KR20070008270A

KR20070008270A - 나노리포좀으로 안정화된 감초, 황백, 백하수오 및 상백피추출물을 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물

Info

Publication number: KR20070008270A
Application number: KR1020050063368A
Authority: KR
Inventors: 박영재; 이정노; 정지헌; 조병기
Original assignee: 주식회사 코리아나화장품
Priority date: 2005-07-13
Filing date: 2005-07-13
Publication date: 2007-01-17
Also published as: KR100803925B1

Abstract

본 발명은 생약 추출물을 안정화한 나노리포좀을 포함하는 피부 피부노화 방지용 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 감초, 황백, 백하수오, 상백피 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 추출물을 안정화한 나노리포좀에 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화장료 조성물은 섬유아세포의 증식 촉진, 항산화 효과, 콜라겐 합성의 촉진에 의한 피부 주름 개선과 피부 탄력 개선, 보습력 향상을 통하여 피부 노화를 방지한다. 더욱이, 본 발명의 화장료 조성물에서, 생약 추출물은 나노리포좀에 의해 내포되어 있기 때문에 피부침투 효과가 크게 증가하고, 제형의 안정성도 크게 개선된다.

감초, 황백, 백하수오, 상백피, 화장료, 나노리포좀

Description

나노리포좀으로 안정화된 감초, 황백, 백하수오 및 상백피 추출물을 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물{Cosmetic Composition for Preventing Skin Aging Comprising Radix glycyrrhizae, Phellodendri Cortex, Radix Cynanchi Wilfordii and Cortex mori Extract Stabilized in Nanoliposome}

본 발명은 화장료 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 감초, 황백, 백하수오, 상백피 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 추출물의 유효 성분을 나노리포좀으로 안정화시킨 피부노화 방지용 화장료 조성물에 관한 것이다.

건강한 피부는 피부세포의 생리활성이 활발하여 진피 (dermis)에 있는 섬유아세포 (fibroblast)에서 피부 탄력 증진 및 주름형성을 억제하는데 중요한 역할을 하는 콜라겐 (collagen)의 합성 및 피부수분유지에 필수적인 히아루론산 (hyaluronic acid)을 포함한 당단백질류인 GAGS (glycos aminoglycans)의 합성이 활발하여 피부에 탄력성, 부드러움, 유연성 및 보습성이 부여된다. 또한, 표피 (epidermis)에서는 기저세포 (basal layer cell)의 증식 (proliferation)이 활발하 고, 피부세포간의 결합을 강화시키는 라미닌, 인테그린 및 데스모좀과 같은 결합단백질 (adhesion protein)의 생성이 균형적으로 이루어져 피부 세포조직을 강화시켜 건강한 피부를 유지해 준다.

그러나, 현대인의 피부는 외부의 각종 유해 환경 및 스트레스에 노출되어 다양한 손상을 받고 있으며, 나이가 들면서 피부의 생리활성이 저하되고 손상된 피부의 회복속도가 느려지면서 피부는 탄력저하, 건조, 주름형성 및 칙칙함 등의 다양한 피부노화 현상을 맞게 된다.

노화에 따른 피부의 생리적 변화로는 피부의 구성 성분인 표피, 진피 및 피하조직의 두께가 얇아지고, 피부장벽의 기능을 맡고 있는 지질 장벽 (lipid barrier)의 지질 조성과 함량이 변화되면서 그 기능이 급격하게 저하되어 피부의 수분함량이 떨어지며, 피부가 건조해지고 기미, 주근께 및 색소침착이 나타나는 등 다양한 변화가 있을 수 있다. 뿐만 아니라, 최근에는 자외선량의 증가와 대기 오염 및 현대인의 과도한 피로와 스트레스 등으로 인해 생성되는 반응성이 높은 활성산소 및 자유라디칼이 생체성분 (단백질, 핵산, 세포막 지질 등)을 산화시키거나 변성시킴으로써 피부노화를 일으키는 주원인으로 대두되면서 자유라디칼에 대한 관심이 높아졌다. 생체가 호흡하는 과정에서 산소의 환원이나, 자외선조사, 식균작용 등으로 인해 발생하는 자유라디칼 (free radical)에 의한 손상은 인체 내에서 광범위하게 발생하며 노화 발생기작중 중요한 이론으로 인식되고 있다. 피부노화에 관여하는 라디칼로는 히드록실 라디칼 (Hydroxyl radical), 슈퍼옥사이드 라디칼 (superoxide radical), 활성산소 (singlet oxygen), 과산화수소 (hydrogen peroxide: H₂O₂) 등이 있다.

본 발명자들은 피부에 유해한 유기 자유 라디칼을 잘 소거하여 피부노화를 억제할 수 있으며, 피부 탄력 증진 및 주름형성을 억제하는데 중요한 역할을 하는 콜라겐(Collagen)의 합성의 증진을 줄 수 있는 화장료를 제공하고자 연구한 결과, 감초, 황백, 백하수오, 상백피 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 추출물을 나노리포좀으로 안정화시켜 피부노화 방지용 화장물로 상기한 목적을 달성할 수 있음을 발견하였다.

최근에는 천연으로부터 얻어지는 성분들이 화장품에 사용하는 사례가 늘고 있는데, 이는 천연 식물성분들로서 피부 친화적이며 친환경적이어서 많은 연구기관에서 연구가 활발히 진행되고 있다. 하지만 대부분의 생약 성분들은 그 자체가 불안정할 뿐만 아니라 화장료에 적용시 화장료의 안정성에 큰 문제점을 가지고 있다.

따라서, 이러한 문제점을 해결하고자 제약뿐만 아니라, 화장품 및 식품 등에서 생리활성 성분이 파괴되지 않고 안정하게 전달될 수 있으며, 생리활성 성분이 지용성이든 수용성이든 모두 내포시킬 수 있는 나노리포좀을 이용하고 있다. 최근에는 나노 기술의 발달과 함께 피부 침투 효과를 극대화 할 수 있는 나노리포좀에 대한 연구 개발도 활발히 진행되고 있다.

본 발명자들은 생약재를 이용한 피부 노화 방지, 즉 피부 보호용 화장료 조성물을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 감초, 황백, 백하수오 및 상백피추출물이 우수한 섬유아세포의 증식, 항산화, 및 콜라겐 합성 효과를 갖고 있다는 것을 발견하였다. 또한, 이들 활성 성분들이 화장료 조성물 내에서 안정하게 유지하고자 상기 추출물을 나노리포좀에 안정화한 제형과 우수한 피부 침투력 향상을 개발하여 피부노화 방지용 화장료 조성물을 완성하였다.

따라서, 본 발명의 목적은 생약 추출물을 안정화한 나노리포좀을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 양태에 따르면, 본 발명은 감초, 황백, 백하수오, 상백피 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 추출물을 안정화한 나노리포좀을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 화장료을 제공한다.

본 발명자들은 피부에 대하여 부작용을 나타내는 종래의 피부 노화 방지용 화장료 조성물의 문제점을 개선하고자, 천연추출물에 대한 연구를 지속적으로 수행하였다. 그 결과 감초, 황백, 백하수오 및 상백피추출물이 피부에 탄력을 부여하는 성분인 콜라겐 합성을 촉진시키고, 콜라겐 합성이 주로 이루어지는 섬유아세포의 증식을 촉진하며, 항산화 효과와 더불어 피부의 보습력을 증강시키면서도 피부 자극 부작용이 거의 없다는 것을 확인하였다.

더욱이, 상술한 생약 추출물을 나노리포좀에 내포(Encapsulation)시킨 경우, 피부 보습력, 피부 탄력이 개선되고, 피부 침투 효과가 크게 증가할 뿐만 아니라, 제형의 안정성도 매우 개선됨을 발견하였다.

감초 (Radix glycyrrhizae)는 콩과 식물인 감초의 뿌리, 잎을 말린 것으로 항염 및 항알러지 작용으로 피부 면역력을 강화시키는 작용을 한다.

또한, 황백 (Phellodendri Cortex)은 운향과 (Rutaceae) 식물인 황백의 수피로서 성질은 차며 맛이 쓰고 독이 없다. 오장과 장위 속에 몰린 열과 황달, 장치 등을 주로 없앤다. 설사와 이질, 적백대하, 음식창을 낫게 하고 감충을 죽이며 옴과 버짐, 눈에 열이 있어 피지 아픈 것, 입안이 헌 것 등을 낫게하며 골증노열을 없앤다. 또한, 후라보노이드, 알칼로이드 등을 함유하므로 자외선 차단 효과와 피부에서 향균, 항염증 및 항바이러스 효과가 우수하다.

또한, 백하수오 (Radix Cynanchi Wilfordii)는 마디풀과 식물인 하수오의 괴근을 말린 것으로 피부세포를 활성화하여 피부를 투명하고 건강하게 해주며, 유효성분의 피부침투를 원활하게 해주는 기능이 있다.

또한, 상백피 (Cortex mori)는 뽕나무 식물인 뽕나무 근피를 말린 것으로 미백효과가 우수하며, 가벼운 진해작용과 이뇨작용이 나타나고, 달임물은 혈압강하작용을 보인다. 또한, 진정, 진통, 체온강하, 진경작용을 보이고, 황색포도상구균, 인플루엔자균, 이질균의 발육을 억제하는 작용을 보인다.

본 발명의 생약 추출물은 당업계에 공지된 다양한 추출 방법을 이용하여 수득할 수 있으며, 바람직하게는, (a) 물, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알 코올 (메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올 등), (c) 상기 저급 알코올과 물과의 혼합용매, (d) 아세톤, (e) 에틸 아세테이트, (f) 클로로포름 또는 (g) 1,3-부틸렌글리콜을 추출 용매로 하여 수득할 수 있다.

한편, 본 발명의 추출물은 상기한 추출 용매뿐만 아니라, 다른 추출 용매를 이용하여도 실질적으로 동일한 효과를 나타내는 생약 추출물이 얻어질 수 있다는 것은 당업자에게 자명한 것이다.

또한, 본 발명의 추출물은 상술한 추출 용매에 의한 추출물뿐만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 생약 출물에 포함되는 것이다.

본 발명의 생약 추출물은 감압 증류 및 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.

본 명세서에서, 용어 "나노리포좀"은 통상적인 리포좀의 형태를 갖는 것으로서 평균 입자 지름이 1-100 ㎚인 리포좀을 의미한다. 본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 나노리포좀의 평균 입자 지름은 30-70 ㎚이다. 상기 나노리포좀의 평균 입자 지름이 70 ㎚를 초과하는 경우에는 본 발명에서 달성하고자 하는 기술적 효과 중 피부침투의 개선 및 제형 안정성의 개선이 매우 미약하다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 생약 추출물은 나노리포좀 총 중 량에 대하여 0.01-40 중량% 함유되고, 보다 바람직하게는 0.1-20 중량% 함유되며, 가장 바람직하게는 4-14 중량% 함유된다.

본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기 나노리포좀은 화장료 총 중량에 대하여 0.0001-20 중량% 함유되며, 보다 바람직하게는 0.01-15 중량% 함유되고, 가장 바람직하게는 0.1-10 중량% 함유된다.

본 발명의 나노리포좀은 폴리올, 계면활성제, 인지질, 지방산 및 물을 포함하는 혼합물에 의해 제조되며, 1가 알코올 (예: 에탄올 등)을 이용하지 않는다는 것이 특징이다.

본 발명의 나노리포좀에 이용되는 폴리올은 특히 제한되지 않으며, 바람직하게는 프로필렌글리콜, 디프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린, 메틸프로판디올, 이소프렌글리콜, 펜틸렌글리콜, 에리스티톨, 자이리톨, 솔비톨, 및 이의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택된다. 바람직하게는 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 글리세린 및 이의 혼합물로 구성된 군으로부터 선택되는 것이고, 가장 바람직하게는 글리세린이다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 10-80 중량%, 바람직하게는 30-70 중량%이다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 계면활성제는 당업계에 공지된 어떠한 것도 사용할 수 있으며, 예를 들어, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 양성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용될 수 있고, 바람직하게는 음이온성 계면활성제 및 비이온성 계면활성제가 사용된다. 음이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알킬아실글루타메이트, 알킬포스페이트, 알킬락틸레이트, 디알킬포스페이트 및 트리알킬포스페이트를 포함한다. 비이온성 계면활성제의 구체적인 예는 알콕시레이티드알킬에테르, 알콕시레이티드알킬에스테르, 알킬폴리글리코사이드, 폴리글리세릴에스테르 및 슈가에스테르를 포함한다. 가장 바람직하게는, 비이온성 계면활성제에 속하는 폴리솔베이트류가 이용된다. 계면활성제의 사용량은, 일반적으로 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.1-10 중량%이고, 바람직하게는 0.5-5.0 중량%이다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 또 다른 성분인 인지질은 양쪽친화성 지질로 이용된 것으로서, 천연 인지질 (예: 난황 레시틴 또는 대두 레시틴, 스핑고마이엘린) 및 합성 인지질 (예: 디팔미토일포스파티딜콜린 또는 수첨 레시틴)을 포함하며, 바람직하게는 레시틴이다. 보다 바람직하게는, 상기 레시틴은 대두 또는 난황에서 추출한 천연 유래의 불포화 레시틴 또는 포화 레시틴이다. 통상적으로 천연 유래의 레시틴은 포스파티딜 콜린의 양이 23-95%, 그리고 포스파디딜에탄올아민의 양이 20% 이하이다. 본 발명의 나노리포좀의 제조에 있어서, 레시틴의 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.5-20 중량%이며, 바람직하게는 2-8 중량%이다.

본 발명의 나노리포좀 제조에 이용되는 지방산은 고급 지방산으로서, 바람직하게는 C_12-22 알킬 체인의 포화 또는 불포화 지방산으로서, 예컨대, 라우린산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아린산, 올레산 및 리놀레산을 포함한다. 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.05-3.0 중량%이고, 바람직하게는 0.1-1.0 중량%이다.

본 발명의 나노리포좀의 제조에 이용되는 물은 일반적으로 탈이온화된 증류수이며, 그 사용량은 나노리포좀 총 중량에 대하여 5.0-40 중량%이다.

나노리포좀의 제조는 당업계에 공지된 다양한 방법을 통해 이루어질 수 있으나, 가장 바람직하게는 상기 성분들을 포함하는 혼합물을 고압 호모게나이저에 적용하여 제조된다. 고압 호모게나이저에 의한 나노리포좀의 제조는 소망하는 입자 크기에 따라 다양한 조건 (예: 압력, 횟수 등)으로 실시할 수 있으며, 바람직하게는 600-1200 bar 압력 하에서 1-5회 고압 호모게나아저를 통과하도록 하여 나노리포좀을 제조한다.

이렇게 제조된 나노리포좀 시스템은 여러 종류의 난용성 물질을 녹임과 동시에 불안정한 물질을 안정화시켜 피부침투효과를 극대화 하는 장점을 가지고 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 생약 추출물을 포함하는 나노리포좀 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 피부보호용 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이 에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물은 피부 노화 방지 (피부 보호)의 용도를 갖는다. 본 명세서에서 용어 "피부 노화 방지"는 피부 노화 예방 및 치료를 포괄적으로 포함하는 의미를 갖는다. 또한, 본 명세서에서 "피부 노화 방지" 및 "피부 보호"는 특별한 언급이 없는 한 동일한 의미로 사용된다.

본 발명의 화장료 조성물은 섬유아세포의 증식 촉진, 콜라겐 합성의 촉진에 의한 피부 주름 개선과 피부 탄력 개선, 항산화 증대 및 보습력 향상을 통하여 피부 노화를 방지하며, 이와 같은 사실은 하기의 실시예에 명시되어 있다. 따라서, 본 발명의 용도인 피부 노화 방지 (즉, 피부 보호)는 주름 개선, 탄력 개선, 보습력 개선 및 피부 항산화능 개선 용도를 포함하는 것으로 해석된다. 더욱이, 본 발명의 화장료 조성물에서, 생약 추출물은 나노리포좀에 의해 내포되어 있기 때문에 피부침투 효과가 크게 증가하고, 제형의 안정성도 크게 개선된다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시 예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요 지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

제조예 1: 각종 추출 용매를 이용한 생약추출물의 수득

제조예 1-a

감초, 산수유, 백하수오 및 상백피 각 20 g을 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 분말화한 가루 20 g을 70% 에탄올 용액 1.5 ℓ에 첨가하고, 냉각 콘덴서가 장착된 환류 추출기에서 4시간 동안 가열 추출하였다. 그런 다음, 수득한 추출액을 와트만여과지 300 메쉬 여과포로 여과하고, 잔사를 동일한 방법으로 1회 더 추출한 후, 각각의 추출액을 합하여 와트만 5번 여과지로 다시 여과하며, 감압 농축기를 이용하여 용매를 제거하고, 동결 건조하여 건조 중량 4.89 g의 추출물을 수득하였다.

제조예 1-b

감초, 산수유, 백하수오 및 상백피 각 20 g을 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 분말화한 가루 20 g을 1,3-부틸렌글리콜 용액 1.5 ℓ에 첨가하고, 제조예 1-a과 동일한 방법을 수행하여 건조중량 4.01 g의 추출물을 수득하였다.

제조예 1-c

감초, 산수유, 백하수오 및 상백피 각 20g 을 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 분말화한 가루 20 g을 아세톤 1.5 ℓ에 첨가하고, 제조예 1-a과 동일한 방법을 수행하여 건조중량 4.72 g의 추출물을 수득하였다.

제조예 1-d

감초, 산수유, 백하수오 및 상백피 각 20 g 을 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 분말화한 가루 20 g을 정제수 1.5 ℓ에 첨가하고, 제조예 1-a과 동일한 방법을 수행하여 건조중량 1.32 g의 추출물을 수득하였다.

제조예 1-e

감초, 산수유, 백하수오 및 상백피 각 20 g 을 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 분말화한 가루 20 g을 70% 메탄올 1.5 ℓ에 첨가하고, 제조예 1-a과 동일한 방법을 수행하여 건조중량 4.19 g의 추출물을 수득하였다.

제조예 1-f

감초, 산수유, 백하수오 및 상백피 각 20 g 을 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 분말화한 가루 20 g을 에틸아세테이트 용액 1.5 ℓ에 첨가하고, 제조예 1-a과 동일한 방법을 수행하여 건조중량 3.96 g의 추출물을 수득하였다.

제조예 1-g

감초, 산수유, 백하수오 및 상백피 각 20 g 을 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 분말화한 가루 20 g을 클로로포름 용액 1.5 ℓ에 첨가하고, 제조예 1-a과 동일한 방법을 수행하여 건조중량 4.27 g의 추출물을 수득하였다.

제조예 1-h

감초, 산수유, 백하수오 및 상백피 각 20g 을 정제수로 세척하고 건조시킨 다음 분말화한 가루 20 g을 노말 부탄올 용액 1.5 ℓ에 첨가하고, 제조예 1-a과 동일한 방법을 수행하여 건조중량 3.77 g의 추출물을 수득하였다.

실험예 1: 섬유아세포 증식 효과

인체 정상 섬유아세포 (한국 세포주은행)를 96-웰 마이크로 플레이트(96-well microplate)의 각 웰에 1 x 10⁴ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지 (sigma사 구입)에서 24시간 동안 37℃에서 배양하였다. 이어, 상기 실시예 1-a 내지 1-h에서 제조한 각각의 생약 추출물이 최종 농도 100 ㎍/㎖로 포함된 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 생약 추출물이 포함되지 않은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 24시간 동안 추가로 배양하였다. 그런 다음, MTT 용액 (3-(4,5-디메틸티아졸-2-일) 2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드: 5 mg/㎖)을 각각에 10 ㎕씩 첨가하고, 4시간 동안 배양한 후, 배지를 제거하고, 각 웰 당 100 ㎕의 디메틸 설폭시드 용액을 가하여 20분 동안 진탕시키고, 마이크로 플레이트 판독기 (microplate reader, Molecular Devices, 미합중국)를 이용하여 570 ㎚에서 상층액 의 흡광도를 측정하였다. 측정값을 하기의 수학식 1에 대입하여 세포 증식 효과를 산출하고, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

추출물	흡광도	세포증식효과(%)
대조군	0.325	-
제조예 1-a	0.501	41.6
제조예 1-b	0.476	30.3
제조예 1-c	0.485	35.4
제조예 1-d	0.445	21.1
제조예 1-e	0.484	34.3
제조예 1-f	0.431	25.3
제조예 1-g	0.496	38.6
제조예 1-h	0.431	24.2

상기 표 1에서 알 수 있듯이, 추출물을 처리하지 않은 대조군와 비교하여, 본원 발명이 추출물을 100 ㎍/㎖ 농도에서 약 20-42%의 섬유아세포 증식 효과를 나타내고 있음을 알 수 있다.

실험예 2: 생약추출물의 농도에 따른 세포증식 효과

상기 실험예 1에서 섬유아세포 증식 효과가 가장 우수한 것으로 확인된 상기 제조예 1-a에서 제조된 추출물을 50, 100 또는 200 ㎍/㎖ 농도로, 실험예 1과 동일한 방법으로 세포 증식 효과를 측정하였고, 그 결과는 하기 표 2에 나타나 있다.

농도 (㎍/㎖)	흡광도 (570 nm)	세포 증식 효과 (%)
대조군	0.325	-
50	0.425	32.46
100	0.474	41.57
200	0.521	57.22

상기 표 2에서 볼 수 있듯이, 추출물은 농도-의존적으로 섬유아세포의 증식을 촉진시킴을 알 수 있고, 더불어 상기 실험예 1에서의 결과가 유의함을 확인할 수 있다.

실험예 3: 콜라겐 합성 증진 효과

인체 정상 섬유아세포 (한국 세포주은행)를 96-웰 마이크로 플레이트의 각 웰에 2 x 10⁴ 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 37℃에서 24시간 동안 배양하였다. 이어, 상기 실시예 1-a에서 제조한 생약 추출물이 최종 농도 50, 100 또는 200 ㎍/㎖로 포함된 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 실험군과 생약추출물이 포함되지 않은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 대조군을 24시간 동안 추가로 배양하고, 아스코르브산 (50 g/㎖)을 첨가하여 콜라겐 합성을 촉진시킨 다음, 다시 24시간 동안 추가로 배양하였다. 그런 다음, 각 웰을 세척하고 혈청이 함유되지 않은 DMEM 배지로 교체한 후 24시간 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 키트 (Takara, 일본국)를 이용하여 새로 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. PICP 양은 ng/2x10⁴ 세포로 환산하였으며, 그 결과는 하기 표 3에 나타나 있다.

농도 (㎍/㎖)	콜라겐 합성량 (ng/2 x 10⁴)
대조군	154
50	187
100	205
200	248

상기 표 3에서 볼 수 있듯이, 생약추출물의 농도가 증가함에 따라 콜라겐의 합성이 증가함을 알 수 있고, 이에 생약추출물이 탁월한 콜라겐 합성 증진 효과를 나타냄을 알 수 있다.

실험예 4: 항산화 효과

실험예 4-1: 지질과산화반응 실험

상기 실험예 1에서 섬유아세포 증식 효과가 가장 우수한 것으로 확인된 상기 제조예 1-a에서 제조된 추출물을 50, 100 또는 200 ㎍/㎖로 제조한 생약 추출물에 대하여 항산화 작용을 펜톤반응 (fenton reaction)에 의한 지질과산화반응계 (lipid peroxidation system)를 이용한 티오바르비츄릭산법 (TBA assay)으로 측정하였다.

에틸리놀레이트 10 ㎕, 0.2% 소디움도데실설폭시드(SDS), 염화제일철 10 μmol, 과산화수소 2 μmol을 함유하는 25mM 트리즈마 (Trizma) 염산/0.75mM 염화칼륨완충액 5 ㎖에 생약추출물의 디메틸설폭시드 (DMSO) 시험용액을 가한 후 55℃에서 16시간동안 항온시킨 후, 4% 디부틸히드록실톨루엔(BHT) 50 ㎕를 가하여 반응을 정지시킨다. 이 용액 0.3 ㎖를 시험관에 넣고 0.05N 염산 3.0 ㎖, 0.67% 티오바르비츄릭산(TBA) 용액을 가하고 30분간 끓인다. 이 반응액을 냉각시킨 후 85% 부탄올 4.0 ㎖을 가하고 원심분리 후 부탄올층의 흡광도를 535 ㎚에서 측정하였다.

각 추출물의 항산화 효과는 다음의 수학식 2로 산출하였다. 그 결과는 하기 표 4에 나타나 있다.

추출물	항산화 작용(%)
	실험농도 (㎍/㎖)^*
	10	50	100
대조군	5	5	5
제조예 1-a	48	62	83
제조예 1-b	47	59	82
제조예 1-c	41	56	73
제조예 1-d	19	52	69
제조예 1-e	40	63	80
제조예 1-f	25	49	81
제조예 1-g	42	60	79
제조예 1-h	26	50	77

*3회 평균치

생약추출물은 대부분 높은 활성을 나타내었다, 비극성 용매 보다는 극성용매의 추출물에서 효과가 컸다.

실험예 4-2: 자유라디칼 소거 실험

자유 라디칼 DPPH (1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl)는 시그마 사의 것을 사용하였다. DPPH는 안정한 자유라디칼로서 보라색을 나타내므로, 시료가 라디칼을 소거함에 따라 보라색이 제거되는 정도를 측정하는 것이다. 먼저 DPPH를 1.5x 10^-4 M 농도로 메탄올에 녹여, 이 용액 500 ㎕를 시험관에 넣었다. 여기에 각 농도의 추출물을 메탄올에 녹여 500 ㎕를 넣고, 상온에서 30분간 반응 후 517 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 이때, 추출물이 메탄올에 녹지 않을 경우에는 디메칠설폭사이드 : 메탄올 = 4 : 1 용매를 사용하였다. 대조군으로서 실시예의 추출물 대신 아스콜빈산을 사용하였다. 각 추출물의 자유 라디칼 소거효과는 다음의 수학식 3을 이용하여 라디칼을 50% 소거하는 농도를 구하여 EC₅₀으로 표시하였다. 그 결과는 하기 표 5에 나타나 있다.

추출물	자유리디칼 소거능(%)
	실험농도 (㎍/㎖)
	10	50	100
아스코빌 산	10.5	10.5	10.5
제조예 1-a	18	46	67
제조예 1-b	16	42	66
제조예 1-c	15	39	62
제조예 1-d	11	30	51
제조예 1-e	13	35	57
제조예 1-f	15	37	61
제조예 1-g	16	41	63
제조예 1-h	15	38	60

표 5에서 보는 바와 같이 본 발명의 생약 추출물은 강력한 항산화제인 아스콜빈 산(비타민 C)과 비교할 때 강력한 활성을 나타내었다.

실험예 5: 생약 추출물을 함유하는 나노리포좀의 제조

나노리포좀은 하기 표 6의 조성으로 A상에 B상을 첨가하고, 균일하게 습윤 시킨 후 C 상을 첨가하고 70-80℃까지 가열 혼합하였다. 이 용액을 600-1000 bar의 조건으로 고압 호모게나이저에 2-4회 통과 시킨후 냉각하여 지름 30-70 nm 입자 크기의 생약 추출물을 안정화시킨 나노리포좀을 얻었다.

상	성 분	함량 (중량%)
A	프로필렌 글리콜	40
B	레시틴	5
	콜레스테롤	2.5
	세라마이드	2.5
	소듐스테아로일 락테이트	0.5
	폴리솔베이트-80	0.5
	스테아린산	0.5
C	생약 추출물 (고형분)	10
	수산화 칼륨	적량
	정제수	To 100

실시예 및 비교 실시예

본 발명의 생약 추출물을 안정화한 나노리포좀을 포함하는 조성물 (실시예) 및 나노 리포좀을 함유하지 않은 조성물 (비교 실시예)을 다음의 조성으로 제조하였다.

성 분		실시예	비교 실시예
성 분		함량(중량%)	함량(중량%)
나노리포좀 (표 6)		10	-
생약 추출물 (고형분)		-	10
A	세토스테아릴알콜	2.0	2.0
	글리세릴스테아레이트	1.5	1.5
	마이키로크리스탈린	0.7	0.7
	스쿠알란	5.0	5.0
	유동파라핀	3.0	3.0
	트리옥타노인	5.0	5.0
	폴리솔베이트	1.2	1.2
	솔비탄스테아레이트	0.5	0.5
	토코페롤아세테이트	0.2	0.2
	마이크로메치콘	3.0	3.0
	BHT	0.05	0.05
B	글리세린	4.0	4.0
	1,3-부틸렌글리콜	2.0	2.0
	EDTA-2Na	0.05	0.05
	정제수	To 100	To 100
향, 방부제		적량	적량

실험예 6: 보습 효과

상기 실시예 및 비교 실시예에서 제조된 각 화장료의 보습력을 평가하기 위하여, 각 화장료가 도포된 피부를 대상으로 하여 수분 보유능 및 수분 증발량을 다음과 같이 측정하였다.

실험예 6-1: 수분 보유능의 측정

22℃ 및 상대습도 45%의 항온 항습실에서 상기 실시예 및 비교 실시예에서 제조된 각 화장료를 30명의 피시험자 하박 안쪽에 일정량 (0.03 g/16 ㎠)을 도포하고, 도포전, 도포 1시간 후 및 도포 2시간 후의 피부의 수분 함량을 측정하였으며, 아무런 처리를 하지 않은 정상 피부를 대조군으로 사용하였다. 측정 기기는 피부의 수분 함량에 따른 피부의 전기 용량을 측정하여 보습력을 측정하는 수분 함량측정기 (corneometer CM820, Conrage + Khazaka사, 독일연방국)를 사용하였다. 그 결과는 하기 표 6에 나타나 있다.

구 분	실시예	비교 실시예	대조군
도포전 피부 전기전도도	50	50	50
도포 1시간후 피부 전기전도도	87	74	50
도포 2시간후 피부 전기전도도	76	63	50

실험예 6-2: 수분 증발량의 측정

팔의 상박 부위에 테입 스트리핑 (tape stripping)을 실시하여 피부의 방어막을 약화시킨 후, 실험예 4-1과 동일한 방법으로 피실험자에게 각 화장료를 도포한 후, 수분증발량기 (TEWA meter, koln, 독일연방국)를 이용하여 1시간, 2시간, 4시간 6시간, 8시간후를 15회씩 수분 증발량을 측정하여 평균값을 구하였다. 그 결과는 하기 표 9와 같다.

구 분	실시예	비교 실시예	대조군
0시간 후 수분증발량	3.0%	3.0%	0.0%
1시간 후 수분증발량	-8.7%	-4.6%	-0.3%
2시간 후 수분증발량	-7.5%	-0.8%	0.1%
4시간 후 수분증발량	-4.6%	2.2%	0.1%
6시간 후 수분증발량	-2.1%	2.8%	-0.2%
8시간 후 수분증발양	-1.5%	3.1%	0.0%

상기 실험예 6-1 및 6-2의 결과에서 보듯이, 본 발명의 실시예 화장료가 비교 실시예의 화장료에 비해서 피부의 전기 전도도가 높고, 적은 수분 손실량을 나타낸다. 따라서, 본 발명의 화장료가 우수한 보습 효과를 나타냄을 알 수 있다.

실험예 7: 피부탄력효과

본 발명의 조성물인 생약 추출물을 안정화한 나노리포좀을 함유하는 화장료의 피부 탄력 증진효과를 측정하였다.

온도 24-26℃, 습도 75의 조건에서 20세 이상의 건강한 여성 30명 (평균연령 38세)을 2 그룹으로 나누고, A 그룹에는 실시예를, B 그룹에는 비교예의 제형을 눈가를 중심으로 하루 2회씩 (아침 및 저녁) 12주간 도포한 후, 피부탄력 측정기(Cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germary)를 이용하여 피부탄력을 측정하였다. 시험결과는 cutometer SEM 575의 R8(R8(12주)-R8(0주)) 값으로 기재하였는데, R8 값은 피부점탄성 (Vicoelasticity)의 성질을 나타내며, 결과는 하기 표 10에 기재되어 있다.

실험 제형	피부탄력효과
실시예	0.68
비교 실시예	0.34

표 10의 결과에서와 같이, 나노리포좀으로 안정화한 생약추출물을 함유한 실시예의 피부탄력은 생약추출물을 안정화하지 않고 직접 제형에 사용한 비교 실시예에 비해 2 배나 증가하였다. 따라서 생약추출물을 안정화한 나노리포좀을 함유한 실시예가 피부탄력증진에 있어 훨씬 더 뛰어난 효과를 나타냄을 알 수 있다.

실험예 7: 피부침투효과

본 발명의 생약추출물을 안정화한 나노리포좀을 함유한 화장료에 대한 피부침투 효과를 측정하였다.

Dermal Equivalent (DE)-인체 정상 섬유아세포 1 X 10⁵ cell/㎖를 인체의 결합조직을 이루는 섬유조직과 유사한 겔 구조에 콜라겐 수용액 3 mg/㎖:5 X DEM : 2:2 소듐바이카보네이트와 200 mM Hepes 완충액이 포함된 0.05 N 수산화나트륨이 7:2:1로 혼합된 배지에 접종하여 5CO₂, 37℃에서 7일 동안 배양하였다. 이를 3 ㎛ 다공성폴리카보네이트 (porous polycarbonate) 재질로 된 막 (membrane)에 의해 안쪽과 바깥쪽이 구분된 플레이트의 안쪽에 넣고 섬유아세포가 배양된 Derma Equivalent(DE) 표면 위에 표피각질형성세포 (Epidermal Keratinocyte) 1 X 10⁵cell/㎖ 세포를 접종하여 EGF와 BPE가 함유된 K-SFM 배지를 안쪽과 바깥쪽에 넣고 7일 동안 배양하였다. 그 후 플레이트 안쪽의 배지를 버려 공기가 배양세포의 표면에 접촉되도록 하고 바깥쪽에 10FBS가 함유된 K-SFM과 EGF가 들어있지 않은 DMEM이 동량으로 혼합된 배지를 넣고 2주간 배양하여 다층의 표피와 진피가 형성된 인공피부를 얻었다. 여기에 본 발명의 실험예 및 비교 실시예를 맨 위층의 인공피부 조직에 적용하여 4시간 배양 후 10FBS가 함유된 K-SFM과 물의 양을 HPLC로 분석하였다. 시험결과는 하기 표 11에 나타나 있다.

배지 중의 생약 추출물의 양 (㎍/㎖)
실시예	비교 실시예
40.5	2.9

실험결과 표 11에서와 같이, 본 발명의 나노리포좀으로 안정화한 생약추출물을 함유한 화장료는 생약추출물을 그대로 사용한 비교예에 비해 10배 이상의 피부 침투 효과가 우수함을 알 수 있다. 이는 본 발명의 나노리포좀의 평균입자 크기가 30-70 ㎚로 아주 작아 피부침투가 용이하기 때문이다. 따라서, 상기의 실험예 7의 피부탄력 증진 효과에 있어서, 본 발명의 실시예는 피부 침투효과가 비교 예보다 우수하여 좀 더 우수한 피부탄력 증진효과를 보이고 있음을 알 수 있다.

실험예 8: 피부 자극성 시험

상기 제조예에서 따라 제조된 생약추출물의 피부 자극성을 알아보기 위하여, 건강한 성인 남,여 30명을 대상으로 양팔 하박부에 5x20 ㎝ 부위에 각 시료의 일정량 (약 0.1 g)을 24시간 동안 첩포한 후, 제거하고 1시간 및 24시간이 경과한 다음, 하기의 판정 기준에 의하여 육안으로 피부 상태 변화를 판독하였고, 자극율은 다음 수학식 4에 따라 계산하였다. 실험 결과는 하기의 표 12에 나타나 있다.

판정기준

- : 홍반이나 특이한 현상 없음

+- : 주위보다 약간 붉어짐

+ : 주위보다 현저히 붉어짐

++ : 주위보다 심하게 붉어지고 부풀음

제조예	판정결과				자극율 (%)
제조예	++	+	+-	-	자극율 (%)
1-a	-	-	2	28	2.2
1-b	-	-	1	29	1.1
1-c	-	-	2	28	2.2
1-d	-	-	2	28	2.2
1-e	-	-	1	29	1.1
1-f	-	-	3	27	3.3
1-g	-	-	3	27	3.3
1-h	-	-	1	29	1.1

상기 표 12의 피부 자극성 실험 결과에서 알 수 있듯이, 본 발명의 추출물은 피부 자극이 없음을 알 수 있다.

이하 상기한 실험예의 결과를 근거로 하여 본 발명의 나노리포좀으로 안정화한 생약추출물 함유하는 화장료를 조성하여 제시한다. 그러나, 본 발명의 조성물을 하기의 제형예들로 한정하고자 하는 것은 아니다.

제형예 1: 유연화장수(스킨로션)

하기 표에 나타난 바와 같이 유연화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
나노리포좀	1.0
1.3-부틸렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
올레일알코올	0.1
폴리솔베이트 20	0.5
에탄올	15.0
벤조페논-9	0.05
향,방부제	미량
정제수	to 100

제형예 2. 영양화장수(밀크로션)

하기 표에 나타난 바와 같이 영양화장수를 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
나노리포좀	3.0
프로필렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
트리에탄올아민	1.2
토코페닐아세테이트	3.0
유동파라핀	5.0
스쿠알란	3.0
마카다이아너트오일	2.0
폴리솔베이트 60	1.5
솔비탄세스퀴올레이트	1.0
카르복시비닐 폴리머	1.0
비에치티이	0.01
EDTA-2Na	0.01
향,방부제	미량
정제수	to 100

제형예 3. 영양크림

하기 표에 나타난 바와 같이 영양크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
나노리포좀	10.0
세토스테아릴알콜	2.0
글리세릴스테아레이트	1.5
트리옥타노인	5.0
폴리솔베이트 60	1.2
솔비탄스테아레이트	0.5
스쿠알란	5.0
유동 파라핀	3.0
싸이클로메치콘	3.0
비에이치티이	0.05
델타-토코페롤	0.2
농글리세린	4.0
1,3-부틸렌글리콜	2.0
산타검	0.1
EDTA-2Na	0.05
향, 방부제	미량
정제수	to 100

제형예 4. 마사지크림

하기 표에 나타난 바와 같이 마사지크림을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
나노리포좀	1.0
프로필렌글리콜	6.0
글리세린	4.0
트리에탄올아민	0.5
밀납	2.0
토코페릴아세테이트	0.1
폴리솔베이트 60	3.0
솔비탄세스퀴올레이트	2.5
세테아릴알코올	2.0
유동파라핀	30.0
카르복시비닐폴리머	0.5
향, 방부제	미량
정제수	to 100

제형예 5. 팩

하기 표에 나타난 바와 같이 팩을 통상의 방법에 따라 제조하였다.

배합 성분	함량 (중량%)
나노리포좀	2.0
프로필렌글리콜	2.0
글리세린	4.0
카르복시비닐 폴리머	0.3
에탄올	7.0
피이지-40 히드로게네이티드 캐스터 오일	0.8
트리에탄올아민	0.3
비에치티이	0.01
EDTA-2Na	0.01
향, 방부제	미량
정제수	to 100

상술한 바와 같이, 본 발명은 감초, 황백, 백하수오, 상백피 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 추출물이 내포된 나노리포좀을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물을 제공한다. 본 발명의 화장료 조성물은 섬유아세포의 증식 촉진, 콜라겐 합성의 촉진에 의한 피부 주름 개선과 피부 탄력 개선, 보습력 향상 및 항산화 효과를 통하여 피부 노화를 방지한다. 더욱이, 본 발명의 화장료 조성물에서, 생약 추출물은 나노리포좀에 의해 내포되어 있기 때문에 피부침투 효과가 크게 증가하고, 제형의 안정성도 크게 개선된다.

Claims

감초, 황백, 백하수오, 상백피 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 추출물을 안정화한 나노리포좀을 유효성분으로 포함하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서, 생약추출물은 (a) 물, (b) 탄소수 1-4의 무수 또는 함수 저급 알코올, (c) 아세톤, (d) 에틸 아세테이트, (e) 클로로포름 또는 (f) 1,3-부틸렌글리콜을 추출 용매로 하여 수득한 것임을 특징으로 하는 피부 노화 방지용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 생약 추출물은 나노리포좀 총 중량에 대하여 0.01-40 중량%로 함유된 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 나노리포좀을 화장료 총 중량에 대하여 0.0001-20 중량%로 함유하는 화장료 조성물.
제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 나노리포좀은 폴리올, 계면활성제, 인지질, 지방산 및 물을 포함하는 혼합물에 의해 제조된 것을 특징으로 하며, 상기 혼합물은 1가 알코올을 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.
제 1 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 피부노화 방지용 화장료 조성물.