KR20090070455A - 초임계 추출법을 이용한 자초 추출물을 유효성분으로함유하는 피부노화방지용 및 피부주름개선용 화장료 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 초임계 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 본 발명은 초임계 추출법을 이용한 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부노화방지용 및 피부주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 또한 초임계 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하는 것을 특징으로 하는 화장방법에 관한 것이다. 본 발명의 초임계 자초 추출물은 항산화 효과, MMP-1 생성억제 효과, 자외선 조사에 의한 MMP-1 생성억제 효과, 콜라겐 합성증진 효과 등 우수한 항노화 효과와 자외선 유도 후 야기되는 세포독성 완화 효과 및 항염효과를 나타내었다. 또한 이러한 본 발명의 초임계 자초 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 피부탄력 개선효과 및 보습효과가 탁월하다.
자초, 초임계 추출, 항노화, 피부노화방지, 주름개선, 보습, 화장료 조성물
Description
본 발명은 초임계 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 본 발명은 초임계 추출법을 이용한 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부노화방지용 및 피부주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부는 노화 과정에서 다양한 물리, 화학적인 변화가 일어난다. 그 원인으로는 크게 내적인 노화(intrinsic aging)와 광노화(photo-aging)로 구분되며 이에 관한 연구가 활발히 이루어져 왔다. 자외선, 스트레스, 질병상태, 환경인자, 상처, 나이가 들어감에 따라 프리라디칼이 활성화되어 야기될 수 있으며, 이런 상태가 심화될 경우 생체 내에 존재하는 항산화 방어망을 파괴하고, 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다. 좀 더 구체적으로 말하자면, 피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부노화 현상이 생겨나는 것이다. 특히 단백질의 산화는 피부의 결합조직인 콜라겐(collagen), 히아루론산(hyaluronic acid), 엘라스틴(elastin), 프로테오글리칸(proteoglycan), 피브로넥틴(fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증반응과 피부의 탄력에 지장을 주고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역기능 저하의 사태에 이르게 된다.
그러므로, 신체의 대사 과정 중 발생하는 프리라디칼이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개되는 프리라디칼을 소거하여 세포막을 보호하고, 또 이미 손상 받은 세포는 활발한 신진대사에 의해 재생시켜서 세포를 증식시켜야 피부는 빠르게 회복되고 건강한 피부를 유지할 수 있다. 노화에는 프리라디칼 뿐만 아니라 기질 금속단백질 분해효소(Matrix Metalloprotease; MMP)라는 효소가 관여하는데 생체 내에서 콜라겐과 같은 세포외기질의 합성과 분해는 적절하게 조절되나 노화가 진행되면서 그 합성이 감소하며 콜라겐을 분해하는 효소인 기질 금속단백질 분해효소(MMP)의 발현이 촉진되어 피부의 탄력이 저하되고 주름이 형성된다. 또한 자외선 조사에 의해 이러한 분해효소가 활성화되기도 한다. 그러므로 세포내에서 활성화가 유도되는 MMP 발현을 조절하거나 그 활성을 억제할 수 있는 물질의 개발이 요구되고 있다. 이제까지 화장품의 소재로서 사용된 원료들은 단순히 효소 활성만을 억제하는 것이 대부분이었다. 이에 세포내 자연노화와 광노화에 의해 그 발현이 유도되는 MMP 발현량 및 활성을 조절하고자 하였다.
한편, 화장료 조성성분으로 다양한 화학물질을 사용하고 있으나, 최근 이러한 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품이 많이 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐만 아니라, 최근 천연재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다.
본 발명자들은 장기간에 걸쳐 다수의 천연물로부터 다양한 추출방법으로 추출물을 제조하여 화장품으로의 응용 가능성을 연구한 결과, 지치과(Boraginaceae)에 속하는 자초(Lithospermum erythrorhizon)의 초임계 추출물이 피부 항산화 효과, 콜라겐합성효과, 피부 잔주름 완화효과에 대하여 우수한 효능을 나타냄을 발견함으로써 본 발명을 완성하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 초임계 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부노화방지용 화장료 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 초임계 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부주름개선용 화장료 조성물을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적은 상기 초임계 자초 추출물을 함유하는 화장료 조성물 을 인간의 피부에 도포하는 것을 특징으로 하는 화장 방법을 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 실시예 및 청구범위에 의해 보다 명확하게 된다.
본 발명은 초임계 추출법을 이용한 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이며, 더욱 상세하게는 본 발명은 초임계 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부노화방지 및 피부주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 초임계 자초 추출물은 항산화 효과, MMP-1 생성억제 효과, 자외선 조사에 의한 MMP-1 생성억제 효과, 콜라겐 합성증진 효과 등 우수한 항노화 효과와 자외선 유도 후 야기되는 세포독성 완화 효과 및 항염효과를 나타내었다. 또한 이러한 본 발명의 초임계 자초 추출물을 함유하는 화장료 조성물은 피부탄력 개선효과 및 보습효과가 탁월하다.
본 발명은 초임계 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부노화방지용 화장료 조성물에 관한 것이다.
또한 본 발명은 초임계 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부주름개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
자초(Lithospermum erythrorhizon)는 지치과(Boraginaceae)에 속하는 숙근초로 자초(紫草), 지초(芝草), 혹은 자단(紫丹)이라고도 한다. 자초의 종명, 에리트로리존(erythrorhizon)에 나타나 있듯이 에리트로-는 붉은색을, 리존은 뿌리를 의미하며, 자초뿌리의 외피 부위에 붉은 색소가 함유되어 있는 것이 특징이다(KOREAN J. FOOD & NUTR. Vol. 13. No. 4, 379~382(2000)). 이 붉은 색소는 나프토퀴논(naphthoquinone)유도체인 색소 배당체로 알려져 있으며, 자초의 뿌리는 예로부터 해독, 소염 등의 약제로 사용되어 왔다(Morimoto, L., Kishi, T. and Ikegami, S. : Naphthoquinone derivatives from Lithospermum erythrorhizon siebold et zuccarint. Tetrahedron Letters, 52, 4739(1965)). 자초는 원추형으로 구부러져 있고, 분지되었으며, 길이는 7~14cm이며, 지름은 1~2cm 이며, 표면은 홍색으로 거칠고 주름이 있으며, 겉의 표피는 탈락하기 쉬우나 질은 단단하면서도 부스러지기가 쉽다. 봄, 가을에 채취하여 햇볕에 말리며, 우리나라 고산지대의 양지 바른 곳에 자생하거나 재배된다. 자초는 주로 몸안의 혈을 서늘하게 하고 혈액순환을 도우며 마진을 치료하는데 상용되는 약재로서, 혈에 열이 많고 독이 성하여 마진이 잘 낳지 않고 심해지며, 반점이 보라색이나 검은 색을 띠고 습진 등의 증상에 응용된다. 자초는 장에 수분을 공급하여 장을 유연하게 만드는 효능도 더불어 가지고 있기 때문에 열증으로 인한 변비에도 응용이 가능하다. 자초는 외용으로도 사용이 가능한데 종기나 습진 등의 증상이 있을 때 피부에 바르면 효과를 볼 수 있다. <한국본초도감>에서는 '자초는 지치과의 여러해살이풀 지치의 뿌리이다. 맛은 달고 성질은 차다. 양혈, 활혈투진, 제창해독의 효능이 있어 혈열로 인한 반진이 암자색을 보일 때에 유효하며, 토혈, 코피, 소변 출혈에도 빠른 효과를 보인다. 홍역의 예방과 치료에 발병률을 감소시키며, 종기 초기와 피부가 헐어 생긴 발진, 만성궤양, 자궁경부미란, 습진, 불이나 뜨거운 물에 데었을 때 등에 내복하거나 외용한다.'고 기록하고 있다.
또한 <동의학 사전>에서는 '자초는 심포경, 간경에 작용한다. 혈분의 열을 없애고 해독하며, 발진을 순조롭게 한다. 피를 잘 돌게 하고 대변을 잘 보게 하며 새살이 빨리 살아나게 한다. 이전에는 자초를 홍역의 예방 치료에 주로 써왔으나 지금은 피부화농성 질병에 주로 쓴다. 또한 융모막상피종, 변비, 배뇨장애, 화상, 동상, 습진, 자궁경부미란 등에도 쓴다.'고 기록하고 있다.
본 명세서에서, 용어 “자초”는 자초의 다양한 기관 또는 부분(예: 잎, 꽃, 뿌리, 줄기, 가지, 껍질 및 종자 등)을 의미하며, 바람직하게는 잎, 줄기, 가지, 껍질, 근경(뿌리줄기) 또는 뿌리이며, 보다 바람직하게는 잎, 껍질, 근경(뿌리줄기) 또는 뿌리이며, 가장 바람직하게는 근경을 의미한다.
본 발명에 의하면, 본 발명의 "초임계 자초 추출물"은 통상의 유기용매 추출법 대신에 초임계 유체 추출법(supercritical fluid extraction)을 사용하여 얻은 자초의 추출물을 의미한다.
초임계 유체는 기체가 고온 고압 조건에서 임계점에 도달하였을 때 갖는 액 체 및 기체의 성질을 지니고 있으며, 화학적으로 비극성 용매와 유사한 극성을 지니고 있으며 이러한 특성으로 인해 초임계 유체는 지용성 물질의 추출에 사용되고 있다(J. Chromatogr. A. 1998;479:200-205).
본 발명의 바람직한 실시예에 의하면, 본 발명의 초임계 자초 추출물은 초임계 이산화탄소를 이용하여 효과적으로 지용성 물질을 추출하여 얻을 수 있다. 이산화탄소는 초임계 유체기기의 작동으로 압력 및 온도가 임계점까지 이르는 과정을 거치면서 액체 및 기체 성질을 동시에 지닌 초임계 유체가 되고 그 결과 지용성 용질에 대한 용해도가 증가한다. 초임계 이산화탄소가 일정량의 시료를 함유한 추출 용기를 통과하게 되면 시료에 함유된 지용성 물질은 초임계 이산화탄소에 추출되어 나온다.
지용성 물질을 추출한 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다. 또는, 처음부터 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 사용함으로써 효과적으로 유효 성분을 추출할 수 있다.
추출된 시료는 대부분 이산화탄소를 함유하고 있는데 이산화탄소는 실온에서 공기 중으로 휘발되므로 상기 방법으로 얻은 추출물을 화장료 조성물로서 사용할 수 있으며, 공용매는 감압증발기로 제거할 수 있다.
추출의 재료가 되는 자초의 근경은 이를 건조하여 사용하거나 또는 그대로 사용할 수 있으며, 바람직하게는 건조하여 사용하는 것이다. 건조법으로는 자연 건 조 또는 열풍 건조법을 이용할 수 있다.
초임계 유체 추출법에 의한 자초 추출물의 제조방법의 일예를 들어 설명하면 다음과 같다.
자초의 근경을 정제수로 세척한 후 건조하고 작은 조각으로 파쇄한 뒤, 시료 초임계 추출용기에 놓고 액체 크로마토그래피 펌프를 이용하여 순수한 이산화탄소를 적당한 온도 및 압력에서 초임계 상태로 만들어 흘려보내면서 추출물을 시험관에 받거나, 공용매를 이산화탄소와 함께 흘려보내 추출한다.
특별히 제한하기 위한 것은 아니지만, 초임계 유체 추출시 이산화탄소는 바람직하게 35 내지 100℃, 보다 바람직하게 50 내지 70℃, 가장 바람직하게 60℃의 온도에서, 바람직하게 100 내지 500 기압, 보다 바람직하게 200 내지 400 기압, 가장 바람직하게 300 기압의 압력하에 초임계상태로 만들어 주는 것이 바람직하다.
본 발명의 바람직한 실시예에 따르면, 자초의 초임계 유체 추출에는 이산화탄소만을 이용할 수도 있지만, 이산화탄소에 추가적으로 공용매를 혼합한 혼합유체를 사용하여 수행할 수도 있다. 초임계 유체 추출 후 추출 용기에 남아있는 시료에 다시 소량의 공용매가 함유된 초임계 이산화탄소를 흘려 통과시키면 순수한 초임계 이산화탄소만으로는 추출되지 않았던 성분들이 추출되어 나오게 할 수 있다.
이러한 공용매의 바람직한 예로는 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물이 있으며, 이중에서도 특히 바람직한 것은 클로로포름이다.
이산화탄소와 공용매를 혼합하여 사용할 때, 공용매의 배합비율은 상기 혼합 유체 총 부피를 기준으로 하여 바람직하게 3 내지 40 부피%, 보다 바람직하게 5 내지 20 부피%, 가장 바람직하게 10 부피%이다.
또한, 본 발명의 초임계 자초 추출물은 상술한 추출법에 의한 추출물 뿐 만 아니라, 통상적인 정제 과정을 거친 추출물도 포함한다. 예컨대, 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외여과막을 이용한 분리, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 자초 추출물에 포함되는 것이다.
본 발명의 자초 추출물은 감압 증류, 동결 건조 또는 분무 건조 등과 같은 추가적인 과정에 의해 분말 상태로 제조될 수 있다.
또한, 본 발명의 초임계 자초 추출물은 화장료 조성물 전체에 대해서 0.001-30.0중량% 함유되며, 바람직하게는 0.1-10.0 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다. 상기 추출물의 함량이 0.001중량% 미만인 경우에는 항산화, 노화방지 및 피부주름개선 효과가 극히 미약하며, 30.0중량% 이상인 경우에는 함유량 증가에 대한 효과 증대 정도가 미미하며, 제형상의 안전 및 안정성에 문제가 있으며 경제적이지도 못하다.
본 발명에 따르면, 초임계 자초 추출물은 항산화 효과(실험예 1 및 2), MMP- 1 생성 억제효과(실험예 3), 자외선에 의한 MMP-1 생성 억제효과(실험예 4), 콜라겐 합성증진효과(실험예 5), 자외선에 의한 세포독성완화 및 항염효과(실험예 6, 7), 피부탄력 개선효과(실험예 8) 및 보습효과(실험예 9)가 뛰어나다.
따라서, 이러한 다양한 기능을 가진 초임계 자초 추출물을 유효성분으로 포함하는 본 발명의 화장료 조성물은 항산화 효과, 피부노화 방지 효과, 피부주름 개선 효과 및 보습 효과를 갖는다.
본 발명의 초임계 자초 추출물은 피부에 국소적으로 바르는 거나 뿌리는 것에 의해 그 효과를 달성할 수 있다. 따라서, 본 발명의 바람직한 일 양태에 따르면, 본 발명의 조성물은 크림, 로션 및 유연수 등의 화장료 조성물 또는 스프레이 및 연고 등의 약제학적 조성물 형태로 제조될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서 상기 유효성분 이외에 화장품 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.
본 발명의 화장료 조성물은 당 업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되 는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 마사지 크림, 에센스, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 폼, 클렌징 밤, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.
또한, 본 발명은 본 발명의 초임계 자초 추출물을 함유하는 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하는 것을 특징으로 하는 화장방법을 제공한다.
본 발명의 화장 방법은 본 발명의 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하는 모든 화장 방법을 일컫는다. 즉, 화장료 조성물을 피부에 도포하는 당업계에 공지된 모든 방법이 본 발명의 화장 방법에 속한다.
본 발명의 화장료 조성물은 단독 또는 중복 도포하여 사용하거나, 본 발명 이외의 다른 화장료 조성물과 중복 도포하여 사용할 수 있다. 또한 본 발명에 따른 피부 보호 효과가 우수한 화장료 조성물은 통상적인 사용방법에 따라 사용될 수 있으며, 사용자의 피부 상태 또는 취향에 따라 그 사용횟수를 달리할 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물이 비누, 계면활성제 함유 클렌징 또는 계면활성제 비함유 클렌징 제형일 경우, 피부에 도포한 후 닦아내거나 떼거나 물로 씻어낼 수도 있다. 구체적인 예로서, 상기 비누는 액상비누, 가루비누, 고형비누 및 오일비 누이며, 상기 계면활성제 함유 클린징 제형은 클렌징폼, 클렌징 워터, 클렌징 수건 및 클렌징 팩이며, 상기 계면활성제 비함유 클렌징 제형은 클렌징크림, 클렌징 로션, 클렌징 워터 및 클렌징 겔이며, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 초임계 자초 추출물을 포함하는 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하는 화장방법을 수행하면, 피부의 노화 방지, 주름개선 효과 및 보습 효과를 얻을 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.
제조예 1: 자초 추출물의 제조 Ⅰ
정제수로 세척하고 건조한 자초의 근경을 각각 50.0g을 물 1.2L에 넣고 냉각 콘덴서가 장치된 추출기에서 5시간 동안 70-90℃에서 가열하여 유효성분을 추출한 후 300메쉬 여과포로 여과하고, 5-10℃에서 7-10일간 방치하여 숙성시킨 후 와트만 5번 여과지로 여과하였다. 이 여액을 65℃에서 회전 감암 증발기로 건조하여, 건조 중량을 각각 15.1g을 얻었다. 건조된 파우더를 50% 1,3-부틸렌 글리콜 용액에 1%(w/v)되게 녹여서 본 발명에 사용하였다.
제조예 2: 초임계 자초 추출물의 제조 II
정제수로 세척하고 건조한 자초의 근경 50.0g을 작은 조각으로 파쇄한 후 시료 1 g을 초임계 추출용기 (Supercritical fluid extractor, Jasco, 일본국)에 넣고 액체 크로마토그래피 펌프 (Supercritical fluid chromatograph, Jasco, 일본국)를 이용하여 순수한 이산화탄소를 온도 60℃ 및 압력 300 기압 조건에서 초임계 상태로 만들고 공용매로 부틸아세테이트를 흘려 보내면서 매 4분씩 40분까지 추출물을 10 ㎖ 용량의 유리 시험관에 받았다. 예비 실험에서 초임계 추출을 위해서는 60℃ 및 300 기압이 최상의 결과를 보여 주어 이 조건을 실험에 이용하였다. 상기 추출액을 65℃에서 회전 감암 증발기로 건조하여, 건조 중량을 15.5g을 얻었다. 건조된 파우더를 50% 1,3-부틸렌 글리콜 용액에 1%(w/v)되게 녹여서 본 발명에 사용하였다.
제조예 3~19: 초임계 자초 추출물의 제조 Ⅲ
정제수로 세척하고 건조한 자초 근경 50.0g을 작은 조각으로 파쇄한 후 시료 1 g을 초임계 추출용기 (Supercritical fluid extractor, Jasco, 일본국)에 넣고 액체 크로마토그래피 펌프 (Supercritical fluid chromatograph, Jasco, 일본국)를 이용하여 순수한 이산화탄소를 온도 60℃ 및 압력 300 기압 조건에서 초임계 상태로 만들고 공용매로 하기 표 1의 공용매를 흘려 보내면서 매 4분씩 40분까지 추출물을 10 ㎖ 용량의 유리 시험관에 받았다. 예비 실험에서 초임계 추출을 위해서는 60℃ 및 300 기압이 최상의 결과를 보여 주어 이 조건을 실험에 이용하였다. 상기 추출액을 65℃에서 회전 감암 증발기로 건조하여, 다음 표 1과 같이 건조중량을 얻었다. 각 시료의 건조된 파우더를 50% 1,3-부틸렌 글리콜 용액에 1%(w/v)되게 녹여서 본 발명에 사용하였다.
| 제조예 번호 | 추출용매 | 자초 건조 중량(단위:g) |
| 3 | 10% 에탄올 | 15.9 |
| 4 | 20% 에탄올 | 16.8 |
| 5 | 30% 에탄올 | 13.7 |
| 6 | 40% 에탄올 | 15.7 |
| 7 | 50% 에탄올 | 16.7 |
| 8 | 60% 에탄올 | 16.5 |
| 9 | 70% 에탄올 | 16.8 |
| 10 | 80% 에탄올 | 14.3 |
| 11 | 90% 에탄올 | 15.1 |
| 12 | 100% 에탄올 | 15.5 |
| 13 | 메탄올 | 15.4 |
| 14 | n-프로판올 | 11.5 |
| 15 | 이소프로판올 | 13.6 |
| 16 | 2-부탄올 | 11.3 |
| 17 | 아세톤 | 12.5 |
| 18 | 클로로포름 | 12.4 |
| 19 | 에틸아세테이트 | 11.5 |
실험예 1: NBT법을 이용한 항산화 효과 측정 실험
제조예 2에서 수득한 초임계 자초 추출물의 항산화 효과를 알아보기 위해서 하기와 같이 NBT법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다. 이 때, 항산화효과가 탁월한 레티놀(retinol)과 BHT(Butylated Hydroxytoluene)를 양성대조군으로 하여 동일한 실험 조건에서 실험을 시행하였다. 그리고, 일반용매 추출법으로 추출한 제조예1의 자초 추출물을 비교군으로 하여 동일한 실험 조건에서 실험을 시행하였다.
항산화 효과를 측정하기 위해서 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 생성되는 활성산소를 NBT법에 의해 측정하고 피검물질이 활성산소를 제거하는 효과, 즉 활성산소 소거효과를 평가한다. 크산틴과 크산틴옥시다제에 의해 활성산소를 생성시킨다. 이 활성산소가 니트로블루테트라졸리움(Nitro Blue Tetrazolium;NBT)과 반응하여 이것에 의해 생성되는 청색을 파장 560nm에서 측정하는 것으로 활성산소 소거율을 측정한다.
측정방법으로서
1. 0.05M Na2CO3 ------------------------------------ 2.4ml
2. 3mM 크산틴 용액---------------------------------- 0.1ml
3. 3mM EDTA 용액------------------------------------ 0.1ml
4. BSA 용액----------------------------------------- 0.1ml
5. 0.72mM NBT 용액---------------------------------- 0.1ml
6. 크산틴 옥시다제 용액----------------------------- 0.1ml
7. 6mM CuCl2 용액----------------------------------- 0.1ml
① 바이엘병에 1,2,3,4,5를 가하고 여기에 시료용액 0.1ml을 첨가하고 25℃에서 10분간 방치한다.
② 6을 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 20분간의 배양을 개시한다.
③ 그 후 7을 가하여 반응을 정지시키고 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.
④ 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다.
⑤ 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 6 대신에 증류수를 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.
활성산소 소거율은 수학식 1에 의하여 산출하였으며, 결과는 표 2에 나타내었다.
St : 시료용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도
Bt : 공시험용액의 효소 반응 후의 560nm에서의 흡광도
So : 시료용액의 효소 무첨가 시 반응전의 560nm에서의 흡광도
Bo : 공시험용액의 효소 무첨가 시 반응전의 560nm에서의 흡광도
| 시료명 | 처리 농도(%) | 항산화효과(%) |
| 초임계 자초 추출물(제조예 2) | 0.01 | 93.8 |
| 자초 추출물(제조예 1) | 0.01 | 92.8 |
| 레티놀 | 0.01 | 93.1 |
| BHT | 0.01 | 90.2 |
상기 표 2의 결과에서 보는 바와 같이, 제조예 2의 초임계 자초 추출물, 레티놀 및 BHT 모두 0.01% 농도에서 우수한 항산화 효과를 확인할 수 있었을 뿐만 아니라 항산화력이 이미 알려진 레티놀 및 BHT보다 본 발명의 초임계 자초추출물이 훨씬 우수한 항산화력을 가지고 있음을 확인할 수 있었다. 또한, 일반 용매를 사용하여 추출한 제조예1의 자초 추출물에 비해서도 항산화력이 훨씬 우수함을 알 수 있었다.
실험예 2: DPPH법을 이용한 항산화 효과 측정 실험
제조예 2에서 수득한 초임계 자초 추출물의 항산화 효과를 알아보기 위해서 하기와 같이 DPPH법을 이용하여 항산화 활성을 측정하였다. 이 때, 양성대조예로서 항산화효과가 탁월한 비타민 C를 비교샘플로 하여 동일한 실험 조건에서 실험을 시행하였다.
DPPH법은 DPPH(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl) 프리라디칼이라는 유리기를 사용하여 환원력에 의한 항산화 활성을 측정한다. 피검물질에 의해 DPPH가 환원되어 흡광도가 감소하는 정도를 공시험액의 흡광도와 비교하여 파장 560nm에서 자유라디칼 소거율을 측정한다.
사용한 시약으로서는 2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl 프리라디칼(Aldrich Chem. Co. MW=618.76)0.1mM 용액으로서 61.88mg을 메탄올에 용해하여 100ml로 한다.
측정방법으로서,
① 96-웰 플레이트에 0.1mM DPPH 용액 0.15ml에 시료용액 0.15ml를 가하여 빨리 교반하고 25℃에서 10분간의 배양을 개시한다.
② 그 후 560nm에서의 흡광도 St를 측정한다.
③ 공시험은 시료용액 대신에 증류수를 사용한 것을 상기와 똑같이 조작해 흡광도 Bt를 측정한다.
④ 역시, 시료용액의 블랭크(Blank)는 0.1mM DPPH 용액 대신에 메탄올을 사용해 똑같이 조작하여 흡광도 Bo를 측정한다.
효과의 결과는 수학식 2에 의하여 산출하였으며, 결과는 표 3에 나타내었다.
St : 시료용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도
Bt : 공시험용액의 자유라디칼 소거 후의 560nm에서의 흡광도
So : 시료용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
Bo : 공시험용액의 자유라디칼 무첨가시 반응 전의 560nm에서의 흡광도
| 시료명 | 처리 농도(ppm) | 항산화효과(%) |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 10 | 29.17 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 20 | 54.59 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 50 | 89.27 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 100 | 92.11 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 200 | 92.92 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 400 | 93.78 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 800 | 93.85 |
| 비타민 C | 0.01 | 87.7 |
상기 표 3의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 초임계 자초 추출물은 50ppm 농도에서부터 비타민 C보다 훨씬 우수한 자유라디칼 소거율을 갖고 있음이 확인되었다.
실험예 3. MMP-1 생성 억제 효과
인간 정상 피부세포인 섬유아세포(한국 세포주 은행, 대한민국)를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)에 각 웰당 1×106 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지(Sigma, 미합중국) 및 37℃의 조건에서 24시간 동안 배양한 후 상기 제조예 2의 초임계 자초 추출물을 최종 농도 100 ㎍/㎖로 첨가한 무혈청 DMEM 배지 및 대조군으로 자초 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지에서 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 MMP-1 분석 킷트(Amersham, 미합중국)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양(ng/㎖)을 측정하고, 하기 수학식 3에 따라 MMP-1 생성 억제율을 계산하였으며, 그 결과는 표 3에 나타내었다. 이때, MMP-1 생성 억제율의 양성 대조군으로 TGF-β(10ng/ml, Roche, 미합중국)을 사용하였다.
| 시료명 | 처리 농도(ppm) | MMP-1 생성억제율(%) |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 10 | 12.5 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 20 | 24.5 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 50 | 55.7 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 100 | 62.3 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 200 | 69.4 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 400 | 78.2 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 800 | 82.1 |
| 비타민 C | 0.01 | 65.3 |
상기 표 4의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 초임계 자초 추출물은 매우 낮은 농도에서도 양성 대조군인 비타민 C 보다 매우 우수한 MMP-1 생성 억제율을 보여주었다.
실험예 4. 초임계 자초 추출물의 자외선 유도에 의한 MMP-1 생성 억제 효과
일반적으로 MMP-1은 자외선에 의해 그 양이 증가되는 것으로 알려져 있다. 따라서 본 발명의 초임계 자초 추출물이 자외선에 의해 생성이 증가되는 MMP-1의 양을 억제하는지를 알아보고자 실험을 실시하였다. 실험은 시료 처리에 앞서 UVA를 일정량 처리하는 것을 제외하고는 실험예 3과 동일하게 실시하였다. 본 실험에 사용한 초임계 자초 추출물은 제조예 2의 추출물을 사용하였으나, 본 실험의 결과가 이에 한정되는 것은 아니다. MMP-1 생성 억제율은 상기 수학식 3에 따라 계산하였으며, 그 결과는 하기 표 5에 나타내었다.
| 시료명 | 처리 농도(ppm) | MMP-1 생성억제율(%) |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 10 | 12.9 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 20 | 36.3 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 50 | 57.8 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 100 | 63.5 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 200 | 80.2 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 400 | 83.5 |
| 초임계 자초 추출물(제조예2) | 800 | 87.2 |
| TGF-β | 0.01 | 68.2 |
상기 표 5의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 초임계 자초 추출물의 자외선 유도 후의 MMP-1 생성 억제율은 양성 대조군인 TGF-β보다 더 우수하였다.
실험예 5. 자초 추출물의 콜라겐 합성 증진 효과
인간 정상 상피세포인 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트에 각 웰당 1 x 106 세포가 되도록 접종하고, DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 상기 제조예 2의 초임계 자초 추출물을 최종농도 100 ㎍/㎖로 첨가한 무혈청 DMEM 배지(실험군) 및 초임계 자초 추출물이 포함되지 않은 무혈청 DMEM 배지(대조군)를 48시간 동안 추가로 배양하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아 콜라겐 키트(Takara, 일본)를 이용하여 프로콜라겐 (procollagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 측정하여 ng/㎖ 환산하였으며, 이로 합성된 콜라겐 양을 측정하였다. 본 실험의 양성대조군으로는 레티놀 및 TGF-β를 사용하였다. 콜라겐 생합성 증가율은 하기 수학식 4에 따라 계산하였으며, 그 결과는 표 6에 나타내었다.
| 시료명 | 처리 농도(ppm) | MMP-1 생성억제율(%) |
| 자초 추출물(제조예2) | 10 | - |
| 자초 추출물(제조예2) | 20 | 10.3 |
| 자초 추출물(제조예2) | 50 | 30.3 |
| 자초 추출물(제조예2) | 100 | 45.5 |
| 자초 추출물(제조예2) | 200 | 63.7 |
| 자초 추출물(제조예2) | 400 | 75.7 |
| 자초 추출물(제조예2) | 800 | 80.3 |
| 레티놀 | 400 | 68.4 |
| TGF-β | 200nm | 70.3 |
상기 표 6의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 초임계 자초 추출물의 콜라겐 합성 증진 효과는 양성 대조군인 TGF-β 및 레티놀과 비교하였을 때 우수한 효과를 갖는 것을 확인하였다.
실험예 6. 자외선 조사에 의한 세포독성 완화 효과
본 실시예는 제조예 2에서 수득한 초임계 자초 추출물의 자외선 조사에 의한 세포독성의 완화효과를 평가하기 위하여 실시되었다. 섬유아세포(fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 1×105개씩 넣고 24시간 동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선 B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 10%FBS가 첨가된 것) 1㎖을 첨가하였다. 여기에 평가하고자 하는 초임계 자초 추출물을 처리한 후 24시간동안 배양하였다. 24시간이 지나면 배지를 제거하고, 각 웰당 세포배양 배지 500㎕ 배지와 MTT 용액(2.5㎎/㎖) 60㎕를 넣은 후 2시간동안 37℃ CO2 배양기에서 배양하였다. 배지를 제거하고 이소프로판올-HCl(0.04N)을 500㎕씩 넣어주었다. 5분간 진탕하여 세포를 용해시키고 상등액 100㎕씩을 96-웰 시험 플레이트에 옮긴 후, 마이크로플레이트 판독기를 사용해 565 nm에서 흡광도를 측정하였다. 하기 수학식 5에 의해 세포생존율(%)을 측정하고 자외선에 의한 세포독성 완화율은 수학식 6에 의하여 계산하였다. 그 결과는 표 7에 나타내었다.
Bo : 세포배양배지 만을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도
Bt : 시료를 처리하지 않은 웰을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도
St : 시료를 처리한 웰을 발색 반응한 웰의 565 nm 흡광도
Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 세포 생존율
Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 세포생존율
St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 세포생존율
| 추출물 처리농도(%) | 세포독성 완화율(%) |
| 0.010% | 65 |
| 0.020% | 73 |
상기 표 7의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 초임계 자초 추출물은 자외선에 의한 세포 독성을 0.010% 농도에서 65% 억제하며,0.020%에서는 73%나 억제하므로, 자외선에 의한 세포독성을 효과적으로 방어함을 알 수 있었다.
실험예 7: 자외선 조사에 의한 염증성 사이토카인 발현 억제효과
본 실시예는 제조예 2에서 수득한 초임계 자초 추출물의 자외선 조사에 의해 발현되는 염증성 사이토카인 발현 억제효과를 평가하기 위하여 사람의 표피조직에서 분리한 섬유아세포(Fibroblast)를 24-웰 시험 플레이트에 5×104개씩 넣고 24시간동안 부착시켰다. 각 웰을 PBS로 1회 세척하고 각 웰에 500㎕의 PBS를 넣었다. 이 섬유아세포에 자외선B(UVB) 램프(Model : F15T8, UV B 15W, Sankyo Dennki사, Japan)를 이용하여 자외선 10mJ/㎠를 조사한 후 PBS를 덜어내고 세포배양 배지(DMEM에 FBS가 첨가되지 않은 배지) 350㎕를 첨가하였다. 여기에 평가하고자 하는 초임계 자초 추출물을 처리한 후 5시간동안 배양하였다. 배양 상층액을 150㎕ 취하여 IL-1α를 정량함으로서 초임계 자초 추출물의 염증성 사이토카인 발현억제효과를 판단하였다. IL-1α의 양은 효소면역분석법 (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)를 이용하여 정량화하였으며, IL-1α의 생성율은 수학식 7에 의해 계산하였다. 그 결과는 표 8에 나타내었다.
Bo : 자외선 조사하지 않고 시료 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량
Bt : 자외선 조사하고 시료를 처리하지 않은 웰의 IL-1α생성량
St : 자외선 조사하고 시료를 처리한 웰의 IL-1α생성량
| 추출물 처리농도(%) | 염증성 사이토카인 발현 억제율(%) |
| 0.010% | 58% |
| 0.020% | 69% |
상기 표 8의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 초임계 자초 추출물은 자외선에 의한 염증성 사이토카인인 IL-1α의 생성을 0.010% 농도에서 58% 억제하며, 0.020%에서는 무려 69%나 억제하므로, 낮은 처리 농도에서도 자외선에 의한 염증 발생을 효과적으로 방어함을 알 수 있다.
이하, 제형예에는 본 발명의 제조예 2로부터 제조된 초임계 자초 추출물을 사용하였으나 본 발명의 제형이 반드시 이에 한정되는 것은 아니다.
제형예 1. 유연 화장수(스킨)
본 발명의 초임계 자초 추출물을 포함하는 화장료 중 유연 화장수(스킨)의 제형예는 다음과 같다:
| 성분 | 함량(중량%) |
| 제조예2의 초임계 자초 추출물 | 0.5 |
| 1,3-부틸렌글리콜 | 5.2 |
| 올레일알코올 | 1.5 |
| 에탄올 | 3.2 |
| 폴리솔베이트 20 | 3.2 |
| 벤조페논-9 | 2.0 |
| 카르복실비닐폴리머 | 1.0 |
| 글리세린 | 3.5 |
| 향 | 미량 |
| 방부제 | 미량 |
| 정제수 | 잔량 |
| 계 | 100 |
제형예 2. 영양화장수(밀크로션)
본 발명의 초임계 자초 추출물을 포함하는 화장료 중 영양화장수(밀크로션)의 제형예는 다음과 같다:
| 성분 | 함량(중량%) |
| 제조예2의 초임계 자초 추출물 | 0.6 |
| 글리세린 | 5.1 |
| 프로필렌글리콜 | 4.2 |
| 토코페릴아세테이트 | 3.0 |
| 유동파라핀 | 4.6 |
| 트리에탄올아민 | 1.0 |
| 스쿠알란 | 3.1 |
| 마카다미아너트오일 | 2.5 |
| 폴리솔베이트60 | 1.6 |
| 솔비탄세스퀴롤레이트 | 1.6 |
| 프로필파라벤 | 0.6 |
| 카르복실비닐폴리머 | 1.5 |
| 향 | 미량 |
| 방부제 | 미량 |
| 정제수 | 잔량 |
| 계 | 100 |
제형예 3. 영양크림
본 발명의 초임계 자초 추출물을 포함하는 화장료 중 영양크림의 제형예는 다음과 같다:
| 성 분(함량:중량%) | 실시예 1 | 비교예 1 |
| 제조예2의 초임계 자초 추출물 | 3.0 | - |
| 친유형 모노스테아린산글리세린 | 2.0 | 2.0 |
| 세테아릴알콜 | 2.2 | 2.2 |
| 스테아린산 | 1.5 | 1.5 |
| 밀납 | 1.0 | 1.0 |
| 폴리솔베이트 60 | 1.5 | 1.5 |
| 솔비탄스테아레이트 | 0.6 | 0.6 |
| 경화식물유 | 1.0 | 1.0 |
| 스쿠알란 | 3.0 | 3.0 |
| 광물유 | 5.0 | 5.0 |
| 트리옥타노인 | 5.0 | 5.0 |
| 디메치콘 | 1.0 | 1.0 |
| 소듐마그네슘실리케이트 | 0.1 | 0.1 |
| 글리세린 | 5.0 | 5.0 |
| 베타인 | 3.0 | 3.0 |
| 트리에타올아민 | 1.0 | 1.0 |
| 소듐히아루로네이트 | 4.0 | 4.0 |
| 방부제, 향, 색소 | 미량 | 미량 |
| 증류수 | 잔량 | 잔량 |
| 합계 | 100 | 100 |
제형예 4. 맛사지 크림
본 발명의 초임계 자초 추출물을 함유한 화장료 중 맛사지 크림의 제형예는 다음과 같다:
| 성분 | 함량(중량%) |
| 제조예2의 초임계 자초 추출물 | 0.5 |
| 글리세린 | 4.0 |
| 바셀린 | 3.5 |
| 트리에탄올아민 | 0.5 |
| 유동파라핀 | 24.0 |
| 스쿠알란 | 3.0 |
| 밀납 | 2.1 |
| 토코페릴아세테이트 | 0.1 |
| 폴리솔베이트 60 | 2.4 |
| 카르복실비닐폴리머 | 1.0 |
| 솔비탄세스퀴올레이트 | 2.3 |
| 향 | 미량 |
| 방부제 | 미량 |
| 정제수 | 잔량 |
| 계 | 100 |
제형예 5. 팩
본 발명의 초임계 자초 추출물을 포함하는 화장료 중 팩의 제형예는 다음과 같다:
| 성 분 | 함량(중량%) |
| 제조예2의 자초 추출물 | 1.0 |
| 에틸알코올 | 3.0 |
| EDTA-2Na | 0.02 |
| 프로필렌 글리콜 | 5.1 |
| 글리셀린 | 4.5 |
| 카보폴 | 1.0 |
| 폴리옥사이드 | 0.1 |
| 방부제 | 미량 |
| 향 | 미량 |
| 정제수 | 잔량 |
| 계 | 100 |
실험예 8. 초임계 자초 추출물을 함유하는 화장료의 피부탄력 개선효과
본 발명의 화장료의 피부탄력 개선효과를 실제 사용 테스트를 통하여 평가하였다. 본 발명의 자초 추출물을 함유하는 제형예 3의 영양크림(실시예1) 및 초임계 자초 추출물을 함유하지 않은 제형예 3의 비교예 1를 사용하여 하기의 실험을 행하였다. 실험자(20세-35세의 여성) 20명을 대상으로 얼굴 오른쪽 부위에는 실시예 1의 크림을 얼굴 왼쪽 부위에는 비교예 1의 크림을 각각 1일 2회씩 연속 3개월간 도포하였다. 실험완료 후 피부탄력 개선효과는 제품 사용 전과 2개월간 사용 후에 피부탄력측정기(cutometer SEM 575, C+K Electronic Co., Germany)를 이용하여 측정하였다. 실험결과는 하기 표 13에 Cutometer SEM 575의 △R8값으로 기재하였는데 R8값은 피부의 점탄성(viscoelasticity)의 성질을 나타낸다.
| 실험제품 | 피부탄력효과(△R8) |
| 실시예 1 | 0.23 |
| 비교예 1 | 0.12 |
상기 표 14의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 초임계 자초 추출물을 함유한 실시예1이 초임계 자초 추출물을 함유하지 않은 비교예 1에 비해 피부 탄력개선 효과가 2배 정도 우수함을 알 수 있다.
실험예 9. 초임계 자초 추출물을 함유하는 화장료의 보습효과
상기 제형예 3에서 제조한 화장료 (실시예 1 및 비교예 1)의 보습력을 평가하기 위하여, 각 화장료가 도포된 피부를 대상으로 하여 수분 보유능을 다음과 같이 측정하였다.
22℃ 및 상대습도 45%의 항온 항습실에서 상기 실시예 1 및 비교예 1의 각 화장료를 24명의 피시험자 얼굴을 반으로 나누어 한쪽에는 실시예 1의 제품을 다른 한쪽에는 비교예 1의 제품을 도포하면서(2회/1일) 4주후의 수분 함유량을 측정하였다.
측정기기는 피부의 수분 함량에 따른 피부의 전기 용량을 측정하여 보습력을 측정하는 수분 함량 측정기 (Corneometer CM825, Courage + Khazaka사, 독일연방국)를 사용하였다. 그 결과는 하기 표 14에 나타나 있다.
| 사용 주수 | 실시예 1 | 비교예 1 |
| 0 Week | 22.78 ㅁ 8.21 | 24.23 ㅁ 8.98 |
| 4 Week | 32.55 ㅁ 6.21 | 28.12 ㅁ 6.14 |
| 4 Week-0 Week | 9.77ㅁ 2.00 | 3.89 ㅁ 2.84 |
상기 표 15의 결과에서 보는 바와 같이, 본 발명의 초임계 자초 추출물을 함유한 화장료 조성물(실시예 1)은 초임계 자초 추출물을 함유하지 않은 화장료 조성물(비교예 1)에 비해 피부 보습효과가 월등히 뛰어났다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.
Claims (8)
- 초임계 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 노화방지용 화장료 조성물.
- 초임계 자초 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부주름개선용 화장료 조성물.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 초임계 자초 추출물은 조성물 전체에 대해서 0.001-30.0중량%로 함유되는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 초임계 자초 추출물은 35 내지 100℃ 온도, 100 내지 500 기압의 압력하에 초임계상태로 만든 이산화탄소를 이용한 초임계 추출법으로 추출한 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제 4 항에 있어서, 상기한 초임계 추출 시에 초임계 이산화탄소에 추가적으로 공용매를 혼합한 혼합 유체를 사용하는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제 5 항에 있어서, 상기 공용매가 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 물, 에틸아세테이트, 부틸아세테이트, 헥산 및 디에틸에테르로 이루어진 군에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물인 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 상기 조성물이 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이로 구성된 군으로부터 선택되는 제형을 갖는 것을 특징으로 하는 화장료 조성물.
- 제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항의 화장료 조성물을 인간의 피부에 도포하는 것을 특징으로 하는 화장 방법.
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