KR100290266B1

KR100290266B1 - 크릴 효소의 신규 제약상 용도

Info

Publication number: KR100290266B1
Application number: KR1019940704201A
Authority: KR
Inventors: 란발트 린드블롬; 페어 요한 드
Original assignee: 페어 요한 드; 페어슨 메디칼 에이비
Priority date: 1992-05-22
Filing date: 1993-05-21
Publication date: 2001-05-15
Also published as: SE9201628D0; ZA933598B; DE69333931D1; NO944448D0; ATE311853T1; ATE214610T1; ES2173887T3; JP4012665B2; AU4100093A; CN1090507C; JPH08501068A; DE69333931T2; DE69331739T2; CN1089505A; DE69331739D1; CZ286794A3; CA2306952A1; DK0642351T3; EP0824910A2; HU9403343D0

Abstract

본 발명은 남극 크릴에서 단리하였으며 엔도- 및 엑소-펩티다제 활성을 모두 나타내는 비면역원성 효소 조성물이 사람 및 동물에서 감염증, 염증, 암, HIV/AIDS, 통증, 폴립, 우췌, 치질, 반점, 주름, 박모, 알러지성 소양증, 유착 및 백내장, 녹내장 등의 안 질환과 같이 매우 다양한 질병을 치료하기 위한 의약 및 제약 조성물의 제조에 유용하다는 것을 개시한다.

Description

[발명의 명칭]

크릴 효소의 신규 제약상 용도

[발명의 상세한 설명]

[기술적 분야]

본 발명은 효소 활성을 가지며 다수의 임상 시험에서 각종 아주 다수의 질병에 대한 치료 효과를 제공하는 것으로 입증된 비면역원성 단백질 물질 및 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따르면, 이러한 물질들은 식작용과 유사한 방식으로 기능하는 것으로 믿어지며, 즉, 이들은 특정 환경 중 각각 “정상” 또는 “비정상”이라 간주되는 각종 입자 및 가용성 물질들을 식별할 수 있는 것 같이 보이며, 달리 말해서, 변질 세포들을 인식, 표적 및 파괴할 수 있는 것으로 보인다. 그러나, 본 발명이 본 명세서에 기재된 가설적 작용 양식으로 한정되는 것을 의도하는 것이 아님을 강조한다.

[선행 기술의 설명]

단백질 분해 효소를 의약 용도로서 사용하는 하나의 전통적 방식은 주로 순환 불충분에 의해 유발된 궤양이 있는 연로한 환자에 있어서 괴사 조직의 외과적 절개에 대한 대응책으로서 단백질성 구조로 덮여진 비유합적 상처를 세정하는데 사용하는 것이다. 참고로 미합중국 특허 제4,801,451호 및 동 제4,963,491호는 남극 크릴(Krill, Euphasia superba)로부터 분리된 엑소 및 엔도 펩티다제의 혼합물과 세정을 위한 용도, 즉 제약학적 세정(제4,801,451호) 및 비제약학적 세정(제 4,963,491호) 용도에 대해 기술하고 있다. 기재된 유일한 약제학적 세정은 효소적 괴사조직 제거, 즉, 괴사성 상처의 효소적 세정이다. 비 약제학적 목적을 위한 용도는, 즉 오래된 페인팅 등을 세정하기 위한 세척제로서의 용도이다. 국제 공개 제85/04809호는 남극 크릴로부터의 효소를 소화 촉진제로서 사용하는 것에 대해 기재하고 있고 유럽 특허원 제1-1070115호는 크릴의 혈전 용해제로서의 용도를 기술하고 있다.

남극 크릴로부터 유래하는 효소 및 효소 혼합물이 단리되었으며, 그들의 생물학적 및 생화학적 특성에 관하여 광범위하게 연구되어 왔다. 이 효소들을 분리하는 여러 방법들이 개발되었다: 참조[Anheller J-E., Hellgren L., Karlstam B. and Vincent J. (1989): “Biochemical and biological profile of a new enzyme preparation from Antarctic krill(E. superba) suitable for debridement of ulcerative lesions”, Arch. Dermatol. Res. 281, 105-110: Axelsen N. H, Kroll J. and Weeke B. (1983): “A manual or quantitative immunoelectrophoresis: methods and applications”, Scan. J. Immunol. 2. Suppl. ; Bucht A. and Karlstam B. (1986): “Immunological characterization of three highly purified trypsin-like enzymes from Antarctic kril1(Euphausia superba)”, Biol. Chem. Hoppe-Seyler 367, 366(Suppl. ); Bucht A., Johansson, B. and Karlstam B. (1986): “Separation and identification of proteases from Antarctic krill(Euphausia superba)”, 6th Int. Symp. HPLC Proteins, Peptides and Poly-nucleotides, Baden-Baden, pp. 34; Chen C.S., Yan T.R. and Che H.Y. (1978): “Purification and properties of trypsin-like enzymes and a carboxypeptidase A from Euphausia superba”, J. Food Biochem. 2, 349-366: Hellgren L., Karlstam B., Mohr V. and Vincent J. (1991): “Krill enzymes-a new concept for efficient debridement of necrotic ulcers”, Int. J. Dermatol. 30, 102-103: Karlstam B. : “Crossed immunoelectrophoretic krill analysis of proteins from Antarctic krill (Euphausia superba) with special reference to serine proteinases” (submitted for publication), Kimoto K. K. Kusama S. and Murakami H(1983) : “Purification and characterization of serine proteinases from Euphausia superba”, Agric. Biol. Chem. 47, 529-534; Lowry 0.H., Rosebrough N.J., Farr A.L. and Randal R.J.(1951): “Protein measurement with the Folin phenol reagent”, J. Biol. Chem. 193, 265-275: Moore S. and Stein W. H. (1963): “Chromatographic determination of amino acids by the use of automatic recording equipment”, Methods Enzymol. 6, 819-831; Osnes K. K. and Mohr V. (1985): “On the purification and characterization of three anionic serine-type peptide hydrolases from Antarctic krill, Euphausia superba”, Comp. Biochem. Physiol. 82B, 607-619: and Osnes K.K. and Mohr V. (1986): On the purification and characterization of exopeptidases form Antarctic krill, Euphausia superba:, Comp. Biochem. Physiol. 83B, 445-458].

[발명의 배경]

우리의 면역 시스템은 항상 준비되어 있으며 활성적인 것으로서, 그의 주된 기능은 외부 침입자, 오래되고 낡은 세포, 특정 환경에서 비정상으로 간주되는 변질 세포 및 가용성 물질들에 주의함으로써 우리 몸의 통합성을 보호하고 보존하는 것이다.

식세포, 과립구, 매크로파지 및 NK-세포들은 우리의 “오래된 면역 세포”이며 보호 및 보존을 위한 그들의 작용 양식은 식작용, 즉 예를 들어 세균을 그들 자신안으로 싸넣고 세균을 죽이고 분해하는 용균 효소를 분비하는 작용이다.

림프구, T-세포 및 B-세포는 우리의 “새로운 면역 세포”로서 이들은 보호 및 보존을 위해 각종 작용 양식을 갖는다. 일부 T-세포는 미생물을 죽이기 위해 독소를 방출하고, 다른 T-세포들은 메시지를 전달하고 반응의 강도를 조절하며, B-세포는 항체를 생산한다. 신·구세포는 우리 신체를 최적으로 보호하기 위해 복잡한 양식으로 상호작용한다.

조직이 손상된 경우, 수분 안에 그 부위에 과립구가 나타나며, 이들은 즉시 외래 침입자, 손상된 세포등을 공격하기 시작한다. 수 시간내에 작용중인 과립구로부터의 화학적 신호에 NK-세포, 및 T-세포가 반응하며, 그들이 그 지역으로 들어간다. 손상된 조직을 제거하고 최종적으로 치료하기 위해 복잡한 상호 작용이 시작된다.

활성화된 면역 방어의 신호는 다양한 면역 세포로부터 누출되는 독소와 미생물에 의해 유발되는 염증으로 나타날 수 있으며, 염증은 그것이 낮은 수준으로 유지되는 한 건강함을 나타내는 것이다. 때때로 면역 방어가 과활성화되어 이롭기 보다는 유해함이 더 큰 급성 염증이 일어나며, 이것이 지연되면 염증은 자가 면역증상의 시발점일 수도 있는 만성화 상태로 변하게 된다.

염증이 상기한 상태로 되는 주된 이유는 미생물 감염 때문이며 또한 면역 방어 체계의 수배의 작용에도 불구하고 미생물이 장기간에 걸쳐 매우 유해한 증상으로 이끌수 있는 자가 보호 수단을 유발시키기 때문이다.

미생물이 그 자신을 가장하여 면역 세포에 의해 인식되지 않게 하거나 세포내, 심지어 면역 세포 내로 들어가 거기서 생육, 증식하고 숙주 세포의 기억을 변화시킨다. 일부의 암, AIDS 및 이들 질환의 기회 감염에 의한 심각한 합병증 등은 그러한 미생물의 작용의 예이다.

따라서, 질환의 발생은 면역 체계가 얼마나 잘 기능하며, 얼마나 정상적으로 그의 임무 수행을 위해 균형된 상태로 존재하는가에 달려있다. 미생물 간섭 이외에, 약물은 일시적 및 영구적 면역 방어 억제의 주된 원인이며, 약제학 분야에서 많은 관심이 이 분야에 모아지고 있다.

[발명의 요약]

최적의 약물이란 면역 방어 체계와 조화를 이루어 공생적으로 작용하며 부작용 없이 원인물 및 증상에 작용하는 약물일 것이다. 본 발명은 이러한 특성을 가진 것으로 보이는 신규 제약상 용도 및 신규 제약 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 목적이 달성되는 수단은 남극 크릴(Euphasia superba)로부터 분리된 1종 이상의 단백질 분해 효소의 용도를 포함한다. 상술한 바와 같이, 이러한 효소는 그 자체로 공지되어 있으며 몇가지 그의 제약학적 용도가 제안되어온 바 있다. 상기 크릴 효소를 본 발명의 목적에 사용하였을 때 얻어지는 결과는 예상될 수 없었던 것이며, 얻어진 결과 또한 예측치 못했던 것이다. 이러한 결과가 달성되는 수단은 하기 실시예 및 첨부된 청구 범위에서 설명될 것이다.

[제조 실시예]

전술한 바와 같이, 크릴로부터 단백질 분해 효소를 분리하는 여러가지 과정이 이미 알려져 있으며, 따라서 다음은 본 발명에 따라 사용될 수 있는 효소 제제를 제조하는 가능한 여러 방법 중의 하나일 뿐이다.

냉동시킨 백색 크릴, 유파시아 수퍼바를 해동시키고 균질화시켰다. 증류수를 1:1(w/v)의 비율로 또한 0.02% 나트륨 아지드를 가하고, 4℃에서 6시간 동안 방치시켰다. 수상을 9000rpm에서 40분간 원심분리시킨 육/껍질 조각의 원심 분리액과 함께 모았다. 수상을 에틸 아세테이트를 사용하여 4℃에서 밤새 탈지방화시켰다. 하부 수상을 모아서 수 시간 동안 증발시켰다.

포화 황산 암모늄 60 % 포화도까지 가하였다. 수득된 침전을 9000 rpm에서 40분간 원심 분리하고 0.05 M 인산염 완충액, pH7.4, 0.05 M 염화 나트륨(PBS)에 용해시킨 다음 PBS에 대하여 투석하여 조추출물을 수득하였다.

조 추출물을 세프아크릴 200(Sweden Pharmacia제조) 칼럼에 걸고 280 nm흡광도에서 단백질 분획을 모아서 단백질 분해 활성에 대해 검정하였다. 활성 분획들을 모아 동결 건조시켰다. 합한 활성 분획들은 이하에서 “복합 단백질”, “복합 효소”, PHIM또는 PHIM 106으로 언급될 것이다.

분리된 효소의 분자량 범위는 SDS-PAGE PAA 4/30(Pharmacia, Sweden)에 의해 측정되었다. 최소 6개의 밴드가 18,000-40,000, 특히 24,000-34,000 범위 내에 나타났다.

상기 겔 크로마토 그래피로부터의 한 분획은 엔도- 및 엑소펩티다제 활성을 보였으며, 그 분획을 더욱 분리하였다. 이 분획은 분자량 26,000 내지 32,000의 가능한 단일 효소를 함유하는 것으로 나타났다. 이하에서 이는 “단일 단백질” 또는 “단일 효소”로 언급될 것이다.

조 추출물, 복합 단백질 또는 단일 단백질 중 어느 것도 시험관 내에서 살균효과는 나타내지 않았으나 정균 효과를 나타내었다.

생 새우 중 이 효소의 정상 온도 범위는 -5 내지 -2℃이다. 따라서, 효소의 최적 온도가 중성 pH에서 +55℃이고, 일부 효소가 100℃에서 1시간 동안 안정하다는 것을 발견한 것은 놀라운 일이다.

[PHIM의 여러가지 특성]

제28도에는 상기와 같이 제조한 PHIM의 온도 안정성, 즉, PHIM의 상대 활성(%) [소의 카제인(BioRad Protease Substrate Tablets)을 30 ℃에서 20시간 동안 분해시킨 면적으로 표시되는 활성]을 온도 10, 20, 30, 40, 50, 60 및 70℃에서 시간의 함수로서 나타낸 것이다. 70℃에서 활성은 2시간 후 25% 이하로 떨어진 반면, 이러한 현상은 60℃에서는 적어도 12시간 후에나 일어난다. 40℃에서 25% 이하로의 활성 감소는 11일 후에 일어난 반면, 30℃에서 PHIM의 활성은 11일 후에도 여전히 약 100 %였다.

제29도에는 최적 온도, 즉 온도의 함수로서 나타낸 PHIM의 총 단백질 분해 활성[소의 카제인(BioRad Pretease Substrate Tablets)을 30℃에서 24시간 동안 분해시킨 면적으로서 카제인 당량(mm²)으로 표현]을 보여준다. 최적 활성이 55℃에서 얻어졌다·는 것이 주목할 만하다.

제30도는 PHIM의 PH 안정성, 즉 상이한 pH 값에서 시간의 함수로서의 PHIM의 상대 활성(%) [소의 카제인(BioRad Protease Substrate Tablets)을 30℃에서 20시간 동안 분해시킨 면적으로 표시되는 활성]을 보여준다. 재형성시킨 PHIM을 실온에서 2 내지 18시간 동안 유리시켰다. PH 3.5 및 pH 11에서는 수 시간 후에 빠른 활성의 감소가 나타난반면, pH7.0 및 9.5 사이에서는 18시간 후에도 활성이 여전히 약 70 % 이상이다.

제31도는 PHIM의 최적 PH, 즉, PH의 함수로서 PHIM의 총 단백질 분해 활성 [소의 카제인 (BioRad Protease substrate Tablets)을 PH7,30℃에서 25시간 동안 분해시킨 면적으로서 카제인 당량(mm²)으로 표현]이 나타나 있다.

제32도는 PHIM의 시험관내 용량-활성 곡선, 즉, PHIM의 총 단백질 분해 활성[소의 카제인(BioRad Protease Substrate Tablets)을 PH7, 30℃에서 24시간 동안 분해시킨 면적으로서 카제인 당량(mm²)으로 표현]을 보여준다. 단백질 농도는 문헌[Bradford, M., Anal, Biochem, 72, 248, 1976]의 방법에 따라 측정하였다. 활성은 PHIM의 용량이 증가함에 따라 급속히 증가하여 약 1.5 mg의 PHIM 용량에서 최대에 달하며, 15 mg의 PHIM에서와 대략 같은 값을 계속 유지한다.

[임상 실시예]

본 발명에 따라 수득된 치료 효과, 임상 실시예 있어서 가능한 제약 및 단점을 설명하기 위해, 본 발명에 따른 효소 및 효소 혼합물을 예를 들어 다음에 대하여 임상적으로 시험하였다:

· 감염증

· 염증

· 사멸 및 변질 세포

· 기회적 감염증

· 안질

· 통증

· 암

모든 연구들은 각각의 사항에 대하여 소수의 환자들만 이용한 파일롯 연구로서 설계되었다. 연구 대상을 조사하기 위하여, 임상학적 요소들을 육안으로 검사할 수 있는 주로 국소적인 상처 및 감염 부위를 선택하였다.

대부분의 경우에서 환자 선택에 있어서의 주안점은 “다른 부분은 건강한 환자”로서, 즉, 결과의 보다 좋은 해석을 위해 내재하고 있는 명백한 전신적 인자를 배제하고 주된 임상적 문제 상황에만 음절을 맞출 수 있도록 하였다. 여러 가지의 일반적 상태 및 전신적 인자가 이러한 환자들에 포함되는데, 이는 20세에서 85세에 이르는 환자들이 시험에 참가하였으며 걸을 수 있는 정도의 가벼운 염증으로부터 욕창에 이르는 상태까지 포함되었기 때문이다. 각 증상을 위한 각 시험 군은 일반적 상태 및 내재하는 전신적 인자에 있어서 상당히 균일한 그룹을 이루었다.

[도면의 간단한 설명]

제1도 내지 제4도는 본 발명에 따른 단일- 및 복합 효소로 치료한 경우의 평균적 삼출 정도, 평균적 홍반 정도, 평균적 부종/수종의 정도 및 외과 수술 후 상처 치료시의 평균 통증의 정도를 나타낸 도표이다.

제5도 및 제6도는 통증이 있는 치육 염증을 본 발명에 따른 촉합 효소로 7일동안 치료하는 동안의 통증의 완화 및 염증의 정도 나타낸 도표이다.

제7도 및 제8도는 상기도 바이러스 감염증을 본 발명에 따른 복합 효소를 사용하여 9일간 치료하는 동안의 부종/수종 및 통증의 정도를 나타낸 도표이다.

제9도 및 제10도는 각각 방광 및 요도 감염증을 본 발명에 따른 복합 효소를 4일간 치료하는 동안 평균 배뇨 간격 및 통증 완화 정도를 나타내는 도표이다.

제11도는 경마용 말의 급성 관절염을 본 발명에 따른 복합 효소로 7일에 걸쳐 치료하는 동안 평균적 통증 완화 정도를 나타내는 도표이다.

제12도는 수술후 괴사성 상체에 대한 단일 효소의 분해 효능을 보여주는 도표이다.

제13도는 화상에 대한 복합 효소(PHIM)의 용량-반응 곡선을 보여준다.

제14도는 각종 증상에 있어서 복합 효소(PHIM)에 대한 용량-범위 간격을 보여주고 있다.

제15도는 각종 증상의 치료에 이르는 체중 kg당 복합 효소(PHIM)의 최대 축적량을 보여주는 것이다.

제16도는 각종 증상의 치료에 이르는, 체중 kg당 복합 효소(PHIM)의 최소 축적량을 보여준다.

제17도는 대조군과 비교한, PHIM 106을 단일 주사(IT, IP 및 SC)하는 경우의 종양 치료 효과를 나타낸 막대 그래프이다.

제18도는 제17도와 유사하나, PHIM 106을 피하에 반복 주사한 경우의 결과를 보여주고 있다.

제19도는 대조군과 비교한, PHIM 106을 여러 용량에서 투여하기 위한 종양 부피를 나타낸 막대 그래프이다.

제20도 및 제21도는 두가지 상이한 배율로 확대한 대조 래트의 조직 병리학적 단면도이다.

제22도 및 제23도는 제20도 및 제21도에 상응하는 단면으로서, 본 발명에 따라 치료된 래트에 관한 것이다.

제24도 및 제25도는 치료되지 않은 대조군 래트의 종양부를 나타내는 사진이다.

제26도 및 제27도는 본 발명에 따라 1회 피하 주사로 치료한 래트의 상응부를 나타내는 사진이다.

제28도는 PHIM의 온도 안정성, 즉 상이한 온도에서 시간에 대한 PHIM의 상대활성(%)을 보여준다.

제29도는 PHIM의 최적 온도, 즉, 시간의 함수로서의 총 단백질 분해 활성을 나타낸다.

제30도는 PHIM의 pH 안정성, 즉 상이한 PH 값에서 시간에 대한 상대 활성(%)을 나타낸다.

제31도는 PHIM의 최적 pH, 즉 pH의 함수로서의 총 단백질 분해 활성을 나타낸다.

제32도는 PHIM의 용량-활성 곡선, 즉 PHIM용량의 함수로서의 총 단백질 분해 활성을 나타낸다.

[임상 실시예 1 내지 10 - 감염증]

감염 및 염증은 많은 경우 함께 발생하며, 유사한 임상적 징후, 즉, 홍반, 팽창, 발열, 수종, 삼출, 농, 통증, 괴사성 조직, 및 때에 따라서는 냄새를 나타낸다. 상기한 바와 같이, 이러한 임상적 징후를 추적하고 기록하여 치료의 경과 및 본 발명에 따른 단일-단백질 및 복합-단백질 제제의 효력을 평가하였다.

[실시예 1]

[수술후 외과적 상처]

본 조사에는 총 40명의 환자를 포함시켰으며, 이들을 각 20명 씩 41개의 수술후 복부 (34) 및 경부 (7) 상처를 대표하는 2 개의 군으로 나누었다. 크릴로부터 제조한 3 카제인 단위/ml의 단일-효소와 5 카제인 단위/ml의 복합-효소를 개별적으로 각 군에서 시험하였다. 방부제 또는 항미생물 첨가제를 가하지 않은 동결 건조한 백색 분말을 5 ml 식염수에서 재구성시켰다.

환자는 평균 연령이 52 ± 16세였으며, 28명의 남자 및 12명의 여자로 구성되었다. 제제의 항 미생물 작용은 임상적 효과 및 효율 면에서 아주 양호 내지 탁월하였다. 5일 이내에 모든 감염이 준임상적 수준에 도달했으며, 임상적 감염의 명백한 징후는 모두 사라졌다. 두 가지 상이한 제제 사이에 유의할 만한 차이는 전혀 관찰되지 않았다. 명백하거나 추측되는 부작용은 관찰되지 않았다.

그 결과를 제1도 내지 제4도에 요약하였다.

이 용도에 적합한 용량은 100 cm²당 0.01 내지 100 mg, 바람직하게는 1 내지 25 mg이다.

[실시예 2]

[소형 화상]

본 조사에는 항생제 및 실버디아진 크림에 반응하지 않는 에스. 아우레우스(S. aureus) 및 피. 애루기노사 (P. aeruginosa)에 의해 감염된 소형 전층 화상을 입은 11명의 환자를 포함시켰다. 5 명의 환자는 3 카제인 단위/ml의 단일-효소 수화콜로이드 크림으로, 6명의 환자는 5 카제인 단위/ml의 복합-효소 용액으로 처치하였다. 방부제 또는 항미생물 첨가제를 가하지 않은, 동결 건조한 백색 분말을 사용하였다. 복합 효소 제제: 앰풀 1 개를 5 ml의 식염수에서 재생하여 최종농도 5 카제인 단위/ml의 용액. 단일 효소 제제: 앰풀 1 개를 5 ml의 수화콜로이드 겔과 혼합하여 최종 농도 3 카제인 단위/ml의 겔.

모든 상처에서 치료 5 일 이내에 감염의 모든 징후가 완전히 사라졌으며 이것은 MO-배양으로 확인하였다. 두 가지 제제 모두에 의해 괴사성 조직, 농 및 육아 조직 내의 섬유소성 원섬유가 효과적으로 분해되었으며, 이들 제제 사이에서 효력에 있어 감지할 수 있는 차이는 관찰되지 않았다. 제제에서 부작용은 보이지 않았다.

시험 결과를 표 1에 요약하였다.

[표 1]

[실시예 3]

[통증이 있는 잇몸 감염증]

본 조사에는 급성 또는 만성 잇몸 감염/염증을 가진 22명의 환자를 포함시켰다. 방부제 또는 항미생물 첨가제를 가하지 않은, 동결 건조한 백색 분말을 사용하였다. 복합 효소 제제: 앰플 1 개를 5 ml의 식염수에서 재생하여 최종 농도 5 카제인 단위/ml의 용액.

일일 3회, 아침, 낮 및 저녁에 앰풀 하나를 5 ml의 수돗물에 재생하여 구강을 5분간 헹구었다. 처치 후 2시간 내에는 식음을 허용하지 않았다. 처치는 결과에 상관없이 7 일간 진행하였다.

통증 경감은 처치 후 20분 내지 12시간에 보고되었다. 감염 및 염증은 4 일 이내에 소멸하였으며, 3 주간의 사후관찰 기간 동안 재발되지 않았다. 부작용은 관찰되지 않았다.

그 결과를 제5도 및 제6도에 요약하였다.

이 용도에 적합한 용량은 처치 당 0.1 내지 100 mg, 바람직하게는 1 내지 35 mg이다.

[실시예 4]

[상기도의 바이러스 감염증]

본 조사에는 상기도의 인플루엔자 바이러스 감염 및 이차 세균 감염 (예, 부비강염)이 있는 11명의 환자를 포함시켰다.

기도의 바이러스 감염은 섬모에 손상을 끼치고, 염증성 반응이 홍반, 부종 및 점액 분비 증가와 함께 시작된다. 손상된 섬모는 흡입된 세균을 더 이상 쓸어낼 수 없어 세균성 감염이 흔히 바이러스 감염에 이차적인 합병증이 된다.

바이러스 감염의 다른 전형적인 증상은 전체적인 질병 상태, 강한 피로감, 발열 및 전신 통증이다.

바이러스는 그 생존과 증식을 숙주 세포에 의존하며, 숙주 세포를 손상/사멸 시키지 않고 바이러스를 사멸시키는 것은 어려운 일이다.

복합 효소 제제: 방부제 또는 항미생물 첨가제를 가하지 않은, 동결 건조한 백색 분말을 사용하였다. 앰풀 1 개를 5 ml의 식염수에서 재생하여 최종 농도가 5 카제인 단위/ml이 되게 한다.

약 0.25 ml의 시험 용액을 각 비공에 분무하고, 구강을 약 4.5 ml로 헹구었다. 이 과정을 매일 세 차례씩 반복하고, 임상적 요소들, 홍반, 부종, 점액 분비, 통증 및 부작용을 매일 한 차례씩 기록하였다.

감염의 증상이 모두 사라졌을 때 치료를 중단하였으나, 10 일을 초과하지는 않았다.

8명의 환자는 6일간의 치료 후에, 나머지 3명의 환자는 9일 후에 증상이 사라졌다.

통증 경감은 모든 환자가 경험하였으며, 2시간 내지 2일 이내에 나타났다.

화농성 배출물이 있는 환자의 경우 객담은 3일 이내에 맑아졌다. 홍반 및 부종은 4일 이내에 사라졌다.

그 결과를 제7도 및 제8도에 요약하였다. 부작용은 관찰되지 않았다.

[실시예 5]

[구강의 헤르페스 심플렉스 (Herpes simplex) 감염증]

구강에 헤르페스 심플렉스 포진이 재발한 8명의 환자를 매일 두 차례씩 양치로 치료하였다. 방부제 또는 항미생물 첨가제를 가하지 않은, 동결 건조한 백색분말을 사용하였다. 복합 효소: 앰풀 1 개를 5 ml의 식염수에서 재생하여 최종농도가 5 카제인 단위/ml이 되게 한다.

각 처치에 앞서 앰풀을 제조하고, 구강을 시험 용액으로 5 분간 헹구었다. 각 처치 후 2 시간 이내에는 식음을 허용하지 않았다. 이 과정을 매일 두 차례섹 반복하고, 임상적 요소들, 홍반, 부종, 통증 및 부작용을 매일 한 차례씩 기록하였다.

통증 경감은 최초 처치 후 2 시간 이내에 경험되었으며, 일부 환자의 경우 첫 이틀 동안은 처치 사이에 통증이 다시 있었으나 그 이후에는 다시 일어나지 않았다.

5일 후에는 모든 환자에게서 증상이 사라졌고, 포진은 모두 치료되었다. 부작용은 관찰되지 않았다.

실시예 1 내지 5로부터 세균, 바이러스 및 진균 감염이 매우 유사한 진행 경로를 따르는 것으로 나타나며, 감염 및 염증의 모든 증상들이 3 내지 6일 이내에 사라졌다. 화상의 경우에 보이는 에스. 아우레우스 및 피. 에루기노사와 같은 내약성 세균 균주, 및 헤르페스 심플렉스와 같은 세포내 바이러스조차도 동일한 유형을 따른다. 잇몸 감염 및 상기도의 바이러스 감염 또한 5 내지 7일 동안 일일 총 15 분간 구강을 헹구는 것만으로 효과적으로 치료되었다. 짧은 작용의 유효시간 및 가능한 타액으로부터의 헹굼 효과는 시험 제제 내의 단백질이 세포 또는 표면에 부착되는 능력 및 실제 치료 순간보다 훨씬 더 긴 시간 동안 작용을 수행하는 능력을 가졌다는 가설을 지지해 준다. 눈의 감염증에서 극도의 누액 분비를 가진 환자들에게서도 동일한 관찰이 있었다.

이 용도에 적합한 용량은 처치 당 0.1 내지 100 mg, 바람직하게는 1 내지 35mg이다.

[실시예 6]

[감염된 욕창]

본 조사에는 발꿈치와 하배부에 총 18개의 욕창부를 가진 14명의 장년 환자를 포함시켰다. 방부제 또는 항미생물 첨가제를 가하지 않은, 동결 건조한 백색 분말을 사용하였다. 복합 효소 제제: 앰풀 1 개를 5 ml의 식염수에서 최종 농도 5 카제인 단위/ml의 용액으로 재구성.

궤양을 식염수로 철저히 헹구고 가능한 한 비운 다음 5 ml의 복합 효소 용액을 궤양에 적하하고 반폐쇄성 드레싱으로 덮었다. 7일 동안 매일 두 차례씩 이 과정을 반복하고, 염증, 홍반, 열, 부종, 괴사성 조직, 농, 동통 및 가능한 부작용에 대해 궤양을 조사하였다.

감염은 치료 지속 4 일 이내에 사라겼다. 6개의 상처는 7일 이내에 완전히 회복되었고, 14일 이내에 총 11개의 상처가 회복되었다. 7개의 상처는 환자의 전반적 상태로 인해 회복되지 않았으나, 약간의 진전을 보였다. 부작용은 관찰되지 않았다.

이 용도에 적합한 용량은 100 cm²당 0.1 내지 100 mg, 바람직하게는 1 내지 25mg이다.

[실시예 7]

[누 감염증]

본 조사의 목적은 치루에 대한 크릴로부터 얻어진 단일 단백질 및 복합 단백질 제제의 항미생물 및 분해 효력 및 유용성을 조사하는 것이다. 방부제 또는 항미생물 첨가제를 가하지 않은, 동결 건조한 백색 분말을 사용하였다. 엔도- 및 엑소펩티다제 활성을 모두 가진 단일 단백질: 앰풀 1 개를 5 ml의 수화 겔 중에서 최종 농도 3 카제인 단위/ml로 재구성. 엔도- 및 엑소펩티다제 활성을 모두 가진 복합 단백질: 앰풀 1 개를 5 ml의 수화겔 중에서 최종 농도 5 카제인 단위/ml로 재구성.

누를 멸균된 용액으로 헹구고 가능한 한 비운 다음 단일 단백질 겔 및 복합단백질 겔을 각각 적하하였다. 이 과정을 매일 한 차례씩 반복하고, 환자에게 홍반, 열, 부종, 농, 동통 및 부작용이 있는지 조사하였다.

감염 및 염증의 증상이 모두 사라졌을 때 치료를 중단하였으나 10일을 초과하지는 않았다.

본 조사에는 치루가 있으나 직장까지 진행되지는 않은 2+2명의 환자를 포함시키고, 단일 단백질 및 복합 단백질 겔 제제로 각각 치료하였다.

모두의 통증 경감이 48 시간 이내에 보고되었고, 감염 및 염증의 모든 증상이 4 일 이후에는 사라졌다.

모든 루가 제6일 내지 제9일에는 치유되었으며, 6 개월의 사후 관찰 기간 내에 다시 재발하는 경우는 보고되지 않았다. 부작용은 관찰되지 않았다.

상기 실시예들로부터, 치루 및 욕창과 같이 일반적으로 전문가들이 치료하기 매우 어렵다고 여기는 복잡한 감염이 성공적으로 치료되고 대부분의 경우 각 조사의 시간틀 내에 최종적인 회복에 이른다는 것을 알 수 있다.

[실시예 8]

[눈 감염증]

화농성 안구 감염증이 있는 15명의 환자를 매일 두 차례씩 크릴에서 얻은 복합 효소 제제 (방부제 또는 항미생물 첨가제를 가하지 않은, 동결 건조한 백색 분말, 복합 효소 앰풀 1 개를 25 ml의 주사용수 중에서 최종 농도 1 카제인 단위/ml로 재구성) 점안액으로 처치하였다. 감염된 눈에 아침 및 저녁에 두 방울, 약 0.4 ml의 시험 용액을 점적하였다. 처치 때마다 눈에 홍반, 부종, 농, 누액 분비 및 가능한 부작용이 있는지 조사하였다.

3일간의 치료 이내에 모든 환자에게서 감염이 없어졌다. 눈 주위의 홍반 및 부종은 2 일 이내에 소실되었으며, 과도한 누액 분비 역시 2 일 이내에 멈추었다. 첫 처치 후 즉시 모든 환자가 감염된 눈에서 진정감을 경험하였으며, 눈 주위의 자극 및 민감성이 수분 내에 사라졌다. 부작용은 보고되지 않았다.

상기 실시예로부터, 눈의 감염증이 아주 저농도, 0.4 카제인 단위/처치,가 사용되었음에도 불구하고 치료에 가장 신속하게 반응한다는 것을 알 수 있다.

이 용도에 적합한 용량은 처치 당 0.01 내지 50 mg, 바람직하게는 0.1 내지 5 mg이다.

[실시예 9]

[수술후 상처의 예방 처치]

각 군에 20명 씩 60명의 환자에게, 크릴에서 얻은 단일 효소 및 복합 효소 제제를 수술후 상처에 대한 예방적 항미생물 헹굼 용액으로서 멸균된 0.9 % NaCl 대조 용액과 비교하여 시험하였다.

출혈 없는 수술후 상처를 수술후 6 내지 12 시간에 첫 처치를 하고, 매일 두차례씩 각 용액으로 재드레싱하였다. 상처를 각 용액으로 철저히 헹구고, 반폐쇄성 드레싱 하에 멸균 거즈로 덮었다. 재드레싱 때마다 상처에 감염, 염증, 홍반, 부종, 발열, 괴사성 조직, 섬유소, 농, 출혈, 동통 및 가능한 부작용이 있는지 조사하였다.

상처가 치료, 즉 90 % 이상 상피형성이 되거나, 시험 또는 대조 처치가 실패하면 치료를 중단하였다.

단일 효소 또는 복합 효소 용액으로 치료한 군에서는 수술후 임상적인 감염증이 전혀 일어나지 않았으며, 급성 염증 또는 홍반 역시 이 두 군에서는 어느 환자에게서도 관찰되지 않았다. 18개의 상처가 10일간의 치료 이내에 회복되었다. 부작용은 관찰되지 않았다.

대조군에서는 4명의 환자에게서 심각한 침입 감염이 발생하였고, 또다른 2명의 환자에게는 급성 염증이 생겼다. 홍반, 부종 및 동통은 이 군에서는 흔히 관찰되었다. 14개의 상처가 10일 이내의 치료로 회복되었다.

[실시예 10]

[방광 및 요도 감염증]

본 조사에는 동통성 비뇨기 감염증이 있는 12명의 여성 환자를 포함시켰다. 방부제 또는 항미생물 첨가제를 가하지 않은, 동결 건조한 백색 분말. 복합 효소 제제: 앰풀 6 개를 50 ml의 식염수 중에서 최종 농도 3 카제인 단위/ml 용액으로 재구성.

모든 환자의 첫번째 뇨배출은 매우 탁했으며, 두번째 배출은 맑거나 약간 탁했다.

통증 경감은 즉각즉이었으며, 뇨의 보유 능력의 향상이 2 일간의 치료 후에는 뚜렷해졌다. MO 시료에서는 4일간의 치료 후에는 세균이 없음을 확인하였으며, 4일 후에는 모든 치료를 종료하였다. 부작용은 관찰되지 않았다.

그 결과를 제9도 및 제10도에 요약하였다. 평균 MO상태치를 표 2에 나타내었다.

[표 2]

상기 실시예로부터, 방광 및 요도 감염증이 매일 두 차례의 적하 치료에 매우 양호하게 반응했다는 것을 알 수 있다. 2일간의 치료 후 감염 및 염증의 급성 징후는 사라졌으며, 4일간의 치료 후에는 모든 환자에게서 증상이 사라졌다.

이 용도에 적합한 용량은 처치 당 0.1 내지 200 mg, 바람직하게는 1 내지 50 mg이다.

[임상 실시예 - 염증]

염증은 대부분의 조사에서 일반적인 현상이었으며, 염증의 감소는 모든 처치에서 유사하였다. 3 내지 4일이면 염증이 2차 치료 과정에서 용납할 수 있는 수준으로 감소되었다. 수술후 상처의 예방적 조사 (실시예 9)의 경우에 시험 군에서는 염증이 전혀 발생하지 않았으며, 실시예 3 (급성 또는 만성 잇몸 감염증/염증) 또한 참조할 수 있다.

[실시예 11]

[염증이 생긴 말 관절]

본 조사에는 앞다리 무릎에 염증이 생긴 16마리의 불구 속보마를 포함시켰다. 방부제 또는 항미생물 첨가제를 가하지 않은, 동결 건조한 백색 분말. 복합 효소 제제: 앰풀 1 개를 10 ml의 주사용수 중에서 최종 농도 2.5 카제인 단위/ml용액으로 재구성)

2 ml의 시험 용액은 통증이 있는 관절에 제1, 2, 4 및 7일에 주사하였다. 주사후 말에 즉각적인 부작용 또는 전반적인 상태의 악화가 있는지 관찰하였다. 매일 한 차례씩 임상적 요소들을 관찰하였다.

9 건은 첫 처치 후 30 분 내지 2 시간의 신속한 통증 경감으로, 4 건은 6시간 이내, 그리고 2건은 2차 주사 후 2시간 이내에 반응하였다. 1 건은 3차 주사후에 통증 경감을 보였으며, 이 건은 무릎 전반에 극심한 부종을 보였다.

발열 및 부종은 신속하게 감소하였으며, 시험된 15 건에서 2일 이후에는 염증의 징후가 전혀 관찰되지 않았다. 부작용은 관찰되지 않았다.

결과를 제11도에 요약하였다.

상기 실시예로부터, 경주마의 급성 관절염이 7 일에 걸친 4회의 연속적인 주사 처치를 통해 관절내 주사로 치료될 수 있음을 알 수 있다. 염증의 임상적 징후는 신속히 감소하였으며, 발열 및 부종은 2일 이내에 소실되었다. 치료후 1 주일만에 말들은 가벼운 훈련에 복귀하였다.

[임상 실시예 12 내지 16, 사멸 및 일탈성 세포]

실시예 3, 4, 5 및 10을 참조한다.

[실시예 12]

[괴사성 수술후 상처]

괴사성 상처를 지닌 15명의 환자를 크릴에서 얻은 단일 효소 제제로 치료하였다. 방부제 또는 항미생물 첨가제를 가하지 않은, 동결 건조한 백색 분말. 5 ㎖의 식염수 중에서 재구성. 단일 효소 제제: 3 카제인 단위/ml.

단일 효소를 처치하기에 앞서 통상적인 헹굼 및 상처 정장을 수행하였다. 매일 두 차례씩 앰풀 하나를 5 ml의 식염수에 희석하여 상처를 완전히 덮고 있는 거즈 드레싱 위로 쏟아부었다. 액체가 흘러나온 거즈를 자체접착성 반폐쇄성 드레싱을 사용하여 상처에 고정하였다. 드레싱을 갈 때마다 상처에 홍반, 수종, 출혈, 팽창, 발열, 삼출, 농, 괴사성 조직, 동통, 냄새, 가능한 부작용이 있는지, 그리고 환자의 전반적 상태를 눈으로 검사하였다. 괴사, 섬유소, 농 및 혈괴가 모두 분해되었을 때 치료를 종료했으나, 7일을 초과하지는 않았다.

이 환자군은 상처의 기원에 있어서 균일하지 않았다. 즉, 계획적인 수술, 외상, 화상, 총상 및 당뇨 환자들이었다. 모든 환자가 하루 두 차례씩 종합적으로 치료를 받았다. 시험 제제에서 부작용은 관찰되지 않았다.

결과를 제12도에 요약하였다.

상기에서 나타나듯이, 괴사, 섬유소, 농, 혈괴 및 반점은 일 주일 이내에 효과적으로 분해되었으며, 일부 상처는 일 주일 이내에 회복되었다. 화상, 총상 및 당뇨 환자의 수술후 상처는 초기에는 매우 불량한 효능을 보였으나, 7일간의 본 조사의 말기에는 괴사가 저부로부터 완전히 분해되고 남은 것은 눈꺼풀과 같은 괴사의 최상층 표면 뿐이었고, 상처는 일 주일 이내에 부분적으로 회복되었다.

[실시예 13]

[반흔 형성 및 켈로이드의 분해]

본 조사의 목적은 외과적 교정의 대안으로서 크릴에서 얻은 복합 단백질 제제의 분해 효력 및 유용성을 조사하는 것이다. 방부제 또는 항미생물 첨가제를 가하지 않은, 동결 건조한 백색 분말. 엔도- 및 엑소펩티다제 활성을 모두 가진 복합 단백질: 앰풀 1 개를 5 ml의 주사용수에서 최종 농도 5 카제인 단위/ml로 재구성.

반흔/켈로이드 1 센티미터 당 0.2 ml의 복합 단백질 용액을 하루에 병소 당 최대 부피 1 ml로 주사하였다. 이 과정을 매일 한 차례씩 반복하고 반흔/켈로이드에서 홍반, 부종, 발열, 출혈, 괴사 및 부작용이 있는지 조사하였다.

반흔/켈로이드가 80 % 분해되었을 때 치료를 종료했으나 7일을 초과하지는 않았다.

복합 단백질 제제를 매일 한 차례씩 5 개의 안면 반흔 형성처 및 3 개의 손 및 전박 켈로이드 형성처에 주사하였다.

7일간의 치료 후에, 섬유소성 반흔은 최초 부피의 약 25 %로, 교질 켈로이드는 약 70%로 감소되었다. 이 기간 동안 부작용은 관찰되지 않았다.

상기에서 나타난 바와 같이, 피내 및 피하조직의 반흔 형성 및 켈로이드는 7일간의 조직내 주사 치료 후 각각 75 % 및 30%로 분해되었다. 반흔 및 켈로이드의 미용적 교정에서, 분해는 지나치게 빨라서는 안되며 최적의 결과를 위해서는 60 내지 80 % 이상의 반흔/켈로이드가 제거되어야 하는 경우는 드물다. 피부 및 그 하부 조직은 주름과 같은 다른 결함이 발생하지 않으면 새로운 상황에 서서히 적응해야 한다.

이 용도에 적합한 용량은 처치 당 0.1 내지 50 mg, 바람직하게는 1 내지 10 mg이다.

[실시예 14]

[건선 및 건성 습진]

건선 반점 및 건성 습진 반점은 반폐쇄성 드레싱 하에서 수화겔 시험 제제(단일 효소)로 극히 쉽게 분해되었다. 24시간 이내에 반점이 완전히 사라지고, 민감한 피부, 특히 건선 환자의 피부가 더 이상의 염증, 자극 또는 동통을 보이지 않았다. 이와는 대조적으로, 치료 후에 병소의 피부 부위가 염증을 덜 나타냈으나, 반점이 사라졌을 때 스테로이드 크림의 접촉성이 대부분 향상되었고, 이런 제제로부터 훨씬 양호한 효과를 관찰하였다.

[실시예 15]

[개의 치구]

본 조사의 목적은 개 모델에서 치구에 대한 크릴에서 얻은 복합 단백질 제제의 분해 효력 및 유용성을 조사하는 것이다. 방부제 또는 항미생물 첨가제를 가하지 않은, 동결 건조한 백색 분말. 엔도- 및 엑소펩티다제 활성을 모두 가진 복합 단백질: 앰풀 1 개를 5 ml의 식염수에서 최종 농도 5 카제인 단위/ml로 재구성.

새로이 제조한 앰풀의 내용물을 치아 및 잇몸에 조심스럽게 칠하였다. 혀를 최소 2분간 고정시키고, 식음은 처치 후 2 시간 동안 허락하지 않았다. 모든 치구가 완전히 분해될 때까지 매일 두 차례씩 치료를 반복하였다. 개에 치구의 상태, 타액 분비 및 부작용이 있는지 매일 한 차례씩 조사하였다.

본 보사에는 특수식 및 사육으로 인해 비정상적인 치구 형성을 지닌 8마리의 비글 개를 포함시켰다. 4일 후에는 치구의 모든 징후가 사라졌으며 조사를 종료하였다. 부작용은 관찰되지 않았다.

[실시예 16]

[사람의 치구]

본 조사의 목적은 치구에 대한 크릴에서 얻은 복합 단백질 제제의 분해 효력 및 유용성을 조사하는 것이다. 방부제 또는 항미생물 첨가제를 가하지 않은, 동결 건조한 백색 분말. 엔도- 및 엑소펩티다제 활성을 가진 복합 단백질: 앰풀 1개를 5 ml의 식염수에서 최종 농도 5 카제인 단위/ml로 재구성.

매 치료 때마다 복합 단백질 용액 앰풀 하나를 준비하여 구강을 5분간 헹구었다. 식음은 처치 후 2시간동안 허용하지 않았다. 매일 두차례씩 치료를 반복하고, 치구, 타액분비, 건조성 및 부작용에 대해 환자를 매일 한 차례씩 조사하였다. 조사가 진행되는 동안은 환자에게 치솔질을 허락하지 않았다.

치구의 모든 징후가 사라졌을 때 치료를 종료하였으나, 7일을 초과하지는 않았다.

첫 치료 후 2 시간 만에 모든 환자가 치아에서 부드럽고 매끄러운 느낌을 경험하였으며, 모든 환자가 치구가 완전히 분해된 것으로 믿었다. 눈으로 검사하였을 때 치구의 잔재가 보였다. 3차 치료후 2 시간만에 치구의 모든 징후가 사라졌고, 치료를 종료하였다. 부작용은 관찰되지 않았다.

[실시예 17]

[기회성 감염증]

암, AIDS, 면역 억제 약품, 방사능 조사 등으로 인해 면역 체계가 완전히 억제된 환자들에서 세 가지 유형의 감염이 발생하였다. 병원성 미생물 균주, 및 정상적으로는 비 병원성인 균주가 병원성으로 변할 수도 있으며, 심한 감염증을 일으켜 종국에는 이러한 상황에 놓인 환자의 실제적인 사망원인이 되는 전체적 패혈증에 이르게 한다.

비치유된 수술후 상처에 기회성 감염증이 있는 세 명의 환자, 즉 2명의 자궁암 4기 환자와 1명의 방사능 조사상을 입은 환자를 매일 두 차례씩 배액 드레싱으로 치료하였다. 12, 14 및 17일 후에 상처가 회복되었다.

[임상 실시예 18 및 19. 안 질환]

[실시예 18]

[개의 암흑색 백내장]

본 조사의 목적은 개의 암흑색 백내장에 대한 크릴에서 얻은 복합 단백질 제제의 분해 효력 및 유용성을 조사하는 것이다. 방부제 또는 항미생물 첨가제를 가하지 않은, 동결 건조한 백색 분말. 엔도- 및 엑소펩티다제 활성을 가진 단일 단백질: 앰풀 1 개를 5 ml의 주사용수에서 최종 농도 3 카제인 단위/ml로 재구성. 엔도- 및 엑소펩티다제 활성이 혼합된 복합 단백질: 앰풀 1 개를 5 ml의 주사용수에서 최종 농도 5 카제인 단위/ml로 재구성.

오른쪽 눈을 2 방울, 약 0.4 ml의 복합 단백질로 처치하였다. 이 과정을 매일 한 차례씩 반복하고 개에게 탁도의 변화 및 부작용이 있는지 조사하였다.

육안으로 보아 눈이 맑은 것으로 나타나면 치료를 종료하였다. 왼쪽 눈은 복합 단백질 용액에 대한 것과 동일한 절차에 따라 단일 단백질로 치료하였다.

육안으로 보아 눈이 맑은 것으로 나타나면 치료를 종료하였다.

5일 후에는 오른쪽 눈에서 탁도의 명백한 감소를 알 수 있었고, 10일 후에는 눈이 매우 맑게 보였으며 치료를 종료하였다.

왼쪽 눈에 대해서도 동일한 관찰을 하였으며 치료는 10일 후에 종료하였다. 부작용은 관찰되지 않았다.

[실시예 19]

[백내장]

본 조사의 목적은 암흑색 백내장에 대한 크릴에서 얻은 복합 단백질 제제의 효능 및 유용성을 조사하는 것이다.

2.5 카제인 단위/ml의 엔도- 및 엑소펩티다제 활성이 혼합된 복합 단백질을 3일마다 오른쪽 눈에 점적하였다.

암흑색 백내장으로 인해 한 쪽 눈에 주간/야간시가 있는 80대의 부인을 매 3일 마다 0.4 ml, 1 카제인 단위의 복합 단백질 제제로 치료하였다. 5회의 치료후에 다른 의학적 이유에서 조사를 종료하였으나, 탁도의 현저한 감소가 관찰되며 부인은 발병된 눈에서 향상된 시력을 보고하였다. 자극감, 동통 또는 다른 불편은 치료 도중 또는 치료 후 1 개월 동안 관찰되지 않았다.

[임상 실시예 - 통증]

통증은 최초에는 조직의 기계적인 파열에 의해 일어나고, 외상 후 짧은 시간에 예리한 통증은 소실되어 간다. 약간의 통각은 치유 과정의 초기 전체에 걸쳐 남아 있다. 감염 및 급성 염증은 조직의 팽창, 화학 반응, 생화학적 작용, 괴사성 조직의 형성, 유착 및 반흔 형성으로 인해 심한 통증을 일으킬 수도 있다. 이 통증은 치유 종료 후에도 오랜 시간 동안 잔존할 수 있으며 영구적인 경우조차 있을 수 있다.

통증은 매우 주관적인 요소이며, 임상적으로 차단하는 것이 극히 어렵다. 정의에 의하자면, 통증은 경미한 가려움으로부터 심한 불구성 동통에 이르는 모든 것이다. 심한 통증에 시달리는 환자들은 점차 통증에 익숙해지는 경향이 있으며, 그들의 수용 정도는 지속적으로 상승한다.

통증 완화의 개시는 본 발명에 따른 시험 제제의 가장 신속하고 명백한 효과였다. 통증 완화는 첫 처치 후 20 분 내지 2 시간에 보고되었으며, 대부분의 경우 통증은 2일 후에는 통증이 경미한 수준 또는 단지 민감한 통각 정도로 감소되었다. 용도에는 무관하게, 급성 또는 만성 통증에서 환자들은 동일한 유형의 통증 완화를 보고하였다. 감각 및 촉각은 치료한 부위에서 없어지지 않았다.

치료 전에 전혀 통증을 겪지 않은 환자들은 첫 처치 후, 특히 눈 및 구강의 처치시에 진정 및 완화감을 보고하였다. (상기 실시예들을 참조할 것, 상기 조사들 대부분에서 통증이 하나의 척도임)

방광 감염증 및 잇몸 감염증의 경우, 통감은 환자들의 물리적-사회적 장해에까지 이르렀다. 시험 제제의 신속한 통증 완화 개시로 환자들은 집중력을 회복하였으며 치료 2일 이내에 정상인으로 활동할 수 있었다. (실시예 3 및 10 대조)

통감에 대한 가장 객관적인 계측은 통감이 발병한 다리를 지탱하는 시간에 관련되는 염증이 생긴 말의 관절에서 수행되었다. 그 결과는 사람에 대한 전반적인 결과에 비할 만한 것이었다. (실시예 11 대조)

이 용도에 적합한 용량은 처치 당 0.01 내지 200 mg, 바람직하게는 1 내지 25 mg이다.

[임상 실시예 20 내지 40. 다양한 용도]

[실시예 20]

[위궤양]

경미한 형태의 위궤양에 특징적인 증상 호소를 되풀이하는 40세의 남자를 캡슐 당 5 mg의 PHIM을 함유한 내산성 젤라틴 캡슐제로 치료하였다. 이 사람은 2주일 동안 하루에 캡슐 하나를 물 한잔과 함께 삼키도록 하였다. 약 4일 후에, 위의 증상 호소가 사라졌으며, 변이 적상적이고 통증이 없는 상태로 위는 상당히 완벽하게 작동하였다.

위 궤양 증상 호소를 20년 동안 지속적으로 되풀이해 온 55세의 남성을 상기와 동일한 용량으로 치료하였다. 수일의 치료 후에 이미 증상 호소가 사라졌으며, 환자의 위는 정상적으로 작동하였다.

위궤양은 세균의 침입으로 인해 시작된다고 생각되는 염증 반응이다. 먼저, 장 점막에 미생물이 침입하고, 이어서 상태는 염증으로 변화되며 이것이 곧 궤양으로 전환된다. 이것은 장점막의 세포가 변질되는 상황이 존재함을 뜻한다. 이 상황은 피부 감염 및 상처의 경우와 상당히 유사한 것으로, 피부와 장점막의 차이는 장 점막에 파이어 집선 (Peyer′s patch) 세포 시스템으로 명명된, 고도로 활성적인 B-세포, T-세포 등으로 이루어진 세포 시스템이 존재한다는 것이다. 이 시스템은 사람의 자기면역 질환의 시발점이라고 여겨진다. PHIM이 이 세포 시스템내에서 작동하며 민감한 점막층에서 변질된 세포를 제거하는 능력을 가진다는 사실 때문에 PHIM은 논리상으로이기는 하나 크론씨병 (Crohn′s disease), 궤양성 대장염, 류마티스성 관절염 등과 같은 자기면역 질환에도 작용할 것이다.

이 용도에 적합한 용량은 처치 당 0.5 내지 300 mg, 바람직하게는 1 내지 50 mg이다.

[실시예 21]

[주름진 피부의 치료]

주름진 피부는 대부분 콜라겐을 가교시키는 자유 라디칼에 기인한다. 자유라디칼의 생성은 성장하면서 자유 라디칼의 생성을 가속시키는 세균에게 훌륭한 성장 배지인 노쇠하고 사멸한 세포에 기인한다. PHIM이 사멸된 세포 및 세균을 “포식”하도록 함으로써 주름의 원인을 제거한다.

33세의 여성을 60일 동안 매일 밤 PHIM 106 용액으로 적신 거즈 밴드로 치료하였다. 매일 밤에 사용된 PHIM 106의 총량은 약 0.15 mg이었다. 밴드는 피부에 30 분 동안 밀착되어 있도록 하였다.

한 쪽 눈 아래의 부위만을 치료함으로써 다른 쪽을 대조용으로 이용하였다. 15일간 치료한 후 벌써 피부의 탄력성에 차이를 관찰할 수 있었고, 총 60일간의 치료 후에는 주름살 면에서 눈으로 볼 수 있는 현격한 차이가 있었다. 치료한 피부 부위는 매우 부드럽고 탄력이 있었으며 주름의 수 및 깊이가 치료하지 않은 피부 부위에 피에 상당히 감소하였다.

[실시예 22]

[폴립(Polyps)]

항문에 폴립이 있는 62세의 남성을 치료하였다. 이 남성은 3년간 폴립으로 고생하였으며, 내과의사에게 치료받은 적도 있었다. 환자는 여러 종류의 의약으로 치료받았으나, 전혀 개선되지 않았다.

이 환자를 5 ml의 식염수에 용해시킨 5 mg의 PHIM을 함유한 거즈 밴드로 치료하였다. 치료는 총 5회 반복하였다. 모든 문제가 사라졌으며, 다음 번 내원시에 폴립이 사라진 것이 관찰되었다. 치료 후 8 개월에도 이 남성에게 여전히 병증이 없었다.

이 용도에 적합한 용량은 처치 당 0.5 내지 250 mg, 바람직하게는 1 내지 50 mg이다.

[실시예 23]

[우췌]

목에 우췌가 있는 35세의 남성을 일 주일 동안 PHIM 106 용액을 약 0.1 mg/석고로 함유한 석고 (“한자플라스트(Hansaplast)”)로 치료하였다. 치료는 일 주일 동안 매일 반복하였다. 1주일의 치료후, 우췌는 완전히 사라졌다.

[실시예 24]

[통상의 감기]

연령이 30 내지 63세 사이인 5명의 환자를 첫 감기 증상이 나타난 후 수 시간만에 PHIM 106으로 치료하였다. 치료는 매 4시간마다 비강 분무 및 매 6시간마다 양치로 수행하였다. 비강 분무 치료에 사용된 용량은 일 회에 각 비공에 약 0.1 mg이었으며, 양치 치료에는 약 1.5 mg/양치였다. 양치시에는 용액을 구강 내에 약 2 내지 4분간 머금고 있다가 삼키도록 하였다. 12시간 후에는 통상의 감기증상이 사라지고, 환자는 병증을 느끼지 않았다.

이 용도에 적합한 용량은 처치 당 0.1 내지 100 mg, 바람직하게는 1 내지 25 mg이다.

[실시예 25]

[인플루엔자균]

인플루엔자균(Haemophilus influenza)의 감염에 의한 되풀이되는 부비강염을 지닌 34세의 여성을 치료하였다. 부비강의 압박 및 통증 증상이 발현된 수 시간 후에, 구강을 총 4회에 걸쳐 두 시간마다 2 mg PHIM 106용액으로 3분 동안 세척하고, 약 0.1 mg의 PHIM 106을 각 비공에 분무하였다. 분무 치료는 총 3일간 매 3시간마다 반복하였다. 부비강 감염에 기인한 압박은 첫 치료 후 수 시간만에 이미 사라졌으며, 코로부터의 분비가 강하게 증가하였다. 3일간의 치료 후, 환자는 병증을 느끼지 않았다.

[실시예 26]

[대상포진]

10개월 전부터 안면에 매우 통증이 심한 대상포진 감염이 있는 70세의 남성을 매 3일마다 약 1 내지 2 mg의 PHIM을 함유한 거즈 밴드를 사용하여 국소적으로 치료하였다.

첫 치료 후 이미 소양감이 감소되었으며, 동통 또한 12일 후에는 완전히 사라졌다. 감염으로 인해 환자는 구개의 통증 때문에 저작에 곤란을 겪어왔으나, 12일 후에는 음식을 아무 문제없이 씹을 수 있었다.

[실시예 27]

[음부 포진]

10년 전부터 음부 포진이 있는 62세의 남성을 치료하였다. 병증은 매 4개월마다 규칙적으로 되풀이되었으며, 급성 병증이 있는 동안에는 환자는 성관계를 삼갔다.

이 남성을 밴드 당 약 3 mg의 PHIM 106에 담근 밴드로 처치하였다. 치료는 2일 동안 하루 두 차례씩 반복하였다. 환자의 병증호소는 2차 치료 후에 이미 사라졌다. 치료가 완결된 후 환자는 이후 10 개월 동안 병증을 호소하지 않았다.

이 용도에 적합한 용량은 처치 당 0.01 내지 100 mg, 바람직하게는 1 내지 25 mg이다.

[실시예 28]

[치질]

55세의 남성과 30세의 여성, 두 사람에게 치질 치료를 하였다. 여성은 약 3년 동안 동통과 경미한 출혈이 있는 병증을 지녀왔다. 이 여성을 거즈 밴드에 싼 PHIM 106 건조 분말을 관련 부위 상에 처치하여 치료하였다. 각 용량은 약 5 mg이었다. 총 5회의 치료가 있은후에 병증이 사라졌다. 이 여성은 지금까지 1년 동안 전혀 병증을 느끼지 않고 있다.

남성은 최근 수년간 병증이 나타났다가 사라지곤 하였다. 6 개월 전, 병증이 출혈 및 그로 인한 매우 심한 통증이 있으면서 심각하게 되었다. 이 남성을 약 4 mg의 PHIM 106으로 적신 거즈 밴드로 한 차례 치료하였다. 통증은 약 20분 이내에 사라졌으며, 이 일회의 치료 후에 모든 병증이 사라지고 그 이후 재발하지 않고 있다.

[실시예 29]

[여행성 설사]

설사 및 구토를 동반한 급성 식풍독 (포도상구균 때문으로 추정됨)에 걸린 41세의 남성을 치료하였다. 이 남성이 발병한 지 한 시간 후에 5 mg의 PHIM 106을 구강 내에 3분간 머금고 있다가 서서히 삼키도록 함으로써 처치하였다. 이 과정을 매 2시간 마다 3 차례 반복하였다. 4차 치료 후 위통이 사라졌으며, 구토 및 심한 설사도 완전히 끝났다.

[실시예 30]

[박모증]

55세 및 62세의 두 남성을 치료하였다. 두 사람 모두 지난 10년간 세발증을 겪고 있었다. 치료는 두피 전체를 처치 당 총 PHIM 약 5 mg을 사용하여 PHIM 106용액으로 적심으로써 행하였다. 두피에 습도를 유지하기 위해 30분 동안 두피를 목욕 모자로 덮어 두었다. 치료는 약 3 개월 동안 일 주일에 한 차례씩 반복하였다. 이 치료 기간 후에는 새로운 모발이 자라기 시작하였다.

PHIM 106이 세균의 좋은 영양 기질이 되는 사멸 및 상리된 세포를 효과적으로 분해하는 것이 양호한 결과에 대한 이유로 보인다. 상기 세균은 국소적으로 피부층의 세포가 무엇보다도 TNF, 즉 종양 괴사 인자를 생산하도록 자극하는 독소를 생산하며, 이 TNF는 다량으로 존재하면 모발 성장에 악영향을 미친다. 세균을 포함한 상기 사멸 및 상리 세포를 제거함으로써 미세순환이 모발의 재생에 유리한 영향을 받는다.

[실시예 31]

[좌창]

29세 및 30세인 두 여성의 안면 좌창을 치료하였다. 29세인 여성은 병증이 심각했으나, 30세인 여성은 주로 이마에 중간 정도의 병증을 가지고 있었다.

환자들을 4 내지 6일 동안 약 0.1 mg의 PHIM 106으로 하루에 수 차례씩 치료하였다. 그 효과는 첫 치료 후에 이미 매우 현저하였으며, 수 일간의 치료 후에는 상기 감염이 사라지고 치료가 거의 완전해졌다. 처치 후 1 주일만에 색소흔만이 명백하였다.

이 용도에 적합한 용량은 처치 당 0.01 내지 50 mg, 바람직하게는 1 내지 10 mg이다.

[실시예 32]

[기관지염]

55세의 남성이 비교적 심한 기관지염 병증을 보였다. 병증은 호흡 불편, 휴식없는 100 미터 이상의 장거리 보행의 곤란 및 심한 피로감 외에도 괴롭게 바투 이어지는 기침으로 나타났다.

내과의사들은 기관지염의 원인이 3년 전에 일어났으며, 항생제 치료에도 불구하고 내성이 생긴 미코플라즈마 감염이라고 간주하였다. 이 감염으로 인해 X-선 조사에 의해 확인된 흉막내수가 생성되었다.

환자를 매번 약 4 mg의 PHIM 106을 사용한 양치로 치료하였다. PHIM용액을 구강 내에 약 4분간 머금고 있다가 서서히 삼키도록 하였다. 이 치료를 첫 2주 동안 격일제로 반복하였다. 이 기간 동안 소량의 PHIM 106을 흡입시키기도 하였다.

첫 2주 동안은 개선이 관찰되지 않았으나, 2주간의 치료 이후에는 목 좌측의 림프선이 부풀어 통증을 일으켰다. 이 기간동안치료를 약3회 계속하였다. 약 1.5 주 후에는 림프선에 관한 모든 문제가 사라졌으며, 환자의 기관지염 병증이 감쇠하기 시작하였다. 4일 간격의 양치를 통한 추가적인 3주간의 치료 후에는 기관지염 병증이 완전히 사라졌다.

6. 5 주에 걸친 모든 치료가 끝난 후, 환자는 완전히 회복되었으며, 오래지 않아 5 킬로미터를 문제없이 걸을 수 있었다.

[실시예 33]

[전립선염]

52세의 남성이 20세 이후 매 겨울마다 전립선염 병증을 겪고 있었다. 최근 4년 동안에는 상기 병증이 더 심해져서 극심한 복부 통증이 일어났다. 급성기 때마다 환자는 상이한 종류의 항생제로 치료받았으나 항생제 치료가 끝나자마자 병증이 수주 이내에 재발하였다. 이렇게 되풀이되는 심하지 않은 유형의 전립선염 문제시에는 환자에게 캡슐 당 PHIM 106을 약 5 mg 함유한 내산성 캡슐을 투여하였다. 환자는 총 1주일 동안 매일 2 캡슐을 복용하였다. 모든 증상이 사라졌으며, 환자는 이후 12 개월 동안 단 한번도 재발을 겪지 않았다.

[실시예 34]

[내성 미코플라즈마 균주의 감염]

내성 미코플라즈마 균주를 가진 55세의 남성을 치료하였다. 이 남성은 3년 전에 급성으로 발병하여 상이한 종류의 항생제로 치료받았으나, 용량미달로 인해 내성을 가진 형태가 발생하였다. 감염 수 주 후에 환자는 아주 심한 기침을 동반한 고열을 겪었으며, 그 결과 X-선 검사에서 흉막내수가 관찰되었다.

환자의 병증은 호흡 불편, 휴식없는 100 미터 이상의 장거리 보행의 곤란 및 심한 피로감 외에도 괴롭게 바투 이어지는 기침으로 나타났다.

[실시예 35]

[사람의 유선염]

출산 3일 후에 이미 돌처럼 단단한 최유선과 강한 통증으로 나타나는 매우 심한 울유 병증을 보이는 28세의 여성을 치료하였다. 이러한 병증은 수유 후 반 시간 만에 벌써 나타났다. 이 환자는 스웨덴 웁살라 (Uppsalaa)의 아카데믹 병원(Academic Hospotal)에서 가능한 여러 가지 방법으로 치료받았으나 어느 것도 도움이 되지 않았다.

강한 통증이 시작되면 환자의 유두에 약 0.1 mg PHIM 106 용액을 점적하였다. 약 15분 이내에 통증이 모두 사라졌으며, 약 45분 후에는 단단한 최유선이 부드럽게 되었다.

이 치료를 3개월 이상 동안 매 수유 후에 반복하였다. 이 기간 동안 줄곧 치료가 필요했었는지를 검사하기 위해 때때로 수유 직후부터 통증이 시작되기 전까지 환자의 치료를 미루었다. 이 검사를 행한 경우마다 강한 통증과 단단한 최유선이 재발하였다.

이 용도에 적합한 용량은 처치 당 0.01 내지 25 mg, 바람직하게는 0.1 내지 5 mg이다.

[실시예 36]

[알러지성 소양증]

28세의 여성이 한 쪽 무릎의 윗쪽과 턱 이하에 담마진과 함께 강한 소양감 형태의 알러지성 문제를 가지고 있었다. 발진은 무릎 쪽은 다소 퍼진 융기처럼 보였으나, 턱은 피부와 같은 색의 작은 발진으로 전체가 얼룩져 있었다.

거즈 밴드를 약 2 mg PHIM 106 용액으로 적셨다. 이 거즈를 무릎 윗쪽 부위의 발진 상에 부착하였다. 10분후 거즈 밴드를 제거하였다. 45분 뒤에는 소양감이 가시기 시작하여 1.5 시간 후에는 완전히 사라졌다. 백색 융기 또한 사라졌으며 담마진을 소실되었다.

24시간 뒤에 틱 이하 부위를 치료하였다. 이 부위는 이제 소양감이 강하고, 환자가 긁었기 때문에 전보다 더 작열감을 주고 있었다.

PHIM 용액을 묻힌 거즈를 부착한 직후, 소양감이 증가하였으며 거즈 밴드는 아주 강한 소양감 때문에 7분 후에 제거하였다. 1.5 시간의 기간 동안 소양감이 감쇠하였으며, 1.45 시간 후에는 완전히 사라졌다.

각각 48시간 및 24시간 후에는 무릎 및 안면 부위 모두에서 아무런 문제도 관찰되지 않았다.

[실시예 37]

[건-초의 항유착]

본 조사의 목적은 토끼에서 파열된 아킬레스건의 치유에 대한 크릴에서 얻은 복합 단백질의 항유착 특성을 조사하는 것이다. 토끼 두 마리의 좌측 아킬레스건을 파열시키고, 수술후 좌측 다리의 비고정을 가능하게 하는 스플릿/오버랩(split/overlapping) 기술로 즉시 봉합하였다.

수술후 제5일에 건과 초 사이의 유착이 명백해졌으며, 1 mg (0.25 ml)의 복합 단백질을 제5일에 초에 간질적으로 주사하고, 수술 후 제7일 및 제9일에 이를 반복하였다. 첫 주사 후 24시간 만에 건과 초 사이의 가시적인 유착이 없었으며 건이 다시 초 내를 자유롭게 활주하였다. 수술 후 6주에도 유착은 재발하지 않았다.

수술 8개월 후에 동물을 희생시키고, 건에 유착, 잉여 섬유소 및 콜라겐이 있는지 육안으로 조사하였다. 건 및 초는 별도로 치유되었으며, 유착의 징후는 전혀 관찰되지 않았다. 수술한 좌측 다리 건의 인장력을 수술하지 않은 우측 다리 건과 비교해 보았을 때 인장력의 차이는 검지되지 않았다.

복합 단백질은 건 및 초 각각의 적절한 치유에 필요한 섬유소에는 영향을 미치지 않으면서 잉여 섬유소를 특이적으로 분해한다.

이 용도에 적합한 용량은 처치 당 0.1 내지 100 mg, 바람직하게는 1 내지 10 mg이다.

[실시예 38]

[유착된 손목의 이해(離解)]

본 조사의 목적은 가동성이 감소된 손목의 섬유소성 조직의 분해에 대한 크릴에서 얻은 복합 단백질 제재의 효능을 조사하는 것이다.

팔의 복합 골절 후 경석고를 사용한 오랫 동안의 관절 고정으로 인해 손목이 강직되어 정상 가동성의 25%에 불과한 40대의 여인을 치료하였다.

훈련 프로그램에도 불구하고, 발병된 관절의 가동성은 잘 향상되지 않았으며, 이에 대한 진단은 관절 내 섬유소 피복으로 인한 고정이라는 것이었다.

복합 단백질 2 mg (0.5 ml)을 3일 간격으로 총 4회 관절내 주사하였다. 가동성은 14일에 걸쳐 50 내지 60%까지 계속적으로 향상되었다. 환자는 훈련 4개월 후에는 70내지 80 %까지 가동성을 회복하였다. 부작용은 관찰되지 않았다.

[실시예 39]

[단일 단백질의 항혈전붕괴/항색전증 특성]

본 조사의 목적은 혈전 및 색전의 치료에 대한 크릴에서 얻은 단일 단백질의 효능을 조사하는 것이다.

혈전은 적절한 혈전이 생성될 때까지 인공적으로 주이정맥을 정지시켜 일으켰다. 단일 단백질 0.5 mg (0.2 ml)을 허혈 부위에서 2 cm 떨어진 곳에서 혈전 방향의 정맥 내로 주사하였다. 30분 이내에 혈전이 완전히 용해되었으며 혈액이 자유롭게 통과하였다. 그 부위에 작은 괴사가 발생하였으나 이들은 7일 이내에 흡수제거되었다.

대조용 동물에서는 허혈 부위가 4내지 5일 이내에 완전히 괴사성으로 변했다.

이 용도에 적합한 용량은 처치 당 0.1 내지 200 mg, 바람직하게는 1 내지 10 mg이다.

[실시예 40]

[녹내장의 치료]

본 조사의 목적은 안내압 증가의 치료에 대한 복합 단백질의 효능을 조사하는 것이다.

74세의 남성이 오른쪽 눈에 경미한 통증/불편을 경험하였는데, 내안압의 증가로 고생하는 것으로 밝혀졌다. 검사시, 압력의 증가가 영구적이며 급성 이유에 의한 것이 아니라고 확정되었다.

총 3회에 걸쳐 4일 간격으로 0.1 mg의 복합 단백질을 발병한 눈에 점적하였다. 치료 후 2주일만에 내안압이 정상이 되었으며 치료 후 4개월이 지날 때까지도 압력이 정상이었다.

환자는 첫 치료 후 20분 이내에 즉각적인 통증 완화를 경험하였다.

[실시예 41]

[HIV-오염된 세포주에서의 시험관내 항바이러스 효과]

본 조사는 스웨덴 국립 세균학 연구소 (SBL)에서 수행되었다. 복합 단백질을 AZT 및 포스카르넷 (Foscarnet)과 비고하였다. 모든 제제를 원액 내지 10^-5까지 희석한 농도에서 시험하였다 (복합 단백질의 최고 농도는 5 mg/ml). 동일하고 표준화된 조건 하에서 재제들을 HIV-I에 40 내지 60% 감염된 세포주에 첨가하였다.

저농도의 AZT 및 포스카르넷 경우, 배양물 내 모든 세포가 공격받고 사멸하였다. 이들 배양에서는 사멸 및 붕괴된 세포만이 검출되었다.

복합 단백질은 저 농도에서도 바이러스에 대한 억제 효과를 보여주었다. 이 배양에서는 각 배양의 초기치와 동일한 40 내지 60%의 세포가 공격받아서 표면에서 박리되었다. 이 공격받은 세포는 형태학적 변화를 나타내었으며, 바이러스는 증식이 불가능해졌다. 복합 단백질 군 내의 감염되지 않은 세포는 복합 단백질 및 공격받은 세포에서 방출된 바이러스 어느 쪽으로부터도 공격을 받지 않았다. 즉 이 세포들은 표면에 붙어있었으며 형태학적 변화의 징후를 보이지 않았다.

그러므로, 크릴에서 얻은 복합 단백질이 건강한 세포와, 바이러스 숙주 세포와 같이 변질된 세포를 구별할 수도 있으며, 건강한 세포에는 해를 끼치지 않으면서 변질된 것만을 특이적으로 인지, 포획 및 파괴할 수도 있다는 것을 알 수 있다.

이 용도에 적합한 용량은 처치 당 1 내지 500 mg, 바람직하게는 10 내지 300 mg이다.

[실시예 42]

[무좀 (표피사상균증)]

본 조사의 목적은 족부의 표피사상균증에 대한 복합 단백질의 효능 및 유용성을 조사하는 것이다.

본 조사에는 진균에 감염된 41명의 환자를 포함시키고, 3일 동안은 하루 한 차례씩 30분간 복합 단백질 5 cu/ml로 족욕시키고, 최대 7일 동안은 수화겔 5 cu/ml로 밤새 치료하였다.

많은 환자에게서 통증 완화가 즉각즉이었으며, 다른 사람들에게서는 2일 이내에 통증이 완전히 사라졌다. 개방된 표면상, 균열 내부 및 발톱 아래의 반점은 쉽사리 제거되었으며, 반점, 냄새 및 감염의 모든 징후가 3일 후에는 사라졌다.

[실시예 43]

[습진 감염증]

본 조사의 목적은 지루성 습진 및 건선 감염증에 대한 복합 단백질의 효능 및 유용성을 조사하는 것이다.

40명의 환자를 복합 단백질 수화겔 2.5 cu/ml로 하루 1회 내지 2회 치료하였다.

건성 습진/반점이 있는 환자들은 하루 또는 이틀, 2 내지 4회의 치료 후에 염증 또는 감염의 징후를 전혀 보이지 않았다. 염증/감염은 초기 2 내지 4일 이내에 소멸되었으나 지방형의 지루성 반점은 6 내지 9일 후에 사라졌다.

건선 반점을 가진 환자들은 통상의 스테로이드 크림에서 결과적으로 피부에 대한 스테로이드의 접근을 더 양호하게 해 주는 복합 단백질에 의한 효과적인 반점 제거에 기인한 것으로 보이는 향상된 효능을 경험하였다.

[실시예 44]

[포피 감염]

본 조사의 목적은 영아의 포피 감염에 대한 복합 단백질의 효능 및 유용성을 조사하는 것이다.

각각 4주 및 6주인 두 명의 영아를 매일 주 차례씩 1 cu/ml의 복합 단백질 용액으로 치료하였다. 아침 및 저녁에 부드러운 카테터가 달린 표준 주사기를 사용하여 약 10 ml의 용액으로 포피 하면을 씻어내렸다. 3일 후에 두 명의 영아 모두에게서 증상이 소실되었으며, 2개월의 사후 관찰 기간 내에 감염이 재발하지 않았다.

[실시예 45]

[개의 포피 감염]

본 조사의 목적은 개의 포피 감염에 대한 복합 단백질의 효능 및 유용성을 조사하는 것이다.

여섯 마리의 개를 복합 단백질 용액 1 cu/ml으로 매일 한 차래씩 포피 하면을 씻어내렸다. 10 ml의 복합 단백질 용액을 표준 일회용 주사기로 빨아들였다. 부드러운 실리콘 카테터를 주사기에 부착하고, 카테터를 포피 아래로 삽입하여 그 부위를 서서히 씻어내렸다. 약 1 ml의 용액은 포피 아래에 최소 2분간 머물도록 하였으며, 30분 동안 개가 이 부위를 핥지 못하게 하였다.

화농성 삼출은 모든 경우에 2일 이내에 멈추었으며, 감염 및 염증의 모든 징후는 4일 이내에 사라졌다.

[실시예 46]

[다용도 점안약]

이 실시예의 목적은 임상적 염증이나 감염의 증상은 나타내지 않으나 “피로하고 자극을 느끼는” 눈에 있어서 복합 단백질의 효과 및 유용성을 연구하기 위한 것이었다.

안질, 공기 오염물에 대한 알러지 반응 또는 안 감염증/염증의 기록이 없는 열두명의 환자를 “피로하고 자극을 느끼는” 눈에 대해 특별히 치료하였다. 복합 단백질 용액(0.1 cu/ml) 두 방울을 필요할 때마다 점안하였다.

모든 환자들이 점안 한지 30분 이내에 안압/약한 통증의 완화를 경험하였다. 어느 환자도 감광성, 촛점의 변화 또는 동공의 확장을 경험하지 않았다. 때때로 일시적 건조 현상이 보고되었다. 자극감, 누액 분비 증가 또는 기타 부작용이 관찰되지 않았다.

이 증상에 대한 적절한 용량 범위는 1회 치료시 0.01 내지 50, 바람직하게는 0.1 내지 5 mg이다.

[실시예 47]

[송아지의 농양]

이 실시예의 목적은 송아지의 농양에 있어서 복합 단백질 용액(5 cu/ml)을 사용한 경우 그의 효과 및 유용성을 연구하기 위한 것이었다.

칼슘 용액을 주사한 후에 형성된, 목에 크기 약 25 내지 40 ml의 농양이 있는 두 마리의 송아지를 1일 1회 치료하였다. 10 ml의 복합 단백질 용액을 배출 튜브를 통해 점적시키되, 그 자리에 최소 4시간 동안 유지시킨다. 튜브를 열고 다음 치료시까지 그대로 둔다.

3회 치료 후 배출액은 깨끗했으며, 6회 치료후 튜브를 제거하였다. 12일에 걸친 9회의 치료 후 “포켓”은 완전히 치료되었다.

[실시예 48]

[개의 종기]

이 실시예는 개의 발의 감염된 종기를 치료하는데 있어 본 발명에 따른 복합단백질의 효과 및 유용성을 연구하기 위한 것이었다.

발가락 사이의 통증이 심하며 감염되어 진물과 피가나는 종기가 있는 세 마리의 박서(boxer)를 복합 단백질 용액(5 cu/ml)으로 1일 2회 치료하였다.

거즈에 2 ml의 용액을 흡수시키고, 이를 종기에 붙였다. 거어즈를 고정시키기 위해 발에 붕대를 감고 보호를 위해 고무 장화를 착용시켰다.

1일 후에는 확실한 통증의 완화를 관찰할 수 있었으며, 화농성 삼출/출혈은 2일 이내에 그쳤다. 5 내지 7일간의 치료 후에 단지 약간의 염증만이 관찰되었으며 11 내지 15일 후에는 종기의 모든 증상이 사라지고 개는 자유롭게 거동할 수 있었다.

이 증상에 적절한 용량 범위는 치료당 0.1 내지 100, 바람직하게는 1 내지 25 mg이다.

[각종 증상을 위한 용량]

제13도는 한가지 특별한 적용증, 즉 화상에 있어서의 용량-반응 곡선을 나타낸 것으로서, 상처 부위 100 cm²당 mg으로 나타낸 PHIM의 양의 함수로서 항미생물 활성을 퍼센트 효능으로 나타낸 것이다. 상처 부위 100 cm²당 약 2 mg의 PHIM의 용량에서 거의 100 %효능에 달한다. 제시한 용량-반응 곡선은 다른 적응증을 대표할 수 있을 것이다.

제14도는 PHIM에 대한 용량-범위 간격, 즉, 각종 적용증에 대하여 치료된 환자로서 정의되는 100 %효능에 달하는 사용 용량을 보여주고 있다. 질환이 있는 부위 100 cm²당 mg으로 나타낸 PHIM 용량에 대하여 효능을 플룻팅하였다. 각 적용증에 대한 대략의 용량 범위는 다음과 같다(증상 부위 100 cm²당 PHIM의 mg수):

· 안염 0.5-0.8

· 염증 0.1-15

· 바이러스 감염증 0.1-1

· 진균 감염증 1-15

· 세균 감염증 0.5-25

· 통증 완화 01-25

제15도는 완치, 즉 각 적응용에 대한 임상 치료 종기에 이르는, 체중 kg당 PHIM의 최대 측적량을 보여주고 있다.

각 적용증에 대한 최대 축적량은 다음과 같다.

(체중 kg당 PHIM mg):

· 안염 1

· 국소적 상처 감염증 5

· 요도 감염증 9

· 진균 감염증 5

· 단순 포진 5

· 지방성 피부 반점 18

· 전층 화상 20

· 기회적 감염증 28

제16도는 각 적용증에 대해 치료에 이르는, 체중 kg당 PHIM의 최소 축적량을 나타낸다. 각 적용증에 대한 대략의 최소 측적량은 다음과 같다(체중 kg당 PHIM mg):

· 안염 〈1

· 국소적 상처 감염증 3

· 요도 감염증 7

· 진균 감염증 3

· 단순 포진 4

· 지방성 피부 반점 13

· 전층 화상 13

· 기회적 감염증 15

[임상 실시예 1 내지 51의 결론]

본 발명에 따른 단일 단백질 및 다단백질 제제는 식세포의 작용 양식을 닮은 전범위 작용을 제공한다.

연구된 적용증들로부터는 임상적 제한이나 단점이 나타나지 않았다. 제제는 자연적 면역 방어가 반응하지 않는 경우, 예를 들어, 울혈성 상처, 및 기회적 감염 등에서와 같이 면역 방어가 완전히 억제된 경우의 임상적 증상에 양호한 효능을 나타낸다.

[부작용]

상기 보고된 연구에 포함된 다수의 환자들 중에서 부작용이 나타낸 예는 없었다. 다중 알러지, 해산물 알러지, 민감성 피부, 안건조증, 및 알려진 억제된 과면역 시스템을 가진 환자들이 연구에 포함되었으며 개별적으로 시험한 결과 어떠한 부작용 증상도 나타내지 않았다.

청구된 복합 단백질 및 단일 단백질 제재는 비독성으로 나타났다.

전체적이고 예비적인 임상 연구 결과에 기초하여, 본 발명의 물질 및 조성물은, 면역 시스템이 반응하는 다수의 각종 질병 및 증상, 예를 들어, 녹내장, 트라코마, 암 AIDS/HIV: 류마티스성 관절염 크론(Crohn)의 질병, 다발성 경화증, 궤양성 대장염 등과 같은 자가면역 질병; 콜레라, 나병, 말라리아, 간염, 티프스 열과 같은 질병: 패혈증: 기관의 이식 및 조직 이식(예방) 기술 및 화장품에 치료제로서 유효할 것이다.

[임상 실시예 49 - 암]

이 연구는 다카시 마키타 교수(Prof. Takashi Makita, Yamaguchi University, Japan)에 의해 수행되었다.

[배경]

암은 매우 복합적인 질병이며 많은 상이한 질병들로 구성된다. 종양이 성장함에 따라서 복잡성도 증가하며 1차 종양은 다른 기관 뿐 아니라 림프절에 까지 전이된다. 종양의 증가되는 증상외에, 부분적으로 종양 그 자체에 의해 야기되는 억제된 면역 방어 시스템의 결과로서 일어날 뿐만 아니라 암의 치료 요법으로 오늘날 가장 보편적으로 사용되고 있는 통상의 화학 치료 요법의 결과로서 일어나는 기회적 감염증이 있다.

종래의 화학 치료요법에는 많은 난점이 있다. 주된 문제점은 항암 약물이 암 세포와 정상 조직 세포를 구별하는 특성을 갖지 않는다는 것이다. 이는 가장 심각한 문제로서 화학 요법에 의해 면역 방어에 필요한 백혈구 세포가 파괴되기 때문이다. 결과적으로 암 환자를 최적으로 치료할 수가 없다.

억제된 면역 방어의 결과 종양 크기가 증가할 뿐만 아니라 억제할 수 없는 기회 감염증이 발생된다. 적절한 치료의 제한된 가능성과 기회 감염증의 복합적 요인에 의해 암을 앓고 있는 환자의 삶의 질이 떨어진다. 사람에 대하여 잘 연구된 것은 거의 없으며, 일반적으로 효능은 암의 형태에 따라 보통 약 20내지 25% 정도이다.

일본에서 1차 및 2차 간암을 앓고 있는 환자를 대상으로 수행한 잘 조절된 상II 연구에서 응답률(CR 및 PR)은 아드리아마이신에 대하여 9.5%, 미토마이신C에 대하여 20%였다[참조 : Tahuchi et al., Regional Cancer Treatment(1992) 4 : 161-165].

동물에 있어서는, 대상적 인자를 제외하고는 부작용을 동물 모델에서 연구하는 것은 매우 어렵기 때문에 사람의 치료시 보다 더 많은 용량의 항암 약물을 투여한다는 사실에 기인하여 효능이 보다 높다. 병력학적 데이타를 비교하는 것도 매우 어렵다.

그러나, 시스플라틴(Cisplatin)을 요시다 육종(Yoshida Sarcoma)을 이식시킨 래트에 사용하였으며, 종양 세포를 종양 조직으로부터 제거하여 생존 세포를 연구할 목적으로 배양한 결과, 53%의 세포가 시스플라틴에 의해 사멸되지 않았다[참조 : K. R. Harp et aℓ., Antitumor, Toxic and Biochemical Properties of Cisplatin].

0.5mg/kg이하의 용량의 미토마이신C로 유사한 시험을 수행하였다. 이 경우 비내성 요시다 육종의 효능은 래트의 30일간의 생존으로서 계산했을때 거의 100%였다. 래트에 사용된 0.5mg/kg의 용량은 사람에는 사용할 수 없는데, 이는 환자에 치명적인 골수 억제와 같은 심각한 부작용이 일어나기 때문이다. 요시다 육종은 미토마이신 C에 쉽게 내성으로 되며, 그러한 경우 심지어 0.5mg/kg 이상의 용량일지라도 아무런 효과가 나타나지 않을 것이다.

언급한 용량 뿐 아니라 더 낮은 용량에서의 부작용 프로필에는 체중 감량, 모발 손실, 백혈구 수 감소, 만성 설사 등이 포함된다[참조 : Mitomycin C, Kyowo Hakko Ltd., Tokyo. Japan]. 아드리아마이신, 시스플라틴, 미토마이신C 등의 항암제는 매우 독성이며, 정맥내 및 동맥내 투여에만 사용할 수 있다.

또한, 세균이 항생 물질에 대해 내성을 발전시키는 것과 유사하게 종양세포도 종종 함암제에 대해 내성을 발전시킨다. 내성의 발전은 치료에 있어서 심각한 단점이다.

[시험 과정 및 결과의 요약]

이 연구의 목적은 래트에 있어서 요시다 육종의 치료시 PHIM 106의 효능 및 유용성을 검사하기 위한 것이다.

PHIM을 3가지 상이한 경로, 즉, 복강내(ip), 종양내(it) 및 피하(sc)로, 요시다 육종을 이식시킨 백색 위스타 래트에 주사하였다. PHIM 106은 5 mg/kg으로 복강내, 종양내 및 피하로 1회 주사, 7일간 1일 2회 피하로 1.25 mg/kg 용량으로 반복 주사, 하루 걸러 5 mg/kg을 피하로 총 4회 주사, 및 하루 걸러 12.5 mg/kg을 피하로 총 4회 주사하였다.

이식된 종양의 크기가 10 mm x 10 mm일때, 치료를 시작하였다.

주사를 마친 후 7일째 되는날 래트를 죽이고, 종양의 크기를 측정하여 비치료 대조 래트와 비교하였다.

종양크기의 감소는 종양내 1회 주사하여 치료한 래트에서 46 %, 피하 1회 주사하여 치료한 래트에서 56 %, 및 복강내 주사로 치료한 래트에서 49 %였다.

1일 2회 7일간 1.25 mg/kg 용량으로 피하에 반복 주사한 그룹에서 효능은 72%였다.

하루 걸러 한번씩 5 mg/kg 및 12.5 mg/kg 용량으로 총 4회 피하 주사한 그룹에서 종양 반응은 각각 53 % 및 69 %였다.

12.5 mg/kg을 투여 받은 한 마리 래트에서 종양 성장은 음성이었다. 치료군에서 전이 정도는 대조군과 비교할때 매우 작았다.

치료된 래트는 식음에 있어서 대조 래트와는 대조적으로 정상적 거동을 보였다. 이 기간중 부작용은 관찰되지 않았다.

[PHIM 106에 대한 설명]

상기 설명한 바와 갈이, PHIM 106은 효소 활성을 가지며 해양, 즉 남극 크릴로부터 유래하는 단백질의 약어이다. 본 발명에 따라서, 이러한 단백질에 대한 근본적으로 새로운 특성이 밝혀졌다. 가설은 이러한 단백질이 처음에 아프고 괴사중인 새포 뿐만 아니라 미생물을 인식한 다음, 표적 세포를 효소적 특성에 의해 파괴한다는 것이다. 건강한 조직 세포에서는 아무런 현상도 일어나지 않는다.

첨예한 선택성을 갖게 하는 메카니즘은 연구 중이나, 유효한 가설에 따른 대련 우리 자신의 면역 방어 시스템과 동일한 신호에 단백질이 반응하고 모든 외래 침입자 뿐만 아니라 분리 세포를 공격한다는 것이다.

암 세포는 그들이 세포 표면에 종양 단백질의 단편을 발현시킨 다는 점에서 분리성이며, 면역 방어 시스템에 의해 건강한 조직 세포와 비교할때 분리성인 것으로 인식될 것이다.

PHIM 106은 400명 이상의 환자를 포함한 개방 인체 연구에서 사용시 어떤 종류의 부작용도 나타내지 않았다.

동물에서는 독성이 검출되지 않았다. 래트의 체중 kg당 5 g 이하의 PHIM 용량을 정맥내 주사하였을때, 독성의 증후가 나타나지 않았다.

PHIM 106은 크기 24,000 내지 34,000 달톤의 단백질로 구성되고 해양으로부터 유래하므로 항체의 형성이 기대되었으나. 토끼와 기니아 픽을 면역화 시켰을때 항체 형성을 검출할 수 없었다.

[재료 및 방법]

[연구의 목적]

소규모 비교 연구로서 요시다 육종을 이식한 백색 위스타 래트를 사용하여 투여 경로, 주사 간격, 용량 반응 곡선 및 PHIM 106의 전체적 유효성을 검사하기 위한 것이다.

제2의 목적은 정맥 뿐 아니라 림프관으로부터 종양 치료에 PHIM 106을 사용함으로써 그의 표적 특성을 연구하기 위한 것이다.

[연구의 설계]

PHIM 106을 복강내, 종양내 및 피하로 1회 주사, 하루 걸러 총 4회 피하로 반복 주사하는 비교 연구를 수행하였다. 치료는 이식된 종양 세포의 크기가 약 10mm x 10mm인 경우에 시작하였다.

치료가 끝난 후 7일째 되는 날에 래트를 죽이고, 종양의 크기를 측정하였다. 조직 병리학적 검사를 수행하였다.

[PHIM 106의 제형]

보존제나 항미생물 첨가제를 가하지 않은 동결 건조시킨 백색 분말.

주사액으로 만들기 위해 백색 분말을 생리 식염수중에 최종 농도 5 mg/ml로 재구성시킨다.

[과정]

백색 위스타 래트의 등에 1 x 10⁴요시다 육종을 피하 이식시켰다. 래트의 치료는 육종이 10 mm x 10 mm로 자랐을때 시작하였다.

PHIM 106을 3가지 상이한 경로, 즉, 복강내, 종양내 및 피부의 건강한 부분에 종양으로 부터 약 3 내지 5 cm의 거리를 두어 피하로 주사하였다.

동물들을 다음의 7개 군으로 나누었다.

제1군 : 치료하지 않은 11마리의 래트로 구성된 대조군.

제2군 : 종양의 중심으로 체중 kg당 5 mg의 PHIM을 1회 주사하여 치료한 5마리의 래트.

제3군 : 5 mg PHIM 106/kg을 피하에 1회 주사하여 치료한 1마리의 래트.

제4군 : 5 mg PHIM 106/kg의 용량으로 1회 복강내 주사하여 치료한 1마리의 래트.

제5군 : 1일 2회 1.25 mg PHIM 106/kg의 용량으로 7일동안 피하 주사로 치료한 3마리의 래트.

제6군 : 하루 걸러 5 mg PHIM 106/kg용량으로 총 4회 피하 주사하여 치료한 5마리의 래트.

제7군 : 하루 걸러 12.5 mg PHIM 106/kg의 용량으로 총 4회 피하 주사하여 치료한 5마리의 래트.

치료가 종결된지 7일째 되는 날에 래트를 죽이고 종양의 부피를 측정하였다. 대조군의 래트도 치료군과 동일한 날에 죽였다.

모든 군의 종양에 대해 조직 병리학적 검사를 수행하였다.

채혈하여 이후의 검사를 위해 보관하였다.

[결과]

5 mg PHIM 106/kg용량으로 종양내 1회 주사하여 치료한 제 2군에서, 대조군과 비교할때 종양 감소율은 46 %였다.

5 mg PHIM 106/kg용량으로 피하에 1회 주사한 제 3군에서 종양 감소율은 56%였으며, 제 2군 및 3군에서와 같이 치료하되 복강내 주사한 제4군에서 종양 감소율은 49 %였다.

5 mg PHIM 106/kg 및 12.5 mg PHIM 106/kg의 반복적 용량으로 피하내 주사한 제6군 및 제7군에서 종양의 감소율은 각각 53 % 및 69 %였다.

가장 좋은 효능은 7일 동안 반복적 용량 투여로 치료한 제5군에서 나타났다. 대조군과 비교한 크기 감소율은 72 %였다. 제17, 18도 및 제19도 참조.

치료 받은 모둔 군에서 종양 크기의 50 % 이상이 대조군의 종양과 비교할 때 매우 괴사성이었다. * 사진 1 및 2 참조.

PHIM 106을 투여한지 24시간 이내에, 종양은 괴사하는 것으로 나타났다.

치료 중 또는 이후에 부작용은 관찰되지 않았다.

PHIM을 주사한 지 24시간 이내에, 종양은 괴사하는 것 같았다. 종양의 괴사부의 크기는 증가하였으며 종양은 대조 래트와 비교할 때 보다 작고 보다 선명하였다. 사진 3 및 4 참조.

대조군과 치료군에 있어서 체중 차이가 관찰되었다. 대조군 래트의 체증 증가는 치료군보다 더 많았다.

치료 중 및 치료 후에 부작용은 관찰되지 않았다.

이 적용증의 적절한 용량 범위는 치료당 0.1 내지 500, 바람직하게는 1 내지 300 mg이다.

[결론]

래트의 수는 제한적이었으며, 따라서 통계적 계산은 수행될 수 없었다. 그러나, 본 연구의 목적이 투여 횟수, 제중 kg당 PHIM 106의 투여량과 관련된 그 자체로서의 효능, 및 다른 투여 경로로 사용될 때 PHIM 106이 종양 세포를 공격하는 양상을 알기 위한 것이었다.

전체적인 면에서의 유용성의 확인 또한 본 연구의 매우 중요한 목적이었다.

암세포는 면역학적 관점에서 분리성이므로, PHIM 106은, 변질 세포의 인식 및 표적화 특성에 관한 상기 가설에 따라, 투여 방식에 관계 없이 종양 세포를 공격하고 파괴한다. 결과적으로 나타난 것은 종양 효능이 강력하며, 효능의 정도는 복강내, 종양내 또는 피하 투여시 비슷하다는 것이다.

PMIM 106의 반복 투여는 단일 투여 보다 효과적이며, 이는 요시다 육종의 성장 속도가 매우 빠르다는 사실에 비추어 예견된 바와 같다.

종양 크기 감소율은 5 mg PHIM 106/kg용량으로 투여한 군 보다는 12.5 mg PHIM 106/kg 용량으로 투여한 군에서 보다 크다.

한편 7일 동안 매일 총 17.5 Hg PHIM 106/kg의 용량으로 치료받은 래트들은 하루 걸러 총 4회, 총 50 mg PHIM 106/kg용량으로 치료받은 래트들과 거의 같은 효능을 보였다.

요시다 육종은 매우 악성이며 빨리 자란다. 따라서, 매일 치료하는 것이 더 좋은 결과를 나타내리라는 것이 예측될 수 있었다. 치료군의 모든 래트들은 양호한 상태였으며 약 24 g의 체중 증가를 보인 대조군 래트와 비교하여 약 10 g의 체중 증가를 보였다. 이러한 현상에 대한 유일한 설명은 매우 큰 종양 중량일 것이다. 치료군의 종양은 위 등으로 번져나간 대조군의 종양과 비교하여 매우 현저하고 딱딱하였다. 이는 대조군에서 종양이 넓은 면적으로 파졌기 때문에 종양의 전체 크기를 측정하는데 있어 문제점이 있음을 의미한다. 12.5 mg PHIM 106/kg 용량으로 치료한 군중 한마리의 래트에서 종양 성장이 전혀 일어나지 않았다는 것은 재미있는 일이다. 종양은 개시일의 크기에 비해 약 15 % 정도 감소하였다.

대조군 및 시험군 종양의 조직 병리학적 검사는 PHIM 106으로 치료된 래트는 비치료된 래트와 비교할 때 그 종양이 매우 괴사 상태에 있음을 보여준다.

3가지 다른 경로로 투여하였을 때 PHIM 106이 활성이라는 사실은 PHIM 106이 정맥 및 동맥 모두로부터 종양을 표적화하고 있음을 보여준다. 피하 투여는 특히 흥미있는데, 이는 PHIM 106이 림프관에 의해 흡수되어 림프 경로를 통하여 부분적으로 종양에 도달할 것이기 때문이다. PHIM 106의 림프계 흡수는 부분적으로는 그러한 식으로 번지는 전이를 파괴한다는 점에서 매우 중요하다. 전이 감소의 증가는 대조군과 비교한 치료군에서 또한 볼 수 있다. 대조군의 폐, 장 및 간에서 다량의 전이를 관찰할 수 있었다. 치료군에서는 95 % 이상의 래트에서 전이는 관찰되지 않았다. 나머지 5 %의 래트에서는 장관 부위에서 소량의 전이된 종양이 나타났다.

상이한 군들에서 동물의 수는 작은 편일지라도, 모든 래트가 치료에 반응하였음을 강조하고자 한다. 이 약물을 투여 방법에 대한 어떠한 제한없이 암의 치료에 사용할 수 있는 가능성은 관찰되는 부작용이 얼음과 더불어 PHIM 106을 그의 천연 표적 특성에 의하여 항암 약물의 새 부류로서 인정케할 것이다.

개방된 파일롯 연구에서 관찰된 PHIM 106의 항미생물 효과는 기회 감염증으로 고통받고 있는 암 환자의 치료에 또다른 중요성을 부가한다. 요시다 육종은 사람에서 알려진 종양보다 훨씬 악성이다.

[실시예 50]

[제대 치료]

4일된 남아를 괴사성 조직을 제거하고 발생될 수 있는 감염증을 피하기 위해 PHIM 106으로 치료하였다.

치료에는 거어즈 조각당 약 2 mg의 PHIM이 되도록 PHIM 106용액으로 포화시킨 거어즈를 사용하였다. 거어즈가 건강한 탯줄 및 약간 감염된 부분과 괴사 부분 탯줄을 덮도록 탯줄 주위를 거어즈를 감았다. 밴드는 12시간당 4회 교환하였다. 약 12시간 후, PHIM106은 괴사 부분과 감염 부분을 제거한 반면, 탯줄의 건강한 부분은 아무런 영향도 받지 않았다. 탯줄상의 건강한 피부의 분해가 관찰되지 않았을 뿐더러, 어떤 감염이나 피부 자극 또는 염증도 관찰되지 않았다. 건강한 태를 4회 더 치료하였다.

생후 6일 째 되는 날 아기를 병원에서 검사하였을 때 아기의 태는 같은 검사를 받은 다른 아기의 대부분과는 대조적으로 아무런 감염증이 없이 매우 양호하여 의사도 놀라워 했다.

이러한 경우 적절한 용량 범위는 치료당 0.01 내지 100, 바람직하게는 1 내지 25 mg이다.

[실시예 51]

[감염된 상처부]

음낭 헤르니아 수술을 받은 3개월된 남아가 수술후 10일 째 되었을 때 수술상처 부위에 화농 형태의 심각한 증상을 보였다. 수술 상처 부위는 실을 제거한 후 균열하려 하였다.

남아를 PHIM 106으로 적신 드레싱(치료당 4 mg PHIM 106)으로 3일 동안 치료하였다. 3일간 치료한 후 감염증은 완전히 사라지고 상처는 완치되었다.

전체 수술 상처는 길이가 약 15 cm였다.

이러한 적용증의 적절한 용량은 치료당 0.01 내지 100, 바람직하게는 1 내지 25 mg이다.

[마우스에 대한 독성]

상응하는 효과량의 약 100 배에 이르는 과용량을 투여하였음에도 불구하고, 사람 및 동물에 대한 PHIM의 독성을 입증하는 것은 가능하지 않았다. p388 쥐의 백혈병(화학적으로 유도된 암) 조직을 피하 이식한 마우스에 대하여 PHIM의 독성을 시험하고, 공지된 항암 약물인 독소루비신(doxorubicin, DOX)와 비고하였다. 결과는 다음 표에 요약되어 있다. PHIM 군 또는 대조군의 마우스는 하나도 죽거나 체중 감량이 일어나지 않는 반면, 최하량으로 투여된 경우를 제외한 독소루비 신군의 모든 마우스가 체중 감량을 일으키며 죽었다. PHIM 최고 용량(20 mg/kg)은 본 명세서에서 전술한 임상 실시예 중 어느 것에 사용된 치료 용량보다 훨씬 높은 것이었음을 언급하고자 한다.

[용량-일반]

상기 독성 시험에 나타난 바와 같이, 매우 과용량으로 사용하였음에도 불구하고 독성 효과는 관찰되지 않았다. 이는 쥐 백혈병의 경우에 그러했을 뿐만 아니라 모든 임상적 예에서 그러하였다. 임상적 실시예의 어느 것에서도 과용량에 기인한 치료 효과의 감소는 나타나지 않았다. 다시 말해서, 용량 상한이 효과량에 비해 아주 높으므로 실제적으로 어느(적절한) 투여량일지라도 안전하게 사용될 수 있다.

가장 낮은 효과량은 치료할 증상에 따라 어느 정도 변할 것이나, 현재 각 적용증에 대한 바람직한 용량은 다음과 같다.

[투여 경로 및 제형]

본 발명의 물질은 그 독성을 무시할만 하므로 사람 및 동물의 치료에 안전하게 사용될 수 있다.

상이한 임상적 증상을 위한 치료 요법이 대채로 투여 경로, 화합물이 투여되는 형태, 연령, 체중 및 환자의 상태 등을 고려한 치료 타입에 적용되어야만 한다.

본 발명의 물질은 용액의 형태로 사용되거나 투여될 수 있다. 용액은 예를 들어, 국소적으로(표면 상처, 손상되지 않은 피부), 점적식으로(뇨관, 누관), 점안약 형태로, 세정액으로, 흡입액으로, 주사액으로(관절 사이, 동맥, 정맥내, 복강내, 피하 및 근육내로), 및 비내로 투여될 수 있다.

본 발명의 물질은 또한 겔의 형태로, 예를 들어, 국소적으로 및 점적에 의해(누관, 욕창 부위에) 투여할 수 있다.

건조 분말 형태일 경우, 물질은 예를 들어, 국소적으로, 내산성 캡슐에 싸인채로 장내로, 또한 흡입에 의해 부여될 수 있다.

본 발명의 물질의 건조 분말은 앰플내에 함유되며, 각 앰플은 50 cu의 단일 단백질 또는 25 cu의 복합 단백질을 함유할 수 있다. 즉용 용액재를 제조하기 위해서는 하나의 앰플 중의 내용물을 생리적 염화 나트륨 용액 또는 증류수로 재구성하여 0.10 내지 25 cu의 복합 단백질/단일 단백질을 함유하는 용액을 형성시킬 수 있다.

본 발명의 물질을 겔의 형태로 사용할 경우, 분말화된 복합 단백질 또는 단일 단백질을 즉석에서 하이드로겔과 목적하는 농도로 섞어서 즉용 하이드로겔을 형성시킨다. 하이드로겔은 그 자체로서 90 % 이상의 물을 함유하는 저분자량 가수분해된 전분으로 구성된다.

본 연구로부터, 상기 투여 경로를 사용함으로써 본 발명의 물질이 혈관계, 동맥 및 정맥을 통해 또한 림프계를 통해 운반될 수 있다고 결론지을 수 있다. 국소적 투여 경로의 경우, 효소와 그의 기질간의 직접적인 접촉이 있다.

[약제학적 제형]

[분말-앰플]

15 cu의 단일 단백질 또는 25 cu의 복합 단백질을 공지된 기술로 종래의 앰플내로 충전한다.

[즉용 용액제]

앰플의 내용물(상기 참조)을 멸균 염화나트륨 용액(생리적 식염수) 또는 멸균수로 재구성하여 농도 0.10 내지 25 cu/ml의 복합 단백질 또는 단일 단백질 용액을 제조한다.

[하이드로겔]

90 % 이상의 물을 함유하는 저분자량의 가수분해된 전분으로 구성되는 하이드로겔을 그 자체로 공지된 방법으로 재조한다. 겔의 제조시, 이를 나누어 포장하고, 포장물을 살균시킨다(오토클레이빙).

[즉용 하이드로겔]

분말화된 복합 단백질/단일 단백질을 즉석에서 하이드로겔(상기 참조)로 목적하는 농도, 예를 들어 2.5또는 5 cu/ml로 제형화한다.

[도면의 추가 설명]

제1도는 크릴로부터의 단일 효소(-■-) 및 복합 효소(…□…) 제제로 5일간에 걸쳐 치료한 경우의 평균 삼출 비율을 나타낸 것이다.

단일 효소 : 개시일부터 제2일까지 20명의 환자가, 제2일부터 3. 5일까지 18명의 환자가, 그리고 제3. 5일부터 최종일까지 9명의 환자가 포함되었다.

복합 효소 : 개시일부터 제2. 5일까지 20명의 환자, 21개소의 상처부가, 제2. 5일부터 4일까지 18명의 환자, 19개소의 상처부가, 그리고 제4일부터 최종일까지 12명의 환자, 12개소의 상처부가 포함되었다.

모든 환자에 있어서, “임상적 감염 증후가 전무”한 상태는 늦어도 제5일안에 도달되었다.

제2도는 크릴로부터의 단일 효소(-■-) 및 복합 효소(…□…) 제제를 사용하여 5일에 걸쳐 치료하는 도중의 홍반의 평균적 정도를 나타낸 것이다.

홍반이 더욱 빨개지는 것은 주변 조직의 부종 및 수종이 감소되기 때문인 것으로 추정된다.

제3도는 크릴로부터의 단일 효소(-■-) 및 복합 효소(…□…) 제제로 5일간 치료하는 도중의 평균적 부종/수송 정도를 나타낸 것이다.

제4도는 크릴로부터의 단일 효소(-■-) 및 복합 효소(…□…) 제제를 사용한 5일에 걸친 치료 도중 통증의 평균적 정도를 나타낸 것이다. 통증은 환자 자신에 의해 무통증에서 참음 수 없는 정도에 이르기까지를 0 내지 5로 정하여 보고되었다.

제5도는 크릴로부터의 복합 효소(…□…) 제제를 사용하여 7일 동안 치료하는 경우의 평균적 통증 완화 정도를 나타낸 것이다.

제6도는 크릴로부터의 복합 효소 제제(…□…)로 7일 동안 치료하는 도중의 평균 염증 정도를 나타낸 것이다.

제7도는 크릴로부터의 복합 효소(…□…) 제제로 9일 동안 치료하는 도중 감염증의 함수로서의 홍반/부종의 정도를 나타낸 것이다.

제8도는 크릴로부터의 복합 효소(…□…) 제제로 7일에 걸쳐 치료하는 도중 통증의 정도를 나타낸 것이다.

제9도는 크릴로부터의 복합 효소(…□…) 제제로 4일 동안 치료하는 도중 평균적 배뇨 간격 정도를 나타낸 것이다.

제10도는 크릴로부터의 복합-효소(…□…) 제제로 4일 동안 치료 도중 평균적 고통 완화 정도를 나타낸 것이다.

제11도는 크릴로부터의 복합 효소(…□…) 제제로 7일간 치료하는 도중 평균적 고통 완화 정도를 나타낸 것이다.

정의 : 극심한 통증 : 말은 통증이 있는 다리로 그 자신을 지탱하지 못한다.

중간 정도의 통증 : 말은 때때로 30초 이상씩 고통스러운 다리로 그 자신을 지탱한다.

경미한 통증 : 말은 각회 2분 이상 고통스러운 다리로 그 자신을 연속적으로 지탱한다.

제12도는 7일간의 치료 도중, 크릴로부터의 단일 효소 제제의 괴사 조직, 섬유소, 농 및 혈병에 대한 분해 효능을 나타낸다.

-B- : 검은 괴사 조직

-Y- : 노란 섬유성 및 화농성 조직

-R- : 빨간 과립화조직 및 홍반

제13도는 화상 중 PHIM의 항미생물 활성으로서 표현된 용량-반응 곡선이다.

제14도는 완치된 환자로서 정의되는 효능 100 %에 이르는 PHIM용량에 대한, 용량-범위 간격을 나타낸다.

A = 안염, B = 염증, C = 바이러스 감염증, D = 진균 감염증, E = 세균 감염증, F = 통증 완화

제15도는 환자에 투여된 PHIM축적량, 치료에 이르는 체중 kg당 PHIM의 최대량을 나타낸 것이다.

A = 안염, G = 국소적 상처 감염증, H =요도 감염증, I = 진균 감염증, J = 단순 포진, K =지방성 피부 반점, L = 전층 화상, 및 M = 기회 감염증

제16도는 환자에 투여된 PHIM의 축적량, 치료에 이르는 체중 kg당 PHIM의 최소량을 나타낸 것이다.

A = 안염, G =국소적 상처 감염증, H =요도 감염증, I = 진균 감염증, J = 단순 포진, K =지방성 피부 반점, L = 전층 화상, 및 M = 기회 감염증

제17도는 대조와 비교한 PHIM 단일 주사시의 종양 효능을 나타낸 것이다.

제18도는 대조와 비교한 PHIM 반복 주사시의 종양 효능을 나타낸 것이다.

막대(n=4) : 1일 2회 1.25 mg/kg, 피하, Q1D 1-7: 막대 (n=5) 5 mg/kg, 피하, Q4D D 1, 3, 5, 7; 막대(n=5) 12.5 mg/kg, 피하, Q4D, D 1, 3, 5, 7.

제19도는 대조군대 치료군에 있어서 종양의 부피를 나타낸 것이다.

제20도 : 대조(저배율)

제21도 : 대조(고배율 확대)

제22도 : 피하(저배율)

제23도 : 피하(고배율 확대)

제24도 : 대조, 치료 안함

제25도 : 대조, 치료 안함

제26도 : 피하 1회 주사

제27도 : 피하 1회 주사

제28도 : PHIM의 온도 안정성, pH 7.0: 30℃, 20시간

제29도 : PHIM의 최적 온도, 소 카제인(Bio Rad프로테아제 기질 타블렛)의 분해 면적으로서 표현된 총 단백질 분해 활성, pH7.0, 30℃, 24시간.

제30도 : PHIM의 pH 안정성, 재구성한 PHIM을 실온에서 2 내지 18시간 동안 방치하였다. 소의 카제인(Bio Rad프로테아제 기질 타블렛)을 분해시킨 면적으로서 총 단백질 분해 활성을 표현하였다(30℃, 20 시간).

제31도 : PHIM의 최적 pH, 소의 카제인(Bio Rad 프로테아제 기질 타블렛)을 분해시킨 면적으로서 총 단백질 분해 활성을 표현하였다. 30℃, 16시간, pH 5.0, 6.0, 7.0, 8.0, 9.0 및 9.5.

제32도 : PHIM의 용량-활성 곡선, 브래드포드법(Bradford, A. Anal, Biochem, 72, 248, 1976)에 따른 단백질 농도. 총 단백질 분해 활성은 pH 7.0. 온도 30℃에서 24시간 동안 소의 카제인(Bio Rad 프로테아제 기질 타블렛)을 분해시킨 면적으로서 나타냈다. 용량 : 0.1, 0.3, 0.5, 0.9, 1.5, 2.5, 5.0 및 15 mg.

Claims

남극 크릴에서 단리되고 SPS-PAGE로 측정한 분자량이 18,000 내지 40,000인 단백질분해 효소(들)로 이루어지며, 엔도- 및 엑소- 펩티다제 활성을 모두 나타내는 효소 조성물로 이루어진, 감염증, 눈 감염증 및 농양으로 이루어진 군에서 선택되는 질병 치료용 의약.
제1항에 있어서, 감염증이 바이러스 감염증으로서, 헤르페스 심플렉스 감염증, 음부 헤르페스 감염증, 구강 헤르페스 감염증, 대상포진 감염증, 통상의 감기 감염증 또는 HIV/AIDS 감염증인 의약.
제1항에 있어서, 감염증이 진균 감염증, 기회성 진균 감염증 또는 무좀인 의약.
제1항에 있어서, 감염증이 세균 감염증 또는 기회성 세균 감염증인 의약.
제1항에 있어서, 감염증이 미코플라즈마 감염증, 호흡기 감염증 또는 호혈성 세균 감염증인 의약.
제1항에 있어서, 감염증이 방광 또는 요도 감염증, 잇몸 감염증, 포피 감염증 또는 눈 감염증인 의약.
남극 크릴에서 단리되고 SDS-PAGE로 측정한 분자량이 18,000 내지 40,000인 단백질분해 효소(들)로 이루어지며, 엔도-및 엑소-펩티다제 활성을 모두 나타내는 효소 조성물로 이루어진, 좌창, 습진, 건선, 반흔 조직, 켈로이드, 피부 반점, 피부과적 사피 및 누()로 이루어진 군에서 선택되는 질병 치료용 의약.
제7항에 있어서, 질병이 감염된 누인 의약.
제1항에 있어서, 국소 투여용 의약.
남극 크릴에서 단리되고 SDS-PAGE로 측정한 분자량이 18,000 내지 40,000인 단백질분해 효소(들)로 이루어지며, 엔도-및 엑소-펩티다제 활성을 모두 나타내는 효소 조성물로 이루어진, 조직 유착 치료용 의약.
제10항에 있어서, 유착이 수술후 조직 유착 또는 건-초 유착인 의약.
제1항에 있어서, 치료가 비경구 투여로 실시되는 것인 의약.
제1항에 있어서, 효소 조성물이 SDS-PAGE로 측정한 분자량이 26,000 내지 32,000인 단일 효소를 주로 하여 이루어진 것인 의약.
남극 크릴에서 단리되고 SDS-PAGE로 측정한 분자량이 26,000 내지 32,000인 딘일 효소를 주로 하여 이루어지며, 엔도- 및 엑소- 펩티다제 활성을 모두 나타내는 효소 조성물로 이루어진, 상처 또는 염증 치료용 의약.
제14항에 있어서, 괴사성 상처, 감염된 상처, 수술후 상처, 화상 도는 국소 궤양으로 이루어진 군에서 선택되는 상처 치료용 의약.
제14항에 있어서, 염증이 홍반, 잇몸 염증, 관절염, 유선염, 부비동염, 기관지염, 전립선염 또는 눈의 염증인 의약.
제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 국소 투여용 의약.
남극 크릴에서 단리되고 SDS-PAGE로 측정한 분자량이 18,000 내지 40,000인 단백질분해 효소(들)로 이루어지며, 엔도- 및 엑소- 펩티다제 활성을 모두 나타내는 효소 조성물로 이루어진, 류마티스 관절염 치료용 의약.
제7항에 있어서, 국소 투여용 의약.
제7항에 있어서, 효소 조성물이 SDS-PAGE로 측정한 분자량이 26,000 내지 32,000인 단일 효소를 주로 하여 이루어진 것인 의약.
제10항에 있어서, 국소 투여용 의약.
제10항에 있어서, 효소 조성물이 SDS-PAGE로 측정한 분자량이 26,000 내지 32,000인 단일 효소를 주로 하여 이루어진 것인 의약.
제18항에 있어서, 국소 투여용 의약.
제18항에 있어서, 효소 조성물이 SDS-PAGE로 측정한 분자량이 26,000 내지 32,000인 단일 효소를 주로 하여 이루어진 것인 의약.