KR101135264B1

KR101135264B1 - 한약재 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101135264B1
Application number: KR1020100008583A
Authority: KR
Inventors: 김동현; 박준성; 유선혜; 김덕희; 김한곤
Original assignee: (주)아모레퍼시픽
Priority date: 2010-01-29
Filing date: 2010-01-29
Publication date: 2012-04-12
Also published as: KR20110088869A

Abstract

본 발명은 한약재 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 자초, 구맥 및 촉규화 혼합 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 항산화, 항노화, 미백, 주름 개선 또는 보습 효과가 우수한 화장료 조성물에 관한 것이다.

Description

한약재 혼합 추출물을 함유하는 화장료 조성물{Cosmetic composition containing the extract of medicinal herb mixture}

자초는 한의학에서 말린 지치의 뿌리를 말한다. 마진, 창양 및 습진에 효능이 있으며 약간 가늘고 긴 방추형으로 간혹 분지되어 있고 길이 6～10cm, 지름 5～15 mm이다. 바깥 면은 어두운 자색-자갈색을 띠고 피층은 거칠고 얇게 벗겨지기 쉽다. 대부분 꼬인 깊은 세로 홈이 있고 때로는 목부까지 이른다. 근두에는 때때로 줄기의 잔경이 붙어 있다. 꺾어지기 쉽고 꺾은 면은 입상이며 빈틈이 많다. 횡절면을 확대경으로 볼 때 피층의 바깥쪽은 어두운 자색을 띠고 안쪽의 엷은 갈색의 부분은 불규칙하게 배열되고 목부는 황색에 가깝다. 근두부의 중앙은 때때로 빈틈이 생겨있고 그 주변은 적자색을 띤다.

구맥은 석죽과의 패랭이꽃 또는 술패랭이꽃의 지상부를 말한다. 구맥은 습열로 인해 소변이 잘 나오지 않는 방광염, 요도염 또는 급성신우신염 등의 치료에 쓰이며 어혈로 인한 월경불순; 수종, 임질과 기타 치질, 난산, 인후염 등에도 활용되고 있다. 약리작용으로 이뇨작용, 장관 흥분작용, 심장억제작용, 혈압하강작용 및 간디스토마억제작용 등이 보고되었다. 생김새는 줄기가 선상이고, 군데군데 약간 융기한 마디에 선상 피침형의 잎이 아주나며 여리에 가지가 분지되어 있다. 바깥면은 황록색이나 엷은 녹색이며 털은 없다. 줄기와 가지 끝에 꽃 또는 삭과가 있다. 꽃받침은 원통형이고 끝은 5갈래로 갈라지고 황록색이며 그 위쪽에 열매가 붙어 있다. 씨는 갈색을 띤다. 이 약은 잎이 많고 황록색이며 뿌리, 기타 이물이 없는 것이어야 한다.

촉규화는 아욱과의 접시꽃의 꽃을 말한다. 꽃 모양이 접시를 닮아서 접시꽃이라고 부르며 백색 꽃을 백규화, 적색 꽃을 적규화라고 한다. 뿌리를 촉규근, 씨를 촉규자, 줄기와 잎을 촉규모라고 하며 모두 약용한다. 이 약은 냄새가 없고 맛은 쓰고 성질은 한쪽으로 치우치지 않고 평하다. 촉규화는 백대하, 하복부 냉증, 대소변불통, 토혈, 자궁출혈, 화상 및 코 끝이 빨개지는 증상 등에 쓰인다. 약리작용으로 말라리아에 효능이 있다고 보고 되었다.

체내 효소계, 환원대사, 화학약품, 공해물질 및 광화학반응 등의 각종 물리적, 화학적 및 환경적 요인 등에 의하여 생성되는 활성산소는 세포구성 성분들인 지질, 단백질, 당 및 DNA 등에 대하여 비선택적, 비가역적인 파괴작용을 함으로써 세포노화 또는 암을 비롯한 각종 질병을 일으키는 것으로 알려져 있다. 또한 이들 활성산소에 의한 지질과산화의 결과로 생성되는 지질과산화물을 비롯한 여러가지 체내 과산화물도 세포에 대한 산화적 파괴를 일으켜 각종 기능장애를 야기함으로써 여러 가지 질병의 원인이 되기도 한다. 따라서, 이와 같은 자유 라디칼을 소거할 수 있는 화합물(free radical scavengers) 또는 과산화물 생성 억제물질과 같은 항산화제들이 이들 산화물들에 기인하는 노화 및 각종 질환의 억제 또는 치료제로서 기대된다.

한편, 피부의 노화는 그 요인에 따라 크게 두 가지로 구분할 수 있다. 그 중 하나인 자연적인 노화(Intrinsic aging)는 피부의 구조와 생리적인 기능이 나이를 먹으면서 계속적인 감퇴를 일으키는 것이고, 다른 하나인 외적 노화(Extrinsic aging)는 태양광선 등 누적된 외부 스트레스로 인해 발생하는 것이다. 특히 태양광의 자외선(ultraviolet rays; UV)은 잘 알려진 노화 원인의 하나로 장시간 자외선에 노출된 피부는 각질층이 두꺼워지고 피부의 주요 구성요소인 콜라겐과 엘라스틴이 변성되어 피부의 탄력성을 잃어가게 된다. 이러한 콜라겐과 엘라스틴은 여러 가지 요인에 의해서 조절되는데, 콜라게나아제(collagenase)와 엘라스타아제(elastase) 같은 기질 메탈로 프로테아제(matrix metallo protease)의 발현으로 인하여 생성된 콜라겐과 엘라스틴이 분해되어 결과적으로 피부 내의 콜라겐 함량이 줄어드는 현상이 나타나게 된다.

이러한 탄력감소의 원인이 되는 콜라겐 및 엘라스틴의 감소를 억제하려는 목적으로 여러 가지 물질들이 개발되어 사용되고 있는데, 그 중 레티놀과 레티노익산 등의 레티노이드 등이 탄력개선 효과를 나타내고(Dermatology therapy, 1998, 16, 357?364), 레구미노사 종자(Leguminosae Seeds)에서 얻어진 단백질분획도 탄력증대 효과를 나타내는데 응용되고 있다(미국등록특허 제5,322,839호). 그러나, 이들 레티노이드들은 소량만을 피부에 적용하여도 피부 자극이 나타난다는 단점을 가지고 있다.

한편, 사람의 피부색을 결정하는 데는 여러 가지 요인들이 관여하는데, 그 중에서도 멜라닌 색소를 만드는 멜라노사이트(melanocyte)의 활동성, 혈관의 분포, 피부의 두께 및 카로티노이드, 빌리루빈 등의 인체 내외의 색소 함유 유무 등의 요인들이 중요하다. 이중 특히 가장 중요한 요인은 인체 내의 멜라노사이트에서 타이로시나제 등의 여러 효소가 작용하여 생성되는 멜라닌이라는 흑색 색소이다. 이 멜라닌 색소의 형성에는 유전적 요인, 호르몬 분비 및 스트레스 등과 관련된 생리적 요인 및 자외선 조사 등과 같은 환경적 요인 등이 영향을 미친다.

신체 피부의 멜라닌 세포에서 생성되는 멜라닌 색소는 검은 색소와 단백질의 복합체 형태를 갖는 페놀계 고분자 물질로서, 태양으로부터 조사되는 자외선을 차단하여 진피 이하의 피부기관을 보호해주는 동시에 피부 생체 내에 생겨난 자유 라디칼 등을 잡아주는 등 피부 내 단백질과 유전자들을 보호해주는 유용한 역할을 담당한다.

이와 같이 피부 내, 외부의 스트레스적 자극에 의해 생겨난 멜라닌은, 스트레스가 사라져도 피부 각질화를 통해서 외부로 배출되기 전까지는 없어지지 않는 안정한 물질이다. 그러나 멜라닌이 필요 이상으로 많이 생기게 되면 기미나 주근깨, 점 등과 같은 과색소 침착증을 유발하여 미용상으로 좋지 않은 결과를 가져오게 된다.

또한, 레저 인구의 증가로 외부에서 활동하는 것을 즐기는 사람들이 많아지면서 자외선에 의한 멜라닌 색소 침착을 막고자 하는 요구가 늘어나게 되었다. 이와 같은 요구에 부응하여 종전부터 아스코르빈산, 코지산, 알부틴, 하이드로퀴논, 글루타치온 또는 이들의 유도체들, 또는 타이로시나제 저해활성을 가진 물질들을 화장료나 의약품에 배합하여 사용하여 왔으나, 이들의 불충분한 미백효과, 피부에 대한 안전성 문제, 화장료에 배합 시 나타나는 제형 및 안정성의 문제 등으로 인해 그 사용이 제한되고 있다.

이에 본 발명자들은 보다 우수한 항산화, 항노화, 미백, 주름개선 및 보습 효과를 부여할 수 있는 원료를 찾고자 하는 연구의 일환으로 여러 천연물을 검색한 결과, 자초, 구맥 및 촉규화로 이루어진 한약재 혼합 추출물이 이들의 단독 추출물에 비해 항산화, 항노화, 미백 및 보습 효과가 더욱더 우수한 것을 발견하여 본 발명을 완성하게 되었다.

따라서, 본 발명의 목적은 항산화, 항노화, 미백, 주름개선 및 보습 효과가 우수한 화장료 조성물을 제공하는 것이다.

상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명에서는 자초, 구맥 및 촉규화로 이루어진 한약재 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명에 의한 화장료 조성물은 자초, 구맥 및 촉규화 혼합 추출물을 유효성분으로 함유함으로써 DPPH 생성 억제 효능을 갖는 항산화 효과 콜라겐 생합성 촉진 효과, 엘라스타아제 및 콜라게나아제의 발현 억제 효과를 통한 항노화 효과가 우수하였고, 멜라닌 생성을 억제하고 자외선에 의해 생성된 색소 침착을 개선하는 효과에 기인한 미백 효과 및 각질형성 세포 분화 촉진을 통한 보습 효과가 우수하였다. 따라서, 본 발명에 의한 자초, 구맥 및 촉규화 혼합 추출물은 항산화, 항노화, 미백, 주름 개선용 화장료 조성물 또는 약학 조성물로서 매우 유용하게 사용될 수 있다.

본 발명은 자초, 구맥 및 촉규화로 이루어진 한약재 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 이때, 상기 한약재들은 0.5:1:1 내지 1.5:1:1의 중량비로 혼합될 수 있으며, 가장 바람직하게는 1:1:1의 중량비로 혼합하여 사용한다. 이때, 자초의 혼합비율이 0.5 미만일 경우에는 상기 혼합 추출물의 피부 효능을 구현하기 어렵고, 1.5를 초과할 경우 제형 제조상의 문제(변색 또는 냄새)가 발생할 수 있다.

상기 한약재 혼합 추출물은 각 한약재를 따로 추출한 후 혼합할 수도 있고, 한약재를 모두 혼합한 상태로 한꺼번에 추출할 수도 있다. 본 발명에서는 상기 한약재를 당업계에 잘 알려진 방법으로 물 또는 유기용매로 추출할 수 있다. 본 발명에 사용하는 유기용매는 에탄올, 메탄올, 부탄올, 에테르, 에틸아세테이트, 클로로포름 및 이들 유기용매와 물의 혼합용매로 이루어진 군에서 선택될 수 있으며, 바람직하게는 80% 에탄올을 사용한다. 이때, 추출온도는 10～80℃가 바람직하며, 6～24시간 동안 추출할 수 있다. 상기 추출온도 및 추출시간을 벗어나면 추출 효율이 떨어지거나 성분의 변화가 생길 수 있다.

본 발명에 의한 화장료 조성물은 상기 한약재 혼합 추출물을 조성물 총 중량에 대하여 0.0001～30 중량%로 함유할 수 있다. 상기 한약재 혼합 추출물의 함량이 30 중량%를 초과하는 경우에는 함량 증가에 비해 그 효과의 증가가 크지 않고 안전성이 떨어지고 제형화하기 어려운 문제가 있고, 0.001 중량% 미만인 경우에는 상기 추출물에 의한 항산화 효과 등을 얻을 수 없다.

본 발명에 의한 화장료 조성물은 상기 유효성분 이외에 당업계에서 통상적으로 사용되는 첨가물 또는 부가물 등을 더 첨가하여 스킨, 스킨토너, 스킨소프트너, 스킨로션, 아스트린젠트, 로션, 영양로션, 밀크로션, 모이스처로션, 영양크림, 맛사지크림, 모이스처크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 세럼, 컨센트레이트, 팩, 마스크, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디클렌저, 바디로션, 바디오일, 샴푸, 린스, 파운데이션, 메이크업베이스, 팩트, 루스파우더, 프레스드파우더, 콤팩트, 아이섀도우, 아이라이너 또는 립스틱 등으로 제형화될 수 있다.

이하, 본 발명의 내용을 실시예 및 시험예를 통하여 보다 구체적으로 설명한다. 이들 실시예는 본 발명의 내용을 이해하기 위해 제시되는 것일 뿐 본 발명의 권리범위가 이들 실시예로 한정되는 것은 아니고, 당업계에서 통상적으로 주지된 변형, 치환 및 삽입 등을 수행할 수 있으며, 이에 대한 것도 본 발명의 범위에 포함된다.

[비교예 1] 자초 추출물 제조

건조시킨 자초 500 g에 80% 에탄올 4 ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 후, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 다음, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 자초 추출물 59 g을 수득하였다.

[비교예 2] 구맥 추출물 제조

건조시킨 구맥 500 g에 80% 에탄올 4 ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 후, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 다음, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 구맥 추출물 40 g을 수득하였다.

[비교예 3] 촉규화 추출물 제조

건조시킨 촉규화 500 g에 80% 에탄올 4 ℓ를 넣고, 3회 환류 추출한 후, 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 다음, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 촉규화 추출물 43 g을 수득하였다.

[실시예 1] 자초, 구맥 및 촉규화의 혼합 추출물 제조

비교예 1의 자초 추출물 25 g, 비교예 2의 구맥 추출물 25 g 및 비교예 3의 촉규화 추출물 25 g을 혼합한 뒤 80% 에탄올 수용액 400 ml를 넣고 완전히 용해시킨 다음 15℃에서 1일간 침적시켰다. 그 후, 여과포 여과와 원심분리를 통해 잔사와 여액을 분리하고, 분리된 여액을 감압 농축하여 자초, 구맥, 촉규화 추출물의 혼합물 69 g을 얻었다.

[시험예 1] 항산화 효과 시험(DPPH test)

유기 라디칼인 DPPH(1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl)의 환원에 의해(항산화제는 산화됨) 발생되는 흡광도의 변화를 통해 항산화능을 평가하였다. 하기 표 1에 기재된 시험물질들에 의해 DPPH의 산화가 억제되어 흡광도가 비처리군(시험물질을 처리하지 않은 군)에 비해 감소되는 정도를 측정하여, 비처리군의 흡광도에 비해서 50％ 이하의 흡광도를 나타내는 농도(IC₅₀ : 첨가한 시료에 의해 흡광도가 50％ 감소했을 때의 시료 농도)를 유효 항산화 농도로 평가하였다.

100 μM(in 에탄올) DPPH 용액 190 ㎕와 하기 표 1의 시험물질들을 각각 10 ㎕ 넣어 반응액을 만들고 37℃에서 30분간 반응시킨 후 540 nm에서 흡광도를 측정하였다. 양성대조군으로는 합성 항산화제인 트롤록스(Trolox)를 사용하였다.

각 물질의 DPPH 분석 결과를 하기 표 1에 나타내었다.

DPPH 분석 결과(억제 %)

시험물질	IC₅₀(ppm)
비교예 1	236
비교예 2	338
비교예 3	295
실시예 1	66
트롤록스	65

표 1의 결과에서, 본 발명에 의한 자초, 구맥 및 촉규화 혼합 추출물이 비교예 1～3의 단일 추출물 보다 좋은 항산화 활성을 보였고, 양성대조군인 트롤록스와 유사한 항산화 효과를 보이는 것을 확인할 수 있었다.

[시험예 2] 콜라겐 생합성 촉진 효과

콜라겐 생합성 촉진 효과를 알아보기 위하여, 먼저, 인간섬유아세포(fibroblast)(PromoCell, Germany)를 24공(well)에 1 공 당 10⁵개씩 파종(seeding)하여 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 이를 24시간 동안 무혈청 DMEM 배지로 배양한 후 무혈청 배지에 녹인 하기 표 2에 기재된 시험물질들을 각각 10^-4 몰농도로 처리하고 24시간 동안 CO₂ 배양기에서 배양하였다. 이들의 상층액을 떠내어 프로콜라겐 형(I) ELISA 키트(procollagen type(I))를 이용하여 프로콜라겐의 증감여부를 보았다. 그 결과를 하기 표 2에 나타내었으며, 여기서 합성능은 비처리군을 100으로 하여 대비한 것이다.

시험물질	합성능(%)
비교예 1	75
비교예 2	69
비교예 3	68
실시예 1	138
EGCG	125
비처리군	100

표 2의 결과에서, 본 발명의 자초, 구맥 및 촉규화 혼합 추출물이 비교예 1～3의 단일 추출물 보다 더 좋은 콜라겐 생합성 증가 효과를 보였고, 양성 대조군인 EGCG와 대비하여도 그 효능이 월등히 우수하였다.

[시험예 3] 콜라게나아제 발현 억제 효능

콜라게나아제 발현 억제 효능(생성 저해능)을 알아보기 위하여, 먼저, 2.5%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM 배지가 들어있는 96공 평판배양기(96-well microtiter plate)에 인간의 섬유아세포를 5,000 세포/공(well)이 되도록 넣고, 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 후 무혈청 DMEM 배지에서 24시간 배양한 다음, 무혈청 DMEM 배지에 녹인 하기 표 3의 시험물질들을 10^-4 몰농도로 24시간 동안 처리한 후, 세포배양액을 채취하였다.

이 후, 채취한 세포배양액을 상업적으로 이용가능한 콜라게나아제 측정기구(미국 아머샴파마샤 사)를 이용하여 콜라게나아제 생성 정도를 측정하였다.

먼저 1차 콜라게나아제 항체가 균일하게 도포된 96-공 평판(96-well plate)에 채위된 세포 배양액을 넣고 3시간 동안 항원-항체 반응을 항온조에서 실시하였다. 3시간 후 발색단이 결합된 2차 콜라겐 항체를 96-공 평판에 넣고 다시 15분간 반응시켰다. 15분 후 발색유발물질을 넣어 실온에서 15분간 발색을 유발시키고, 다시 1 M 황산을 넣어 반응(발색)을 중지시키면 반응액의 색깔은 노란색을 띄며 반응 진행의 정도에 따라 노란색의 정도가 다르게 나타났다.

노란색을 띠는 96-공 평판의 흡광도를 흡광계를 이용하여 405 nm에서 측정하였고, 하기 수학식 1에 의해 콜라게나아제의 발현 정도를 계산하였다. 이때 상기 시험물질을 처리하지 않은 군의 채취된 세포배양액의 반응 흡광도를 비처리군의 흡광도로 하였다.

A: 상기 시험물질 처리 세포군의 흡광도

B: 비처리군의 흡광도

한편, 상기 인간의 섬유아세포에서 상기 시험물질들의 콜라게나아제 발현 억제 효능을 측정한 결과를 콜라게나아제 발현 정도로 하기 표 3에 나타내었으며, 이는 비처리군의 콜라게나아제 발현 정도를 100으로 하여 대비한 것이다.

시험물질	콜라게나아제 발현 정도(%)
비교예 1	106
비교예 2	95
비교예 3	116
실시예 1	31
토코페롤	75
EGCG	60
비처리군	100

상기 표 3의 결과에서, 본 발명에 의한 자초, 구맥 및 촉규화 혼합 추출물이 비교예 1～3의 단일 추출물 보다 콜라게나아제 발현을 효과적으로 억제하였고, 양성 대조군인 EGCG와 대비하여도 그 효능이 월등히 우수하였다.

[시험예 4] 엘라스타아제 발현 억제 효능

엘라스타아제 발현 억제 효능(생성 저해능)을 알아보기 위하여, 먼저, 2.5%의 우태아 혈청이 함유된 DMEM 배지가 들어있는 96공 평판배양기에 인간의 섬유아세포를 5,000 세포/공이 되도록 넣고, 90% 정도 자랄 때까지 배양하였다. 그 후 무혈청 배지로 24시간 배양하고, 무혈청 배지에 녹인 하기 표 4의 시험물질들을 10^-4 몰농도로 24시간 동안 처리한 후, 세포배양액을 채취하였다.

이 후, 채취한 세포배양액을 상업적으로 이용 가능한 엘라스타아제 측정기구(미국 아머샴파마샤 사)를 이용하여 엘라스타아제 생성 정도를 측정하였다.

먼저 1차 엘라스타아제 항체가 균일하게 도포된 96-공 평판에 채위된 세포 배양액을 넣고 3시간 동안 항원-항체 반응을 항온조에서 실시하였다. 3시간 후 발색단이 결합된 2차 엘라스틴 항체를 96-공 평판에 넣고 다시 15분간 반응시켰다. 15분 후 발색유발물질을 넣어 실온에서 15분간 발색을 유발시키고, 다시 1 M 황산을 넣어 반응(발색)을 중지시키면 반응액의 색깔은 노란색을 띄며 반응 진행의 정도에 따라 노란색의 정도가 다르게 나타났다.

노란색을 띠는 96-공 평판의 흡광도를 흡광계를 이용하여 405 nm에서 측정하고, 하기 수학식 2에 의해 엘라스타아제의 발현 정도를 계산하였다. 이때 상기 시험물질을 처리하지 않은 군의 채취된 세포배양액의 반응 흡광도를 비처리군의 흡광도로 하였다.

A: 상기 시험물질 처리 세포군의 흡광도

B: 비처리군의 흡광도

한편, 상기 인간의 섬유아세포에서 상기 시험물질들의 엘라스타아제 발현 억제 효능을 측정한 결과를 하기 표 4에 나타내었고, 이는 비처리군의 발현 정도를 100으로 하여 대비한 것이다.

시료	엘라스타아제 발현 정도(%)
비교예 1	116
비교예 2	109
비교예 3	128
실시예 1	40
토코페롤	88
EGCG	68
비처리군	100

상기 표 4의 결과에서, 본 발명에 의한 자초, 구맥 및 촉규화 혼합 추출물이 비교예 1～3의 단일 추출물 보다 엘라스타아제 발현을 효과적으로 억제하였고, 양성 대조군인 토코페롤 및 EGCG와 대비하여도 그 효능이 월등히 우수하였다.

[시험예 5] 쥐의 색소세포를 이용한 멜라닌 생성 억제 효과

멜라닌 생성 억제효과를 알아보기 위하여 쥐의 색소세포를 이용하여 실험하였다. 먼저, C57BL/6 마우스 유래의 쥐의 색소세포(Mel-Ab cell)(Dooley, T.P. et al, Skin pharmacol, 7, pp 188-200)를 DMEM에 10% 우태반 혈청, 100 nM 2-O-테트라데카노일포르빌(tetradecanoyphorbol)-13-아세테이트, 1nM 콜레라 독소(cholera toxin)를 첨가한 배지에서 37℃, 5% CO₂의 조건에서 배양하였다. 배양된 Mel-Ab 세포를 0.25% 트립신-EDTA로 떼어내고, 24-공 평판에 10⁵ 세포/공의 농도로 세포를 배양하고 이틀째부터 3일 연속으로 10 ppm의 각 시험물질(표 5)을 가하여 배양하였다. 이때, 상기 하이드로퀴논은 양성대조군으로 사용하였다. 그 다음 배양액을 제거하고, PBS로 세척한 후, 1 N 수산화나트륨으로 세포를 녹여 400 nm에서 흡광도를 측정한 다음, 하기 수학식 3에 따라 멜라닌 생성 억제율을 계산하였으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다(Dooley의 방법).

시험물질	멜라닌 생성 억제율(%)
비교예 1	98
비교예 2	108
비교예 3	159
실시예 1	31
하이드로퀴논	41.1
비처리군	100

상기 표 5의 결과에서, 본 발명에 의한 자초, 구맥 및 촉규화 혼합 추출물이 비교예 1～3의 단일 추출물 보다 좋은 멜라닌 생성 억제율을 보이는 것으로 확인되었고, 특히 양성대조군인 하이드로퀴논과 유사한 정도의 멜라닌 생성 억제율을 보이는 것을 확인하였다.

[시험예 6] 각질형성세포 분화 촉진 효과

각질형성세포의 분화 촉진 효과를 알아보기 위하여, 하기와 같이 각질형성세포의 분화시 생성되는 CE(Cornified Envelop)양을 흡광도를 이용하여 측정하였다.

먼저, 신생아의 표피로부터 분리해 일차 배양한 사람의 각질형성세포를 배양용 플라스크에 넣어 바닥에 부착시킨 뒤 하기 표 6의 시험물질을 배양액에 1 ppm 농도로 처리한 후 세포가 바닥 면적의 70～80% 정도 자랄 때까지 5일간 배양하였다. 이때, 저칼슘(0.03 mM) 처리군과 고칼슘(1.2 mM) 처리군을 각각 음성 대조군, 양성대조군으로 하였다. 그 다음 상기 배양한 세포를 수확하여 PBS(Phophate buffered saline)로 세척한 뒤 2% SDS(sodium dodecyl sulfate)와 20 mM 농도의 DTT(Dithiothreitol)를 함유한 10 mM 농도의 트리스-염산 완충액(Tris-HCl, pH 7.4) 1 ml를 가하여 소니케이션(sonication), 보일링(boiling), 원심분리한 후 침전물을 다시 PBS 1 ml에 현탁시켜 340 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 이와 별도로 상기 소니케이션 후의 용액을 일부 취하여 단백질 함량을 측정하고, 세포 분화정도 평가시 기준으로 삼았다. 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다.

시험물질	각질형성세포에서의 분화능(%)
저칼슘(0.03 mM) 용액(음성대조군)	100
고칼슘(1.2 mM) 용액(양성대조군)	210
비교예 1	105
비교예 2	99
비교예 3	109
실시예 1	175

상기 표 6의 결과에서, 본 발명에 의한 자초, 구맥 및 촉규화 혼합 추출물이 비교예 1～3의 단일 추출물 보다 좋은 각질형성세포의 분화를 촉진하는 것을 알 수 있었고 이를 통한 피부 보습 효과에 좋은 효과를 나타낼 수 있음을 확인하였다.

[제형예 1] 파운데이션 제조

하기 표 7에 기재된 조성에 따라 제형예 1의 파운데이션을 제조하였다(단위: 중량%).

번호	성분	함량
1	정제수	잔량
2	실시예 1의 한약재 혼합 추출물	10
3	트리에탄올아민/스테아르산	10
4	부틸렌글리콜	5
5	벤토나이트	0.15
6	소듐마그네슘실리케이트	0.05
7	셀룰로오스검 (카르복시메틸셀룰로오스나트륨)	0.1
8	분체 안료	14.0
9	스테아르산	0.6
10	글라이콜스테아레이트	0.8
11	이소트리데실이소노나노에이트	4.8
12	헥실라우레이트	6.0
13	소르비탄세스퀴올리에이트	0.5
14	글리세릴스테아레이트SE(글리세릴스테아레이트/피이지-100스테아레이트)	0.7
15	폴리소르베이트 60	0.3

<제조방법>

1) 수상성분 1～7을 70～75℃로 가열하여 균일하게 혼합하였다.

2) 상기 1)의 혼합물을 교반하면서 70～75℃를 유지한 상태에서 서서히 고상 분체 성분 8을 투입한 후 균일하게 교반하였다.

3) 성분 9～15를 가열하여 용해한 다음 상기 2)의 혼합물에 서서히 투입하며 유화하였다.

4) 상기 3)에서 제조한 생성물을 30℃로 냉각한 후 수중유형 액상 파운데이션을 얻었다.

[제형예 2] 립스틱 제조

하기 표 8에 기재한 조성에 따라 제형예 2의 립스틱을 제조하였다(단위: 중량%).

번호	성분	함량
1	칸데릴라 왁스	7.0
2	밀납	5.0
3	실시예 1의 한약재 혼합 추출물	10.0
4	폴리글리세릴-2-트리이소스테아레이트	10.0
5	피마자유	잔량
6	수소화된 폴리이소부텐	10.0
7	C10-11이소파라핀	2.0
8	실리콘 젤	1.0
9	비타민E 아세테이트	2.0
10	티타늄디옥사이드	3.0
11	철 산화물	5.3
12	FD&C 예로우(yellow) #5 알루미늄-레이크	4.5
13	D&C 레드(red)#7 칼슘-레이크	1.2
14	운모	4.0
15	실리카	5.0
16	방부제	적량
17	향	0.2

<제조방법>

1) 상기 원료성분 1～2를 각 중량비율대로 평량하여 80～90℃로 가열한 후 용해하였다.

2) 상기 1)에서 제조한 혼합물에 원료성분 3～9를 각 중량비율대로 평량하여 75～80℃로 가열한 후 교반하여 용해하였다.

3) 상기 2)에서 제조한 혼합물에 원료성분 10～16을 각 중량비율대로 평량하여 호모 믹서(homo mixer)로 분산시켰다.

4) 상기 3)을 탈기 후 원료성분 17를 넣고 80～90℃에서 금속몰드 또는 일회용 플라스틱 몰드 등에 부어 성형하였다.

[제형예 3] 아이섀도우 제조

하기 표 9에 기재된 조성에 따라 제형예 3의 아이섀도우를 제조하였다(단위: 중량%).

번호	성분	함량
1	탈크	잔량
2	마이카	5.0
3	알루미늄 스테아레이트	3.0
4	색소	3.0
5	실시예 1의 한약재 혼합 추출물	10.0
6	오일(페닐 트리메치콘)	20.0

<제조방법>

1) 성분 1～5를 평량하여 헨슬믹서로 600 rpm에서 5분간 혼합하였다.

2) 성분 6을 85℃로 가열하여 용해하였다.

3) 상기 1)의 혼합물에 2)를 분무하고 헨슬믹서로 600 rpm에서 5분간 혼합하였다.

[제형예 4] 아이라이너

하기 표 10에 기재된 조성에 따라 제형예 4의 아이라이너를 제조하였다(단위: 중량%).

번호	성분	함량
1	실시예 1의 한약재 혼합 추출물	10.0
2	아크릴레이트 코폴리머	25.0
3	정제수	잔량
4	소디움 메타포스페이트	0.07
5	이소부틸렌	0.5
6	부틸렌글리콜	3.5
7	잔탄검	0.18
8	소디움 마그네슘 실리케이트	0.04
9	벤토나이트	0.45
10	산화철	20.0
11	방부제	적량

<제조방법>

1) 상기 성분 1～9를 혼합하여 실온에서 교반하였다.

2) 상기 1)에 성분 10을 넣고 실온에서 교반하였다.

3) 상기 2)에 성분 11을 넣고 실온에서 교반 후, 탈기하여 조성물을 제조하였다.

Claims

자초, 구맥 및 촉규화로 이루어진 한약재 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 자초, 구맥 및 촉규화는 0.5:1:1 내지 1.5:1:1의 중량비로 혼합된 것임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 항산화용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 항노화용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 미백용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 주름개선용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 보습용임을 특징으로 하는 화장료 조성물.