나노리포좀으로 안정화 시킨 것을 함유하는 화장료는 피부 주름 개선 효과와 탄력효과를 증진시키는 것으로서, 피부노화방지의 우수한 효과를 발휘하고 있음을 알 수 있다.

이하에서는, 이상의 실험예의 결과를 근거로 하여 본 발명에 따라서 하고초 추출물을 나노리포좀으로 안정화시킨 것을 함유하는 화장료 조성물의 제형예를 제시한다. 그러나, 본 발명의 조성물을 하기의 제형예들로 한정하고자 하는 것은 아니다.

[ 제형예 1] 유연 화장수

나노리포좀으로 안정화한 하고초 추출물을 함유한 유연 화장수를 아래의 [표 11]에 보인 조성과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량%)
나노리포좀(하고초 추출물)	1.00
1,3-부틸렌글리콜	1.00
디소듐이디티에이	0.05
알란토인	0.10
디포타슘글리시리제이트	0.05
시트릭애씨드	0.01
소듐시트레이트	0.02
글리세레스-26	1.00
알부틴	2.00
하이드로제네이티드캐스터오일	1.00
에탄올	30.00
보존제	미량
착색제	미량
착향제	미량
정제수	잔량

[ 제형예 2] 영양 크림

나노리포좀으로 안정화한 하고초 추출물을 함유한 영양크림을 아래의 [표 12]에 보인 조성과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량%)
나노리포좀(하고초 추출물)	2.0
1,3-부틸렌 글리콜	7.0
글리세린	1.0
D-판테놀	0.1
식물 추출물	3.2
마그네슘알루미늄실리케이트	0.3
PEG-40 스테아레이트	1.2
스테아릭애씨드	2.0
폴리소르베이트 60	1.5
친유형글리세릴스테아레이트	2.0
소르비탄세스퀴올리에이트	1.5
세테아릴알코올	3.0
미네랄오일	4.0
스쿠알란	3.8
카르릴릭/카프릭트리글리세라이드	2.8
식물성 오일	1.8
디메치콘	0.4
디포타슘글리시리제이트	미량
알란토인	미량
소듐 히아루로네이트	미량
토코페릴아세테이트	적량
트리에탄올아민	적량
보존제	적량
착향제	적량
정제수	잔량

이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명은 나노리포좀에 안정화된 하고초 추출물의 함유에 의해 엘라스틴 생합성 촉진 및 엘라스테이즈 합성 저해 효과가 우수하여 피부의 주름을 개선하고 탄력을 유지해 주는 효과를 갖고, 항산화 효과도 우수하여 피부 세포 및 조직 손상을 방지하고 건강한 피부를 유지시켜 노화를 방지하며, 피부 침투 효과가 크게 증가되어 피부 주름 개선 효과가 매우 향상되며, 제형의 안정성도 크게 개선되는 효과를 갖는다.

Claims (13)

1. 나노리포좀에 안정화된 하고초 추출물이 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 30중량% 함유된 것으로 엘라스틴 합성 촉진, 엘라스테이즈 활성 저해 및 항산화 작용에 의하여 피부의 주름을 개선하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
2. 삭제
3. 삭제
4. 삭제
5. 삭제
6. 삭제
7. 삭제
8. 삭제
9. 삭제
10. 삭제
11. 삭제
12. 삭제
13. 삭제