ES2255097T3

ES2255097T3 - Uso de enzimas de krill para el tratamiento de la placa dental.

Info

Publication number: ES2255097T3
Application number: ES97202796T
Authority: ES
Inventors: Johan De Faire
Original assignee: Phairson Medical Inc
Current assignee: Phairson Medical Inc
Priority date: 1992-05-22
Filing date: 1993-05-21
Publication date: 2006-06-16
Anticipated expiration: 2013-05-21
Also published as: AU4100093A; RU94046254A; ES2173887T3; SK140594A3; JPH08501068A; CA2136331C; HU9403343D0; KR100290266B1; EP0642351A1; NO944448D0; JP2000351734A; ZA933598B; CA2306952A1; NO944448L; ATE311853T1; SE9201628D0; DE69333931D1; AU675942B2; CN1089505A; CZ286794A3

Abstract

UNAS COMPOSICIONES ENZIMATICAS NO INMUNOGENICAS QUE SE HAN AISLADO A PARTIR DEL KRILL ANTARTICO Y QUE PRESENTAN ACTIVIDAD ENDO - Y EXO - PEPTIDASA, RESULTAN UTILES EN LA FABRICACION DE COMPOSICIONES PARA EL TRATAMIENTO DE LA PLACA DENTAL.

Description

Uso de enzimas de krill para el tratamiento de la placa dental.

Ámbito técnico

La presente invención se refiere al nuevo uso farmacéutico de sustancias proteicas no inmunógenas y a composiciones que tienen actividad enzimática y que, en pruebas clínicas, sorprendentemente han demostrado eliminar la placa dental. Según la invención se cree que estas sustancias funcionan de forma fagocítica, es decir, parecen ser capaces de distinguir entre partículas diversas y materia soluble considerada como "normal" o "anormal", respectivamente, en un entorno en particular o, expresado de forma diferente, parecen ser capaces de reconocer, dirigirse a, y destruir células divergentes. Sin embargo, debería enfatizarse que la invención no pretende restringirse a ningún hipotético modo de acción expresado en la presente memoria descriptiva.

Descripción de la técnica anterior

Una forma tradicional de buscar enzimas proteolíticas para uso médico es usarlas para la limpieza de heridas no cicatrizantes cubiertas con estructuras proteicas, como una alternativa al desbridamiento quirúrgico, fundamentalmente en pacientes ancianos con ulceras provocadas por insuficiencias circulatorias. Véanse, por ejemplo, los documentos US-A-4.801.451 y US-A-4.963.491, que describen una mezcla de enzimas exo y endopeptidasas que han sido aisladas a partir de krill antártico (Euphasia superba) y su uso con fines limpiadores, tanto en la limpieza farmacéutica (US-A-4.801.451) como en la limpieza no farmacéutica (US-A-4.963.491). La única limpieza farmacéutica descrita es el desbridamiento enzimático, a saber, la limpieza enzimática de heridas necróticas. Los fines no farmacéuticos descritos son, entre otros, agentes de lavado, para renovar pinturas viejas, etc. El documento WO85/04809 describe el uso de enzimas de krill antártico como promotores de la digestión. El documento EP-A1-0170115 describe el uso del krill como disolvente de trombos.

Se han aislado enzimas y mezclas de enzimas procedentes de krill antártico, y se han estudiado ampliamente en relación con sus propiedades biológicas y bioquímicas. También se han desarrollado varios procedimientos para aislar estas enzimas. Véanse, por ejemplo, Anheller J-E., Hellgren L., Karlstam B. y Vincent J. (1989): "Biochemical and biological profile of a new enzyme preparation from Antarctic krill (E. superba) suitable for debridement of ulcerative lesions", Arch. Dermatal. Res. 281, 105-110; Axelsen N. H., Kroll J. y Weeke B. (1973): "A manual of quantitative immunoelectrophoresis: methods and applications", Scan. J. Immunol. 2, Supl.; Bucht A. y Karlstam B. (1986): "Immunological characterization of three highly purified trypsin-like enzymes from Antarctic krill (Euphausia superba)", Biol. Chem. Hoppe-Seyler 367, 366 (Supl.); Bucht A., Johansson, B. y Karlstam B. (1986): "Separation and identification of proteases from Antarctic krill (Euphausia superba)", 6º Int. Symp. HPLC Proteins, Peptides and Polynucleotides, Baden-Baden, pág. 34; Chen C. S., Yan T. R. y Chen H. Y. (1978): "Purification and properties of trypsin-like enzymes and a carboxypeptidase A from Euphausia superba", J. Food Biochem. 2, 349-366; Hellgren L., Karlstam B., Mohr V. y Vincent J. (1991): "Krill enzymes - a new concept for efficient debridement of necrotic ulcers", Int. J. Dermatol. 30, 102-103; Karlstam B.: "Crossed immunoelectrophoretic krill analysis of proteins from Antarctic krill (Euphausia superba) with special reference to serine proteinases" (remitido para su publicación); Kimoto K. K., Kusama S. y Murakami K. (1983); "Purification and characterization of serine proteinases from Euphausia superba", Agric. Biol. Chem. 47, 529-534; Lowry O. H., Rosebrough N. J., Farr A. L. y Randal R. J. (1951): "Protein measurement with the Folin phenol reagent", J. Biol. Chem. 193, 265-275; Moore S. y Stein W. H. (1963): "Chromatographic determination of amino acids by the use of automatic recording equipment", Methods Enzymol. 6, 819-831; Osnes K. K. y Mohr V. (1985): "On the purification and characterization of three anionic serine-type peptide hydrolases from Antarctic krill, Euphausia superba", Comp. Biochem. Physiol. 82B, 607-619; y Osnes K. K. y Mohr V. (1986): "On the purification and characterization of exopeptidases from Antarctic krill, Euphausia superba", Comp. Biochem. Physiol. 83B, 445-458.

Resumen de la invención

El fármaco óptimo sería un fármaco que actuara en armonía e interacción simbiótica con el sistema de defensa inmune y con un objetivo en las causas y síntomas sin reacciones adversas. La presente invención proporciona nuevos usos farmacéuticos y nuevas composiciones farmacéuticas que parecen tener dichas propiedades. El medio mediante el cual se consigue esto implica el uso de una composición enzimática según se define en la reivindicación 1. Según se mencionó anteriormente, dichas enzimas se conocen como tales, y también se han sugerido para algunos usos farmacéuticos. Los resultados obtenidos cuando se usan dichas enzimas de krill para los fines descritos en este documento no podían esperarse, y los resultados obtenidos son, de hecho, inesperados. El medio mediante el cual se consiguen estos resultados se explicará en los siguientes Ejemplos y en las reivindicaciones anexas.

Ejemplo de preparación

Según se mencionó anteriormente, ya se conocen muchos procedimientos para aislar enzimas proteolíticas a partir del krill, por lo que la siguiente es sólo una de las muchas posibles formas de preparar preparaciones enzimáticas que pueden usarse según la invención.

Se descongeló y homogeneizó Krill blanco ultracongelado, Euphasia Superba. Se añadió agua destilada en una proporción de 1:1 (p/v) y un 0,02% de azida sódica, y se dejó durante 6 horas a +4°C. La fase acuosa se recogió junto con el centrifugado de los trozos de carne/conchas, a 9000 rpm durante 40 minutos. La fase acuosa se desgrasó con acetato de etilo a +4°C hasta el día siguiente. La fase acuosa inferior se recogió y se evaporó durante varias horas.

Se añadió una disolución saturada de sulfato amónico al 60% de saturación. El precipitado obtenido se centrifugó a 9000 rpm durante 40 minutos y después se disolvió en tampón de fosfato 0,05 M, pH 7,4, en cloruro sódico 0,05 M (PBS) y se dializó frente a PBS, "extracto bruto".

El extracto bruto se aplicó a una columna de Sephacryl 200 (Pharmacia, Suecia) y las fracciones proteicas se recogieron a una su absorbancia de 280 nm y se analizó su actividad proteolítica. Las fracciones activas se agruparon y se liofilizaron. Las fracciones activas combinadas se denominarán en lo sucesivo, de forma intercambiable, "Multi-Proteína", "Multi-Enzima", PHIM o PHIM 106.

El intervalo de pesos moleculares de las enzimas aisladas se determinó mediante SDS-PAGE PAA4/30 (Pharmacia, Suecia). Apareció un mínimo de 6 bandas en el intervalo de 18.000-40.000, específicamente en 24.000-34.000.

Una fracción del gel cromatográfico anterior mostró ambas actividades de endo y exopeptidasa, y la fracción se aplicó para una separación adicional. Se demostró que esta fracción contenía una posible única enzima con un peso molecular de 26.000-32.000. Se denominará en lo sucesivo "Mono-Proteína", o "Mono-Enzima".

Ni el extracto bruto, ni la Multi-Proteína, ni la Mono-Proteína mostraron ningún efecto bactericida in vitro, pero posiblemente un efecto bacteriostático.

El intervalo normal de temperatura de las enzimas en las gambas vivas es de -5 a -2°C. Es sorprendente averiguar que la temperatura óptima para las enzimas es de +55°C a pH neutro, y algunas enzimas son estables a 100°C durante 1 hora.

Diversas características de las PHIM

En las Figuras 1a y 1b se muestra la estabilidad la temperatura de las PRIM, según se prepararon anteriormente, es decir, el porcentaje relativo de actividad de las PHIM (actividad expresada como área digerida de caseína bovina; BioRad Protease Substrate Tablets; pH 7,0; 30°C durante 20 horas) en función del tiempo a las temperaturas de 10, 20, 30, 40, 50, 60 y 70°C. A 70°C la actividad ha descendido por debajo del 25% después de 2 horas, mientras que esto tarda al menos 12 horas a 60°C. A 40°C se observa una disminución de la actividad por debajo del 25% después de 11 días, mientras que la actividad de las PHIM a 30°C después de 11 días todavía es de aproximadamente el 100%.

En la Figura 2 se muestra la temperatura óptima, es decir, la actividad proteolítica total de las PHIM (expresada en equivalentes de caseína en mm^{2} como área digerida de caseína bovina; BioRad Protease Substrate Tablets; pH 7,0; 30°C durante 24 horas) en función de la temperatura. Es interesante apreciar que la actividad óptima se obtiene a 55°C.

En la Figura 3 se muestra la estabilidad al pH de las PHIM, es decir, el porcentaje de actividad relativa de las PRIM (actividad expresada como área digerida de caseína bovina; BioRad Protease Substrate Tablets; 30°C durante 20 horas) en función del tiempo a diferentes valores de pH. Las PHIM reconstituidas se mantuvieron a temperatura ambiente durante entre 2 y 18 horas. A pH 3,5 y a pH 11 hay una disminución más bien rápida de la actividad ya después de unas pocas horas, mientras que entre un pH 7,0 y un pH 9,5 la actividad está todavía por encima de aproximadamente el 70% después de 18 horas.

En la Figura 4 se muestra el pH óptimo de las PHIM, es decir, la actividad proteolítica total de las PHIM (expresada en equivalentes de caseína en mm^{2} como área digerida de caseína bovina, BioRad Protease Substrate Tablets; 30°C durante 16 horas) en función del pH. Se aprecia que hay una actividad proteolítica óptima a aproximadamente pH 8.

En la Figura 5 se muestra la curva de dosis-actividad in vitro de las PHIM, es decir, la actividad proteolítica total de las PHIM (expresada en equivalentes de caseína en mm^{2} como área digerida de caseína bovina; BioRad Protease Substrate Gel Tablets; pH 7,0; 30°C durante 24 horas). La concentración de proteínas se midió según Bradford, M., Anal. Biochem, 72, 248, 1976. la actividad aumenta rápidamente al aumentar la dosis de las PHIM y alcanza un máximo a aproximadamente 1,5 mg de PHIM, teniendo todavía la actividad aproximadamente el mismo valor a 15 mg de PRIM.

Ejemplos clínicos

Para ilustrar el efecto terapéutico obtenido según la invención, las posibles limitaciones e inconvenientes en la práctica clínica, las enzimas y las mezclas de enzimas según la invención se probaron clínicamente para comprobar, entre otras, las siguientes indicaciones:

-: Infecciones

-: Inflamaciones

-: Células muertas y divergentes

-: Infecciones oportunistas

-: Enfermedades oculares

-: Dolor

-: Cáncer.

Todos los estudios se diseñaron como estudios preliminares sobre pequeños números de pacientes para la indicación respectiva. Para investigar la finalidad del estudio se eligieron heridas fundamentalmente tópicas y zonas afectadas en las que pudieran realizarse inspecciones visuales de los parámetros clínicos.

En la mayoría de los casos la palabra clave para la elección de los pacientes fue "paciente por lo demás sano", es decir, se centro la atención sobre la situación del problema clínico primario y se excluyeron factores del sistema subyacentes obvios para permitir una buena interpretación de los resultados. En este material de los pacientes están incluidos de forma natural cierta variedad de estados generales y factores sistémicos, dado que participaron pacientes desde la edad de 20 hasta los 85 años y se incluyeron indicaciones desde una "leve" inflamación ambulatoria hasta escaras por hospitalización. Cada grupo de prueba para la respectiva indicación constituía un grupo más bien homogéneo en relación con los estados generales y los factores sistémicos subyacentes.

No obstante, en este documento sólo se presentan dos de dichos ejemplos como relevantes para la presente invención.

Breve descripción de los dibujos

En los dibujos:

Las Figuras 1a y 1b muestran la estabilidad a la temperatura de las PHIM, es decir, el porcentaje relativo de actividad de las PHIM frente al tiempo a diferentes temperaturas;

la Figura 2 muestra la temperatura óptima de las PHIM, es decir, la actividad proteolítica total en función de la temperatura;

la Figura 3 muestra la estabilidad al pH de las PHIM, es decir, el porcentaje de actividad relativa frente al tiempo a diferentes valores de pH;

la Figura 4 muestra el pH óptimo de las PHIM, es decir, la actividad proteolítica total en función del pH; y

la Figura 5 muestra una curva de dosis-actividad de las PHIM, es decir, la actividad proteolítica total en función de la dosis de PHIM.

Ejemplo 1 Placa dental en perros

El propósito de este estudio era investigar la eficacia descomponedora y la utilidad de la preparación Multi-Proteína a partir de Krill sobre la placa dental en un modelo de perro. Polvo blanco liofilizado sin conservantes ni aditivos antimicrobianos. Multi-Proteína con actividades de endo y exopeptidasa: 1 ampolla para ser reconstituida en 5 ml de disolución salina hasta una concentración final de 5 unidades de caseína/ml.

Se untó cuidadosamente el contenido de una ampolla recién preparada sobre los dientes y las encías. La lengua se fijó durante un mínimo de 2 minutos y no se permitieron alimentos ni bebidas durante las 2 horas posteriores al tratamiento. El tratamiento se repitió dos veces al día hasta que toda la placa estaba completamente descompuesta. Se inspeccionó el estado de la placa en los perros, la secreción de saliva y las reacciones adversas una vez al día.

En este estudio se incluyeron 8 beagles con una formación anormal de placas debido a una alimentación y alojamiento especiales. Después de 4 días, todos los signos de placa habían desaparecido y el estudio había terminado. No pudieron observarse reacciones adversas.

Un intervalo de dosificación adecuado para esta indicación es de 0,1 a 100, preferiblemente de 1 a 35 mg por tratamiento.

Ejemplo 2 Placa dental humana

El propósito de este estudio era investigar la eficacia descomponedora y la utilidad de la preparación Multi-Proteína a partir de Krill sobre la placa dental. Polvo blanco liofilizado sin conservantes ni aditivos antimicrobianos. Multi-Proteína con actividades de endo y exopeptidasa: 1 ampolla para ser reconstituida en 5 ml de disolución salina hasta una concentración final de 5 unidades de caseína/ml.

Se preparó una ampolla de disolución Multi-Proteína antes de cada tratamiento, y la cavidad bucal se enjuagó durante 5 minutos. No se permitieron alimentos ni bebidas durante las 2 horas posteriores al tratamiento. El tratamiento se repitió dos veces al día y los pacientes fueron inspeccionados una vez al día para comprobar la placa, la secreción de saliva, la sequedad y las reacciones adversas. A los pacientes no se les permitió lavarse los dientes durante el estudio en curso.

El tratamiento terminó cuando todos los signos de placa habían desaparecido, pero durante no más de 7 días.

Dos horas después del primer tratamiento todos los pacientes experimentaron una sensación blanda y suave sobre los dientes, y todos los pacientes consideraron que la placa había sido completamente descompuesta. Una inspección visual mostró restos de placa. 2 horas después del tercer tratamiento todos los signos de placa habían desaparecido y los tratamientos habían finalizado. No pudieron observarse reacciones adversas.

Conclusiones de los ejemplos clínicos

Las preparaciones Mono-Proteína y Multi-Proteína según la invención presentan un intervalo total de acciones que parecen semejarse al modo de acción de las células fagocíticas.

No pudieron establecerse limitaciones o inconvenientes clínicos a partir de las indicaciones investigadas. Por el contrario, las preparaciones mostrando una buena eficacia en situaciones clínicas en las que la defensa inmune natural no estaba respondiendo, por ejemplo, heridas en estasis, y en las que la defensa inmune estaba completamente suprimida, por ejemplo, infecciones oportunistas.

Reacciones adversas

No se observaron reacciones adversas en ninguno de los muchos pacientes incluidos en los anteriores estudios referidos. Los pacientes que padecían polialergias, alergias al marisco, piel sensible, sequedad ocular y los pacientes con un sistema inmune hiperactivo con la respuesta suprimida habían sido incluidos en los estudios o estudiados separadamente sin mostrar ningún signo de reacciones adversas.

Se ha demostrado que las preparaciones Multi-Proteína y Mono-Proteína reivindicadas son atóxicas.

Basándonos en estas investigaciones clínicas completas y preliminares también puede ser razonable concluir que las sustancias y las composiciones inventivas serían eficaces como cura de un gran número de otras enfermedades y dolencias.

Descripción de las PHIM 106

Según se explicó anteriormente, PHIM: 106 es una abreviatura de las proteínas con propiedades enzimáticas y procedentes de fuentes marinas, en las pruebas a continuación, de krill antártico. Según la invención se han descubierto nuevas propiedades fundamentales de estas proteínas. La hipótesis es que las proteínas reconocen en primer lugar células enfermas y divergentes así como microbios, y a continuación destruyen las células objetivo mediante las propiedades enzimáticas. Las células del tejido sano no se ven afectadas.

El mecanismo que subyace tras la aguda selectividad está investigándose, pero la hipótesis de trabajo es que las proteínas son capaces de reaccionar con las mismas señales que nuestro propio sistema de defensa inmune, y atacan a cualquier invasor extraño, así como a células divergentes.

Las células cancerosas son divergentes en el sentido de que expresan fragmentos de proteínas tumorales en la superficie celular, y serán reconocidas como divergentes por el sistema de defensa inmune, en comparación con las células del tejido sano.

Las PHIM 106 se han usado en estudios humanos abiertos en más de 400 pacientes sin ningún tipo de efectos secundarios.

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En animales no pudo detectarse toxicidad. Se inyectaron hasta 5 g de PHIM 106/kg de peso corporal en ratas por vía i.v. sin ningún signo de toxicidad.

Dado que las PHIM 106 consisten en proteínas con un tamaño de 24-34.000 Dalton y proceden de fuentes marinas, podría esperarse la formación de anticuerpos, pero no pudo detectarse ninguna formación de anticuerpos cuando se inmunizaron conejos y cobayas.

Toxicidad en ratones

No ha sido posible demostrar ninguna toxicidad de las PHIM en seres humanos ni en animales, a pesar de la administración de sobredosis excesivas, de hasta aproximadamente 100 veces la correspondiente dosis eficaz. La toxicidad de las PHIM también se probó en ratones con leucemia murina P388 implantada por vía s.c. (un cáncer inducido químicamente) y se comparó con la doxorrubicina, un conocido fármaco antineoplásico, abreviado como DOX. Los resultados se resumen en la siguiente tabla. Puede observarse que ni en el grupo de las PHIM ni en el de control murió ni perdió peso ningún ratón, mientras que todos los ratones del grupo de la doxorrubicina, excepto para la dosis más baja, perdieron peso y murieron. Es digno de mención que la dosis más alta de PHIM (20 mg/kg) es mucho más alta que cualquiera de las dosis curativas usadas en cualquiera de los ejemplos clínicos que se han referido anteriormente en esta descripción.

\begin{minipage}[t]{155mm} Toxicidad de las PRIM y de la DOX, administradas por vía i.p. diariamente durante 9 días consecutivos a ratones con leucemia murina P388\end{minipage}
Fármaco	Dosis (mg/kg)	Muerte tóxica	Cambio en el peso corporal (g)
Control	0	0/6	+ 2,3

PHIM	20	0/6	+ 3,3
	10	0/6	+ 3,3
	5	0/6	+ 3,3

DOX	5	6/6	- 2,3
	2,5	6/6	- 0,6
	1,25	0/6	+ 0,5

Dosis - general

Según se mencionó en relación con las anteriores pruebas de toxicidad referidas no se han observado efectos tóxicos a pesar de una sobredosis masiva. Esto no es sólo cierto en el caso de la leucemia murina, sino también en todos los ejemplos clínicos. Tampoco se ha observado ninguna reducción en el efecto terapéutico debido a la sobredosis en ninguno de los ejemplos clínicos. En otras palabras, la dosis límite superior es tan superior a la dosis eficaz que puede usarse prácticamente cualquier dosis (razonable) de forma segura.

La menor dosis eficaz varía un poco dependiendo de la dolencia a tratar, y las dosis actualmente preferibles para las diversas indicaciones son como sigue.

Vías de administración y formulaciones

Las sustancias de la invención pueden usarse de forma segura en la terapia humana y animal en virtud de su insignificante toxicidad.

El régimen terapéutico para las diferentes indicaciones clínicas debe adaptarse al tipo de patología, teniendo en cuenta también, como de costumbre, la vía de administración, la forma en la que se administra el compuesto y la edad, el peso y el estado del sujeto implicado.

Las sustancias de la invención pueden aplicarse o administrarse en forma de disoluciones. Las disoluciones pueden administrarse, por ejemplo, tópicamente (heridas superficiales, piel intacta); mediante instilación (tracto urinario, fístulas); en forma de gotas oculares; como una disolución para enjuagues; mediante inhalación; mediante inyección (por vía intraarticular, intraarterial, intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, intramuscular); y por vía nasal.

Las sustancias de la invención también pueden administrarse en forma de geles, por ejemplo, por vía tópica, y mediante instilación (fístulas, úlceras de decubito).

Cuando están en forma de polvo seco, las sustancias pueden administrarse, por ejemplo, tópicamente, por vía intestinal en cápsulas gastrorresistentes y mediante inhalación.

El polvo seco de las sustancias de la invención está contenido en ampollas, conteniendo cada una bien 15 cu de Mono-Proteína o bien 25 cu de Multi-Proteína. Con objeto de preparar una disolución lista para su uso, el contenido de la ampolla es reconstituido con una disolución estéril de cloruro sódico o con agua estéril, para formar disoluciones que contienen entre 0,10 y 25 cu de Multi-Proteína/Mono-Proteína.

Cuando se usan las sustancias de la invención en forma de gel, la Multi-Proteína o la Mono-Proteína pulverulenta ex temporere se formula con un hidrogel hasta la concentración deseada, para formar un hidrogel listo para su uso. El hidrogel como tal consiste en almidón hidrolizado de bajo peso molecular que contiene >90% de agua.

A partir de nuestros estudios puede concluirse que, usando las anteriores vías de administración, las sustancias de la invención encuentran su camino hacia el sistema sanguíneo, por vía arterial y venosa, y a través del sistema linfático. En la vía de administración tópica hay un contacto directo entre las enzimas y su sustrato.

Formulaciones farmacéuticas Polvo-Ampollas

Se introducen 15 cu de Mono-Proteína o 25 cu de Multi-Proteína en una ampolla convencional usando las técnicas conocidas.

Disolución lista para su uso

El contenido de una ampolla (cotéjese anteriormente) es reconstituido con una disolución estéril de cloruro sódico (disolución salina fisiológica) o con agua estéril hasta una concentración de Multi- o Mono-Proteína de desde 0,10 hasta 25 cu/ml.

Hidrogel

Se prepara un hidrogel consistente en almidón hidrolizado de bajo peso molecular que contiene >90% de agua de una forma conocida per se. Tras la preparación del gel se envasa en porciones, y los envases se esterilizan (en autoclave).

Hidrogel listo para su uso

Se formulan las Multi-Proteína/Mono-Proteína pulverulentas ex temporere con el hidrogel (cotéjese anteriormente) hasta la concentración deseada, por ejemplo, 2,5 ó 5 cu/ml.

Claims

1. Uso de una composición enzimática que comprende enzimas proteolíticas con un peso molecular de desde 18.000 hasta 40.000 determinado mediante SDS-PAGE, y aisladas a partir de krill antártico, en el que la composición muestra ambas actividades de endo- y exo-peptidasa, para la elaboración de una composición eliminadora de la placa dental para su administración oral en ausencia de comida o bebida durante un periodo de dos horas tras su administración, y durante un tiempo suficiente para descomponer dicha placa dental.

2. El uso de la reivindicación 1, en el que la composición comprende de 0,1 a 100, preferiblemente de 1 a 35 mg de enzima por tratamiento.