JP4012665B2 - クリル酵素の新規な薬学的用法 - Google Patents

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、酵素活性を有し、多数の臨床試験において非常に多くの疾病に対して薬効を有することが証明された非免疫性蛋白質物質及び組成物の新規な薬学的用法に関するものである。本発明によれば、この物質は、食作用的に機能するものと考えられる。即ち、この物質は、特定の環境下において、種々の微粒子及び溶解性物質の「正常」及び「異常」を判別出来るように思われる。換言すれば、目標とされた、開散性破壊細胞を認識出来るように思われる。しかしながら、本発明は、本明細書に開示されたいかなる仮説的な反応によっても制限されるものではないことが銘記されなければならない。
【０００２】
【従来技術】
医学的に使用される蛋白分解酵素を観察する一般的な方法のひとつは、主に循環不全による潰瘍を持つ高齢の患者に対して、外科的な創面切除に代えて、蛋白質構造で被覆された未治癒の創傷に対しての創除去にこれらを用いることである。アメリカ特許第４，８０１，４５１号及びアメリカ特許第４，９６３，４９１号参照。これらのアメリカ特許には、南極クリル（オキアミ類）から分離されたエキソペプチダーゼ酵素とエンドペプチダーゼ酵素の混合物と薬学的（アメリカ特許第４，８０１，４５１号）及び非薬学的（アメリカ特許第４，９６３，４９１号）清浄の目的での、その使用を開示している。ここに開示されている薬学的清浄は、酵素による除去、即ち壊疽性創傷の創除去のみである。上記のアメリカ特許に開示されている非薬学的清浄は、高齢の患者の若返り等のための健康増進剤としての用途である。国際出願公開第ＷＯ８５／０４８０９号には、消化促進剤としての南極クリルから得られる酵素の使用が開示されている。また、ヨーロッパ特許公開第０１７０１１５号には血栓溶解剤としてのクリルの用法が開示されている。
南極クリルから生成される酵素及び酵素の混合物が分離され、その微生物学的及び生化学的特性に関して広く研究されている。また、これらの酵素を分離するために種々の方法が開発されている。Ａｎｈｅｌｌｅｒ Ｊ．Ｅ．、Ｈｅｌｌｇｒｅｎ Ｌ．、Ｋａｒｌｓｔａｍ Ｂ．及びＶｉｎｃｅｎｔ Ｊ．（１９８９）の「潰瘍性外傷の除去に適した新規な酵素の南極クリル（オキアミ類）から調製した生化学的及び微生物学的概要（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ ｐｒｏｆｉｌｅ ｏｆ ａ ｎｅｗ ｅｎｚｙｍｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｆｒｏｍ Ａｎｔａｒｃｔｉｃ ｋｒｉｌｌ（Ｅ． ｓｕｐｅｒｂａ）ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｄｅｂｒｉｄｅｍｅｎｔ ｏｆ ｕｌｃｅｒａｔｉｖｅｌｅｓｉｏｎｓ）」Ａｒｃｈ． Ｄｅｒｍａｔｏｌ． Ｒｅｓ． ２８０， １０５−１１０；Ａｘｌｅｓｅｎ Ｎ．Ｈ．，Ｋｒｏｌｌ Ｊ.、Ｗｅｅｋｅ Ｂ．（１９７３）「免疫電気泳動の定量マニュアル；方法及び用途(Ａｍａｎｕａｌ ｏｆ ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ ｉｍｍｕｎｏｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ；ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」、Ｓｃａｎ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２，ｓｕｐｐｌ．；Ｂｕｃｈｔ Ａ．， Ｋａｒｌｓｔａｍ Ｂ．（１９８６）「南極クリル（オキアミ類)から得られる高度に精製された三つのトリプシン状酵素の免疫学的特徴(Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ｈｉｇｈｌｙｐｕｒｉｆｉｅｄ ｔｒｙｐｓｉｎ−ｌｉｋｅ ｅｎｚｙｍｅｓ ｆｒｏｍ Ａｎｔａｒｃｔｉｃ ｋｒｉｌｌ（Ｅｕｐｈａｕｓｉａ ｓｕｐｅｒｂａ））」Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． Ｈｏｏｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ ３６７、３６６（Ｓｕｐｐｌ．）；Ｂｕｃｈｔ Ａ．， Ｊｏｈａｎｓｓｏｎ， Ｂ．、ＫａｒｌｓｔａｍＢ．（１９８６）「南極クリル（オキアミ類）から得られるプロテアーゼの分離及び識別（Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ ｐｒｏｔｅａｓｅｓ ｆｒｏｍ Ａｎｔａｒｃｔｉｃ ｋｒｉｌｌ（Ｅｕｐｈａｕｓｉｓ ｓｕｐｅｒｂａ）） ６ｔｈ Ｉｎｔ． Ｓｙｍｐ． ＨＰＬＣ Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｐｅｐｔｉｄｅｓ ａｎｄ Ｐｏｌｙｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ， Ｂａｄｅｎ−Ｂａｄｅｎ， ｐｐ ３４；Ｃｈｅｎ Ｃ．Ｓ．，Ｙａｎ Ｔ． Ｒ．， Ｃｈｅｎ Ｈ． Ｙ． （１９７８）「トリプシン状酵素の精製及び特性及びオキアミ類から得られるカルボキシペプチダーゼＡ（Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｔｒｙｐｓｉｎ−ｌｉｋｅ ｅｎｚｙｍｅｓ ａｎｄ ａ ｃａｒｂｏｘｙｐｅｐｔｉｄａｓｅ Ａｆｒｏｍ Ｅｕｐｈａｕｓｉａ ｓｕｐｅｒｂａ）」，Ｊ．Ｆｏｏｄ Ｂｉｏｃｈｅｍ．２，３４９〜２，３６６；Ｈｅｌｌｇｒｅｎ Ｌ．， Ｋａｒｌｓｔａｍ Ｂ．， Ｍｏｈｒ Ｖ．， Ｖｉｎｃｅｎｔ Ｊ．（１９９１）「クリル酵素ー壊疽性潰瘍の効率的な除去のための新規な理論（Ｋｒｉｌｌ ｅｎｚｙｍｅｓ−ａ ｎｅｗ ｃｏｎｃｅｐｔ ｆｏｒ ｅｆｆｉｃｉｅｎｔ ｄｅｂｒｉｄｅｍｅｎｔ ｏｆ ｎｅｃｒｏｔｉｃ ｕｌｃｅｒｓ）」Ｉｎｔ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ． ３０， １０２−１０３；Ｋａｒｌｓｔａｍ Ｂ．「特にセリンプロテナーゼに関する南極クリル（オキアミ類）から得られる蛋白質の交叉免疫電気泳動クリル分析（Ｃｒｏｓｓｅｄ ｉｍｍｕｎｏｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｔｉｃ ｋｒｉｌｌ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｐｒｏｔｅｉｎｓ ｆｒｏｍ Ａｎｔａｒｃｔｉｃ ｋｒｉｌｌ（Ｅｕｐｈａｕｓｉａ ｓｕｐｅｒｂａ） ｗｉｔｈ ｓｐｅｃｉａｌ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｔｏ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ）」（出版のために提出された）；Ｋｉｍｏｔｏ Ｋ．Ｋ．，Ｋｕｓａｍａ Ｓ．，Ｍｕｒａｋａｍｉ Ｋ， （１９８３）「オキアミ類から得られるセリンプロテナーゼの精製及び特性（Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｓｅｒｉｎｅ ｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ ｆｒｏｍ Ｅｕｐｈａｕｓｉｓ ｓｕｐｅｒｂａ）」Ａｇｒｉｃ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． ４７， ５２９−５３４；Ｌｏｗｒｙ Ｏ． Ｈ．， Ｒｏｓｅｂｒｏｕｇｈ Ｎ． Ｊ．， Ｆａｒｒ Ａ． Ｌ．， ＲａｎｄａｌＲ． Ｊ．（１９５１）「Ｆ氏フェノール試薬による蛋白質の測定（Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ Ｆｏｌｉｎ ｐｈｅｎｏｌ ｒｅａｇｅｎｔ）」 Ｊ． Ｂｉｏｌ． Ｃｈｅｍ． １９３，２６５−２７５；Ｍｏｏｒｅ Ｓ．， Ｓｔｅｉｎ Ｗ． Ｈ． （１９６３）「自動記録装置を用いたアミノ酸のクロマトグラフ測定法（Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ａｍｉｎｏ ａｃｉｄｓ ｂｙ ｔｈｅ ｕｓｅ ｏｆ ａｕｔｏｍａｔｉｃ ｒｅｃｏｒｄｉｎｇ ｅｑｕｉｐｍｅｎｔ）」 Ｍｅｔｈｏｄｓ， Ｅｎｚｙｍｏｌ． ６， ８１９−８３１；Ｏｓｎｅｓ Ｋ． Ｋ．， Ｍｏｈｒ Ｖ． （１９８５）「南極クリル、オキアミ類から得られる三つの陰イオンセリン系ペプチド加水分解酵素の精製及び特性（Ｏｎ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｒｅｅ ａｎｉｏｎｉｃ ｓｅｒｉｎｅ−ｔｙｐｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｈｙｄｒｏｌａｓｅｓ ｆｒｏｍ Ａｎｔａｒｃｔｉｃ ｋｒｉｌｌ， Ｅｕｐｈａｕｓｉａ ｓｕｐｅｒｂａ）」Ｃｏｍｐ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓｏｌ． ８２Ｂ， ６０７−６１９；Ｏｓｎｅｓ Ｋ． Ｋ．， Ｍｏｈｒ Ｖ．（１９８６）「南極クリル、オキアミ類から得られるエキソペプチダーゼの精製及び特性（Ｏｎ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｘｏｐｅｐｔｉｄａｓｅｓ ｆｒｏｍ Ａｎｔａｒｃｔｉｃ ｋｒｉｌｌ，Ｅｕｐｈａｕｓｉａ ｓｕｐｅｒｂａ）」 Ｃｏｍｐ．Ｂｉｏｃｈｅｍ． Ｐｈｙｓｉｏｌ． ８３Ｂ， ４４５−４５８．
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
我々の持つ免疫系は、常に我々を保護しており、常に活性状態となっている。免疫系の主な機能は、特定の環境下においては異常とみなされる外部からの侵入物、古くなった細胞、開散細胞、溶解性物質等を処理して我々の身体を正常に保持している。食細胞、顆粒球、大食細胞及びＮＫ細胞は、我々の「古い免疫細胞」であり、身体の保護及び予防のためのこれらの活動モードは食作用である。即ち、病原菌をその内部に飲み込み加水分解酵素を放出して病原菌を死滅または分解させる。リンパ球、Ｔ細胞及びＢ細胞は、我々の「新しい免疫細胞」であり、身体の保護及び疾病の予防のためにこれらの細胞は種々の活動モードで存在する。Ｔ細胞のいくつかは、細菌を死滅させるためにトキシンを放出する。他のＴ細胞は、情報を伝達し、反射の強さを制御し、Ｂ細胞は抗体を生成する。新旧の細胞は複雑な相互作用で、我々の身体を最良の状態で保護している。
細胞組織が損傷を受けた場合、数分間の内に顆粒球が損傷箇所に現れ、即座に外部よりの侵入物や損傷を受けた細胞に対する攻撃を開始する。数時間の内に大食細胞、ＮＫ細胞、Ｔ細胞が顆粒球からの化学走化性信号に反応して、作用し、損傷部位に入る。すると優れた相互作用を開始し、損傷を受けた細胞を除去して、最終的に損傷が治癒する。
免疫作用が作用していることのしるしは、炎症として見ることができ、この炎症は、種々の免疫細胞及び細菌から放出されるトキシンによって引き起こされる。炎症は、低レベルである限りは健全な作用である。時として免疫による防御が行き過ぎて、鋭い痛みが生じ、治癒するというよりはむしろ悪化させる場合があり、炎症が長引いて慢性化した場合、それは、自己免疫状態の開始である場合がある。
炎症が悪化する主な理由は、細菌性の感染によるもので、我々の免疫の多様な防御にもかかわらず、細菌は自己保護の手段を生成して長期間の進行で非常に危険な状態となる可能性がある。
細菌は、免疫細胞により知覚されないように潜伏している場合があり、また細胞や、免疫細胞にさえも侵入して、寄生し、増殖して、それらのホスト細胞の記憶を変化させる。いくつかの癌やＡＩＤＳ及びこれらの症状の合併症が、こうした細菌の挙動の例である。
従って、疾病の病原は、免疫系がどれだけ良く機能するかにかかっており、通常は、この機能のために完全なバランスが保たれている。ところで、細菌による干渉の外に、薬物は、一時的または恒久的な免疫不全の主要な要因となっており、この方向における薬学的な研究が盛んに行われている。
最適な薬剤は、免疫系と調和し、共生的に相互作用し、病原や症状を攻撃し、副作用を生じないものである。本発明は、こうした特性を備えた新規な薬学的用法及び薬学的組成物を提供する。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
これを達成するための手段は、南極クリル（オキアミ類）から分離された一乃至複数の蛋白質分解酵素の使用を含んでいる。上述のように、こうした酵素は、知られているが、僅かな薬学的用法しか示されていない。クリルの酵素をここに述べる目的で使用することは予測されていなかった。また得られた結果は、実際に予測出来ないものであった。これらの結果を達成した手段は、以下の実施例及び請求の範囲において説明される。
【０００５】
調製の実施例
上記のように、クリルより蛋白質分解酵素を分解する多くの方法がすでに知られている。従って、以下に示す方法は、多くの方法の中で、本発明により使用可能な酵素製剤の調製方法の一つを示しているにすぎない。
冷凍されたホワイトクリル、オキアミ類は、解凍され、均質化された。蒸留水を、１：１の割合で添加するとともに、０．０２％のアジ化ナトリウムを添加して、＋４℃で６時間放置した。水相（ｗａｔｅｒ ｐｈａｓｅ）が、肉及び殻片から９０００ｒｐｍで４０分遠心分離された遠心分離物とともに回収された。水相は、エチルアセテートによって+４℃で一晩脱脂された。下側の水相が回収され、数時間煮沸された。
飽和硫酸アンモニウムが、６０％飽和状態となるまで加えられた。得られた沈殿物は、９０００ｒｐｍで４０分間遠心分離され、ついで、ｐＨ７．４で０．０５Ｍの塩化ナトリウム（ＰＢＳ）の０．０５Ｍのリン干渉液に溶解され、ＰＢＳに対して透析された（素材抽出）。
素材抽出物は、Ｓｅｐｈａｃｒｙｌ ２００ （Ｐｈａｒｍａｃｉａ、スウェーデン）柱に塗布され、蛋白質部分が２８０ｎｍの吸収度で回収され、蛋白質分解反応が検査された。活性成分は、貯留され、凍結乾燥された。
以下において、組み合わされた活性成分は、相互に変更可能に、「マルチ蛋白質（ｍｕｌｔｉ−ｐｒｏｔｅｉｎ）」、「マルチ酵素（Ｍｕｌｔｉ−ｅｎｚｙｍｅ）」、ＰＨＩＭまたはＰＨＩＭ１０６と呼ばれる。
分離された酵素の分子量範囲がＳＤＳ−ＰＡＧＥ ＰＡＡ４／３０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ、スウェーデン）により測定された。最低６つのバンドは、１８，０００乃至４０，０００の範囲、特に２４，０００乃至３４，０００の範囲であった。
ゲルクロマトグラフにより得られた一つの部分は、エンドペプチダーゼとエキソペプチダーゼの双方の反応を示した。この部分は、さらに分離された。この結果、この部分には、分子量２６，０００乃至３２，０００の単一の酵素が含まれていることが示された。この部分を、「単一蛋白質（Ｓｉｎｇｌｅ−Ｐｒｏｔｅｉｎ）」または「単一酵素（Ｓｉｎｇｌｅ−Ｅｎｚｙｍｅ）」と呼ぶ。
マルチ蛋白質及び単一蛋白質のいずれの抽出素材にも試験管内で殺菌効果は見られなかったが、制菌作用はあるものと考えられる。
活海老中の酵素の正常温度範囲は、−５乃至−２℃である。驚いたことに、酵素に最適な温度はｐＨが中性の状態で＋５５℃であり、いくつかの酵素は１００℃で１時間安定である。
【０００６】
ＰＨＩＭの種々の特徴
図２８には、上記のように調製されたＰＨＩＭの温度安定性、即ち、ＰＨＩＭの相対活性の百分率（牛のカゼインの消化された部分で示される活性；Ｂｉｏ Ｒａｄ Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｔａｂｌｅｔｓ；３０℃で２０時間）で、温度１０、２０、３０、４０、５０、６０及び７０℃で時間の関数として示されている。７０℃では、２時間経過後に活性は２５％未満まで低下した。しかしながら、６０℃の場合には、活性が２５％未満に低下するまでには少なくとも１２時間が必要である。４０℃では、活性の２５％未満までの低下は、１１日後であったが、３０℃では、１１日を経過した後も活性は１００％である。
図２９には、最適温度が示されている。例えば、ＰＨＩＭ質分解活性（カゼイン相当量としてｍｍ^２により牛のカゼインの消化された部分として；ＢｉｏＲａｄ Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｔａｂｌｅｔｓ；ｐＨ７．０；３０℃で２４時間）が、温度の関数として示されている。最適活性が５５℃で得られることは興味深い。
図３０には、ＰＨＩＭのｐＨ安定性が示されている。即ち、ＰＨＩＭの百分率による相対活性（ウシのカゼインの消化された部分で示される活性；Ｂｉｏ Ｒａｄ Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｔａｂｌｅｔｓ；３０℃で２０時間）が種々のｐＨ弁で時間の関数として示されている。再構成されたＰＨＩＭは室温で２〜１８時間維持した。ｐＨ３．５およびｐＨ１１では、数時間後に既に活性の増大がある一方、ｐＨ７．０およびｐＨ９．５の間では、１８時間後で活性は約７０％なお上であった。
図３１には、ｐＨの関数としてのＰＨＩＭのｐＨ最適値、即ち、ＰＨＩＭの全タンパク分解活性（ウシ由来のカゼインの消化領域として、ｍｍ^２中のカゼイン等価として表現されたもの、；Ｂｉｏ Ｒａｄ Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｔａｂｌｅｔｓ；３０℃で１６時間）が示される。ｐＨ８において、最適蛋白質分解が有ることに注意すべきである。
図３２には、試験管内でのＰＨＩＭの用量活性曲線、即ち、ＰＨＩＭの全蛋白質分解活性（ウシ由来のカゼインの消化領域として表現されたもの；Ｂｉｏ Ｒａｄ Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｇｅｌ Ｔａｂｌｅｔｓ；ｐＨ７．０；３０℃で２４時間）。この蛋白質濃度は、Ｂｒａｄｆｏｒｄ， Ｍ．，Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ． ７２，２４８， １９７６に合わせて測られる。この活性はＰＨＩＭの用量が増えると共に急速に増加し、そしてＰＨＩＭが約１．５ｍｇの時、最大値に達するこの活性は、ＰＨＩＭが１５ｍｇの時と同じである。
【０００７】
臨床に関する実施例
本発明の医療的な効果及び臨床的な使用における制限及び欠点を示すために、本発明の酵素及び酵素の混合物が、以下に示す項目に関して臨床的に試験された。
− 感染
− 炎症
− 死亡し、分離された細胞
− 流行性感染
− 眼病
− 痛み
− 癌
上記の各項目に関するすべての研究は、少数の患者による各指標に対しての先駆的な研究である。研究の目的を調査するために、最も注目すべき、目視による臨床パラメータを調査することが可能な創傷及び疾患部が選択された。
多くの場合、患者選択におけるキーワードは、「対象となる疾病が無ければ健康な患者」である。即ち、結果に関する良好な解釈を得るために、主要な臨床課題の状態に集中し、自明の内在的な体系の要因を排除した。いくつかの一般的な状態及び体系的要因は、２０歳から８５歳までの患者により、また歩行可能な軽度の炎症を持つ患者から寝たきりの入院患者までを試験対象とするため、患者の資料として当然含めた。各項目の試験グループは、むしろ一般状態及び内在的な体系の要因に関して同種のグループとして構成された。
【０００８】
臨床例１乃至１０−感染
感染と炎症は、多くの場合一緒に発生し、これらは同様の臨床的症状、即ち、紅班、腫脹、熱、水腫、分泌、膿、痛み、壊疽性組織及び時としてにおいを示す。こうした臨床的症状は、上述のように追跡され、処置方法及び本発明による単一蛋白質及びマルチ蛋白質製剤の効き目を評価するために記録される。
【０００９】
実施例・手術後の外科的創傷
この研究は、合計４０人の患者に対して行われた。患者は、２０人ずつ二つのグループに分けられ、４１の手術後の創傷のうち腹部の創傷（３４）及び胸部創傷（７）であった。各グループに対して、クリルから生成された単一酵素、３カゼイン単位／ｍｌ及びマルチ酵素、５カゼイン単位／ｍｌの製剤が試験された。製剤は、保存剤、抗菌剤を添加してない凍結乾燥された白い粉末である。５ｍｌの食塩水中において希釈される。
患者の資料は、平均年齢５２±１６歳で、２８人の男性と１２人の女性が含まれていた。製剤の抗菌作用は臨床効果及び効率の面で非常に良好であった。５日以内で、すべての感染は無症状レベルとなり、臨床的感染の症状は見られなくなった。二つの製剤間に注目すべき差異は見られなかった。明らかな又は疑うべき副作用は見られなかった。
この結果は、図１乃至図４に要約されている。
この項目に対する適当な投与量は、１００ｃｍ^２当たり０．０１至１００ｍｇ好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００１０】
実施例２・小さな火傷
抗生物質及びシルバーダイアジン（ｓｉｌｖｅｒｄｉａｚｉｎｅ）クリームに反応しないＳ．ａｎｒｅｕｓ及びＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａに感染した小さな全層火傷をおった１１人の患者に対して、この研究が行われた。５人の患者は、３カゼイン単位／ｍｌの単一酵素の親水コロイドクリームによって処置され、６人の患者は、５カゼイン単位／ｍｌのマルチ酵素水溶液により処置された。製剤は、保存剤及び抗菌剤を添加していない凍結乾燥した白色粉末である。マルチ酵素製剤：１アンプルは、５ｍｌの食塩水により希釈されて５カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液となる。単一酵素製剤：１アンプルは、５ｍｌの食塩水により希釈されて３カゼイン単位／ｍｌの濃度のゲルとなる。
この項目における適当な投与量は、１００ｃｍ^２当たり０．０１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
５日間の処置によりすべての患部は、感染の症状が無いことがＭＯ培養によって確認された。壊疽性組織、膿及び顆粒化組織中の線維性源線維は双方の製剤により効果的に分解され、これらの製剤間においてなんらの差異も見られなかった。また、これらの製剤による副作用も見られなかった。
試験の結果は、表１に要約する。
【表１】

【００１１】
実施例３・苦痛な歯茎感染
この研究は、急性及び慢性の歯茎感染／炎症を持つ２２人の患者について行われた。製剤は、保存剤及び抗菌剤を添加していない凍結乾燥された白色粉末である。マルチ酵素製剤：１アンプルは、５ｍｌの食塩水により希釈されて５カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液となる。
朝、正午及び夕方の、１日に三回、アンプルを５ｍｌの水道水中で希釈して、口腔を５分間すすいだ。処置後２時間は、飲食を禁止した。処置は結果に関係なく７日間行われた。
１２時間の処置中の２０分経過後に、痛みが無くなったことが報告された。感染及び炎症は、４日以内に消失し、この後３週間は再発しなかった。なんらの副作用も報告されなかった。
結果は、図５及び図６に要約する。
この項目に対する適正な投与量は、処置毎に０．１乃至１００、好ましくは１乃至３５ｍｇである。
【００１２】
実施例４・上側気道のウイルス性感染
この研究は、インフルエンザウイルス感染及び上側気道に二次バクテリア感染を持つ１１人の患者に対して行われた。
気道のウイルス感染は、繊毛を傷つけ、炎症反応は、紅班、腫脹及び鼻汁の分泌の増加等を引き起こす。傷つけられた繊毛は、吸い込まれたバクテリアを排除することが出来ず、バクテリア感染は、ウイルス性感染の二次的合併症となる。
他のウイルス感染の症状は、一般的な病気の状態、疲労感、発熱、一般的な苦痛である。
ウイルスは、生存及び増殖のためホスト細胞に寄生するので、ホスト細胞を傷つけ又は殺すことなくウイルスを駆除することは困難である。
マルチ酵素製剤：保存剤及び抗菌剤を添加していない凍結乾燥された白色粉末が使用された。１アンプルは、５ｍｌの食塩水により希釈されて５カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液となる。
約０．２５ｍｌの試験溶液を各鼻孔にスプレーし、口腔を約４．５ｍｌの溶液で５分間すすいだ。この手順は、一日三回ずつ繰り返され、紅班、腫脹、鼻汁、痛み及び副作用等の臨床的パラメータが一日１回記録された。
処置は、１０日間以内で、感染の症状が無くなった時点で中止した。
８人の患者は、６日間の処置の間に症状が消え、残りの患者は９日間の処置で症状が消えた。
痛みは、すべての患者において、２時間から２日間で消えた。唾液は、膿の吐き出しにより、３日間できれいになった。紅班、腫脹は４日間で消えた。
この結果は、図７及び図８に要約されている。なんらの副作用は見られなかった。
この項目における好適な投与量範囲は、０．１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至３５ｍｇである。
【００１３】
実施例５：口腔の単純ヘルペス感染
口腔に水ふくれを持つ８人の患者は、一日２回のうがいにより処置された。製剤は、保存剤及び抗菌剤を添加していない凍結乾燥された白色粉末である。マルチ酵素製剤：１アンプルは、５ｍｌの食塩水により希釈されて５カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液となる。
各処置の前にアンプルが用意され、口腔を、試験溶液により５分間すすいだ。各処置後２時間は、飲食を禁止された。この手順は、毎日２回繰り返され、紅班、腫脹、痛み及び副作用の臨床パラメータは一日に１回記録された。
処置は、１０日以内を限度として、感染の症状が消えたところで終了した。
痛みは、最初の処置から２時間以内に消え、何人かの患者は、最初の二日間、処置と処置の間で痛みを再発したが、それ以降の再発は見られなかった。
５日経過後、すべての患者から症状が消え、すべての疱疹は治癒した。副作用は見られなかった。
上記の実施例１乃至５から、細菌、ウイルス及び菌による感染は、非常に良く似た経過をたどり、すべての感染及び炎症の症状は３乃至６日で消失する。例えば、熱傷時のＳ．ａｕｒｅｕｓ及びＰ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ等の薬品に対して耐性を持つウイルス種及び単純ヘルペス（Ｈｅｒｐｅｓ Ｓｉｍｐｌｅｘ）の細胞内ウイルスの場合においても、同様のパターンとなる。歯茎感染及び上側気道のウイルス感染も、５乃至７日間に合計１５分間口腔をすすぐことで効果的に処置される。こうした短い作用期間及び唾液からの洗浄効果は、試験された製剤からの蛋白質が細胞又は表面に付着して、実際の処置時間に比べて非常に長い時間作用することが出来るとする仮説を支持する。これと同様のことが、目の感染症における涙の分泌を持つ患者にも観察される。
この項目における適正な投与量は、一回当たり０．１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至３５ｍｇである。
【００１４】
実施例６・感染された褥瘡潰瘍
この研究は、かかと及び背中下部に１８の褥瘡を持つ１４人の高齢な患者について行われた。製剤は、保存剤及び抗菌剤を添加していない凍結乾燥された白色粉末である。マルチ酵素製剤：１アンプルは、５ｍｌの食塩水により希釈されて５カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液となる。
潰瘍は、全体を食塩水によって洗浄され、潰瘍に５ｍｌのマルチ酵素溶液を点滴する前に、出来うる限り潰瘍部分を除去し、半密閉包帯で被覆する。この手順は、７日間、一日に２回繰り返され、潰瘍は、炎症、紅班、熱、分泌液、壊疽組織、膿、痛み及び副作用が検査される。
感染は、４日間の処置で治癒し、６つの傷が７日間で完全に治癒し、１４日間で合計１１となった。７つの傷は、患者の一般状態により治癒しなかったが、傷には幾分かの回復が見られた。なお、副作用は見られなかった。
この項目に関して適正な投与量は、１００ｃｍ^２当たり０．１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００１５】
実施例７・瘻感染
研究の目的は、クリルから生成される単一蛋白質及びマルチ蛋白質製剤の肛門瘻に対する抗菌性及び分解性及び有用性を調査するためである。製剤は、保存剤及び抗菌剤を添加していない凍結乾燥された白色粉末である。エンドペプチダーゼ及びエキソペプチダーゼの作用を有する単一蛋白質：１アンプルは、５ｍｌの食塩水により希釈されて３カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液となる。エンドペプチダーゼ及びエキソペプチダーゼの混合物の作用を有するマルチ酵素製剤：１アンプルは、５ｍｌの食塩水により希釈されて５カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液となる。
瘻は殺菌溶液中で洗浄され、単一蛋白質ゲル及びマルチ蛋白質ゲルを点滴する前に、出来る限り除去された。この手順は、毎日１回行われ、患者の紅班、熱、分泌液、膿、痛み及び副作用が検査された。
処置は、１０日以内で、感染の症状及び炎症が無くなった時点で終了された。
肛門瘻を持ち、直腸との間が係属された２＋２の患者に対して、この研究が行われた。処置は、それぞれ単一蛋白質ゲル及びマルチ蛋白質ゲルによって行われた。
４８時間までで、完全に痛みが無くなったことが報告され、４日経過後には、感染の症状及び炎症が消えた。
すべての瘻は、６日乃至９日で治癒し、その後６月以内における再発は報告されなかった。副作用も無かった。
上記の実施例より、専門家が、うまく扱うことが非常に困難であるとしている、例えば肛門瘻と褥瘡潰瘍等の合併感染をうまく扱うことが出来、各研究期間の時間内にほとんどの場合最終的に治癒させることが出来るものと考えられる。
この項目における適正な投与量の範囲は、１００ｃｍ^２当たり０．０１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００１６】
実施例８・目の感染症
化膿性の目の感染症を持つ１５人の患者は、毎日２回、クリルから生成されたマルチ酵素の点眼を受けた。（製剤は、保存剤及び抗菌剤を添加していない凍結乾燥された白色粉末である。マルチ酵素製剤：１アンプルは、２５ｍｌの水により希釈されて注射のための１カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液となる。）感染した目に対する点眼は朝晩２回行われ、約０．４ｍｌの試験溶液が点眼された。各点眼毎に、目について紅班、腫脹、膿、涙の分泌及び副作用が調査された。
処置は、１０日以内とし、すべての感染の兆候が消失したときに終了した。
すべての患者は、処置開始後三日以内に感染のない状態となり、目の回りの紅班及び腫脹は、二日以内で消失し、過剰な涙の分泌も二日以内で解消した。最初の点眼後すぐに、すべての患者が、感染した目がなめらかになった感じを持ち、数分間で目の回りの炎症、圧痛が解消した。副作用は報告されていない。
上記の例より、処置毎に０．４カゼイン単位と非常に低濃度で使用したにもかかわらず、目の感染症は処置に対して最も早く反応したと考えられる。
この項目における適正な投与量範囲は、０．０１乃至５０ｍｇ、好ましくは０．１乃至５ｍｇである。
【００１７】
実施例９・手術後の傷の予防
クリルから生成された単一酵素及びマルチ酵素製剤は、手術後の傷の予防用抗菌洗浄溶液としての０．９％ＮａＣｌ制御溶液に対して試験され、合計６０人の患者を各２０人のグループとして試験を行った。
無出血状態の手術後の傷、手術後６乃至１２時間の最初の回復処置は、各溶液により一日に二回ずつ行われた。傷は、各溶液で全体を洗浄され、殺菌ガーゼの上から半閉塞包帯を巻いて被覆した。各回復処置において、傷について感染、炎症、紅班、腫脹、熱、壊疽組織、線維、膿、出血、痛み及び副作用が検査された。
処置は、９０％以上が上皮で覆われて傷が治癒した時、及び試験又は制御された処置が失敗したときに終了した。
手術後の臨床的感染は、単一酵素及びマルチ酵素溶液により処置したグループには、発生せず、炎症や紅班にこれら二つのグループの患者には見られなかった。１８の傷は１０日間の処置により治癒した。副作用は見られなかった。
対照グループにおいて、４人の患者にひどい侵襲性の感染が発生し、更に２人の患者には急性の炎症が生じた。このグループには紅班、腫脹、痛みが頻繁にみられた。１４の傷は、１０日以内で治癒した。
この項目における適正な投与量範囲は、１００ｃｍ^２当たり０．０１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００１８】
実施例１０・膀胱及び尿道の感染症
痛みを伴う尿道の感染症を持つ、女性のみ１２人の患者に関して研究が行われた。製剤は、保存剤及び抗菌剤を添加していない凍結乾燥された白色粉末である。マルチ酵素製剤：６アンプルは、５０ｍｌの食塩水により希釈されて３カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液となる。
最初にすべての患者より採取した尿は、非常に混濁し、第二回目に採取したものは僅かに混濁している程度まで清浄化されていた。
痛みは、瞬時に解消され、２日間の処置後、尿持続能力に明かな改善が見られた。４日間の処置ののちＭＯサンプルにバクテリアが存在しないことを確認、即ち４日処置を行った後、すべての処置を終了した。副作用は見られなかった。
結果は、図９及び図１０に要約されている。平均ＭＯ状態値は、表２に示されている。
【表２】

上記の例より、膀胱及び尿道の感染症は、非常に良好に一日に二回の点滴処置で反応した。処置開始から２日経過後、急性の感染及び炎症の症状が消え、４日経過後、すべての患者に感染症の兆候は見られなかった。
この項目における適正な投与量範囲は、０．０１乃至２００ｍｇ、好ましくは１乃至５０ｍｇである。
【００１９】
臨床例・炎症
ほとんどの研究において、炎症は、共通の特徴であり、すべての項目において、炎症の減少は同様である。３乃至４日以内で炎症は許容範囲まで減少し、治癒に向かっているようにみえた。手術後の傷の予防的処置（実施例９）の研究において、試験グループには全く炎症は発生しなかった。また、実施例３（急性及び慢性の歯茎感染・炎症） においても、試験グループには全く炎症は発生しなかった。
【００２０】
実施例１１・炎症を起こした馬の関節
前足の膝に炎症をもつびっこの競走馬１６頭について研究が行われた。製剤は、保存剤及び抗菌剤を添加していない凍結乾燥された白色粉末である。マルチ酵素製剤：１アンプルは、１０ｍｌの水により希釈されて２．５カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液となる。
２ｍｌの試験溶液は、痛みのある関節に、第１日目、第２日目、第４日目及び第７日目に注射された。注射後、副作用及び一般的な状態での悪化を見るために、馬が検査された。臨床パラメータが一日に１回計測された。
９例は、最初の処置後３０分乃至２時間で迅速に痛みが解消した。他の４例では、最初の処置後６時間で痛みが解消した。さらに、他の２例では、第二回目の注射後２時間で痛みが解消した。残りの１例は、三回目の注射後に痛みが解消した。最後の例では、膝全体に腫脹があった。
熱と腫脹は急速に低下し、研究された１５例においては、２日後にはなんらの炎症も見られなかった。副作用も見られなかった。
結果は、図１１に要約されている。
この例より、競走馬の急性関節炎は、７日間に４回の関節内注射を連続的に処置することで治療出来る。炎症の臨床的症状は、急速に減少し、二日間で熱及び腫脹は回復した。その後一週間の治療で、馬は軽いトレーニングが出来るまで回復した。
この項目における適正な投与量範囲は、０．１乃至２００ｍｇ、好ましくは１乃至５０ｍｇである。
【００２１】
臨床例１２乃至１６・死亡及び開散細胞
実施例３、４、５及び１０参照
【００２２】
実施例１２・手術後の壊疽性創傷
クリルから生成された単一酵素製剤により、１５人の壊疽性創傷を持つ患者が治療された。製剤は、保存剤及び抗菌剤を添加していない凍結乾燥された白色粉末である５ｍｌの食塩水により希釈されて３カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液となる。
通常の清浄及び傷の洗浄が、単一酵素を塗布する前に行われた。一日に２回、アンプルが５ｍｌの食塩水で希釈され、傷を完全に覆うガーゼ包帯の上に滴下された。包帯を交換する毎に、傷について紅班、水腫（ｏｅｄｅｍａ）、出血、腫脹、熱、分泌物、膿、壊疽組織、痛み、におい、副作用、及び患者の一般状態が検査された。治療は、７日以内とし、すべての壊死、線維、膿及びかさぶたが分解された時に終了した。
この患者の資料は、傷の生態学に関して異種のものであり、即ち、予定された手術、外傷、火傷、刺し傷及び糖尿病等とは異種のものである。すべての患者は、一日に２回、総合的に治療された。副作用は見られなかった。
結果は、図１２に要約されている。
上記の壊死、線維、膿、かさぶた及び血小板は、一週間以内で、効果的に分解され、いくつかの傷は、一週間以内で治癒した。火傷、刺し傷、手術後の傷を持つ糖尿病患者の場合には、当初非常に効き目が悪いように見えたが、研究を終了する７日目には、下側は完全に治癒しており、壊死の表面のみが蓋状に残留していたのみであり、傷の一部は一週間で治癒した。
この項目における適正な投与量範囲は、１００ｃｍ^２当たり０．０１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００２３】
実施例１３・傷跡及びケロイドの分解
この研究の目的は、外科的成形に替わるクリルから生成されたマルチ蛋白質製剤の分解に対する効き目及び有用性を調査するものである。製剤は、保存剤及び抗菌剤を添加していない凍結乾燥された白色粉末である。エンドペプチダーゼ及びエキソペプチダーゼが作用するマルチ酵素製剤：１アンプルは、５ｍｌの水により希釈されて５カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液となる。
各外傷につき一日当たりの最大量を１ｍｌとして、傷跡／ケロイドの１ｃｍ毎に０．２ｍｌのマルチ蛋白質溶液を注射した。この手順は、一日に一回繰り返され、傷跡／ケロイドについて紅班、腫脹、熱、出血、壊死及び副作用が検査された。
治療は、７日以内とし、傷跡／ケロイドが８０％分解したときに終了した。
マルチ蛋白質製剤は、５人の顔に傷跡を持つ患者と、３人の頭部及び前腕に一日一回、ケロイドを持つ患者に注射された。
７日間の治療により、線維質の傷跡は、初期の大きさの約２５％にまで減少し、コラーゲン質のケロイドは約７０％にまで減少した。この試験の間、副作用は見られなかった。
上記より明らかなように、皮内及び皮下の傷跡及びケロイドは、７日間の皮内注射による治療で７５％乃至３０％分解された。傷跡及びケロイドを美容整形する場合、分解が急速に生じることはなく、傷口及びケロイドの６０乃至８０％を除去する必要がある。皮膚及び下側組織は、しわ等の他の欠陥が生じないように、徐々に適合させる必要がある。
この項目における適正な投与量範囲は、治療毎に、０．１乃至５０ｍｇ、好ましくは１乃至１０ｍｇである。
【００２４】
実施例１４・乾癬及び乾性湿疹
乾癬班及び乾性湿疹班は、半閉塞性の包帯で被覆したヒドロゲル試験製剤（単一酵素）により極めて容易に分解される。２４時間以内で、班は完全に消滅し、特に乾癬患者の敏感な皮膚には、付加的な炎症、痛みは見られなかった。これとは逆に、影響を受けた皮膚部分は、より炎症が少ないものとなっているが、ほとんどすべてのステロイドクリームの到達性は、班が消えた時に改善され、より大きな効果が見られた。
この項目に対する適正な投与量は、１００ｃｍ^２当たり０．０１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００２５】
実施例１５・犬の歯垢
この研究の目的は、クリルから生成されるマルチ蛋白質の、犬の歯垢の分解に対する効き目及びその有用性を調査することである。製剤は、保存剤及び抗菌剤を添加していない凍結乾燥された白色粉末である。エンドペプチダーゼ及びエキソペプチダーゼが作用するマルチ酵素製剤：１アンプルは、５ｍｌの食塩水により希釈されて５カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液となる。
調整されたアンプルの内容物は、歯及び歯肉に注意深く塗り付けられた。舌は、最短限２分間固定され、飲食は２時間禁止された。治療は、一日に２回、歯垢が完全に分解するまで繰り返された。犬の歯垢の状態、唾液の分泌及び副作用が調査された。
特別な食事及び犬舎により異常な歯垢を持つ８頭のビーグル犬について、この研究が行われた。４日後に、歯垢のすべての症状が消え、研究が終了した。副作用は見られなかった。
この項目に対する適正な投与量は、治療あたり０．１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至３５ｍｇである。
【００２６】
実施例１６・人間の歯垢
この研究の目的は、クリルから生成されるマルチ蛋白質の、歯垢の分解に対する効き目及びその有用性を調査することである。製剤は、保存剤及び抗菌剤を添加していない凍結乾燥された白色粉末である。エンドペプチダーゼ及びエキソペプチダーゼが作用するマルチ酵素製剤：１アンプルは、５ｍｌの食塩水により希釈されて５カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液となる。
マルチ蛋白質溶液のアンプルは、各治療毎に調製され、口腔は５分間洗浄された。飲食は、治療後２時間禁止された。治療は、１日に２回繰り返され、患者の歯垢の状態、唾液の分泌、乾燥度及び副作用が検査された。患者は、この研究の間、歯を磨くことを許されなかった。
治療は、７日以内とし、すべての症状が消えたときに、終了した。
最初の治療から２時間後に、すべての患者は、歯が柔らかく、なめらかになったと感じ、歯垢は完全に分解したものと考えられた。目視による検査では、歯垢の残留が認められた。三回目の治療２時間後、すべての歯垢が消え、治療を終了した。副作用は見られなかった。
この項目に対する適正な投与量は、治療あたり０．１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至３５ｍｇである。
【００２７】
実施例１７・日和見感染
こうしたタイプの感染は、癌、ＡＩＤＳ、免疫抑制剤、放射線等による免疫系が完全に抑制された患者に発症する。発病性の微生物種または発病性に変化し得る非発病性の微生物種は、深刻な感染を引き起こし、こうした状態にかかった患者を死に至らしめる一般的な敗血症を引き起こす。
治癒しない手術後の傷を持つ、第４段階の子宮癌を持つ二人の患者と放射線被曝傷を持つ一人の患者の、三人の患者が、排液性の包帯をしながら一日に２回治療された。１２、１４及び１７日経過後に、傷は治癒した。
この項目に対する適正な投与量は、１００ｃｍ^２あたり０．０１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００２８】
臨床例１８−１９・眼病
実施例１８・犬の灰白白内障
この研究の目的は、クリルから生成される単一蛋白質及びマルチ蛋白質の、犬の灰白白内障に対する効き目及びその有用性を調査することである。製剤は、保存剤及び抗菌剤を添加していない凍結乾燥された白色粉末である。エンドペプチダーゼ及びエキソペプチダーゼが作用する単一酵素製剤は、１アンプルが、５ｍｌの水により希釈されて３カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液とし、マルチ酵素製剤：１アンプルは、５ｍｌの水により希釈されて５カゼイン単位／ｍｌの濃度の溶液とする。
マルチ蛋白質溶液を２滴、約０．４ｍｌを右目に点眼した。この手順は、一日に１回反復して行われ、犬について不透明度及び副作用が検査された。
治療は、目視検査により透明に見えた時に終了した。左目は、マルチ蛋白質の溶液による治療と全く同じ手順で、単一蛋白質溶液を用いて治療された。
この治療は、目視検査により透明に見えたときに終了した。
５日後に右目の不透明さにおいて明白な減少が見られ、そして１０日後には、この目は非常に透明になり治療を終了した。
左目に関しても同じことが観察され、治療を１０日後に終了した。
この項目に対する適切な投与量は、１回の治療当たり０．０１〜５０ｍｇ、好ましくは０．１〜５ｍｇである。
【００２９】
実施例１９・目の白内障
この研究の目的は、クリルから生成される単一蛋白質及びマルチ蛋白質の、灰白白内障に対する効き目及びその有用性を調査することである。
２．５カゼイン単位／ｍｌのエンドペプチダーゼ及びエキソペプチダーゼが作用するマルチ酵素製剤が三日おきに点眼された。
灰白白内障のために、片目に昼夜視力を持つ８０歳台の高齢な女性に、１カゼイン単位／ｍｌのマルチ蛋白質製剤を三日毎に０．４ｍｌ点眼した。５回の治療後、他の医学的な理由により治療を終了した。しかしながら、明らかに不透明度の減少がみられ、女性からは冒されている目の視力の改善が報告された。治療中及び治療後１月間には副作用は見られなかった。
この項目に対する適正な投与量は、治療あたり０．０１乃至５０ｍｇ、好ましくは０．１乃至５ｍｇである。
【００３０】
臨床例−痛み
痛みは、最初に組織の機械的な破壊によって生じ、鋭い痛みは、外傷性障害の後すぐにおさまる。治癒課程の初期段階には、ある種の敏感さが残る。感染及び急激な炎症は、組織の腫脹、化学反応、微生物作用、壊死細胞の形成、癒着または傷跡の形成により深刻な苦痛を引き起こす。痛みは、治癒後長い時間続くことがあり、永久につづくこともある。
痛みは、主観的なパラメータであり、これを臨床的に遮断することは非常に困難である。痛みの定義として、軽いかゆみ程度の痛みから深刻な痛みまでのすべてが含まれる。深刻な痛みに悩まされている患者は、痛みに慣れを生じて、痛みに対する許容レベルは連続的に高くなる。
痛みの解消の兆候は、非常に早く、本発明の試験製剤のもっとも明らかな効果が見られた。最初の製剤投与から２０分乃至２時間で、痛みの解消が報告され、ほとんどの場合、２日間で、痛みは軽くまたは圧痛のレベルまで減少した。急性の痛み及び慢性の痛みを問わず、同一パターンでの痛みの軽減を報告した。治療した部位の感覚及び触覚は失われなかった。
治療前に痛みを経験しなかった患者は、最初の治療後になめらかで、楽になったことを報告した。特に、目及び口腔に対する治療（上記の例では、これらの研究のほとんどのパラメータである）では、なめらかさや楽になったことが報告された。
尿膀胱感染及び歯肉の感染において、痛みの感覚が、患者の社会生活に傷害を引き起こす。試験製剤による迅速な痛みの軽減により、患者は集中力を回復し、二日間の治療で通常の活動ができるようになった（実施例３、１０と比較）。
もっとも具象的な痛み感覚の評価は、痛みの感覚が症状を持つ足を支持する時間に関係する馬の炎症を起こした関節について行われた。結果は、人間に関する一般的研究結果と同等であった（実施例１１と比較）。
この項目に対する適正な投与量は、処置あたり０．０１乃至２００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００３１】
臨床例２０乃至４０：種々の項目
実施例２０・胃潰瘍
胃潰瘍の軽い苦痛を訴える４０歳の男性を、１カプセル中に５ｍｇのＰＨＩＭを含有する耐酸性ゼラチンカプセルにより治療した。彼は、１日に１カプセルをコップ１杯の水とともに服用した。４日経過後、胃の痛みは解消し、胃は、正常状態で、痛みもなく非常に完全な状態で活動した。
２０年間慢性的に痛みを訴える５５歳の患者を、同じ処方により治療した。数日間の治療後には、痛みが解消し、胃は正常に活動した。
胃潰瘍は、バクテリアによって発症する炎症である。まず最初に、腸内の粘膜が細菌に感染し、これが炎症に変化して、すぐに潰瘍におおわれる。これは、腸内粘膜の細胞が開散細胞となることを意味する。この状況は、皮膚への感染や傷への感染と非常によく似ている。皮膚と腸内粘膜との違いは、腸内粘膜にはペーヤ（Ｐｅｙｅｒ’ｓ）のパッチセルシステムと呼ばれる細胞組織があり、この細胞組織は非常に高い活性を持つＢ細胞及びＴ細胞等で構成されている。これらの細胞組織は、病気に対する自己免疫機能のためのゲートと考えられる。ＰＨＩＭがこの細胞組織内で作用し、敏感な粘膜層より開散細胞を排除する機能を有しているので、これが極めて局所的に作用し、クローン（Ｃｒｏｈｎ’ｓ）疾病、潰瘍性大腸炎、リウマチ性関節炎等にも効果がある。
この項目に対する適正な投与量は、処置あたり０．５乃至３００ｍｇ、好ましくは１乃至５０ｍｇである。
【００３２】
実施例２１・しわのある皮膚の治療
しわの有る皮膚は、多くはコラーゲンとクロスリンクされた自由基によって引き起こされる。自由基のけがによる形成は、バクテリアの成長にとって格好の媒体となる死亡細胞を形成しバクテリアの増殖を促進し、かつ自由基の形成を促進する。ＰＨＩＭによる死亡細胞及びバクテリアの食作用を許容することによって、しわの原因が除去される。
３３歳の女性が、ＰＨＩＭ１６０溶液により湿潤したガーゼ絆創膏を用いて６０日間毎晩治療した。毎晩使用するＰＨＩＭの合計量は、０．１５ｍｇであった。絆創膏は、３０分間皮膚に密着させて治療して、しわを除去した。
一方の目の下の部分を治療することにより、反対側を対照として使用することができる。１５日間の治療後、皮膚の弾性に違いが現れ、合計６０日間の治療で、しわに関する違いは歴然としたものとなった。治療した部分の皮膚は、非常に柔軟で、弾力があり、しわの数及び深さは、治療しない部分に比べて格段に減少した。
この項目に対する適正な投与量は、１００ｃｍ^２あたり０．０１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００３３】
実施例２２・ポリープ
肛門にポリープを持つ６２歳の男性が治療された。男性は、３年間ポリープに悩まされており、内科医の治療を受けていた。彼は、種々の薬で治療されたが、なんらの改善も見られなかった。
彼は、５ｍｌの食塩水に溶解した５ｍｇのＰＨＩＭを含むガーゼ絆創膏で治療された。治療は、合計で５回繰り返された。すべての問題は、解消し、次の内科医の診察ではポリープが無くなっていると診断された。治療後８月後、男性は、未だに苦痛におそわれていない。
この項目に対する適正な投与量は、処置あたり０．５乃至２５０ｍｇ、好ましくは１乃至５０ｍｇである。
【００３４】
実施例２３・いぼ
首にいぼを持つ３５歳の男性が、ＰＨＩＭ１０６溶液、約０．１ｍｇ／膏薬を含む膏薬（Ｈａｎｓａｐｌａｓｔ）で一週間治療された。治療は一週間、毎日行われた。一週間後、いぼは完全に消失した。
この項目に対する適正な投与量は、治療あたり０．５乃至２５０ｍｇ、好ましくは１乃至５０ｍｇである。
【００３５】
実施例２４・感冒
３０歳乃至６３歳の５人の患者が、最初のかぜの兆候から数時間のうちに治療された。治療は、４時間毎に鼻孔にスプレーするとともに、６時間おきにうがいをすることで行われた。鼻孔へのスプレーにおける投与量は、各スプレー毎に約０．１ｍｇであり、うがいは毎回約１．５ｍｇとした。うがいは、溶液を２乃至４分間口腔中に含んでから、溶液を飲み込む要領で行われた。１２時間後、かぜの症状は無くなり、痛みも消えた。
この項目に対する適正な投与量は、治療あたり０．１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００３６】
実施例２５・好血性細菌インフルエンザ
３４歳の女性は、好血性インフルエンザの感染による副鼻孔炎を訴えた。副鼻胴に圧迫感と苦痛の兆候が現れてから数時間後に、２ｍｇのＰＨＩＭ１０６の溶液で３分間うがいをし、２時間毎に４回うがいを繰り返した。これとともに、０．１ｍｇのＰＨＩＭ１０６が、各鼻孔にスプレーされた。スプレーによる治療は各３時間づつ三日間行われた。副鼻胴の感染による圧迫感は、最初の治療から数時間後にはすでに解消しており、鼻からの分泌が急激に増加した。治療三日間、女性は苦痛から解放された。
この項目に対する適正な投与量は、１００ｃｍ^２あたり０．１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００３７】
実施例２６・帯状湿疹
１０カ月から顔に非常な苦痛を伴なう帯状湿疹に感染した７０歳の男性は、約１−２ｍｇのＰＨＩＭを含有するガーゼ絆創膏で、三日毎に治療された。
最初の治療後に、かゆみが減少し、１２日後には痛みも解消した。感染により、口蓋の痛みのために、咀嚼が困難であったが、１２日後に、何の問題も無く食物を咀嚼できるようになった。
この項目に対する適正な投与量は、１００ｃｍ^２あたり０．０１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００３８】
実施例２７・ヘルペス生殖器
１０年前よりヘルペス生殖器を持つ６２歳の男性の治療を行った。苦痛は４月毎に定期的に生じ、この急性の痛みがある間、かれは、性交渉を慎んだ。
各絆創膏につき約３ｍｇのＰＨＩＭ１０６溶液に浸漬した絆創膏により治療された。治療は、一日に２回、二日間反復して行われた。苦痛は、二回目の治療後に消失していた。治療を完了してからこの１０カ月間、苦痛は発生していない。
この項目に対する適正な投与量は、処置あたり０．０１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００３９】
実施例２８・痔
二人の痔を持つ患者の治療した。一人は、５５歳の男性、他方は３０歳の女性である。女性は、約３年間痛みと軽い出血に悩まされていた。彼女は、ガーゼ絆創膏に包まれた乾燥したＰＨＩＭ１０６粉末により処置され、絆創膏は患部に貼着された。各回の投与量は５ｍｇであった。痛みが解消するまでに合計５回の治療を要した。彼女は、この１年間痛みを生じていない。
男性は、昨年中、痔がでたりでなかったりしていた。６月前に、痛みが出血を伴った急激なものとなり、その結果非常に激しい痛みを持った。男性は、約４ｍｇのＰＨＩＭ１０６に浸漬したガーゼ絆創膏で１回治療された。約２０分後に痛みは解消し、１回の治療で全ての痛みが解消し、それから痛みは再発していない。
この項目に対する適正な投与量は、処置あたり０．５乃至２５０ｍｇ、好ましくは１乃至５０ｍｇである。
【００４０】
実施例２９・旅行者の下痢
４１歳の男性が、下痢及び嘔吐を伴う食中毒（たぶんサルモネラ菌による）にかかった。１時間後、男性は病気になった。彼は、５ｍｇのＰＨＩＭ１０６により、約３分間これを口腔内に保持し、次いでゆっくり飲み込むことで、治療された。この手順を２時間おきに３回繰り返した。４回の治療で、胃痛は無くなり、嘔吐感及び激しい下痢は完全に治癒した。
この項目に対する適正な投与量は、処置あたり０．５乃至３００ｍｇ、好ましくは１乃至５０ｍｇである。
【００４１】
実施例３０・薄毛
５５歳と６２歳の二人の男性患者を治療した。彼らは、過去１０年間、薄毛に悩まされていた。頭皮全体を、各治療毎で合計５ｍｇのＰＨＩＭ１０６の溶液に浸漬して行われた。頭皮の水分を保持するために、頭皮には、シャワーキャップが３０分間被着された。処置は、約３カ月間１週間に１度繰り返された。この治療のあと、新しい頭髪がはえはじめた。
良好な結果の理由は、ＰＨＩＭ１０６がバクテリアのよい栄養となるすべての死亡及び開散細胞を効果的に分解するからである。バクテリアは、トキシンを生成し、このトキシンにより局部的に皮膚層の細胞に、大量に存在することにより頭髪の成長に悪影響を与えるＴＮＦ、潰瘍性壊死要素を生成する。死亡及び開散細胞をバクテリアとともに除去することによって、微少循環は、頭髪の代謝に好ましい影響を与える。
この項目に対する適正な投与量は、１００ｃｍ^２あたり０．０１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００４２】
実施例３１・座瘡
顔に座瘡を持つ２９歳及び３０歳の二人の女性を治療した。２９歳の女性は、激しい痛みがあり、３０歳の女性は、主に前頭部に中位の痛みがあった。
彼らは、約０．１ｍｇのＰＨＩＭ１０６により、４乃至６日間に、１日に数回ずつ治療を受けた。最初の治療後の効果は極めて顕著であり、数日の治療後、感染は解消し、回復はほぼ完全であった。１週間の治療後に、色素の痕のみが証拠であった。
この項目に対する適正な投与量は、処置あたり０．０１乃至５０ｍｇ、好ましくは１乃至１０ｍｇである。
【００４３】
実施例３２・気管支炎
５５歳の男性は、比較的悪い気管支炎をわずらっていた。この患者は、せき込んだり、さらには激しい疲労で１００ｍ以上休みなく歩くことができない症状を訴えていた。
気管支炎の原因は、内科医により抗生物質による治療に関わらず抵抗力を生じるマイコプラズマ感染によるものであり３年前に発病したものである診断された。感染は、胸膜に水がたまった。胸膜の水は、Ｘ線検査により確認された。
患者は、毎回約４ｍｇのＰＨＩＭ１０６で、うがいをすることで治療された。ＰＨＩＭ溶液を約４分間口腔中に保持し、次いでゆっくりと飲み込んだ。この治療は、最初の２週間、２日おきに繰り返された。この間、少量のＰＨＩＭ１０６が吸入された。
最初の２週間の間は、なんらの回復もみられなかった。しかしながら、２週間の治療後、首の左側のリンパ腺は腫脹し、痛みを生じた。このとき、治療は、約３回連続して行われた。１．５週間後、リンパ腺に関するすべての問題は解消し、気管支炎による患者の苦痛は鎮静しはじめた。さらに、４日毎のうがいによる３週間の治療により気管支炎による苦痛は、完全に解消した。
６．５週間の全治療の後、患者は、完全に回復し、短時間の後、問題を生じることなく５ｋｍ歩行することができた。
この項目に対する適正な投与量は、処置あたり０．１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００４４】
実施例３３・前立腺炎
５２歳の男性は、２０歳ごろから冬毎に前立腺炎の苦痛に悩まされている。最近の４年間、痛みはより激しくなり、非常に激しい腹痛となった。それぞれの激しい痛みの間に、彼は、種々の抗生物質による治療を受けたが、抗生物質治療が、完了すると、数週間で痛みが再発した。こうした良性の再発性前立腺炎に対して、男性は、カプセル毎に約５ｍｇのＰＨＩＭ１０６を含有する耐酸性カプセルを服用した。合計２週間で毎日２カプセルづつ服用した。すべての兆候が無くなり、最近の１２カ月間、痛みの再発はない。
この項目に対する適正な投与量は、処置あたり０．５乃至３００ｍｇ、好ましくは１乃至５０ｍｇである。
【００４５】
実施例３４・マイコプラズマ感染の抵抗不全
マイコプラズマ感染の抵抗不全を持つ５５歳の男性を治療した。男性は、３年前に急に発病し、種々の異なる種類の抗生物質により治療を受けたが、以下に示すようにその抗生物質に対して抵抗力が生じた。感染後数週間で、男性は、非常に高熱を発し、非常にひどい咳を伴い、Ｘ線検査中に、胸膜に水が見られた。
この患者は、せき込んだり、さらには激しい疲労で１００ｍ以上休まずに歩くことが出来ない症状を訴えていた。
患者は、毎回約４ｍｇのＰＨＩＭ１０６で、うがいをすることで治療された。ＰＨＩＭ溶液を約４分間口腔中に含み、次いでゆっくりと飲み込んだ。この治療は、最初の２週間、２日おきに繰り返された。この間、少量のＰＨＩＭ１０６が吸入された。
最初の２週間は、なんらの回復もみられなかった。しかしながら、２週間の治療後、首の左側のリンパ腺は腫脹し、痛みを生じた。このとき、治療は、約３回連続して行われた。１．５週間後、リンパ腺に関するすべての問題は解消し、気管支炎による患者の苦痛は鎮静しはじめた。さらに、４日毎のうがいによる３週間の治療により気管支炎による苦痛は、完全に解消した。
６．５週間の全治療の後、患者は、完全に回復し、短時間の後、問題なく５ｋｍ歩行することができた。
この項目に対する適正な投与量は、処置あたり０．１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００４６】
実施例３５・人間の乳腺炎
乳腺が石のように堅くなり、痛みを感じたことにより判断されてから３日後に、２８歳の女性は激しい乳腺鬱滞の苦痛に襲われた。これらの苦痛は、母乳の授乳後３０分程度で、苦痛があった。彼女は、スウェーデンのウプサラ（Ｕｐｐｓａｌｌａ）の大学病院で可能な種々の方法で治療を受けたが、治癒しなかった。
激しい痛みが始まった時に、約０．１ｍｇのＰＨＩＭ１０６の溶液を、女性の乳首に滴下した。約１５分で、すべての痛みが解消し、硬かった乳腺は、４５分後には柔軟化した。
この手順は、各授乳後に３カ月以上も続けられた。常に治療が必要であるか否かをチェックするために、授乳から激しい痛みの発生までの間、直接的な治療をときどき差し控えた。各チェック時には、激しい痛みと硬い乳腺がチェックされた。
この項目に対する適正な投与量は、処置あたり０．０１乃至２５ｍｇ、好ましくは１乃至５ｍｇである。
【００４７】
実施例３６・アレルギー性のかゆみ
２８歳の女性は、一方の膝の上と顎の下に蕁麻疹による激しいかゆみを覚えるアレルギーを持っていた。蕁麻疹は、膝の部分では白く、幾分広がり隆起したようになっており、顎の部分では全体に広がった皮膚と同色の小さな発疹となっていた。
ガーゼ絆創膏は、約２ｍｇのＰＨＩＭ１０６により湿潤された。ガーゼは、膝の蕁麻疹の部分に張り付けられた。１０分後に、ガーゼ絆創膏は取り除かれ、４５分後にはかゆみが引き始め、１．５時間後には、完全に解消した。白い隆起は無くなり、蕁麻疹は消えた。
２４時間後に、顎の下側の部分が治療された。この部位には激しいかゆみがあり、女性が引っかいたために、一層激しいものとなっていた。
ＰＨＩＭ溶液に浸したガーゼ絆創膏を直接貼着すると、かゆみが増した。ガーゼ絆創膏は、非常に激しいかゆみのために７分後に取り除かれた。その後１．５時間の間に、かゆみが軽くなり、１．４５時間で完全に解消した。
４８時間及び２４時間を経過して、膝及び顎の部分には何の問題も見られなかった。
この項目における適正な投与量範囲は、１００ｃｍ^２当たり０．０１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００４８】
実施例３７・腱の腱鞘への膠着防止
この研究の目的は、兎のかかとの腱の破断の治癒時におけるクリルより生成されたマルチ蛋白質の膠着防止特性を調査することにある。２羽の兎の左のかかとを破断させ、即座に分離・重合技術により手術後左足が固定出来るように縫合した。
手術から５日後、腱と腱鞘との間の膠着の症状が見られた。そこで、５日目に１ｍｇ（０．２５ｍｌ）のマルチ蛋白質を間質的に腱鞘に注射し、ついで７日目と９日目に治療を繰り返した。最初の注射後、腱と腱鞘の間の膠着の症状は見られず、腱は腱鞘に対して自由に摺動した。手術後６週間で、膠着は再発しなかった。
手術後８カ月で、動物は犠牲となり、その腱の膠着、線維及びコラーゲンの伸びが目視的に検査された。腱と腱鞘は、各別に治癒し、なんらの膠着の兆候も見られなかった。手術を受けた左足の腱の引張強さを手術を受けていない右足の腱と比較したところ、引張強さの相違は検出されなかった。
マルチ蛋白質は、腱と腱鞘それぞれの正しい治療に必要なフィブリンに影響を与えることなく、フィブリンの余剰を明確に分解する。
この項目における適正な投与量範囲は、処置当たり０．１〜１００ｍｇ、好ましくは１〜１０ｍｇである。
【００４９】
実施例３８・手首の膠着の解消
この研究の目的は、運動能力が低下した手首の線維組織の分解におけるマルチ蛋白質の効き目を調査することである。
４０歳台の女性は、複雑骨折後の剛性ギブス包帯により長期間固定された結果、正常な運動能力の２５％の手首の堅さに悩まされていた。
トレーニングプログラムに拘わらず、影響を受けた関節の回復は、はかどらず、線維が関節内部を覆っているための膠着であると診断された。
２ｍｇ（０．５ｍｌ）のマルチ蛋白質が、３日毎に４回、関節内に注射された。運動能力は、良好に改善され、１４日間で５０乃至６０％の運動能力が得られた。この女性は、４カ月間のトレーニングの後に、７０乃至８０％の運動能力が回復した。
副作用は見られなかった。
この項目における適正な投与量範囲は、投与毎に、０．１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至１０ｍｇである。
【００５０】
実施例３９・単一蛋白質の血栓防止・栓塞防止特性
この研究の目的は、血栓及び栓塞に対するクリルより生成された単一蛋白質の効力を調査するものである。
血栓は、適切な血栓が生じるまで、耳の主静脈の人工的な血行停止により発生された。０．５ｍｇ（０．２ｍｌ）の単一蛋白質が、血栓に向かう方向の虚血部から２ｃｍの部位の静脈に注射された。３０分以内で、血栓が完全に溶解し、血液は自由に流れた。当該部位には、小さな壊死が生じたが、７日以内でそれらは吸収された。
実験用動物では、４乃至５日間で虚血部は全体的に壊死した。
この項目における適正な投与量範囲は、処置毎に０．１乃至２００ｍｇ、好ましくは１乃至１０ｍｇである。
【００５１】
実施例４０・緑内障の治療
この研究の目的は、増加した眼圧の治療に対するマルチ蛋白質の効力を調査するものである。
７４歳の男性は、右目に僅かな痛みと不快感を持っており、眼圧の増加に苦しめられていることがわかった。検査中に、圧力の増加が、恒常的なものであり、急性のものでは無いとの判断がなされた。
０．１ｍｇのマルチ蛋白質が４日毎に影響を受けている目に、合計３回点眼された。治療後２週間で、眼圧は、正常になり、さらに治療後４カ月の圧力は正常であった。
男性は、最初の治療後２０分以内で、痛みが解消した。
副作用は見られなかった。
この項目における適正な投与量範囲は、処置毎に０．０１乃至５０ｍｇ、好ましくは０．１乃至５ｍｇである。
【００５２】
実施例４１・試験管内におけるＨＩＶ感染を持つ細胞列に対する抗ウイルス効果
この研究は、スウェーデン国立細菌研究所（ＳＢＬ）で行われた。マルチ蛋白質は、ＡＺＴ及びホスカネット（Ｆｏｓｃａｒｎｅｔ）と比較された。すべての製剤は、非希釈状態のから１０^ー５（マルチ蛋白質の最高濃度は５ｍｇ／ｍｌ）に希釈して試験された。製剤は、４０乃至６０％がＨＩＶ−Ｉに感染している細胞列に、同一でかつ標準的な条件で添加された。
低希釈度のＡＺＴ及びホスカネットにおいては、培地内のすべての細胞が攻撃され、死滅させられた。これらの培地からは、死滅し、押しつぶされた細胞のみが検出された。
低希釈度のマルチ蛋白質は、ウイルスの抑制効果が示された。４０乃至６０％のＨＩＶ−Ｉ感染細胞を持つ培地では、初期値の細胞（培地）が攻撃され、ＨＩＶ−Ｉの表面から離脱させられた。攻撃を受けた細胞は、形態学的な変化をし、ウイルスは増殖することが出来なかった。マルチ蛋白質グループの非感染細胞は、マルチ蛋白質及び攻撃された細胞から離れたウイルスのいずれからも攻撃を受けなかった。これらの細胞は、表面に膠着し、形態学的変化を示さなかった。
しかして、クリルから生成されたマルチ蛋白質は、健康な細胞とウイルスのホスト細胞としての開散細胞とを区別することが出来、さらに、健康な細胞を傷つけることなく、開散物質を認識、捕捉、破壊出来ることが判明した。
この項目における適正な投与量範囲は、１乃至５００ｍｇ、好ましくは１０乃至３００ｍｇである。

対照：５０％感染細胞、細胞毒性及び感染率は、免疫蛍光検査により測定。

対照：５０％感染細胞、細胞毒性及び感染率は、免疫蛍光検査により測定。
【００５３】
実施例４２−運動選手の足（表皮絲状菌病）
この研究の目的は、足の表皮絲状菌病（Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｓｉｓ）に対するマルチ蛋白質の効力及び有用性を調査することにある。
この研究は、菌に感染した４１人の患者に関して行われた。治療は、一日１回、５ｃｕ／ｍｌのマルチ蛋白質の足浴を３０分間づつ３日間行うとともに、５ｃｕ／ｍｌのヒドロゲルで一晩づつ最大７日間治療した。
多くの患者において、痛みは即座に解消し、他の患者も２日以内に完全に解消した。開いた表面、割れ目及び爪の下の班は、容易に除去され、班、におい、及び感染は、三日後には無くなった。
この項目における適正な投与量範囲は、１００ｃｍ^２当たり０．０１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００５４】
実施例４３・湿疹の感染
この研究の目的は、湿疹性の脂漏症及び乾癬に対するマルチ蛋白質の効力及び有用性を調査することにある。
４０人の患者が、毎日１、２回、２．５ｃｕ／ｍｌのマルチ蛋白質ヒドロゲルで治療された。
乾燥した湿疹／班を持つ患者は、２乃至４回の治療後１乃至２日経過後には炎症及び感染の兆候を示さなかった。脂肪型の脂漏は、炎症及び感染は最初の２乃至４日で消えたが、脂漏自体は６乃至９日で解消した。
乾癬を持つ患者は、通常のステロイドクリームに比べて高い効き目があった。これは、マルチ蛋白質による班の効果的な除去により、ステロイドより表皮への接触性が向上されたためと思われる。
この項目における適正な投与量範囲は、１００ｃｍ^２当たり０．０１乃至１００ｍｇ、好ましくは０．１乃至２５ｍｇである。
【００５５】
実施例４４・包皮感染
この研究の目的は、幼児の包皮感染に対するマルチ蛋白質の効力及び有用性を調査することにある。
二人のそれぞれ生後４週間と６週間の幼児を１ｃｕ／ｍｌのマルチ蛋白質溶液で、毎日２回、朝晩に治療した。約１０ｍｌの溶液が、包皮内に標準の注射器と柔軟なカテーテルを用いて流された。３日後に、両幼児は、感染の兆候も無く、その後２カ月間感染は再発しなかった。
この項目における適正な投与量範囲は、１回の処置当たり０．０１〜１００、好ましくは１〜２５ｍｇである。
【００５６】
実施例４５・犬の包皮感染
この研究の目的は、犬の包皮感染に対するマルチ蛋白質の効力及び有用性を調査することにある。
６頭の犬は、包皮状態で、毎日１度、１ｃｕ／ｍｌのマルチ蛋白質で洗浄された。１０ｍｌのマルチ蛋白質溶液が、標準の使い捨て注射器に吸引された。柔軟なシリコンカテーテルが、注射器に取り付けられ、カテーテルが、包皮状態で挿入され、当該部分がゆっくりと洗浄された。約１ｍｌの溶液は、包皮状態で最低２分間保持され、犬が当該部分を３０分間なめないようにした。
膿は２日以内に止まり、すべての症例において、感染及び炎症の症状は、４日以内で解消した。
この項目における適正な投与量範囲は、投与毎に０．１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００５７】
実施例４６・一般的な目的の点眼
この研究の目的は、臨床的な炎症及び感染の兆候が無い状態で、「疲労し、刺激を受けた」目に対するマルチ蛋白質の効力及び有用性を調査することにある。
眼病の記録がなく、空気汚染に対するアレルギー反応もなく、また目の感染／炎症のない１２人の患者が、目の「疲労及び刺激」のためのみに治療を受けた。０．１ｃｕ／ｍｌのマルチ蛋白質溶液を２滴、必要に応じて点眼した。
すべての患者が、点眼後３０分以内に緊張及び少しの痛みの軽減を経験した。光の感度、焦点の変化または瞳孔の拡張は報告されなかった。ときどき、一時的な目の乾きが経験された。
炎症、涙の分泌の増加又は他の副作用は見られなかった。
この項目における適正な投与量範囲は、処置毎に０．０１乃至５０ｍｇ、好ましくは０．１乃至５ｍｇである。
【００５８】
実施例４７・子牛の膿瘍
この研究の目的は、５ｃｕ／ｍｌのマルチ蛋白質溶液を用いた場合の子牛の膿瘍に対する有効性及び有用性を調査することにある。
カルシウム溶液注射の後、首に約２５乃至４０ｍｌの膿瘍ができた２頭の、子牛に毎日１回治療された。１０ｍｌのマルチ蛋白質溶液が排液管から注入され、最低４時間保持された。ついで管を開き次の治療まで放置した。
３回目の治療後に、排出された液体は透明になり、６回目の治療後に管が取り除かれた。９乃至１２日後には、「ポケット」が完全に治癒した。
この項目における適正な投与量範囲は、処置毎に０．１乃至２００ｍｇ、好ましくは１乃至２０ｍｇである。
【００５９】
実施例４８・犬のおでき
この研究の目的は、犬の足の感染によるおできに対するマルチ蛋白質の有効性及び有用性を調査することにある。
爪先の間に、痛みが激しく、感染し、出液／出血のあるおできを持つ３頭のボクサー犬が、５ｃｕ／ｍｌのマルチ蛋白質溶液により毎日２回治療された。
ガーゼに２ｍｌの溶液をしみこませて、おできに当てた。足には、ガーゼを保持するために絆創膏が巻き付けられ、これを保護するためにゴム製のブーツが用いられた。
１日後に明らかな痛みの軽減が見られ、膿、出液／出血は、２日後に止まった。治療から５乃至７日後、僅かな炎症の兆候のみが見られ、１１乃至１５日後には吹出物のすべての症状が消え、犬は自由に動き回れるようになった。
この項目における適正な投与量範囲は、処置毎に０．１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００６０】
種々の症状に対する投与量
図１３は、一つの特定の症状、即ち火傷に対する投与量−反応曲線を示し、損傷部位１００ｃｍ^２当たりのＰＨＩＭのｍｇ量の関数として抗菌作用で表される有効率を示している。損傷部位１００ｃｍ^２当たり約２ｍｇのＰＨＩＭの投与量において、ほぼ１００％の有効率が得られた。投与量−反応曲線は、他の用途における有効率をも示している。
図１４は、投与量範囲、即ち、種々の症状における治癒した患者により規定される有効率１００％に到達する投与量を示している。有効性は、患部１００ｃｍ^２当たりのＰＨＩＭの量に対してプロットされている。概略の投与量範囲（ｍｇ
ＰＨＩＭ・１００ｃｍ^２患部）
− 目の感染 ０．５ − ０．８
− 炎症 ０．１ − １５
− ウイルス感染 ０．１ − １
− 菌感染 １ − １５
− 細菌感染 ０．５ − ２５
− 痛み止 ０．１ − ２５
図１５は、治癒に至るまでに蓄積される体重１ｋｇ当たりのＰＨＩＭの最大蓄積重量を示している。即ち、種々の症状に対する臨床の最終点における体重１ｋｇ当たりのＰＨＩＭの最大蓄積重量を示している。概略の各症状における最大蓄積量は（ｍｇ ＰＨＩＭ／ｋｇ体重）は以下の通りである。
− 目の感染 １
− 局所の傷の感染 ５
− 潰瘍感染 ９
− 菌感染 ５
− 単純ヘルペス感染 ５
− 脂肪膚班 １８
− 全層火傷 ２０
− 条件依存感染 ２８
図１６は、治癒に至るまでに蓄積される体重１ｋｇ当たりのＰＨＩＭの最小蓄積重量を示している。各症状における概略の最小蓄積量は（ｍｇ ＰＨＩＭ／ｋｇ体重）以下の通りである。
− 目の感染 ＜１
− 局所の傷の感染 ３
− 潰瘍感染 ７
− 菌感染 ３
− 単純ヘルペス感染 ４
− 脂肪膚班 １３
− 全層火傷 １３
− 条件依存感染 １５
【００６１】
臨床例１乃至５１の結論
本発明による単一蛋白質及びマルチ蛋白質製剤は、食細胞の活動モードに近い作用をすべての範囲で行う。
調査された症状においては、なんらの臨床的制限及び欠点は見いだせなかった。一方、これとは逆に、製剤は、自己免疫による防護が作用しない、例えば傷が安定状態において、また、条件依存感染等の免疫による保護が完全に抑制されている、例えば臨床的状態において、良好な効力を発揮する。
【００６２】
副作用
上記に報告した研究を含む多くの患者において、副作用は見られなかった。複数のアレルギー、食物アレルギー、皮膚過敏症、ドライアイ等に悩まされている患者や、抑制され又は異常に活発な免疫系を持つ患者が研究に含まれ、副作用の兆候もなく個別に試験された。
請求の範囲に記載されたマルチ蛋白質及び単一蛋白質は無毒なものであることが示された。
こうした完全でかつ予備の臨床的調査に基づいて、本発明による物質及び化合物が、緑内障、トラコーマ、癌、ＡＩＤＳ／ＨＩＶ、リウマチ性関節炎、クローン病、多発性硬化症、潰瘍性結腸炎等の自己免疫性疾病、コレラ、ハンセン氏病、マラリア、肝炎、チフス神経性熱病等の疾病、敗血症、臓器や組織の移植（予防）技術、美容等に効果があると結論するのは妥当である。
【００６３】
臨床例４９・癌
この研究は、日本の山口大学の、マキタタカシ教授によって行われた。
背景
癌は、非常に複雑な病気であり、多数の異なる疾病で構成されている。この複雑さは、腫瘍が大きくなるにつれて増大し、主腫瘍は、他の組織及びリンパ節に転移する。腫瘍の増加による作用は、日和見感染であり、この一部は腫瘍自体による免疫保護系の抑圧の結果として生じるが、また、癌の治療として今日最も一般的に用いられている化学療法による場合もある。
伝統的な化学療法の使用に関しては、多くの異なる問題が提起されている。主要な問題は、抗ガン剤が、健康な細胞と癌細胞を区別する性質を有していないことにある。これは、免疫保護に必要な白血球が、化学治療により破壊されてしまうため、最も深刻な問題である。従って、癌患者を最良の方法で治療することが出来ない。
免疫の低下は、腫瘍の活動を増加させると共に、制御不能な日和見感染を増加させる。最良の治療の可能性の低さと日和見感染により、癌患者の生存率を低下させている。人間に関して、うまくコントロールされた研究は非常に少なく、癌の種類によるが、治療の効力は約２０乃至２５％となっている。
一次及び二次肝臓癌患者に対して日本で行われたうまくコントロールされた第二段階の研究において、反応率（ＣＲ及びＰＲ）は、アドリアマイシン（Ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）に関して９．５％、ミトマイシンＣ（Ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ Ｃ）では２０％であった（Ｔ．Ｔａｇｕｃｈｉ ｅｔ ａｌ． ＲｅｇｉｏｎａｌＣａｎｃｅｒ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ （１９９２） ４：１６１−１６５参照）。
動物研究においては、人間の患者の治療に比べて大量の抗ガン剤の投与により効力が高くなっている。これは、目的とするパラメータを除き動物モデルから副作用を研究することが非常に困難なためである。歴史的なデータの比較は、非常に困難である。
しかしながら、ヨシダ肉腫を移植したラットにシスプラチン（Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）を用い、腫瘍細胞を除去し、生存している細胞を調べるために培養したところ、５３％の細胞は、シスプラチンによって死滅しなかった（Ｋ． Ｒ． Ｈａｒｐ ｅｔ ａｌ． Ａｎｔｉｔｕｍｏｒ， Ｔｏｘｉｃ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ 参照）。
同様のことが、０．５ｍｇ／ｋｇまでの投与量で、ミトマイシンＣを用いて行われた治療で実験された。この場合、抵抗力を持たないヨシダ肉腫に対する効力は、ラットの３０日の生存率で見ると約１００％である。ラットに用いられた投与量０．５ｍｇ／ｋｇは、患者にとって致命的な骨髄の収縮等の深刻な副作用があるため、人間には投与不能である。ヨシダ肉腫は、容易にミトマイシンＣに対する抵抗力を付け、この場合、０．５ｍｇ／ｋｇという多量の投与、またはそれ以上の投与量においても何の効果も認められなかった。
上記の投与量レベルまたはそれよりも少ない投与量レベルにおける副作用は、体重の減少、頭髪の減少、白血球の減少及び慢性的な下痢である（Ｍｉｔｏｍｙｃｉｎ Ｃ、協和発酵株式会社、日本国東京都、参照）。アドリアマイシン、シスプラチン、ミトマイシンＣ等の抗ガン剤は、非常に有毒であり、静脈内及び動脈内投与に限られる。
さらに、腫瘍細胞は、しばしば、細菌が抗菌剤に対する抵抗力を獲得するのと同様に、抗ガン剤に対する抵抗力を獲得する。抵抗力の獲得は、治癒可能な治療に対して極めて深刻な欠点である。
【００６４】
試験手順及び結果の要約
この研究の目的は、ラットにおけるヨシダ肉腫の治療におけるＰＨＩＭ１０６の有効性及び有用性を調査することにある。
ＰＨＩＭ１０６は、腹膜内（ｉ．ｐ．）、腫瘍内（ｉ．ｔ．）及び皮下（ｓ．ｃ．）の三つの異なるルートで、ヨシダ肉腫を移植された白いウイスターラット（Ｗｉｓｔａｒ ｒａｔ）に注射された。ＰＨＩＭ１０６は、単一の５ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．、ｉ．ｔ．及びｓ．ｃ．注射で用いられ、反復投与として、７日間１．２５ｍｇ／ｋｇのｓ．ｃ．を一日２回、５ｍｇ／ｋｇのｓ．ｃ．を二日おきに合計４回、１２．５ｍｇ／ｋｇのｓ．ｃ．を二日おきに合計４回注射した。
治療は、腫瘍の大きさが１０ｍｍｘ１０ｍｍとなった時に開始された。
ラットは、注射完了後、７日後に犠牲となった。腫瘍の大きさが計測され、治療を受けなかった実験用ラットのものと比較された。
腫瘍の大きさの減少は、一回のｉ．ｔ．注射で治療されたラットでは４６％、一回のｓ．ｃ．注射で治療されたラットでは５６％、一回のｉ．ｐ．注射で治療されたラットでは４９％であった。
１．２５ｍｇ／ｋｇをｓ．ｃ．で７日間反復して、一日２回づつ投与されたラットグループでは、効力は７２％であった。
５ｍｇ／ｋｇと１２．５ｍｇ／ｋｇをｓ．ｃ．で二日おきに合計４回づつ投与されたラットグループでは、腫瘍の反応はそれぞれ５３％及び６９％であった。
１２．５ｍｇ／ｋｇの投与を受けたグループのラットの１頭には、負の腫瘍成長が見られた。治療を受けたグループの転移の度合いは、治療を受けない対照ラットのグループに比べてはるかに小さかった。
治療を受けたラットは、飲食において正常な挙動を示したが、対照ラットでは正常な挙動を示さなかった。副作用は、この試験中、認められなかった。
【００６５】
ＰＨＩＭ１０６の説明
上記のように、ＰＨＩＭ１０６は、酵素的な特性を備えた蛋白質の略称であり、以下の試験においては南極クリルである海洋資源から生成されるものである。本発明の根本である新しい特性が、これらの蛋白質中に発見された。蛋白質が、まず病気及び開散している細胞を細菌とともに認識し、酵素的な特性により目的細胞を破壊するという仮説である。健康な細胞にはなにも起こらない。
シャープな選択性のメカニズムについては、現在調査中であるが、この作業は蛋白質が、我々が保有している免疫系と同じ信号に反応することが出来、すべての外部侵入物及び開散細胞を攻撃するのではないかと仮定するものである。
ガン細胞は、感覚的に開散性であり、腫瘍蛋白質の断片を細胞表面に表し、それらが免疫系によって健康な細胞との比較において開散性であると認識される。
ＰＨＩＭ１０６は、なんらの副作用なしに、４００人以上の患者に対して人体による研究のために一般的に使用されている。
動物においては、毒性は検出されておらず、ＰＨＩＭ１０６／ｋｇを５ｇまでを体重当たりラットにｉ．ｖ．注射され、なんらの毒性の兆候も見られなかった。
ＰＨＩＭ１０６は、２４−３４，０００ダルトンのサイズであり、海洋資源から生成されたものである。抗体を生成するものと予測されたが、兎及びモルモットに免疫を付与する際に、抗体は検出されなかった。
【００６６】
資料及び方法
研究の目的
比較研究において注射から投与に対する反応曲線までの一連の流れである、投与のルート及び全体的なＰＨＩＭ１０６の有用性を調査するために、白色のウイスターラットにヨシダ肉腫を植え付けた。
第二の目的は、ウイルス及びリンパ管からの腫瘍の治療に用いることにより、ＰＨＩＭ１０６の目的特性が研究された。
研究の設計
比較研究は、ＰＨＩＭ１０６は、単一のｉ．ｐ．、ｉ．ｔ．及びｓ．ｃ．注射で用いられ、反復投与として、ｓ．ｃ．を二日おきに合計４回行った。対照ラットには、治療は行われなかった。治療は、腫瘍の大きさが１０ｍｍｘ１０ｍｍとなった時に開始された。
ラットは、治療の７日後に犠牲となり、腫瘍の大きさが計測された。組織病理学的な検査が行われた。
【００６７】
ＰＨＩＭ１０６の形成
ＰＨＩＭは、保存剤及び抗菌剤を添加していない凍結乾燥された白色粉末である。
白色の粉末は、食塩水によって注射用に希釈され、最終濃度は５ｍｇ／ｍｌとされた。
手順
１ｘ１０^４のヨシダ肉腫が、白色ウイスターラットの背中の皮下に移植された。治療は、腫瘍の大きさが１０ｍｍｘ１０ｍｍとなった時に開始された。
ＰＨＩＭ１０６は三つの異なったルート、腹腔内（ｉ．ｐ）、腫瘍内（ｉ．ｔ．）及び皮下（ｓ．ｃ．）で腫瘍から約３−５ｃｍの皮膚の健康な部分に注入された。
動物は、以下の７つのグループに分割された。
グループ１．
治療がなされなかった１１匹のラットからなる対照グループ。
グループ２．
直接腫瘍の中心に（ｉ．ｔ．）治療がなされた５匹のラット。
グループ３．
皮下的に（ｓ．ｃ．）５ｍｇのＰＨＩＭ１０６／ｋｇの１回の注射による治療がなされたもの。
グループ４．
腹腔内に（ｉ．ｐ．）５ｍｇのＰＨＩＭ１０６／ｋｇの１回の注射による治療を受けた１匹のラット。
グループ５．
皮下的に（ｓ．ｃ．）１．２５ｍｇのＰＨＩＭ１０６／ｋｇを１日２回、７日間治療された３匹のラット。
グループ６．
皮下的に（ｓ．ｃ．）５ｍｇのＰＨＩＭ１０６／ｋｇを２日毎に総計４回治療された５匹のラット。
グループ７．
皮下的に（ｓ．ｃ．）１２．５ｍｇのＰＨＩＭ１０６／ｋｇを２日毎に総計４回治療された５匹のラット。
ラットは、注射完了後、７日後に犠牲となり、腫瘍の大きさが測定された。対照グループのラットも治療を受けたラットと同じ日に犠牲となった。
組織病理学も、すべてのグループの腫瘍に関して実行された。
その後の検査のために血液を集め、保存した。
【００６８】
結果
グループ２において、腫瘍の大きさの減少は、一回のｉ．ｔ．５ｍｇ ＰＨＩＭ１０６／ｋｇの注射による治療されたラットでは４６％であった。
グループ３においては、一回のｓ．ｃ．５ｍｇＰＨＩＭ１０６／ｋｇの注射で治療されたラットでは５６％であった。また、グループ４は、グループ２および３と同じ治療で、ｉ．ｐ．によるが、腫瘍の減少は４９％であった。
グループ６、７において、ｓ．ｃ．５ｍｇ／ｋｇと１２．５ｍｇ／ｋｇＰＨＩＭ１０６／ｋｇを二日おきに合計４回づつ投与したラットグループでは、腫瘍の減少はそれぞれ５３％及び６９％であった。
もっとも高い効力は、反復して７日間治療したグループ５にみられた。対照グループとの比較において、サイズの減少率は７２％であった。図１７、１８、１９参照。
すべての治療を受けたグループにおいて、５０％以上のサイズの腫瘍は、対照グループの腫瘍に比べて、非常に多くが壊死状態であった。写真１、２参照。
ＰＨＩＭ１０６の注射後２４時間以内で、腫瘍は壊死状態にあるようにみえる。
治療中及び後に、なんらの副作用も認められなかった。
腫瘍の壊死状態の部分のサイズが増加し、腫瘍は小さくなり、対照ラットとの差異がより明らかとなった。写真３、４参照。
対照グループと治療を受けたラットの体重差が認められるものもある。対照グループのラットは、治療を受けたラットよりも増加した。
治療中及び後に、なんらの副作用も認められなかった。
この項目に対する最適な投与量は、一処置当たり、０．１〜５００ｍｇ、好ましくは１〜３００ｍｇである。
【００６９】
説明
ラットの数が限られているので、統計的な計算を行うことは出来ない。しかしながら、この研究の目的は、投与数に関して腫瘍に対する効果を調査することにあり、ＰＨＩＭ１０６の量は、体重１ｋｇ当たりで計算され、さらに、異なる投与ルートを用いれば、ＰＨＩＭ１０６が腫瘍を攻撃したかどうかの指標を得ることである。
全体的な有用性に関する感触を得ることも、本研究の非常に重要な目的である。
免疫学的な見地から、癌細胞は、開散性であり、ＰＨＩＭ１０６は、上記に従って、投与モードとは無関係に、開散細胞の特性を認識し、これを目標として、腫瘍細胞を攻撃、破壊する。結果は、腫瘍に対する効力は大きく、ｉ．ｐ．、ｉ．ｔ．またはｓ．ｃ．のいずれにより注射された場合にも効力は同様である。
ヨシダ肉腫は、非常に早く増殖するので、一回の投与に比べて反復してＰＨＩＭ１０６を投与することが望ましい。
腫瘍の減少は、５ｍｇ ＰＨＩＭ１０６／ｋｇの投与を受けたグループよりも１２．５ｍｇ ＰＨＩＭ１０６／ｋｇの投与を受けたほうが大きい。
一方、７日間毎日治療をうけたラットは、合計１７．５ｍｇ ＰＨＩＭ１０６／ｋｇの投与を受け、二日おきに合計４回の注射により合計５０ｍｇ ＰＨＩＭ１０６／ｋｇによって治療されたラットに比べて僅かに優れている。
ヨシダ肉腫は、非常に悪性で、急速に増殖する。従って、毎日治療をすることがよい結果を与えるものであると予測される。治療を受けたすべてのラットは、良好な状態であり、いずれも約１０ｇ体重が増加した。これに比べて対照グループのラットの体重は２４ｇ増加した。これに関する唯一の説明は、大きな腫瘍によるものである。治療をうけたグループの腫瘍は、胃等に広がった対照グループの腫瘍に比べて、はっきりし、硬いものとなっている。これは、腫瘍が大きく占めているので、対照グループにおける腫瘍全体のサイズを測定することは、困難なものとなっている。１２．５ｍｇ ＰＨＩＭ１０６／ｋｇで治療を受けたラットの内の１匹において腫瘍自体の増殖がなかったことは、興味深い事実である。腫瘍は、開始日のサイズより約１５％減少していた。
対照グループ及び試験グループの腫瘍の組織病理学的検査では、ＰＨＩＭ１０６で治療を受けたラットには、治療を受けていないラットに比べて極めて多く壊死が見られた。
三つの異なるルートで投与された時にＰＨＩＭ１０６が活性であった事実は、ＰＨＩＭ１０６が、静脈と動脈の両方からの腫瘍を標的としていることを示している。皮下投与は、ＰＨＩＭ１０６がリンパ管に取り込まれ、リンパ系の経路を通って腫瘍に到達しなければならないので、特に興味深い。ＰＨＩＭ１０６がリンパ系に取り込まれることは、一部がこの方向で広がる転移細胞の破壊のために重要である。転移細胞の減少は、治療を受けたグループを対照グループと比較することにより明らかである。対照グループにおいては、肺、腸、肝臓に多くの転移が認識された。治療を受けたグループにおいて、９５％を越えるラットには検出可能な転移が見られなかった。残りの５％のラットには、腸の部分に少数の小さな転移が見られた。
それぞれのグループの動物の数は少ないが、すべてのラットが治療に反応したことは強調すべきである。投与方法に制限を設けず、観測すべき副作用もなしに、癌を治療するための薬剤としての使用可能性は、おそらく自然標的攻撃特性によりＰＨＩＭ１０６を新しいカテゴリーの抗ガン剤として位置づけるものである。
パイロット研究により観察されたＰＨＩＭ１０６の抗菌性は、二次感染に悩まされる癌患者の治療にとって、付加的に重要である。ヨシダ肉腫は、周知の人間の腫瘍よりも悪性の腫瘍である。
【００７０】
実施例５０・へその処置
生後４日の男児、壊死組織を除去し、感染を防止するために、ＰＨＩＭ１０６により治療された。
治療にはガーゼが用いられ、１枚のガーゼに対して約２ｍｇのＰＨＩＭ１０６溶液で飽和されたガーゼが用いられた。ガーゼは、へその緒に巻き付けられ、健康なへその緒と幾分感染した部分及びへその緒の壊死した部分を覆った。絆創膏は、１２時間毎に４回交換された。約１２時間後に、ＰＨＩＭ１０６は壊死した部分と感染した部分を排除したが、健康なへその緒の部分にはなんらの影響も見られなかった。へその緒の健康な皮膚には、なんらの劣化も見られず、いかなる感染、皮膚のかゆみ又は炎症は見られなかった。健康なへそは、さらに４回治療された。
生後６日で、乳児は病院の検査を受け、乳児がなんらの感染もなく非常に良好なへそであると診断され、同時に検査を受けた多数の乳児と対照して医師を驚かせた。
この項目における適正な投与量範囲は、処置毎に０．０１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
【００７１】
実施例５１・感染した傷
陰嚢水腫（ｈｙｄｒｏ ｃｅｌｅ ｏｃｈ ｓｃｒｏｔａｌ ｈｅｒｎｉａ）のために外科手術を受けた生後３月の男児は、手術後１０日で、手術の傷に深刻な感染による膿が発生した。外科手術の傷の一部は、抜糸後クラック状になっていた。
男児は、３日毎に４ｍｇのＰＨＩＭ１０６に浸漬した包帯で３日間治療された。３日間の治療後に、感染全体が無くなり、傷は治癒した。
手術の傷の全体は、約１５ｃｍの長さであった。
この項目における適正な投与量範囲は、処置毎に０．０１乃至１００ｍｇ、好ましくは１乃至２５ｍｇである。
マウスに対する毒性
対応する有効投与量の約１００倍までの完全な過剰投与にも拘わらず、ＰＨＩＭの人間及び動物に対するいかなる毒性も実証することが出来なかった。ＰＨＩＭの毒性は、Ｐ３８８鼠白血病（化学的に誘発された癌）を皮下に植え付けたマウスに対して試験され、ＤＯＸと略称される周知の抗ガン剤であるドキソルビシン（ｄｏｘｏｒｕｂｉｃｉｎ）と比較された。結果は、以下の表に要約されている。ＰＨＩＭグループ及び対照グループのマウスで死亡したり、体重が減少したものは無かったが、最も投与量の少なかったものを除き、ドキソルビシングループのすべてのマウスは体重が減少、又は死亡した。もっとも高いＰＨＩＭの投与量（２０ｍｇ／ｋｇ）は、この説明以前に報告されているいかなる臨床例に用いられた投与量よりも高いことは、非常に意味深いことである。
【表３】

【００７２】
投与・一般
上記の毒性試験に関して示したように、非常に大きな過剰投与に拘わらず、毒性の影響は全く見られなかった。これは、鼠白血病に関して事実であるばかりではなく、すべての臨床例においても事実である。また、過剰投与による治療効果の低下も、いかなる臨床例においても見られない。換言すれば、投与量の上限は、有効投与量よりもはるかに高く、事実いかなる（妥当な）投与量でも安全に使用することが出来る。
最小有効投与量は、治療される側の状態に応じて変える。現在好ましい種々の項目に対する投与量は、以下の通りである。
投与経路及び形態
本発明の物質は、人間及び動物の治療に、無視できる程度の毒性により安全に使用することが出来る。
種々の臨床的項目に対する治療規則は、病状のタイプ、投与経路、化合物を投与する形態、年齢、体重、治療対象の状態等を考慮して適合されなければならない。
本発明の物質は、溶液の態様で塗布又は投与する事が出来る。溶液は、局部的に（表皮の傷、無傷な皮膚）しみこませて（膀胱、瘻）、点眼薬の態様で、洗浄溶液として、吸引により、注射により（関節内、動脈内、静脈内、皮下、筋肉内）、及び鼻腔内に投与する事が出来る。
本発明の物質は、さらに、ゲルの態様で、局部的に及びしみこませて（瘻、褥瘡)、投与することが出来る。
乾燥粉末の態様の場合、物質は、局部的に、耐酸性カプセルにいれて腸内に及び吸引により投与する事が出来る。
本発明の物質の乾燥粉末は、アンプルに収容され、各アンプルは、１５ｃｕの単一蛋白質又は２５ｃｕのマルチ蛋白質を収容する。使用可能な溶液を調製するために、１アンプルの内容物は、殺菌塩化ナトリウム溶液又は殺菌水で再生され、０．１０乃至２５ｃｕのマルチ蛋白質／単一蛋白質を形成するようにされた。
本発明の物質をゲルの態様で使用する場合、粉末のマルチ蛋白質または単一蛋白質は、ヒドロゲルにより所望の濃度の使用可能なヒドロゲルに調製する。ヒドロゲルは、例えば９０％以上の水分を持つ低分子量の加水分解されたスターチで構成される。
我々の研究から、上記の投与経路を用いることにより、発明の物質は、動脈及び静脈の血液系及びリンパ系を通る経路を見つける。局部的な投与経路の場合、酵素とその適用先は直接接触する。
【００７３】
薬学的形態
粉末ーアンプル
１５ｃｕの単一蛋白質又は２５ｃｕのマルチ蛋白質が、公知の技術により周知のアンプルに充填される。
使用可能な溶液
アンプル（上記の）内容物は、殺菌塩化ナトリウム溶液（生理学的食塩水）または殺菌水により再生され、０．１０〜２５ｃｕ／ｍｌの濃度のマルチ蛋白質又は単一蛋白質となる。
ヒドロゲル
ヒドロゲルは、９０％以上の水を含む加水分解された低分子量のスターチで周知の要領で調製される。ゲルの調整中に部分毎にパッケージ化され、各パッケージは、殺菌される（オートクレーブ）。
使用可能なヒドロゲル
粉末のマルチ蛋白質及び単一蛋白質は、それ自体は公知の手法で、所望濃度、例えば２．５または５ｃｕ／ｍｌのヒドロゲルに調製される。
【００７４】
図１；単一酵素（…… ■ ……）及びマルチ酵素（…… □ ……）製剤による５日間の治療による滲出率、
単一酵素：開始から２日間は２０人の患者があり、２乃至３．５日間１８人の患者があり、３．５日間から終了まで９人の患者があった。
マルチ酵素：２．５日まで、２０人の患者で２１の傷があり、２．５から３日まで、１８人の患者で１９の傷があり、４日目から終了まで１２人の患者で１２の傷があった。
すべての患者に対し、終了の基準は、「臨床的な感染の兆候がないこと」であり、５日目で終了した。
図２：クリルから生成された単一酵素（…… ■ ……）及びマルチ酵素（…… □ ……）製剤による５日間の治療による平均紅班痕、
紅班の赤さが強められたのは、周囲の組織の腫脹、水腫の減少によるものと思われる。
図３：クリルから生成された単一酵素（…… ■ ……）及びマルチ酵素（…… □ ……）製剤による５日間の治療による平均腫脹／水腫痕。
図４：クリルから生成された単一酵素（…… ■ ……）及びマルチ酵素（…… □ ……）製剤による５日間の治療による平均痛みスコア、
痛みの間隔は、痛み無しから耐えられない痛みまで０乃至５段階の類似している尺度で、患者自身により報告された。
図５；クリルから生成されたマルチ酵素（…… □ ……）製剤による７日間の治療における平均痛み解消スコア。
図６：クリルから生成されたマルチ酵素（…… □ ……）製剤による７日間の治療における平均炎症スコア。
図７：クリルから生成されたマルチ酵素（…… □ ……）製剤による９日間の治療における感染の関数としての紅班・腫脹スコア。
図８：クリルから生成されたマルチ酵素（…… □ ……）製剤による７日間の治療における痛み間隔のスコア。
図９：クリルから生成されたマルチ酵素（…… □ ……）製剤による４日間の治療における平均排尿間の平均時間。
図１０：クリルから生成されたマルチ酵素（…… □ ……）製剤による４日間の治療における平均痛み解消スコア。
図１１：クリルから生成されたマルチ酵素（…… □ ……）製剤による７日間の治療における平均痛み解消スコア、
定義：激しい痛み：痛む足で自信を支えられない。中程度の痛み：馬が痛みのある足で、１回に３０秒以上、時々自身を支える。穏やかな痛み：痛みのある足で、１回に２分以上、馬が自身を続けて支えることができる。
図１２：７日間の治療におけるクリルからの単一酵素の、壊死、線維、膿、かさぶたの分解効力
−Ｂ−：黒色壊死組織、-- Ｙ --：黄色の線維性及び化膿した組織、… Ｒ…：赤色の顆粒状組織及び上皮
図１３： 火傷に対するＰＨＩＭの抗菌作用の有効性を示す、投与−応答曲線
図１４：回復した患者によって規定される１００％の効果にいたるために用いられるＰＨＩＭの投与−範囲間隔。
Ａ＝目の感染、Ｂ＝炎症、Ｃ＝ウイルス感染、Ｄ＝菌感染、Ｅ＝バクテリア感染、Ｆ＝痛み解消
図１５：患者に投与されたＰＨＩＭの蓄積投与量、回復に至るまでのＰＨＩＭの体重１ｋｇ当たりの最大量。
Ａ＝目の感染、Ｇ＝局所傷感染、Ｈ＝尿道感染、Ｉ＝菌感染、
Ｊ＝単純ヘルペス感染、Ｋ＝脂肪皮膚班、Ｌ＝３度熱傷、
Ｍ＝日和見感染
図１６：患者に投与されたＰＨＩＭの蓄積投与量、回復に至るまでのＰＨＩＭの体重１ｋｇ当たりの最小量。
Ａ＝目の感染、Ｇ＝局所傷感染、Ｈ＝尿道感染、Ｉ＝菌感染、
Ｊ＝単純ヘルペス感染、Ｋ＝脂肪皮膚班、Ｌ＝３度熱傷、
Ｍ＝日和見感染
図１７：対照と比較したＰＨＩＭ１０６の単一の注射の腫瘍に対する効力。
図１８：対照と比較したＰＨＩＭ１０６の反復注射の腫瘍に対する効力。
Ｂａｒ（ｎ＝４）：Ｓ．Ｃ．１．２５ｍｇ １日２回／ｋｇ Ｑ１Ｄ １−７；Ｂａｒ（ｎ＝５）：Ｓ．Ｃ．５ｍｇ／ｋｇ Ｑ４Ｄ Ｄ１、３、５、７；Ｂａｒ（ｎ＝５）：Ｓ．Ｃ．１２．５ｍｇ／ｋｇ Ｑ４Ｄ Ｄ１、３、５、７
図１９： 対照対治療を受けたグループの腫瘍の量。
図２０： 対照（低出力）。
図２１： 対照（拡大）。
図２２： 皮下（低出力）。
図２３： 皮下（拡大）。
図２４： 対照、治療無し。
図２５： 対照、治療無し
図２６： 皮下単−注射
図２７： 皮下単−注射
図２８： ＰＨＩＭ．ｐＨ７．０；３０℃で２０時間の温度安定性。
図２９： ＰＨＩＭ．の温度最適値。ｐＨ７．０；３０℃で２４時間のウシカゼインの消化領域（Ｂｉｏ Ｒａｄ Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｔａｂｌｅｔｓ）として表現された、全蛋白分解活性。
図３０： ＰＨＩＭ．のｐＨ安定性。再生されたＰＨＩＭは室温で２〜１８時間維持された。ウシカゼインの消化領域（Ｂｉｏ Ｒａｄ Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｔａｂｌｅｔｓ）として表現された、全蛋白分解活性。
図３１： ＰＨＩＭのｐＨ最適値。３０℃で１６時間。ｐＨ５．０，６．０，７．０，８．０，９．０及び９．５でウシカゼインの消化領域（Ｂｉｏ ＲａｄＰｒｏｔｅａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｔａｂｌｅｔｓ）として表現された全蛋白分解活性。
図３２： ＰＨＩＭの投与活性曲線。ブラッドフォードによるプロテイン濃度（Ｂｒａｄｆｏｒｄ， Ｍ． Ａｎａｌ． Ｂｉｏｃｈｅｍ．， ７２，２４８， １９７６）。ｐＨ７．０、温度３０℃で２４時間投与：０．１，０．３，０．５，０．９，１．５，２．５，５．０及び１５ｍｇでウシカゼインの消化領域（Ｂｉｏ Ｒａｄ Ｐｒｏｔｅａｓｅ Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ Ｔａｂｌｅｔｓ）として表現された全蛋白分解活性。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の単一及びマルチ酵素での平均分泌率を示す図である。
【図２】本発明の単一及びマルチ酵素での平均紅斑痕を示す図である。
【図３】本発明の単一及びマルチ酵素での平均腫脹／水腫痕を示す図である。
【図４】本発明の単一及びマルチ酵素での外科手術傷の処置における平均痛みを示す図である。
【図５】本発明のマルチ酵素による苦痛をともなう細菌性感染の７日間の処置に関する平均痛み解消を示す図である。
【図６】本発明のマルチ酵素による苦痛をともなう細菌性感染の７日間の処置に関する炎症記録を示す図である。
【図７】本発明によるマルチ酵素を上側気道に用いた場合のウイルス性感染の９日間の処置に関する紅班／腫脹の記録を示す図である。
【図８】図８は、本発明によるマルチ酵素を上側気道に用いた場合のウイルス性感染の９日間の処置に関する痛み感覚の記録を示す図である。
【図９】本発明のマルチ酵素を用いた膀胱及び尿道感染の４日間の処置における排尿の平均時間の記録を示す図である。
【図１０】本発明のマルチ酵素を用いた膀胱及び尿道感染の４日間の処置における鎮痛の記録を示す図である。
【図１１】本発明のマルチ酵素を用いた競走馬の急性関節炎の７日にわたる処置における平均苦痛軽減を示す図である。
【図１２】壊疽性術後創傷に対する単一酵素の分解効率を示す図である。
【図１３】火傷に対するマルチ酵素（ＰＨＩＭ）の投与−反応曲線を示す図である。
【図１４】種々の項目に対するマルチ酵素（ＰＨＩＭ）の投与−反応間隔を示す図である。
【図１５】種々の項目に関する治癒に至るまでのマルチ酵素（ＰＨＩＭ）の体重１ｋｇ当たりの最大蓄積量を示す図である。
【図１６】種々の項目に関する治癒に至るまでのマルチ酵素（ＰＨＩＭ）の体重１ｋｇ当たりの最小蓄積量を示す図である。
【図１７】ＰＨＩＭ１０６の単一の注射（ＩＴ、ＩＰ及びＳＣ）による潰瘍処置の効果を、対照グループとの対比で示す棒グラフである。
【図１８】ＰＨＩＭ１０６を皮下に反復して注射した場合の、図１７と同様の図である。
【図１９】投与量を変化させて、ＰＨＩＭ１０６を投与した場合の潰瘍の大きさを、対照グループとの対比で示す図である。
【図２０】ラットの組織病理学的断面を示す図である。
【図２１】図２０の異なる縮尺による図である。
【図２２】本発明により処置されたラットに関する、図２０及び図２１と同様の図である。
【図２３】本発明により処置されたラットに関する、図２０及び図２１と同様の図である。
【図２４】未処置の実験用ラットの潰瘍を示す写真である。
【図２５】未処置の実験用ラットの潰瘍を示す写真である。
【図２６】本発明により単一の皮下注射により処置したラットの写真である。
【図２７】本発明により単一の皮下注射により処置したラットの写真である。
【図２８】ＰＨＩＭの温度安定性、即ち、異なる温度における時間に対するＰＨＩＭの相対活性率を示す図である。
【図２９】ＰＨＩＭの最適温度、即ち、温度の関数としての全蛋白質分解活性を示す図である。
【図３０】ＰＨＩＭのｐＨ安定性、即ち、異なるｐＨ値における時間に対する相対活性率を示す図である。
【図３１】ＰＨＩＭの最適ｐＨ、即ち、ｐＨの関数としての全蛋白質分解活性を示す図である。
【図３２】ＰＨＩＭの投与量／活性曲線、即ち、ＰＨＩＭの投与量の関数としての全蛋白質分解活性を示す図である。

Claims (11)

1. 南極クリルから分離された、歯垢を除去するのに有効な量の加水分解性エンザイム成分を含む歯垢除去組成物。
2. エンザイム成分は、エンドペプチダーゼ活性及びエキソペプチターゼ活性を有する請求項１記載の組成物。
3. エンザイム成分は、少なくとも二つのエンドペプチダーゼ活性と少なくとも二つのエキソペプチターゼ活性を有する請求項１又は２記載の組成物。
4. エンドペプチダーゼ活性は、トリプシン及びキモトリプシンから選択される請求項１〜３のいずれかに記載の組成物。
5. エキソペプチダーゼ活性は、カルボキシペプチターゼ活性である請求項１〜４のいずれかに記載の組成物。
6. 加水分解性エンザイムは、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで決定して、２０〜４０ＫＤの分子量を有する請求項１〜５のいずれかに記載の組成物。
7. 加水分解性エンザイム成分は、オキアミ属から分離された成分である請求項１〜６のいずれかに記載の組成物。
8. エンザイム成分は、ＩＶＧＧＭ／ＮＥＶＴＰＨＡＹＰＷＱＶＧＬＦＤＤＭＹＦ（ＳＥＱ ｉｄ ｎｏ １７）からなるＮ−終端配列を有する請求項１〜７のいずれかに記載の組成物。
9. 薬学的に受容可能な担体で処方された請求項１〜８のいずれかに記載の組成物。
10. 薬学的に受容可能な担体は、局所用担体であり、そして組成物は局所用組成物である請求項８記載の組成物。
11. 歯垢の処理に適した薬剤の製造のための請求項１〜１０のいずれかの組成物の使用。

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