KR20180078344A - 기난드로프시스 기난드라 또는 클레오메 기난드라 지상부위 추출물, 및 이를 포함하는 화장, 피부과학적 또는 약학조성물 - Google Patents
기난드로프시스 기난드라 또는 클레오메 기난드라 지상부위 추출물, 및 이를 포함하는 화장, 피부과학적 또는 약학조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 기난드로프시스 기난드라 지상부위, 바람직하게는 잎의 추출물, 및 선택적으로는 적합한 부형제를 포함하는 조성물, 바람직하게는 화장, 피부과학적 또는 약학조성물에 관한 것이다.
또한 본 발명은 피부, 점막, 또는 각질 부속기관의 질병 또는 병리 예방 또는 치료, 혈관장애 및/또는 과다피지분비 관련 문제의 예방 또는 치료, 또는 항-노화, 상처치유, 보습화, 감량 및/또는 항-부분 비만, 항-알레르기 및 친-색소침착 제품에 사용되는 조성물 또는 추출물에 관한 것이다. 마지막으로, 본 발명은 상기 조성물 또는 추출물을 투여하는 외관 또는 상태 개선을 위한 피부, 각질 부속기관, 점막에 대한 화장방법에 관한 것이다.
또한 본 발명은 피부, 점막, 또는 각질 부속기관의 질병 또는 병리 예방 또는 치료, 혈관장애 및/또는 과다피지분비 관련 문제의 예방 또는 치료, 또는 항-노화, 상처치유, 보습화, 감량 및/또는 항-부분 비만, 항-알레르기 및 친-색소침착 제품에 사용되는 조성물 또는 추출물에 관한 것이다. 마지막으로, 본 발명은 상기 조성물 또는 추출물을 투여하는 외관 또는 상태 개선을 위한 피부, 각질 부속기관, 점막에 대한 화장방법에 관한 것이다.
Description
본 발명은 기난드로프시스 기난드라 지상부위, 바람직하게는 잎의 추출물, 및 바람직하게는 적합한 부형제를 포함하는 조성물, 바람직하게는 화장, 피부과학적 또는 약학조성물에 관한 것이다.
바람직하게는, 기난드로프시스 기난드라 지상부위의 추출물은, 조성물에서, 조성물 총 중량에 대하여 0.01% 내지 10중량% 포함된다.
또한 본 발명은 기난드로프시스 기난드라 지상부위 및 바람직하게는 잎의 추출물 추출방법, 및 상기 방법에 의해 얻어지는 추출물에 관한 것이다.
또한 본 발명은 피부, 점막, 또는 각질 부속기관의 질병 또는 병리 예방 또는 치료, 혈관장애 및/또는 과다피지분비 관련 문제의 예방 또는 치료, 또는 항-여드름, 항-노화, 치유, 보습화, 감량 및/또는 항-부분 비만, 항-알레르기 및 친-색소침착 제품에 사용되는 조성물 또는 추출물에 관한 것이다. 마지막으로, 본 발명은 상기 조성물 또는 추출물을 투여하는 외관 또는 상태 개선을 위한 피부, 각질 부속기관, 점막에 대한 화장방법에 관한 것이다.
풍접초 ( 기난드로프시스 기난드라 , Gynandropsis gynandra)는 풍접초 (Capparaceae)과 식물이다. 학명은 기난드로프시스 기난드라 (L.) 브리끄 또는 기난드로프시스 펜타필라 또는 클레오메 기난드라이다. 또한 지역에 따라 달라지는 다양한 통속명으로 불린다. 예를들면:
(부르키나 서남쪽) 줄라어로는“Wouin wouin” 및 (브르키나파소 중앙) 몰레어로는 “Kyenebdo” 및 다양한 아프리카 민족어로는 많은 다른 명칭들;
프랑스어로는 “Cleome,” “Gynandro” 및 “Mouzambe a fleurs blanches”;
영어로는 “Cat’s whiskers” 또는 “spider flower”, 및
독일어로는 “Senfkapper” 및 “Benzoinbaun”.
작은 일년생 초본식물, 야생종은 1.5 m까지 자라는 높이가 15 내지 30 cm의 경작식물로 작은 잎과 때로는 붉은색의 둥근 줄기를 가진다. 개화되면 작은 푸른색 내지 연보라 꽃을 피운다. 열매는 길이가 4 내지 6cm의 스핀들-형태 꼬투리이고 여러 매우 작은 검정색의 종자들을 가진다.
잎과 줄기는 다음과 같은 화합물을 가지는 것으로 기재된다:
이소티아시아네이트 (클레오민),
스테롤 핵 (루페올, 캄페스테롤, 에피루페올),
비타민 C (127-484 mg/100 g),
β-카로텐 (6.7-18.9 mg/100 g),
탄수화물 (4.4-6.4%),
단백질 (3.1-7.7%),
페놀성 화합물 (520-910 mg/100 g),
칼슘 (213-434 mg/100 g), 및
마그네슘 (86 mg/100 g).
일부 저자들은 알칼로이드 존재를 주장하지만 다른 저자들은 그렇지 않다.
잎과 줄기는 다음과 같은 화합물을 함유하는 것으로 기재된다:
29.5% 단백질
28% 지질 (59% 리놀레산 및 약 20% 올레산)
스테롤
페놀성 화합물 (캠퍼롤, 루테올린).
지상 부위 (줄기 및 잎)는 전통적으로 경구 투여되어 사용되었다. 고농도의 비타민 및 미량원소를 가지는 식물로 인식되어, 소스 양념 및, 수프 채소로서 특히 아동 및 성인에게 적합하고 임신 중 특히 추천되는 식용식물로 사용되었다.
지상 부위 및 종자의 오일 추출 후 얻어지는 유박은 가축 사료로 사용된다.
또한, 잎, 줄기 및 씨앗 제제를 경구 섭취하면 살충, 구충, 항기생충 및 항균성 및 항산화 특성을 보일 수 있다. 잎즙은 세안제으로 사용된다. 씨앗은 경구 섭취되고 항구토 특성을 가진다.
여러 전통의약에서 (특히 아프리카 및 인도에서), 본 식물은 경구 섭취되어 통증 (두통, 산통, 위통) 및 전갈에 쏘일 때 치료제로 사용된다. 잎은 고름상처에 직접 적용되어 고름형성을 방지한다.
최근 약학연구는 이러한 전통적 용도 일부를 지지한다: 추출물의 복강내 주사로 생쥐의 진통 작용 (U.R. Ghogare et al., Natural Product Research, 23 (4): 327-333 (2009)); 경구 투여에 의한 래트의 항-관절염 효과 (R.T. Narendhirakannan et al., Molecular and Cellular Biochemistry, 276 : 71-80 (2005)); 경구 투여에 의한 유리한 콜레스테롤 저하 효과 (T. Johns, Journal of Ethnopharmacology, 66 : 1-10 (1999)).
또한, 미국출원 US 2004/0028643A1은 항-노화 조성물에서 사용될 다수의 식물들 스크리닝을 기재한다. 본 미국출원 실시예에 제시된 결과는 클레오메 기난드라 추출물 (식물 일부이지 전체인지 정의되지 않은 메탄올 추출물)은 만족할만한 결과를 주지 않는다. 특히, 항-DPPH 활성 시험 후, 추출물은 상당한 활성을 보이지 않는다고 판단되었다.
이와는 달리, 본 발명자들은 풍접초의 지상 부위 (잎, 줄기, 꽃, 종자) 추출물, 및 바람직하게는 잎 추출물은, 지금까지 알려지지 않은 화장학적 및 피부과학적 특성을 보인다는 것을 확인하였다. 하기 실시예들은 본 발명의 추출물이 상당한 항-DPPH 활성을 보인다는 것을 제시한다.
풍접초 지상부위 추출물이 이러한 특정 특성에 대하여 적용되는 것은 최초의 일이다.
본 발명의 목적은 활성성분으로서 풍접초 지상부위의 추출물 (이하 본 발명 추출물이라 칭함), 바람직하게는 풍접초 잎 추출물을 포함하는 조성물을 제공하는 것이고, 추출물은 추출물 건량 기준으로 갈산 당량으로 표기할 때 최소한 3중량%의 폴리페놀을 포함한다.
도 1은 백분율로 표기된 활성제 농도 함수로서 P. acnes에 의해 자극된 각질세포가 생성한 IL8 (pg/ml)을 나타낸다.
도 2는 풍접초 (GG) 추출물 0.001% 및 0.005% (w/v 활성물질) 또는 기준 물질 (10 ng/ml EGF) 존재에서 0 (T0), 24 (T24), 48 (T48) 및 72 시간 (T72) 배양된 대조군 세포 또는 세포의 사진이고, T0은 상처를 만든 순간이다.
도 2는 풍접초 (GG) 추출물 0.001% 및 0.005% (w/v 활성물질) 또는 기준 물질 (10 ng/ml EGF) 존재에서 0 (T0), 24 (T24), 48 (T48) 및 72 시간 (T72) 배양된 대조군 세포 또는 세포의 사진이고, T0은 상처를 만든 순간이다.
바람직하게는, 폴리페놀은 플라보노이드이다. 특정 특성에 의하면, 추출물은 추출물 건량 기준으로 루틴 당량으로 표기할 때 최소한 1중량%, 바람직하게는 최소한 3중량% 플라보노이드를 포함한다.
본 발명인 풍접초 추출물은 선택적으로 조성물에서 적합한 부형제와 조합된다.
본 조성물은 바람직하게는 화장학적, 피부과학적 또는 약학조성물이다.
본 조성물은 바람직하게는 피부, 각질 부속기관 및/또는 점막, 특히 환경, 예를들면 UV 방사선 또는 오염에 민감하거나 손상된피부, 각질 부속기관 및/또는 점막에 국부적으로 적용된다.
본 추출물은 바람직하게는 풍접초 잎 추출물이다.
*본 발명의 추출물은 추출물 건량 기준으로 갈산 당량으로 표기될 때 최소한 3중량%의 폴리페놀 농도 (폴린-시오칼토 분석)에 특징이 있다.
본 추출물에 존재하는 폴리페놀 중, 플라보노이드에 특히 관심이 있다. 따라서, 본 발명의 바람직한 실시태양에서, 본 발명에 의한 추출물은 플라보노이드 함량 (염화알루미늄 분석)이, 추출물 건량 기준으로 루틴 당량으로 표기될 때 최소한 1중량%의 플라보노이드에 특징이 있다. 이러한 플라보노이드는 바람직하게는 주로 루틴 및 이의 유도체로 이루어진다.
루틴은 식 (I)의 화합물이다:
루틴 유도체는 바람직하게는 플라본 핵이 루틴, 즉 식 (II)의 잔기인 화합물이다:
본 발명의 추출물에 함유된 플라보노이드에서, 루틴 및 이의 유도체는 바람직하게는, 플라보노이드 총 중량 기준으로 루틴 당량으로 표기될 때, 최소한 50%, 바람직하게는 최소한 60%, 더욱 바람직하게는 최소한 70%, 더더욱 바람직하게는 최소한 80% 함유된다.
본 발명의 바람직한 실시태양에 의하면, 추출물은 추출물 건량 기준으로 중량 백분율로서 0 내지 80%, 바람직하게는 10 내지 80%, 더욱 바람직하게는 30 내지 70% 당을 함유한다.
본 발명의 추출물은 바람직하게는 건조 추출물 총 중량 기준으로 중량 백분율로서 0 내지 50중량%, 더욱 바람직하게는 0 내지 20중량%, 더더욱 바람직하게는 0 내지 10중량%의 풍접초 지질을 함유한다.
본 발명의 추출물은 바람직하게는 건조 추출물 총 중량 기준으로 중량 백분율로서 0 내지 60중량%, 더욱 바람직하게는 0.5 내지 30중량%, 더더욱 바람직하게는 0.5 내지 10중량%의 풍접초 단백질 (브래드포드 분석)을 함유한다.
본 추출물은 바람직하게는 수성 및/또는 알코올성 및/또는 글리콜 및/또는 글리세롤 용매 중 풍접초의 신선하거나 마른 지상부위의 고체-액체 추출법으로 얻어진다. 지상 부위는 바람직하게는 잎이다.
용매는 바람직하게는 물, 에탄올, 글리세롤, 글리콜 예를들면 프로판디올, 및 이들의 혼합물 예를들면, 다른 용매 기준으로 0 내지 100% 물 비율, 더욱 바람직하게는 다른 용매 기준으로 10 내지 50% 물의 이성분 혼합물로 이루어진 군에서 선택된다.
특히, 물 및 에탄올, 글리세롤 및 프로판디올에서 선택되는 1종의 용매로 이루어진 유형의 이성분 용매 혼합물이 이용된다.
더욱 상세하게는, 0.1 내지 50중량%, 바람직하게는 1 내지 10중량%, 바람직하게는 5중량% (총 중량 기준으로 건량 백분율로서)의 식물의 바람직한 부분 (건량)이 추출 용매에 투입된다. 풍접초의 건조 부분은 단독 또는 조합으로 잎, 줄기, 꽃, 종자, 및 바람직하게는 잎일 수 있다.
에탄올 존재에서는, 수중 0 내지 100% 에탄올, 바람직하게는 10 내지 80% 에탄올, 및 바람직하게는 60 내지 80%가 선택된다 (물 + 에탄올 총 중량 기준으로 에탄올 중량 백분율로서).
글리세롤 존재에서, 수중0 내지 100% 글리세롤, 바람직하게는 30 내지 80%, 및 바람직하게는 80%가 선택된다 (물 + 글리세롤 총 중량 기준으로 글리세롤 중량 백분율로서).
글리콜, 더욱 상세하게는 프로판디올 존재에서, 수중 0 내지 100% 프로판디올, 바람직하게는 10 내지 80%, 및 바람직하게는 60%가 선택된다 (물 + 프로판디올 총 중량 기준으로 프로판디올 중량 백분율로서).
추출 온도는 바람직하게는 4 내지 100°C, 바람직하게는 10 내지 60°C, 및 더욱 상세하게는 15 내지 30°C이다.
추출시간은 바람직하게는 30 분 내지 4 시간, 바람직하게는 30 분 내지 2 시간, 및 더욱 바람직하게는 약1 시간이다.
추출 종류 후, 바람직하게는 예를들면 여과, 세틀링 또는 원심분리에 의해 잔류 건조물을 액상과 분리한다. 이렇게 획득된 액상은 적합한 공극크기의 필터를 통하여 여과되어 맑은 용액을 얻는다.
이러한 제1 분리단계들은, 예를들면 초미세여과 및/또는 나노여과에 의한 정제단계로 이어지고, 다른 성분들을 제거하여 잠재적인 관심 분자들로 농축할 수 있다.
획득 추출물은 액상으로 제공될 수 있지만 당업자에게 알려진 방법, 예를들면 말토덱스트린과 같은 지지체 유무에서 원자화 또는 냉동-건조에 의해 건조될 수 있다.
본 발명의 다른 목적은 다음 연속 단계들로 구성되는 풍접초 지상부위의 추출물 제조방법에 관한 것이다:
(a) 적합한 용매 중 풍접초 지상부위, 및 바람직하게는 잎의 액-상 분산;
(b) 단계 (a)에서 얻어진 혼합물을 수성 및/또는 알코올성 및/또는 글리콜 및/또는 글리세롤 용매 중에서 추출;
(c) 단계 (b)에서 얻어진 추출물의 원심분리 및/또는 여과;
(d) 필요하다면, 단계 (c)에서 얻어진 추출물의 초미세여과 및/또는 정용여과 및/또는 나노여과;
(e) 단계 (c) 또는 (d) 이후, 풍접초 지상부위의 추출물 회수;
(f) 지지체 유무에서 단계 (e)에서 얻어진 추출물의 선택적 건조.
단계 (a) 과정에서, 바람직하게는 다음 비율로 잎이 사용된다: 총 중량 기준으로 마른 잎의 중량 백분율로서 0.1 내지 50% 마른 잎, 바람직하게는 5 내지 20%, 및 바람직하게는 5%.
단계 (b)는 바람직하게는 교반 중에 수행된다. 어떠한 효소도 첨가되지 않는다.
단계 (c) 과정에서, 바람직하게는 다음 용매가 단독 또는 물과 조합되어 사용된다: 에탄올, 글리세롤 또는 프로판디올이, 바람직하게는 수중 30 내지 90% 이들 용매, 및 더욱 바람직하게는 50 내지 80% (용매 + 물 종 중량 기준으로 용매 중량 백분율로서) 비율.
추출물은 바람직하게는 조성물 예를들면 화장, 피부과학적 또는 약학조성물에서, 하나 이상의 적합한 부형제와 함께 활성제로 적용된다. 조성물은 풍접초 지상부위의 추출물와 함께 최소한 하나의 다른 활성화합물을 더욱 포함한다. 이러한 다른 화합물은 하기 모든 화합물 및 동등한 기능적 균등물로부터 선택될 수 있다.
다른 화합물은 특히, 피부연화제, 보습활성제, 각질조절인자, 각질용해제, 치유제 및/또는 피부장벽 재구성제, PPAR, RXR 또는 LXR 작용제, 피지-조절제, 항-자극 및/또는 항-염증 및/또는 진정제, 항산화제, 항-노화제, 미백 또는 저색소침착제, 색소제, 지방분해제 또는 지방형성 억제제 또는 항-부분 비만 또는 감량제, 무기 또는 유기 태양광 차단제 및 필터, 항진균 화합물, 보존제, 항균제, 프리바이오틱스 및 프로바오이틱스, 항생제, 및 면역조절제와 같은 당업자에게 알려진 피부과, 약학 또는 화장품에서 통상 사용되는 활성제에서 선택된다.
더욱 상세하게는, 조합적으로 사용 가능한 상처치유제 및/또는 피부장벽 재구성제는 바람직하게는 판테놀 (비타민 B5), 아라비노갈락탄, 산화아연, 세라미드, 콜레스테롤, 스쿠알란 및 인지질이다.
조합적으로 사용 가능한 피지-조절제는 바람직하게는 5-알파 환원효소 억제제로 이루어진 군에서 선택된다. 또한 아연 (및 아연 유도체 예를들면 이의 글루콘산염, 살리실산염 및 피로글루탐산) 및 시피로노락톤 역시 피지-억제 활성을 가진다. 피지에 작용하는 지질 유래 기타 피지조절제 예를들면 리놀레산 역시 흥미롭다.
항-염증 및/또는 항-자극 및/또는 진정제는 아라비노갈락탄일 수 있다.
조합적으로 사용가능한 햇빛 보호 활성제는 UVB 및/또는 UVA 필터 또는 태양 차단제, 예를들면 보호 정도에 따라 선택 및 농도를 적용할 수 있는 본 분야의 숙련가에게 알려진 무기 및/또는 유기 차단제 또는 필터를 포함한다.
조합적으로 사용 가능한 보존제는, 예를들면, 화장품에 일반적으로 사용되는 것, 항균 활성 (유사-보존제)을 가지는 분자들 예를들면 카프릴릭 유도체, 예를들면, 카프릴로일 글리신 및 글리세릴 카프릴레이트; 헥산디올, 레불린산나트륨, 및 구리 및 아연 유도체 (글루코네이트 및 PCA)이다.
본 발명의 추출물과 조합 가능한 추천 활성제 중에서, 식물추출물이 특히 언급된다:
식물성 오일 예컨대 대두유 및/또는 유채씨유, 아보카도 오일 (WO2004/012496, WO2004/012752, WO2004/016106, WO2007/057439), 루핀 오일, 바람직하게는 감미 백색 루핀 오일 (WO 98/47479), 또는 이들 오일 혼합물;
동물성 또는 식물성 오일, 특히 해바라기 유지증류액 또는 농축물, 더욱 바람직하게는 리놀산 해바라기 농축물, 예컨대 Laboratoires Expanscience에서 판매하는 해바라기 오일 불검화물 농축물 (Soline®) (국제출원 WO 01/21150 참고), 아보카드 오일, 유채씨유, 옥수수유 또는 팜유 불검화물 농축물 특히 이들은 보습화 및/또는 피부연화제, 치유 및/또는 피부장벽 재구성, 항-염증 및/또는 항-자극 및/또는 진정 활성에 유용하며;
식물 또는 식물성유, 바람직하게는 국제출원 WO 01/21605에 기재된 방법으로 획득되는 아보카도 푸란의 불검화물 (Avocadofurane®), 아보카도 및/또는 대두 불검화물, 더욱 상세하게는 아보카도의 푸란 불검화물 및 대두의 불검화물 혼합물, 바람직하게는 약1/3-2/3의 혼합물 (예컨대 Piascledine®), 대두 불검화물 (국제출원 WO 01/51596에 기재된 방법에 따라 획득), 스테롤성 불검화물 (전형적으로 불검화물 총 중량 기준으로 스테롤, 메틸스테롤 및 트리테르펜 알코올 비율이 20 내지 95중량%, 바람직하게는 45-65중량%인 불검화물), 피토스테롤, 스테롤 에스테르 및 비타민 유도체 특히 이들은 치유 및/또는 피부장벽 재구성, 항-노화, 항-염증 활성에 유용하며;
식물성 아미노산 펩티드 또는 복합체, 특히 아보카도 펩티드 (예컨대 국제출원 WO2005/105123에 기재된 것들), 루핀 펩티드 (예컨대 출원 WO2005/102259에 기재된 방법에 따라 획득된 것), 퀴노아 펩티드 (예컨대 국제출원 WO2008/080974에 기재된 것), 마카 펩티드 (예컨대 국제출원 WO2004/112742에 기재된 것), 발효 또는 미-발효 대두 펩티드, 특히 보습화 및/또는 피부연화제 활성 (아보카도)에 유용한 쌀 펩티드 (예컨대 국제출원 WO2008/009709에 기재된 것), 이들은 각질조절 활성 (루핀, 퀴노아), 치유 및/또는 피부장벽 재구성 활성 (마카, 퀴노아, 대두), 항-염증 및/또는 항-자극 및/또는 진정 활성 (루핀, 퀴노아), 항산화 활성 (아보카도), 항-노화 활성 (루핀, 마카), 색소화 활성 (쌀)에 유용하며, 쉬산드라 펩티드 (예컨대 특허출원 FR 0955344에 기재된 것), 아카시아 마크로스타키아 종자 추출물 (예컨대 특허출원 FR 0958525에 기재된 것) 동부 (비그나 운퀴쿨라타) 종자 추출물 (예컨대 특허출원 FR 0958529에 기재된 것);
식물성 당, 특히 각질조절, 치유 및/또는 피부장벽재구성, 항-염증 및/또는 항-자극 및/또는 진정특성이 유용한 특히 아보카도 당 (예컨대 출원WO2005/115421에 기재된 것);
*부틸 아보카데이트 (5 알파 Avocuta®), 5-알파 환원효소 억제제 (WO 01/52837 및 WO 02/06205 참고) 및 전형적으로는, 증가되는 여드름 및 비듬에서 발견되는 지루성 분비 조절제;
폴리페놀-풍부 추출물, 및 더욱 상세하게는 아보카도 열매 추출물 (예컨대 출원 FR 1 061 055에서 기재된 것) 및 마카 잎 추출물 (예컨대 출원 FR 1 061 047에서 기재된 것);
특히 치유 촉진에 유용한 루페올 (FR 2 822 821, FR 2 857 596);
자극 치료에 특히 적합한 루핀 전체 추출물 (예컨대 국제출원 WO2005/102259에 기재된 것);
특히 보습화 특성이 인정되는쿠푸아수 버터.
본 발명의 추출물과 조합되는 추천 활성제 중, 특히 2-운데실-4-히드록시메틸-4-메틸-1,3-옥사졸린, 2-운데실-4,4-디메틸-1,3-옥사졸린, (E)-4,4-디메틸-2-헵타데스-8-엔일-1,3-옥사졸린, 4-히드록시메틸-4-메틸-2-헵타데실-1,3-옥사졸린, (E)-4-히드록시메틸-4-메틸-2-헵타데스-8-엔일-1,3-옥사졸린, 2-운데실-4-에틸-4-히드록시메틸-1,3-옥사졸린, 바람직하게는 2-운데실-4,4-디메틸-1,3-옥사졸린 (OX-100 또는 Cycloceramide®; WO2004050052, WO2004050079 및 WO2004112741)로 이루어진 군에서 선택되는 옥사졸린이 언급된다. 이들은 특히 항-염증 및/또는 항-자극 및/또는 진정, 항산화, 미색, 면역조절 활성이 유용하다.
본 발명의 추출물과 조합되는 추천 활성제 중, 5-알파 환원효소 억제제 예컨대 부틸 아보카데이트 (5 알파 Avocuta®)가 언급될 수 있다.
이들 모든 조합은 풍접초 지상부위의 추출물 이외 최소한 하나의 다른 활성 화합물을 포함하며, 상기의 둘, 셋, 넷 또는 이상의 활성 화합물을 포함할 수 있다.
본 발명에 의한 조성물은 국소 투여, 경구, 직장, 질, 비강, 심방 또는 기관지투여, 또는 비경구 투여에 적합한 다양한 제제로 제형화 될 수 있다. 바람직하게는 본 발명의 조성물은 국소 투여에 적합한 더욱 상세하게는 피부 및/또는 각질 부속기관 및/또는 점막에 적용되는 다양한 제제로 제형화 될 수 있다.
제1 형태에 의하면, 다양한 제제는 국소 투여에 적합하며, 특히 크림, 에멀션, 밀크, 고약, 로션, 오일, 수성 또는 물-알코올 또는 글리콜 용액, 분말, 패치, 분무, 샴프, 바니쉬 또는 기타 외용 생성물을 포함한다.
본 발명에 의한 화합물 및 조성물 투여 형태, 용량 및 최적 제제 형태는 약학적 치료, 특히 환자 또는 동물의 피부과학적, 화장학적 또는 수의학적 치료에서 고려되는 기준에 따라, 예를들면 환자 또는 동물의 연령 또는 체중, 병태 경중도, 치료 내성, 알려진 2차 효과, 피부 타입에 따라 결정될 수 있다. 원하는 투여 타입에 따라, 본 발명의 조성물 및/또는 활성화합물은 최소한 하나의 약학적으로 허용되는 부형제, 특히 피부과학에서 허용 가능한 부형제 또는 화장학적으로 허용 가능한 부형제를 더욱 포함할 수 있다. 제1 형태에 의하면, 외용 국소 투여에 적합한 부형제가 사용될 수 있다. 본 발명에 의한 조성물은, 본 분야의 숙련가에게 알려진 약학적 첨가제인, 증점제, 보존제, 향료, 착색제, 화학 또는 무기 필터, 보습제, 온천수 등에서 선택되는 최소한 하나의 첨가물을 더욱 포함할 수 있다.
풍접초 지상부위의 추출물을 포함한 본원에 기재된 조성물은 화장학적 또는 피부과학적 용도를 의도한다. 본 조성물은 바람직하게는 국소 투여에 적합한 제제 형태로 제형화 될 수 있다.
본 발명의 다른 목적은 화장학, 약학 또는 피부과학적 조성물로 사용되는 본 발명의 조성물 또는 상기된 풍접초 지상부위의 추출물, 바람직하게는 화장학적 또는 피부과학적 조성물이다.
바람직하게는, 본 발명의 조성물 또는 추출물은 피부 및/또는 점막 및/또는 각질 부속기관의 질환 또는 병리의 예방 및/또는 치료에 사용된다.
특히, 본 발명의 조성물 또는 추출물은 여드름 관련 질환 예방 및 /또는 치료에 사용된다.
여드름 생리병리학은 과다피지분비, 털집 각화항진 (면포형성) 및 여드름 균 (프로피오니박테리움 아크네스, P. acnes)에 의한 세균 군집화를 포함한 다양한 촉발 인자들과 연관된다. 이들 인자들은 복잡하게 상호 연관된다 Bellew et al . 2011, 10(6): 582-585).
피지선에 의한 피지 분비는 여드름 형성에 중요한 역할을 한다. 실제로, 피지 특성 변화와 관련된 과다피지분비는 각화항진을 유발하고 따라서 P. acnes 증식에 유리한 환경을 제공한다.
또한 여드름은 과다 P. acnes 발생과 연관된다. 이러한 공생균은 여드름 환경 (과다피지분비, 염증, 털집 폐쇄)에 유리한 기회 병원균으로 기능한다. P. acnes 는 면포형성 및 염증을 악화시키는 다양한 인자들을 생성한다: 톨-유사 수용체 (TLR)를 통한 염증 유발 및 유지 신호화, 털집벽 파괴 유발 효소 방출, 호중구 화학주성 인자 생성.
따라서 본 발명의 조성물 또는 추출물은 과다피지분비, 예컨대 지루피부염 (유가), 여드름 및 여드름성 피부, 및 비듬 관련 질환의 예방 및/또는 치료에 사용된다.
본 발명의 조성물 또는 추출물은 특히 혈관 보호 및/또는 혈액순환, 특히 혈액 미세순환에 작용하여 혈관장애 예방 및/또는 치료에 유용하다.
따라서 본 발명의 조성물 또는 추출물은 바람직하게는 예컨대 만성붉음증, 피부 홍반, 장미증, 가려움증, 홍조를 띤 특히 피하 모세혈관 확장으로 인한 반응성 피부 및/또는 점막에서 발생할 수 있는 (만성) 피하 모세혈관 확장 예방 및/또는 치료에 유용하다.
또한 본 발명의 조성물 또는 추출물은 바람직하게는 노령화 및 광-유발 노화 예방을 위한 노령화 또는 광-유발 항-노화 생성물 및 반흔 및 피부 형성 관련 질환의 예방 및/또는 치료에서 치유제로 사용될 수 있다.
“반흔 및 피부 형성 관련 질환"이란 피부 예컨대 처진 피부, 튼살, 흉터, 균열, 특히 가슴 피부 갈라짐과 같은 상처치유 및 피부 형성에 따른 질환을 의미한다.
특히, 본 발명의 조성물 또는 추출물은 미성숙, 정상 또는 성숙/노화 피부, 각질 부속기관 (모발 또는 손발톱) 및/또는 점막 (치은, 치주, 생식기 점막)의 장벽 또는 항상성의 질환 예방 및/또는 치료에 사용되는 보습화 생성물로서 사용될 수 있다.
“피부, 각질 부속기관 및/또는 점막의 장벽의 질환”이란 피부 외층 수준에서의 질환을 의미한다.
“피부, 각질 부속기관 및/또는 점막의 항상성의 질환” 이란 예컨대 건선, 기저기 발진, 아토피성 피부염, 마른 피부 (건조증), 탈수 피부 및 광민감성 피부와 같은 세포 재생 및 균형 과정에서 유발되는 질환을 의미한다.
또한 본 발명의 조성물 또는 추출물은 바람직하게는 모든 종류의 광선으로 인한 염증, 특히 화상 치료 및/또는 예방에 사용된다.
또한 본 발명의 조성물 또는 추출물은 바람직하게는 지방조직, 부분 비만 조절 더욱 상세하게는 지방형성 억제에 의한 감량제로 사용된다.
본 발명의 조성물 또는 추출물은 예컨대 알레르기성 피부염, 접촉피부염, 습진 및 가려움증과 같은 반응 또는 알레르기성 병리의 예방 및/또는 치료에서 항-알레르기 생성물로 사용될 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 조성물 또는 추출물은 탈색, 예컨대 탈색 피부 (백반증)과 같은 탈색 질환을 보이는 피부 반응, 질환 또는 병리의 예방 및/또는 치료에서 친-색소침착제로 사용될 수 있다.
바람직하게는, 본 발명의 조성물 또는 추출물은 피부의 반응, 장애 또는 병리; 또는 예컨대 모발의 각질 부속기관의 반응, 장애 또는 병리 (탈모, 비듬, 다모증, 털집염); 또는 점막 예컨대 치은염 (신생아 민감성 치은, 담배 또는 기타 원인에 의한 위생 문제), 치주염을 보이는 치은 및 치주 또는, 선천성 면역 (항균 펩티드) 또는 후천성 면역 (세포성, 체액성, 시토카인) 결핍 관련 내부 또는 외부 남성 또는 여성 생식기에 자극을 주는 생식기 점막의 반응, 장애 또는 병리 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다.
또한 본 발명은 상태 및/또는 외관 개선 관점에서 피부 및/또는 각질 부속기관 및/또는 점막의 화장방법에 관한 것이고, 본 발명의 조성물 또는 추출물을 이를 필요로 하는 환자의 피부 및/또는 각질 부속기관 및/또는 점막에 적용하는 단계로 구성된다.
본 발명 화장방법의 일 실시태양에서, 의도되는 피부 및/또는 각질 부속기관 및/또는 점막은 바람직하게는 환경 (UV, 오염)에 의한 민감성, 자극성 또는 손상된 것들이고, 특히 민감성 피부이다. 때로 민감성 피부는전형적으로는 매일 당김 또는 아린감이 있는 홍조를 띤다 (특히 안면 피부).
본 발명의 화장방법은 특히 여드름 및 여드름 경향의 피부를 개선하고 비듬을 개선할 수 있다.
또한 본 발명의 화장방법은 항-노령화 또는 광-유발 항-노화, 보습화, 감량화 및/또는 항-부분 비만 제품에 있어서 조성물 또는 추출물 적용에 특징이 있다.
실시예
1
80/20 (w/w) 에탄올/물 혼합물 중 5%의 마르고 분쇄된 풍접초 잎 줄기를 1 시간 동안 실온에서 교반하면서 현탁하였다. 여과, 세틀링 또는 원심분리하여 건조 잔류물을 액상과 분리하였고 획득된 액상을 적합한 공극크기 필터로 여과하여 맑은 용액을 얻었다. 획득 추출물은 다음과 같은 특성을 가진다:
총 당 (안트론): 41%/건량
총 폴리페놀 (폴린-시오칼토); 갈산 당량: 7.7%/건량
단백질 (브래드포드 분석): 3.1%/건량.
본 추출물은 항-라디칼 활성, “튜브내” 항-DPPH 활성을 가지고, 50% 저해 농도 (IC50)가 건조 추출물의 0.2 mg로 결정되고 이는 반응매질 중 19 μg 폴리페놀을 나타낸다.
실시예
2
80/20 (w/w) 글리세롤/물 혼합물 중 5%의 마르고 분쇄된 풍접초 잎 줄기를 1 시간 동안 실온에서 교반하면서 현탁하였다. 여과, 세틀링 또는 원심분리하여 건조 잔류물을 액상과 분리하였고 획득된 액상을 적합한 공극크기 필터로 여과하여 맑은 용액을 얻었다. 획득 추출물은 다음과 같은 특성을 가진다:
총 당 (안트론): 65%/건량
총 폴리페놀 (폴린-시오칼토); 갈산 당량: 6.4%/건량
플라보노이드 함량 (AlCl3); 루틴 당량: 4%/건량
단백질 (브래드포드 분석): 4.0%/건량.
본 추출물은 항-라디칼 활성, “튜브내” 항-DPPH 활성을 가지고, 50% 저해 농도 (IC50)가 건조 추출물의 0.09 mg로 결정되고 이는 반응매질 중 7.1 μg 폴리페놀을 나타낸다.
실시예
3
60/40 (w/w) 프로판디올/물 혼합물 중 5%의 마르고 분쇄된 풍접초 잎 줄기를 1 시간 동안 실온에서 교반하면서 현탁하였다. 여과, 세틀링 또는 원심분리하여 건조 잔류물을 액상과 분리하였고 획득된 액상을 적합한 공극크기 필터로 여과하여 맑은 용액을 얻었다. 획득 추출물은 다음과 같은 특성을 가진다:
총 당 (안트론): 32%/건량
총 폴리페놀 (폴린-시오칼토); 갈산 당량: 7.6%/건량
플라보노이드 함량 (AlCl3); 루틴 당량: 4.8%/건량
단백질: 1%.
본 추출물은 항-라디칼 활성, “튜브내” 항-DPPH 활성을 가지고, 50% 저해 농도 (IC50)가 건조 추출물의 0.16 mg로 결정되고 이는 반응매질 중 14 μg 폴리페놀을 나타낸다
실시예
4: 국소적용조성물
본 발명자들은 국소 도포용 하기 여러 조성물들을 하기한다. 풍접초 지상부위 추출물은 예컨대 하기 조성이 제시된 세정수, 수-중-유 에멀션, 유-중-수 에멀션, 오일, 밀크, 로션, 샴프, 거품제 및 분무제인 다양한 화장 제품에 포함된다. 백분율은 조성물 총 중량 기준의 중량 백분율로 나타낸다.
실시예
5:
풍접초추출물의생물학적활성
A.
여드름에대한생물학적활성
A.1.
과다피지분비에대한작용
:
피지선세포에의한지질합성억제
- 재료 및 방법:
50 μΜ 아라키돈산에 의해 자극 또는 자극되지 않은 인간 피지선세포 (SZ95 세포주)를 0.005%, 0.01% 및 0.02% (w/v 활성물질) 풍접초 (GG) 추출물 또는 기준 억제제로 24시간 또는 48시간 처리하였다.
처리 후, 나일 레드로 염색 후 형광 측정에 의해 중성지질을 정량하였다. 본 측정치는, 상대 형광단위 (RFU)로 나타내고 피지선세포에 의한 세포내 지질 “데보노” 합성을 반영한다.
결과를 일원분산분석 (ANOVA) 이어 두네트 검정으로 통계적으로 분석하였다.
- 결과 및 결론:
GG 추출물은 기본 조건 (구성성 합성) 및 아라키돈산 자극에서 피지선세포에 의한 지질 생성을 강하고도 유의하게 저해하였다 (표 1).
이러한 결과는 GG 추출물은 여드름에서 증가하는 피지 생성 조절 관점에서 유의하다.
표 1:
피지선세포에의한지질합성
| 24 시간 | 48 시간 | ||||
| RFU (평균 ± SEM) | 저해 (%) | RFU (평균 ± SEM) | 저해 (%) | ||
| 기본 상태 피지선세포 | 대조군 | 29640.28 ± 1019.29 | 97604.09 ± 3736.99 | ||
| 0.005% GG | 25440.10 ± 198.28 | 14 p <0.01 | 74085.896 ± 1047.96 | 24 p <0.05 | |
| 0.01% GG | 22893.63 ± 475.55 | 23 p <0.001 | 46292.89 ± 2805.65 | 53 p <0.001 | |
| 0.02% GG | 19276.25 ± 883.24 | 35 p <0.001 | 43252.41 ± 1149.51 | 56 p <0.001 | |
| 기준 억제제 | 29640.28 ± 1019.29 | 0 ns | 45229.89 ± 10406.07 | 54 p<0.001 | |
| 아리키돈산에 의해 자극된 피지선세포 | 아라키돈산 | 58393.80 ± 1667.47 | 263211.67 ± 19744.67 | ||
| 0.005% GG | 54804.64 ± 654.07 | 6 ns | 209406.77 ± 5875.92 | 20 p <0.05 | |
| 0.01% GG | 45644.06 ± 623.10 | 22 p <0.001 | 108301.22 ± 4605.77 | 59 p <0.001 | |
| 0.02% GG | 30823.73 ± 1310.56 | 47 p <0.001 | 43726.41 ± 1809.07 | 83 p <0.001 | |
| 기준 억제제 | 44282.33 ± 645.11 | 24 p<0.001 | 91723.64 ± 696.97 | 65 p<0.001 | |
A.2.
여드름악화인자들에대한작용
1
. 각질세포 모델
- 재료 및 방법:
인간 각질세포 (NCTC-2544 세포주)를 풍접초 (GG) 추출물 0.01% 및 0.02% (w/v 활성물질) 존재 또는 부재 (대조군) 또는 기준 분자 (10-7 M 덱사메타손, 10-6 M 인도메타신)와 함께 24 시간 예비 배양하였다. GG 또는 기준물질 존재의 세포를 0.1 μg/ml 포르볼 미리스테이트 아세테이트 (PMA)로 24 시간 동안 처리하였다.
처리 후, 배양 상등액 중 분비된 인터루킨 8 (IL8) 및 프로스타글란딘 E2 (PGE2)을 ELISA로 정량하였다. 결과를 스튜던트 t-검정으로 통계적 분석하였다.
- 결과 및 결론:
GG 추출물은 각질세포에서 PMA로 자극된 IL8 및 PGE2 여드름 악화 조절자 생성을 강하고도 유의하게 억제하였다 (표 2).
GG 추출물은 여드름 악화 인자들을 조기에 조절한다.
표 2:
각질세포에의한IL8
및
PGE2생성
| IL8 (ng/ml) |
저해 | |
| 대조군 세포 | 0.1 ± 0.0 | |
| 0.1 μg/ml PMA | 50.1 ± 1.8 | |
| 10-7 M 덱사메타손 | 7.4 ± 0.8 | 85% p<0.001 |
| 0.01% GG | 28.3 ± 0.5 | 44% p<0.001 |
| 0.02% GG | 17.6 ± 0.5 | 65% p<0.001 |
| PGE2 (ng/ml) |
저해 | |
| 대조군 세포 | 0.039 ± 0.0 | |
| 0.1 μg/ml PMA | 138.4 ± 10.6 | |
| 10-6 M 인도메타신 | 0.039 ± 0.0 | 100% p<0.001 |
| 0.01% GG | 24.1 ± 3.0 | 83% p<0.001 |
| 0.02% GG | 9.8 ± 0.0 | 93% p<0.001 |
2. 각질세포에 대한 P . acnes 효과조절 - 재료 및 방법:
인간 각질세포 (HaCaT 세포주)를 풍접초 (GG) 추출물 0.0005%, 0.002%, 0.008% 및 0.031% (w/v 활성물질) 또는 기준 억제제, 니코틴아미드 존재에서 48 시간 예비 배양하였다.
각질세포를 P. acnes (균주 ATCC6919) 현탁액에 18 시간 동안 배양하여 자극하였다.
배양 후, 배양 상등액 중 각질세포에 의해 생성된 IL8를 ELISA로 정량하였다.
결과를 스튜던트 t-검정으로 통계적 분석하였다: ns (유의하지 않음) p>0.05, *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001.
- 결과 및 결론:
도 1은 백분율로 표기된 활성제 농도 함수로서 P. acnes에 의해 자극된 각질세포가 생성한 IL8 (pg/ml)을 나타낸다.
GG 추출물은 각질세포에서 P. acnes 에 의한 IL8 생성을 유의하게 저해하였다 (도 1).
GG 추출물은 여드름 생리병리학에 있어서 P. acnes 영향을 조절한다.
3. 항균 펩티드 발현 자극
- 재료 및 방법:
Ca++-풍부 매질에서 배양된 정상 인간 각질세포를 24 시간 동안 풍접초 (GG) 추출물 0.005% (w/v 활성물질)로 처리하였다.
처리 후, 항균 펩티드 (베타-디펜신 2 및 3 -hBD2, hBD3- 및 카텔리시딘 LL37) 유전자 발현을 정량적 실시간 RT-PCR로 분석하였다.
결과를 일원 ANOVA에 이어 두네트 검정으로 통계적 분석하였다: ns (유의하지 않음) p>0.05; **p<0.01; ***p<0.001.
- 결과 및 결론:
GG 추출물은 각질세포 (표 3)에 의한 항균 펩티드 발현을 자극하였다.
따라서, GG 추출물은 피부의 세균 집락화를 제한할 수 있고 따라서 P. acnes 관련 병원성을 제한할 수 있다.
표 3:
각질세포에서항균펩티드
hBD2
,
hBD3
및
LL37유전자발현
in
(상대량)
| HBD2 | HBD3 | LL37 | |
| 대조군 세포 | 1.00 | 1.00 | 1.00 |
| 0.005% GG |
2.70
(+170% **) |
1.85
(+85% ***) |
1.51
(+51% ns) |
4. 호중구 이동 조절 호중구는 여드름 생리병리학에 있어서 중요한 역할을 한다. 호중구는 특히 P. acnes에 의해 생성되는 많은 화학주성 물질로 인하여 여드름성 피부에 다량 존재한다.
- 재료 및 방법:
인간 호중구를 풍접초 추출물 0.001% 및 0.002% (w/v 활성물질) 또는 기준 억제제와 함께 30분 동안 예비 처리하였다.
세포들을 Transwell® 이동 시스템에 넣었다: 예비 처리된 호중구를 1 μΜ의 화학주성인자 fMLP (N-포르밀-Met-Leu-Phe)가 함유된 수용 플레이트 삽입구에 넣었다.
2 시간 배양 후, 이동된 호중구 개수를 젖산탈수소효소 (LDH) 활성을 측정하여 평가하였다.
결과를 스튜던트 t-검정으로 통계적 분석하였다.
- 결과 및 결론:
호중구 이동은 GG 추출물에 의해 유의하게 저해되었다 (표 4).
GG 추출물은 따라서 여드름에서 피부 중 호중구 점증을 방지하였다.
표 4:
호중구이동
| 이동 (%) |
fMLP에 의해 자극된 세포에 대한 저해 | |
| 대조군 세포 | 1.89 ± 0.2 | |
| fMLP | 25.1 ± 3.02 | |
| 억제제 | 6.4 ± 0.26 | -74% p<0.01 |
| 0.001% GG | 8.65 ± 0.24 | -66% p<0.01 |
| 0.002% GG | 14.05 ± 1.26 | -44% p<0.05 |
5. 호중구에 의한 류코트리엔 B4 생성 저해류코트리엔 B4은 호중구에 의해 다량 생성되고 방출되며, 여드름 부위에서 중요한 역할을 하고 피지 분비를 유도한다.
- 재료 및 방법:
인간 호중구를 15 분 동안 풍접초 (GG) 추출물 0.002% 및 0.008% (w/v 활성물질) 존재에서 예비 배양하였다.
세포들을 1 mg/ml 옵소닌화 지모산 (opsonized zymosan)을 첨가하여 자극하였다.
배양 10 분 후, 세포가 방출하는 류코트리엔 B4 (LTB4)을 ELISA 방법으로 세포 상등액에서 분석하였다.
결과를 스튜던트 t-검정으로 통계적 분석하였다.
- 결과 및 결론:
GG 추출물은 호중구에서 옵소닌화 지모산에 의해 유도되는 LTB4 생성을 유의하게 저해하였다 (표 5).
따라서, GG 추출물은 여드름에서 호중구 및LTB4 영향을 조절한다.
표 5:
호중구에의한류코트리엔
B4 생성
| LTB4 (pg/ml) |
저해 | |
| 대조군 세포 | 81.45 ± 7.16 | |
| 자극 세포 | 439.32 ± 3.01 | |
| 0.002% GG | 199.17 ± 4.83 | -54% p<0.001 |
| 0.008% GG | 220.91 ± 1.75 | -49% p<0.001 |
6. 비만세포에 의한 히스타민 방출 억제 히스타민은 피지 생성을 변경시킨다. 실제로, 피지선세포 (피지를 생성하는 피지선 구성 세포)는 표면에 히스타민 수용체를 가진다.
- 재료 및 방법:
비만세포를 풍접초 (GG) 추출물 0.08% (w/v 활성물질) 또는 10 Mm 칼슘 (히스타민 방출의 기준 억제제) 존재에서 30분 동안 예비 배양하였다.
비만세포를 10 μΜ 물질 P로 15 분 동안 자극하였다. 배양 후, 히스타민 방출량을 ELISA로 정량하였다.
결과를 스튜던트 t-검정으로 통계적 분석하였다.
- 결과 및 결론:
GG 추출물은 물질 P에 의해 자극된 비만세포의 히스타민 방출을 강하고도 유의하게 저해하였다 (표 6).
GG 추출물은 여드름에서 히스타민 영향을 조절한다.
표 6:
비만세포에의한히스타민방출
| 히스타민 (ng/ml) |
저해 | |
| 대조군 | 20.1 ± 1.9 | |
| 물질 P | 142.5 ± 9.6 | |
| 10 nM 칼슘 | 21.8 ± 1.0 | -85% p<0.01 |
| 0.08% GG | 12.3 ± 1.3 | -91% p<0.01 |
A.3. 산화스트레스 여드름에는, 산소 자유 라디칼 (OFR) 고농도 생성으로 특정되는 산화스트레스가 존재한다. 여드름 중증도는 OFR 수치와 상관된다.
또한, 여드름에서 스쿠알렌 (피지의 액상 성분)은 산화된다.
1. 항산화효과
- 재료 및 방법:
정상 인간 각질세포를 24 시간 동안 풍접초 (GG) 추출물 0.032% (w/v 활성물질) 또는 10 μg/ml 비타민 C (기준 항산화제)로 예비 처리한 후 H2DCF-DA 프로브 (45 분 배양)를 포함하였다.
각질세포를 100 μΜ 과산화수소 (H2O2)로 20 분 동안 자극하였다.
반응 산소종 (ROS) 생성율을 형광 측정하여 평가하였다.
결과를 스튜던트 t-검정으로 통계적 분석하였다.
- 결과 및 결론:
GG 추출물은 H2O2 에 의해 유도되는 산화스트레스에 대한 반응으로 각질세포에 의한 ROS 생성을 억제하고 (표 7), 따라서 항산화효과를 가진다.
표 7:
H
2
O
2
로처리된각질세포에서ROS생성
| ROS (형광 단위) |
저해 | |
| 자극 세포 (H2O2) | 1474.5 ± 93.32 | |
| 기준 (비타민 C) | 992.83 ± 93.96 | 33% p<0.05 |
| 0.032% GG | 981.33 ± 132.52 | 33% p<0.05 |
2. 지질 과산화에 대한 보호- 재료 및 방법:
저캇 (Jurkat) 세포주의 세포를 풍접초 (GG) 추출물 0.02% (w/v 활성물질) 또는 100 μΜ BHT (기준) 및 지질 과산화에 특이적인 형광 프로브 C11-불소 존재에서45 분 동안 예비 배양하였다.
세포를 UVA+B로 조사하고 30 분 동안 GG 또는 BHT 존재에서 배양하였다.
배양 후, 지질 과산화물 함량을 형광 강도의 유세포분석으로 평가하였다 (산화에 역비례).
결과를 스튜던트 t-검정으로 통계적 분석하였다.
- 결과 및 결론:
GG 추출물은 UV 광선에 의해 유발되는 지질 과산화에 대하여 세포를 유의하게 보호하였다 (표 8).
표 8:
UV
-
유발된지질과산화
| 지질 과산화물 (조사된 대조군의 %) |
보호 (%) | |
| (UV) 조사된 세포 | 100 | |
| 100 μM BHT | 64 | 49% p<0.01 |
| 0.02% GG | 83 | 23% p<0.05 |
A.4. 치유작용: 각질세포이동자극 여드름 부위는 흉악한 흉터를 형성한다. 따라서, 여드름 치료는 친-치유 작용이 동반될 수 있다.
- 재료 및 방법:
정상 인간 각질세포 단층에 인위적 상처를 만들었다.
세포를 칼세인으로 염색하고 72 시간 동안 풍접초 (GG) 추출물 0.001% 및 0.005% (w/v 활성물질) 또는 기준 물질 (10 ng/ml EGF) 존재에서 배양하였다.
0, 24, 48 및 72 시간에서, 각질세포 이동을 현미경 사진으로 관찰하고 상처 표면적을 측정하여 정량화하였다.
도 2는 풍접초 (GG) 추출물 0.001% 및 0.005% (w/v 활성물질) 또는 기준 물질 (10 ng/ml EGF) 존재에서 0 (T0), 24 (T24), 48 (T48) 및 72 시간 (T72) 배양된 대조군 세포 또는 세포의 사진이고, T0은 상처를 만든 순간이다.
결과를 스튜던트 t-검정으로 통계적 분석하였다.
- 결과 및 결론:
GG 추출물은 각질세포 이동을 유의하게 자극하였고 (표 9, 도 2) 48 시간 후 상처가 전체적으로 회복되었다.
GG 추출물은 따라서 피부 치유 과정에서재상피화 과정을 촉진한다.
표 9:
각질세포이동평가
| 이동 면적 (회복된 상처 백분율) |
|||
| 24 h | 48 h | 72 h | |
| 대조군 세포 | 62 | 68 | 71 |
| 기준 (EGF) | 95 (p<0.001) | 99 (p<0.001) | 100 (p<0.001) |
| 0.001% GG | 68 (ns) | 96 (p<0.001) | 99 (p<0.001) |
| 0.005% GG | 72 (ns) | 99 (p<0.001) | 99 (p<0.001) |
B.
기타생물학적활성
B.1
.
지방세포에서지방형성저해
- 재료 및 방법:
*정상 인간 지방세포를 1 시간 동안 풍접초 (GG) 추출물 0.02% (w/v 활성물질) 또는 기준 (20 μΜ 세룰레닌) 존재에서 배양하였다. 배양 후, 방사능 표지 [14C]-아세테이트를 첨가하고 샘플을 밤새 배양하였다.
배양 후, 지질을 추출하고 포함된 방사능 (지방형성에 상당)을 액체 섬광으로 측정하였다.
결과를 스튜던트 t-검정으로 통계적 분석하였다.
- 결과 및 결론:
GG 추출물은 지방세포에 의한 지질 신생합성을 유의하게 저해하였다 (표 10).
따라서, 본 추출물은 감량 (slimming)효과를 가진다.
표 10:
지방세포에서지방형성평가
| 아세테이트 결합 (cpm) |
저해 | |
| 대조군 세포 | 32895 ± 1358 | |
| 기준 (세룰레닌) | 14934 ± 671 | 55% p<0.001 |
| 0.02% GG | 26573 ± 227 | 19% p<0.05 |
B.2. 멜라닌세포에의한멜라닌생성증가 - 재료 및 방법:
정상 인간 표피 멜라닌세포를 풍접초 (GG) 추출물 0.002% 및 0.01% (w/v 활성물질) 및 10-7 M NDP-MSH (멜라닌 합성 자극) 존재에서 240 시간 배양하였다.
배양 후, 멜라닌을 세포에서 추출하고 분광 측정으로 정량화하였다.
결과를 스튜던트 t-검정으로 통계적 분석하였다.
- 결과 및 결론:
GG 추출물은 멜라닌 생성에 대한 NDP-MSH 효과를 자극하고 촉진하였다 (표 11).
추출물은 따라서 친-색소침착 효과를 가진다.
표 11:
멜라닌세포에의한멜라닌생성
| 멜라닌 (μl/ml) |
자극 | |
| 대조군 세포 | 13.0 ± 1.1 | |
| 자극 대조군 (NDP-MSH) |
27.1 ± 0.9 | +108% p<0.001 |
| 0.002% GG | 35.1 ± 0.3 | +170% p<0.01 |
| 0.01% GG | 41.2 ± 0.5 | +217% p<0.001 |
B.3. 내피세포에대한활성스크리닝 - 재료 및 방법:
인간 미세혈관 내피세포를 풍접초 (GG) 추출물 0.01% 및 0.02% (w/v 활성물질)로 24 시간 처리하였다.
배양 후, 다양한 마커들의 유전자 발현을 PCR 어레이를 이용한 정량적 실시간 RT-PCR로 분석하였다.
- 결과 및 결론:
내피세포 스크리닝 결과는 풍접초 추출물은 다음과 같은 영향을 가진다는 것을 보였다 (표 12):
친-혈관형성분자의 유전자 발현 억제: 태반성장인자 (PGF), 혈소판유래성장인자 (PDGF) 서브유닛 B 및 혈관내피성장인자 수용체-3 (VEGFR3).
항혈관형성분자 발현 자극: 트롬보스폰딘-1 및 엔도스타틴.
혈관수축 관여 분자 발현 자극: 칼모둘린 및 엔도텔린-1.
→ 이들 효과는 혈관형성 및 혈관수축 저해에 유리하고, 따라서 GG의 항-홍조 활성을 보인다.
혈관강도 및 탄소 관여 분자 발현을 자극: 알파 평활근 액틴 (αSMA) 및 트로포닌 1.
방어 분자 발현을 자극: 헴 산화효소-1 (헴이 친-산화반응에 참여하는 것을 억제하는 보호 기능) 및 티오레독신 (단백질에 대한 산화적 손상 회복).
→ 이들 효과는 GG에 의한 혈관벽 강화 및 보호 활성에 유리하다.
표 12:
PCR
어레이를통한내피세포에대한활성스크리닝
| 유전자 발현 (대조군 세포에 대한 상대 함량 %) |
|||
| 대조군 세포 | 0.01% GG | 0.02% GG | |
| 친혈관형성 성장인자 | |||
| PGF | 100 | 64 | 53 |
| PDGFB | 100 | 84 | 62 |
| VEGFR3 | 100 | 57 | 65 |
| 항혈관형성 분자 | |||
| 트롬보스폰딘-1 | 100 | 148 | 183 |
| 엔도스타틴 | 100 | 112 | 220 |
| 혈관수축 | |||
| 칼모둘린 | 100 | 120 | 165 |
| 엔도텔린-1 | 100 | 127 | 169 |
| 혈관 강화/탄성 | |||
| αSMA | 100 | 127 | 183 |
| 트로포닌-1 | 100 | 177 | 184 |
| 산화스트레스에 대한 방어/응답 | |||
| 헴 산화효소-1 | 100 | 185 | 320 |
| 티오레독신 | 100 | 126 | 171 |
Claims (13)
- 활성성분으로서 풍접초 (Gynandropsis gynandra)지상부위의 추출물, 및 필요한 경우 적합한 부형제를 포함하는 약학조성물로서, 상기 추출물은 추출물 건량 기준으로 갈산 당량으로 표기할 때 적어도 3중량%의 폴리페놀을 포함하며, 상기 추출물은 물과, 글리세롤 및 글리콜에서 선택되는 하나의 용매의 이성분 용매 혼합물에서 풍접초의 지상부위의 고체-액체 추출법으로 얻어지는, 약학조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 폴리페놀은 플라보노이드인, 약학조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 폴리페놀은 추출물 건량 기준으로 루틴 당량으로 표기할 때 적어도 1중량%의 플라보노이드인, 약학조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 글리콜은 프로판디올인, 약학조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 조성물은 피부, 각질 부속기관 또는 점막에 국부적으로 외용되는, 약학조성물.
- 제5항에 있어서, 상기 피부, 각질 부속기관 또는 점막은, 환경에 민감하거나 손상된 피부, 각질 부속기관 또는 점막인, 약학조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 추출물은 풍접초 잎의 추출물인, 약학조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 추출물은 풍접초의 신선하거나 마른 지상부위의 고체-액체 추출법으로 얻어지는, 약학조성물.
- 제1항에 있어서, 여드름, 또는 여드름 형성 경향이 있는 피부, 비듬 처치에 사용되는, 약학조성물.
- 제1항에 있어서, 과다피지분비증 또는 혈관 장애 (vascular disorders) 예방 또는 치료, 또는 상처치유 (healing), 항-알레르기 또는 친-색소침착제로 사용되는, 약학조성물.
- 제10항에 있어서, 상기 과다피지분비증은 지루피부염인, 약학조성물.
- 제1항에 있어서, 다음의 상태들: 지루성피부염, 유가, 여드름, 여드름성 피부, 아토피성 피부염, 건선, 알레르기성 피부염, 접촉 피부염, 만성붉음증, 피부 홍반, 장미증, 가려움증, 홍조를 보이는 반응성 피부 또는 점막, 반흔 질환의 예방 또는 치료에 사용되는, 약학조성물.
- 제12항에 있어서, 상기 홍조를 보이는 반응성 피부 또는 점막은 피하 모세혈관 확장으로 인한, 약학조성물.
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