ES2261383T5

ES2261383T5 - Un metodo para mantener o mejorar la sintesis de mucinas.

Info

Publication number: ES2261383T5
Application number: ES01911559T
Authority: ES
Inventors: Olivier Ballevre; Paul-Andre Finot; Denis Breuille
Original assignee: Societe des Produits Nestle SA; Nestle SA
Current assignee: Societe des Produits Nestle SA; Nestle SA
Priority date: 2000-02-04
Filing date: 2001-01-31
Publication date: 2010-06-18
Anticipated expiration: 2021-01-31
Also published as: CA2399063C; AU784137B2; BG106967A; NZ520605A; DE60118888T3; HUP0204439A2; MXPA02007491A; CA2399063A1; WO2001056405A3; NO20023640L; CN1434681A; EP1255452B1; DE60118888T2; BRPI0108096B1; CN1434681B; HUP0204439A3; MA25656A1; JP2003533436A; IL150977A0; ES2261383T3

Abstract

Empleo de una fuente de proteínas que incluye ami- noácidos en donde la treonina constituye por lo menos el 5, 5% en peso de los aminoácidos en la preparación de una compo- sición nutritiva para el tratamiento de un estado de enfer- medad caracterizado por alteraciones de los niveles de mucina en un paciente.

Description

Un método para mantener o mejorar la síntesis de mucinas.

Antecedentes de la invención

Esta invención se refiere en general el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el mantenimiento, mejora o aumento de la síntesis de mucinas, especialmente en el tracto gastrointestinal y pulmones. La invención se refiere además al mantenimiento, mejora o aumento de la síntesis de mucinas en un paciente por administración de una composición nutritiva al paciente, en donde la composición nutritiva contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de treonina. Mediante el aumento de la síntesis de la mucina, pueden ser tratados con eficacia una gran variedad de diferentes estados de enfermedades caracterizados por alteraciones de los niveles de mucina, a saber, inflamaciones intestinales e infecciones bacterianas u otros estados de enfermedades similares.

Las mucinas son glicoproteínas, que son un componente primario del gel viscoelástico o mucus, que cubre la mayor parte de las superficies mucósicas del tracto gastrointestinal y pulmones. Se segregan continuamente a partir de las superficies del pulmón y tracto gastrointestinal; por ejemplo a partir de las células en forma de cáliz. Se hallan en forma de grandes macromoléculas compuestas de un núcleo de péptido y cadenas laterales de oligosacáridos. Las cadenas laterales de oligosacáridos están empalmadas por medio de enlaces O-glicosídicos a radicales de serina y treonina en el núcleo del péptido. Las cadenas laterales de oligosacárido constituyen aproximadamente el 90% de la masa de mucinas. La treonina constituye aproximadamente el 22% en peso del núcleo de péptido.

El mucus actúa para proteger las células epiteliales del tracto gastrointestinal y pulmones de toxinas tales como ácidos, bilis, enzimas digestivas y de bacterias entéricas y sus toxinas (Neutra, M.R. y Forstner, J.F.; 1987; Physiology of the Gastrointestinal Tract ("Fisiología del Tracto Gastrointestinal"), segunda edición, Raven Press, NY, páginas 975 a 1009). Por lo tanto el mucus funciona como una barrera principal de defensa local que actúa para prevenir la invasión y dispersión sistémica de las bacterias y endotoxinas normalmente presentes en el tracto gastrointestinal o pulmones. Por lo tanto el estatus de salud del mucus es importante para la salud.

Sin embargo, muchos estados de enfermedad se caracterizan por alteraciones de la composición del mucus. Por ejemplo, estudios histoquímicos han demostrado la presencia de anormalidades bien caracterizadas en las mucinas durante enfermedades malignas, fibrosis cística, enfermedades crónicas inflamatorias del intestino, colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn y durante la infección con parásitos nematodos intestinales (Tse, S-L, y Chadee, K; 1992; Infection and Immunity ("Infección e inmunidad"), vol. 60, nº 4, páginas 1603-1612). También los fármacos antiinflamatorios no-esteroidales son conocidos por aumentar el riesgo de lesiones en la mucosa por el ácido y la pepsina. También, pacientes que sufren una respuesta inflamatoria puede tener debilitada la producción de mucina. Los resultados de estos cambios o alteraciones son una variedad de efectos adversos; incluyendo la translocación bacteriana, gastritis, erosiones gástricas, ulceración péptica e invasiones de bacterias patogénicas. La patente nº 5.162.373 describe formulaciones que contienen ornitina para el empleo en la revitalización de superficies mucosas en situación de peligro. Dichas formulaciones están previstas para administración parenteral.

Existe por lo tanto la necesidad de un método para mantener o mejorar la síntesis de mucinas.

Resumen de la invención

Esta invención proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el mantenimiento, mejora o aumento de la síntesis de mucinas en un paciente mediante la administración de una composición nutritiva o suplemento que contenga una cantidad terapéuticamente efectiva de treonina. Se ha descubierto sorprendentemente que la administración a un paciente de una cantidad terapéuticamente efectiva de treonina tiene un efecto beneficioso en el tratamiento de una variedad de estados de enfermedad caracterizados por alteraciones de los niveles de mucina, la condición del mucus en general, y otros efectos benéficos similares.

En una versión, la presente invención incluye el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para tratamiento de un estado de enfermedad caracterizado por alteraciones de los niveles de mucina en un paciente, en donde comprende la administración entérica al paciente de una composición nutritiva que contiene una fuente de proteínas que incluye aminoácidos de los cuales la treonina comprende por lo menos el 5,5% en peso de los aminoácidos.

En una versión, la presente invención incluye el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el mantenimiento de la síntesis de mucinas en un paciente en donde comprende la administración entérica al paciente de una composición nutritiva la cual tiene una fuente de proteínas que incluye aminoácidos de los cuales la treonina comprende por lo menos el 5,5% en peso de los aminoácidos.

En una versión, la presente invención incluye el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el mantenimiento de la síntesis de mucinas en un paciente en donde comprende la administración entérica al paciente de una composición nutritiva la cual incluye una fuente de proteínas que contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de treonina, una fuente de hidratos de carbono, y una fuente de lípidos incluyendo una mezcla de triglicéridos de cadena mediana y triglicéridos de cadena larga.

En una versión, la presente invención incluye el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el tratamiento de un estado de enfermedad caracterizado por alteraciones de los niveles de mucina en un paciente. Comprende la administración entérica al paciente de una composición nutritiva la cual contiene una fuente de proteínas que incluye aminoácidos de los cuales la treonina constituye por lo menos el 7,4% en peso de los aminoácidos.

En una versión, la presente invención incluye el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el mantenimiento de la síntesis de mucinas en un paciente. Comprende la administración entérica al paciente de una composición nutritiva la cual tiene una fuente de proteínas que incluye aminoácidos de los cuales la treonina constituye por lo menos el 7,4% en peso de los aminoácidos.

En una versión, la presente invención incluye el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para aumentar la síntesis de mucinas, en donde el método comprende la suplementación de la dieta de un paciente añadiendo una cantidad terapéuticamente efectiva de treonina a la dieta.

En una versión, la presente invención incluye el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para aumentar la síntesis de mucinas en un paciente, en donde comprende la administración al paciente de una composición nutritiva que contiene treonina en una cantidad de por lo menos el 30% de una cantidad de treonina recomendada diariamente.

En una versión, la presente invención proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el tratamiento de la inflamación intestinal en un paciente. Incluye la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de treonina.

En una versión, la presente invención proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el tratamiento de una infección bacteriana intestinal en un paciente. Incluye la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de treonina.

En una versión, la presente invención proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para la reducción de la tensión oxidante debida a la inflamación intestinal aguda. Incluye la administración de una cantidad terapéuticamente efectiva de treonina.

Una ventaja de la presente invención es que proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el mantenimiento, mejora o aumento de la síntesis de mucinas en un paciente.

Otra ventaja de la presente invención es que proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el mantenimiento, mejora o aumento de la síntesis de mucina en un paciente mediante la administración de una composición nutritiva al paciente, en donde la composición nutritiva contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de treonina.

Todavía otra ventaja de la presente invención es que proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el mantenimiento, mejora o aumento de la síntesis de mucinas en un paciente aumentando la eficiencia del alimento en una dieta administrada al paciente en donde la dieta contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de treonina.

Todavía otra ventaja de la presente invención es que proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el tratamiento de una variedad de estados de enfermedad.

Otra ventaja de la presente invención es que proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el tratamiento de la inflamación intestinal.

Todavía otra ventaja de la presente invención es que proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el tratamiento de una infección intestinal bacteriana.

Una ventaja adicional de la presente invención es que proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para la reducción de la tensión oxidante debida a la inflamación intestinal aguda, aumentando la síntesis de mucinas en un paciente.

Características y ventajas adicionales de la presente invención se describen en, y serán aparentes a partir de, la descripción detallada de las versiones actualmente preferidas.

Breve descripción de las figuras

La figura 1 ilustra gráficamente el efecto de la concentración de treonina en la proporción de síntesis parcial de las mucoproteínas.

La figura 2 ilustra gráficamente el efecto de la cantidad de treonina necesaria para la eficiencia alimenticia de una dieta.

La figura 3 ilustra gráficamente el efecto de la cantidad de treonina necesaria en la proporción de síntesis parcial de mucoproteínas.

Descripción detallada de las versiones actualmente preferidas

La presente invención proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el mantenimiento, mejora o aumento de la síntesis de mucinas mediante la administración a un paciente de una composición nutritiva que contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de treonina. La invención proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el tratamiento de una gran variedad de estados de enfermedad caracterizados por alteraciones de los niveles de mucina, tales como inflamaciones intestinales e infecciones bacterianas u otros estados de enfermedad similares.

La invención está basada en el descubrimiento de que la administración entérica de una composición nutritiva que contiene una fuente de proteína enriquecida en treonina tiene un efecto beneficioso sobre la síntesis de las mucinas. La fuente de proteínas puede ser una fuente cualquiera de aminoácidos que está enriquecida en treonina. Por ejemplo, la fuente de proteína puede ser proteína de leche, blanco de huevo, caseíno-glico-macropéptido, proteína de suero de leche, proteína de caseína, proteína de soja, proteína de arroz, proteína de guisantes o proteína de avena, o mezclas de estas proteínas. También, la fuente de proteínas puede estar en forma de proteína intacta, proteína hidrolizada o mezclas de las mismas. Además, si se desea, la fuente de proteínas puede estar en forma de aminoácidos libres. En una versión, la proteína puede estar en forma de mezclas de proteína intacta o proteína hidrolizada, con aminoácidos libres.

La treonina constituye por lo menos el 5,5% en peso de los aminoácidos de la fuente de proteínas. La cantidad de treonina puede también constituir por lo menos el 6% en peso de los aminoácidos y de preferencia por lo menos el 7,4% en peso de los aminoácidos. Esto puede ser obtenido empleando una fuente de proteínas que es naturalmente enriquecida en treonina o mediante la suplementación de otras fuentes de proteína con treonina. Es particularmente preferida una fuente de proteínas que está naturalmente enriquecida en treonina; por ejemplo la proteína de suero fresco de leche o caseíno-glico-macropéptido. La proteína de suero fresco de leche tiene un contenido en treonina de aproximadamente el 7,4% en peso de los aminoácidos y el caseíno-glico-macropéptido tiene un contenido en treonina de aproximadamente el 14% en peso de los aminoácidos.

Para los pacientes aquejados de no absorción o intolerancia a las proteínas intactas, la fuente de proteína se basa de preferencia en proteína hidrolizada. Especialmente preferida a este respecto es la proteína hidrolizada de suero de leche fresco. El empleo de proteína hidrolizada de suero de leche fresco proporciona la ventaja de un contenido de treonina naturalmente enriquecido mientras proporciona nutrición a los pacientes que no absorben o que tienen intolerancia a las proteínas intactas.

La fuente de proteína proporciona de preferencia desde aproximadamente el 10% hasta aproximadamente el 20% de la energía de la composición nutritiva. Por ejemplo, la fuente de proteína puede proporcionar aproximadamente desde el 15% hasta aproximadamente el 18% de la energía de la composición nutritiva.

La composición nutritiva puede también incluir una fuente de hidratos de carbono. La fuente de hidratos de carbono proporciona de preferencia desde aproximadamente el 35% hasta aproximadamente el 65% de la energía de la composición nutritiva, de preferencia desde el 40% hasta el 60% de la energía de la composición nutritiva. Por ejemplo, la fuente de hidratos de carbono puede proporcionar aproximadamente el 51% de la energía de la composición. Pueden emplearse varios hidratos de carbono incluyendo la maltodextrina, almidón de maíz, almidón modificado o sucrosa o mezclas de los mismos. De preferencia, la composición está exenta de lactosa.

La composición nutritiva puede incluir además una fuente de lípidos. De preferencia, la fuente de lípidos proporciona desde aproximadamente el 20% hasta aproximadamente el 50% de la energía de la composición nutritiva; especialmente del 25% a aproximadamente el 40% de la energía de la composición nutritiva. Por ejemplo, la fuente de lípidos puede proporcionar aproximadamente el 33% de la energía de la composición nutritiva.

La fuente de lípidos puede comprender una mezcla de triglicéridos de cadena media (MCT) y triglicéridos de cadena larga (LCT). La fuente de lípidos incluye de preferencia por lo menos desde el 30% hasta aproximadamente el 80% en peso de triglicéridos de cadena media. Por ejemplo, los triglicéridos de cadena media pueden completar aproximadamente el 70% en peso de la fuente de lípidos. Fuentes de triglicéridos de cadena larga adecuados son el aceite de girasol, aceite de semilla de colza, aceite de soja, grasa de leche, aceite de maíz y lecitina de soja. Los aceites de coco fraccionados son una fuente adecuada de triglicéridos de cadena media.

El perfil de lípidos de la composición entérica está diseñada de preferencia para tener un ratio de ácido graso poliinsaturado omega-6 (n-6) a omega-3 (n-3), de aproximadamente 1:1 a aproximadamente 10:1. Por ejemplo el ratio de ácido graso de n-6 a n-3 puede ser de aproximadamente 6:1 a aproximadamente 9:1.

La composición nutritiva incluye de preferencia un perfil completo de vitaminas y minerales. Por ejemplo, pueden proporcionarse suficientes vitaminas y minerales para suministrar aproximadamente del 75% al 250% aproximadamente de la dosis diaria de vitaminas y minerales por 1000 calorías de la composición nutritiva.

La composición nutritiva tiene de preferencia un contenido en energía de aproximadamente 800 kcal/litro a aproximadamente 1200 kcal/litro; por ejemplo, un contenido en energía de aproximadamente 1000 kcal/litro.

La composición nutritiva puede estar en una forma cualquiera adecuada. Por ejemplo, la composición nutritiva puede estar en forma de un polvo soluble, un concentrado líquido o una formulación lista para beber. Alternativamente, la composición nutritiva puede estar en forma sólida; por ejemplo en forma de una barra lista para comer o un cereal para desayuno. Las formulaciones listas para beber son particularmente preferidas. La composición puede administrarse a un paciente por medio de un tubo nasogástrico, un tubo yeyuno, o dejando que el paciente lo beba o lo coma. Varios sabores, fibras, edulcorantes y otros aditivos pueden estar también presentes.

La composición nutritiva puede emplearse como un soporte nutritivo para pacientes que padecen de, o tienen el riesgo de, una producción debilitada o reducida de mucina. Por ejemplo, la composición nutritiva puede emplearse como un soporte nutritivo para pacientes que padecen de una respuesta inflamatoria, que sufren una mala nutrición, que sufren de fibrosis quística, malignidad, enfermedades crónicas de inflamación del intestino, colitis ulcerativa y enfermedad de Crohn, siguiendo un tratamiento que incluye la administración de fármacos antiinflamatorios no esteroidales y otros estados de enfermedad similares. La composición nutritiva puede también emplearse para restituir la producción de mucina después de una nutrición totalmente parenteral.

La cantidad de composición nutritiva requerida para ser administrada a un paciente, variará según diversos factores tales como la condición del paciente, peso corporal del paciente, edad del paciente, y de si la composición nutritiva es la única fuente de nutrición. Sin embargo, la cantidad requerida puede ser fácilmente ajustada por un practicante médico. En general una cantidad suficiente de composición nutritiva se administra para proporcionar al paciente aproximadamente de 1 g de proteína a aproximadamente 4,0 g de proteína por kg de peso corporal por día y aproximadamente 0,05 g a aproximadamente 0,4 g de treonina por día. Por ejemplo, un paciente adulto puede recibir aproximadamente 1,5 g de proteína a aproximadamente 2,0 g de proteína por kg de peso corporal por día y aproximadamente 0,07 g a aproximadamente 0,2 g de treonina por día. Si la composición nutritiva se emplea como suplemento para otras comidas, la cantidad de la composición nutritiva que se administra diariamente puede disminuirse según el caso.

La composición nutritiva puede tomarse en dosis múltiples, por ejemplo de 2 a 5 veces, para completar la cantidad diaria requerida o puede tomarse en una dosis única.

En una versión, la presente invención incluye el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el tratamiento de un estado de enfermedad caracterizado por la alteración de los niveles de mucina en un paciente. Incluye la administración entérica al paciente de una composición nutritiva la cual tiene una fuente de proteína que incluye aminoácidos en donde la treonina constituye por lo menos el 5,5% en peso de los aminoácidos. La cantidad de treonina puede también constituir por lo menos el 6,0% y de preferencia por lo menos el 7,4% de los aminoácidos.

En una versión, la presente invención incluye el aumento de la síntesis de mucinas en un paciente mediante el suplemento de una dieta de un paciente con una cantidad terapéuticamente efectiva de treonina. La cantidad de treonina añadida a la dieta puede incluir por lo menos 0,2 mM. De preferencia, la cantidad de treonina oscila desde aproximadamente 0,2 mM a aproximadamente 0,8 mM.

La cantidad de treonina a añadir puede basarse sobre las dosis o requisitos diarios recomendados para la treonina. En una versión, la cantidad de treonina añadida a la dieta incluye por lo menos el 30% de la cantidad diaria recomendada, de preferencia por lo menos el 60%, y con mayor preferencia por lo menos el 100% de esta cantidad.

En una versión, la presente invención proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para aumentar la síntesis de mucinas aumentando la eficiencia alimenticia en una dieta de un paciente. La eficiencia alimenticia representa el ratio entre el aumento de peso corporal y la cantidad de alimento ingerido durante un período de la dieta como se detalla más adelante en el ejemplo 4. La eficiencia alimenticia y con ello la síntesis de mucinas puede aumentarse administrando al paciente una composición nutritiva que contiene una cantidad terapéuticamente efectiva de treonina. Por ejemplo, la cantidad de treonina puede basarse sobre la cantidad recomendada diariamente de treonina como se ha descrito anterior-
mente.

Una versión de la invención proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el tratamiento de estados de enfermedad caracterizados por alteraciones de los niveles de mucina en un paciente. Los estados de enfermedad pueden incluir una variedad de estados de enfermedad tales como la inflamación intestinal e infección bacteriana u otros estados de enfermedad similares como se ha descrito anteriormente. En una versión, la invención proporciona el empleo, como en las reivindicaciones 1 ó 2, de una fuente de proteínas para la preparación de una composición nutritiva para el tratamiento de la inflamación intestinal, para el tratamiento de infecciones intestinales bacterianas, para reducir la tensión oxidante debida a la inflamación intestinal aguda y para el tratamiento de otros estados de enfermedad similares. Los métodos para el tratamiento de estados de enfermedad consisten en la administración a un paciente de una cantidad terapéuticamente efectiva de treonina como se ha descrito anteriormente. La treonina puede administrarse como parte de una composición nutritiva, como un suplemento u otra substancia nutritiva similar.

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A título de ejemplo y no de limitación, son ejemplos de la presente invención los que siguen a continuación:

Ejemplo 1

Se emplean veinticuatro ratas Wistar machos, con un peso cada una de aproximadamente 200 g. Las ratas tienen libre acceso al agua. Las ratas se dividen en 3 grupos de 8 ratas cada uno en jaulas separadas.

Cada grupo de ratas tiene libre acceso durante 3 días a una dieta de control basada en proteína de soja suplementada con Met. A continuación, se administra a cada grupo una vez al día, una cantidad de la dieta de control suficiente para satisfacer el 80% de los requisitos fisiológicos para el crecimiento de cada rata. A continuación, un grupo (grupo de control) es alimentado de la misma manera durante el resto de la prueba. Los grupos restantes dejan de recibir comida durante un período de tres días. Las ratas tienen libre acceso al agua durante este tiempo.

Los dos grupos restantes de ratas se alimentan a continuación cada uno con una dieta separada, una vez al día, en una cantidad de la dieta de control suficiente para satisfacer el 80% de los requisitos fisiológicos para el crecimiento de cada rata. Un grupo (grupo A) se alimenta con una fórmula entérica basada en suero de leche ácido suplementado con 5% de celulosa. Un segundo grupo (grupo 1) se alimenta con una fórmula entérica liofilizada basada en suero de leche fresco (adquirible en Nestle Clinical Nutrition con el nombre registrado de PEPTAMEN®) suplementado con un 5% de celulosa.

El contenido de proteína de las dietas es como sigue: la dieta de control contiene 19,02 g de proteína por gramo de dieta, la fórmula entérica basada sobre el suero de leche ácido contiene 15,67 g de proteína por gramo de dieta, y la fórmula entérica basada en el suero de leche fresco contiene 15,63 g de proteína por gramo de dieta. La treonina proporciona aproximadamente el 7,4% en peso de proteína en la fórmula entérica basada sobre el suero de leche fresco. En la fórmula entérica basada sobre el suero de leche ácido, la treonina proporciona menos del 5% en peso de proteína.

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Resultados 1

Después de tres días, se recoge mucosa gastrointestinal de cada rata. El contenido de treonina de la mucosa se determina a continuación como sigue:

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1

Los resultados del ejemplo 1 indican que las ratas sin comida del grupo 1 tienen un contenido de treonina más alto en la proteína de la mucosa, que las del grupo A y un contenido de treonina ligeramente menor que el contenido normal de las del grupo de control. Esto indica un aumento en la producción de mucinas en las ratas del grupo 1.

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Ejemplo 2

Se emplea una dieta líquida isotónica. La dieta puede adquirirse en Nestle Clinical Nutrition con la marca registrada PEPTAMENT®. La dieta tiene los siguientes componentes:

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2

La dieta tiene una densidad de energía de 1000 kcal/litro y la proteína proporciona el 16% de la energía, los hidratos de carbono proporcionan el 51% de la energía, y el lípido proporciona el 33% de la energía. La treonina proporciona aproximadamente el 7,4% en peso de la fuente de proteínas. Se reclutan diez pacientes de ambos sexos entre los 20 y 60 años de edad, para el estudio. A todos los pacientes se les ha diagnosticado que padecen la enfermedad de Crohn, y el diagnóstico ha sido confirmado por histología, radiología o ambos. A todos los pacientes se les dio harina de bario, y se utilizó la radiografía para dictaminar el sitio de la enfermedad en el intestino delgado. Los pacientes fueron también sometidos a un dictamen endoscópico. Se asigna un tanteo de 0 a 3 (0 = normal, 1 = inflamación suave, 2 = inflamación moderada, y 3 = inflamación severa), a cada área del intestino inspeccionado. Las áreas del intestino incluyen por ejemplo, el íleo terminal, ciego, colon descendente, colon transversal, colon ascendente, colon sigmoideo y recto. También se hizo un dictamen sobre la condición del mucus en el área del intestino que se inspecciona. Se asigna un tanteo de 0 a 3 (0 = normal, 3 = reducción severa), a cada área.

Cada paciente del estudio se alimenta con el producto PEPTAMEN® como única fuente de nutrición durante un período de 8 semanas. La administración de la composición nutritiva está bajo la supervisión de un dietético y se efectúa oralmente o mediante un tubo nasogástrico, según desee el paciente. La ingesta de la composición nutritiva se ajusta sobre la base de la tolerancia, el sabor y el aumento de peso. Después de 8 semanas, cada paciente se somete de nuevo a un dictamen endoscópico e inflamatorio y se asignan valores del mucus.

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Resultados 2

En general, el dictamen endoscópico y las condiciones del mucus han mejorado en todos los pacientes después de la administración de la composición nutritiva a los pacientes como se ha descrito en el ejemplo 2. Por lo tanto, el tratamiento da como resultado la efectiva remisión de la enfermedad de Crohn en la mayoría de los casos.

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Ejemplo 3 (in vitro)

El efecto del suplemento con treonina sobre la proporción de la síntesis de la mucina fue analizado in vitro en células HT29-MTX (células de carcinoma de colon humano). Las células HT29-MTX se hicieron crecer en medio Dulbecco esencial mínimo modificado (DMEM) suplementado con 10% (v/v) de suero bovino fetal inactivado con calor (Life Technologies), y conteniendo 25 mM de glucosa, 1% de aminoácidos no esenciales (Life Technologies), 2 mM de glutamina (AJINOMOTO CO), 85 mg/litro de penicilina-estreptomicina, 50 mg/litro de gentamicina, y 1,5 mg/litro de anfotericina B (Life Technologies). Las células se cultivaron a 37ºC en una atmósfera que contenía 10% de CO_{2} - 90% de aire. El medio de cultivo se cambió diariamente. Los experimentos se efectuaron en frascos de cultivo T de 75 cm^{2} entre los pasos 10 a 20. Se realizaron estudios en el último período post-confluente (21 días después de la siembra), cuando todos las células presentan un fenotipo que segrega mucina.

Para el experimento, las células se hicieron crecer en DMEM normal hasta la confluencia (7 días después de la siembra). A continuación, después del día 7 hasta el día 21 después de la siembra, se ensayaron varias concentraciones de treonina en el DMEM, a saber, 0,2 mM, 0,4 mM, 0,8 mM y 1,6 mM. El día 20, se añadió L-(3-H^{3})treonina (30 microCi/frasco) a 10 ml de un medio de cultivo recién preparado. Se determinó la incorporación del trazador radiactivo a las mucoproteínas recién sintetizadas durante el período de las 24 horas siguientes.

Después de 24 horas del marcado metabólico, se retiró el medio de cultivo de las células. Las células se lavaron dos veces con 10 ml de 1xPBS y se recuperaron empleando un raspador de goma. Las células se homogeneizaron en tampón de Tris/HCl 0,05 M de pH 7,50 empleando un politron a un ajuste bajo (6.000 rpm, 30 segundos, 4ºC). Se separó un alícuota de cada homogeneizado para medir la radiactividad específica de la treonina libre intracelular considerada como el conjunto precursor. Las mucoproteínas se purificaron a partir de los homogeneizados mediante cromatografía de exclusión por tamaños después de una digestión enzimática parcial de proteínas no muy altamente glicosiladas y así protegidas. Las mucinas purificadas se hidrolizaron con HCl 6M (24 horas a 100ºC), y su composición de aminoácidos se determinó por HPLC. La salida del detector de UV se conectó a un detector radiactivo (Radiomatic 500TR, Packard) para medir la H^{3}-treonina incorporada a las mucoproteínas. Se calculó la proporción parcial de síntesis (FSR) de las mucoproteínas y se expresó en tanto por ciento/día (%/d): (FSR = (radiactividad específica de la treonina unida a la mucoproteína/radiactividad específica de la treonina intracelular libre)*100).

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Resultados 3

Los resultados del ejemplo 3 están mostrados en la figura 1, la cual demuestra que el efecto de la concentración de la treonina sobre la proporción parcial de síntesis de las mucoproteínas ("mucoproteína FSR"). La mucoproteína FSR se determinó para cada una de las concentraciones variables de treonina (mM) en el medio de cultivo de células HT29-MTX como se muestra más adelante en la figura 1. Los valores de los datos son los valores medios \pm SEM (n=6) en donde los valores de los datos que no comparten una letra corriente son significativamente diferentes
(p<0,05).

La mucoproteína FSR aumentó significativamente de 0,2 mM (26,4 \pm 1,4%) a 0,8 mM (37,3 \pm 1,4%) de treonina y alcanzó una zona plana a aproximadamente 0,8 mM de treonina. La mucoproteína FSR aumentó generalmente con el nivel de treonina en el medio de cultivo en condiciones que no son limitantes en treonina para el cultivo celular, y el número de células y la viabilidad no resultaron alteradas.

Estos resultados indican claramente que la biodisponibilidad de la treonina en el medio de cultivo puede influenciar significativamente la proporción de la síntesis de la mucoproteína in vitro. Así, cualquiera que sea el estado de enfermedad considerado (enfermedad inflamatoria del intestino, infección, enfermedad de Crohn u otros estados de enfermedades similares), la necesidad de treonina aumenta durante la síntesis de las proteínas inflamatorias ricas en treonina a expensas de la síntesis de mucoproteína. Así, la suplementación de treonina puede ser una eficiente y efectiva intervención nutritiva para estimular o restaurar la proporción de síntesis de la mucoproteína, y así facilitar una mejor protección de la célula epitelial.

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Ejemplo 4 (in vivo)

El efecto del contenido de treonina en la dieta sobre la proporción de síntesis de la mucina, se analizó in vivo en las ratas en desarrollo. Se emplearon treinta y dos ratas macho Sprague-Dawley (90 g). Se dividieron aleatoriamente en 4 grupos de 8 ratas y se separaron en jaulas individuales. Las ratas tenían libre acceso al agua durante todos estos experimentos.

Después de un período de adaptación de 6 días con una dieta de pienso, las ratas fueron adaptadas (con libre acceso) a sus dietas experimentales durante 3 días. Las dietas experimentales se basaron en aminoácidos libres (dieta semisintética, 12,5% de proteínas) y cantidades variables de treonina: A) cantidad necesaria de treonina para el crecimiento de las ratas de acuerdo con las recomendaciones del National Research Council (edición revisada de 1995); B) 60% de la cantidad necesaria de treonina; C) 30% de la cantidad necesaria de treonina; y D) 150% de la cantidad necesaria de treonina. Ratas de cada grupo se alimentaron con dietas experimentales durante 14 días. Los grupos A, B y D se alimentaron emparejados con el grupo C.

Antes del sacrificio de las ratas, se administró una dosis copiosa de 1-C^{13}-Valina en la vena caudal lateral de los animales. Cada animal recibió un bolo de 150 micromoles de L-C^{13}-Valina (99% de C^{13}/100 g de peso corporal. Los animales se sacrificaron después de la anestesia, por desangrado a partir de la aorta abdominal entre 35 y 53 minutos después de la inyección de 1-C^{13}-valina. Se obtuvieron muestras de la mucosa intestinal raspando con un portaobjetos de vidrio y a continuación congelándolas inmediatamente en nitrógeno líquido.

Las muestras de la mucosa de las ratas se homogeneizaron suavemente en tampón 0,05M de Tris/HCl de pH 7,50 empleando un politrón con ajuste bajo (6.000 rpm, 30 segundos, 4ºC). Se empleó un alícuota del homogeneizado de cada muestra para medir el enriquecimiento en 1-C^{13}-valina en el conjunto intracelular que fue considerado como enriquecimiento en C^{13} del conjunto precursor. A continuación, las mucoproteínas se purificaron como se ha descrito anteriormente para el experimento in vitro. Se midieron los enriquecimientos de 1-C^{13} en las mucoproteínas mediante espectrometría de masas.

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Resultados 4

Como se muestra en la figura 2, se evaluó el efecto de la cantidad necesaria de treonina y porcentajes de la misma sobre la eficiencia alimenticia de una dieta. Como se ha descrito en el ejemplo 4, las dietas contenían 30%, 60%, 100% y 150% de las cantidades necesarias de treonina de las ratas. La eficiencia alimenticia se calculó como el ratio entre el aumento de peso corporal (gramos) y la cantidad de alimento ingerido (gramos) durante los 14 días y se expresó en tanto por ciento. Los valores de los datos son valores medios \pm SEM (n=8). Los valores de los datos que no comparten una letra común son significativamente diferentes (p<0,05).

Como se ilustró además en la figura 2, la eficiencia alimenticia de las cuatro dietas varió con respecto al porcentaje de la cantidad necesaria de treonina en la dieta. Fue significativamente inferior para la dieta conteniendo el 30% de las cantidades necesarias de treonina de las ratas (11,8 \pm 1,2%) que para las dietas conteniendo el 60% (17,5 \pm 0,5%), 100% (18,8 \pm 0,8%) y 150% (20,6 \pm 1,3%) de las cantidades necesarias de treonina.

Como se muestra en la tabla 1 (más adelante) y la figura 3, se evaluó el efecto del porcentaje de la cantidad necesaria de treonina sobre las proporciones de síntesis parcial de las mucoproteínas.

TABLA 1

4

La tabla 1 compara la proporción de síntesis parcial de las mucoproteínas en el yeyuno de ratas en desarrollo con respecto a la dieta A (100% de las cantidades necesarias de treonina), dieta B (60% de las cantidades necesarias de treonina), dieta C (30% de las cantidades necesarias de treonina), dieta D (150% de las cantidades necesarias de treonina). La figura 3 es una ilustración gráfica de la tabla 1. Los valores de los datos son valores medios \pm SEM como se ilustró además en la figura 3.

Como se muestra en la tabla 1 y la figura 3, la proporción de síntesis de las mucoproteínas fue la más baja en el yeyuno de las ratas alimentadas con la dieta que es la más deficiente en treonina (30% de las cantidades necesarias de treonina). Como se muestra, la proporción de síntesis parcial de la mucoproteína en el yeyuno fue de 143%/día con la dieta de control (100% de las cantidades necesarias de treonina), y disminuyó a 101%/día con la dieta que contenía el 30% de las cantidades necesarias de treonina. Sin embargo, la proporción de síntesis de la mucoproteína no aumentó con la dieta que contenía el 150% de las cantidades necesarias de treonina respecto a lo que se observó en la dieta de control.

Estos resultados indican que si las cantidades necesarias de treonina para el crecimiento no están cubiertas por la dieta, la proporción de síntesis de la mucoproteína, disminuye. Así el contenido de treonina de la dieta tiene un efecto tanto sobre el crecimiento como sobre la proporción de síntesis de la mucoproteína in vivo en las ratas. Esto demuestra que no solamente el crecimiento sino también la síntesis de las mucoproteínas es afectada cuando la dieta es deficiente en treonina. En consecuencia, si las cantidades necesarias de treonina no son adecuadamente proporcionadas por la dieta, el suplemento de treonina puede ser una estrategia nutritiva efectiva y eficiente para aumentar o restituir la proporción de síntesis de la mucoproteína, y así asegurar una mejor protección de la célula epitelial.

Claims

1. Empleo de una fuente de proteínas que incluye aminoácidos en donde la treonina constituye por lo menos el 5,5% en peso de los aminoácidos en la preparación de una composición nutritiva para el mantenimiento de la síntesis de mucinas en el tratamiento de un estado de enfermedad caracterizado por alteraciones de los niveles de mucina en un paciente.

2. Empleo de una fuente de proteínas que incluye aminoácidos en donde la treonina constituye por lo menos el 5,5% en peso de los aminoácidos en la preparación de una composición nutritiva para el aumento de la síntesis de mucinas en el tratamiento de un estado de enfermedad caracterizado por alteraciones de los niveles de mucina en un paciente.

3. El empleo de la reivindicación 1 ó 2, en donde la treonina constituye por lo menos el 6% en peso de los aminoácidos.

4. El empleo de cualquier reivindicación anterior, en donde la treonina constituye por lo menos el 7,4% en peso de los aminoácidos.

5. El empleo de cualquier reivindicación anterior, en donde la fuente de proteínas contiene proteína del suero de leche fresco.

6. El empleo de la reivindicación 5, en donde la proteína del suero de leche fresco se hidroliza.

7. El empleo de la reivindicación 1, en donde la composición nutritiva contiene además una fuente de lípidos y una fuente de hidratos de carbono.

8. El empleo de la reivindicación 7, en donde la fuente de lípidos contiene una mezcla de triglicéridos de cadena mediana y triglicéridos de cadena larga.

9. El empleo de la reivindicación 8, en donde la fuente de lípidos contiene de un 30% a un 80% en peso de triglicéridos de cadena mediana.