BRPI0108096B1 - usos de uma fonte de proteína compreendendo aminoácidos em que o teor de treonina é de pelo menos 5,5% em peso dos aminoácidos - Google Patents

Abstract

"método para manter ou melhorar a síntese de mucinas". métodos para manter, melhorar ou aumentar a síntese de mucina administrando-se um suplemento ou composição nutricional que contém uma quantidade terapeuticamente eficaz de treonina são fornecidos. a presente invenção ainda fornece métodos para tratar diversos estados de doença caracterizados pelas alterações dos níveis de mucina, tal como, infecções bacterianas e inflamatórias intestinais ou outros tipos de estados de doença.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "USOS DE UMA FONTE DE PROTEÍNA COMPREENDENDO AMINOÁCIDOS EM QUE O TEOR DE TREONINA É DE PELO MENOS 5,5% EM PESO DOS AMINOÁCIDOS".

O presente pedido é uma continuação em parte do pedido do Pedido de Patente n° 09/498.905 depositado em 4 de fevereiro de 2000. FUNDAMENTO DA INVENÇÃO

Esta invenção geralmente se refere a métodos para manter, melhorar ou aumentar a síntese de mucinas, especialmente no trato gastrointestinal e pulmões. A invenção se refere ainda à continuidade, melhora ou aumento da síntese de mucinas em um paciente administrando-se uma composição nutricional ao paciente onde a composição nutricional contém uma quantidade terapeuticamente eficaz de treonina. Aumentando-se a síntese de mucinas, diversos estados de doença caracterizados pelas alterações nos níveis de mu-cina, tal como, infecções bacterianas e inflamatórias intestinais ou outros tipos de estados de doença, podem ser eficazmente tratados.

As mucinas são glicoproteínas que são componentes primários do gel viscoelástico, ou muco, que reveste a maioria das superfícies muco-sais do trato gastrointestinal e pulmões. Elas são continuamente secretadas das superfícies do pulmão e trato gastrointestinal; por exemplo das células taça. Elas estão na forma de grandes macromoléculas compostas de um núcleo de peptídeo e cadeias laterais de oligossacarídeo. As cadeias laterais de oligossacarídeo são ligadas através de ligações O-glicossídicas à resíduos de serina e treonina no núcleo do peptídeo. As cadeias laterais de oligossacarídeo constituem aproximadamente 90% da massa das mucinas. A treonina constitui cerca de 22% em peso do núcleo de peptídeo. A mucosa atua para proteger as células epiteliais do trato gastrointestinal pulmões de toxinas tal como ácidos, bile, enzimas digestivas e de bactérias entéricas e suas toxinas (Neutra, M.R. e Forstner, J.F.; 1987; Phy-siology of the Gastrointestinal Tract, segunda edição, Raven Press, NY páginas 975 a 1009). Portanto, as funções da mucosa como uma principal, é a barreira de defesa local que atua para prevenir a invasão e propagação sistêmica de bactérias e endotoxinas normalmente presentes no trato gas- trointestinal ou pulmões. Portanto, o estado saudável da mucosa é importante para saúde.

Entretanto, muitos estados de doença são caracterizados por alterações na composição da mucosa. Por exemplo, os estudos histoquími-cos têm demonstrado anormalidades bem caracterizadas em mucinas durante a malignidade, fibrose cística, doenças do intestino inflamatórias crônicas, colite ulcerativa e doença de Crohn e durante infecção com parasitas nematódeos intestinais (Tse, S-L, e Chadee, K; 1992; Infection and Immu-nity, Vol. 60, n° 4, páginas 1603-1612). Além disso, as drogas anti-inflamatórias não esteroidais são conhecidas por aumentar o risco de danos à mucosa por pepsina e ácido. Além disso, os pacientes passando por resposta inflamatória podem ter produção de mucina danificada. Os resultados dessas alterações ou defeitos são diversos efeitos colaterais; incluindo translocação bacteriana, gastrite, erosões gástricas, ulceração pépticas e invasões de bactérias patogênicas. Há entretanto uma necessidade para um método de manter ou melhorar a síntese de mucinas.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Esta invenção fornece métodos para manter, melhorar ou aumentar a síntese de mucinas em um paciente administrando-se um suplemento ou composição nutricional que contém uma quantidade terapeutica-mente eficaz de treonina. Tem sido surpreendentemente constatado que administrar a um paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de treonina tem um efeito benéfico no tratamento de diversos estados de doença caracterizados por alterações nos níveis de mucina, a condição da mucosa em geral e outros efeitos benéficos.

Em uma modalidade, a presente invenção inclui um método de tratar um estado de doença caracterizado por alterações nos níveis de mucina em um paciente onde o método compreende administrar entericamente ao paciente uma composição nutricional que tem uma fonte de proteína incluindo aminoácidos onde a treonina compreende pelo menos 5,5% em peso dos aminoácidos.

Em uma modalidade, a presente invenção inclui um método para manter a síntese de mucinas em um paciente onde o método compreende administrar entericamente ao paciente uma composição nutricional que tenha uma fonte de proteína incluindo aminoácidos onde a treonina compreende pelo menos 5,5% em peso dos aminoácidos.

Em uma modalidade, a presente invenção inclui um método para manter a síntese de mucinas em um paciente onde o método compreende administrar entericamente ao paciente uma composição nutricional que inclui uma fonte de proteína contendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de treonina, uma fonte de carboidrato e uma fonte de lipídeo incluindo uma mistura de triglicerídeos de cadeia média e triglicerídeos de cadeia longa.

Em uma modalidade, a presente invenção inclui um método de tratar um estado de doença caracterizado pelas alterações nos níveis de mucina em um paciente. O método compreende administrar entericamente ao paciente uma composição nutricional que tem uma fonte de proteína incluindo aminoácidos onde a treonina compreende pelo menos 7,4% em peso dos aminoácidos.

Em uma modalidade, a presente invenção inclui um método para manter a síntese de mucinas em um paciente. O método compreende administrar entericamente ao paciente uma composição nutricional que tenha uma fonte de proteína incluindo aminoácidos onde a treonina compreende pelo menos 7,4% em peso dos aminoácidos.

Em uma modalidade, a presente invenção inclui um método para aumentar a síntese de mucinas onde o método compreende suplementar uma dieta de um paciente adicionando-se uma quantidade terapeuticamente eficaz de treonina à dieta.

Em uma modalidade, a presente invenção inclui um método para aumentar a síntese de mucinas em um paciente onde o método compreende administrar ao paciente uma composição nutricional que contém treonina em uma quantidade de pelo menos 30% de uma quantidade diariamente recomendada de treonina.

Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para tratar inflamação intestinal em um paciente. O método inclui administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de treonina.

Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para tratar infecção bacteriana intestinal em um paciente. O método inclui administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de treonina.

Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para reduzir tensão oxidativa devido à inflamação intestinal aguda. O método inclui administrar uma quantidade terapeuticamente eficaz de treonina.

Uma vantagem da presente invenção é que ela fornece métodos melhorados para manter, melhorar ou aumentar a síntese de mucinas em um paciente.

Uma outra vantagem da presente invenção é que ela fornece métodos para manter, melhorar ou aumentar a síntese de mucinas em um paciente administrando-se uma composição nutricional ao paciente onde a composição nutricional contém uma quantidade terapeuticamente eficaz de treonina.

Ainda outra vantagem da presente invenção é que eia fornece métodos para manter, melhorar ou aumentar a síntese de mucinas em um paciente aumentando-se a eficiência de alimento em uma dieta administrada ao paciente onde a dieta contém uma quantidade terapeuticamente eficaz de treonina.

Ainda uma outra vantagem da presente invenção é que ela fornece métodos para tratar diversos estados de doença.

Outra vantagem da presente invenção é que ela fornece métodos para tratar inflamação intestinal.

Ainda outra vantagem da presente invenção é que ela fornece métodos para tratar infecção bacteriana intestinal.

Uma vantagem adicional da presente invenção é que ela fornece métodos para reduzir a tensão oxidativa devido à inflamação intestinal aguda aumentando-se a síntese de mucinas em um paciente.

As vantagens e características adicionais da presente invenção são descritas e serão aparente a partir da descrição detalhada das modalidades presentemente preferidas.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS A figura 1 ilustra graficamente o efeito da concentração de treo-nina na taxa de síntese fracional de mucoproteínas. A figura 2 ilustra graficamente o efeito de um requerimento de treonina na eficiência de alimento de uma dieta. A figura 3 ilustra graficamente o efeito de um requerimento de treonina nas taxas de síntese fracional de mucoproteínas.

DESCRICÀO DETALHADA DAS MODALIDADES PRESENTEMENTE PREFERIDAS A presente invenção fornece métodos para manter, melhorar ou aumentar a síntese de mucinas administrando-se a um paciente uma composição nutricional que contém uma quantidade terapeuticamente eficaz de treonina. A invenção fornece métodos para tratar diversos estados de doença caracterizados pelas alterações nos níveis de mucina, tal como, infecções bacterianas e inflamatórias intestinais ou outros estados de doença. A invenção é com base nas descobertas que entericamente administrando composição nutricional que contém uma fonte de proteína enriquecida em treonina tem um efeito benéfico na síntese de mucinas. A fonte de proteína pode ser qualquer fonte adequada de aminoácidos que é enriquecida em treonina. Por exemplo, a fonte de proteína pode ser proteína de leite, clara de ovo, caseíno-glico-macropeptídeo, proteína do soro de leite, proteína de caseína, proteína de soja, proteína de arroz, proteína de ervilha ou proteína de aveia, ou misturas dessas proteínas. Além disso, a fonte de proteína pode estar na forma de proteína intacta, proteína hidrolisada, ou misturas destes. Além disso, se desejado, a fonte de proteína pode estar na forma de aminoácidos livres. Em uma modalidade, a proteína pode estar na forma de misturas de proteína intacta ou proteína hidrolisada, com aminoácidos livres.

Em uma modalidade, a treonina fornece pelo menos 5,5% em peso de aminoácidos da fonte de proteína. A quantidade de treonina pode também incluir pelo menos 6% em peso dos aminoácidos e preferivelmente pelo menos 7,4% em peso dos aminoácidos. Isto pode ser obtido empregando-se uma fonte de proteína que é naturalmente enriquecida em treoni-na ou suplementando-se outras fontes de proteína com treonina. A fonte de proteína que é naturalmente enriquecida em treonina é particularmente preferida; por exemplo, proteína de soro de leite doce ou caseíno-glico-macropeptídeo. A proteína de soro de leite doce tem um conteúdo de treonina de cerca de 7,4% em peso de aminoácidos, e caseíno-glico-macropeptídeo tem um conteúdo de treonina de cerca de 14% em peso de aminoácidos.

Para pacientes sofrendo de má absorção ou intolerância de proteínas intactas, a fonte de proteína é preferivelmente com base na proteína hidrolisada. Especialmente preferido neste respeito é proteína de soro de leite doce hidrolisada. O uso de soro de leite doce hidrolisado fornece a vantagem de um conteúdo de treonina naturalmente enriquecido ao mesmo tempo que fornecendo nutrição aos pacientes com má absorção ou pacientes com intolerância à proteínas intactas. A fonte de proteína preferivelmente fornece cerca de 10% a cerca de 20% da energia da composição nutricional. Por exemplo, a fonte de proteína pode fornecer cerca de 15% a cerca de 18% da energia da composição nutricional. A composição nutricional pode também incluir uma fonte de car-boidrato. A fonte de carboidrato preferivelmente fornece cerca de 35% a cerca de 65% da energia da composição nutricional, preferivelmente 40% a 60% da energia da composição nutricional. Por exemplo, a fonte de carboidrato pode fornecer cerca de 51% da energia da composição. Vários car-boidratos podem ser empregados incluindo maltodextrina, amido de milho, amido modificado ou sacarose, ou misturas destes. Preferivelmente a composição é livre de lactose. A composição nutricional pode ainda incluir uma fonte de lipí-deo. Preferivelmente a fonte de lipídeo fornece cerca de 20% á cerca de 50% da energia da composição nutricional; especialmente 25% a cerca de 40% da energia da composição nutricional. Por exemplo, a fonte de lipídeo pode fornecer cerca de 33% da energia da composição nutricional. A fonte de lipídeo pode compreender uma mistura de tríglicerí-deos de cadeia média (MCT) e triglicerídeos de cadeia longa (LCT). A fonte de lipídeo preferivelmente inclui pelo menos 30% a cerca de 80% em peso de triglicerídeos de cadeia média. Por exemplo, os triglicerídeos de cadeia média podem compor cerca de 70% em peso da fonte de lipídeo. As fontes adequadas de triglicerídeos de cadeia longa são óleo de girassol, óleo de colza, óleo de soja, gordura de leite, óleo de milho e lecitina de soja. Os óleos de coco fracionados são uma fonte adequada de triglicerídeos de cadeia média. O perfil de lipídeo da composição entérica é preferivelmente designado ter uma relação de Omega-3 (n-3) para Omega-6 (n-6) de ácido graxo poliinsaturado de cerca de 1:1 a cerca de 10:1. Por exemplo, a relação de ácido graxo de n-3 para n-6 pode ser cerca de 6:1 a 9:1. A composição nutricional preferivelmente inclui um perfil de mineral e vitamina completo. Por exemplo, os minerais e vitaminas suficientes podem ser fornecidos para suprir cerca de 75% a cerca de 250% da porção diária recomendada das vitaminas e minerais por 1000 calorias da composição nutricional. A composição nutricional preferivelmente tem um conteúdo de energia de cerca de 800 kcal/l a cerca de 1200 kcal/l; por exemplo um conteúdo de energia de cerca de 1000 kcal/l. A composição nutricional pode estar em qualquer forma adequada. Por exemplo, a composição nutricional pode estar na forma de um pó solúvel, um concentrado líquido, ou uma formulação pronta para beber. Alternativamente, a composição nutricional pode estar na forma sólida; por exemplo na forma de uma barra pronta para comer ou cereal de café da manhã. As formulações prontas para beber são particularmente preferidas. A composição pode ser alimentada a um paciente através de um tubo naso-gástrico, tubo do jejuno ou tendo-se o paciente bebido ou comido. Vários aromatizantes, fibras, adoçantes e outros aditivos podem também estar pre- sentes. A composição nutricional pode ser empregada como um suporte nutricional para pacientes sofrendo de, ou em risco de, produção de mucina reduzida ou debilitada. Por exemplo, a composição nutricional pode ser empregada como um suporte nutricional para pacientes sofrendo de uma resposta inflamatória, sofrendo de má nutrição, sofrendo de fibrose cística, ma-lignidade, doenças do intestino inflamatória crônica, colite ulcerativa e doença de Crohn, passando pelo tratamento que inclui a administração de drogas anti-inflamatórias não esteroidais, e outros estados de doença. A composição nutricional pode também ser empregada para restaurar a produção de mucina após a nutrição parenteral total. A quantidade da composição nutricional requerida para ser alimento de um paciente variará dependendo dos fatores tal como as condições do paciente, o peso do corpo do paciente, a idade do paciente, e se a composição nutricional é a única fonte de nutrição. Entretanto a quantidade requerida pode ser facilmente fixada por um praticante médico. Em geral, uma quantidade suficiente da composição nutricional é administrada para fornecer o paciente com cerca de 1 g de proteína a cerca de 4,0 g de proteína por kg de peso de corpo por dia e cerca de 0,05 g a cerca de 0,4 g de treonina por dia. Por exemplo, um paciente adulto pode ser administrado cerca de 1,5 g de proteína a cerca de 2,0 g de proteína por kg de peso de corpo por dia e cerca de 0,07 g a cerca de 0,2 g de treonina por dia. Se a composição nutricional é empregada como um suplemento para outros alimentos, a quantidade de composição nutricional que é administrada diariamente pode ser conseqüentemente diminuída. A composição nutricional pode ser tomada em múltiplas doses, por exemplo 2 a 5 vezes, para compor a quantidade diariamente requerida ou pode ser tomada em uma dose única.

Em uma modalidade, a presente invenção inclui um método para tratar estado de doença caracterizado por alterações nos níveis de mucina em um paciente. O método inclui administrar entericamente ao paciente uma composição nutricional que tem uma fonte de proteína incluindo aminoáci- dos onde a treonina inclui pelo menos 5,5% em peso dos aminoácidos. A quantidade de treonina pode também incluir pelo menos 6,0% e preferivelmente pelo menos 7,4 % em peso dos aminoácidos.

Em uma modalidade, a presente invenção inclui aumentar a síntese de mucinas em um paciente suplementando-se uma dieta de um paciente com uma quantidade terapeuticamente eficaz de treonina. A quantidade de treonina adicionada à dieta pode incluir pelo menos 0,2 mM. Preferivelmente, a quantidade de treonina também varia de cerca de 0,2 mM a cerca de 0,8 mM. A quantidade de treonina a ser adicionada pode ser com base nos requerimentos ou dosagens diárias recomendadas para treonina. Em uma modalidade, a quantidade de treonina, adicionada à dieta inclui pelo menos 30% da quantidade diária recomendada, preferivelmente pelo menos 60%, e mais preferivelmente pelo menos 100% desta quantidade.

Em uma modalidade, a presente invenção fornece um método para aumentar a síntese de mucinas aumentando-se a eficiência do alimento em uma dieta de um paciente. A eficiência do alimento representa a relação entre o ganho de peso do corpo e a quantidade de aiimento ingerido durante um período de dieta como detalhado abaixo no Exemplo 4. A eficiência do alimento e desse modo a síntese de mucinas podem ser aumentados administrando-se ao paciente uma composição nutricional que contém uma quantidade terapeuticamente eficaz de treonina. Por exemplo, a quantidade de treonina pode ser com base na quantidade diariamente recomendada de treonina como previamente discutido.

Uma modalidade da invenção fornece métodos para tratar estados de doença caracterizados pelas alterações de níveis de mucinas em um paciente. Os estados de doença podem incluir diversos estados de doença, tal como infecção bacteriana e inflamação intestinal ou outros estados de doença, como previamente discutido. Em uma modalidade, a invenção fornece métodos para tratar inflamação intestinal, para tratar infecções bacte-rianas intestinais, para reduzir tensão oxidativa devido à inflamação intestinal aguda e para tratar outros estados de doença. Os métodos para tratar estados de doença fornecem administrar a um paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de treonina como previamente discutido. A treonina pode ser administrada como parte de uma composição nutricional, suplemento ou outra substância nutricional.

Por modo de exemplo e não limitando, os exemplos da presente invenção são como segue: Exemplo 1 Vinte e quatro ratos Wistar machos, cada um pesando cerca de 200 g, são empregados. Os ratos têm acesso livre à água. Os ratos são divididos em 3 grupos de 8 ratos com cada rato em uma gaiola separada.

Cada grupo de ratos tem livre acesso, durante 3 dias, a uma dieta de controle com base em proteína de soja suplementada com Met. Por conseguinte, cada grupo é alimentado, uma vez por dia, com uma quantidade da dieta de controle suficiente para abastecer 80% dos requerimentos fisiológicos para o desenvolvimento de cada rato. Por conseguinte, um grupo (o grupo de controle) é alimentado do mesmo modo durante o restante da experiência. Os grupos restantes são então subalimentados durante um período de três dias. Os ratos têm livre acesso à água durante este tempo.

Os dois grupos restantes de ratos são então cada alimentado com uma dieta separada, uma vez por dia, em uma quantidade suficiente da dieta de controle para abastecer 80% dos requerimentos fisiológicos para o desenvolvimento de cada rato. Um grupo (grupo A) é alimentado com uma fórmula entérica com base em soro de leite ácido suplementado com 5% de celulose. O segundo grupo (grupo 1) é alimentado com uma fórmula entérica secada por congelamento com base em soro de leite doce (disponível por Nestle Clinicai Nutrition sob o nome comercial PEPTAMEN®) suplementado com 5% de celulose. O conteúdo de proteína das dietas são como segue: a dieta de controle contém 19,02 g de proteína por grama da dieta, fórmula entérica com base em soro de leite ácido contém 15,67 g de proteína por grama de dieta, e a fórmula entérica com base em soro de leite doce contém 15,63 g de proteína por grama de dieta. A treonina fornece cerca de 7,4% em peso de proteína na fórmula entérica com base no soro de leite doce. Na fórmula entérica com base no soro de leite ácido, a treonina fornece menos do que 5% em peso de proteína.

Resultados 1 Após três dias, a mucosa gastro-intestinal é coletada de cada rato. O conteúdo de treonina da mucosa é então determinado como segue: Os resultados do exemplo 1 indicam que os ratos subnutridos do grupo 1 têm um conteúdo mais elevado de treonina na proteína de mucosa do que aqueles do grupo A e um conteúdo de treonina levemente mais baixo do que o conteúdo normal daqueles do grupo de controle. Isto indica um aumento na produção de mucinas nos ratos do grupo 1.

Exemplo 2 Uma dieta líquida isotônica é empregada. A dieta está disponível por Nestle Clinicai Nutrition sob o nome comercial PEPTAMEN®. A dieta tem os seguintes componentes: Continuação A dieta tem uma densidade de energia de 1000 kcal/i e as proteínas fornecem 16% de energia, o carboidrato fornece 51% de energia, e o lipídeo fornece 33% de energia. A treonina forneceucerca de 7,4% em peso da fonte de proteína. Dez pacientes, de ambos os sexos e entre as idades de 20 a 60 anos, são recrutados para o estudo. Todos os pacientes têm sido diagnosticado como sofrendo de doença de Crohn, e o diagnóstico tem sido confirmado por histologia, radiologia, ou ambos. Todos os pacientes são administrados alimentados por bário, e a radiografia é empregada para avaliar o sítio da doença no intestino delgado. Os pacientes são também submetidos à avaliação endoscópica. Uma marca de 0 a 3 (0= normal, 1 = inflamação leve, 2= inflamação moderada, e 3= inflamação severa) é determinada para cada área do intestino que é examinado. As áreas do intestino incluem, por exemplo, o íleo terminal, ceco, cólon descendente, cólon transverso, cólon ascendente, cólon sigmóide e reto. Além disso, uma avaliação é feita sob a condição do muco na área do intestino que é examinada. Uma marca de 0 a 3 (0 = normal, 3= redução severa) é determinada para cada área.

Cada paciente no estudo é alimentado pelo produto PEPTA-MEN® como a fonte única de nutrição durante um período de 8 semanas. A administração da composição nutricional está sob a supervisão de um médico e é efetuada oralmente ou por tubo nasogástrico, como desejado pelo paciente. A entrada da composição nutricional é ajustada na base de tolerância, palatabilidade e ganho de peso. Após 8 semanas, cada paciente novamente passou pela avaliação endoscópica e valores da mucosa e inflamação são determinados.

Resultados 2 Em geral, a avaliação endoscópica e condições da mucosa em todos os pacientes tem melhorado após administrar a composição nutricional aos pacientes como discutido no Exemplo 2. Então, o tratamento eficazmente resultou na moderação da doença de Crohn na maioria dos casos.

Exemplo 3 (In vitro) O efeito da suplementação de treonina na taxa da síntese de mucina foi analisada in vitro em células HT2S-MTX (células de carcinoma colônicas humanas). As células HT29-MTX foram desenvolvidas em veículo essencial mínimo modificado por Dulbecco normal (DMEM) suplementado com 10% (volume/volume) de soro bovino fetal desativado por aquecimento (Tecnologias de Vida) e contendo 25 mM de glicose, 1 % de aminoácidos não essenciais (Tecnologias de Vida), 2 mM de glutamina (AJINOMOTO CO), 85 mg/L de peniclina-estreptomicina, 50 mg/L de gentamicina, e 1,5 mg/L de Anfotericina B (Tecnologias de Vida). As células foram cultivadas a 37°C em uma atmosfera contendo 10% de C02: 90% de ar. O veículo de cultura foi carregado diariamente. As experiências foram realizadas em frascos de cultura de T75 cm2 entre passagens de 10 a 20. Os estudos foram realizados no último período pós-confluente (21 dias após semeadura), quando todas as células exibem um fenótipo de separação de mucina.

Para a experiência, as células foram desenvolvidas no DMEM normal até confluência (7 dias após semeadura). Então do dia 7 ao dia 21 após semeadura, concentrações severas de treonina no DMEM foram testadas, quer dizer, 0,2 mM, 0,4 mM, 0,8 mM e 1,6 mM. No dia 20, L-(3-3H) treonina (30 micro Ci/frasco) foi adicionado à um veículo de cultura de 10 ml_ fresco. A incorporação do traçador radioativo a mucoproteínas sintetizadas novamente foi determinada durante o seguinte período de 24 horas.

Após 24 horas de rotulação metabólica, o veículo de cultura de células foi removido. As células foram lavadas duas vezes com 10 ml de 1 x PBS e recuperadas empregando raspador de borracha. As células homogeneizadas em de 0,05 M de tampão Tris/ HCI pH 7,50 empregando um poli-tron em uma fixação inferior (6,000 rpm, 30 segundos, 4°C). Uma alíquota de cada homogenado foi removida para a medição da radioatividade específica da treonina livre intracelular considerada como grupo precursor. As mucoproteínas foram purificadas a partir das células homogeneizadas por uma cromatografia de exclusão de tamanho após uma digestão enzimática parcial de glicosilados não elevados e desse modo protegeram proteínas. As mucinas purificadas foram hidrolisadas com 6M de HCI (24 horas a 100°C), e sua composição de aminoácido foi determinada por HPLC. A saída do detector UV foi conectada a um detector radioativo (radiomatic 500TR, Packard) para medir a 3H-treonina incorporada na mucoproteína. A taxa de síntese fracional (FSR) de mucoproteínas foi calculada e expressada em percentual/ dia (%/d): (FSR = (radioatividade específica de treonina de ligação de mucoproteína/ radioatividade específica de treonina livre intracelular) * 100).

Resultado 3 Os resultados do exemplo 3 são mostrados na Figura 1 que demonstra o efeito da concentração de treonina na taxa de síntese fracional de mucoproteínas ("FSR de mucoproteína"). A FSR de mucoproteína foi determinada por cada das concentrações variantes de treonina (mM) no veículo de cultura de células HT29-MTX como ainda mostrado na Figura 1. Os valores dos dados são valores médios ± SEM (n = 6) onde os valores dos dados que não compartilham uma letra comum são significantemente diferentes (p < 0,05). A FSR de mucoproteína aumentou significantemente de 0,2 mM (26,4 ± 1,4%) a 0,8 mM (37,3 ± 1,4%) de treonina e atingiu uma altura de cerca de 0,8 mM de treonina. A FSR de mucoproteína geralmente aumentou com o nível de treonina no veículo de cultura sob condições que não são limitantes em treonina para a cultura de célula como a disponibilidade e número de células não são perturbados.

Estes resultados claramente indicam que a biodisponibilidade da treonina no veículo de cultura pode influenciar significantemente a taxa de síntese de mucoproteína in vitro. Desse modo, qualquer um dos estados de doença considerado (Doença de Intestino Inflamatória, infecção, doença de Crohn ou outros tipos de estados de doença), o requerimento de treonina é aumentado para a síntese de proteínas inflamatórias ricas em treonina no consumo da síntese de mucoproteína. Desse modo, a suplementação de treonina pode ser uma intervenção nutricional eficiente e eficaz para estimular ou restaurar a taxa de síntese de mucoproteína, e desse modo para facilitar a proteção de célula epitelial melhorada.

Exemplo 4 (In vivo) O efeito do conteúdo de treonina na dieta na taxa da síntese de mucina foi analisada in vivo no desenvolvimento dos ratos. Trinta e dois ratos Sprague-Dawley machos (90 g) foram empregados. Eles foram aleatoriamente divididos em 4 grupos de 8 ratos e separados em gaiolas individuais. Os ratos tiveram acesso livre à água durante todas as experiências.

Após um período de adaptação de 6 dias em uma dieta alimentar, os ratos foram adaptados (acesso livre) para sua dieta experimental durante 3 dias. As dietas experimentais foram com base em aminoácidos livres (dieta semi-sintética, 12,5% de proteínas) e quantidades variantes de treonina: A) um requerimento de treonina para desenvolvimento de ratos de acordo com as recomendações do Conselho de Liberação Nacional (edição revisada de 1995); B) 60% do requerimento de treonina; C) 30% do requerimento de treonina; e D) 150% do requerimento de treonina. Os ratos de cada grupo foram alimentados com as dietas experimentais durante 14 dias. Os grupos A, B e D foram alimentados aos pares com grupo C.

Antes do sacrifício dos ratos, uma dose de inundante de 1-13C-Valina foi realizada na veia dorsal lateral dos animais. Cada animal recebeu uma pílula grande de 150 micromol de L-13C-Valina (99% de 13C)/ 100 g de peso do corpo. Os animais foram sacrificados após anestesia por exsangui-nação da aorta abdominal entre 35 à 53 minutos após a injeção de 1-13C-Valina. As amostras da mucosa intestinal foram obtidas descartando-se com uma lâmina de vidro e desde então congelado-as imediatamente em nitrogênio líquido.

As amostras das mucosas dos ratos foram homegeneizadas gentilmente em 0,05 M de tampão Tris/HCI pH 7,50 empregando um politron em um fixação inferior (6,000 rpm, 30 segundos, 4°C). Uma alíquota de cada amostra homogenada foi empregada para medir o enriquecimento de 1-13C-Valina no grupo intracelular que foi considerado como enriquecimento de 13C- do grupo precursor. Desde então, as mucoproteínas foram purificadas como previamente descritas durante a experiência in vitro. O enriquecimento de 1-13C-Valina em mucoproteínas foram medidos por espectrometria de massa.

Resultados 4 Como mostrado na figura 2, o efeito do requerimento de treo-nina e percentuais deste na eficiência de alimento de uma dieta foi avaliada. Como discutido no Exemplo 4, as dietas contêm 30%, 60%, 100%, e 150% do requerimento de treonina dos ratos. A eficiência de alimento foi calculada como a relação entre o ganho de peso do corpo (gramas) e a quantidade de alimentos ingeridos (gramas) durante os 14 dias, e expressados em percentuais. Os valores dos dados são valores médios ± SEM (n = 8). Os valores dos dados que não compartilham uma letra comum são significante-mente diferentes (p< 0,05).

Como ainda ilustrado na Figura 2, a eficiência do alimento das quatro dietas variaram com respeito ao percentual do requerimento de treonina na dieta. Foi significantemente mais inferior para a dieta contendo 30% do requerimento de treonina de ratos (11,8 ± 1,2%) do que para dietas contendo 60% (17,5 ±0,5%), 100% (18,8 ± 0,8%) e 150% (20,6 ± 1,3%) do re- querimento de treonina.

Como mostrado na Tabela 1 (abaixo) e Figura 3, o efeito do percentual do requerimento de treonina nas taxas de síntese fracionais de mucoproteínas foi avaliado.

Tabela 1 Dieta % do requerimento FSR (%/d) Média ± SEM de treonina 123,5 C 30% 109,8 101,8±9,4 80,4 93.6 178.3 B 60% 123,9 139,8±19,3 117.4 157.3 A 100% 146,2 143,5±6,3 135.3 117.6 D 150% 159,1 138,5±12,0 138,9 A tabela 1 compara a taxa de síntese fracional da mucoproteí-na no jejuno de ratos desenvolvidos com respeito à Dieta A (100% do requerimento de treonina), Dieta B (60% do requerimento de treonina, Dieta C (30% do requerimento de treonina), e Dieta D (150% do requerimento de treonina). A figura 3 é uma ilustração gráfica da Tabela 1. Os valores dos dados são valores médios ± SEM como também ilustrados na Figura 3.

Como mostrado na Tabela 1 e Figura 3, o rato da síntese de mucoproteínas foi inferior no jejuno de ratos alimentados com a dieta que é mais deficiente em treonina (30% do requerimento de treonina). Como mostrado, a taxa da síntese fracional de mucoproteína no jejuno foi 143%/ dia com a dieta de controle (100% do requerimento de treonina), e aumentada a 101%/dia com a dieta contendo 30% do requerimento de treonmina. Entretanto, a taxa de síntese de mucoproteína não aumentou com a dieta contendo 150% do requerimento de treonina o mesmo que foi observado na dieta de controle.

Esses resultados indicam que se os requerimentos de treonina para desenvolvimento não são revestidos pela dieta, a taxa de síntese de mucoproteína é aumentada. Desse modo, o conteúdo da treonina da dieta tem um efeito em ambas taxas de síntese de mucoproteína e desenvolvimento in vivo em ratos. Isto demonstra que não somente o desenvolvimento porém também a síntese de mucoproteína é efetuada quando a dieta é deficiente em treonina. Conseqüentemente, se os requerimentos de treonina não são adequadamente fornecidos pela dieta, a suplementação de treonina pode ser uma estratégia nutricional eficiente e eficaz para aumentar ou restaurar a taxa de síntese de mucoproteína, e desse modo assegurar uma melhor proteção da célula epitelial.

Deveria ser entendido que várias alterações e modificações para as modalidades presentemente preferidas descritas aqui seriam aparentes para aqueles versados na técnica. Tais alterações e modificações podem ser feitas sem afastar-se do espírito e escopo da presente invenção e sem diminuir suas vantagens presentes. É então entendido que todas tais alterações e modificações sejam revestidas pelas reivindicações anexas.

REIVINDICAÇÕES

Claims (14)

1. Uso de uma fonte de proteína compreendendo aminoácidos, em que o teor de treonina é igual a pelo menos 5,5% em peso dos aminoácidos, caracterizado pelo fato de ser na preparação de uma composição nutricional para tratar um estado de doença apresentando alterações dos níveis de mucina em um paciente.

2. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o teor de treonina é de pelo menos 6% em peso dos aminoácidos.

3. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a fonte de proteína compreende proteína do soro de leite doce.

4. Uso de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que a proteína do soro de leite doce é hidrolisada.

5. Uso de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a composição nutricional ainda compreende uma fonte de lipídeo e uma fonte de carboidrato.

6. Uso de acordo com a reivindicação 5, caracterizado pelo fato de que a fonte de lipídeo compreende uma mistura de triglicerídeos de cadeia média e triglicerídeos de cadeia longa.

7. Uso de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que a fonte de lipídeo compreende 30% a 80% em peso de triglicerídeos de cadeia média.

8. Uso de uma fonte de proteína compreendendo aminoácidos, em que o teor de treonina é igual a pelo menos 5,5% em peso dos aminoácidos, caracterizado pelo fato de ser na preparação de uma composição nutricional para manter a síntese de mucina no tratamento de um estado de doença apresentando alterações dos níveis de mucina em um paciente.

9. Uso de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que o teor de treonina é de pelo menos 7,4% em peso dos aminoácidos.

10. Uso de acordo com a reivindicação 8 ou 9, caracterizado pelo fato de que o teor de treonina é de pelo menos 14% em peso dos aminoácidos.

11. Uso de acordo com a reivindicação 8 ou 9, caracterizado pelo fato de que a fonte de proteína compreende caseíno-glico-macropeptídeo.

12. Uso de acordo com a reivindicação 8 ou 9, caracterizado pelo fato de que a fonte de proteína compreende proteína do soro de leite doce.

13. Uso de acordo com a reivindicação 8, caracterizado pelo fato de que a composição nutricional ainda compreende uma fonte de lipídeo compreendendo uma mistura de triglicerídeos de cadeia média e triglicerí-deos de cadeia longa, e uma fonte de carboidrato.

14. Uso de uma fonte de proteína compreendendo aminoácidos, em que o teor de treonina é igual a pelo menos 5,5% em peso dos aminoácidos, caracterizado pelo fato de ser na preparação de um suplemento nutricional para tratar inflamação intestinal ou infecção bacteriana intestinal em um paciente.