CN103379910A - 白花菜地上部分提取物及包含其的化妆品、皮肤病学或药物组合物 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种组合物，例如化妆品、皮肤病学或药物组合物，包含白花菜地上部分的提取物以及可选择性的合适的载体，优选地所述地上部分为叶。本发明还涉及这种组合物或提取物，用于预防或治疗皮肤、粘膜或指甲与头发的异常和/或疾病，用于预防或治疗血管异常和/或与皮脂分泌过多相关的问题，或进一步用于抗衰老、愈合、保湿、减肥和/或抗橘皮组织、抗过敏和蛋白着色产品。最后，本申请涉及以改善皮肤、指甲和头发、粘膜的状况和外观为目的的皮肤、指甲和头发、粘膜的美容护理方法，包括给予该组合物或提取物。
Description
本发明涉及一种组合物，优选化妆品、皮肤病学或药物组合物，所述组合物包含白花菜(Gynandropsis gynandra)地上部分提取物，优选叶，以及优选地合适的载体的。
优选，与组合物总重量相比较，组合物中白花菜地上部分提取物的浓度按重量计在0.01％与10％之间。
本发明还涉及一种提取白花菜地上部分，尤其是白花菜叶的提取物的方法，以及采用所述方法获得的提取产物。
本发明还涉及一种组合物或提取物，该组合物或提取物被用于预防或治疗皮肤、粘膜或角质附属物的异常或病理；被用于预防或治疗血管异常和/或与皮脂分泌过多相关的问题；或被用于抗痤疮、抗衰老、治疗、保湿、减肥和/或抗橘皮组织、抗过敏、以及蛋白着色产品(pro-pigmenting product)。最后，本发明涉及一种针对皮肤、角质附属物、粘膜的为了改善其外观或状况的美容护理方法，该方法包含给予所述组合物或提取物。
白花菜是白花菜科植物。它的植物学名为Gynandropsis gynandra(L.)Briq或Gynandropsis pentaphylla或Cleome gynandra。根据地理位置的不同，还有许多不同的俗名，提到的有：
在Jula(布基拉法索西南地区)被称作“Wouin wouin”，在Moré(布基拉法索中心地区)被称作“Kyenebdo”，并且在非洲其他国家还有许多不同的名；在法国被称为“Cleome”，“Gynandro”以及“Mouzambe à fleurs blanche”；在英国被称作“Cat’s whiskers”或“spider flower”，以及在德国杯称作“Senfkapper”与“Benzoinbaun”。
白花菜是一种小型一年生草本植物、农作物，高为15至30cm，其野生型可达1.5m，小叶，圆茎，有时是淡红色。开蓝色至淡紫罗兰色小花。果实为含有大量的极小的带黑色的种子的4至6cm长的纺锤形荚果。
已经记载，茎叶中含有以下成分：
异硫氰酸盐(醉蝶花素)，
甾核(羽扇豆醇，菜油甾醇，表羽扇豆醇)，
维生素C(127-484mg/100g)，
β-胡罗卜素(6.7-18.9mg/100g)，
碳水化合物(4.4-6.4％)，
蛋白质(3.1-7.7％)，
酚类化合物(520-910mg/100g)，
钙(213-434mg/100g)，以及
镁(86mg/100g)。
有的作者报道了生物碱的存在，但其他人没有报道。
已经记载，茎叶中含有以下成分：
29.5％的蛋白质，
28％的酯类(59％亚油酸以及约20％的油酸)，
甾醇类，
酚类化合物(山萘酚，木犀草素)。
地上部分(茎与叶)传统上用于通过口服途径给药。鉴于其作为具有高含量维生素与微量元素的植物的名气，白花菜通常被当食用植物，同样适合于大人与儿童，并被强烈建议在怀孕时食用，白花菜还被用作酱汁中的调味品，并且经常作为汤中的蔬菜。
地上部分及种子中的油被提取后得到的油渣饼可用作牲畜饲料。
此外，当口服时，叶子、茎、种子的制剂会具有杀虫、驱蠕虫、抗寄生虫、杀菌、抗氧化的功效。叶子的汁可当做洗眼剂。口服时，种子具有止吐的功效。
在众多的传统药物中(尤其在非洲和印度)，植物主要通过口服途径用来治疗疼痛(头痛、分娩痛、胃痛)以及蝎螫伤。叶子可以直接用于化脓性的伤口防止形成脓水。
最近的药理学研究已经支持了这些传统用途：在腹腔注射了植物提取物的小鼠身上表现出镇痛活性(U.R.Ghogare等人，Natural ProductResearch，23(4)：327-333(2009))；通过口服途径在大鼠中表现出抗关节炎的效果(R.t.Narendhhirakannan等人，Molecular and CellularBiochemistry，276：71-80(2005))；通过口服途径具有降低胆固醇的活性(T.Johns，Joumal of Ethnopharmacology，66：1-10(1999))。
此外，美国申请US2004/0028643A1记载了用于抗衰老组合物的大量植物的筛选。该美国申请中的实施例给出的结论表明白花菜植物提取物(该植物的全部或某部分的甲醇提取物)并没有提供令人满意的结果。尤其是，接着的抗DPPH活性试验中，确定该提取物没有显示出显著的效果。
相反的，本发明人已经发现白花菜的地上部分(叶、茎、花、种子)的叶提取物，以及更优选的叶提取物，显示出在申请目前未被描述过得美容以及皮肤病学的特性。以下实施例表明本发明提取物表现出显著的抗DPPH活性。
由于白花菜地上部分提取物特殊的性质，这是首次如此使用他们。
本发明的目的是提供一种含有作为活性成分的白花菜地上部分提取物(之后将被称作本发明提取物)的组合物，所述白花菜地上部分提取物优选为白花菜叶提取物，其特征在于该提取物包含相对于干燥提取物的重量以没食子酸等同物计的至少3重量％多酚。
优选的，所述多酚为类黄酮。根据这种特性，提取物中含有相对于干燥提取物重量计以芦丁等同物计的至少1重量％类黄酮，优选至少3重量％。
在组合物中本发明的白花菜提取物任选地与合适的载体组合。
该组合物优选是一种美容、皮肤病学的或药物组合物。
该组合物优选意在局部施用到皮肤、角质附属物和/或粘膜，尤其是对环境敏感或受环境损伤的皮肤、角质附属物和/或粘膜，例如受紫外线辐射或污染。
该提取物优选是白花菜叶的提取物。
本发明提取物可以以其多酚浓度(Folin-Ciocalteu试验)为特征，其多酚浓度为相对于干燥提取物以没食子酸等同物计至少3重量％。
在存在于该提取物中的多酚中，类黄酮是特别的使人感兴趣的。因此，在本发明的优选的实施方式之一中，根据本发明的提取物以其类黄酮含量(氯化铝试验)为特征，其类黄酮含量为相对于干燥提取物重量以芦丁等同物计至少1重量％。这些类黄酮优选主要含有芦丁和其衍生物。
芦丁的化学式(I)为：
优选地，芦丁衍生物为其中发现类黄酮残基的化合物，也就是化学式(II)残基为：
在本发明的提取物中含有的类黄酮中，发现芦丁和其衍生物优选地以相对于总黄酮重量以芦丁等同物计至少50重量％，优选至少60重量％，更优选至少70重量％，更优选至少80重量％的比例存在。
根据本申请的优选实施方式，以相对于干燥提取物重量的重量百分比计，提取物含有0至80重量％，优选10至80重量％，更优选30至70重量％的糖，。
以相对于干燥提取物重量的重量百分比计，本发明提取物优选含有0至50重量％，更优选0至20重量％，甚至更优选0至10重量％的白花菜脂类。
以相对于干燥提取物总重量的重量百分比计(Bradford试验)，本发明的提取物优选含有0至60重量％，更优选0.5至30重量％，甚至更优选0.5至10重量％的白花菜蛋白。
这种提取物优选通过用含水的和/或乙醇的和/或乙二醇的和/或丙三醇的溶剂固-液萃取新鲜或干燥的白花菜地上部分而得到，所述地上部分优选是叶。
所述溶剂选自由水、乙醇、丙三醇、诸如丙二醇的二醇以及其混合物组成的组，所述其混合物诸如相对于其他溶剂水占0-100％的二元混合物，更优选地相对于其他溶剂水占10-50％的二元混合物。
主要地，使用由水与选自下述的一种溶剂组成的这种类型的二元混合物溶剂：乙醇、丙三醇以及丙二醇。
尤其是，将0.1至50重量％(相对于干物质等同物)的所需的植物部分引入到提取溶剂中，优选1至10重量％，优选5重量％(百分比被表示为相对于所使用的总重量的干物质等同物)。白花菜干燥部分可以是叶、茎、花、种子的单独或混合，优选叶。
乙醇存在的情况下，将选择水中0至100％的乙醇，优选10至80％乙醇，更优选60至80％的乙醇的比例(百分比表示相对于乙醇+水的总重量的乙醇重量)。
丙三醇存在的情况下，将选择水中0至100％的丙三醇，优选30至80％乙醇，更优选80％的丙三醇的比例(百分比表示相对于丙三醇+水的总重量的丙三醇重量)。
二醇尤其是乙二醇存在的情况下，将选择水中0至100％的乙二醇，优选10至80％乙醇，优选60％的乙二醇的比例(百分比表示相对于乙二醇+水的总重量的乙二醇重量)。
提取温度优选4至100℃，优选10至60℃，更优选15-30℃。
提取时间优选30分钟至4小时，优选30分钟至2小时，更优选约1小时。
提取结束时，优选将剩余干物质从液相中分离，例如使用过滤法、沉淀法或离心法。由此得到的液体可以通过合适孔径的滤膜过滤，以获得澄清的溶液。
第一分离步骤后可以跟随纯化步骤，例如使用超滤和/或纳米过滤，使浓缩可能的目标分子而忽略其他的成分可能。
得到的提取物可以是液体形式，也可以通过本领域技术人员知道的方法例如在使用或不使用固载例如麦芽糖糊精的情况下雾化或冻干而被干燥。
本发明的另一目的是提供一种制备白花菜地上部分提取物的方法，包括以下步骤：
(a)将白花菜地上部分优选叶液相分散于合适的提取溶剂中；
(b)接着步骤(a)得到的混合物经在水或乙醇或乙二醇或丙二醇溶剂中提取；
(c)接着将步骤(b)得到的产物离心或过滤；
(d)如果需要，接着可超滤和/或膜过滤和/或纳米过滤步骤(c)获得的产物；
(e)接着步骤(c)或(d)之后，回收白花菜地上部分提取物；
(f)任选地基于或不基于固载干燥步骤(e)所得产物。
步骤(a)中，优选所述叶以如下比例使用：0.1至50％叶干物质，优选5至20％，更优选5％，百分比为相对于所用的总重量干物质的重量。
步骤(b)优选在搅拌下进行，不必加入酶。
步骤(c)中，优选下列试剂单独使用或与水混合使用：乙醇、丙三醇或丙二醇，这些溶剂在水中的比例优选30至90％，更优选50至80％(百分比为相对于溶剂+水的总重量这些溶剂的重量)。
提取物优选作为组合物如美容、皮肤病学或药物组合物中的活性成分，其可以包含一种或多种合适的载体。除了白花菜地上部分提取物，组合物中还可以含有至少一种其他活性化合物。所述其他化合物可以选自如下所述化合物或其功能等同物。
所述其他化合物特别选自经典的，本领域技术人员熟知的且用于皮肤病学、药物、美容的活性成分，例如润肤剂、保湿活性成分、角质调节剂、角质剥脱剂、皮肤屏障的愈合或重建剂、PPAR、RXT或LXR激动剂、皮脂调节剂、抗刺激剂和/或抗炎剂和/或舒缓剂、抗氧化剂、抗老化剂、脱色剂或色素脱失剂、着色剂，脂肪分解或脂肪合成抑制剂或抗橘皮组织剂或减肥剂、有机或矿物的防晒和过滤剂、抗真菌剂、防腐剂、抗细菌剂、益生素与益生菌、抗生素、免疫调节剂。
特别是，可以联合使用的皮肤屏障愈合和/或重建剂，优选泛酰醇(维生素B5)、阿拉伯半乳糖、氧化锌、神经酰胺、胆固醇、角鲨烷以及磷脂。
可以联合使用的皮脂调节剂，优选地选自5-α还原酶抑制剂。锌(以及锌衍生物如葡萄糖酸锌，水杨酸锌以及焦谷氨酸)以及螺内酯也具有皮脂抑制活性。其他来源于脂类的对皮脂性质产生作用的皮脂调节剂例如亚油酸，也同样可以选择。
抗炎剂和/或抗刺激剂和/或舒缓剂可以是阿拉伯半乳糖。
可以联合使用的防晒活性成分，优选为UVB和/或UVA滤光或防晒剂，例如为本领域技术人员所熟知的矿物或无机的滤光或防晒剂，本领域技术人员可以根据所需防护等级选择合适的物质及其浓度。
可以联合使用的防腐剂为，例如，常用于美容、抗菌活性分子(伪防腐剂)如辛酸衍生物，例如，锌酰基氨基酸、辛酸甘油酯、己二醇、乙酰丙酸钠、以及铜和锌衍生物(葡萄糖盐与PCA)。
在推荐的与本发明提取物组合的活性成分中，由植物提取物制成的，特别是：
-植物油如大豆油和/或菜籽油，鳄梨油(WO2004/012496，WO2004/012752，WO2004/016106，WO2007/057439)，羽扇豆油，更优选甜白羽扇豆油(WO98/47479)；或这些油的混合物；
-动植物油的油馏分或浓缩物，尤其是向日葵油、更优选亚油酸向日葵浓缩物，如由法国科延公司出售浓缩向日葵油不皂化物()(参见国际申请WO01/21150)，浓缩油不皂化物如鳄梨油、菜籽油、玉米油或棕榈油，其对他们的保湿和/或滋润，愈合和/或重建皮肤屏障，抗炎和/或抗刺激和/或舒缓的活性显著有用；
-植物或植物油不皂化物，优选鳄梨呋喃()，其可通过国际申请WO01/21605记载的制备方法获得；鳄梨和/或大豆不皂化物，尤其是鳄梨呋喃不皂化物与大豆不皂化物以各自约1/3-2/3的比例混合的混合物(如
)；大豆不皂化物(如通过国际申请WO01/51596记载的方法制备得到)；甾醇类不皂化物(典型的不皂化物，其中相对于不皂化物总重量甾醇、甲基甾醇，三萜烯醇占20至90重量％，优选占45至65重量％)；植物甾醇；甾醇酯以及维生素衍生物；其具有愈合和/或重建皮肤屏障，抗衰老，抗炎的显著作用；
-肽或植物氨基酸复合物，尤其是鳄梨肽(如通过专利申请WO2005/105123所记载的方法制备得到的)，羽扇豆肽(如通过专利申请WO2005/102259所记载的方法制备得到的)，藜麦肽(如通过专利申请WO2008/080974所记载的方法制备得到的)，吗啡肽(如通过专利申请WO2004/112742所记载的方法制备得到的)，发酵或非发酵的大豆肽，大米肽(如通过专利申请WO2008/009709所记载的方法制备得到的)，其具有显著的保湿和/或滋润活性(鳄梨)，角质调节活性(羽扇豆、藜麦)，愈合和/或重建皮肤屏障活性(吗啡、藜麦、大豆)，抗炎和/或抗刺激和/或舒缓活性(羽扇豆、藜麦)，抗氧化活性(鳄梨)，着色活性(大米)，五味子肽(Schisandra)(如通过专利申请FR0955344所记载的方法制备得到的)，大穗金合欢(Acaciamacrostachya)种子提取物(如通过专利申请FR0958525所记载的方法制备得到的)以及豇豆(Vigna unguiculata)种子提取物(如通过专利申请FR0958525所记载的方法制备得到的)；
-植物糖，尤其是鳄梨糖(如通过专利申请WO2005/115421所记载的方法制备得到的)，其具有显著角质调节、愈合和/或重建皮肤屏障，抗炎和/或抗刺激和/或舒缓的特性；
-鳄梨油酸丁酯(5alpha
)，5-α还原酶抑制剂(参见WO01/52837与WO02/06205)以及通常在痤疮和头皮屑中发现增加的皮脂分泌物的调节剂；
-富含多酚的提取物，优选是鳄梨成果提取物(如通过专利申请FR1 061055所记载的方法制备得到的)以及吗啡叶提取物(如通过专利申请FR1 061047所记载的方法制备得到的)；
-羽扇豆醇(FR2 822 821，FR2 857 596)，其具有显著促进治疗的功效；
-羽扇豆总提取物(如通过申请WO2005/102259所记载的方法制备得到的)，其尤其适合治疗刺激；
-阿苏果油，其尤其具有备受赞扬的保湿功效。
在推荐的与本发明提取物组合的活性成分中，提及的可以由噁唑啉制成，噁唑啉尤其选自2-十一烷基-4-羟甲基-4-甲基-1，3-噁唑啉，2-十一烷基-4，4-二甲基-1，3-噁唑啉，(E)-4，4-二甲基-2-十七烷基-8-烯基-1，3-噁唑啉，4-羟甲基-4-甲基-2-十七烷基-1，3-噁唑林，(E)-4-羟甲基-4-甲基-2-十七烷-8-烯基-1，3-噁唑啉，2-十一烷基-4-乙基-4-羟甲基-1，3-噁唑啉，优选2-十一烷基-4，4-二甲基-1，3-噁唑啉(OX100或
WO2004050052，WO2004050079以及WO2004112741)。它们特别具有抗炎和/或抗刺激和/或舒缓、抗氧化、脱色、免疫调节的功效。
在推荐的与本发明提取物组合的活性成分，提及的可以由5-α还原酶制，例如鳄梨油酸丁酯(5alpha)抑制剂制成。
除了白花菜地上部分提取物，组合物中还含有至少一种其他活性成分，也可以是两种、三种、四种或更多的上述活性成分。
本发明组合物可以制备成多种形式的制剂以适用于局部给药、口服、直肠给药、阴道给药、鼻腔给药、耳道给药或气管给药以及肠道外给药。本发明组合物优选制备成多种形式的制剂以适用于局部给药，尤其是用于皮肤和/或角质附属物和/或粘膜。
根据第一种变化，不同的制剂适合于局部给药，显然包括乳霜、乳液、奶液、润发油、洗液、油、含水的或水醇或乙二醇溶液、粉末、膏药、喷雾、香波、涂膜及其他外部应用。
本发明的化合物和组合物的给药模式、给药方案，最佳治疗形式可以根据建立药物治疗时的常规标准，尤其是使皮肤病学、美容或兽医治疗适用于患者或动物，例如根据患者或动物的年龄及身体状况，患者或动物的综合病情的严重程度、对治疗的耐受程度、已记载的副作用、皮肤类型。根据所需给药的类型，组合物和/或活性化合物可以进一步包括至少一种药学上可接受的载体，尤其是皮肤病学可接受的载体，或化妆品可接受的载体。根据第一种变化，使用适合外部局部途径的载体。目前发明组合物可以进一步包括至少一种本领域技术人员熟知的药学或化妆品辅助剂，所述辅助剂选自增稠剂、防腐剂、芳香剂、着色剂、化学或矿物质过滤剂、保湿剂、热水等。
具有说明的规格含有白花菜地上部分提取物的组合物尤其用于化妆品或皮肤用途。该组合物优选以适用于局部给药的形式配制。
本发明的另一目的是提供如上定义的含有本发明的组合物或白花菜地上部分提取物，其作为化妆品，药学或皮肤病学组合物，优选化妆品或皮肤病学组合物。
优选的，本发明的组合物或提取物用于预防和/或治疗皮肤和/或粘膜和/或角质附属物的异常。
尤其是，本发明的组合物或提取物用于预防和/或治疗与痤疮相关的异常。
痤疮的生理病理与很多诱发因素相关，包括皮脂分泌过多、毛囊过度角质化(痤疮的起源)以及痤疮丙酸杆菌(P.acnes)的细菌定植。这些因素错综复杂一起相互作用(Bellew et al.2011，10(6)：582-585)。
由于油脂产生的皮脂在痤疮形成的过程中发挥关键作用。的确，与皮脂性质变化有关的皮脂分泌过多产生可以诱导过度角质化的信号，因此产生利于痤疮丙酸杆菌P.acnes增殖的环境。
痤疮还与痤疮丙酸杆菌过度发展有关。这种共生菌充当了痤疮环境(皮脂分泌过多、发炎、毛囊阻塞)中利于形成的条件致病菌。痤疮丙酸杆菌产生促进粉刺生成与炎症的许多因子：经由Toll样受体诱导和维持炎症的信号，导致毛囊壁破裂的酶的释放，吸引中性粒细胞的趋化因子的产生。
本发明的组合物或提取物还被用于预防和/或治疗与皮脂分泌过多相关的疾病，例如脂溢性皮炎(摇篮帽)，痤疮与易生痤疮的皮肤以及头皮屑。
本发明的组合物或提取物尤其在预防和/或治疗血管异常中对保护血管和/或作用于血液循环，特别是血液微循环是有用的。
本发明的组合物或提取物因此优选用于预防和/或治疗(慢性)皮下毛细血管扩张，这种扩张可能发生在这些情况下，诸如酒糟鼻、皮肤红斑、红斑痤疮、瘙痒症、伴随有发红特别是由于皮下毛细血管扩张引起的反应性皮肤和/或粘膜。
本发明的组合物或提取物还优选在预防衰老或光诱导的衰老中用作年龄或光诱导的抗老化产品以及在预防和/或治疗与瘢痕和皮肤组织相关的异常中作为治疗产品。
“瘢痕和皮肤组织相关的异常”是指由皮肤的疤痕和皮肤组织过程导致的异常诸如松弛肌肤、妊娠纹、头皮屑、皲裂，尤其乳房的开裂。
特别是，本发明的组合物或提取物用作保湿产品，干涉预防和/或治疗无论未成熟、正常或成熟/老化的皮肤、角质附属物(头发与指甲)和/或粘膜(牙龈、牙周组织、生殖器粘膜)的屏障或体内平衡的异常。
“皮肤，角质附属物和/或粘膜的屏障异常”是指介入皮肤表层水平的异常。
“皮肤，角质附属物和/或粘膜的体内平衡异常”是指细胞更新和平衡过程导致的异常，例如牛皮癣、尿疹、过敏性皮肤炎、硬皮病(干燥病)、脱水皮肤及光敏感皮肤。
本发明的组合物或提取物还优选用于预防和/或治疗各种辐射导致的炎症，特别是晒伤。
本发明的组合物或提取物还优选用作减肥产品，其调节脂肪组织、橘皮组织，尤其抑制脂肪生成。
本发明的组合物或提取物用作抗过敏产品，其用于预防和/或治疗反应或过敏性的病理，如过敏性皮炎、接触性皮炎、湿疹以及瘙痒症。
优选的，本发明的组合物或提取物用作蛋白着色产品，用来预防和/或治疗显示脱色异常例如脱色皮肤(白癜风)的皮肤的反应、异常或病理。
优选的，本发明的组合物或提取物用来预防和/或治疗皮肤的反应性、异常及病理，或角质附属物如头发的反应、异常及病理(脱发、头皮屑、多毛症、毛囊炎)；或粘膜的反应性、异常及病理例如牙龈和牙周组织出现的牙龈炎(新生的敏感牙龈、烟草等原因产生的卫生问题)，牙周病或呈现男性或女性的外生殖器或内阴部刺激的生殖器粘膜，这种刺激与先天免疫缺失(抗菌肽)或获得性免疫缺失(细胞的、体液、细胞因子)相关。
本发明还涉及一种针对皮肤和/或角质附属物和/或粘膜的皮肤美容护理方法，目的在于改善它们的状态和外观，包括将本发明的组合物或提取物施用于需要的患者的皮肤和/或角质附属物和/或粘膜上。
在本发明的美容方法的一个实施方式中，预期的皮肤和/或角质附属物和/或粘膜优选为对环境(紫外线、污染)敏感的，受环境(紫外线、污染)刺激或损伤的皮肤和/或角质附属物和/或粘膜，特别是敏感皮肤。敏感皮肤通常具有红肿(尤其是面部皮肤)，典型地伴随有日常的牵引感和刺痛感。
本发明的美容方法的目的特别是改善遭受痤疮或呈现痤疮倾向的皮肤的患者，另一目的是改善头皮屑。
本发明的美容方法的特征还在于，该组合物或提取物为对抗年龄或光诱导的抗衰老、保湿、减肥和/或抗橘皮组织的产品。
实施例1
将干燥并压碎的白花菜(Gynandropsis gynandra)多叶茎以5％浓度悬浮在80/20(重量/重量)乙醇/水混合溶液中室温下搅拌1小时。残余干物质通过过滤，沉淀或离心与液相分离，由此得到的液体部分还可以使用合适孔径大小的滤膜过滤以得到澄清溶液。所获得的提取物具有以下特征：
总糖(蒽酮法)：41％/干物质
总多酚(Folin-Ciocalteu法)：没食子酸等同物7.7％/干物质
蛋白质(Bradford试验)：3.1％/干物质。
该提取具有抗自由基活性，“在试管中”抗DPPH活性，可以确定其半抑制浓度(IC50)为0.2mg干提取物，其表示在反应介质中含有19μg的多酚成分。
实施例2
将干燥并压碎的白花菜多叶茎以5％浓度悬浮在80/20(重量/重量)丙三醇/水混合溶液中并室温下搅拌1小时。残留的干物质通过过滤、沉淀或离心与液相分离，由此得到的液体部分还可以使用合适孔径大小的滤膜过滤以得到澄清溶液。所获得的提取物具有以下特征：
总糖(蒽酮法)：65％/干物质
总多酚(Folin-Ciocalteu法)；没食子酸等同物：6.4％/干物质
类黄酮量(AlCl3法)；芦丁等同物：4％/干物质
蛋白质(Bradford试验)：4.0％/干物质。
该提取具有抗自由基活性，“在试管中”抗DPPH活性，可以确定其半抑制浓度(IC50)为0.09mg干提取物，其表示在反应介质中含有7.1μg的多酚成分。
实施例3
将干燥并压碎的白花菜多叶茎以5％浓度悬浮在60/40(重量/重量)丙二醇/水混合溶液中室温下搅拌1小时。残留的干物质通过过滤、沉淀或离心与液相分离，由此得到的液体部分还可以使用合适孔径大小的滤膜过滤以得到澄清溶液。所获得的提取物具有以下特征：
总糖(蒽酮法)：32％/干物质
总多酚(Folin-Ciocalteu法)；没食子酸等同物：7.6％/干物质
类黄酮量(AlCl3法)；芦丁等同物：4.8％/干物质
蛋白质：1％。
该提取具有抗自由基活性，“在试管中”抗DPPH活性，可以确定其半抑制浓度(IC50)为0.16mg干提取物，其表示在反应介质中含有14μg的多酚成分。
实施例4：局部给药组合物
本发明提供了如下多种局部给药组合物。白花菜地上部分提取物可加入多种美容产品，例如卸妆水、水包油乳剂、油包水乳剂、油、奶液、洗液、香波、发泡产品以及喷雾，它们的组成显示如下。百分比表示产品的重量相对于组合物的总重量。
敏感肌肤用的化妆水
抗衰老乳液
抗红肤色乳液
| 原料/商标或INCI名称 | ％ |
| PEG40硬脂酸盐 | 1-5％ |
| PEG5硬脂酸甘油酯 | 1-5％ |
| 石蜡 | 1-5％ |
| 单硬脂酸甘油酯 | 1-5％ |
| 山梨糖醇硬脂酸酯 | 0-2％ |
| 鲸蜡醇 | 0-2％ |
| 苹果酸乙醇 | 5-20％ |
| 七叶苷糖 | 0-2％ |
| 槐米(OPHORA JAPONICA) | 0-5％ |
| 维生素E | 0-1％ |
| 白花菜提取物 | 0.01-10％ |
| 丁二醇 | 1-5％ |
| PIROCTOLAMINE | 0-1％ |
| 防腐剂 | 0-1％ |
| 丙三醇 | 1-10％ |
| 黄原胶 | 0-1％ |
| 锌PCA | 0-2％ |
| 大米淀粉 | 1-5％ |
| 尼龙6 | 0-2％ |
| 聚丙烯酰胺凝胶 | 1-5％ |
| 维生素B6 | 0-1％ |
| 香料 | 0-1％ |
| 纯净水 | 适量加至100％ |
SPF50+防晒喷雾
抗痤疮乳剂
| 原料/商标或INCI名称 | ％ |
| PEG40硬脂酸盐 | 1-5％ |
| PEG5硬脂酸甘油酯 | 1-5％ |
| 石蜡 | 1-5％ |
| 单硬脂酸甘油酯 | 1-5％ |
| 山梨糖醇硬脂酸酯 | 0-2％ |
| 鲸蜡醇 | 0-2％ |
| 苹果酸乙醇 | 5-20％ |
| 维生素E | 0-1％ |
| 维生素B3 | 0-5％ |
| 亚油酸 | 0-1％ |
| 白花菜提取物 | 0.01-10％ |
| 丁二醇 | 1-5％ |
| PIROCTOLAMINE | 0-1％ |
| 防腐剂 | 0-1％ |
| 丙三醇 | 1-10％ |
| 黄原胶 | 0-1％ |
| 锌PCA | 0-2％ |
| 大米淀粉 | 1-5％ |
| 尼龙6 | 0-2％ |
| 聚丙烯酰胺凝胶 | 1-5％ |
| 维生素B6 | 0-1％ |
| 香料 | 0-1％ |
| 纯净水 | 适量加至100％ |
抗头屑洗发水
| 原料/商标或INCI名称 | ％ |
| 纯净水 | 适量加至100％ |
| 月桂酰两性基乙酸 | 5-20％ |
| 椰油基葡萄糖苷 | 5-20％ |
| PEG6000二硬脂酸 | 1-5％ |
| 防腐剂 | 0-2％ |
| 维生素F | 0-5％ |
| 吡罗克酮乙醇胺 | 0-2％ |
| 白花菜提取物 | 0.01-10％ |
| 吡啶硫酮锌 | 0-1％ |
| pH调节剂 | 0-1％ |
| 螯合剂 | 0-1％ |
| 香料 | 0-1％ |
实施例5：白花菜提取物的生物学活性
A.对于痤疮的生物学活性
A.1.对皮脂分泌过多的作用：抑制皮脂腺细胞的脂类生成
-材料与方法
经50μM花生四烯酸刺激或未刺激的人皮脂腺细胞(SZ95细胞系)，经浓度0.005％、0.01％和0.02％(活性物质的重量/体积)的白花菜(GG)提取物或参照抑制剂处理24或48小时。处理结束后，通过测量尼罗红染色得到的荧光强度来定量中性脂类的数量。测量结果以相对荧光单位(RFU)表示，反应了皮脂腺细胞内脂质的从头合成。
采用单因素方差分析后经Dunnett’s检验统计分析结果。
-结果与结论
白花菜提取物强烈并显著地抑制基础条件(组成合成)的皮脂腺细胞与经花生四烯酸刺激的皮脂腺细胞的脂质生成(表1)。结果表明白花菜提取物在调节在痤疮中增加的皮脂的生成中具有影响。
表1：皮脂腺细胞的酯类合成
A.2.对痤疮加重因子的作用
1.角质细胞模型
-材料与方法
将人角质细胞(NCTC-2544细胞系)，用浓度为0.01％和0.02％(活性物质的重量/体积)白花菜(GG)提取物预培养或未经预培养(对照)或用参照分子(10-7M塞地米松、10-6M吲哚美辛)预培养24小时。在GG或参照物一直存在下用0.1μg/ml十四酰佛波乙酸酯(PMA)处理细胞24小时。
处理结束后，通过ELISA法测定培养上清液中分泌的白细胞介素8(IL8)与前列腺素E2(PGE2)的量。通过t-检验统计分析结果。
-结果与结论
白花菜提取物强烈并显著地抑制角质细胞中经PMA刺激而产生的痤疮加重介质IL8与PGE2(表2)。
白花菜提取物先调节痤疮的早期恶化因子。
表2：角质细胞的IL8和PGE2的生成
2.调节痤疮丙杆菌对角质细胞的作用
-材料与方法
用浓度为0.0005％、0.002％、0.008％和0.031％(活性物质的重量/体积)的白花菜(GG)提取物或参照抑制剂烟酰胺预培养人角质细胞(HaCaT细胞系)48小时。
然后通过与痤疮丙杆菌(菌株ATCC6919)的菌悬液培养18小时刺激角质细胞。
最后，用ELISA法测定培养上清液中角质细胞产生的IL8的量。
采用t-检验统计分析结果：ns(不显著)p＞0.05，*p＜0.05，**p＜0.01，***p＜0.001。
-结果与结论
图1显示根据活性成分的百分浓度痤疮丙杆菌刺激的角质细胞的IL8的生成(pg/ml)。
白花菜提取物显著抑制由痤疮丙杆菌诱导的角质细胞的IL8的生成(图1)。
在痤疮的病理生理学白花菜提取物调节痤疮丙杆菌的影响。
3.刺激抗菌肽的表达
-材料与方法
在富含Ca++的培养基中培养的正常人角质细胞经浓度为0.005％(活性物质的重量/体积)白花菜提取物(GG)处理24小时。
处理后，采用实时定量RT-PCR分析抗菌肽(β-防御素2和3-hBD2、hBD3-和抗菌肽LL37)的基因表达。
采用单因素方差分析后经Dunnett’s检验对结果进行统计分析：ns(不显著)p＞0.05，**p＜0.01，***p＜0.001。
-结果与结论
白花菜提取物刺激角质细胞的抗菌肽的表达(表3)。
因此，白花菜提取物能够限制皮肤的细菌定殖因而限制与痤疮丙杆菌有关的致病性。
表3角质细胞中抗菌肽hBD2、hBD3与LL37的基因表达(相对量)
4.调节中性粒细胞迁移
中性粒细胞在痤疮的病理生理学中具有重要作用。由于痤疮丙杆菌产生的许多趋化物质，在痤疮皮肤中显著存在大量中性粒细胞。
-材料与方法
人中性粒细胞用浓度为0.001％和0.002％(活性物质的重量/体积)的白花菜提取物或对照抑制剂预处理30分钟。
然后，将细胞放置在Transwell迁移系统中：将预处理的细胞放置在含有浓度为1μM的化学引诱物fMLP(N-甲酰-甲硫氨酸-亮氨酸-丙氨酸)位于接收盘上的嵌入物中。
培养2小时后，通过测定乳酸脱氢酶(LDH)的酶活性评价已经迁移的中性粒细胞数。
采用t-检验对结果进行统计分析。
-结果与结论
白花菜提取物显著地抑制中性粒细胞的迁移(表4)。
因此，白花菜提取物能够预防痤疮中所述皮肤中的中性粒细胞的聚集。
表4：中性粒细胞迁移
5.抑制中性粒细胞产生白三烯B4
白三烯B4由中性粒细胞大量产生并释放，它在痤疮损伤中具有重要作用并诱导皮脂分泌。
-材料与方法
人中性粒细胞在浓度0.002％和0.008％(w/v活性物质)的白花菜提取物(GG)存在下预培养15分钟。
然后通过加入1mg/ml的调理的酵母聚糖刺激细胞。
培养10分钟后，采用ELISA技术测定细胞上层清液中细胞释放的白三烯B4(LTB4)。
采用t-检验对结果进行统计分析。
-结果与结论
白花菜提取物显著抑制由调理的酵母聚糖诱导的中性粒细胞产生的LTB4(表5)。
因此，白花菜提取物调节痤疮中的中性粒细胞和LTB4的影响。
表5：中性粒细胞的白三烯B4的产生
6.抑制肥大细胞的组胺释放
组胺能够改变皮脂的生成。的确，皮脂腺细胞(负责生成皮脂的皮脂腺组成细胞)在其表面具有组胺受体。
-材料与方法
肥大细胞在浓度0.08％(活性物质的重量/体积)的白花菜提取物(GG)或10Mm的钙(组胺释放的参照抑制剂)存在下预培养15分钟。
然后，用10μM的P物质刺激肥大细胞15分钟。
培养后，用ELISA法定量释放的组胺。
使用t-检验对结果进行统计分析。
-结果与结论
白花菜提取物强烈而显著地抑制由经P物质刺激的肥大细胞的组胺释放(表6)。
白花菜提取物能够调节痤疮中的组胺作用。
表6：肥大细胞的组胺释放
A.3.氧化应激
痤疮中，存在氧化应激作用，这种作用的特征是大量产生氧自由基(OFR)。痤疮的严重性与OFR量相关。而且，痤疮中角鲨烯(皮脂的脂质成分)会被氧化。
1.抗氧化作用
-材料与方法
正常人角质细胞用浓度0.032％(w/v活性物质)的白花菜提取物(GG)或10μg/ml的维生素C(参照抗氧化剂)处理24小时，之后混入H2DCF-DA探针(培养45分钟)。
然后，用100μM的过氧化氢(H2O2)刺激角质细胞20分钟。
通过测定荧光评价活性氧(ROS)的生成。
采用t-检验对结果进行统计分析。
-结果与结论
白花菜提取物抑制角质细胞在应答H2O2诱导的氧化应激中ROS的生成(表7)，因此具有抗氧化效果。
表7：H2O2处理的角质细胞的ROS生成
2.抗脂质过氧化的保护
-材料与方法
Jurkat细胞系的细胞在浓度0.02％(w/v活性物质)的白花菜提取物(GG)或100μM的BHT(参照)以及对脂质过氧化特异的荧光探针C11-氟存在下预培养45分钟。
然后将细胞用UVA+B辐射，然后在存在白花菜提取物或BHT下培养30分钟。
培养后，采用流式细胞分析荧光强度(与氧化程度成反比)来评价脂质过氧化物的量。
采用t-检验对结果进行统计分析。
-结果与结论
白花菜提取物显著的保护细胞抵抗由UV辐射引起的脂质过氧化作用(表8)。
表8：UV引起的脂质过氧化作用
A.4.治疗作用：刺激角质细胞迁移
痤疮损伤会导致难看的疤痕的形成。因此，痤疮治疗可以伴随前治疗作用。
-材料与方法
在单层正常人角质细胞上制造人工伤口。细胞用钙黄绿素染色后，在浓度0.001％与0.005％(活性物质的重量/体积)的白花菜提取物(GG)或参照物(10ng/ml的EGF)存在下培养72小时。在0、24、48和72小时时，用显微照像术监测角质细胞迁移，通过测定伤口表面面积定角质细胞迁移。附图2显示了，在0(T0)、24(T24)、48(T48)和72(T72)小时时，对照细胞或在浓度0.001％与0.005％(活性物质的重量/体积)的白花菜提取物或参照物(10ng/ml的EGF)存在下培养的细胞的照片，T0为伤口形成的时间。
采用t-检验对结果进行统计分析。
-结果与结论
白花菜提取物显著刺激角质细胞迁移(表9，附图2)，48小时后伤口被全部覆盖。
因此，白花菜提取物在皮肤愈合中支持表皮的再植过程。
表9：角质细胞迁移评价
B.其他生物学活性
B.1.抑制脂肪细胞中的脂肪生成
-材料与方法
正常人体脂肪细胞在浓度0.02％(活性物质的重量/体积)的白花菜提取物(GG)或参照物(20μM浅蓝菌素)存在下培养1小时。培养后，加入放射性标记物[14C]-乙酸盐，并将样品放置过夜。
培养后，提取脂质，用液体闪烁法测定脂质中包含的放射性成分。
采用t-检验对结果进行统计分析。
-结果与结论
白花菜提取物显著抑制脂肪细胞中脂质的新合成(表10)。
因此，该提取物具有减肥效果。
表10：脂肪细胞的脂肪生成评价
B.2.提高黑色素细胞的黑色素生成
-材料与方法
正常人体表皮黑色素细胞在浓度0.002％和0.01％(活性物质的重量/体积)的白花菜提取物(GG)以及10-7的NDP-MSH(刺激黑色素合成)存在下培养240小时。
培养之后，提取细胞中的黑色素，采用分光光度法测定黑色素。
采用t-检验对结果进行统计分析。
-结果与结论
白花菜提取物显著刺激和加强NDP-MSH对黑色素生成的影响(表11)
因此，该提取物具有蛋白着色效果。
表11：黑色素细胞的黑色素生成
B.3.对内皮细胞活性的筛选
-材料与方法
人毛细血管内皮细胞用浓度0.01％和0.02％(活性物质的重量/体积)的白花菜提取物(GG)处理24小时。
培养之后，采用PCR阵列通过实时-RT-PCR分析不同标记物的基因表达。
-结果与结论
对血管内皮细胞的筛选结果可能表明白花菜提取物(表12)：
-抑制促进血管新生分子的基因表达：胎盘生长因子(PGF)、血小板衍生生长因子(PDGF)亚基B以及血管内皮生长因子受体-3(VEGFR3)。
-刺激抗血管生成分子的表达：血小板反应蛋白-1和内皮细胞抑制素。
-刺激血管收缩相关分子的表达：钙调素和内皮素-1。
→这些结果支持了提取物对血管生成与扩张的抑制作用，因此白花菜提取物表现出抗红肤色的活性。
-刺激与血管强度/弹性相关分子的表达：α平滑肌肌动蛋白(αSMA)和肌钙蛋白-1。
-刺激防御分子的表达：血红素氧合酶-1(通过防止自由血红素参与预氧化反应的保护作用)和硫氧还原酶(修复蛋白的氧化性损伤)。
→这些结果支持了白花菜的加强和保护血管壁的作用。
表12：通过PCR阵列在内皮细胞上的活性筛选
Claims (15)
1.一种组合物，包括作为活性成分的白花菜地上部分提取物，其特征在于所述提取物包含相对于干燥提取物重量以没食子酸等同物计至少3重量％的多酚，以及如果需要，合适的载体；所述多酚优选是类黄酮，通常相对于干燥提取物重量以芦丁等同物计浓度至少1重量％的类黄酮。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于该组合物意在通过局部外用途径施用到皮肤、角质附属物和/或粘膜，尤其对环境敏感或受环境损伤的皮肤、角质附属物和/或粘膜。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于所述提取物为白花菜叶的提取物。
4.根据前述任一项权利要求所述的组合物，其特征所述提取物通过在含水的和/或乙醇的和/或乙二醇的和/或丙三醇的溶剂中固-液萃取新鲜或干燥的白花菜地上部分而得到。
5.根据权利要求4所述的组合物，其特征在于所述溶剂选自由水、乙醇、丙三醇、二醇例如丙二醇或它们的混合物，优选二元混合物，所组成的组，其中，相对于其他溶剂水占0-100％，优选地相对于其他溶剂水占10-50％。
6.根据前述任一权利要求所述的组合物，其特征在于其还含有至少一种其他活性成分，特别是选自由以下活性成分所组成的组：润肤剂、保湿剂、角质调节剂、角质剥脱剂、皮肤屏障的愈合或重建剂、PPAR、RXR或LXR激动剂、皮脂调节剂、抗刺激剂和/或抗炎剂和/或舒缓剂、抗氧化剂、抗老化剂、脱色或色素脱失剂、着色剂、脂肪分解或合成抑制剂或抗橘皮组织或减肥剂、有机或矿物的防晒和滤光剂、抗真菌化合物、防腐剂、抗细菌剂、益生素与益生菌、抗生素、免疫调节剂。
7.根据权利要求6所述的组合物，其特征在于，其他活性成分选自：
皮肤屏障的愈合或重建剂，优选泛醇，
皮脂调节剂，优选地选自5-α还原酶抑制剂、锌衍生物、螺内酯以及亚油酸，
抗炎剂和/或抗刺激剂和/或舒缓剂，优选阿拉伯半乳聚糖，
矿物或有机物的滤光和防晒剂，优选UVB和/或UVA滤光和防晒剂，
防腐剂优选地选自锌酰基氨基酸、辛酸甘油酯、己二醇、乙酰丙酸钠以及铜和锌的衍生物。
8.根据权利要求1-5任一项所述组合物，进一步包含至少一种其他活性成分，所述其他活性成分选自由下述所组成的组：
植物油，优选是大豆油、菜籽油、鳄梨油、羽扇豆油以及更优选的甜白羽扇豆油或这些油的混合物，
动植物油的油馏分或浓缩物，所述动植物油优选是向日葵油、鳄梨油、菜籽油、玉米油以及棕榈油，并且优选浓缩的不皂化物，
植物或植物油不皂化物，优选鳄梨油不皂化物、大豆油不皂化物或它们的混合物，优选鳄梨呋喃，尤其鳄梨呋喃不皂化物与大豆不皂化物以各自约1/3-2/3的比例混合的混合物，甾醇类不皂化物、植物甾醇、甾醇酯以及维生素衍生物，
肽或植物氨基酸复合物，优选鳄梨肽、羽扇豆肽、藜麦肽、吗啡肽、发酵或非发酵的大豆肽、大米肽、五味子肽、大穗金合欢种子提取物、豇豆种子提取物，
植物糖，优选是鳄梨糖，
鳄梨油酸丁酯，
富含多酚的提取物，优选是鳄梨提取物或吗啡叶提取物，
羽扇豆醇，
羽扇豆总提取物，
噁唑啉，优选是2-十一烷基-4-羟甲基-4-甲基-1，3-噁唑啉，2-十一烷基-4，4-二甲基-1，3-噁唑啉，(E)-4，4-二甲基-2-十七烷基-8-烯基-1，3-噁唑啉，4-羟甲基-4-甲基-2-十七烷基-1，3-噁唑啉，(E)-4-羟甲基-4-甲基-2-十七烷-8-烯基-1，3-噁唑啉，2-十一烷基-4-乙基-4-羟甲基-1，3-噁唑啉以及2-十一烷基-4，4-二甲基-1，3-噁唑啉，以及
其混合物。
9.根据前述任一项权利要求所述的组合物，其特征在于其是化妆品、皮肤病学或药物组合物。
10.一种针对皮肤和/或角质附属物和/或粘膜目的在于改善其状况和/或外观的美容护理方法，包括将根据前述任一项权利要求所述的组合物或权利要求1-5中任一项所述的白花菜地上部分提取物施用于有需要的患者的皮肤和/或角质附属物和/或粘膜。
11.根据权利要求10所述的美容护理方法，其特征在于，其针对对环境敏感或受到环境的损伤的皮肤、角质附属物和/或粘膜，或者针对呈现发红、通常伴有日常牵引感或刺痛感的皮肤、角质附属物和/或粘膜或者针对痤疮、有长痤疮倾向或皮屑的皮肤。
12.根据权利要求10或11所述的美容护理方法，其特征在于所述组合物或提取物为年龄或光诱导的抗衰老产品，或保湿、减肥和/或抗橘皮组织的产品。
13.前述任一项权利要求所述的组合物或权利要求1-5任一项所述的提取物用于预防和/或治疗与皮脂分泌过多相关的疾病，尤其是脂溢性皮炎；或用作愈合、抗过敏和/或蛋白着色的产品。
14.前述任一项权利要求所述的组合物或权利要求1-5任一项所述的提取物用于预防和/或治疗血管疾病。
15.前述任一项权利要求所述的组合物或权利要求1-5任一项所述的提取物用于预防和/或治疗下述病症：酒糟鼻；皮肤红斑；红斑痤疮；瘙痒症；伴随有发红，特别是由于皮下毛细血管扩张引起的反应性皮肤和/或粘膜。
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