KR20110082292A - 아토피 및 여드름 피부에 효능을 보이는 황칠나무 추출물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 아토피성 피부의 예방 및 치료와 여드름 피부에 유효한 효과를 나타내는 황칠나무(Dendropanax morbifera Lev.) 수액과, 수피를 물 및 유기용매로 추출한 추출물, 그에 대한 각 분획물과 정유추출물에 관한 것으로, 사람의 아토피 병변과 가장 유사한 아토피 마우스(NcNga)에 있어서 화학적 아토피 유발 물질인 DNCB (2,4-dinitrochlorobenzene)에 의한 아토피 병변을 억제하여 가려움증 억제 및 우수한 항염증 효능을 갖으며, 여드름을 악화시키는 원인균으로 알려진 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)에 대하여 항균 작용이 우수하다.

Description

아토피 및 여드름 피부에 효능을 보이는 황칠나무 추출물 {Antipuritis and antiance effects of Dendropanax morbifera Lev. extract}

본 발명은 아토피성 피부염 관련 가려움증 완화 및 항염증, 항균효과를 통해 여드름 피부에 효능을 나타내는 황칠나무 수액 및 추출물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 아토피성 피부염 관련 가려움증과 여드름 증상을 완화시키기 위하여 인체에 안전한 천연 한방 생약제인 황칠나무의 수액과 수피부분에서 추출한 물, 에탄올 및 정유 추출물로서 아토피성 피부염을 증상을 겪고 있는 환자들에게 제공하기 위한 것이다.

피부질환이란 사람을 포함한 포유동물의 머리털과 손톱, 발톱을 포함하는 모든 피부에 나타나는 이상 소견을 의미하는 것으로, 아토피 알러지를 가진 사람에게서 나타나는 아토피 피부염(atopic dermatitis)이 대표적인 질환이다. 아직까지 아토피 피부염의 원인은 명확히 밝혀지지 않았지만, 알레르기성 체질인 사람에서 호발하고, 특히 다른 알러지 질환인 알러지성 비염, 천식 등을 동반하여 유전적 요인이나 면역 질환의 하나로 이해하고 있다. 아토피 질환의 특징으로는 초기의 심한 가려움증에 의해 대부분이 피부를 긁고 이에 따른 2차감염과 특히 환자의 정신적 안정 및 감정의 상태에 따라 더욱 악화될 수도 있다. 아토피 피부염은 상당히 많은 사람들이 앓고 있는데, 전 인구의 0.5~1%가, 어린이의 경우는 5~10%가 고통 받고 있다. 증상이 나타나는 시기는 대체로 생후 2~6개월 내이며, 특히 1세 미만의 영아에게서 가장 많이 나타나고, 85%가 만 다섯살 안에 나타난다. 아토피성 피부염은 주로 유아기에 자주 발생하지만, 최근에는 사춘기 이후의 환자가 증가하고 있고, 그 병력도 매우 길어지고 있다. 아토피성 피부염의 치료에는, 높은 약리효과를 기대할 수 있는 스테로이드 제제 등의 약제가 사용되고 있다. 그러나 이와 같은 스테로이드 제제의 부작용이 문제가 되고 있고, 환자는 치료기간 중에 부작용의 위험에 노출되어 있다. 더욱이, 스테로이드 제제의 사용 중지에 의하여 부작용(약물의 사용정지 후에 일어나는 극적인 환부의 병세악화)이 생기는 것도 잘 알려져 있다. 이와 같은 부작용의 대책으로서, 부신피질 호르몬 등의 호르몬을 포함하지 않는 비스테로이드성 항염증제 또는 항히스타민제 등이 사용되고 있으나 완치가 어려운 상태이다. 따라서 부작용이 없는 아토피 피부염의 경감 또는 치료제 개발이 매우 절실한 실정이다.

여드름은 호르몬의 작용, 과도한 피지분비, 세균의 감염 등에 의한 모피지선, 모낭, 주변조직의 염증질환을 의미한다. 여드름의 원인으로는 우선 신체의 성장과 더불어 2차 성징이 나타나면서 올 수 있는 내분비 기능의 불균형을 들 수 있다. 연령이나 성별, 피부타입에 따라 차이가 있지만, 사춘기에 피지분비가 가장 왕성하며, 이외에도 유전적으로 피지분비가 많은 지성피부, 스트레스도 피지선에서 생성한 지방이 땀이나 먼지 등과 함께 모공을 막아 여드름이 생성된다. 여드름을 짜서 모낭벽이 터지거나 자발적으로 파열되고 그 내용물이 주위조직으로 배출되면 상피세포, 피지, 다른 미생물 등에 의해 더욱 심한 염증반응인 농양을 일으킬 수 있다. 농양은 치유과정에서 흉터를 남기기도 한다. 피지선에서 발견되는 세균인 프로피오니박테리움 아크네스(propionibacterium acnes)는 정상적인 세균총에 속하지만 여드름이 없는 사람보다는 여드름이 있는 사람에게서 더 많은 군체가 발견된다. 프로피오니박테리움 아크네스는 여드름의 직접적인 병인은 아니지만 염증성 여드름 생성에 관여한다. 즉, 이 균이 백혈구를 모여들게 하는 주화성물질을 만들어서 백혈구가 피지선에 모여들고, 가수분해 효소와 염증성 유리지방산을 분비하도록 하기 때문이다.

종래의 황칠나무에 관한 관련 기술로는 한국 특허공개 제 2000-0004499에 항암활성을 가지는 황칠나무 추출물이 기재되어 있고, 한국 특허공개 제 2003-0079205에 간세포 보호효과를 갖는 황칠 추출물, 황칠 분획물 및 이들을 함유한 약학 조성물이 기재되어 있고, 한국 특허공개 제 2004-01077853에 에탄올 유발 간손상을 억제하는 황칠추출물이 기재되어 있고, 한국 특허공개 제 2004-0107852에 피부 미백 효과가 있는 황칠추출물과 황칠 분획물이 기재되어 있으며 한국 특허공개 제 2005-0036093에 황칠나무 수액을 유효성분으로 하는 자외선 차단 화장품 조성물, 한국 특허공개 제 2006-0131360에 생리활성이 뛰어난 황칠나무의 종실추출물이 기재되어 있으나, 황칠나무의 수액 및 추출물에 대한 아토피 피부염과 여드름을 비롯한 피부질환에 관한 기술은 없다.

본 발명은 상기한 문제점을 해결하기 위하여 안출된 것으로서, 본 발명의 목적은 탁월한 치료 효능을 보이는 아토피 및 여드름 등의 피부질환에 있어서 외용치료제 황칠나무 추출물 및 수액을 제공하는 것이다. 본 발명은 종래의 천연물 유래의 아토피관련 제품에 비해서 아토피 피부염 억제, 항균, 항염증 효과가 우수하여 아토피 피부염 및 여드름 질환에 있어서 개선 효과 및 그 효과의 지속성이 우수하며, 인체에 안전하고, 비자극성이며, 피부 개선 효과가 우수한 천연물 제제를 제공하는 것을 목적으로 한다.

황칠나무(Dendropanox morbifera LEV.)는 두릅나무에 속하는 상록 활엽교목으로 우리나라의 제주도와 완도, 보길도, 해남 등 남ㆍ서해안 일대에 자생하고 있는 우리나라 특산 수종이다. 겨울에도 낙엽이 지지 않는 수종으로 수피(樹皮)에 상처를 주면 황색의 진(津)이 나오는 데 이것을 황칠(黃漆)이라 하며 전통적으로 가구 및 다양한 분야에 이용되었다. 황칠은 목공예 표면도장용 칠의 하나로서 옻칠은 검은색 도료인데 비해 황칠은 황색이다. 또한 황칠은 금빛을 띠고 있으면서 투명하여 바탕의 나뭇결을 생생하게 보여주는 특징이 있다. 우리나라 목칠공예의 아름다움은 울긋불긋한 채색이 아니라 나무결의 효과를 살리는 것을 중요하게 여겼으며 황칠은 이러한 효과를 내기에 적절한 도료였다. 이처럼 목칠공예에 중요한 황칠의 공급원인 황칠나무는 옻나무와는 달리 열대수목인 난지산으로 내한성이 매우 약하여 그 생육한계가 해발 600m 이하인 연평균 최저기온이 -2℃ 이상이며, 평균기온 12∼15℃로 약산성 토양과 습기가 많은 지역에서 자생하고 있다. 또한 황칠나무의 수액을 바르게 되면 머리를 맑게 하고 심신을 편안하게 해주는 효과가 있음은 물론, 은은하고 매혹적인 향기를 품고 있어 여성들의 향수로도 사용되고 있으며, 이러한 황칠나무의 안식향 성분은 신경안정작용을 하여 머리를 맑게 하며 새집증후군의 원인인 포름알데히드의 제거능력이 뛰어나 거실 및 사무실, 수험생의 방에 놓아두기도 한다. 또한 예로부터 민간에서 구전되어 오는 바로는 황칠나무의 수액이 염증치료에 탁월한 효과가 있다고 전해 내려오고 있다.

한편, 황칠나무 수액에 함유된 정향성분은 소량의 터펜(Terpene)류와 다량의 세스퀴터펜(Sesquiterpene)류가 포함되어 있는데, 채취시기나 장소에 따라서 차이가 있지만 germacrene-d, β-selinene, α-amorphene, α-selinene, δ-cadinene,γ-cadinene, T-muurolol, β-elemene, bicyclo [4,4,0] dec- 1 - en - 2 - isopropyl - 5 - methyl - 9-methylene, β-cadinene, germacrene-B, α-copaene, α-humulene, α-cadinene과 소량의 linalool L, α-terpinene, α-cubebene, α-ylangene,(+)-calarene, 3,7-guaiadine, (-)-isoledene, β-cubebene, limonene, aromadendrene, cadina-1,4-diene 등이 함유되어 있다.

본 발명에 있어서 황칠나무 수액과 물, 에탄올 추출물 및 정유추출물은 기존의 아토피 및 여드름 질환에 있어서 효능을 보이는 새로운 생약으로써 실제 사람의 아토피 피부병변과 가장 유사한 동물모델로 알려져 있는 Nc/Nga 마우스를 사용하여, 가려움 및 염증, 아토피 질환에 있어서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있는 사이토카인(cytokine) 등에 있어서의 효능을 확인하였다. 또한 여드름을 악화시키는 원인균으로 알려진 프로피오니박테리움아크네스에 대한 항균력을 확인하였다.

본 발명의 황칠나무 수피 추출물을 제조하는 방법은 정제수와 유기용매로 추출한 추출물을 얻을 수 있다. 또한 상기의 액상의 추출물은 농축을 하거나 또는 건조분말로 만들 수 있다. 더불어 연속증류 추출방법에 따른 정유성분 추출물을 얻을 수 있다.

이하 본 발명의 황칠나무 수피 추출법에 대하여 상세히 설명한다.

본 발명의 황칠의 추출방법은 황칠나무의 수피를 세절하고 건조한 후 중량의 약 10배 분량의 물 혹은 추출용매를 넣은 뒤 50~120℃에서 5~24시간 동안 가온하거나, 소니케이션 하거나, 상온 또는 4℃에서 3~4일간 냉침 하여 추출한 다음, 추출액을 40~60℃로 냉각시킨 후 여과하거나, 냉각 없이 상징액을 취한다. 상기 추출용매로는 에탄올, 메탄올, 부탄올 등의 알코올 용매와 물이 바람직하다. 다음, 상기와 같은 추출 및 여과 조작을 1회 이상 바람직하게는 3회 이상 반복 실시하여 얻은 상징액을 모두 합하고, 회전증발장치 등을 이용하여 감압 하에서 용매를 증발시켜 황칠 추출물을 얻을 수 있다. 이를 소량의 증류수에 용해하여 황칠 추출물을 얻어 시료로 사용할 수 있으며, 상기 농축액을 -80℃ 동결건조 혹은 50℃ 진공감압을 통하여 분말상태로도 얻을 수 있다.

본 발명의 황칠나무 수피의 정유성분 추출은 시료용기에 세절된 황칠나무 수피와 10배수의 증류수를 둥근 바닥 플라스크에 넣고 개량형 simultaneous steam distillation and extraction(SDE)장치를 사용하여 4시간 증류 추출하였다. 이때 추출용 용매로서는 n-pentane : diethyl ether (1:1) 혼합용매 사용하였으며 냉각수의 온도는 2±1℃를 유지하였다. 추출된 정유는 무수황산나트륨으로 탈수 여과한 다음 Vigreux 컬럼(20cm)을 사용하여 40℃이하에서 용매를 제거한 후 시료로 사용하였다.

또한 본 발명의 의약품 외용제 또는 화장료 조성물은 상기한 한방 식물추출물 외에도 필요에 따라 본 발명의 효과를 저하시키지 않는 범위 내에서 피부 외용제에 일반적으로 사용하는 각종 성분, 예를 들면 수용성 성분, 분말 성분, 유분, 계면활성제, 보습제, 점도조절제, 방부제, 산화방지제, 향료, 색소 등을 배합하는 것이 가능하다. 또한 종래의 아토피피부 치료제에 많이 사용되어온 세라마이드(Ceramides) 등 보습제 또는 지질(Lipids) 성분이나 하이드로코티손(Hydrocortisone) 등의 스테로이드(Steroids), 레티닐 팔미테이트(Retinyl palmitate) 등의 비타민A 유도체 또는/및 토코페롤(Tocopherol), 기타 식물추출물 등을 공지의 레시틴(lecithin)을 이용하여 리포좀(liposome) 형태로 만들거나 N-스테아로일-파이토스핑고신(Nstearoyl-phytosphingosine)에 포접시켜 병용도 가능하다. 또한 본 발명에 사용된 황칠은 오래 전부터 동양에서는 민간요법 또는 한방에서 사용해 오던 재료로서 일정 함유량 내에서 피부 외용제로 사용시 인체에 대한 안전성이 확인되어 있어서, 피부 및 점막에 대한 자극은 거의 없는 것으로 알려져 있으며 상기 생약 추출물에 기호성 식품 성분을 첨가하여 통상적으로 알려진 방법에 의하여 각종 건강기능식품을 제조할 수 있고, 또한 일반적인 제형으로 제형화 될 수 있으며, 제형에 따라 당업자가 적의하게 선택하여 배합 할 수 있으며, 황칠나무 추출물 및 수액을 20중량%이하 함유시켜 만들 수 있다.

본 발명의 황칠나무수액과 수피부분의 물추출물, 에탄올추출물 및 정유추출물은 가려움증을 가라앉히고 항균성 및 아토피 동물모델의 병변을 경감시키고 지속적으로 발생하는 요인을 차단함으로서 아토피 피부염을 겪는 환자에게 예방, 개선 치료에 우수한 효과를 나타낼 수 있으며 가려움과 염증 부분에 있어서 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있는 IgE, TNF-α등을 모두 감소시킴으로써 나타내는 효과를 보인다. 또한 여드름의 원인균으로 알려져 있는 프로피오니박테리움 아크네스에 대한 뛰어난 항균작용을 갖는다.

<실험예 1 : 항균효과실험 : 스타필로코커스 아우레어스 (Staphylococcus aureus)>

황칠나무수액과 수피부분의 물, 에탄올추출물과 분획물 및 정유추출물에 대한 아토피성 피부염의 2차 감염 세균에 대한 항균성을 확인하고자 스타필로코커스 아우레어스(Staphylococcus aureus : ATCC 29737)균을 사용하였다. 실험방법은 페이퍼 디스크(paper disc)를 이용한 아가 확산(agar diffusion)법으로 사용 균주에 상기 추출물 및 분획물 샘플을 멸균한 증류수에 녹인 후 각 농도별로 50㎕ 씩 페이퍼 디스크에 점적한 후 디스크 주위에 생성된 저해환의 직경(㎜)으로 항균력을 측정하여 아래 표1에 나타내었다. 그 결과 모든 추출물 및 분획물에서 용량 의존적인 효과를 확인할 수 있었으며, 특히 각 분획물에 비해 물, 에탄올 및 정유추출물과 수액을 처리하였을 때 항균력이 더욱 우수함을 확인 하였다. 또한 광범위한 항균범위를 가지고 있는 것으로 알려져 있는 트리클로산과 살리실산에 비해서도 매우 우수한 항균력을 나타냄을 확인하였다.

Group		Staphylococcus aureus (ATCC 29737)
		디스크주위에 생성된 저해환의 직경(mm)
멸균 증류수 (50㎕)		8.6±0.24
정제수추출물	0.1%	10.2±0.32
	1%	12.5±0.21
	10%	13.1±0.38
	20%	13.7±0.29
수액	0.1%	9.8±0.34
	1%	11.3±0.41
	10%	11.9±0.78
	20%	13.9±0.43
정유추출물	0.1%	10.3±0.21
	1%	13.5±0.76
	10%	13.9±0.93
	20%	14.9±0.32
EtOH ext	0.1%	10.2±0.45
	1%	12.6±0.87
	10%	13.1±0.32
	20%	14.7±0.56
Hexane fr	0.1%	10.3±0.93
	1%	11.6±0.11
	10%	12.2±0.28
	20%	12.7±0.23
Ethyl acetate fr	0.1%	9.9±0.38
	1%	11.7±0.71
	10%	11.9±0.63
	20%	12.5±0.56
Butanol fr	0.1%	9.6±0.74
	1%	10.9±0.71
	10%	11.8±0.63
	20%	12.9±0.03
살리신산 (Salicylic acid)	3mg/ml	11.9±0.93
	5mg/ml	13.8±0.41
트리클로산 (Triclosan)	3mg/ml	12.8±0.36
	5mg/ml	13.5±0.4

<실험예 2 : 항균효과실험 : 프로피오니박테리움 아크네스 (Propionibacterium acnes)>

황칠나무의 에탄올 및 각각의 분획물 및 정유추출물에 대한 여드름의 원인균에 대한 항균성을 확인하고자 프로피오니박테리움 아크네스 (Propionibacterium acnes : ATCC 6919)균을 사용하였다. 실험방법은 페이퍼 디스크(paper disc)를 이용한 아가 확산(agar diffusion)법으로 상기 실험예 1의 실험법과 같으며, 그 결과를 아래 표2에 나타내었다. 그 결과 모든 추출물 및 분획물에서 용량 의존적인 효과를 확인할 수 있었으며, 특히 각 분획물에 비해 물, 에탄올 및 정유추출물과 수액을 처리하였을 때 항균력이 더욱 우수함을 확인할 수 있었다. 또한 여드름 치료에 유효성분으로 사용되어 오던 살리실산과 광범위한 항균범위를 갖는 것으로 알려져 있는 트리클로산과 비교해도 대등한 효과를 보였다.

Group		Propionibacterium acnes (ATCC 6919)
		디스크주위에 생성된 저해환의 직경(mm)
멸균 증류수 (50㎕)		8.6±0.24
정제수추출물	0.1%	10.2±0.45
	1%	12.5±0.87
	10%	13.1±0.32
	20%	14.5±0.56
수액	0.1%	9.8±0.34
	1%	11.3±0.41
	10%	11.9±0.78
	20%	13.9±0.43
정유추출물	0.1%	10.2±0.21
	1%	13.5±0.76
	10%	13.9±0.93
	20%	14.8±0.32
EtOH ext	0.1%	9.6±0.74
	1%	11.9±0.71
	10%	13.8±0.63
	20%	14.9±0.03
Hexane fr	0.1%	10.3±0.93
	1%	11.6±0.11
	10%	12.2±0.28
	20%	12.7±0.23
Ethyl acetate fr	0.1%	9.9±0.38
	1%	11.7±0.71
	10%	11.9±0.63
	20%	12.5±0.56
Butanol fr	0.1%	9.8±0.49
	1%	10.5±0.56
	10%	12.9±0.63
	20%	13.2±0.36
살리신산 (Salicylic acid)	3mg/ml	11.9±0.93
	5mg/ml	13.8±0.41
트리클로산 (Triclosan)	3mg/ml	12.8±0.36
	5mg/ml	13.5±0.4

<실험예 3 : In vivo 평가, 염증 및 부종 유발인자(TPA)로 유도한 마우스 모델 실험>

황칠나무의 에탄올 및 정유추출물에 대한 항염증 효능을 확인하고자 실험동물로써 4~6주령의 체중 25~35g인 ICR계 마우스를 실험군별로 5마리씩 사용하여 반복실험 하였다. 먼저 각 그룹별로 각각의 일정한 함량의 추출생약이 함유되어 있는 화장료를 마우스의 양쪽 귀에 각각 50㎕씩 도포하여 준다. 30분이 지난 후 부종 유도 물질인 TPA(12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate)를 5nmol/50㎕ 의 농도로 4시간 처리 후 마우스의 양쪽 귀를 잘라내어 무게를 측정하여 TPA에 의해 유도된 부종 및 염증에 있어서의 상기 추출물들에 대한 억제율을 하기의 표3에 나타내었다. 그 결과 상기 황칠의 물, 에탄올 및 정유추출물과 수액 모두 용량 의존적으로 TPA에 의한 부종 및 염증을 억제하는 것을 확인할 수 있었으며 황칠나무 물추출물 및 수액에 비해 에탄올추출물(10%:27.72%), 정유추출물(10%:31.11%)이 다소 높은 억제율을 나타내는 것을 확인할 수 있었다. 또한 부종 및 염증에 뛰어난 효능을 보이는 것으로 알려져 있는 인도메타신(Indomethacin)과 비교해 보았을때 황칠 추출물의 억제율은 상대적으로 미약하지만 비교적 우수한 부종 및 염증억제 활성을 보이는 것으로 나타났으며, 황칠추출물을 여드름 예방 및 치료 목적으로 피부용 조성물에 배합할 경우 더욱 우수한 항균효과를 나타낼 것으로 예상된다.

Group		귀 무게 (mg)	억제율 (%)
증류수 (50㎕)		11.48±0.21	-
TPA		19.18±0.06	#
정제수 추출물	1%	16.41±0.13	14.42
	10%	14.41±0.31	24.86
정유추출물	1%	16.16±0.29	15.73
	10%	13.86±0.27	27.72
EtOH 추출물	1%	16.05±0.24	16.32
	10%	13.21±0.28	31.11
수액	1%	16.52±0.30	13.84
	10%	13.55±0.21	29.35
인도메타신 (Indomethacin)	0.05%	15.2±0.32	20.75
	0.1%	12.0±0.18	37.43

<실험예 4 : In vivo 평가, 아토피 유발인자(DNCB)로 유도한 마우스 모델 실험>

상기 추출물이 사람의 아토피 병변과 가장 유사한 병변을 갖는 마우스에 있어서의 치료효과를 확인하기 위하여 7주령의 체중 25~27g인 Nc/Nga 마우스를 사용하였다. Nc/Nga 마우스의 등 부위를 제모한 뒤 화학적 아토피 유발물질로 알려져 있는 DNCB(2,4-dinitrochlorobenzene) 1%를 실험 시작 3일 전 200㎕씩 귀 및 등 부분에 도포하고, 3일 후부터는 상대적으로 우수한 항염증 효과를 확인할 수 있었던 황칠 에탄올추출물, 정유추출물과 대조군으로써 인도메타신을 주 3회씩 200㎕ 도포하여 주었다. DNCB는 0.2% 의 농도로 주 2회 150㎕씩 지속적으로 도포하여 준다. 12주간 일주일에 한 번씩 아토피 관련 평가 항목<홍반 (Erytherma), 부종&혈종 (Edema&Excoriation), 짓무름 (Erosion), 태선화 (Lichenificaiton)>들을 scoring(0:증상없음, 1:경증, 2:중증, 3:매우심한증상)하여 합산한 값의 평균값으로 평가하였고 이 결과를 도 1 에 나타내었으며, 도 2 에 동물의 사진을 첨부하였다. 또한 12주째에 마우스의 안면, 귀, 등 부위의 긁는 횟수를 20분간 측정하여 아래 표4에 나타내었고, 그 결과 control 마우스에 비해 DNCB를 처리한 그룹에서 긁는 횟수가 약 10배 이상 증가하였으며, 에탄올추출물 및 정유추출물을 처리한 그룹에서는 DNCB를 처리한 그룹과 대비하여 각각 56.22%, 59.91% 억제하는 결과를 확인할 수 있었다. 그러나 인도메타신을 처리한 그룹에서는 가려움을 22.35% 감소시켰으나, 황칠 추출물에 비해서는 낮은 억제율임을 확인할 수 있었다.

Group	20분간 긁는 횟수	억제율 (%)
Control	8.0±2.02	-
DNCB	86.8±6.62	#
EtOH ext (1%)	38.0±4.16	56.22
정유추출물 (1%)	34.8±2.60	59.91
인도메타신 (0.1%)	67.4±7.47	22.35

또한 12주째 마우스의 혈액에서 분리한 serum 내에서의 IgE 및 TNF-α level을 측정하였으며 그 결과를 아래 표 5, 6에 각각 나타내었다. IgE의 결과 control 그룹과 비교 하였을 때 DNCB를 처리한 그룹에서 IgE level이 약 두배 이상 증가됨을 확인하였으나, 황칠의 각 추출물을 발라준 그룹에서는 DNCB를 그룹에 비해 황칠 추출물이 억제 시키는 것을 확인할 수 있었으며 에탄올 추출물에 비해 정유추출물이 높은 억제율을 나타내었다(에탄올추출물 : 9.04%, 정유추출물 : 19.88%). 또한 인도메타신의 경우 14.89% 억제시키는 결과를 확인하였다. 이에 본 생약구성 화장료가 감소시키는 아토피병변(도1, 도2 참조)은 12주째에서 IgE가 억제됨으로써 가려움 등에 있어서 효과를 보이는 것으로 확인 할 수 있었다. TNF-α의 결과 control 그룹과 비교하였을 때 DNCB를 처리한 그룹에서 TNF-α level이 증가됨을 확인하였고, 황칠의 각 용매별 추출물을 발라준 그룹에서는 DNCB를 처리한 그룹에 비해 에탄올추출물 13.14%, 정유추출물 19.36% 억제시키는 경향을 확인하였다. 또한 인도메타신을 처리한 그룹에서는 30.27% 감소시키는 것을 확인하였다. 이에 본 생약구성 화장료가 감소시키는 아토피병변(도1, 도2 참조)은 12주째에서 TNF-α가 억제됨으로써 부종과 염증 등에 있어서 효과를 보이는 것으로 확인할 수 있었다.

Group	IgE level(ng/ml)	억제율 (%)
Control	52.30±9.32	-
DNCB	124.41±8.53	#
EtOH ext (1%)	113.16±6.34	9.04
정유추출물 (1%)	99.67±7.33	19.88
인도메타신 (0.1%)	105.88±9.29	14.89

Group	TNF-α level(pg/ml)	억제율 (%)
Control	368.30±24.56	-
DNCB	579.02±36.91	#
EtOH ext (1%)	502.94±22.29	13.14
정유추출물 (1%)	466.93±21.51	19.36
인도메타신 (0.1%)	403.74±8.23	30.27

도 1은 사람의 아토피 병변과 가장 유사한 병변을 갖는 마우스에 있어서의 황칠의 에탄올 및 정유 추출물을 처리하였을 때의 치료효과 그래프이다.
도 2는 아토피 유발인자(DNCB)로 유도한 마우스 모델 실험의 결과이다.

이하, 본 발명을 하기 실시예에 의하여 보다 구체적으로 설명하지만 이들에 의해 본 발명의 범위가 어떤 식으로든 제한되는 것은 아니다.

<실시예 1 : 황칠나무 추출물의 제조>

황칠나무 수피 600g을 50메쉬 정도의 입자로 잘게 분쇄한 후, 각각의 생약 중량의 5배량의 증류수 혹은 에탄올수용액에서 3시간 동안 환류 냉각한 후, 여과지(10㎛ filter)로 여과하여 추출한 액을 감압 농축하여 본 발명의 각 생약 추출물을 수득할 수 있다. 또한, 상기 추출물을 약 -80℃에서 얼린 후 동결 건조하여 분말 상태로도 제조할 수 있다.

<실시예 2 : 황칠나무 분획물의 제조>

상기 실시예 1의 황칠 에탄올 추출물은 헥산분획물, 에틸아세테이트 분획물, 부탄올 분획물 및 물 분획물로 이루어진 군으로써 제조방법은 먼저 황칠 추출물에 용매로서 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물을 순차적으로 첨가하고, 실온에서 각각 1일간 추출한 후 여과지 등을 통하여 여과함으로써 상징액을 분리시킨다. 상기 상징액 분리 조작을 1회 이상 바람직하게는 3회 이상 반복 실시하여 얻은 상징액을 모두 합하고, 회전증발장치(rotary evaporator) 등을 이용하여 감압하에서 용매를 증발시켜 농축시킴으로써, 황칠 헥산 분획물(hexane fr.), 황칠 에틸아세테이트 분획물(ethyl acetate fr.), 황칠 부탄올 분획물(butanol fr.)을 제조할 수 있다. 또한, 상기 분획물을 약 -80℃에서 얼린 후 동결 건조하여 분말 상태로도 제조할 수 있다.

<실시예 3 : 황칠나무 정유 추출물의 제조>

본 발명의 황칠나무 수피의 정유성분 추출은 시료용기에 50메쉬 정도로 분쇄된 황칠나무 수피300g과 증류수 3L를 둥근 바닥 플라스크에 넣고 개량형 simultaneous steam distillation and extraction(SDE)장치를 사용하여 4시간 증류 추출하였다. 이때 추출용 용매로서는 n-pentane : diethyl ether (1:1) 혼합용매 60ml를 사용하였으며 냉각수의 온도는 2±1℃를 유지하였다. 추출된 정유는 무수황산나트륨으로 탈수 여과한 다음 Vigreux 컬럼(20cm)을 사용하여 40℃이하에서 용매를 제거한 후 시료로 사용하였다.

- : 음성대조군, # : 양성대조군

Claims (7)

1. 황칠나무 수피의 정제수 또는 알코올추출물 및 정유추출물과 황칠나무 수액이 함유됨을 특징으로 하는 아토피 및 여드름 피부 치료용 피부 외용제 조성물
2. 제 1항에 있어서 황칠에탄올 추출물에 헥산, 에틸아세테이트, 부탄올을 용매로 하여 순차적으로 반복 추출하여 얻어진 헥산분획물, 에틸아세테이트분획물, 부탄올분획물이 함유됨을 특징으로 하는 아토피 및 여드름 피부의 치료용 피부 외용제 조성물
3. 제 1항 및 2항에 있어서 통상의 피부외용제 및 피부질환개선용 화장료의 조성물에 및 황칠추출물 및 황칠나무 수액이 각각 0.1 내지 20.0% 중량% 함유되는 것을 특징으로 아토피 및 여드름 피부의 치료용 피부 외용제 조성물
4. 제 1항 및 2항의 추출물 및 분획물을 포함하는 아토피 피부질환 및 여드름 피부에 있어서의 피부질환 개선용 피부외용제.
5. 제 1항 및 2항의 추출물 및 분획물을 포함하는 아토피 피부질환 및 여드름 피부에 있어서의 피부질환 개선용 화장료.
6. 상기 황칠추출물 및 수액이 피부외용연고, 에센스, 미백크림, 로션, 에멀젼, 팩, 일반화장수, 스킨밀크, 크림, 세럼, 미용비누, 유연화장수, 약용화장수, 헤어토닉, 전신세정제 및 오일젤로 사용되는 것을 특징으로 하는 아토피 피부질환 및 여드름피부질환 개선용 화장료.
7. 제 1항 및 2항의 추출물 및 분획물을 아토피 피부질환 및 여드름피부질환에 효능을 보이는 식품학적 조성물.
   

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