KR101184313B1 - 항염증 활성을 갖는 천연화장료 이로미스 Ｎｏ．４ 콤플렉스 - Google Patents

Abstract

본 발명은 항염증 활성을 갖는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 강황, 겨우살이, 감국, 병풀, 카모마일 및 은행잎을 혼합하여 추출한 식물추출물을 함유하는 항염증 활성을 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 강황, 겨우살이, 감국, 병풀, 카모마일 및 은행잎으로부터 추출된 식물추출물들은 우수한 항염증 활성을 가지며 이들 식물추출물들을 원료로 함유하는 화장료 조성물은 피부에 매우 안전하면서 피부진정과 염증 완화에 효과적이다.

Description

항염증 활성을 갖는 천연화장료 이로미스 Ｎｏ．４ 콤플렉스 {iLomys No.4 Complex with an anti-inflammation activity}

본 발명은 항염증 활성을 갖는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 구체적으로 강황, 겨우살이, 감국, 병풀, 카모마일 및 은행잎을 혼합하여 추출한 식물추출물을 함유하는 항염증 활성을 갖는 화장료 조성물에 관한 것이다.

염증반응은 외부 자극에 의한 동통, 발열, 발적, 종창, 기능상실 등을 특징으로 하며, 조직학적으로는 소동맥, 모세혈관 및 소정맥의 투과성과 혈류증가를 동반한 확장, 혈장단백을 함유한 혈장의 삼출, 백혈구의 염증부위로의 이동 등을 포함한 복잡한 증상 등이 관찰되며, 항염은 외부 자극으로부터 위와 같은 현상으로 나타나는 조직의 파괴를 막는 일련의 작용을 말한다.

염증은 세포나 조직이 어떠한 원인에 의해 손상을 받으면 그 반응을 최소화하고 손상된 부위를 원상으로 회복시키려는 일련의 방어목적으로 나타나는 것이며 염증을 유발하는 원인으로 외상, 상, 동상, 방사능 등에 의한 물리적 요인과 산(acid)과 같은 화학물질에 의한 화학적 요인, 항체반응에 의한 면역학적 요인들이 있으며 그 외에 혈관이나 호르몬 불균형에 의해서도 일어난다. 염증을 소실시키기 위해 염증원의 제거, 생체반응 및 증상을 감소시키는 작용을 하는 것을 항염제라고 한다. 현재까지 항염의 목적으로 이용되고 있는 물질로는 비스테로이드계로 프루폐나믹산(flufenamic acid), 이부프로펜(ibuprofen), 벤지다민(benzydamine), 인도메타신(indomethacin) 등이 있고 스테로이드계통으로 프레드니솔론(prednisolone), 덱사메타손(dexamethasone)등이 있으며 (김창종, 병태생리학, 한림상사, p61-69, 1988) 알란토인, 아즈렌, ε-아미노키프론산, 하이드로코티존(ⅴ), 감초산 및 그 유도체(β-글리칠레친산, 글리칠레친산유도체) 등이 항염증에 효과가 있는 것으로 알려져 있다 (광정무부, 신화장품학, 남산당, p162, 1993).

지방산의 일종인 아라키돈산(arachidonic acid)은 사이클로옥시게나제와 리폭시게나제의 반응을 통하여 염증, 천식 및 각종 혈관순환기계 질병의 병리에 중심적인 역할을 담당하는 지질성 화학전달물질을 생산한다. 아라키돈산은 리폭시게나제의 작용을 받아 또 다른 종류의 화학전달물질을 생산하는 데, 이들은 호흡기, 백혈구, 순환계 등에 작용한다. 현재 사용되고 있는 항염증제로는 아라키돈산으로부터 사이클로옥시게나제에 의해 생합성되는 염증유발물질만을 차단하는 비 스테로이드성약물이 널리 이용되고 있다. 아스피린과 이부프로펜(ibuprofen)으로 대표되는 이들 약물은 아라키돈산에 대한 또 다른 경로인 리폭시게나제 경로의 대사산물들의 생합성을 차단할 수는 없다. 현재까지 가장 탁월한 항염증 효과를 보인 약물로는 덱사메타손(dexamethasone)으로 대표되는 스테로이드성 약물이 알려져 있다. 그러나 이 약물은 부작용으로 인해 현재는 이 목적으로의 사용이 금지되어 있다. 이러한 사정 때문에 천연물을 이용한 저해물질의 탐색은 새로운 항염증제로의 개발이 기대되는 부분이다. 이 저해물질은 사이클로옥시게나제와 리폭시게나제의 양쪽 경로를 모두 차단하며 부작용이 매우 적으리라고 기대할 수 있다.

따라서, 본 발명의 주된 목적은 천연물을 이용하여 개발된 항염증 활성을 갖는 화장료 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 강황, 겨우살이, 감국, 병풀, 카모마일 및 은행잎을 1~3:1~3:1~3:1~3:1~3:1~3 중량비로 혼합하여 추출한 식물추출물을 함유하는 항염증 활성을 갖는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 식물추출물은 강황, 겨우살이, 감국, 병풀, 카모마일 및 은행잎을 0~6:0~6:0~6:0~6:0~6:0~6 중량비로 혼합하여 추출한 것일 수 있으나, 바람직하게는 1~3:1~3:1~3:1~3:1~3:1~3 중량비로 혼합, 더욱 바람직하게는 1:1:3:1:2:3 중량비로 혼합하여 추출한 것일 수 있다. 가능하다면 상기 6종의 식물을 모두 포함시키는 것이 추출 후 고형분 함량이 높으며 특정 혼합비에서 특히 높은 고형분 함량을 나타내었다 (표 1 참조).

본 발명의 실험예에서는, 상기 식물 혼합추출물이 염증유발물질의 생합성 또는 유도에 관여하는 사이클로옥시게나제와 리폭시게나제의 활성 억제효과를 확인함으로써 함영증 활성을 가짐을 증명하였다. 본 발명의 식물추출물들은 현저히 높은 리폭시게나제 활성 저해 효과를 나타내고 (표 3 참조), 항염증 효과가 있는 것으로 알려진 인도메타신과 비교하여 더 낮은 농도에서도 더 높은 사이클로옥시게나제(COX 2) 유전자 발현 저해 효과를 나타내었다 (표 6 참조). 또한 마우스 염증 모델 동물을 이용한 항염증 효과 실험을 통하여, 본 발명의 6가지 식물들의 단독 식물추출물이 2~10%의 염증 억제율을 보인데 반해, 6가지 식물 모두를 혼합한 식물추출물들은 모두 20% 이상의 염증 억제율을 나타내어 식물추출물들의 상승적 효과(synergy effect)를 확인할 수 있었다 (실험예 2 및 표 4 참조).

강황(Gurguma aromatia Salisbury)은 열대지방에서 자라는 여러해살이풀로 울금과 비슷하나 짧은 털이 있고 뿌리줄기를 꺾은 면이 노란색이다. 뿌리줄기에 노란 색소물질이 0.4~0.6%로 쿠르쿠민과 그의 유사물질 II로 되어 있고, 정유가 6~10%이며 세스쿠이테르펜(주성분은 ι-α-쿠르쿠멘, ι-β-쿠르쿠멘 C₁₅H₂₄) 65%, 세스쿠이테르펜알코올 22%, d-캠퍼 2.5%와 그 밖에 d-캄펜, 투루메론, P-토릴메틸카르비놀이 있다. 쿠르쿠민은 수리성 이담약에 속하고 센 억균작용이 있다. 정유에 포함되어 있는 P-토릴메틸카르비놀과 투르메론은 동물실험에서 열물을 빨리 내보내고 간에서의 열물산합성을 돕는다. 즉 정유성분은 진성이담약이다. 또한 억균력이 세며 담석을 녹이는 성질이 있다. 동의치료에서 건위약, 열물내기약, 통경약으로 써왔고 코피, 피오줌, 토혈에 쓴다. 오래 사용하더라도 부작용이 없다 (약초의 성분과 이용, 일월서각, 1999, 828~829).

겨우살이(Viscum soloratun (Kom.) Nakai)는 기생목, 동청, 곡기생, 유기생, 율기생이라고도 불리며 사철 푸른 작은 떨기나무이다. 오리나무, 참나무, 황철나무, 버드나무, 팽나무, 밤나무의 가지에 기생한다. 주요성분으로는 잎이 붙은 가지에서 알칼로이드, 플라보노이드, 흔적의 사포닌이 확인되었고 올레아놀산 C₃₀H₄₈O₃, β-아미린 C₃₀H₅₀O, 1.5%의 메소이노시톨, 비스신, 옥시다아제, 세틸알코올, 미리스트산, 아라킨, 고무질(점액), 페닐아민, 프로피오콜린, 아세틸콜린, 수지가 있다. 열매의 점액질은 β-아미린과 루페올 C₃₀H₅₀의 팔미트산에스테르이다. 동의치료에서 자궁수축약, 피멎이약으로 사용한다. 민간에서는 잎을 신경쇠약에 쓴다. (약초의 성분과 이용, 일월서각, 1999, 189~190)

감국(Chrysanthemum indicum L.)은 들국화라고도 하며 9~10월에 꽃이 핀다. 주요성분으로는 꽃에 정유(0.2%), dι-캠퍼, 테트라코산, 헥사코산, 테르펜케톤, α-투욘, 3-(10)칼렌, 크리스테논, 루테올린, 크리산테인이 확인되었다. 동의치료에서 나력, 부스럼에 달여 먹거나 바르고 마른 꽃을 기름으로 우려서 부스럼에 바르기도 한다. 수증기 증류한 정유는 3~5 방울을 물에 띄워서 곽란, 배아픔에 먹는다 (약초의 성분과 이용, 일월서각, 1999, 728~729).

병풀(Centella asiatica Urbain)은 덩굴 뻗는 여러해살이풀이며 잎이 둥글고 여름철에 붉은 보라색의 작은 꽃이 핀다. 주요성분으로는 전초에 배당체인 브라흐모시드, 브라흐미노시드, 트리테르펜산인 브라흐민산, 베툴린산, 스티그마스테롤이 있다. 동의치료에서 종독, 악창에 사용하고 민간에서는 귀앓이, 류머티즘, 곪은 상처에 바르고 어지럼증, 전간, 천식에 먹는다 (약초의 성분과 이용, 일월서각, 1999, 508~509).

카모마일(Matricaria chamomilla L.)은 카밀레꽃이라고 하며 한해 또는 두해살이 풀이다. 주요성분으로는 꽃에 정유가 재배 조건에 따라 0.05~1.9%까지 나타나고 대체적으로 0.2~0.9% 정도가 있다. 정유의 조성은 아줄렌 화합물인 캄아줄렌 C₁₄H₁₆(1,4~디메틸-7-에틸아줄렌, 녹는점 161℃, d²⁰ 0.9883, 푸른색의 걸죽한 용액, 물에 섞이지 않고 유기용매에 잘 풀린다) 약 4.6%(1.6~17.7%), 테르펜 화합물 C₁₀H₁₆, 세스쿠이테르펜화합물 C₁₅H₂₄ 약 10%, 세스쿠이테르펜알코올화합물(C₁₅H₂₄O₂ 와 C₁₅H₂₆O₂)이 약 20%, 카디넨, 카프릴산, 논닐산, 이소길초산으로 이루어져있다. 꽃에는 캄아줄렌, 마트리신, 아피게닌, 헬레니아린이 있는데 캄아줄렌과 마트리신이 유효성분으로 인정되고 있다. 카마게렌은 항염증작용이 있고 조직 재생과정을 빠르게 하며 알레르기반응성을 약화시킨다. 특히 피부 점막에 대한 소염작용이 세다. 또한 국소마비작용도 있다. 아피줄닌과 아핀, 헬레니아린은 진경작용이 있다. 이러한 작용은 구풍약으로 쓰는데도 알맞다. 정유는 방부작용, 살균작용이 있고 위의 기능을 높여주고 염증과정을 치료하며 배에 가스가 차는 것을 막는다. 또한 땀내기작용도 한다 (약초의 성분과 이용, 일월서각, 1999, 742~743).

은행잎(Ginkgo biloba L.)은 은행나무의 잎이며 부채모양을 하고 있다. 주요성분으로는 긴크게틴 C₃₂H₂₂O₁₀, 이소긴크게틴, 빌로베틴 C₃₁H₂₀O₁₀ 과 같은 비플라보노이드와 켐페롤-3-람노글루코시드, 루틴, 켐페롤, 쿠에르세틴, 이소람네틴 등이 있다. 쓴맛물질로서 긴크골리드 A C₂₀H₂₄O₇, 긴크골리드 B C₂₀H₂₄O₁₀, 긴크골리드 C C₂₀H₂₄O₁₁, 빌로발리드 A C₁₅H₁₈O₈, 기타 시킴산, 아나카르드산, 긴크골산, 긴놀(셀리도니올), 긴논(셀리도니온), β-시토스테롤, 에스톨리드형 납이 있다. 동의치료에서 손발이 저리고 가는동맥의 혈류장애가 오는 질병을 치료하는데 사용된다 (약초의 성분과 이용, 일월서각, 1999, 138~139).

본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 식물추출물은 통상적인 식물 추출방법으로 추출될 수 있으며, 바람직하게는 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매를 이용하여 추출할 수 있다. 예컨대, 상기 유기용매는 에탄올, 메탄올, 글리세린, 부틸렌글리콜 및 프로필렌글리콜를 사용할 수 있으며 이들 유기용매와 물을 적절히 혼합한 용매도 사용할 수 있다.

상기 추출용매를 이용한 추출방법으로는 통상적인 식물추출방법 예컨대, 열수추출, 유기용매 추출 등의 방법을 사용할 수 있으며, 예컨대 상기 식물들의 건조물 또는 그 분쇄물을 상기 추출용매에 투입하고 필요에 따라 교반하면서 5-40℃에서 1-15일간 침적시키거나 40-100℃에서 4-20시간 동안 가열하여 추출할 수 있다. 또한 추출에 사용되는 용매의 양은 추출원료의 통상 5 내지 20배량(중량비)을 사용할 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 조성물은 리폭시게나제(lipoxygenase) 와 사이클로옥시게나제(cyclooxygenase) 활성을 동시에 억제함으로써 항염증 활성을 갖는 것을 특징으로 한다.

세포가 자극을 받게 되면 포스포리피다제(phospholipidase A₂, PLA₂)에 의한 세포막 인지질로부터 아라키돈산(arachidonic acid, AA) 및 리소포리피드(lysophospholipid)가 생성된다. PLA₂에 의해 생성된 AA는 사이클로옥시다제(cyclooxydase, COX)와 리폭시게나제(lipoxygenase, LOX)에 의해 염증의 강력한 매개체인 프로스타글란딘(prostaglandins, PGs)으로 각각 합성된다. 이때 생성된 리소포스포리피드(lysophospholipid)는 극히 미량으로 혈소판을 활성화하며 다양한 염증성질환에 관여하는 혈소판 활성인자(platelet activating factor, PAF)로 합성되므로, PLA₂는 각종의 염증성 질환에 관여하는 매개체 생성의 효소로 알려져 있다. 본 발명은 외부 염증성 유도 인자로부터 자극받아 포스포리피다제(PLA₂)의 활성화에 의해 생성된 아라키돈산 인체반응 메카니즘 중에 관여하는 리폭시게나제의 활성을 억제하며, 또한 사이클로옥시다제의 발현을 억제시킴으로써 우수한 항염증 활성을 갖는 혼합 식물추출물을 제공한다.

본 발명의 화장료 조성물에서, 상기 식물추출물은 오랫동안 생약 및 식용으로 사용되어 오던 약재 식물들의 추출물이기 때문에 피부에 도포하는 경우 특별한 부작용이 없으므로 전체 조성물에 대하여 0.01 내지 90 중량%로 함유시킬 수 있으나, 바람직하게는 0.1 내지 30 중량%로 함유시키는 것이 적당하다.

상기와 같은 본 발명의 화장료 조성물의 제형은 특별히 제한되지 않으며, 목적하는 바에 따라 적절히 선택할 수 있다. 예를 들어, 상기 조성물은 스킨로션, 스킨소프트너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 구성된 군에서 선택된 제형을 가질 수 있다.

또한 상기 조성물은 피부외용 연고로도 제형화할 수 있는데, 이 경우 본 발명의 식물추출물 이외에 바셀린 50-97 중량% 및 폴리옥시에틸렌올레일-에테르 포스페이트 0.1-5 중량%를 함유하도록 제조할 수 있다.

이하, 본 발명의 식물추출물을 제조하는 방법을 보다 구체적으로 설명한다. 강황, 겨우살이, 감국, 병풀, 카모마일, 은행잎 일정량에 대하여 추출 용매로서 물, 에탄올, 메탄올, 글리세린, 부틸렌글리콜 및 프로필렌글리콜로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 용매를 1-20배 부피량을 가한다. 추출 방법으로는 냉각 콘덴서가 장치되어 용매가 증발되는 것을 방지한 상태에서 40~100℃, 2~20시간 가열하여 추출하거나 4~40℃에서 1~15일간 침적시켜 유효성분을 추출하는 방법을 사용할 수 있다. 이렇게 추출된 추출액을 0.1 내지 30% 범위로 혼합하여 화장료에 첨가하는 것이다.

이상 설명한 바와 같이, 본 발명에 따르면 강황, 겨우살이, 감국, 병풀, 카모마일 및 은행잎으로부터 추출된 식물추출물들이 우수한 항염증 활성을 가지고 있음을 확인할 수 있었다. 이들 식물추출물들을 원료로 함유하는 화장료 조성물은 피부에 매우 안전하면서 피부진정과 염증 완화에 효과를 발휘할 수 있다.

도 1은 본 발명에 따른 식물추출물의 iNOS 유전자 발현율 억제 효과를 실험한 결과이다.
도 2는 본 발명에 따른 식물추출물의 COX2 유전자 발현율 억제 효과를 실험한 결과이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

실시예 1~15.

강황, 겨우살이, 감국, 병풀, 카모마일, 은행잎을 하기 표 1의 비로 70% 함수에탄올을 원료의 10배 분량으로 넣고 추출기로 상온에서 5일간 추출한 후 400 메쉬 여과포로 여과하고 0.45 μm의 필터 여과하여 그 결과를 하기 표 1에 기재하였다.

[표 1]

실시예 16~20.

강황 100g + 겨우살이 100g + 감국 300g + 병풀 100g + 카모마일 200g + 은행잎 300 g을 하기 표 2의 용매를 사용하고 11 kg에 넣고 추출기로 상온에서 5일간 추출한 후 400 메쉬 여과포로 여과하고 0.45 μm 의 필터여과하여 그 결과를 하기 표 2에 기재하였다.

[표 2]

실험예 1. 리폭시게나제 활성억제 효과

상기 실시예 1 내지 20에서 제조된 식물추출물에 대하여 리폭시게나제 활성억제 효과를 확인하기 위해 하기와 같이 실험하였다 (김경만, Journal of Drug Research, 5, p45, 1996).

0.1M 소디움 포스페이트 완충용액(sodium phosphate buffer, pH 7.0)에 용해한 1.12 mM 리놀렌산(Linolenic acid) 1.0 mL 용액에 50,000 단위/mL의 리폭시게나제 용액(Lipoxygenase solution) 0.95 mL와 일정 농도의 시료를 50 μl을 넣어, 25℃에서 10분간 반응시켰다. 대조군(control)으로는 시료 대신 용매를 사용하며, 공시험액(blank)은 리폭시게나제 용액 대신 완충액을 0.95 mL 넣는다. 그 후에 20% 트리클로로아세트산(trichloroacetic acid) 0.5 mL와 0.6% 티오바비투릭산(thiobarbituric acid) 1.0 mL를 가한 후, 끓는 물에서 10분간 가열 발색시키고 얼음물에 냉침하였다. 부탄올 2.0 mL를 투입하여 혼합 교반한 후, 원심 분리하였다. 상층인 부탄올을 분광광도계(UV Spectrum)를 이용하여 535 ㎚에서 흡광도를 측정하였다.

각 시료는 반응액 최종농도가 500 μg/ml, 1,000 μg/ml로 실시하였고, 효소 활성에 대한 저해율은 하기 수학식 1에 의하여 계산하였다. 실험 결과, 실시예 11과 20이 500 μg/mL에서 40% 이상의 높은 저해율을 나타냈다 (표 3 참조).

[수학식 1]

[표 3]. 리폭시게나제(Lipoxygenase) 활성 억제 효과

표 3에 나타난 바와 같이, 본 발명의 식물추출물들은 현저히 높은 리폭시게나제 저해율을 보여, 대부분의 천연물들이 리폭시게나제 활성억제 효과가 거의 없는 것과 달리, 리폭시게나제 활성억제를 통한 항염 효능이 매우 우수함을 알 수 있다.

또한, 6가지 식물들의 추출물을 모두 혼합한 실시예 10 내지 실시예 20에서 리폭시게나제 활성 억제 효과가 현저히 높아진 것으로 볼 때, 이들 식물들의 추출물을 모두 혼합하는 경우 항염 효능에 있어서 상승적 효과가 있는 것으로 판단할 수 있다.

실험예 2. 항염증 실험

본 발명의 식물추출물에 대한 항염증 효과를 알아보기 위하여 마우스 좌측귀를 대조부위, 우측귀를 시험부위로 하여, 시료 적용 전 에탄올로 귀를 깨끗하게 세척하고 시료 20 μl을 1일 1회 4일간 지속적으로 도포하고 마지막 도포 1시간 후에 좌측귀에 에탄올을 우측귀에는 아라키돈산(Arachidonic acid; 염증유발물질)을 2 ㎎/ear을 도포하여 1시간 후 귀의 부종(ear edema) 정도를 마이크로미터로 양쪽 귀를 3회씩 반복 측정하였다.

항염 효과는 아라키돈산 처리군을 기준으로 부종억제 정도로 판정하였으며 그 결과를 하기 표 4에 나타내었다.

[표 4]. 국소적용에 의한 귀두께 및 염증 억제율

A: 대조군귀의 평균두께(아라키돈산 처리귀의 두께-비처리 귀의두께)

B: 시료도포군 귀의두께(아라키돈산 처리귀의 두께-비처리 귀의두께)

상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 식물추출물들은 모두 어느 정도 염증 억제효과가 있는 것으로 나타났다. 그러나 본 발명의 6가지 식물 모두를 혼합한 경우인 실시예 10 내지 실시예 20의 추출물들은 모두 20% 이상의 염증 억제율을 나타내어 식물추출물들의 상승적 효과를 확인할 수 있었으며, 특히 실시예 11, 실시예 18 및 실시예 20의 추출물은 30% 이상의 염증 억제율을 보였다. 이러한 수치는 의약품 성분으로서 항염 효과가 매우 우수한 물질인 인도메타신보다 낮은 항염 효과지만, 화장료로서 사용하기에는 충분한 정도임을 알 수 있다.

실험예 3. iNOS 및 COX2 유전자 발현 저해 실험

생쥐의 대식세포인 Raw264.7 세포에 리포폴리사카라이드를 처리하여 인위적으로 COX2(Cyclooxygenase 2) 유전자 발현을 증가시킨 후 시료에 의한 저해능을 RT-PCR 방법을 이용하여 측정하였다. 10% FBS - DMEM 배지에 8 x 10⁵ 세포를 현탁시켜 100 mm 디쉬(dish)에 접종하여 부착시켰다. 하루 후 시료를 농도별로 처리하여 18시간 배양한 후 1 μg/ml의 리포폴리사카라이드 (lipopolysaccharide, LPS; 시그마)를 처리하여 8시간 배양(incubation) 하였다. 세포의 배지를 제거하고 트라이졸(Trizol, 인비트로젠 사) 1 ml을 첨가하여 인비트로젠 사의 RNA 분리법에 따라 RNA를 분리하고 260 nm에서 정량하여 역전사중합반응을 실시하였다. 역전사중합반응은 올인원 역전사중합반응 키트(All-in-one RT-PCR kit, 수퍼바이오 사)를 사용하였고, 프라이머(primer)와 반응 조건은 하기 표 6에 나타내었다. 올인원 역전사중합반응키트의 메뉴얼에 따라 실험을 진행하였고, 항염 및 자극완화제로 많이 사용되는 물질인 인도메타신(indomethacin)을 양성대조군으로 사용하였다. 실험 결과는 하기 표 7에 나타내었다.

[표 5]. RT-PCR의 프라이머 및 반응조건

[표 6]. iNOS 및 COX 2 유전자 발현율

상기 표 6에서와 같이, 본 발명의 추출물은 양성대조군인 인도메타신과 비교하여 75배 내지 200배 더 낮은 농도로 처리하였음에도 불구하고 iNOS 및 COX 2 유전자 발현 저해 실험결과, 항염 및 자극완화제로 많이 사용되는 인도메타신과 비교하여 유사하거나 더 높은 발현 저해 효과를 나타내었다 (도 1과 2 참조).

처방예 1.

실시예 20의 추출물을 함유한 화장료 중 영양로숀의 처방예는 다음과 같다. (단위는 중량%이다)

< 제조방법 >

제형예 1 : 원료물질 2, 3, 4, 5 및 6을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭한다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 원료물질 1, 7, 8 및 14를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 이어 원료물질 9를 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화한 후, 그리고 10, 11, 12, 13을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시킨다.

비교제형예 1 : 원료물질 2, 3, 4, 5 및 6을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭한다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 원료물질 7, 8 및 14를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 이어 원료물질 9를 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화한 후, 그리고 10, 11, 12, 13을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시킨다.

처방예 2.

실시예 20의 추출물을 함유한 화장료 중 영양크림의 처방예는 다음과 같다.

< 제조방법 >

제형예 2 : 원료물질 2, 3, 4, 5 및 6을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭한다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 원료물질 1, 7, 8 및 14를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 이어 원료물질 9를 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화한 후, 10, 11, 12, 13을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시킨다.

비교제형예 2 : 원료물질 2, 3, 4, 5 및 6을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질이라 칭한다. 상기 비이온계 양친매성 지질과 원료물질 7, 8 및 14를 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 이어 원료물질 9를 일정한 온도에서 서서히 첨가하여 균질화한 후 10, 11, 12, 13을 투입하여 분산시켜 안정화하고 숙성시킨다.

처방예 3.

실시예 20의 추출물을 함유한 화장료 중 맛사지 크림의 처방예는 다음과 같다.

< 제조방법 >

제형예 3 : 8, 9, 10, 11, 13, 16을 혼합교반하면서 80~85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 12를 80~85℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 50℃까지 냉각한 뒤 14번을 투입하고 45℃까지 냉각한 뒤 15번을 투입하고 35℃까지 냉각되면 1번을 투입한다. 25℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다.

비교제형예 3 : 8, 9, 10, 11, 13, 16을 혼합교반하면서 80~85℃ 사이로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 12를 80~85℃ 사이로 가열하여 투입한 뒤 유화한다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 50℃까지 냉각한 뒤 14번을 투입하고 45℃까지 냉각한 뒤 15번을 투입하고 35℃까지 냉각한 뒤 숙성시킨다.

시험예 1. 피부진정 효과 확인 시험

상기 처방예 2의 제형예 2와 비교제형예 2의 영양로션에 대한 피부도포 시, 피부진정 효과를 확인하기 위하여 다음과 같은 임상 확인 실험을 하였다. 20～55세의 여성층으로서 피부 트러블이 있는 50명에 대하여 피부진정 효과를 조사하였다. 동일인에게 안면 왼쪽 부분에는 제형예 2의 영양로션을, 안면 오른쪽 부분에는 비교제형예 2의 영양로션을 매일 아침 세안 후 피부에 1일 1회 20일간 도포한 후 피부진정 효과를 확인하기 위하여 피부진정 정도를 측정하였다. 피부진정 정도는 설문조사를 토대로 실시하였으며 시험 결과를 하기 표 5에 나타낸다.

[표 7]. 피부진정 효과 확인 시험 결과

상기 표 7의 시험 결과와 같이, 본 발명의 식물추출물을 첨가하여 제조한 제형예 2의 화장료가 첨가되지 않고 제조한 비교제형예 2보다 피부진정 효과가 매우 우수하다는 것을 알 수 있다.

Claims (6)

1. 강황, 겨우살이, 감국, 병풀, 카모마일 및 은행잎을 1~3:1~3:1~3:1~3:1~3:1~3 중량비로 혼합하여 추출한 식물추출물을 함유하는 항염증 활성을 갖는 피부외용제 조성물.
   
2. 제 1항에 있어서, 상기 식물추출물은 강황, 겨우살이, 감국, 병풀, 카모마일, 및 은행잎을 1:1:3:1:2:3 중량비로 혼합하여 추출한 것을 특징으로 하는 항염증 활성을 갖는 피부외용제 조성물.
   
3. 제 1항에 있어서, 상기 식물추출물은 물, 에탄올, 메탄올, 글리세린, 부틸렌글리콜 및 프로필렌글리콜로 구성된 군에서 선택된 하나 이상의 용매로 추출된 것을 특징으로 하는 항염증 활성을 갖는 피부외용제 조성물.
   
4. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 리폭시게나제(lipoxygenase)와 사이클로옥시게나제(cyclooxygenase) 활성을 동시에 억제함으로써 항염증 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 피부외용제 조성물.
   
5. 제 1항에 있어서, 상기 식물추출물은 전체 조성물 대비 0.1 내지 30 중량%로 함유된 것을 특징으로 하는 항염증 활성을 갖는 피부외용제 조성물.
   
6. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 스킨로션, 스킨소프트너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징 폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클렌저로 구성된 군에서 선택된 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 항염증 활성을 갖는 피부외용제 조성물.

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