본 발명은 하수오, 백복령, 우슬, 당귀, 구기자, 토사자 및 장뇌삼 추출물로 이루어진 생약추출 혼합물(이하 "칠보미려단"이라 칭함)을 안정화한 나노리포좀을 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명자들은 종래부터 생약 등으로 사용되어 오던 자연의 천연물로부터 탁월한 항노화 효능 물질을 탐색하기 위하여 여러 물질을 대상으로 연구를 수행하였고, 그 결과 "칠보미려단"이 피부 세포의 증식 촉진, 항산화 효능, 콜라겐 합성 촉진, 피부 면역 증강 및 피부 보습력 개선 효과가 뛰어난 것을 확인하고 나노리포좀으로 안정화하여 효과를 극대화 함으로서 본 발명을 완성하였다.
본 발명에서 제공되는 "칠보미려단"은 하수오, 백복령, 우슬, 당귀, 구기자, 토사자 및 장뇌삼 추출물의 혼합으로 얻어진다.
상기 하수오(학명 : Pleuropterus multiflorus)는 마디풀과(Polygonaceae)에 속하는 다년생초로서 중국에서 들어온 것으로 알려져 있으며, 오랫동안 재배되고 있는 덩굴성 약용식물이다. 덩이뿌리는 강장제, 강정제, 통경제, 양혈제, 진해제로 쓰고 감기, 토혈, 신경쇠약, 관절염 치료에 쓰인다.
상기 백복령(학명 : Poria cocos)은 담자균류 민주름목 구멍장이버섯과의 버섯으로서 옛날부터 한방 재료로 이용되어 온 약용버섯이다. 약용으로 하는 것은 이 버섯이 땅 속의 소나무 뿌리에 만드는 균핵이며, 자실체는 균핵이 지표에 노출되었을 때 균핵의 표면에 드물게 형성된다. 복령의 자실체는 균핵 위에 평평하게 퍼지고, 깊이 2∼20㎜, 지름 0.5∼2㎜의 관공(管孔)이 표면에 배열되어 있을 뿐, 버섯모양을 나타내지 않으며, 색은 거의 흰색이다. 이뇨제, 진정제, 강장제로서, 부종(浮腫), 정신불안, 동계(動悸), 소화불량 등의 치료에 사용된다. 또, 최근에는 함유성분의 하나로 다당류인 파키만에 항종양성작용(抗腫瘍性作用)이 있다는 발표도 있어, 약용효과가 한층 기대되고 있다.
상기 우슬(학명: Achyranthes japonica)은 비름과에 속하는 여러해살이 풀인 쇠무릎의 뿌리로서, 식용, 약용으로 쓰인다. 주요 성분으로 사포닌과 다량의 칼슘을 함유하고 있다.효능은 활혈행하(活血行下)의 작용이 있어 여자의 생리를 정상으로 유도하고, 대하, 산후복통을 치료한다. 또한, 완화지통(緩和止痛)의 작용을 해 무릎질환인 관절염, 류머티스성관절염, 타박으로 인한 염증을 치료하는 데 유용하며, 산어(散瘀), 이뇨의 작용이 있다. 허리와 다리가 무겁고 통증을 느끼며 때로 근육경련이 있을 때에도 쓰인다. 그리고, 혈관을 확장시켜 일시적인 혈압강하작용을 나타내기도 하여 고혈압의 두통이나 어지러운 증상이 있을 때에도 활용한다.
상기 당귀(학명: Angelica gigas Nakai)는 미나리과에 속하는 다년생 방향성 초본인 당귀의 뿌리이다. 당귀의 식물 형태를 살펴보면 높이 60~90㎝. 꽃은 흰색으로 8~9월에 원줄기와 가지 끝에 피고, 열매는 편평한 긴 타원형이고 가장자리에 좁은 날개가 있다. 당귀는 한약재 중 보혈제의 대표적인 생약으로 혈을 보하여 주고 청열작용과 혈의 흐름을 좋게 한다. 그래서 빈혈이나 어혈로 인한 혈행 장애에서 오는 동통증에 크게 활용하고 있다. 또한, 장의 연동운동을 활발히 해주며, 체내의 가스를 원활히 배출시켜 충분한 영양 흡수를 돕는다. 당귀의 성분은 정유 및 피라노쿠마린계인 데쿠르시놀, 데쿠르신, 나다케네틴, 움벨리페론, 베타-시토스테롤 및 기타 수용성 불휘발성 결정물질 등을 함유하고 있다.
상기 구기자(학명 : Lycium chinense)는 마을주변에 야생성으로 생육하고 있는 낙엽활엽 관목이고 토심이 깊은 곳에 원줄기는 비스듬하게 기대며 끝이 밑으로 처져 잘자라며 종자 등의 방법으로 쉽게 번식할 수 있다. 잎은 식용, 열매는 약용으로 이용하는데 부위별 명칭은 열매는 구기자, 잎은 구기엽, 뿌리의 껍질은 지골피(地骨皮) 라고 한다. 예로부터 불로장생의 신비의 약으로 알려져 열매에는 베타인, 과피에는 피살린, 잎에는 루틴이 들어 있다. 비타민 A 가 많이 함유하고 있고 무기질의 인과 탄수화물, 단백질등의 성분이 고루 들어있다. 잎에는 모세혈관 등의 혈관벽을 튼튼하게 하고 동맥경화를 막는 비타민C가, 열매에는 혈액순환을 잘되게 하는 성분이 함유되어 있다.
상기 토사자(학명 : Cuscuta japonica Choisy)는 넝쿨 뻗는 메꽃과의 한해살이 풀로서, 다른식물에 기생하며 산야와 밭둑 및 구릉지에서 자란다. 원줄기는 노란색이고 철사모양이며 털이 없고, 종자가 발아하여 다른 나무에 기생하여 양분을 흡수하며, 길이 약 5m 정도로 뒤엉켜서 자란다. 잎은 비늘 같고 길이 0.2cm정도로 삼각형이며, 꽃은 흰색으로 수상화서를 이루며 작은 꽃자루는 짧거나 없으며 여러개가 모여서 덩어리져 핀다. 그 씨를 토사자라 하며, 씨에는 수지모양의 배당체, 아밀라제, 프로비타민 A 등이 풍부하다.한방에서는 강정강장약으로 음위증, 유정, 요통에 쓰였으며, 또한 진정약, 진통약, 설사약으로 쓰였다.민간에서는 전초즙으로 구진(농포)을 없애기 위해 얼굴을 씻으며 가래약, 피멎이약으로도 이용되어 왔다.
상기 장뇌삼(학명 : Panax ginseng)은 미나리목 오가피나무과(두릅나무과)에 속하는 음지성 여러해살이풀 또는 이것의 뿌리로서 학명을 Panax ginseng이라 하기도 한다.원래 온대 지역 산악 지대의 삼림에서 자생하는 음지식물인데, 약용식물로 수요가 증가하여 재배하게 되었다. 장뇌삼에서 주로 뿌리는 자양, 강장, 강심, 보정(補精), 건위, 진정 등 여러 가지 약효를 나타내고 독성이 거의 없어 만병통치, 불로장수의 약초, 한약재로 이용되어 왔다. 근래에는 과학적으로도 그와 같은 여러 약효가 인정되고 있다. 일반적으로 한방에서 인정되고 있는 장뇌삼의 약효를 요약하면, 강장, 강심, 건위, 보정, 진정, 자양(滋養) 등의 약으로 널리 사용되고, 위장 등의 기능 쇠약에 의한 물질대사 기능의 저하에 부활제(賦活劑)로 사용되며, 병약자의 위부정체감(胃部停滯感), 소화불량, 구토, 흉통, 이완성설사, 식욕부진 등에도 응용된다.
본 발명에서 제공하는 "칠보미려단" 혼합물 내 각종 생약 성분은 당업계에 공지된 다양한 추출 방법을 이용하여 수득할 수 있으며, 바람직하게는, (a) 물, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올 (메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), (c) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (d) 아세톤, (e) 에틸 아세테이트, (f) 클로로포름 또는 (g) 1,3-부틸렌글리콜을 추출 용매로 하여 수득할 수 있다.
한편, 본 발명의 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 생약 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.
또한, 본 발명의 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 생약 추출물에 포함되는 것이다.
본 발명의 생약 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
본 발명에서 상기 생약추출 혼합물을 안정화한 나노리포좀 함량은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.1 ~ 20.0중량%이며, 또한, 상기 생약추출 혼합물은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.1 ~ 20.0중량%이며, 바람직하게는 4 ~ 12중량%이다.
본 명세서에서, 용어 "나노리포좀"은 통상적인 리포좀의 형태를 갖는 것으로서 평균 입자 지름이 1-100nm인 리포좀을 의미한다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 나노리포좀의 평균 입자 지름은 30-70nm이다. 상기 나노리포좀의 평균 입자 지름이 70nm를 초과하는 경우에는 본 발명에서 달성하고자 하는 기술적 효과 중 피부침투의 개선 및 제형 안정성의 개선이 매우 미약하다.
본 발명의 나노리포좀은 폴리올, 계면활성제, 인지질, 지방산 및 물을 포함하는 혼합물에 의해 제조되며, 1가 알코올 (예: 에탄올 등)을 이용하지 않는다는 것이 특징이다.
본 발명의 나노리포좀에 이용되는 폴리올은 특히 제한되지 않으며, 바람직하게는 프로필렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 메틸프로판디올, 이소프렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 에리스리톨, 자이리톨 및 솔비톨을 포함하며, 가장 바람직하게는 프로필렌 글리콜이다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 10-80 중량%, 바람직하게는 30-70중량%이다.
본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 계면활성제는 당업계에 공지된 어떠한 것도 사용할 수 있으며, 예를 들어, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 양성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용될 수 있고, 바람직하게는 음이온성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용된다. 음이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알킬아실글루타메이트, 알킬포스페이트, 알킬락틸레이트, 디알킬포스페이트 및 트리알킬포스페이트 등을 포함한다. 비이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알콕시레이티드알킬에테르, 알콕시레이티드알킬에스테르, 알킬폴리글리코사이드, 폴리글리세릴에스테르 및 슈가에스테르 등을 포함한다. 가장 바람직하게는, 비이온성 계면활성제에 속하는 폴리솔베이트류가 이용된다. 계면활성제의 사용량은, 일반적으로 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.1-10중량%이고, 바람직하게는 0.5-5.0중량%이다.
본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 또 다른 성분인 인지질은 양쪽친화성 지질로 이용된 것으로서, 천연 인지질(예: 난황 레시틴 또는 대두 레시틴, 스핑고마이엘린) 및 합성 인지질(예: 디팔미토일포스파티딜콜린 또는 수첨 레시틴)을 포함하며, 바람직하게는 레시틴이다. 보다 바람직하게는, 상기 레시틴은 대두 또는 난황에서 추출한 천연 유래의 불포화 레시틴 또는 포화 레시틴이다. 통상적으로 천연 유래의 레시틴은 포스파티딜 콜린의 양이 23-95%, 그리고 포스파디딜에탄올아민의 양이 20% 이하이다. 본 발명의 나노리포좀의 제조에 있어서, 레시틴의 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.5~20중량%이며, 바람직하게는 2-8중량%이다.
본 발명의 나노리포좀 제조에 이용되는 지방산은 고급 지방산으로서, 바람직하게는 C12-22 알킬 체인의 포화 또는 불포화 지방산으로서, 예컨대, 라우린산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아린산, 올레산 및 리놀레산을 포함한다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.05-3.0중량%이고, 바람직하게는 0.1-1.0중량%이다.
본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 물은 일반적으로 탈이온화된 증류수이며, 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 5.0-40중량%이다.
나노리포좀의 제조는 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 이루어질 수 있으나, 가장 바람직하게는 상기 성분들을 포함하는 혼합물을 고압 호모게나이저에 적용하여 제조된다.고압 호모게나이저에 의한 나노리포좀의 제조는 소망하는 입자 크기에 따라 다양한 조건(예: 압력, 횟수 등)으로 실시할 수 있으며, 바람직하게는 600-1200bar 압력 하에서 1-5회 고압 호모게나아저를 통과하도록 하여 나노리포좀을 제조한다.
이렇게 제조된 나노리포좀 시스템은 여러 종류의 난용성 물질을 녹임과 동시에 불안정한 물질을 안정화시켜 피부침투효과를 극대화하는 장점을 가지고 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 생약추출 혼합물을 포함하는 나노리포좀 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
본 발명의 화장료 조성물은 피부 노화 방지(피부 보호)의 용도를 갖는다. 본 명세서에서 용어 "피부 노화 방지"는 피부 노화 예방 및 치료를 포괄적으로 포함하는 의미를 갖는다. 또한, 본 명세서에서 "피부 노화 방지" 및 "피부 보호"는 특별한 언급이 없는 한 동일한 의미로 사용된다.
본 발명의 화장료 조성물은 피부 세포의 증식 촉진, 항산화 효능, 콜라겐 합성의 촉진에 의한 피부 주름 개선과 피부 탄력 개선, 보습력 향상 및 피부 면역 증강을 통하여 피부 노화를 방지하며, 이와 같은 사실은 하기의 실시예에 명시되어 있다. 따라서, 본 발명의 용도인 피부 노화 방지 (즉, 피부 보호)는 주름 개선, 보습력 개선 및 피부 탄력 개선 용도를 포함하는 것으로 해석된다. 더욱이, 본 발명의 화장료 조성물에서 생약추출 혼합물은 나노리포좀에 의해 내포되어 있기 때문에 피부침투 효과가 크게 증가하고 제형의 안정성도 크게 개선된다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시 예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
제조예 1: "칠보미려단" 생약추출 혼합물의 제조
일차적으로 하수오, 백복령, 우슬, 당귀, 구기자, 토사자, 장뇌삼을 완전 건조한 후, 각각 하수오 40g, 백복령 40g, 우슬 10g, 당귀 10g, 구기자 10g, 토사자 10g 및 장뇌삼 5g의 건조중량으로 혼합한 다음, 추출 용매로서 물을 10 ~ 20 배 부피량 가하였다. 이를 70℃에서 1시간 가량 가열하였다. 이어, 여과한 후 상온에서 식힌 다음 4℃에서 7일간 저온 숙성시킨 다음, 여과하여 사용하였다.
실험예 1: 피부 세포 증식 효과
"칠보미려단"이 피부 세포 증식에 미치는 효과를 알아보기 위하여 인체 정상 섬유아세포(한국세포주은행)를 96-웰 마이크로 플레이트(96-well microplate)의 각 웰에 1 x 104 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma사)에서 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 이어, 상기 생약추출 혼합물이 최종 농도 0.01%, 0.05%, 0.1%, 0.5% 및 1%로 포함된 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 생약추출 혼합물이 포함되지 않은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 24시간 동안 추가로 배양하였다. 그런 다음, MTT 용액(3-(4,5-디메틸티아졸-2-일) 2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드: 5mg/㎖)을 각각 10㎕씩 첨가하고, 4시간 동안 배양한 후, 배지를 제거하고, 각 웰 당 100㎕의 DMSO 용액을 가하여 20분 동안 진탕시키고, 마이크로 플레이트 판독기(microplate reader, Molecular Devices, 미합중국)를 이용하여 570nm에서 상층액의 흡광도를 측정하였다. 측정값을 하기의 수학식 1에 대입하여 세포 증식 효과를 산출하고, 그 결과는 하기 표 1에 나타내었다.
세포증식효과(%) = [(실험군 흡광도 - 대조군의 흡광도)/대조군의 흡광도] x 100
칠보미려단 (%) |
흡광도(570nm) |
세포증식효과(%) |
대조군 |
0.631 |
- |
0.01 |
0.765 |
21.2 |
0.05 |
0.854 |
35.3 |
0.10 |
0.981 |
55.5 |
0.50 |
1.064 |
68.6 |
1.00 |
1.245 |
97.3 |
상기 표 1에서 알 수 있듯이, 생약추출 혼합물을 처리하지 않은 대조군과 비교하여, 생약추출 혼합물이 처리된 실험군의 경우 매우 높은 섬유아세포 증식 효과를 나타낸다.
실험예 2 : 항산화 효과
본 발명의 제조예에 따라 얻어진 "칠보미려단" 생약추출 혼합물의 항산화 효과를 알아보기 위하여 자유라디칼 소거활성 실험(Free Radical Scavenging Activity Test)을 실시하였다. 자유라디칼 소거활성 실험은 Kim 등(Kor. J. Pharmacogn., 24(4), 299-303(1993))의 방법을 변형한 것으로써, 안정한 자유라디칼인 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryhydrazyl, 시그마사) 시약을 사용하였다. DPPH 용액(Blank인 경우는 에탄올) 150㎕에 상기 생약추출 혼합물을 다양한 농도로 제작하여, 이들을 각각 150㎕ 첨가하여 혼합하고, 실온에서 30분간 방치한 후 517nm에서 흡광도를 측정하는 실험군을 설정하였으며, 이에 대한 대조군으로는 정제수를 이용한 경우로 설정하였다. 상기 실험군과 대조군에 대한 흡광도 측정 후, 하기 수학식 2를 이용하여 자유라디칼 소거활성 효과를 구하여 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
자유라디칼소거효과(%) = 100 - [(실험군 흡광도 - Blank 흡광도)/대조군의 흡광도] x 100
칠보미려단(%) |
자유라디칼소거효과(%) |
0.01 |
20.2 |
0.05 |
38.1 |
0.10 |
57.9 |
0.50 |
79.2 |
1.00 |
93.7 |
상기 표 2에 나타낸 결과를 통해 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 생약추출 혼합물은 자유라디칼 소거능력이 매우 탁월하다는 것을 확인할 수 있었다.
실험예 3: 콜라겐 합성 증진 효과
인체 정상 섬유아세포(한국세포주은행)를 96-웰 마이크로 플레이트의 각 웰에 2 x 104 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 이어, 상기 제조한 "칠보미려단" 생약추출 혼합물이 최종 농도 0.01, 0.05 및 0.10%로 포함된 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 생약추출 혼합물이 포함되지 않은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 키트 (Takara, 일본국)를 이용하여 측정함으로써 새로 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. 양은 ng/2x104 세포로 환산하였으며, 그 결과는 하기 표 3에 나타나 있다.
칠보미려단(%) |
콜라겐 합성량 (ng/2 x 104) |
대조군 |
124 |
0.01 |
159 |
0.05 |
187 |
0.10 |
223 |
상기 표 3에서 볼 수 있듯이, 본 발명의 생약추출 혼합물의 농도가 증가함에 따라 콜라겐의 합성이 증가함을 알 수 있고, 이에 본 발명의 생약추출 혼합물이 탁월한 콜라겐 합성 증진 효과를 나타냄을 알 수 있다.
실험예 4 : 피부면역증강 효능 시험
8-10 주령의 C57BL/6 생쥐를 대상으로 복부를 면도한 다음 FS-20 sun lamp를 이용하여 자외선 B파장을 (UVB) 2.4KJ/m2로 조사하면 접촉성 과민반응(contact hypersensitivity)이 대조군에 비해 44.3% 억제되는 면역억제현상을 초래하게 된다.
본 발명의 "칠보미려단" 생약추출 혼합물을 UV 조사 후 도포하고 3일이 경과한 다음, UV조사 영역에 3% 삼질소염화벤젠(trinitrochlorobenzene)으로 감작시켰다. 6일 후 1%의 삼질소염화벤젠을 생쥐의 귀에 도포하고 부종 상태를 측정하였다.그 결과는 하기 표 4에 정리되어 있다.
칠보미려단(%) |
피부면역 증강효과(%) |
대조군 |
- |
0.01 |
12.6 |
0.05 |
24.5 |
0.10 |
39.5 |
상기 표 4에서 확인할 수 있듯이, 본 발명의 생약추출 혼합물은 농도-의존적으로 피부 면역 반응을 증가시키고 있음을 알 수 있다.
제조예 2: 생약추출 혼합물을 함유하는 나노리포좀의 제조
나노리포좀은 하기 표 5의 조성으로 A상에 B상을 첨가하고, 균일하게 습윤 시킨후 C상을 첨가하고 70-80℃까지 가열 혼합하였다.이 용액을 600-1000 bar의 조건으로 고압 호모게나이저에 2-4회 통과 시킨 후, 냉각하여 지름 30-70nm 입자 크기의 생약추출 혼합물을 안정화시킨 나노리포좀을 얻었다.
상 |
성 분 |
함량(중량%) |
A |
프로필렌 글리콜 |
40 |
B |
레시틴 |
5 |
콜레스테롤 |
2.5 |
세라마이드 |
2.5 |
소듐스테아로일 락테이트 |
0.5 |
폴리솔베이트-80 |
0.5 |
스테아린산 |
0.5 |
C |
생약추출 혼합물(칠보미려단) |
10 |
수산화 칼륨 |
적량 |
정제수 |
To 100 |
실시예
및
비교예
하기 표 6의 조성비를 가지는 화장료 조성물에 상기의 "칠보미려단" 생약추출 혼합물을 안정화시킨 나노리포좀(제조예 2)을 함유하는 조성물을 실시예로 하고, 나노리포좀으로 안정화되지 않은 "칠보미려단"(제조예 1)을 함유하는 조성물인 비교예 1, "칠보미려단"이 함유되지 않은 조성물인 비교예 2을 다음의 조성으로 제조하였다. 한편, 제조예 2의 "칠보미려단"함량은 조성물 총 중량에 대해서 2.0중량%이다.
성 분 |
실시예 |
비교예 1 |
비교예 2 |
함량(중량%) |
함량(중량%) |
함량(중량%) |
제조예 1 |
- |
2.0 |
- |
제조예 2 |
20 |
- |
- |
A |
세토스테아릴알콜 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
글리세릴스테아레이트 |
1.5 |
1.5 |
1.5 |
마이키로크리스탈린 |
0.7 |
0.7 |
0.7 |
스쿠알란 |
5.0 |
5.0 |
5.0 |
유동파라핀 |
3.0 |
3.0 |
3.0 |
트리옥타노인 |
5.0 |
5.0 |
5.0 |
폴리솔베이트 |
1.2 |
1.2 |
1.2 |
솔비탄스테아레이트 |
0.5 |
0.5 |
0.5 |
토코페롤아세테이트 |
0.2 |
0.2 |
0.2 |
마이크로메치콘 |
3.0 |
3.0 |
3.0 |
BHT |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
B |
글리세린 |
4.0 |
4.0 |
4.0 |
1,3-부틸렌글리콜 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
EDTA-2Na |
0.05 |
0.05 |
0.05 |
정제수 |
To 100 |
To 100 |
To 100 |
향, 방부제 |
적량 |
적량 |
적량 |
실험예
5: 보습 효과
상기 실시예 및 비교예에서 제조된 각 화장료의 보습력을 평가하기 위하여, 각 화장료가 도포된 피부를 대상으로 하여 수분 보유능 및 수분 증발량을 다음과 같이 측정하였다.
실험예 5-1: 수분 보유능의 측정
22℃ 및 상대습도 45%의 항온 항습실에서 상기 실시예 및 비교예에서 제조된 각 화장료를 30명의 피시험자 하박 안쪽에 일정량(0.03g/16 ㎠)을 도포하고, 도포전, 도포 1시간 후 및 도포 2시간 후의 피부의 수분 함량을 측정하였으며, 아무런 처리를 하지 않은 정상 피부를 대조군으로 사용하였다.측정 기기는 피부의 수분 함량에 따른 피부의 전기 용량을 측정하여 보습력을 측정하는 수분 함량측정기(corneometer CM825, Conrage + Khazaka사, 독일연방국)를 사용하였다.그 결과는 하기 표 7에 나타나 있다.
구 분 |
실시예 |
비교예 1 |
비교예 2 |
대조군 |
도포전 피부 전기전도도 |
50 |
50 |
50 |
50 |
도포 1시간후 피부 전기전도도 |
87 |
83 |
69 |
50 |
도포 2시간후 피부 전기전도도 |
77 |
73 |
57 |
50 |
실험예
5-2: 수분 증발량의 측정
팔의 상박 부위에 테입 스트리핑 (tape stripping)을 실시하여 피부의 방어막을 약화시킨 후, 실험예 5-1과 동일한 방법으로 피실험자에게 각 화장료를 도포한 후, 수분증발량기(Tewameter TM300, Conrage + Khazaka사, 독일연방국)를 이용하여 12 시간마다 1분 간격으로 5회씩 수분 증발량을 측정하여 평균값을 구하였다.그 결과는 하기 표 8과 같다.
구 분 |
실시예 (%) |
비교예 1(%) |
비교예 2(%) |
대조군(%) |
0시간후수분 증발량 |
100.0 |
100.0 |
100.0 |
100.0 |
12시간후 수분 증발량 |
74.2 |
81.3 |
89.5 |
93.0 |
24시간후 수분 증발량 |
55.8 |
63.5 |
76.6 |
85.3 |
36시간후 수분 증발량 |
39.7 |
48.0 |
65.2 |
79.5 |
48시간후 수분 증발량 |
25.7 |
31.5 |
53.0 |
72.6 |
상기 실험예 5-1 및 5-2의 결과에서 보듯이, 본 발명의 실시예 화장료가 비교예의 화장료에 비해서 피부의 전기 전도도가 높고, 적은 수분 손실량을 나타낸다.따라서, 생약추출 혼합물을 안정화시킨 나노리포좀을 함유하는 화장료가 더 우수한 보습 효과를 나타냄을 알 수 있다.
실험예
6: 피부탄력효과
본 발명의 "칠보미려단" 생약추출 혼합물을 안정화한 나노리포좀을 함유하는 화장료 조성물의 피부 탄력 증진효과를 측정하였다.
온도 24-26℃, 습도75의 조건에서 20세 이상의 건강한 여성 30명(평균연령 37세)을 3 그룹으로 나누고, A 그룹에는 실시예를, B 그룹에는 비교예 1을, C 그룹에는 비교예 2의 제형을 눈가를 중심으로 하루 2회씩 (아침 및 저녁) 12주간 도포한 후, 피부탄력 측정기(Cutometer MPA580, Conrage + Khazaka사, 독일연방국)를 이용하여 피부탄력을 측정하였다.시험결과는 cutometer MPA580의 R8(R8(12주)-R8(0주)) 값으로 기재하였는데, R8 값은 피부점탄성 (Vicoelasticity)의 성질을 나타내며, 결과는 하기 표 9에 기재되어 있다.
실험 제형 |
피부탄력효과 |
실시예 |
0.72 |
비교예 1 |
0.61 |
비교예 2 |
0.29 |
표 9의 결과에서와 같이, 생약추출 혼합물을 안정화한 나노리포좀을 함유한 실시예의 피부탄력은 생약추출 혼합물 2%가 함유된 비교예 1과 생약추출 혼합물을 함유하지 않는 비교예 2에 비해 더 증가함을 확인할 수 있었다.
실험예 7: 피부침투효과
본 발명의 "칠보미려단" 생약추출 혼합물을 안정화한 나노리포좀을 함유한 화장료에 대한 피부침투 효과를 측정하였다.
Dermal Equivalent (DE)-인체 정상 섬유아세포 1 X 105cell/㎖를 인체의 결합조직을 이루는 섬유조직과 유사한 겔 구조에 콜라겐 수용액 3mg/㎖:5 X DEM : 2:2 소듐바이카보네이트와 200 mM Hepes 완충액이 포함된 0.05N 수산화나트륨이 7:2:1로 혼합된 배지에 접종하여 5CO2, 37℃에서 7일 동안 배양하였다. 이를 3㎛ 다공성폴리카보네이트(porous polycarbonate) 재질로 된 막(membrane)에 의해 안쪽과 바깥쪽이 구분된 플레이트의 안쪽에 넣고 섬유아세포가 배양된 Derma Equivalent(DE) 표면 위에 표피각질형성세포(Epidermal Keratinocyte) 1 X 105 cell/㎖ 세포를 접종하여 EGF와 BPE가 함유된 K-SFM 배지를 안쪽과 바깥쪽에 넣고 7일 동안 배양하였다. 그 후 플레이트 안쪽의 배지를 버려 공기가 배양세포의 표면에 접촉되도록 하고 바깥쪽에 10FBS가 함유된 K-SFM과 EGF가 들어있지 않은 DMEM이 동량으로 혼합된 배지를 넣고 2주간 배양하여 다층의 표피와 진피가 형성된 인공피부를 얻었다. 여기에 본 발명의 실험예 및 비교예를 맨 위층의 인공피부 조직에 적용하여 4시간 배양 후 10FBS가 함유된 K-SFM과 물의 양을 HPLC로 분석하였다.시험결과는 하기 표 10에 나타나 있다.
배지 중의 생약추출 혼합물의 양 (㎍/㎖) |
실시예 |
비교예 1 |
38.4 |
3.2 |
실험결과 표 10에서와 같이, 본 발명의 "칠보미려단" 생약추출 혼합물을 안정화한 나노리포좀을 함유한 화장료는 "칠보미려단" 생약추출 혼합물을 그대로 사용한 비교예 1에 비해 10배 이상의 피부 침투 효과가 우수함을 알 수 있다. 이는 본 발명의 나노리포좀의 평균입자 크기가 30-70 nm로 아주 작아 피부침투가 용이하기 때문이다. 피부 침투력의 증가는 유효성분의 효능을 극대화할 수 있으며, 실시예가 비교예 1보다 우수한 효과를 나타냄을 볼 수 있다.
실험예 8: 제형의 안정성 시험
상기 본 발명의 "칠보미려단" 생약추출 혼합물을 안정화한 나노리포좀을 함유한 화장료에 대한 안정성 시험을 하기의 방법으로 실시하였다.
상기 화장료의 안정성을 시험하기 위해 상기 실시예 및 비교예를 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관하고 또한 4℃로 일정하게 유지되는 완전히 차광된 냉장고 내에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관한 후, 변색 및 변취, 분리정도를 비교 측정하였다. 그 결과는 하기 표 11에 정리되어 있다.
이 때 제품 변색 및 변취, 분리정도를 다음의 6등급으로 분류하여 평가하였다.[ 0 : 변화없음, 1 : 극히 조금 분리(변색), 2 : 조금 분리(변색), 3 : 조금 심하게 분리(변색), 4 :심하게 분리(변색), 5 : 극히 심하게 분리(변색).]
구 분 |
제품의 안정성 |
실시예 |
비교예 1 |
45℃ |
4℃ |
45℃ |
4℃ |
변색 |
0.3 |
0 |
3.6 |
0 |
변취 |
0.2 |
0 |
2.4 |
0 |
분리 |
0 |
0 |
2.7 |
0 |
표 11에서 알 수 있는 바와 같이, 실시예는 45℃에서 변색이나 변취, 분리 현상이 없이 안정하였으나, "칠보미려단" 생약추출 혼합물을 나노리포좀으로 안정화하지 않고 직접 제형에 사용한 비교예 1은45℃에서 분리 및 변색이 일어나 추출물이 불안정할 뿐만 아니라, 생약추출 혼합물이 제형에 들어가 제형 자체가 불안정해 졌음을 알 수 있다.
이하 상기한 실험예의 결과를 근거로 하여 본 발명의 생약추출 혼합물을 안정화한 나노리포좀을 함유하는 화장료를 조성하여 제시한다.그러나, 본 발명의 조성물을 하기의 제형예들로 한정하고자 하는 것은 아니다.
제형예 1: 유연화장수(스킨로션)
하기 표에 나타난 바와 같이 유연화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.
배합 성분 |
함량 (중량%) |
제조예 2 |
1.0 |
1.3-부틸렌글리콜 |
6.0 |
글리세린 |
4.0 |
올레일알코올 |
0.1 |
폴리솔베이트 20 |
0.5 |
에탄올 |
15.0 |
벤조페논-9 |
0.05 |
향,방부제 |
미량 |
정제수 |
to 100 |
제형예
2. 영양화장수(
밀크로션
)
하기 표에 나타난 바와 같이 영양화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.
배합 성분함량 (중량%)
제조예 2 |
3.0 |
프로필렌글리콜 |
6.0 |
글리세린 |
4.0 |
트리에탄올아민 |
1.2 |
토코페닐아세테이트 |
3.0 |
유동파라핀 |
5.0 |
스쿠알란 |
3.0 |
마카다이아너트오일 |
2.0 |
폴리솔베이트 60 |
1.5 |
솔비탄세스퀴올레이트 |
1.0 |
카르복시비닐 폴리머 |
1.0 |
비에치티이 |
0.01 |
EDTA-2Na |
0.01 |
향,방부제 |
미량 |
정제수 |
to 100 |
제형예
3. 영양크림
하기 표에 나타난 바와 같이 영양크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.
배합 성분함량 (중량%)
제조예 2 |
10.0 |
세토스테아릴알콜 |
2.0 |
글리세릴스테아레이트 |
1.5 |
트리옥타노인 |
5.0 |
폴리솔베이트 60 |
1.2 |
솔비탄스테아레이트 |
0.5 |
스쿠알란 |
5.0 |
유동 파라핀 |
3.0 |
싸이클로메치콘 |
3.0 |
비에이치티이 |
0.05 |
델타-토코페롤 |
0.2 |
농글리세린 |
4.0 |
1,3-부틸렌글리콜 |
2.0 |
산타검 |
0.1 |
EDTA-2Na |
0.05 |
향, 방부제 |
미량 |
정제수 |
to 100 |
제형예
4. 마사지크림
하기 표에 나타난 바와 같이 마사지크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.
배합 성분함량 (중량%)
제조예 2 |
1.0 |
프로필렌글리콜 |
6.0 |
글리세린 |
4.0 |
트리에탄올아민 |
0.5 |
밀납 |
2.0 |
토코페릴아세테이트 |
0.1 |
폴리솔베이트 60 |
3.0 |
솔비탄세스퀴올레이트 |
2.5 |
세테아릴알코올 |
2.0 |
유동파라핀 |
30.0 |
카르복시비닐폴리머 |
0.5 |
향, 방부제 |
미량 |
정제수 |
to 100 |
제형예
5. 팩
하기 표에 나타난 바와 같이 팩을 통상의 방법에 따라 제조하였다.
배합 성분 |
함량 (중량%) |
제조예 2 |
2.0 |
프로필렌글리콜 |
2.0 |
글리세린 |
4.0 |
카르복시비닐 폴리머 |
0.3 |
에탄올 |
7.0 |
피이지-40 히드로게네이티드 캐스터 오일 |
0.8 |
트리에탄올아민 |
0.3 |
비에치티이 |
0.01 |
EDTA-2Na |
0.01 |
향, 방부제 |
미량 |
정제수 |
to 100 |