CN113429458B - 一种抑制二肽基肽酶iv功能的南极磷虾降血糖寡肽及用途 - Google Patents
一种抑制二肽基肽酶iv功能的南极磷虾降血糖寡肽及用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113429458B CN113429458B CN202110885756.9A CN202110885756A CN113429458B CN 113429458 B CN113429458 B CN 113429458B CN 202110885756 A CN202110885756 A CN 202110885756A CN 113429458 B CN113429458 B CN 113429458B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- oligopeptide
- dipeptidyl peptidase
- antarctic krill
- solution
- enzymolysis
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 title claims abstract description 50
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 title claims abstract description 50
- 102000016622 Dipeptidyl Peptidase 4 Human genes 0.000 title claims abstract description 43
- 101000930822 Giardia intestinalis Dipeptidyl-peptidase 4 Proteins 0.000 title claims abstract description 43
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 title claims abstract description 25
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims abstract description 23
- 241000239370 Euphausia superba Species 0.000 title claims description 17
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 29
- 241000239366 Euphausiacea Species 0.000 claims abstract description 27
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 19
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 19
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 claims abstract description 12
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000036541 health Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 5
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 29
- 241000238557 Decapoda Species 0.000 claims description 18
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 13
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 11
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 11
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 claims description 9
- 238000005360 mashing Methods 0.000 claims description 8
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 7
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 claims description 7
- 101710180012 Protease 7 Proteins 0.000 claims description 6
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 claims description 6
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 5
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 5
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 4
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 4
- 108091005658 Basic proteases Proteins 0.000 claims description 3
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 claims description 3
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 claims description 3
- 229940055729 papain Drugs 0.000 claims description 3
- 102000003779 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000194 Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases Proteins 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 238000011278 co-treatment Methods 0.000 claims 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 1
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 abstract description 12
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 7
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 abstract description 7
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 abstract description 6
- 230000000291 postprandial effect Effects 0.000 abstract description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract description 5
- UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N triformin Chemical compound O=COCC(OC=O)COC=O UFTFJSFQGQCHQW-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 abstract description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 abstract description 2
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 abstract description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 108010067722 Dipeptidyl Peptidase 4 Proteins 0.000 abstract 1
- 102100025012 Dipeptidyl peptidase 4 Human genes 0.000 abstract 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 abstract 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 abstract 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 19
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 15
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 239000012154 double-distilled water Substances 0.000 description 5
- 230000002218 hypoglycaemic effect Effects 0.000 description 5
- DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N Glucagon-like peptide 1 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 DTHNMHAUYICORS-KTKZVXAJSA-N 0.000 description 4
- 101800000224 Glucagon-like peptide 1 Proteins 0.000 description 4
- 102100040918 Pro-glucagon Human genes 0.000 description 4
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 4
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 4
- XUFXOAAUWZOOIT-SXARVLRPSA-N (2R,3R,4R,5S,6R)-5-[[(2R,3R,4R,5S,6R)-5-[[(2R,3R,4S,5S,6R)-3,4-dihydroxy-6-methyl-5-[[(1S,4R,5S,6S)-4,5,6-trihydroxy-3-(hydroxymethyl)-1-cyclohex-2-enyl]amino]-2-oxanyl]oxy]-3,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-2-oxanyl]oxy]-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,4-triol Chemical group O([C@H]1O[C@H](CO)[C@H]([C@@H]([C@H]1O)O)O[C@H]1O[C@@H]([C@H]([C@H](O)[C@H]1O)N[C@@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)C(CO)=C1)O)C)[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O XUFXOAAUWZOOIT-SXARVLRPSA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 3
- 208000020832 chronic kidney disease Diseases 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 3
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 3
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 3
- 102000051325 Glucagon Human genes 0.000 description 2
- 108060003199 Glucagon Proteins 0.000 description 2
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N glucagon Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O)C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC=1NC=NC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C1=CC=CC=C1 MASNOZXLGMXCHN-ZLPAWPGGSA-N 0.000 description 2
- 229960004666 glucagon Drugs 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 2
- 101800000068 Antioxidant peptide Proteins 0.000 description 1
- 208000002249 Diabetes Complications Diseases 0.000 description 1
- 206010012655 Diabetic complications Diseases 0.000 description 1
- 101800001586 Ghrelin Proteins 0.000 description 1
- 102400000442 Ghrelin-28 Human genes 0.000 description 1
- 102100023915 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 238000012449 Kunming mouse Methods 0.000 description 1
- UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N Leu-Pro-Gly Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(O)=O UCBPDSYUVAAHCD-UWVGGRQHSA-N 0.000 description 1
- ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N Streptozotocin Natural products O=NN(C)C(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O ZSJLQEPLLKMAKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MQBTXMPQNCGSSZ-OSUNSFLBSA-N Thr-Arg-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)[C@@H](C)O)CCCN=C(N)N MQBTXMPQNCGSSZ-OSUNSFLBSA-N 0.000 description 1
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 229960002632 acarbose Drugs 0.000 description 1
- XUFXOAAUWZOOIT-UHFFFAOYSA-N acarviostatin I01 Natural products OC1C(O)C(NC2C(C(O)C(O)C(CO)=C2)O)C(C)OC1OC(C(C1O)O)C(CO)OC1OC1C(CO)OC(O)C(O)C1O XUFXOAAUWZOOIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 1
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 210000005252 bulbus oculi Anatomy 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000013118 diabetic mouse model Methods 0.000 description 1
- 208000016097 disease of metabolism Diseases 0.000 description 1
- 210000003890 endocrine cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000001508 eye Anatomy 0.000 description 1
- 210000002683 foot Anatomy 0.000 description 1
- 230000030136 gastric emptying Effects 0.000 description 1
- GNKDKYIHGQKHHM-RJKLHVOGSA-N ghrelin Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)CN)COC(=O)CCCCCCC)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1N=CNC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 GNKDKYIHGQKHHM-RJKLHVOGSA-N 0.000 description 1
- 108010089804 glycyl-threonine Proteins 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 210000003405 ileum Anatomy 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N preproglucagon 78-108 Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CC=1N=CNC=1)[C@@H](C)O)[C@@H](C)O)C(C)C)C1=CC=CC=C1 GCYXWQUSHADNBF-AAEALURTSA-N 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N streptozocin Chemical compound O=NN(C)C(=O)N[C@H]1[C@@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O ZSJLQEPLLKMAKR-GKHCUFPYSA-N 0.000 description 1
- 229960001052 streptozocin Drugs 0.000 description 1
- 238000000825 ultraviolet detection Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
- C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/17—Amino acids, peptides or proteins
- A23L33/18—Peptides; Protein hydrolysates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
- A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
- A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/485—Exopeptidases (3.4.11-3.4.19)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
- C12P21/06—Preparation of peptides or proteins produced by the hydrolysis of a peptide bond, e.g. hydrolysate products
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/14—Dipeptidyl-peptidases and tripeptidyl-peptidases (3.4.14)
- C12Y304/14005—Dipeptidyl-peptidase IV (3.4.14.5)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
- A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Obesity (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
本发明公开了一种具有抑制二肽基肽酶IV功能的南极磷虾降血糖寡肽及用途，具体是以南极磷虾为原料，通过超声脱脂、酶解，膜超滤分级和色谱制备得到二肽基肽酶Ⅳ抑制寡肽Leu‑Pro‑Gly‑Thr‑Arg‑Ile‑Pro‑Ala(LPGTRIPA)，ESI‑MS测定分子量为824.0Da。本发明制备的南极磷虾的二肽基肽酶Ⅳ抑制寡肽LPGTRIPA可显著抑制DPP‑Ⅳ活力，显著降低模型小鼠餐后血糖水平，改善小鼠口服葡萄糖糖耐量和麦芽糖糖耐量，降低模型小鼠的甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)的含量，且安全无毒副作用，可应用于治疗或者辅助治疗II型糖尿病的特医食品、保健品和药物。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种源于南极磷虾的二肽基肽酶Ⅳ抑制寡肽及其治疗糖尿病的用途。
背景技术
糖尿病是一种以高血糖为特征的代谢性疾病。近年来，我国糖尿病发病率从1980年的0.6％增长到目前的11.6％。国家卫计委最新公布数据表明，我国糖尿病人群已达1.14亿人，其中II型糖尿病接近占糖尿病人群的90％。此外，糖尿病已成为中国慢性肾病(CKD)的首要因素，约20％-40％的糖尿病患者合并慢性肾病，合并症患者的心肾事件风险显著增加，预期寿命显著降低；除此以外，糖尿病并发症还涉及血管、眼、足等多个器官，致残、致死率高，治疗周期长、开销大，给国家、患者及家庭带来沉重的经济负担，成为严重影响我国国民健康的公共问题之一。
胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是回肠内分泌细胞分泌的一种脑肠肽，可以通过可以刺激胰岛素、抑制升糖素、抑制胃排空和让胰岛细胞重生的方式来降低血糖。但人体自身产生的GLP-1极易被体内的二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)降解，其血浆半衰期不足2分钟。因此，寻找DPP-Ⅳ抑制剂，降低机体分泌的GLP-1的降低速率，维持体内GLP-1的水平，就可以抑制胰高血糖素分泌，从而降低血糖。该方法成为开发治疗糖尿病药物的主攻方向之一。
南极磷虾资源被喻为人类未来的海洋蛋白资源仓库，具有极为重要的开发价值，研究人员利用多种技术指备了系列功能肽，如抗氧化肽、高F值寡肽、降压肽等。例如，吉薇等以南极磷虾为原料制备二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制肽AP、IPA和IPAVF。
发明内容
本发明的目的在于提供一种抑制二肽基肽酶IV功能的南极磷虾降血糖寡肽及用途，其可应用于治疗或者辅助治疗II型糖尿病的特医食品、保健品和药物。为达到上述发明目的，采用如下技术方案：
一种南极磷虾寡肽，其特征在于，所述寡肽的氨基酸序列为Leu-Pro-Gly-Thr-Arg-Ile-Pro-Ala(LPGTRIPA)。
优选地，该寡肽为八肽化合物，分子量为824.0Da。
本发明还公开了一种制备上述寡肽的方法，包括如下步骤：
1)南极磷虾预处理：将南极磷虾捣碎后加入乙酸乙酯溶液，脱脂后离心，收集固体沉淀干燥，即得脱脂虾粉；
2)南极磷虾虾粉的酶解：将脱脂虾粉加入到缓冲液中搅匀，溶液调温至45-55℃，加入蛋白酶A，酶解后调溶液pH加入蛋白酶B，酶解后，溶液冷却至室温，离心收集上清液，即得南极磷虾蛋白酶解液；
3)南极磷虾寡肽寡肽的制备：将南极磷虾蛋白酶解液经超滤膜进行分级，收集分级组分，测定各组分对二肽基肽酶Ⅳ的抑制作用，选择活性最好的组分依次经凝胶柱层析和反相高效液相色谱纯化，即得二肽基肽酶Ⅳ抑制寡肽。
优选地，步骤1)包括：
南极磷虾解冻，去头和皮，虾肉组织捣碎机捣碎，按料液比1g:5-20mL加入乙酸乙酯溶液，110-130W超声20-40min脱脂，重复2-5次，于4℃、6000g离心5-20min，固体沉淀干燥，得脱脂虾粉。
更优选地，步骤1)包括：
南极磷虾解冻，去头和皮，虾肉组织捣碎机捣碎，按料液比1g:10-15mL加入乙酸乙酯溶液，120W超声25-30min脱脂，重复3次，于4℃、6000g离心10-15min，固体沉淀干燥，得脱脂虾粉。
优选地，步骤2)包括：
将上述脱脂虾粉按照料液比1g:10-50mL加入到pH 8-9缓冲液中，搅匀，溶液调温至40-60℃，加入脱脂虾粉重量1.0-2.0％蛋白酶A，酶解2-5h；然后调溶液pH至5-6，加入脱脂虾粉重量1.0-2.0％蛋白酶B，酶解2-5h；酶解结束后，溶液冷却至室温，于12000rmp离心15-30min，收集上清液，即南极磷虾蛋白酶解液。
更优选地，步骤2)包括：
将上述脱脂虾粉按照料液比1g:12-15mL加入到pH 8.5缓冲液中，搅匀，溶液调温至45-55℃，加入脱脂虾粉重量1.0-1.5％蛋白酶A，酶解2-3h；然后调溶液pH至5.5-6.5，加入脱脂虾粉重量1.0-1.5％蛋白酶B，酶解2-3h；酶解结束后，溶液冷却至室温，于12000rmp离心20min，收集上清液，即南极磷虾蛋白酶解液。
优选地，蛋白酶A为碱性蛋白酶，酶活力≥1.0×105U/g；蛋白酶B为木瓜蛋白酶，酶活力≥5.0×105U/g。
优选地，步骤3)包括：
将上述南极磷虾蛋白酶解液经截留分子量为5.0和1.0kDa的超滤膜进行分级，收集分级组分，测定各组分对二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)的抑制作用(用半数抑制浓度IC50表示)，选择活性最好的组分依次经凝胶柱层析和反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化，得到二肽基肽酶Ⅳ(DPP-IV)抑制寡肽。
本发明还公开了上述寡肽在在制备用于抑制DPP-Ⅳ活力和降低血糖的食品、保健品和药物中的用途。
优选地，南极磷虾寡肽对二肽基肽酶Ⅳ的半抑制浓度IC50为0.029mg/mL。
本发明还公开了上述寡肽在制备治疗和/或辅助治疗和/或预防II型糖尿病和/或减轻II型糖尿病并发症的食品中的用途。
本发明还公开了上述寡肽在制备治疗和/或辅助治疗和/或预防II型糖尿病和/或减轻II型糖尿病并发症的保健品中的用途。
本发明还公开了上述寡肽在制备治疗和/或辅助治疗和/或预防II型糖尿病和/或减轻II型糖尿病并发症的药品中的用途。
与现有技术相比，本发明所提供的南极磷虾寡肽Leu-Pro-Gly-Thr-Arg-Ile-Pro-Ala(LPGTRIPA)可显著抑制DPP-Ⅳ活力，显著降低糖尿病小鼠餐后血糖水平，改善小鼠口服葡萄糖糖耐量和麦芽糖糖耐量，降低甘油和胆固醇的含量。LPGTRIPA具有安全无毒副作用、降糖活性显著等优点，可应用于治疗或者辅助治疗II型糖尿病的特医食品、保健品和药物。
附图说明
图1为本发明的超滤组分NJH-1的Sephadex LH-20柱层析色谱图；
图2为本发明的Sephadex LH-20柱层析组分NJH-1C的
Peptide 10/300GL分离色谱图；
图3为本发明的
Peptide 10/300GL制备组分NJHS-3的RP-HPLC色谱图；
图4为Leu-Pro-Gly-Thr-Arg-Ile-Pro-Ala(LPGTRIPA)的结构；
图5为Leu-Pro-Gly-Thr-Arg-Ile-Pro-Ala(LPGTRIPA)的质谱图；
图6为Leu-Pro-Gly-Thr-Arg-Ile-Pro-Ala(LPGTRIPA)对糖尿病小鼠餐后血糖曲线下面积的影响；
图7为Leu-Pro-Gly-Thr-Arg-Ile-Pro-Ala(LPGTRIPA)对糖尿病小鼠口服葡萄糖耐量曲线下面积的影响；
图8为Leu-Pro-Gly-Thr-Arg-Ile-Pro-Ala(LPGTRIPA)对糖尿病小鼠口服麦芽糖耐量曲线下面积的影响。
具体实施方式
这里将详细地对示例性实施例进行说明，以下示例性实施例中所描述的实施方式并不代表与本公开相一致的所有实施方式。相反，它们仅是与如所附权利要求书中所详述的、本公开的一些方面相一致的方法的例子。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，或按照制造厂商所建议的条件。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1
南极磷虾的二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制寡肽的制备
制备工艺流程如下：南极磷虾→超声脱脂→酶解→超滤→色谱制备→DPP-Ⅳ抑制寡肽→降糖功能评价。
具体步骤为：
1)南极磷虾预处理：南极磷虾解冻，去头和皮，虾肉组织捣碎机捣碎，按料液比1g:15mL加入乙酸乙酯溶液，120W超声30min脱脂，重复三次，于4℃、6000g离心15min，固体沉淀干燥，得脱脂虾粉；
2)南极磷虾虾粉的酶解：将上述脱脂虾粉按照料液比1g:15mL加入到pH 8.5缓冲液中，搅匀，溶液调温至50℃，加入脱脂虾粉重量1.2％的碱性蛋白酶，酶解2.5h；然后调溶液pH至6.0，加入脱脂虾粉重量1.5％的木瓜蛋白酶，酶解3h，溶液冷却至室温，于12000rmp离心20min，收集上清液，即南极磷虾蛋白酶解液(NJH)。
3)南极磷虾寡肽的制备：将上述酶解液(NJH)经截留分子量5.0和1.0kDa的超滤膜进行分级，收集分级组分NJH-1(MW≤1.0kDa)、NJH-2(1.0≤MW≤5.0kDa)和NJH-3(5.0≤MW)，测定其对DPP-Ⅳ的抑制作用(见表1)。
表1南极磷虾蛋白酶解物和分离各组分的二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制活性
| IC<sub>50</sub>(mg/mL) | IC<sub>50</sub>(mg/mL) | ||
| NJH | 1.552 | NJH-1C | 0.394 |
| NJH-1 | 0.536 | NJH-1D | 0.994 |
| NJH-2 | 1.723 | NJHS-1 | 1.046 |
| NJH-3 | ＞5.0 | NJHS-2 | 0.465 |
| NJH-1A | 1.681 | NJHS-3 | 0.157 |
| NJH-1B | 0.82 | NJHS-4 | 0.482 |
由表1可知，活性最好的组分为NJH-1，因此选择NJH-1依次经凝胶色谱和反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化，得到高活性DPP-Ⅳ抑制寡肽，利用氨基酸序列分析仪和质谱测定其结构，具体过程为：
①凝胶色谱层析：将上述NJH-1溶于双蒸水配成浓度为50mg/mL的溶液，经过葡聚糖凝胶Sephadex LH-20柱(2.6×80cm)层析分离，用双蒸水进行洗脱，流速0.5mL/min，根据220nm下的吸光度制作凝胶层析色谱图收集各色谱峰NJH-1A-D(见图1)，测定各色谱峰对DPP-Ⅳ的抑制作用(见表1)，由表可知活性最好的组分是NJH-1；将NJH-1C溶于双蒸水，配成浓度为25mg/mL的溶液，经过
Peptide 10/300GL分离，用双蒸水进行洗脱，流速0.8mL/min，根据220nm下色谱图收集各色谱峰NJHS-1-4(见图2)，测定各色谱峰的DPP-Ⅳ抑制作用(IC50)，活性最好的为NJHS-3，因此取凝胶层析酶解物NJHS-3进行后续实验。
②RP-HPLC精制：将上述NJHS-3用双蒸水配成浓度为50μg/mL的溶液，用RP-HPLC进行纯化(进样量10μL；色谱柱Kromasil C-18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相50％乙腈；紫外检测波长220nm，根据220nm下的吸光度曲线收集寡肽NJP1-6(见图3)，测定寡肽对DPP-Ⅳ抑制作用(见表2)。
表2南极磷虾寡肽对二肽基肽酶Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制活性
| IC<sub>50</sub>(mg/mL) | IC<sub>50</sub>(mg/mL) | ||
| NJP1 | 0.062 | NJP4 | 0.267 |
| NJP2 | 0.137 | NJP5 | 0.029 |
| NJP3 | 0.067 | NJP6 | 0.174 |
由表2可知DPP-Ⅳ抑制寡肽NJP5活性最高，因此取NJP5进行后续试验。
试验例1
DPP-Ⅳ抑制寡肽结构检测
收集活性最高的NJP5，采用Edman降解法，用ABI 494蛋白/多肽测序仪测定氨基酸序列为Leu-Pro-Gly-Thr-Arg-Ile-Pro-Ala(LPGTRIPA)(见图4)，ESI-MS测定分子量为824.0Da(见图5)。
试验例2
DPP-Ⅳ抑制寡肽功能评价
一、糖尿病小鼠模型的准备
1.取SPF级昆明小鼠适应性饲养一周，随机分成高脂组和空白组；
2.模型组采用高脂饲料喂养，空白组采用普通饲料喂养，两组均自由饮水；
3.高脂饲养4周后禁食6h后测定小鼠体重以及血糖；
4.给高脂组小鼠腹腔注射100mg/kg的链脲佐菌素后继续采用高脂饲料饲喂；
5.一周后再次测定小鼠体重以及血糖，空腹血糖在11.0mM以上为糖尿病小鼠；
6.取造模成功的糖尿病小鼠，随机分为模型组、阿卡波糖组、LPGTRIPA组，分别给予生理盐水、阿卡波糖、LPGTRIPA，空白组给予生理盐水作为对照；给药共持续四周。
二、DPP-Ⅳ抑制寡肽对小鼠餐后血糖水平的影响
使用血糖仪检测小鼠餐后血糖浓度，具体步骤如下：
每次小鼠给药后再投喂饲料，进食结束后2h尾静脉取血测定血糖浓度并统计血糖变化曲线下面积(见图6)。
由图6可知，LPGTRIPA能显著降低餐后血糖水平。
三、DPP-Ⅳ抑制寡肽对小鼠口服葡萄糖糖耐量和麦芽糖糖耐量的影响
在给药的第三周和第四周对小鼠口服葡萄糖糖耐量和麦芽糖糖耐量进行测试，具体步骤如下：
测定小鼠体重和空腹血糖后给药，给药后1h再给予各组小鼠2.5g/kg的葡萄糖和2.0g/kg的麦芽糖并在30、60、90、120min时尾静脉取血测定血糖浓度并统计血糖变化曲线下面积(见图7、8)。
由图7和8可知，LPGTRIPA能明显改善小鼠口服葡萄糖糖耐量和麦芽糖糖耐量。
四、DPP-Ⅳ抑制寡肽对小鼠血清中甘油(TG)和胆固醇(TC)的含量的影响
取给药后的小鼠，禁食过夜后眼球取血并加入肝素钠溶液保存血液，5000rpm离心10min后取上清并使用甘油三酯(TG)试剂盒(上海碧云天生物工程研究所)和胆固醇(TC)试剂盒(上海碧云天生物工程研究所)按说明书操作检测TG和TC含量，检测结果见表3。
表3南极磷虾寡肽LPGTRIPA对糖尿病小鼠甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)含量的影响
| 组别 | 剂量(mg/kg) | TG(mmol/mL) | TC(mmol/mL) |
| 空白组 | -- | 1.55 | 5.23 |
| 模型组 | -- | 3.08 | 9.75 |
| 阿卡波糖组 | 100 | 2.96 | 9.31 |
| LPGTRIPA | 100 | 2.77 | 9.03 |
由表3可知，LPGTRIPA可以显著降低甘油三酯和胆固醇的含量
以上所述仅为本发明的优选实施例，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 浙江海洋大学
<120> 一种抑制二肽基肽酶 IV 功能的南极磷虾降血糖寡肽及用途
<160> 1
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Leu Pro Gly Thr Arg Ile Pro Ala
1 5
Claims (8)
1.一种南极磷虾寡肽，其特征在于，所述寡肽的氨基酸序列为Leu-Pro-Gly-Thr-Arg-Ile-Pro-Ala。
2.如权利要求1所述的寡肽，其特征在于，所述寡肽的分子量为824.0 Da。
3.如权利要求1所述的寡肽，其特征在于，所述寡肽具有二肽基肽酶Ⅳ抑制活性。
4.一种制备如权利要求1所述寡肽的方法，包括如下步骤：
1）南极磷虾预处理：将南极磷虾捣碎后加入乙酸乙酯溶液，脱脂后离心，收集固体沉淀干燥，即得脱脂虾粉；
2）南极磷虾虾粉的酶解：将脱脂虾粉加入到缓冲液中搅匀，溶液调温至45-55℃，加入蛋白酶A，酶解后调溶液pH加入蛋白酶B，酶解后，溶液冷却至室温，离心收集上清液，即得南极磷虾蛋白酶解液；其中，所述蛋白酶A为碱性蛋白酶，酶活力≥1.0×105 U/g；蛋白酶B为木瓜蛋白酶，酶活力≥5.0×105 U/g；
3）南极磷虾寡肽的制备：将南极磷虾蛋白酶解液经超滤膜进行分级，收集分级组分，测定各组分对二肽基肽酶Ⅳ的抑制作用，选择活性最好的组分依次经凝胶柱层析和反相高效液相色谱纯化，即得二肽基肽酶Ⅳ抑制寡肽。
5.权利要求1所述寡肽在制备用于抑制DPP-Ⅳ活力和降低血糖的药物中的用途。
6.如权利要求5所述用途，其特征在于，所述南极磷虾寡肽对二肽基肽酶Ⅳ的半抑制浓度IC50为0.029mg/mL。
7.权利要求1所述寡肽在制备辅助降血糖的保健品中的用途。
8.权利要求1所述寡肽在制备治疗和/或辅助治疗和/或预防II型糖尿病和/或减轻II型糖尿病并发症的药品中的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110885756.9A CN113429458B (zh) | 2021-08-03 | 2021-08-03 | 一种抑制二肽基肽酶iv功能的南极磷虾降血糖寡肽及用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110885756.9A CN113429458B (zh) | 2021-08-03 | 2021-08-03 | 一种抑制二肽基肽酶iv功能的南极磷虾降血糖寡肽及用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113429458A CN113429458A (zh) | 2021-09-24 |
| CN113429458B true CN113429458B (zh) | 2022-07-01 |
Family
ID=77762703
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110885756.9A Active CN113429458B (zh) | 2021-08-03 | 2021-08-03 | 一种抑制二肽基肽酶iv功能的南极磷虾降血糖寡肽及用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113429458B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114133431B (zh) * | 2021-12-07 | 2023-07-25 | 昆明理工大学 | 一种马乳源小分子肽及其应用 |
| CN114807276B (zh) * | 2022-03-22 | 2024-05-07 | 中国科学院南海海洋研究所 | 一种卵形鲳鲹降血糖肽及其制备方法与应用 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0838213A1 (en) * | 1992-05-22 | 1998-04-29 | Phairson Medical, Inc. | Use of Krill Enzymes for the Treatment of Dental Plaque |
| CN107048416A (zh) * | 2017-03-30 | 2017-08-18 | 大连大学 | 一种具有抗氧化能力的南极磷虾多肽复方制剂及制备方法 |
| CN109762863A (zh) * | 2019-03-11 | 2019-05-17 | 青岛琛蓝医药科技发展有限公司 | 一种南极磷虾活性寡肽的制备方法、该方法制备的南极磷虾活性寡肽及应用 |
| CN110699410A (zh) * | 2019-09-16 | 2020-01-17 | 浙江海洋大学 | 一种南极磷虾小分子肽的制备方法 |
| CN112342260A (zh) * | 2020-11-11 | 2021-02-09 | 上海海洋大学 | 一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法及其产品 |
| CN112679578A (zh) * | 2020-12-28 | 2021-04-20 | 光明乳业股份有限公司 | 具有抗氧化性和dpp-iv抑制活性的多肽混合物及其制备方法 |
-
2021
- 2021-08-03 CN CN202110885756.9A patent/CN113429458B/zh active Active
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0838213A1 (en) * | 1992-05-22 | 1998-04-29 | Phairson Medical, Inc. | Use of Krill Enzymes for the Treatment of Dental Plaque |
| CN107048416A (zh) * | 2017-03-30 | 2017-08-18 | 大连大学 | 一种具有抗氧化能力的南极磷虾多肽复方制剂及制备方法 |
| CN109762863A (zh) * | 2019-03-11 | 2019-05-17 | 青岛琛蓝医药科技发展有限公司 | 一种南极磷虾活性寡肽的制备方法、该方法制备的南极磷虾活性寡肽及应用 |
| CN110699410A (zh) * | 2019-09-16 | 2020-01-17 | 浙江海洋大学 | 一种南极磷虾小分子肽的制备方法 |
| CN112342260A (zh) * | 2020-11-11 | 2021-02-09 | 上海海洋大学 | 一种利用脱脂南极磷虾粉制备降血糖肽的方法及其产品 |
| CN112679578A (zh) * | 2020-12-28 | 2021-04-20 | 光明乳业股份有限公司 | 具有抗氧化性和dpp-iv抑制活性的多肽混合物及其制备方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 南极磷虾蛋白源二肽基肽酶-Ⅳ(DPP-Ⅳ)抑制肽的研究;吉薇;《中国博士学位论文全文数据库（电子期刊） 医药卫生科技辑》;20180115(第2018/01期);第E065-21页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN113429458A (zh) | 2021-09-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113429458B (zh) | 一种抑制二肽基肽酶iv功能的南极磷虾降血糖寡肽及用途 | |
| RU2546520C2 (ru) | Применение ave0010 для производства лекарственного средства для лечения сахарного диабета 2 типа | |
| Elliott et al. | An abnormal insulin in juvenile diabetes mellitus | |
| CN111574586B (zh) | 一种中华冀土鳖虫来源的具有降血脂功能的活性肽及其制备方法和应用 | |
| CN103800301B (zh) | 治疗糖尿病的脉冲给药组合物及其制备方法 | |
| EP2664622A2 (en) | Polypeptides, nucleic acid molecule encoding polypeptides, and uses of polypeptides | |
| CN109939143A (zh) | 一种用于降血糖控制并发症的中药组合物及其制备方法 | |
| Jiang et al. | Curative effects of valsartan alone or combined with alpha-lipoic acid on inflammatory cytokines and renal function in early-stage diabetic kidney disease | |
| CA3022247C (en) | Composition for treating diabetic disease | |
| CN113845567B (zh) | 一种金枪鱼鱼卵二肽基肽酶ⅳ抑制寡肽 | |
| Atma et al. | Dipeptidyl peptidase IV (DPP-IV) inhibitory activity of ultrafiltration and gel filtration fraction of gelatin hydrolyaste derived from bone of fish for antidiabetes | |
| CN116751247A (zh) | 具保肝护肝功效的金枪鱼心脏动脉球抗氧化肽及制备方法和应用 | |
| EP3653639B1 (en) | Polypeptide and composition thereof for treating diseases of metabolic system | |
| CN104784192B (zh) | 蚌肉寡糖在制备降血糖药物中的应用及其制备方法 | |
| EP3329922A1 (en) | Glp-1 secretagogue | |
| CN101054414A (zh) | 鹿茸表皮生长因子(deer egf)提取及其制备方法 | |
| JP2001514230A (ja) | ロビニア・シュードアカシア・レクチンとその使用 | |
| CN100594930C (zh) | 以垂体前叶肾上腺皮质提取物为主要成份的组合药物及其制备方法和用途 | |
| CN113087773A (zh) | 一种具有降血糖和抗氧化功能的牦牛骨肽及其制备方法 | |
| CN101081865B (zh) | 鹿茸促生长释放因子(deer ghrf)提取及其制备方法 | |
| CN113476591B (zh) | 一种乳源多肽衍生物在制备糖尿病防治药物、保健品以及食品添加物中的应用 | |
| CN117304261A (zh) | 一种具有降血糖作用的黄姑鱼鱼鳔寡肽及其制备方法和应用 | |
| CN103751765A (zh) | 重组灵芝免疫调节蛋白（rLZ-8）在制备治疗组织纤维化药物中的应用 | |
| CN110787287B (zh) | 一种鱼鳞胶原蛋白多肽在制备治疗慢性心力衰竭药物中的应用 | |
| CN113730549B (zh) | 乳源活性肽ccl-1s在制备促睡眠产品中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20220916 Address after: 710000 No. B49, Xinda Zhongchuang space, 26th Street, block C, No. 2 Trading Plaza, South China City, international port district, Xi'an, Shaanxi Province Patentee after: Xi'an Huaqi Zhongxin Technology Development Co.,Ltd. Address before: 316002 No.1 Haida South Road, Changzhi Island, Lincheng street, Dinghai District, Zhoushan City, Zhejiang Province Patentee before: Zhejiang Ocean University Effective date of registration: 20220916 Address after: Room 313, Building 3, No. 407, Stadium Road, Gongshu District, Hangzhou City, Zhejiang Province, 310016 Patentee after: Zhejiang All Seasons Biotechnology Co.,Ltd. Address before: 710000 No. B49, Xinda Zhongchuang space, 26th Street, block C, No. 2 Trading Plaza, South China City, international port district, Xi'an, Shaanxi Province Patentee before: Xi'an Huaqi Zhongxin Technology Development Co.,Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right |