KR100830342B1

KR100830342B1 - 조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물 및그 제조방법

Info

Publication number: KR100830342B1
Application number: KR1020070005237A
Authority: KR
Inventors: 최종완; 서봉석; 정민석; 박창민
Original assignee: 한국화장품주식회사
Priority date: 2007-01-17
Filing date: 2007-01-17
Publication date: 2008-05-16
Also published as: JP2010515723A; CN101600416A; WO2008088103A1; US20100055212A1

Abstract

본 발명은 조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 조직배양한 삼 부정근의 추출물을 별도로 제조하여 포함하는 것이 아니라, 조성물에 포함된, 조직배양한 삼 부정근 자체로부터 유용성분의 침출을 유도하는 것으로, 본 발명의 조성물은 상기 침출되어 나온 유용 성분 및 그 함량이 지속적으로 유지되고, 또한 조성물 내의 삼 부정근을 관능 인지할 수 있는 점에서 사용자의 신뢰감과 사용 만족도가 향상된다. 또한, 상기 화장료 조성물의 제조방법은, 조직배양한 삼 부정근으로부터 유용 성분을 추출, 분리 및 정제하기 위한 별도의 과정이 없어 공정이 단순화되고 비용이 절감되며, 상기 공정으로 인한 유용성분의 소실 또한 방지할 수 있는 장점이 있다.

삼 부정근, 화장료 조성물

Description

조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물 및 그 제조방법 {A cosmetic composition comprising tissue cultured Panax ginseng C.A. Meyer adventitious root itself and an preparing method thereof}

도 1은 조직배양한 산삼 부정근의 사진이고,

도 2는 조직배양한 산삼 부정근 자체를 포함하는 화장품과 조직배양한 산삼 부정근의 추출물을 함유하는 화장품 각각에 대한 선호도를 나타낸 그래프이고,

도 3은 본 발명의 실시예인, 조직배양한 산삼 부정근을 포함하는 크림 및 에센스의 사진이다.

본 발명은 조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

일반적으로 식물추출물을 함유하는 기능성 화장품은, 추출물 제조 시 배양, 회수, 세척, 건조, 침적, 숙성 및 여과 등을 포함하는 여러 단계를 통해 추출물을 수득하여 화장료 조성물로 이용하기 때문에 시간적, 경제적 비용면에서 불리한 단점이 있다. 용매를 이용한 추출공법 또는 초임계 추출공법에 의한 추출물의 경우, 단시간 내에 대량의 고순도의 성분 추출은 기대할 수 있지만, 추출된 성분들이 시간 경과에 따라 빛, 공기, 온도 등의 영향으로 자체 침전되거나, 색 변화가 발생하는 등의 안정성에 문제가 있어, 조성물에 첨가하였을 때 조성물의 성질에 영향을 미치는 단점이 있다. 또한, 상기한 추출물들은 충분한 숙성 기간을 거치지 않고 대부분 단기간, 짧은 시간 동안 침적이나 숙성을 통하여 수득하므로, 유용성분에 대한 충분한 추출효과를 기대하기 어려운 단점이 있고, 부가적인 분리 및/또는 정제 단계를 거치지 않고서는 유용 성분만을 다량으로 추출하지는 못하므로, 추출물 자체만으로 높은 농도의 유용 성분을 함유하는 화장품을 제조하기에는 불리한 면이 있다. 또한, 기능성 화장품을 구매하여 사용하고자 하는 소비자는, 유용성분을 포함하는 추출물의 함유 유무 및 정도를 시각적으로 확인할 수 없고, 단지 화장품 포장재에 적힌 조성 함유량을 인지하여 구매, 사용할 수 밖에 없다. 상기한 단점들을 개선하기 위한 방법으로 기능성 성분을 함유하는 식물의 추출물이 아닌, 식물 자체를 화장료 조성물에 포함하여 제조하는 방법이 제기되었으나, 식물 자체를 멸균시키는 과정에 대해 비용이 발생하고, 조성물에 첨가되는 식물의 크기 등이 달라 품질의 균일성이 떨어지는 단점이 있다.

또한, 최근의 조직배양기술을 이용한 식물의 미분화된 캘러스를 포함하는 화장료 조성물에 대한 특허(한국등록특허 제 637342호)가 개시되어 있으나, 캘러스 자체는 세포의 기능이 정해지지 않은 세포 덩어리를 나타내는 것으로, 분화 결과물 인 완전 개체가 가지는 유용 성분의 종류 및 함량과는 큰 차이를 나타내는 것으로 알려져 있다.

기능성 성분을 다량 함유한 식물의 하나의 예로, 오갈과(Araliacea), 인삼(Panax ginseng C.A. Meyer)에 속하는 산삼은 산에서 자연적으로 자라는 인삼으로, 새싹이 나올 때, 꽃을 맺는 꽃대가 잎 및 줄기와 함께 나오는 현화식물에 속하면서 피자식물에도 속하며, 반음지성식물이다. 동의보감에서는 '신초'라 기록된 바 있으며, 예로부터 신비한 영약으로 취급되는 희귀식물로서 여러 다양한 질병치료제 및 보양제로 이용되어왔다.

인삼의 주요성분은 배당체이며, 이들 혼합물을 산(酸)으로 가수분해하면 포도당, 람노오스, 수크로오스, 프룩토오스 등의 유리당과 아글리콘이 생성되고, 사포닌의 배당체로서는 파낙사디올과 파낙사트리올, β-시스토스테롤 및 올레아놀산이 나온다. 세스퀴테르페노이드계의 화합물인 파나센(panacen)은 고유의 향기성분이다. 그 밖에 β-시스토스테롤, 스티구마스테롤; 알칼로이드; 캠페롤, 트리폴림 및 파나세노이드 등의 플라보노이드(flavonoid); B복합체, 니코틴산, 판토텐산, 폴산 및 비오틴 등의 비타민류; 망간, 구리, 바나듐, 코발트, 비소, 게르마늄, 인, 알루미늄 및 니켈 등의 미량원소(粘液質); 게르마늄 세포 효소(酵素); 및 아밀라아제, 페놀라아제 등의 효소가 함유되어 있음이 밝혀졌다.

임상학적 연구결과로 보고된 인삼의 효능으로는, 항당뇨 작용, 항암 작용, 심장 강화 및 혈압 조정, 간기능 강화, 위장기능강화, 스트레스 해소 및 강장 효과, 체력(정력) 증진, 뇌기능 강화, 노화 억제, 방사선 조사 방어작용, 빈혈 회복 효과 및 조혈 작용, 면역 기능 증진, 소염 작용 및 허약체질 개선 효과 등이 있다. 산삼의 효능은 인삼과 비슷하나 약리적 효과면에서 훨씬 뛰어나다고 알려져 있다.

산삼은 천종, 지종, 인종, 장뇌 이상의 4가지로 분류되는데, 상세하게는 자연적으로 산에서 나서 씨가 떨어져 생긴 천종(천연산삼), 야생동물이나 조류가 산삼 씨를 먹고 산중에 배설하여 자란 지종, 사람이 씨를 뿌려 자란 인종, 및 산삼의 종자를 채취하여 깊은 산속에 씨를 뿌려 야생상태로 인위적으로 양생시킨 장뇌(가삼)이다. 일반적으로는 야생산삼은 종자를 뿌려도 싹이 잘 나오지 않고, 설사 자란다고 해도 몇 년을 넘기지 못하고 썩어 없어지는 경우가 많아 재배가 쉽지 않은 아주 귀한 식물이다.

최근 이러한 산삼의 희귀성과 고부가가치성의 단점을 보완하기 위하여, 약으로 주로 이용되는 산삼의 뿌리 조직을 일반화된 식물조직배양기술을 이용하여 부정근을 대량 증식시킴으로써, 균일하고 우수한 품질의 산삼 부정근을 단기간 내에 적은 비용으로 대량 배양, 생산하여 여러 식품이나 원료에 사용하고 있다. 예를 들어, 주류 음료의 제조 시 인삼, 매실, 금 등을 넣고 숙성시켜 맛과 향을 개선시켰고, 음료에 담긴 인삼 자체의 시각적 효과로 제품에 대한 신뢰감을 만족시킨 바 있다. 그러나 상기한 산삼 부정근 자체를 포함한 화장료 조성물이 공지되거나 개시된 바는 없다.

이에, 본 발명자들은 삼의 유용 성분을 안정적으로 함유하는 화장료 조성물의 제조에 대해 연구하던 중, 조직배양한 삼 부정근 자체를 화장료 조성물에 첨가함으로써, 이로부터 침출된 성분상이 균일하게 유지되고, 관능 만족도를 증가시키 는 것을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는, 조직배양한 삼 부정근 자체가 함유하고 있는 유용 성분이 자연적, 지속적으로 침출되고 유지되며, 삼 부정근 자체를 시각적으로 인지할 수 있도록 하여 신뢰감을 줄 수 있으며, 삼 부정근이 가지는 자연향을 통해 만족감을 증대시킬 수 있는, 조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물 및 이의 제조방법을 제공하는 것이다.　　　　　　　　

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 조직배양한 삼 부정근 및 화장료 성분이 배합된 것을 특징으로 하는 조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 화장료 조성물은, 조성물 총중량에 대하여 0.1 내지 5 중량%의 조직배양한 삼 부정근과, 95 내지 99.9 중량%의 화장료 성분이 배합되어 조성되는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 삼은 산삼, 인삼 및 장뇌삼으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 화장료 성분은 용매, 체질안료, 무기안료, 유기안료, 무기분체, 유제, 화장료에 배합할 수 있는 계면활성제, 실리콘함유 계면활성제, 증점제, 안정 제, 방부제, 산화방지제 및 향료로 이루어지는 군으로부터 하나 이상 선택되어 조합된 것을 특징으로 하며, 이는 당업계의 통상적인 화장료 성분을 포함한다.

상기 조성물은, 조성물 총중량에 대하여 용매 성분으로 다가 알코올을 1 내지 5 중량% 사용하는 경우, 배합된 삼 부정근으로부터 보습 유용 성분을 침출시키는 것을 특징으로 한다.

상기 조성물은, 조성물 총중량에 대하여 용매 성분으로 다가 알코올을 5 내지 30 중량% 사용하는 경우, 배합된 삼 부정근으로부터 주름개선 유용 성분을 침출시키는 것을 특징으로 한다.

상기 조성물은, 조성물 총중량에 대하여 용매 성분으로 다가 알코올을 5 내지 30 중량% 및 에탄올을 1 내지 50 중량% 사용하는 경우, 배합된 삼 부정근으로부터 미백 유용 성분을 침출시키는 것을 특징으로 한다.

또한, 본 발명은 통상의 화장료 성분을 혼합하는 제1 단계; 및 상기 제1 단계의 화장료 성분 혼합물에 조직배양한 삼 부정근을 첨가하는 제2 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물의 제조 방법을 제공한다.

본 발명의 유용성분은 보습, 주름개선 또는 미백에 유효한 성분을 포함한다.

이하, 본 발명을 구체적으로 설명한다.

본 발명의 화장료 조성물은 통상의 화장료 성분을 혼합하는 제1 단계; 및 상기 제1 단계의 화장료 성분 혼합물에 50 내지 60 ℃에서 열풍건조시킨, 조직배양한 삼 부정근을 첨가하는 제2 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물의 제조방법에 의해 제조된다.

상기 제1 단계에서의 화장료 성분은 당업자가 통상적으로 수행하는 방법에 의해 혼합될 수 있다.

본 발명의 조직배양한 삼 부정근은 한국등록특허 제0353636호에 기재된 조직배양방법에 의해 수득하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 조성물 중 조직배양한 삼 부정근은 조성물 총중량에 대하여 0.1 내지 5 중량%로 포함되는 것이 바람직하다. 상기 삼 부정근의 함량이 0.1 중량% 미만이면 침출되는 유용기능성분의 함량이 부족하게 되고, 5 중량%를 초과하면 점도 등의 제품의 성상에 영향을 미칠 수 있고, 사용자에게 자극을 유발할 가능성이 있다.

본 발명의 조성물에 있어서, 조성물 총중량에 대하여 화장료 성분 중 용매 성분으로 다가 알코올, 바람직하게는 1,3-부틸렌글리콜을 1 내지 5 중량% 사용하는 경우, 배합된 삼 부정근으로부터 보습 유용 성분, 바람직하게는 당류(carbohydrate)를 침출시키는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 조성물에 있어서, 조성물 총중량에 대하여 화장료 성분 중 용매 성분으로 다가 알코올, 바람직하게는 1,3-부틸렌글리콜을 5 내지 30 중량% 사용하는 경우, 배합된 삼 부정근으로부터 주름개선 유용 성분, 바람직하게는 비타민, 사포닌(saponin)류를 침출시키는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 조성물에 있어서, 조성물 총중량에 대하여 화장료 성분 중 용매 성분으로 다가 알코올, 바람직하게는 1,3-부틸렌글리콜을 5 내지 30 중량% 및 탄소수 1 내지 4의 알코올, 바람직하게는 에탄올을 1 내지 50 중량% 사용하는 경우, 배합된 삼 부정근으로부터 미백 유용 성분, 바람직하게는 플라보노이드류를 침출시키는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 화장료 조성물은, 침출 30일 이후부터 조성물 내의 삼 부정근으로부터 침출된 유용 성분을 70% 이상 함유하는 것으로 측정되며, 숙성 후 180일까지 유용 성분의 함량 저하가 관찰되지 않아, 기능성 화장료 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 조직배양한 삼 부정근은, 조성물이 다양한 미생물등에 의해 오염되면, 삼 부정근의 색과 형상이 변화됨으로써 화장료의 사용 가능 여부 및 오염의 지표로 활용할 수 있으므로, 본 발명의 조성물을 안심하고 사용할 수 있다.

본 발명의 조직배양한 삼 부정근을 포함하는 화장료 조성물은 보습, 주름개선 또는 미백 효과를 위한 화장품, 세안제 및 샴푸 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를들어, 각종 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저 등이 있으며, 이로 한정되는 것은 아니다.

이하, 본 발명을 하기 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

참조예 . 조직배양한 산삼 부정근의 준비

본 발명에 사용된 조직배양한 산삼 부정근은 씨비엔 바이오텍(CBN biotech, 한국)으로부터 구매하여 사용하였다. 상기 산삼 부정근은 한국등록특허 제353636호에 기재된 방법으로 조직배양하고, 대량증식한 것으로, 사용 전에 50 내지 60 ℃ 에서 열풍건조하여 사용하였다.

실시예 1. 조직배양한 산삼 부정근 자체를 포함하는 보습용 에센스의 제조.

조직배양한 산삼 부정근 자체를 포함하는 보습용 에센스를 하기 표 1의 조성에 따라 제조하였다.

	성분명	함량(중량%)
A	1,3-부틸렌글리콜	1.0
	글리세린	1.0
	카보머	0.2
	글리세릴 메타크릴레이트	0.35
	파라벤	0.20
	정제수	100으로맞춤
B	수산화칼륨	0.06
C	PEG-6-하이드로 제네이티드 캐스터 오일	1.0
C	향료	적량
D	참조예 1의 산삼 부정근	2.0
	계	100.00

A를 충분히 분산, 습윤하여 균일한 겔(Gel)상이 되도록 하고, B를 첨가하여 중화하였다. (A+B)에 C를 첨가하여 균일교반하여 가용화시킨 후, D를 실온에서 첨가하여 균일하게 분포되도록 교반하고, 용기에 담아 제품화하였다. 상기 방법으로 제조한 에센스는 피부에 도포시 지속적으로 보습 효과를 유지하였다.

실시예 2. 조직배양한 산삼 부정근 자체를 포함하는 보습용 크림의 조성 및 제조.

조직배양한 산삼 부정근 자체를 포함하는 보습용 크림을 하기 표 2의 조성에 따라 제조하였다.

	성분명	함량(중량%)
A	1,3-부틸렌글리콜	1.0
	글리세린	1.0
	카보머	0.5
	글리세릴 메타크릴레이트	0.35
	파라벤	0.20
	정제수	100으로맞춤
B	수산화칼륨	0.15
C	PEG-6-하이드로 제네이티드 캐스터 오일	1.0
C	향료	적량
D	참조예 1의 산삼 부정근	2.0
	계	100.00

본 실시예 2의 크림은 상기 실시예 1의 제조방법과 동일한 과정을 통해 제조하였다. 상기 방법으로 제조한 크림은 피부에 도포시 지속적으로 보습 효과를 유지하였다.

실시예 3. 조직배양한 산삼 부정근 자체를 포함하는 주름개선용 에센스의 조성 및 제조.

조직배양한 산삼 부정근 자체를 포함하는 주름개선용 에센스를 하기 표 3의 조성에 따라 제조하였다.

	성분명	함량(중량%)
A	1,3-부틸렌글리콜	5.0
	글리세린	5.0
	카보머	0.2
	글리세릴 메타크릴레이트	0.35
	파라벤	0.20
	정제수	100으로맞춤
B	수산화칼륨	0.06
C	PEG-6-하이드로 제네이티드 캐스터 오일	1.0
C	향료	적량
D	참조예 1의 산삼 부정근	2.0
	계	100.00

본 실시예 3의 에센스는 상기 실시예 1의 제조방법과 동일한 과정을 통해 제조하였다. 상기 방법으로 제조한 에센스는 피부에 도포시 지속적인 주름개선효과를 유지하였다.

실시예 4. 조직배양한 산삼 부정근 자체를 포함하는 주름개선용 크림의 조성 및 제조.

조직배양한 산삼 부정근 자체를 포함하는 주름개선용 크림을 하기 표 4의 조성에 따라 제조하였다.

	성분명	함량(중량%)
A	1,3-부틸렌글리콜	5.0
	글리세린	5.0
	카보머	0.5
	글리세릴 메타크릴레이트	0.35
	파라벤	0.20
	정제수	100으로맞춤
B	수산화칼륨	0.15
C	PEG-6-하이드로 제네이티드 캐스터 오일	1.0
C	향료	적량
D	참조예 1의 산삼 부정근	2.0
	계	100.00

본 실시예 4의 크림은 상기 실시예 1의 제조방법과 동일한 과정을 통해 제조하였다. 상기 방법으로 제조한 크림은 피부에 도포시 지속적인 주름개선효과를 유지하였다.

실시예 5. 조직배양한 산삼 부정근 자체를 포함하는 미백용 에센스의 조성 및 제조.

조직배양한 산삼 부정근 자체를 포함하는 미백용 에센스를 하기 표 5의 조성에 따라 제조하였다.

	성분명	함량(중량%)
A	1,3-부틸렌글리콜	5.0
	글리세린	5.0
	에탄올	10.0
	카보머	0.2
	글리세릴 메타크릴레이트	0.35
	파라벤	0.20
	정제수	100으로맞춤
B	수산화칼륨	0.06
C	PEG-60-하이드로 제네이티드 캐스터 오일	1.0
C	향료	적량
D	참조예 1의 산삼 부정근	2.0
	계	100.00

본 실시예 5의 에센스은 상기 실시예 1의 제조방법과 동일한 과정을 통해 제조하였다. 상기 방법으로 제조한 에센스는 피부에 도포시 지속적인 미백 효과를 유지하였다.

실시예 6. 조직배양한 산삼 부정근 자체를 포함하는 미백용 크림의 조성 및 제조.

조직배양한 산삼 부정근 자체를 포함하는 미백용 크림을 하기 표 6의 조성에 따라 제조하였다.

	성분명	함량(중량%)
A	1,3-부틸렌글리콜	5.0
	글리세린	5.0
	에탄올	10.0
	카보머	0.5
	글리세릴 메타크릴레이트	0.35
	파라벤	0.20
	정제수	100으로맞춤
B	수산화칼륨	0.15
C	PEG-60 -하이드로 제네이티드 캐스터 오일	1.0
C	향료	적량
D	참조예 1의 산삼 부정근	2.0
	계	100.00

본 실시예 6의 크림은 상기 실시예 1의 제조방법과 동일한 과정을 통해 제조하였다. 상기 방법으로 제조한 크림은 피부에 도포시 지속적인 미백 효과를 유지하였다.

비교예 1 ~ 6. 조직배양한 산삼 부정근을 포함하지 않는 화장료의 제조.

조직배양한 산삼 부정근을 포함하지 않는 화장료를 상기 실시예 1 내지 6의 조성에서 참고예 1의 산삼 부정근을 제외한 조성에 따라 제조하였다.

시험예 1. 본 발명에 따른 화장료의 효능 조사 시험

1-1. 보습능 시험

본 발명에 따른 화장료의 보습 효과를 조사하기 위해 피부의 수분함량 측정을 실시하였다. 상기 실시예 1 및 2, 비교예 1 및 2의 제형에 따라 제조된 화장료 각각에 대하여 20~50세의 여성 20명을 대상으로 도포 전 및 후의 피부의 수분함량을 하기와 같이 측정하였다. 피부의 수분함량은 피부표면의 수분함량을 피부정전부하용량 계측법으로 측정하는 장비인 피부 수분량 측정기(Corneometer CM 825, Courage & Khazaka, Germany)를 이용하여 측정하였다. 시험 시작 1시간 전부터 실내에서 대기한 지원자의 상박부에 각각의 샘플을 2.0 ㎎/㎠ 의 농도로 균일하게 도포하고, 시료를 도포하지 않은 다른쪽 상박부를 대조군으로 하였다. 도포직전 및 도포직후의 피부수분함량을 측정하였으며, 이후, 1시간, 3시간, 5시간 경과시의 피부수분함량을 각각 측정하였다.

sample	Time(hr)	result
sample	Time(hr)	Corneometric value (도포부위)	Corneometric value (비도포부위)
비교예 1	0	80	79
	1	99	80
	3	95	81
	5	85	79
실시예 1 (제조30일경과)	0	81	81
	1	110	82
	3	106	80
	5	102	81
실시예 1 (제조60일경과)	0	83	75
	1	112	80
	3	105	78
	5	99	82
실시예 1 (제조90일경과)	0	82	79
	1	110	79
	3	104	81
	5	98	80
실시예 1 (제조120일경과)	0	85	82
	1	109	80
	3	100	79
	5	95	82
실시예 1 (제조150일경과)	0	83	81
	1	109	83
	3	101	80
	5	94	81
실시예 1 (제조180일경과)	0	87	79
	1	114	81
	3	108	82
	5	99	80

sample	Time(hr)	result
sample	Time(hr)	Corneometric value (도포부위)	Corneometric value (비도포부위)
비교예 2	0	88	80
	1	102	80
	3	95	78
	5	89	79
실시예 2 (제조 30일경과)	0	87	80
	1	116	79
	3	106	81
	5	93	82
실시예 2 (제조 60일경과)	0	84	79
	1	114	79
	3	103	80
	5	97	81
실시예 2 (제조 90일경과)	0	83	81
	1	114	80
	3	105	81
	5	94	80
실시예 2 (제조 120일경과)	0	85	79
	1	110	81
	3	99	80
	5	92	81
실시예 2 (제조 150일경과)	0	83	81
	1	113	79
	3	101	79
	5	92	82
실시예 2 (제조 180일경과)	0	84	82
	1	116	79
	3	102	80
	5	96	81

표 7 및 8에 나타난 바와 같이, 실시예 1 또는 2의 화장료를 도포한 부위의 피부수분함량은 비도포 부위의 피부수분함량과 확연한 차이를 나타내었으며, 제조 30일 이상이 경과된 실시예 1 또는 2의 화장료를 도포한 부위의 수분 함량은 비교예 1 또는 2의 화장료를 도포한 대조군의 수분 함량과 비교하여 뛰어났으며, 제조 180일이 경과된 실시예 1 또는 2의 화장료를 도포한 부위에서도 상기의 뛰어난 수분 함량을 유지하는 것을 확인할 수 있었다.

1-2. 콜라겐 생합성 촉진 시험

본 발명에 따른 화장료의 주름개선 효과를 조사하기 위해 섬유아세포를 이용한 콜라겐 생합성 촉진 시험을 실시하였다.

마우스 섬유아세포(3T3-L1, KCLB 10092.1, 한국세포주은행)는 10 %(v/v) 우태아혈청 (FBS; fetal bovine serum, BioWhittaker, MD, USA), 1%(v/v) 페니실린-스트렙토마이신 (penicillin-streptomycin, BioWhittaker, MD, USA)을 포함한 DMEM 배지(Dulbecco's Modified Eagle's Medium, Invitrogen, USA)를 이용하여, 37℃, 5 % CO₂ 조건하에서 배양한 후, 트립신을 처리하여 수득한 후, 24웰 세포배양접시에 1ⅹ10⁵ 세포수/㎖/웰이 되도록 분주하여 24시간 배양하고, 새로운 배지에 상기 실시예 3 및 4, 비교예 3 및 4의 제형에 따라 제조된 화장료를 0.01 %로 희석하여 세포에 처리하고 24시간 배양하여 하기 실험에 사용하였다. 상기 섬유아세포(fibroblast)에서 실제적으로 콜라겐의 합성이 증가되었음을 확인하기 위하여 배양한 세포의 배양상등액을 채취하여 콜라겐의 양을 정량하였다. 상세하게는, 배양상등액 100㎕에 dye reagent (피크릭산(picric acid) 100 ㎖에 Sirius red reagent(BDH, UK) 0.1g 녹여 제조) 1㎖을 첨가하고 30분간 실온에서 천천히 교반하며 반응시켰다. Sirius red는 음이온계 색소로서 콜라겐에 특이적으로 결합한다. 30분간 반응시킨 후 반응액을 5000 ×g 이상에서 20분간 원심분리하여 콜라겐-색소 결합체를 침전시켰다. 침전물에 0.5M NaOH를 가해 실온에서 5분 동안 용해시켰다. 상기 용액의 흡광도를 마이크로 웰 플레이트 리더를 이용하여 540nm에서 측정하여 하기 표 9 및 표 10에 나타내었으며, 이를 비시험군의 흡광도 값과 비교하여 콜라겐 생합성 촉진 효과를 평가하였다.

sample	콜라겐 합성율 (%)
비교예 3	101 %
실시예 3 (제조 30일경과)	108 %
실시예 3 (제조 60일경과)	110 %
실시예 3 (제조 90일경과)	118 %
실시예 3 (제조 120일경과)	121 %
실시예 3 (제조 150일경과)	118 %
실시예 3 (제조 180일경과)	118 %

sample	콜라겐 합성율 (%)
비교예 4	103 %
실시예 4 (제조 30일경과)	112 %
실시예 4 (제조 60일경과)	120 %
실시예 4 (제조 90일경과)	121 %
실시예 4 (제조 120일경과)	119 %
실시예 4 (제조 150일경과)	119 %
실시예 4 (제조 180일경과)	118 %

표 9 및 10에 나타난 바와 같이, 실시예 3 또는 4의 화장료를 처리한 섬유아세포의 콜라겐 합성율은 비교예 3 또는 4의 화장료를 처리한 대조군과 비교하여 확연한 차이를 나타내었으며, 제조 30일의 화장료 처리군부터 꾸준히 증가하여 제조 180일의 화장료 처리군까지 대조군 대비 약 1.2배의 콜라겐 합성율을 유지하는 것을 확인할 수 있었다.

1-3. 타이로시나제 활성 저해 시험

본 발명에 따른 화장료의 미백활성을 조사하기 위해 타이로시나제 활성 저해 시험을 실시하였다. 실험을 위해, 타이로시나제 효소액은 버섯 타이로시나제 (mushroom tyrosinase, T-3824, 1530U/㎎, Sigma)를 1000 U/㎖이 되도록 인산염 완충액(pH 6.5)으로 녹여 준비하였으며, 기질액은 L-타이로신(L-tyrosine, 45160-0410, Junsei chemical co. Ltd)을 1.5 mM이 되도록 인산염 완충액(pH 6.5)으로 녹여 준비하였다.

상기 실시예 5 및 6, 비교예 5 및 6의 제형에 따라 제조된 화장료를 각각 20 g 정제수에 첨가, 교반하여 총부피가 500 ㎖이 되도록 한 후, 1N 염산을 이용하여 pH 2.0으로 조정하였다. 상기 액을 분액깔대기에 취하고, 여기에 동량의 클로로포름을 넣어 세게 흔들어 섞고 방치한 후 수층을 분취하였다. 상기 조작을 2회 반복하여 수득한 수층을 60℃에서 감압농축한 후, 1N 수산화나트륨을 넣어 pH를 6.5로 조정하고, 정제수를 넣어 20 ㎖이 되도록 하였다. 상기 액을 여과하고, 여액 5 ㎖을 취하여 인산염 완충액(pH 6.5)를 넣어 10 ㎖로 하여 검액으로 하였다. 검액 170 ㎕, 타이로시나제 효소액 10 ㎕를 넣고 37 ℃에서 10분간 방치하였다. 여기에 기질액 20 ㎕를 넣은 다음 37 ℃에서 10분간 반응시킨 후, 바로 얼음중에 5분간 방치한 후 파장 490 nm에서 ELISA 리더(UV max kinetic microplate reader 01414, Molecular Devices, USA)를 이용하여 흡광도를 측정하였다. 상기에서 측정된 흡광도를 하기 수학식 1에 대입하여 타이로시나제 활성저해율을 계산하여 하기 표 11 및 표 12에 나타내었다. 검액 대신 인산염 완충액(pH 6.5)을 넣어 조작한 액을 공시험액으로, 기질액 대신 인산염 완충액(pH 6.5)을 넣어 조작한 액을 보정액으로 하였다.

A: 검액 반응 후의 흡광도

B: 공시험액의 반응 후의 흡광도

A': 검액의 보정액

B': 공시험액의 보정액

sample	타이로시나제 활성 저해율 (%)
비교예 5	23 %
실시예 5 (제조 30일경과)	46 %
실시예 5 (제조 60일경과)	54 %
실시예 5 (제조 90일경과)	55 %
실시예 5 (제조 120일경과)	63 %
실시예 5 (제조 150일경과)	65 %
실시예 5 (제조 180일경과)	63 %

sample	타이로시나제 활성 저해율 (%)
비교예 6	32 %
실시예 6 (제조 30일경과)	56 %
실시예 6 (제조 60일경과)	59 %
실시예 6 (제조 90일경과)	64 %
실시예 6 (제조 120일경과)	64 %
실시예 6 (제조 150일경과)	71 %
실시예 6 (제조 180일경과)	70 %

상기 표 11 및 표 12에 나타난 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 5 및 6의 화장료는 제조 후 30일 내지 180일간 숙성시, 산삼 부정근으로부터 미백 유효 성분이 지속적으로 침출되어 타이로시나제 활성 저해율이 높아지는 것을 확인할 수 있었으며, 이로써 미백 유효성분의 활성이 유지되는 것을 확인할 수 있었다.

시험예 2. 조직배양한 산삼 부정근을 포함하는 화장품에 대한 선호도 조사

상기 실시예 1 및 2의 제형과 비교제형(산삼 부정근 추출물을 함유하는 에센스 및 크림) 각각에 대하여 20-50세 여성 100명을 대상으로 비교품평을 실시하여 각 제형에 대한 선호도 결과를 도 2에 나타내었다.

도 2에 나타난 바와 같이, 산삼 부정근 자체가 화장품에 포함되어 있음을 시각적으로 인지할 수 있는 점에서, 여성 100명 중 84명이 산삼 부정근을 포함하는 제형을 산삼 부정근 추출물을 포함하는 제형에 비해 압도적으로 선호함을 알 수 있다.

상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명의 화장료 조성물은 조직배양한 삼 부정근으로부터 침출되어 나온 유용 성분 및 그 함량이 지속적으로 유지되고, 또한 사용자가 삼 부정근을 관능 인지함에 따라 사용자의 신뢰감과 사용 만족도가 향상되며, 상기 화장료 조성물의 제조방법은, 삼 부정근으로부터 유용 성분을 추출, 분리 및 정제하는 부가적인 과정이 없어 공정이 단순화되고 비용이 절감되며, 삼 부정근 자체로부터 유용성분이 침출되므로 유용성분이 소실되지 않는 장점이 있다.

Claims

조직배양한 삼 부정근 및 화장료 성분이 배합된 것을 특징으로 하는 조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 화장료 조성물은 조성물 총중량에 대하여 0.1 내지 5 중량%의 조직배양한 삼 부정근과, 95 내지 99.9 중량%의 화장료 성분이 배합되어 조성되는 것을 특징으로 하는 조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 삼은 산삼, 인삼 및 장뇌삼으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 화장료 성분은 용매, 체질안료, 무기안료, 유기안료, 무기분체, 유제, 화장료에 배합할 수 있는 계면활성제, 실리콘함유 계면활성제, 증점제, 안정제, 방부제, 산화방지제 및 향료로 이루어지는 군으로부터 하나 이상 선택되어 조합된 것을 특징으로 하는 조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 조성물 총중량에 대하여 용매 성분으로 1,3-부틸렌글리콜을 1 내지 5 중량% 사용하고, 보습 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 조성물 총중량에 대하여 용매 성분으로 1,3-부틸렌글리콜을 5 내지 30 중량% 사용하고, 주름개선 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물.
청구항 1에 있어서, 상기 조성물 총중량에 대하여 용매 성분으로 1,3-부틸렌글리콜을 5 내지 30 중량% 및 탄소수 1 내지 4의 알코올을 1 내지 50중량% 사용하고, 미백 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물.
통상의 화장료 성분을 혼합하는 제1 단계; 및 상기 제1 단계의 화장료 성분 혼합물에 조직배양한 삼 부정근 자체를 첨가하는 제2 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물의 제조 방법.
청구항 8에 있어서, 상기 화장료 조성물은 보습 효과, 미백 효과 또는 주름개선 효과를 나타내는 것을 특징으로 하는 조직배양한 삼 부정근 자체를 포함하는 화장료 조성물의 제조 방법.