KR100501399B1

KR100501399B1 - 나노리포좀으로 안정화된 생약 추출물을 포함하는피부노화 방지용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR100501399B1
Application number: KR10-2003-0032733A
Authority: KR
Inventors: 정지헌; 이정노; 이재영; 조병기
Original assignee: 주식회사 코리아나화장품
Priority date: 2003-05-23
Filing date: 2003-05-23
Publication date: 2005-07-18
Also published as: KR20040101588A

Abstract

본 발명은 생약 추출물을 안정화한 나노리포좀을 포함하는 피부 피부노화 방지용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 산삼, 산수유, 산약, 감초, 맥문동, 복령, 지황 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 추출물을 안정화한 나노리포좀을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 섬유아세포의 증식 촉진, 콜라겐 합성의 촉진에 의한 피부 주름 개선과 피부 탄력 개선, 보습력 향상 및 피부 면역 증강을 통하여 피부 노화를 방지한다. 더욱이, 본 발명의 화장료 조성물에서, 생약 추출물은 나노리포좀에 의해 내포되어 있기 때문에 피부침투 효과가 크게 증가하고, 제형의 안정성도 크게 개선된다.

Description

나노리포좀으로 안정화된 생약 추출물을 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물{Cosmetic Compostion for Preventing Skin Aging Comprising Plant Extract as Oriental Medicine Stabilized in Nanoliposome}

본 발명은 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 생약 추출물을 안정화한 나노 리포좀을 포함하는 피부 피부노화 방지용 화장료 조성물에 관한 것이다.

피부는 외부 환경과 직접 접해 있으면서, 물리적, 화학적 및 생물학적 자극원으로부터 인체를 보호하는 중요한 보호막 역할을 담당한다. 그러나 자외선의 과다노출에 의한 생체 성분의 산화 및 나이에 따른 피부의 생리적 기능의 저하, 영양 결핍 등으로 인하여 피부는 본래의 기능을 상실하고, 미용적으로도 피부의 탄력 저하, 건조, 주름 형성, 칙칙함 등의 다양한 피부 노화 현상을 나타낸다. 따라서, 화장품 개발에 있어서 피부의 노화를 방지하거나 지연시키는 연구는 대단히 중요한 위치를 차지하고 있다.

최근에는 천연 식물성분들에 대한 다양한 피부생리 활성을 검색하여 피부미용 효과가 우수한 물질들을 개발하여 노화 방지 등과 같은 기능성 화장품에 이용하는 사례가 급증하고 있다. 그러나, 대부분의 생약 성분들은 그 자체가 불안정할 뿐 아니라 화장료 적용시, 내용물의 침전, 색깔의 변화 등과 같은 화장료의 안정성에 큰 문제점을 가지고 있다.

이러한 문제를 해결하고자 제약, 화장품 및 식품 분야에서는 생리활성 성분을 파괴되지 않고 안정하게 전달할 수 있으며, 생리활성 성분이 지용성이든 수용성이든 모두 내포시킬 수 있는 리포좀을 이용하고 있다. 최근에는 나노 기술의 발달과 함께 피부 침투 효과를 극대화 할 수 있는 나노리포좀에 대한 연구 개발도 활발히 진행되고 있다.

본 발명자들은 민간 및 한방에서 생약재를 이용한 피부 노화 방지, 즉 피부 보호용 화장료 조성물을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 산삼 추출물 이외에, 맥문동, 복령, 산약, 산수유 및 지황 추출물이 우수한 생리 활성 효과를 갖고 있다는 것을 발견하였다. 또한, 이들 활성 성분들이 화장료 조성물내에서 안정하게 유지되며, 피부 적용시 주름발생, 탄력감소 및 보습능 상실 등의 노화 요인들을 모두 해소할 수 있도록, 생리활성 효과를 극대화 하고자, 상기 추출물을 나노리포좀에 안정화한 제형을 개발하여 피부노화 방지용 화장료 조성물을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 생약 추출물을 안정화한 나노리포좀을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 양태에 따르면, 본 발명은 산삼, 산수유, 산약, 감초, 맥문동, 복령, 지황 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 추출물을 안정화한 나노리포좀을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명자들은 종래의 피부 노화 방지 (또는 피부보호)용 화장료 조성물의 문제점을 개선하고 노화 방지 효능을 더 부가하고자 한국내에 자생하는 생약에 대한 연구를 수행하였고, 그 결과 산삼, 맥문동, 복령, 산약, 산수유, 지황 및 감초 추출물이 피부에 탄력을 부여하는 성분인 콜라겐 합성을 촉진시키고, 콜라겐 합성이 주로 이루어지는 섬유아세포 및 각질형성세포의 증식을 촉진하며, 더불어 피부의 항염 효과를 나타내고, 피부 자극 및 부작용이 거의 없다는 것을 발견하였고, 더욱이, 상술한 생약 추출물을 나노리포좀에 내포 (encapsulation)시킨 경우, 피부의 보습력이 크게 증감되며, 피부탄력이 개선되고, 피부침투 효과가 크게 증가할 뿐만 아니라 제형의 안정성도 매우 개선됨을 발견하였다.

본 발명은 산삼 추출물 외 맥문동(Liriope platyphylla Wang et Tang), 복령(Poria cocos Wolf), 산약(Dioscorea opposita Thunb.), 산수유(Cornus officinalis Sieb. et Zucc), 지황(Rehmannia glutinosa Liboschtz var.), 감초(Glycyrrhiza glabra L.) 추출물을 유효 성분으로 나노리포좀에 포집하여 안정화 시킨 피부노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물에서 유효 성분으로 함유되는 산삼 (Panax ginseng(C.A.MEY))은 예로부터 신비한 영약으로 취급되어 전설 속에나 등장할 만큼 희귀식물이다.

일반적으로 산삼의 효능을 보면, 조혈작용, 노화 방지, 혈압 정상화, 간기능정상화, 당뇨병 치료, 암 예방 및 치료, 스트레스 해소, 알레르기성 체질의 개선, 냉증 치료, 갱년기 장애 해소 및 정력 강화에 유효한 것으로 알려져 있고, 또한 피부미용과 모발 개선에도 효과가 있는 것으로 알려져 있다.

산삼은 인삼에 비해 유효성분의 함량이 많으며, 약효가 높은 것으로 알려져 있다. 배당체 (glycosides) 성분인 사포닌 (saponin)을 비롯하여, 질소함유 화합물로서 단백질, 아미노산, 핵산, 알칼로이드, 지용성분으로 지방산, 정유, 폴리아세틸렌, 페놀화합물, 파이토스테롤, 테르페노이드, 당류로서 단당류와 올리고당, 다당류, 펙틴질 그리고 비타민류와 무기질 등 매우 다양한 성분들이 함유되어 있다. 일반적으로 사포닌 성분은 식물계에 광범위하게 분포되어 있는 성분이다 (약 750여종 식물). 사포닌이란 수용액에서 비누처럼 미세한 거품을 내는데서 붙여진 이름이다. 일반적으로 사포닌 성분은 물의 표면장력을 낮추므로 쉽게 거품을 내고 용혈작용을 나타낸다. 그러나 산삼의 사포닌은 약성이 온화하고 독성이 없을 뿐만 아니라 용혈작용이 거의 없다는 것이 밝혀졌다. 또한 이 사포닌 성분은 다른 식물에서 발견되는 사포닌과는 화학구조가 전혀 다르다. 따라서, 사포닌은 타 식물계 사포닌과 구별하기 위해서 산삼 (Ginseng) 배당체 (Glycoside)란 의미로 진세노사이드 (Ginsenoside)라고 부른다.

본 발명에서 이용되는 산삼의 바람직한 기관은 부정근이다. 본 발명에서 사용되는 산삼 부정근 추출물은 자연삼 산삼을 초기 배양 재료로 이용하여 무균 상태에서 배양한 후, 산삼 뿌리 유도 과정, 유도된 산삼 뿌리의 현탁배양 과정, 소규모 생물반응기 배양 과정 및 대규모 대량 배양 과정을 거쳐 획득한다. 이같은 방법으로 획득된 산삼 부정근을 건조시켜 본 발명에 이용한다 (참조: 대한민국 특허 제99-61176 호).

산삼 이외의 원료인 맥문동 (Liriope platyphylla Wang et Tang), 복령 (Poria cocos Wolf), 산약 (Dioscorea opposita Thunb.), 산수유 (Cornus officinalis Sieb. et Zucc), 지황 (Rehmannia glutinosa Liboschtz var.) 및 감초(Glycyrrhiza glabra L.) 역시 피부 각질 연화 작용, 항균, 항염 작용, 상처 치유 증진 및 우수한 수분 보유력, 혈행 촉진 등의 효능을 가지고 있는 것으로 알려져 있다.

본 발명의 생약 추출물은 당업계에 공지된 다양한 추출 방법을 이용하여 수득할 수 있으며, 바람직하게는, (a) 물, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), (c) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (d) 아세톤, (e) 에틸 아세테이트, (f) 클로로포름 또는 (g) 1,3-부틸렌글리콜을 추출 용매로 하여 수득할 수 있다.

한편, 본 발명의 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 생약 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.

또한, 본 발명의 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 생약 출물에 포함되는 것이다.

본 발명의 생약 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 생약 추출물은 나노리포좀 총중량에 대하여 0.1-20 중량%이며, 보다 바람직하게는 4-12 중량%이다.

본 명세서에서, 용어 "나노리포좀"은 통상적인 리포좀의 형태를 갖는 것으로서 평균 입자 지름이 1-100 nm인 리포좀을 의미한다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 나노리포좀의 평균 입자 지름은 30-70 nm이다. 상기 나노리포좀의 평균 입자 지름이 70 nm를 초과하는 경우에는 본 발명에서 달성하고자 하는 기술적 효과 중 피부침투의 개선 및 제형 안정성의 개선이 매우 미약하다.

본 발명의 나노리포좀은 폴리올, 계면활성제, 인지질, 지방산 및 물을 포함하는 혼합물에 의해 제조되며, 1가 알코올 (예: 에탄올 등)을 이용하지 않는다는 것이 특징이다.

본 발명의 나노리포좀에 이용되는 폴리올은 특히 제한되지 않으며, 바람직하게는 프로필렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 메틸프로판디올, 이소프렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 에리스리톨, 자이리톨 및 솔비톨을 포함하며, 가장 바람직하게는 프로필렌 글리콜이다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 10-80 중량%, 바람직하게는 30-70 중량%이다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 계면활성제는 당업계에 공지된 어떠한 것도 사용할 수 있으며, 예를 들어, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 양성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용될 수 있고, 바람직하게는 음이온성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용된다. 음이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알킬아실글루타메이트, 알킬포스페이트, 알킬락틸레이트, 디알킬포스페이트 및 트리알킬포스페이트를 포함한다. 비이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알콕시레이티드알킬에테르, 알콕시레이티드알킬에스테르, 알킬폴리글리코사이드, 폴리글리세릴에스테르 및 슈가에스테르를 포함한다. 가장 바람직하게는, 비이온성 계면활성제에 속하는 폴리솔베이트류가 이용된다. 계면활성제의 사용량은, 일반적으로 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.1-10 중량%이고, 바람직하게는 0.5-5.0 중량%이다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 또 다른 성분인 인지질은 양쪽친화성 지질로 이용된 것으로서, 천연 인지질 (예: 난황 레시틴 또는 대두 레시틴, 스핑고마이엘린) 및 합성 인지질 (예: 디팔미토일포스파티딜콜린 또는 수첨 레시틴)을 포함하며, 바람직하게는 레시틴이다. 보다 바람직하게는, 상기 레시틴은 대두 또는 난황에서 추출한 천연 유래의 불포화 레시틴 또는 포화 레시틴이다. 통상적으로 천연 유래의 레시틴은 포스파티딜 콜린의 양이 23-95%, 그리고 포스파디딜에탄올아민의 양이 20% 이하이다. 본 발명의 나노리포좀의 제조에 있어서, 레시틴의 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.5~20 중량%이며, 바람직하게는 2-8 중량%이다.

본 발명의 나노리포좀 제조에 이용되는 지방산은 고급 지방산으로서, 바람직하게는 C_12-22 알킬 체인의 포화 또는 불포화 지방산으로서, 예컨대, 라우린산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아린산, 올레산 및 리놀레산을 포함한다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.05-3.0 중량%이고, 바람직하게는 0.1-1.0 중량%이다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 물은 일반적으로 탈이온화된 증류수이며, 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 5.0-40 중량%이다.

나노리포좀의 제조는 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 이루어질 수 있으나, 가장 바람직하게는 상기 성분들을 포함하는 혼합물을 고압 호모게나이저에 적용하여 제조된다. 고압 호모게나이저에 의한 나노리포좀의 제조는 소망하는 입자 크기에 따라 다양한 조건 (예: 압력, 횟수 등)으로 실시할 수 있으며, 바람직하게는 600-1200 bar 압력 하에서 1-5회 고압 호모게나아저를 통과하도록 하여 나노리포좀을 제조한다.

이렇게 제조된 나노리포좀 시스템은 여러 종류의 난용성 물질을 녹임과 동시에 불안정한 물질을 안정화시켜 피부침투효과를 극대화 하는 장점을 가지고 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 생약 추출물을 포함하는 나노리포좀 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 피부보호용 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 피부 노화 방지 (피부 보호)의 용도를 갖는다. 본 명세서에서 용어 "피부 노화 방지"는 피부 노화 예방 및 치료를 포괄적으로 포함하는 의미를 갖는다. 또한, 본 명세서에서 "피부 노화 방지" 및 "피부 보호"는 특별한 언급이 없는 한 동일한 의미로 사용된다.

본 발명의 화장료 조성물은 섬유아세포의 증식 촉진, 콜라겐 합성의 촉진에 의한 피부 주름 개선과 피부 탄력 개선, 보습력 향상 및 피부 면역 증강을 통하여 피부 노화를 방지하며, 이와 같은 사실은 하기의 실시예에 명시되어 있다. 따라서, 본 발명의 용도인 피부 노화 방지 (즉, 피부 보호)는 주름 개선, 보습력 개선 및 피부 탄력 개선 용도를 포함하는 것으로 해석된다. 더욱이, 본 발명의 화장료 조성물에서, 생약 추출물은 나노리포좀에 의해 내포되어 있기 때문에 피부침투 효과가 크게 증가하고, 제형의 안정성도 크게 개선된다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시 예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

제조예 1: 생약 추출물의 제조

생약 추출물은 산삼 10 g, 산수유 20 g, 산약 20 g, 감초 20 g, 복령 10 g, 맥문동 10 g 및 지황 10 g을 달아서 물을 첨가하여 1 ℓ로 만든 다음, 이를 70℃에서 1시간 가량 가열하였다. 이어, 여과한 후 상온에서 식힌 다음 4℃에서 7일간 저온 숙성시킨 다음 여과하여 사용한다.

본 발명의 바람직한 구현예에서, 생약 추출물의 함량은 전체 화장료 조성물에 대하여 0.0001 내지 10.0 중량%이고, 보다 바람직하게는 0.0005 내지 10.0 중량%이며, 가장 바람직하게는 0.005 내지 5.0 중량%이다. 생약 추출물의 함량이 0.0001 중량% 미만일 경우에는 뚜렷한 피부 노화 방지 효과, 특히 주름 개선 효과를 기대할 수 없다. 또한, 생약 추출물의 함량이 10.0 중량%를 초과하는 경우에는 함유량 증가에 따른 뚜렷한 효과의 증가가 나타나지 않는다.

실험예 1: 섬유아세포 증식 효과

인체 정상 섬유아세포 (한국세포주은행)를 96-웰 마이크로 플레이트 (96-well microplate)의 각 웰에 1 x 10⁴ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지 (Sigma사)에서 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 이어, 상기 생약 추출물이 최종 농도 0.005%, 0.01%, 0.05%, 0.1% 및 1%로 포함된 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 생약 추출물이 포함되지 않은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 24시간 동안 추가로 배양하였다. 그런 다음, MTT 용액 (3-(4,5-디메틸티아졸-2-일) 2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드: 5 mg/㎖)을 각각에 10 ㎕씩 첨가하고, 4시간 동안 배양한 후, 배지를 제거하고, 각 웰 당 100 ㎕의 디메틸 설폭시드 용액을 가하여 20분 동안 진탕시키고, 마이크로 플레이트 판독기 (microplate reader, Molecular Devices, 미합중국)를 이용하여 570 nm에서 상층액의 흡광도를 측정하였다. 측정값을 하기의 수학식 1에 대입하여 세포 증식 효과를 산출하고, 그 결과는 하기 표 1에 나타나 있다.

세포증식효과 (%) = [(추출물처리시의 흡광도 - 대조군의 흡광도)/대조군의 흡광도] x 100

추출물 (%)	흡광도	세포증식효과(%)
대조군	0.330	-
0.005	0.306	7.2
0.001	0.269	18.5
0.05	0.201	39.0
0.1	0.129	60.8
1	0.056	83.1

상기 표 1에서 알 수 있듯이, 생약 추출물을 처리하지 않은 대조군과 비교하여, 생약 추출물이 처리된 실험군의 경우 매우 높은 섬유아세포 증식 효과를 나타낸다.

실험예 2 : 각질형성세포 증식 효과

각질형성세포를 이용하여 실험예 1과 동일한 방법으로 각질형성세포의 증식효과를 측정하였고, 그 결과는 다음 표 2에 나타나 있다.

추출물(%)	흡광도	세포증식효과(%)
대조군	0.324	-
0.005	0.311	4.1
0.001	0.287	11.5
0.05	0.261	19.3
0.1	0.223	31.3
1	0.121	62.8

상기 표 2에 기재된 바와 같이, 본 발명의 생약 추출물은 각질형성세포의 증식을 크게 증가시킬 수 있음을 알 수 있다.

실험예 3: 콜라겐 합성 증진 효과

인체 정상 섬유아세포 (한국세포주은행)를 96-웰 마이크로 플레이트의 각 웰에 2 x 10⁴ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 이어, 상기 제조한 생약 추출물이 최종 농도 0.005, 0.01 및 0.05%로 포함된 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 생약 추출물이 포함되지 않은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 24시간 동안 추가로 배양하고, 아스코르브산 (50 g/㎖)을 첨가하여 콜라겐 합성을 촉진시킨 다음, 다시 24시간 동안 추가로 배양하였다. 그런 다음, 각 웰을 세척하고 혈청이 함유되지 않은 DMEM 배지로 교체한 후 24시간 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 키트 (Takara, 일본국)를 이용하여 측정함으로써 새로 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. PICP 양은 ng/2x10⁴ 세포로 환산하였으며, 그 결과는 하기 표 3에 나타나 있다.

생약 추출물 농도 %(v/v)	콜라겐 합성량 (ng/2 x 10⁴)
대조군	153
0.005	189
0.01	204
0.05	250

상기 표 3에서 볼 수 있듯이, 생약 추출물의 농도가 증가함에 따라 콜라겐의 합성이 증가함을 알 수 있고, 이에 본 발명의 생약 추출물이 탁월한 콜라겐 합성 증진 효과를 나타냄을 알 수 있다.

실험예 4 : 피부면역증강 효능 시험

8-10 주령의 C57BL/6 생쥐를 대상으로 복부를 면도한 다음 FS-20 sun lamp를 이용하여 자외선 B파장을 (UVB) 2.4KJ/m²로 조사하면 접촉성 과민반응 (contact hypersensitivity)이 대조군에 비해 44.3% 억제되는 면역억제현상을 초래하게 된다.

본 발명의 생약 추출물을 UV 조사 후 도포하고 3일이 경과한 다음 UV조사 영역에 3% 삼질소염화벤젠 (trinitrochlorobenzene)으로 감작시켰다. 6일 후 1%의 삼질소염화벤젠을 생쥐의 귀에 도포하고 부종 상태를 측정하였다. 피부면역증강효과는 다음과 같은 수식에 의해 계산하였고, 그 결과는 하기 표 4에 정리되어 있다.

[(제조예 도포 및 UVB 조사군의 귀 부종 두께 - UVB 조사군의 귀 부종 두께)/(대조군의 귀 부종 두께 - UVB 대조군의 귀 부종 조사군의 귀 부종 두께)] x 100

생약 추출물 농도 %(v/v)	피부면역 증강효과 (%)
대조군	-
0.005	7.6
0.01	15.4
0.05	33.9

상기 표 4에서 확인할 수 있듯이, 본 발명의 생약 추출물은 농도-의존적으로 피부 면역 반응을 증가시키고 있음을 알 수 있다.

제조예 5: 생약 추출물을 함유하는 나노리포좀의 제조

나노리포좀은 하기 표 5의 조성으로 A상에 B상을 첨가하고, 균일하게 습윤 시킨후 C 상을 첨가하고 70-80℃까지 가열 혼합하였다. 이 용액을 600-1000 bar의 조건으로 고압 호모게나이저에 2-4회 통과 시킨후 냉각하여 지름 30-70 nm 입자 크기의 생약 추출물을 안정화시킨 나노 리포좀을 얻었다.

상	성 분	함량 (중량%)
A	프로필렌 글리콜	40
B	레시틴	5
	콜레스테롤	2.5
	세라마이드	2.5
	소듐스테아로일 락테이트	0.5
	폴리솔베이트-80	0.5
	스테아린산	0.5
C	생약 추출물 (고형분)	10
	수산화 칼륨	적량
	정제수	To 100

실시예 및 비교 실시예

본 발명의 생약 추출물을 안정화한 나노리포좀을 포함하는 조성물 (실시예) 및 나노 리포좀을 함유하지 않은 조성물(비교예)을 다음의 조성으로 제조하였다.

성 분		실시예	비교예
성 분		함량(중량%)	함량(중량%)
나노리포좀 (표 5)		10	-
생약 추출물 (고형분)		-	10
A	세토스테아릴알콜	2.0	2.0
	글리세릴스테아레이트	1.5	1.5
	마이키로크리스탈린	0.7	0.7
	스쿠알란	5.0	5.0
	유동파라핀	3.0	3.0
	트리옥타노인	5.0	5.0
	폴리솔베이트	1.2	1.2
	솔비탄스테아레이트	0.5	0.5
	토코페롤아세테이트	0.2	0.2
	마이크로메치콘	3.0	3.0
	BHT	0.05	0.05
B	글리세린	4.0	4.0
	1,3-부틸렌글리콜	2.0	2.0
	EDTA-2Na	0.05	0.05
	정제수	To 100	To 100
향, 방부제		적량	적량

실험예 5: 보습 효과

상기 실시예 및 비교 실시예에서 제조된 각 화장료의 보습력을 평가하기 위하여, 각 화장료가 도포된 피부를 대상으로 하여 수분 보유능 및 수분 증발량을 다음과 같이 측정하였다.

실험예 5-1: 수분 보유능의 측정

22℃ 및 상대습도 45%의 항온 항습실에서 상기 실시예 및 비교 실시예에서 제조된 각 화장료를 30명의 피시험자 하박 안쪽에 일정량 (0.03 g/16 ㎠)을 도포하고, 도포전, 도포 1시간 후 및 도포 2시간 후의 피부의 수분 함량을 측정하였으며, 아무런 처리를 하지 않은 정상 피부를 대조군으로 사용하였다. 측정 기기는 피부의 수분 함량에 따른 피부의 전기 용량을 측정하여 보습력을 측정하는 수분 함량측정기 (corneometer CM820, Conrage + Khazaka사, 독일연방국)를 사용하였다. 그 결과는 하기 표 6에 나타나 있다.

구 분	실시예	비교예	대조군
도포전 피부 전기전도도	50	50	50
도포 1시간후 피부 전기전도도	87	75	50
도포 2시간후 피부 전기전도도	75	59	50

실험예 5-2: 수분 증발량의 측정

팔의 상박 부위에 테입 스트리핑 (tape stripping)을 실시하여 피부의 방어막을 약화시킨 후, 실험예 5-1과 동일한 방법으로 피실험자에게 각 화장료를 도포한 후, 수분증발량기 (TEWA meter, koln, 독일연방국)를 이용하여 12 시간마다 1분 간격으로 5회씩 수분 증발량을 측정하여 평균값을 구하였다. 그 결과는 하기 표 8과 같다.

구 분	실시예(%)	비교예(%)	대조군(%)
0시간후 수분 증발량	4.0	4.0	0.0
12시간후 수분 증발량	-9.1	-5.5	-0.1
24시간후 수분 증발량	-7.2	-1.0	0.1
36시간후 수분 증발량	-5.0	2.5	0.1
48시간후 수분 증발량	-2.3	3.0	0.0

상기 실험예 5-1 및 5-2의 결과에서 보듯이, 본 발명의 실시예 화장료가 비교 실시예의 화장료에 비해서 피부의 전기 전도도가 높고, 적은 수분 손실량을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 화장료가 우수한 보습 효과를 나타냄을 알 수 있다.

실험예 6: 피부탄력효과

본 발명의 조성물인 생약 추출물을 안정화한 나노 리포좀을 함유하는 화장료의 피부 탄력 증진효과를 측정하였다.

온도 24-26℃, 습도 75의 조건에서 20세 이상의 건강한 여성 30명 (평균연령 38세)을 2 그룹으로 나누고, A 그룹에는 실시예를, B 그룹에는 비교예의 제형을 눈가를 중심으로 하루 2회씩 (아침 및 저녁) 12주간 도포한 후, 피부탄력 측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germary)를 이용하여 피부탄력을 측정하였다. 시험결과는 cutometer SEM 575의 R8(R8(12주)-R8(0주)) 값으로 기재하였는데, R8 값은 피부점탄성 (Vicoelasticity)의 성질을 나타내며, 결과는 하기 표 9에 기재되어 있다.

실험 제형	피부탄력효과
실시예	0.63
비교예	0.35

표 9의 결과에서와 같이, 생약추출물을 안정화한 나노리포좀을 함유한 실시예의 피부탄력은 생약추출물을 안정화하지 않고 직접 제형에 사용한 비교예에 비해 두배나 증가하였다. 따라서 생약추출물을 안정화한 나노리포좀을 함유한 실시예 가 피부탄력증진에 있어 훨씬 더 뛰어난 효과를 나타냄을 알 수 있다.

실험예 7: 피부침투효과

본 발명의 생약추출물을 안정화한 나노리포좀을 함유한 화장료에 대한 피부침투 효과를 측정하였다.

Dermal Equivalent (DE)-인체 정상 섬유아세포 1 X 10⁵ cell/㎖를 인체의 결합조직을 이루는 섬유조직과 유사한 겔 구조에 콜라겐 수용액 3 mg/㎖:5 X DEM : 2:2 소듐바이카보네이트와 200 mM Hepes 완충액이 포함된 0.05 N 수산화나트륨이 7:2:1로 혼합된 배지에 접종하여 5CO₂, 37℃에서 7일 동안 배양하였다. 이를 3 ㎛ 다공성폴리카보네이트 (porous polycarbonate) 재질로 된 막 (membrane)에 의해 안쪽과 바깥쪽이 구분된 플레이트의 안쪽에 넣고 섬유아세포가 배양된 Derma Equivalent(DE) 표면 위에 표피각질형성세포 (Epidermal Keratinocyte) 1 X 10⁵cell/㎖ 세포를 접종하여 EGF와 BPE가 함유된 K-SFM 배지를 안쪽과 바깥쪽에 넣고 7일 동안 배양하였다. 그 후 플레이트 안쪽의 배지를 버려 공기가 배양세포의 표면에 접촉되도록 하고 바깥쪽에 10FBS가 함유된 K-SFM과 EGF가 들어있지 않은 DMEM이 동량으로 혼합된 배지를 넣고 2주간 배양하여 다층의 표피와 진피가 형성된 인공피부를 얻었다. 여기에 본 발명의 실험예 및 비교예를 맨 위층의 인공피부 조직에 적용하여 4시간 배양 후 10FBS가 함유된 K-SFM과 물의 양을 HPLC로 분석하였다. 시험결과는 하기 표 10에 나타나 있다.

배지 중의 생약 추출물의 양 (㎍/㎖)
실시예	비교예
39.5	2.7

실험결과 표 10에서와 같이, 본 발명의 생약추출물을 안정화한 나노리포좀을 함유한 화장료는 생약추출물을 그대로 사용한 비교예에 비해 10배 이상의 피부 침투 효과가 우수함을 알 수 있다. 이는 본 발명의 나노리포좀의 평균입자 크기가 30-70 nm로 아주 작아 피부침투가 용이하기 때문이다. 따라서, 상기의 실험예 6의 피부탄력 증진 효과에 있어서, 본 발명의 실시예는 피부 침투효과가 비교예 보다 우수하여 좀 더 우수한 피부탄력 증진효과를 보이고 있음을 알 수 있다.

실험예 8: 제형의 안정성 시험

상기 본 발명의 생약추출물을 안정화한 나노리포좀을 함유한 화장료에 대한 안정성 시험을 하기의 방법으로 실시하였다.

화장료의 안정성을 시험하기 위해 상기 실시예 및 비교예을 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관하고 또한 4℃로 일정하게 유지되는 완전히 차광된 냉장고 내에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관한 후, 분리 정도 및 변색 정도를 비교 측정하였다. 그 결과는 하기 표 11에 정리되어 있다. 이 때 제품 분리 및 변색 정도를 다음의 6등급으로 분류하여 평가하였다: 0 : 변화없음; 1 : 극히 조금 분리(변색); 2 : 조금 분리(변색); 3 : 조금 심하게 분리(변색); 4 :심하게 분리(변색); 및 5 : 극히 심하게 분리(변색).

온도	분리 및 변색정도
온도	실시예	비교예
45℃	0	4.2
4℃	0	0

표 11에서 알 수 있는 바와 같이, 실시예는 45℃에서 변색이나 분리 현상이 없이 안정하였으나, 생약추출물을 안정화하지 않고 직접 제형에 사용한 비교예는 45℃에서 심한 분리 및 변색이 일어나 추출물이 불안정할 뿐만 아니라, 생약추출물이 제형에 들어가 제형자체가 불안정해 졌음을 알 수 있다.

이하 상기한 실험예의 결과를 근거로 하여 본 발명의 생약추출물을 안정화한 나노리포좀을 함유하는 화장료를 조성하여 제시한다. 그러나, 본 발명의 조성물을 하기의 제형예들로 한정하고자 하는 것은 아니다.

제형예 1: 유연화장수(스킨로션)

하기 표에 나타난 바와 같이 유연화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
나노리포좀	1.0
1.3-부틸렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
올레일알코올	0.1
폴리솔베이트 20	0.5
에탄올	15.0
벤조페논-9	0.05
향,방부제	미량
정제수	to 100

제형예 2. 영양화장수(밀크로션)

하기 표에 나타난 바와 같이 영양화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
나노리포좀	3.0
프로필렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
트리에탄올아민	1.2
토코페닐아세테이트	3.0
유동파라핀	5.0
스쿠알란	3.0
마카다이아너트오일	2.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.0
카르복시비닐 폴리머	1.0
비에치티이	0.01
EDTA-2Na	0.01
향,방부제	미량
정제수	to 100

제형예 3. 영양크림

하기 표에 나타난 바와 같이 영양크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
나노리포좀	10.0
세토스테아릴알콜	2.0
글리세릴스테아레이트	1.5
트리옥타노인	5.0
폴리솔베이트 60	1.2
솔비탄스테아레이트	0.5
스쿠알란	5.0
유동 파라핀	3.0
싸이클로메치콘	3.0
비에이치티이	0.05
델타-토코페롤	0.2
농글리세린	4.0
1,3-부틸렌글리콜	2.0
산타검	0.1
EDTA-2Na	0.05
향, 방부제	미량
정제수	to 100

제형예 4. 마사지크림

하기 표에 나타난 바와 같이 마사지크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
나노리포좀	1.0
프로필렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
트리에탄올아민	0.5
밀납	2.0
토코페릴아세테이트	0.1
폴리솔베이트 60	3.0
솔비탄세스퀴올레이트	2.5
세테아릴알코올	2.0
유동파라핀	30.0
카르복시비닐폴리머	0.5
향, 방부제	미량
정제수	to 100

제형예 5. 팩

하기 표에 나타난 바와 같이 팩을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
나노리포좀	2.0
프로필렌글리콜	2.0
글리세린	4.0
카르복시비닐 폴리머	0.3
에탄올	7.0
피이지-40 히드로게네이티드 캐스터 오일	0.8
트리에탄올아민	0.3
비에치티이	0.01
EDTA-2Na	0.01
향, 방부제	미량
정제수	to 100

상술한 바와 같이, 본 발명은 생약 추출물이 내포된 나노리포좀을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 화장료 조성물은 섬유아세포의 증식 촉진, 콜라겐 합성의 촉진에 의한 피부 주름 개선과 피부 탄력 개선, 보습력 향상 및 피부 면역 증강을 통하여 피부 노화를 방지한다. 더욱이, 본 발명의 화장료 조성물에서, 생약 추출물은 나노리포좀에 의해 내포되어 있기 때문에 피부침투 효과가 크게 증가하고, 제형의 안정성도 크게 개선된다.

Claims

산삼, 산수유, 산약, 감초, 맥문동, 복령, 지황 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 추출물을 안정화한 나노리포좀을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 생약 추출물은 나노리포좀 총중량에 대하여 4-12 중량%로 함유된 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 나노리포좀의 평균 입자 지름은 30-70 nm인 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 나노리포좀은 폴리올, 계면활성제, 인지질, 지방산 및 물을 포함하는 혼합물에 의해 제조된 것을 특징으로 하며, 상기 혼합물은 1가 알코올을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
제 4 항에 있어서, 상기 폴리올은 프로필렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 메틸프로판디올, 이소프렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 에리스리톨, 자이리톨 및 솔비톨로 구성된 군으로부터 선택되며, 그 함량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 30-70 중량%인 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
제 4 항에 있어서, 상기 계면활성제는 알킬아실글루타메이트, 알킬포스페이트, 알킬락틸레이트, 디알킬포스페이트 및 트리알킬포스페이트로 구성된 군으로부터 선택되는 음이온 계면활성제 또는 알콕시레이티드알킬에테르, 알콕시레이티드알킬에스테르, 알킬폴리글리코사이드, 폴리글리세릴에스테르 및 슈가에스테르로 구성된 군으로부터 선택되는 비이온계면활성제이며, 그 함량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.5-5.0 중량%인 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
제 4 항에 있어서, 상기 인지질은 레시틴이며, 그 함량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 2-8 중량%인 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
제 7 항에 있어서, 상기 레시틴은 대두 또는 난황에서 추출한 천연 유래의 불포화 레시틴 또는 포화 레시틴인 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
제 4 항에 있어서, 상기 지방산은 C_12-22 알킬 체인의 포화 또는 불포화 지방산이며, 그 함량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.1-1.0 중량%인 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
제 4 항에 있어서, 상기 나노리포좀은 상기 혼합물을 고압 호모게나이저에 적용하여 제조된 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.