KR101009766B1

KR101009766B1 - 하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101009766B1
Application number: KR1020080116048A
Authority: KR
Inventors: 홍은숙; 안기웅; 조병기
Original assignee: (주)더페이스샵
Priority date: 2008-11-21
Filing date: 2008-11-21
Publication date: 2011-01-20
Also published as: KR20100057157A

Abstract

본 발명은 하고초(Prunella vulgaris)추출물 및 개사철쑥(Artemisia abrotanum)추출물을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 상세하게는 하고초 추출물을 함유하여 엘라스틴 생합성 촉진효과, 엘라스테이즈 활성 저해효과가 있으며, 개사철쑥 추출물을 함유하여 지방세포의 분화 및 트리글리세라이드의 합성을 촉진시키고 지방축적의 주요한 효소인 G3PDH(Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase)를 활성화 시키는 효과가 우수한 주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 또한 하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물은 우수한 항산화 효과를 가지고 있다.

하고초, 개사철쑥, 주름개선, 피부노화방지, 화장료

Description

하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물{Cosmetic Composition containing the Extract of prunella vulgaris and Artemisia abrotanum for Improvement of Wrinkle}

화장품은 우리 일상 생활과 깊이 관련되어 있으며 많은 사람들이 사용하고 있다. 인류의 문명이 발달하기 전 화장의 목적은 자연으로부터 신체를 보호하는 것이었으나, 과학과 문명의 발달과 더불어 화장의 목적은 신체를 청결하게 하고 아름답게 하며, 또한 노화를 지연시켜 아름답고 쾌적한 생활을 하게 하는 것으로 바뀌 었다. 화장품의 기능은 청결과 미적 기능뿐만 아니라, 수분, 공해 물질과 스트레스, 자외선 등의 외적인 요인과 면역세포의 기능저하, 세포 활성의 저하 등의 내적 요인에 기인한 자유 라디칼(Free Radical), 활성산소, 과산화물 등에 의한 단백질, 핵산, 세포막 지질 파괴 등의 피부 노화의 원인을 제거하거나 억제하는 것이다. 또한, 소비자의 고기능 화장품에 대한 욕구를 충족시키기 위한 미백, 피부주름 개선 및 억제, 그리고 자외선 차단 기능을 갖는 화장품들이 계속해서 개발되고 있다. 그 중에서도 특히 주름 개선 및 억제 제품은 보다 젊음을 유지하려는 소비자의 많은 관심을 받는 대상이다.

주름살은 특정 방향으로 근육이 오랜 기간동안 반복하여 움직임으로써 형성되는데, 연령, 외부환경, 자외선 조사 등에 의해서 영향을 받는다. 이러한 인자에 의한 피부 세포의 손상은 여러 가지 노화 현상을 일으키는데 진피 매트릭스를 구성하는 콜라겐, 엘라스틴, GAGs 의 생성 및 분해가 원활히 일어나지 않음으로 인해 매트릭스의 견고성이 떨어져 피부의 탄력이 떨어지고 주름이 생성된다.

또한, 진피 아래에 피부를 지지해주는 피하지방층은 나이가 듦에 따라 지방의 생성이 줄어들어 두께가 얇아짐으로서 피부가 전반적으로 얇아지고 탄력이 떨어지며 주름생성에도 영향을 미치게 된다. 지지층으로서 큰 역할을 하는 피하지방층을 유지시키기 위해서는 지방세포를 활성화 시키고 지방생성을 촉진시키는 것이 필요하다.

현재, 주름개선 화장료로는 레티노이드, 아데노신, 동물태반유래 단백질, 클로렐라 추출물 등이 알려져 있다. 가장 잘 알려져 있는 레티놀은 콜라겐 합성을 촉 진하는 물질이지만 불안정하고 피부 적용시 자극, 발작등의 안전성 문제로 사용량의 제한이 있으며, 클로렐라 추출물 등은 효과가 미미하여 실질적으로 피부주름 개선효과를 기대하기가 어렵다고 알려져 있다.

전술한 문제점을 해결하기 위해 다양한 생약재 추출물을 연구한 결과, 본 발명의 목적은 하고초 추출물을 함유하여 엘라스틴 생합성 촉진효과, 엘라스테이즈 활성 저해효과가 있고, 개사철쑥 추출물을 함유하여 지방세포의 분화 및 트리글리세라이드의 합성을 촉진시키고 지방축적의 주요한 효소인 G3PDH를 활성화 시키는 효과를 나타낼 뿐만 아니라 항산화효과도 나타내는 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상술한 문제를 해결하기 위하여 본 발명에 따른 하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 다음과 같은 수단을 포함할 수 있다.

본 발명의 일실시예에 따른 주름 개선용 화장료 조성물은 하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물을 함유한다.

상기 하고초 추출물은 엘라스틴 합성 촉진 및 엘라스테이즈 활성 저해를 특징으로 한다.

또한, 상기 개사철쑥 추출물은 지방세포의 분화 및 트리글리세라이드의 합성을 촉진시키고 지방축적의 주요한 효소인 G3PDH의 활성화를 특징으로 한다.

한편, 상기 화장료 조성물은 항산화 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.

한편, 하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물의 함량은 화장료 조성물 총중량에 대해서 각각 0.005~20 중량％인 것을 특징으로 한다.

상기 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형으로 형성되는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 따른 하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 피부 주름개선에 효과가 있으며, 특히, 하고초 추출물을 함유하여 엘라스틴 생합성 촉진효과, 엘라스테이즈 활성 저해효과가 있으며, 개사철쑥 추출물을 함유하여 지방세포의 분화 및 트리글리세라이드의 합성을 촉진시키고 지방축적의 주요한 효소인 G3PDH를 활성화 시키는 효과가 우수하다. 또한 하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물은 항산화 효과 또한 갖고 있다. 이러한 하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물이 함유된 화장료 조성물은 주름개선 효과를 통한 피부노화방지용 화장료 조성물에 유용하다.

이하, 본 발명을 구체적으로 설명한다.

하고초는 꿀풀이라고도 불리며 꿀풀과의 여러해살이풀이다. 한국과 만주 등지에 자생하며, 다년생 초본으로 높이 20~30cm로 산야지 및 길가풀밭에서 자란다. 원줄기는 네모지고 전체에 백색털이 있고 꽃은 자주색으로 꽃이 밀착한다. 잎은 마주보며 장원형으로 가는 톱니가 있다. 꿀풀의 꽃이나 전초를 건조한 것을 한약으로 사용한다. 성분은 triterpenoid, oleanolic acid, ursolic acid, rutin, hyperoside, caffeic acid 등이 함유되어 있다. 민간에서는 강장, 고혈압, 자궁염, 월경불순, 이뇨, 안질, 갑상선종, 임질, 나력, 두창, 해열, 연주창, 한열왕래증 등에 쓰이고 방광하탈, 신장병, 적리, 건위, 히스테리, 폐병, 늑막염, 뇌염, 각기, 선암, 임파절종양 등 다양한 치료에 쓰인다. 또한 결핵간균, 이질간균, 포도상구균, 용혈성 연쇄상구균 등 병원미생물의 생장을 억제하는 효과도 있다. <동의보감>에 따르면 요로결석에 효과가 있고 간과 담의 화열을 제거하여 안질환이나 두통, 어지러움을 개선시켜준다. <동의학 사전>에서는 해독작용과 강압작용, 이뇨작용, 억균작용등이 있다고 나와있고 연주창, 영류, 유서선염, 두창, 옹종, 간화, 부종, 대하, 고혈압, 폐결핵, 유행성간엽 등에 쓸수 있다고 한다. 중국에서 펴낸 <중약대사전>에서는 나력, 영류, 급성 유선염, 유암, 안구의 동통, 현기증 등에 효과가 있다고 나타나있다. <전남본초>에서 구안와사, 타박상이나 칼 등에 베인 상처의 치료에 효과가 있다고 하였으며, <한국본초도감>은 결핵성림프선염, 종기, 신경성 고혈압 등에 효과가 뛰어나다고 나타나있다.

개사철쑥은 쌍떡잎식물 초롱꽃목 국화과의 두해살이풀로 갯사철쑥이라고도 한다. 냇가의 모래땅에서 자란다. 높이 40∼150cm이다. 전체에 털이 없고 냄새가 있다. 뿌리에 달린 잎은 뭉쳐나고 가늘게 갈라지며 조각은 줄 모양으로서 고르지 못하고 꽃이 필 때 없어진다. 위쪽 잎은 다시 갈라지며 그 조각은 실 모양이다. 줄기에 달린 잎은 어긋나고 긴 타원형이며 깃꼴로 깊게 갈라진다. 길이 9∼15cm, 나비 3.5∼5.5cm이며 깊이 패어 들어간 모양의 톱니가 있고 위쪽으로 올라갈수록 잎 크기가 작아진다. 꽃은 7∼9월에 초록빛을 띤 노란색으로 피는데 길이 3.5∼4cm, 지름 5∼6mm로서 가지와 줄기 끝에 총상꽃차례로 달리며 꽃대의 길이는 2∼6mm이다. 총포조각은 끝이 둥글고 3줄로 늘어선다. 바깥조각은 길이가 약간 짧고 가운데와 안조각은 같은 길이이다. 암꽃은 화관의 길이 약 1.5mm이고, 양성화는 약 1.8mm로 각각 모양이 다르다. 열매는 수과이며 털이 없고 길이 약 1mm이다. 어린 잎은 식용한다. 한방에서는 포기째 감기·결핵성염·학질·간염·담낭염·담도염·황달 등에 약재로 쓴다. 한국(제주·강원·경기·황해)·일본·중국 등지에 분포한다.

본 발명에 의한 하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물은 각각 또는 동시에 다음과 같이 제조할 수 있다.

하고초 및/또는 개사철쑥을 물로 깨끗이 세척한 후, 그늘에서 건조한다. 건조한 하고초, 개사철쑥을 추출용기에 넣고, 적당량의 추출 용매에 적절한 온도에서 일정 시간 추출한다. 상기 추출물은 여과되고, 진공회전증발기 등을 이용하여 농축될 수 있다.

상기 추출 용매로는 물(정제수), 탄소수 1 내지 4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합 용매로부터 선택된 극성용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 에탄올을 첨가하여 열수 추출하는 것을 특징으로 한다.

상기 추출 용매의 양은 생약 건조 중량의 2 ~ 10 배로 한다.

상기 추출 방법은 중탕 추출, 환류냉각 추출, 초음파 추출 등의 추출 방법을 사용할 수 있으며, 바람직하게는 중탕 추출의 추출방법으로 1회 내지 5회 추출될 수 있다.

상기 침적 온도는 30 ~ 70℃ 이며, 보다 바람직하게는 40 ~ 60℃이며, 가장 바람직하게는 50℃ 정도로 유지하는 것이 부패, 변색 및 변취의 예방에 가장 효과적이다.

상기 침적 시간은 5 ~ 20 시간이며, 바람직하게는 10 시간이다.

상기 하고초 추출물 및/또는 개사철쑥 추출물을 수득한 후, 거름종이 등을 이용하여 고형분을 제거하고, 현탁액을 원심분리 시키고, 상층액을 감압 여과할 수 있다.

상기 여과된 추출물을 진공회전농축기로 20 ~ 100℃, 바람직하게는 50 ~ 70℃에서 감압농축할 수 있다.

본 발명에 이용되는 하고초 추출물은 주름개선 효과가 우수하고, 엘라스틴 생성을 촉진하고, 엘라스테이즈 활성을 억제하고, 피부 상태 개선의 용도를 나타내고, 세포증식 촉진 효과에 의해 피부의 주름을 개선하며 제형내의 안정성이 우수하다. 또한 개사철쑥 추출물을 함유하여 지방세포의 분화 및 트리글리세라이드의 합성을 촉진시키고 지방축적의 주요한 효소인 G3PDH를 활성화 시키는 효과가 있다. 이와 같은 사실은 하기의 실시예에 명시되어 있다.

본 발명의 조성물에서 상기 하고초 추출물과 개사철쑥 추출물은 화장료 조성물 총 중량에 대하여 각각 0.005 ~ 20 중량% 함유될 수 있다.

본 발명의 조성물은 상기 하고초 추출물과 개사철쑥 추출물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

본 발명의 하고초 추출물과 개사철쑥 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장 료 조성물로 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 본 발명의 하고초 추출물과 개사철쑥 추출물을 함유하는 화장품 이외에도 피부 과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소 적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱(conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 하고초 추출물과 개사철쑥 추출물에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 수렴화장수, 유연화장수, 영양화장수, 각종 크림, 에센스, 팩, 파운데이션 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형을 포함한다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 이에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[제조예 1]하고초 추출물의 제조

하고초 50 g을 파쇄기에 곱게 파쇄하여 100% 에탄올 200ml에 침지시켜 50℃ 수욕조에서 10시간 동안 온탕하였다. 얻어진 추출액을 실온으로 냉각시키고 거름종이로 여과하여 여과액을 취하였다. 질소를 사용하여 여과액에서 에탄올을 증발시켜 농축한 다음, 이를 10% 에탄올에 0.01~20중량%로 녹여 추출물을 제조하였다.

[제조예 2]개사철쑥 추출물의 제조

개사철쑥 50 g을 파쇄기에 곱게 파쇄하여 100% 에탄올 200ml에 침지시켜 50 ℃ 수욕조에서 10시간 동안 온탕하였다. 얻어진 추출액을 실온으로 냉각시키고 거름종이로 여과하여 여과액을 취하였다. 질소를 사용하여 여과액에서 에탄올을 증발시켜 농축한 다음, 이를 10% 에탄올에 0.01~20중량%로 녹여 추출물을 제조하였다.

[실험예 1]세포증식효과

하고초 추출물과 개사철쑥 추출물의 피부 세포(skin cell) 증식효과를 보기위해 인체 정상 섬유아세포(Fibroblast)를 96-웰 마이크로 플레이트(96-well microplate)의 각 웰(Well)에 1X10⁴ 세포가 되도록 접종하여 디엠이엠(DMEM : Dulbecco's Modified Eagle's Medium)배지에서 24시간 배양한다. 배양후 상기에서 제조한 제조예 1, 2의 추출물을 최종 농도 50 ~ 500㎍/㎖ 되도록 조정한 혈청이 없는 디엠이엠 배지로 교체한 후 24시간 더 배양한다. 배양 후 MTT(3-(4,5-디메틸씨아졸-2-일)-2,5-디페닐테트라졸리움, 3-(4,5-dimethyl-thiazol-2-yl)2,5-diphenyl tetrazolium: 5㎎/㎖) 용액 10㎕을 첨가하여 4시간 방치 후 반응액을 제거한다. 각 웰당 100㎕의 디메틸 설폭사이드용액을 가하여 염색된 세포를 용해시킨 후 마이크로 플레이트 리더로 570㎚ 에서의 흡광도를 측정하였다.

상기 과정을 실시하여 하기 수학식 1로부터 세포증식효과를 구해 그 결과를 표 1 에 나타내었다.

세포증식효과(%) = {(추출물처리시의 흡광도-대조군의 흡광도)/대조군의 흡광도} X 100

	세포증식효과(%)
시료(㎍/㎖)	하고초 추출물	개사철쑥 추출물
대조군	-	-
50	38.2	0.2
100	51.9	1.3
200	70.5	5.7
300	75.8	10.4
500	83.7	15.6

상기 표 1에 의하면, 하고초 추출물은 세포증식효과가 뛰어나 피부 주름 개선에 효과가 있음을 확인할 수 있다.

[실험예 2] 엘라스틴 합성효과

10⁵ 개의 신생아 피부로부터 분리된 인체 정상 섬유아세포를 6-웰 플레이트에서 24 시간 배양한후, 제조예 1, 2의 추출물 시료를 50 ~ 500㎍/㎖로 처리하였다. 24∼48 시간 배양한후, 섬유아세포가 새롭게 합성 분비한 엘라스틴의 양을 상업적으로 입수가능한 엘라스틴 키트(Fastin™ elastin assay kit)를 이용하여 측정하였다. 그 엘라스틴량을 세포수 또는 단백질량으로 보정하였다. 그 결과를 표 2에 나타내었다.

	엘라스틴 합성증가(%)
시료(㎍/㎖)	하고초 추출물	개사철쑥 추출물
대조군	-	-
50	18.9	0.4
100	34.2	0.7
200	65.2	2.4
300	79.8	5.9
500	85.4	10.4

상기 표 2에 의하면, 하고초 추출물이 엘라스틴 합성 증가에 우수한 효과를 보이고 있어 이를 통한 피부 주름개선 효과가 있음을 확인할 수 있다.

[실험예 3] 엘라스테이즈 활성저해 효과

엘라스틴을 분해하는 효소인 엘라스테이즈가 활성을 나타내는 경우, 탄성 섬유인 엘라스틴이 분해되어 피부 주름 형성이 가속화된다. 따라서, 본 실험예에서는 제조예 1, 2의 추출물의 엘라스테이즈 억제율을 측정하였다. 엘라스테이즈의 기질인 N-석시닐-(알라닌)-3-p-니트로아닐라이드가 분해되면 p-니트로아닐린이 되는데, 이것은 노란색을 띈다. 이 발색정도를 분광분석기를 이용하여 흡광도로 측정하여, 엘라스테이즈 활성 억제율을 평가하였다(The synthesis and analytical use of a high sensitive and convenient substrate of elastase, Biochemical Medicine 11, 350-357, 1974). 엘라스테이즈의 활성 억제율의 계산방법은 아래의 수학식 2와 같으며, 세부적인 방법은 위 문헌에 기재된 바와 같다. 그 결과는 표 3에 나타내었다.

엘라스테이즈 활성 저해율(%) = (1-B/A) × 100

A: 억제제 부재하의 OD 400

B: 억제제 존재하의 OD 400

	엘라스테이즈 합성저해효과(%)
시료(㎍/㎖)	하고초 추출물	개사철쑥 추출물
대조군	-	-
50	10.3	1.4
100	22.6	2.6
200	40.2	4.1
300	62.5	13.5
500	70.5	21.6

상기 표 3에 의하면, 하고초 추출물은 엘라스테이즈 합성 저해 효과가 우수하여 이를 통해서 피부 주름 개선 효과가 있음을 확인할 수 있다.

[실험예 4]항산화 효과

항산화 효능을 확인하기 위하여, 자유 라디칼인 1,1-디페닐-2-피크릴히드라질(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl; 이하 DPPH)을 이용하였다. DPPH는 2 ×10-4 M 농도가 되도록 에탄올에 용해시켜 사용하였다. DPPH 0.15 ㎖, 제조예 1, 2의 추출물 시료(1000 ppm-30 ppm) 또는 비타민 C(1000 ppm-30 ppm)를 각각 0.15 ㎖ 첨가하여 30분간 실온에서 반응시킨 후, 570 nm에서 흡광도를 측정하였다. DPPH 소거 효과는, 하기와 같은 수학식 3을 이용하여 계산된 DPPH 라디칼 소거활성 값이 50 % 이상인 시료에 대해서 IC₅₀(50 % Inhibitory activity)를 비교하였다.

DPPH 라디칼 소거활성 (%) = ((A control-B control) - (A sample-B sample)) / (A control -B control) × 100

A control : 시료를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도

A sample : 시료를 첨가한 반응군의 흡광도

B control : DPPH를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도

B sample : DPPH를 첨가하지 않은 반응군의 흡광도

그 결과, 하기 표 4에는 하고초 추출물과 개사철쑥 추출물, 비타민 C(Roche사, Switzerland)의 DPPH를 이용한 자유라디칼의 소거 효과를 측정한 것을 나타내었다.

시료(㎍/㎖)	SC₅₀
비타민C	84.7ppm
하고초 추출물	0.89%
개사철쑥 추출물	1.32%

상기 표 4에 의하면, 하고초 추출물과 개사철쑥 추출물은 항산화 효과를 갖고 있음을 확인하였다.

[실험예 5]지방세포 분화촉진 효과

하고초 추출물과 개사철쑥 추출물의 지방세포 분화촉진 효과를 확인하고자 분화전 단계의 지방세포 (3T3 F442A cell)에 하고초 추출물과 개사철쑥 추출물을 0.125, 0.25, 0.5%의 농도로 6일간 처리하였다. 배지를 제거한 후 PBS로 세척하고, 지방산을 선택적으로 염색시키는 Oil red O 시약을 이용하여 세포내 지방성분을 염색하였다.

	지방세포 분화촉진효과(%)
시료(%)	하고초 추출물	개사철쑥 추출물
0.125	0.2	15
0.25	0.3	45
0.5	1.2	96

위 표 5에 나타난 바와같이 시료를 처리하지 않은 대조구의 경우 지방세포의 분화가 일어나지 않아 생성된 지방량이 5%정도로 미미한 반면, 개사철쑥 추출물을 처리한 세포의 경우 지방 세포로의 분화가 농도 의존적으로 일어난 것을 확인 할수 있었다.

[실험예 6]PPAR-r mRNA 발현 촉진효과

하고초 추출물과 개사철쑥 추출물이 지방조직 생성과 지방저장에 중요한 역할을 하는 PPAR-r(Peroxisome proliferator activated receptor- r )의 mRNA 발현 촉진에 미치는 영향을 확인하고자 하였다. 분화전 단계의 지방세포 (3T3 F442A cell)에 개사철쑥 추출물을 0.125, 0.25, 0.5%의 농도로 6일간 처리하였다. 배지를 제거한 후 PBS로 세척하고, trypsin-EDTA로 세포를 회수한 후, 세포내 mRNA를 추출하였다. quantitative PCR을 통하여 PPAR-r mRNA 발현양을 정량하였다.

	PPAR-r mRNA 발현 촉진효과(%)
시료(%)	하고초 추출물	개사철쑥 추출물
0.125	-	33
0.25	-	54
0.5	-	76

위 표 6에 나타난 바와같이 처리한 개사철쑥의 농도에 비례하여 PPAR-r mRNA 발현양이 증가하는 것을 확인하였다.

[실험예 7]트리글리세라이드 생성촉진 효과

하고초 추출물과 개사철쑥 추출물의 지방(triglyceride)의 생성촉진 효과를 확인하고자 분화전 단계의 지방세포 (3T3 F442A cell)에 개사철쑥 추출물을 0.125, 0.25, 0.5%의 농도로 6일간 처리하였다. 배지를 제거한 후 PBS로 세척하고, trypsin-EDTA를 이용하여 세포를 회수하였다. 세포를 파쇄하여 세포내 트리글리세라이드를 추출한 뒤 트리글리세라이드 측정 kit을 이용하여 정량하였다.

	트리글리세라이드 생성 촉진효과(%)
시료(%)	하고초 추출물	개사철쑥 추출물
0.125	0.1	24
0.25	0.5	50
0.5	1.6	68

위 표 7에 나타난 바와 같이 개사철쑥 추출물을 적용하였을 때 트리글리세라이드 생성량이 증가한 것을 알수 있었다.

[실험예 8]G3PDH mRNA 발현 촉진효과

하고초 추출물과 개사철쑥 추출물이 트리글리세라이드 저장에 중요한 역할을 하는 G3PDH의 mRNA 발현 촉진에 미치는 영향을 확인하고자 하였다. 분화전 단계의 지방세포 (3T3 F442A cell)에 개사철쑥 추출물을 0.125, 0.25, 0.5%의 농도로 6일간 처리하였다. 배지를 제거한 후 PBS로 세척하고, trypsin-EDTA로 세포를 회수한 후, 세포내 mRNA를 추출하였다. quantitative PCR을 통하여 G3PDH mRNA 발현양을 정량하였다.

	G3PDH mRNA 발현 촉진효과(%)
시료(%)	하고초 추출물	개사철쑥 추출물
0.125	-	9
0.25	-	15
0.5	-	25

위 표8에 나타난 바와같이 처리한 개사철쑥의 농도에 비례하여 G3PDH mRNA 발현양이 증가하는 것을 확인하였다.

[제조예 3] 실시예 및 비교예

제조예 1의 하고초 추출물과 제조예 2의 개사철쑥 추출물을 함유하는 화장료를 제조하고, 이와 비교하기 위하여 하고초 추출물과 개사철쑥 추출물이 결여된 화장료 조성물을 하기 표 9의 조성비로 제조하였다.

구분	함량(중량%)
성분	실시예1	실시예2	실시예3	비교예
하고초 추출물	0.5	1.0	-	-
개사철쑥 추출물	0.5	-	1.0	-
부틸렌글리콜	2.0	2.0	2.0	2.0
프로필렌글리콜	6.0	6.0	6.0	6.0
카르복시비닐폴리머	0.5	0.5	0.5	0.5
밀납	2.0	2.0	2.0	2.0
바셀린	7.0	7.0	7.0	7.0
폴리솔베이트 60	2.0	2.0	2.0	2.0
솔비탄세스퀴올레이트	2.5	2.5	2.5	2.5
스쿠알란	3.0	3.0	3.0	3.0
유동파라핀	10.0	10.0	10.0	10.0
트리에탄올아민	0.5	0.5	0.5	0.5
토코페릴아세테이트	0.1	0.1	0.1	0.1
향료, 방부제	미량	미량	미량	미량
정제수	잔량	잔량	잔량	잔량
합계	100	100	100	100

[실험예 5]외부 주름 개선 임상효과

본 발명의 하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물을 함유하는 화장료에 대한 피부주름개선 임상효과를 측정하였다. 40세 이상의 여성 40명 (평균연령 46.7세)을 4그룹(A, B, C 및 D)으로 나누어 A그룹을 대상으로 실시예1, B그룹 대상으로 실시예2, C그룹 대상으로 실시예3, D그룹 대상으로 비교예를 각각 주름이 있는 눈가를 중심으로 12주간 도포(2회/일, 0.2g/회) 한 후, 미세주름측정기인 스킨 비지오메터(Skin Visiometer SV 600 FireWire, CK Electronic GmbH)와 탄력측정기인 큐토메터(Cutometer MPA 580, CK Electronic GmbH)를 이용하여 피부의 주름개선 효과와 탄력성을 측정하였으며, 그 결과를 표 10에 나타내었다.

구분		주름개선효과		탄력효과
구분		주름의 평균깊이(%)	거칠기평균(%)	피부흡착도(%)
실시예1	T0	100.0	100.0	100.0
실시예1	T12	69.4	60.4	56.1
실시예2	T0	100.0	100.0	100.0
실시예2	T12	75.5	62.4	66.5
실시예3	T0	100.0	100.0	100.0
실시예3	T12	82.9	63.7	59.4
비교예	T0	100.0	100.0	100.0
비교예	T12	99.1	96.4	97.5

상기 표 10에서 주름의 평균깊이는 주름을 측정하고자 하는 부위에 실리콘고무를 이용하여 만든 표본을 5등분하고 각각 5군데에서 주름 높이의 최고점과 최저점의 차이에 대한 평균값을 나타낸다. 거칠기 평균은 표본에서 전체 주름깊이의 평균값에서 개개 측정부위(전체를 255개의 측정부위 점으로 나눔)에서의 주름깊이 차이에 대한 평균값을 나타낸다. 주름의 평균깊이와 거칠기 평균의 수치는 낮게 나타날수록 주름이 작게 형성되는 것으로서 피부 노화도가 작은 것을 의미하게 되어 바람직하다.

상기 표 10에 나타난 결과로부터, 실시예1, 2, 3의 적용전/후의 상대적인 수치 계산을 통해 살펴보면, 주름의 평균깊이 값에서 적용전을 100%으로 보았을때 주름의 평균깊이와 거칠기 평균이 실시예1에서 가장 우수한 개선효과를 보였고 실시예2와 3이 그 다음으로 나타났다. 따라서, 본 발명에 의한 하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물 함유 화장료는 피부의 주름개선에 상당한 효과를 발휘하고 있음을 알 수 있다.

또한, 상기 표 10에서 피부흡착도는 큐토미터 측정기기내로 피부가 흡착된 길이(penetration depth of the skin into the aperture)를 나타내는 것으로서 흡착정도를 나타내며, 그 수치가 작을수록 바람직하다. 적용전을 100%로 보았을때 상기예1, 2, 3 적용후 흡착정도가 줄어듦으로서 피부의 탄력도가 상당한 정도로 개선되었음을 확인할 수 있다.

결과적으로 상기 표 10에 나타난 결과를 통해 확인할 수 있는 사실은 본 발명에 따른 하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물을 함유하는 화장료는 피부주름개선효과와 탄력효과를 증진시키는 것으로서, 피부노화방지의 우수한 효과를 발휘하고 있음을 알 수 있다.

앞선 실험예의 결과를 근거로 하여 본 발명의 하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 조성하여 제시한다. 그러나 본 발명의 조성물을 하기의 제형예들로 한정하고자 하는 것은 아니다.

[제형예 1]유연 화장수

하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물을 함유한 유연 화장수의 제형예는 다음 표 11의 조성과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량%)
하고초 추출물	1.00
개사철쑥 추출물	1.00
1,3-부틸렌글리콜	1.00
디소듐이디티에이	0.05
알란토인	0.10
디포타슘글리시리제이트	0.05
시트릭애씨드	0.01
소듐시트레이트	0.02
글리세레스-26	1.00
알부틴	2.00
하이드로제네이티드캐스터오일	1.00
에탄올	30.00
보존제	미량
착색제	미량
착향제	미량
정제수	잔량

[제형예 2]영양 크림

하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물을 함유한 영양크림의 제형예는 다음 표 12의 조성과 같이 제조하였다.

원료	함량(중량%)
하고초 추출물	2.0
개사철쑥 추출물	2.0
1,3-부틸렌 글리콜	7.0
글리세린	1.0
D-판테놀	0.1
식물 추출물	3.2
마그네슘알루미늄실리케이트	0.3
PEG-40 스테아레이트	1.2
스테아릭애씨드	2.0
폴리소르베이트 60	1.5
친유형글리세릴스테아레이트	2.0
소르비탄세스퀴올리에이트	1.5
세테아릴알코올	3.0
미네랄오일	4.0
스쿠알란	3.8
카르릴릭/카프릭트리글리세라이드	2.8
식물성 오일	1.8
디메치콘	0.4
디포타슘글리시리제이트	미량
알란토인	미량
소듐 히아루로네이트	미량
토코페릴아세테이트	적량
트리에탄올아민	적량
보존제	적량
착향제	적량
정제수	잔량

Claims

하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물을 함유하는 주름개선용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 하고초 추출물은 엘라스틴 합성 촉진 및 엘라스테이즈 활성 저해를 특징으로 하는 주름개선용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 개사철쑥 추출물은 지방세포의 분화 및 트리글리세라이드의 합성을 촉진시키고 지방축적의 주요한 효소인 G3PDH의 활성화를 특징으로 하는 주름개선용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 항산화 효과를 갖는 것을 특징으로 하는 주름개선용 화장료 조성물.
제 1항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 하고초 추출물 및 개사철쑥 추출물의 함량은 화장료 조성물 총중량에 대해서 각각 0.005~20 중량%인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더 및 아이섀도로 구성된 그룹에서 선택된 어느 하나의 제형으로 형성되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.