RU2003346C1 - Композици дл ферментативного гидролиза белков - Google Patents

Abstract

Использование: медицина и ветеринари . Цель: повышение эффективности композиции и расширение спектра ее применени  Сущность изобретени : композици  содержит, мас%: комплекс иммобилизованных на водорастворимом носителе бактериальных нейтральных и щелочных про- теиназ из Baalus subtilis с активностью 12 - 750 ПЕ/мл 10 - 30, а в качестве наполнител  и носител  - полиэтиленгликоль с молм. 1500 «Да или гель на его основе 70 - 90. Композици  сокращает сроки лечени  в среднем в 2 раза

Description

Изобретение относитс  к области медицины и ветеринарии, эименно к препаратам дл  лечени  гнойно-некротических заболеваний человека и животных.

Предложенна  композици  включает 5 иммобилизованный на водорастворимом носителе комплекс нейтральных и щелочных протеиназ (ИКП) из Bacillus subtlllls с активностью 12-750 ПЕ/г, а в качестве наполнител  полиэтиленгликоль с мол.м. 600- W 2000 кДа или гель полиэтиленгликол  (ПЭГ-гель), вз тые в оптимальных концентраци х .

Предлагаема  композици  дл  ферментативного гидролиза белков некротических 15 тканей и гнойных масс содержит, мас,%: Комплекс иммобилизованных на водорастворимом синтетичес-f ком полимере нейтра-20 льных и щелочных проте- иназ из Bacillus subtlllls с активностью 12-750 ПЕ/г 10-30 Наполнитель - полиэтилен- гликоль или гель полиэти-25 ленгликол  с мол.м. 600-2000 кДа 70-90 Полученна  композици  представл ет собой бесцветную в зкую жидкость без вкусе и запаха, растворимую в воде. Предлага- 30 ёма  композици  может быть применена в любой области медицины и ветеринарии дл  лечени  различных заболеваний, где необходим ферментативный гидролиз белков некротических тканей и гнойных масс.35

Предлагаема  композици  была испытана в медицине, конкретно стоматологии дл  лечени  среднего и глубокого кариеса зубов, пульпитов, периодонтитов, в пульмонологии дл  лечени  бронхолегочных забо- 40 леваний, в хирургии дл  лечени  гнойных ран различной этиологии, в офтальмологии дл  удалени  непрозрачного сло  роговицы при термических и химических ожогах дл  восстановлени  зрени , а также в ветерина- 45 рии дл  лечени  послеродовых эндометритов у коров.

Стоматологи .

Биологическа  препаровка зубов с использованием предлагаемой композиции 50 выполнена у 45 больных, имеющих средний и глубокий кариес. Вольному в первое посещение проводили оперативное раскрытие кариозной полости и вводили композицию в количестве 0,1-0,25 мл с активностью ИКП 55 50-100 ПЕ/мл под временную пломбу. Через сутки временную пломбу, гидролизо- ванные избирательно некротические ткани и композицию удал ли и накладывали посто нную пломбу.

В большинстве случаев (39 больных или 86,6%) дл  получени  четкого клинического эффекта достаточно было однократного введени  композиции, содержащей ИКП с активностью 50-100 ПЕ/мл.

При использовании ИКП в дозе меньше 50 ПЕ/мл возникала необходимость повторного введени  композиции дл  доочищени  кариозной полости зубов, а при использовании же дозы больше 100 ПЕ/мл возможны побочные эффекты (например, болевой синдром ).

За вл ема  композици  имеет преимущество перед традиционным очищением кариозной полости зубов путем оперативного (бормашиной) удалени  некротических тканей зуба и пломбировани  его полости, так как позвол ет строго избирательно удалить некротические ткани, не поврежда  живые ткани зуба, резко снизить вредные воздействи  на пульпу зуба вибрации и высоких температур при сверлении и безболезненно проводить очищение кариозной полости.

Пульмонологи .

В клинике композицию применили у 122 больных, страдающих различными бронхо- легочными заболевани ми (хронические бронхиты, бронхопневмонии, осложненна  бронхиальна  астма, силикозы). Композицию вводили через назотрахеальный катетер , бронхоскопили ингал ционно 1-4 раза, при этом активность действующего компонента (ИКП) составл ла 12-100 ПЕ/мл.

Через сутки после однократного введени  композиции количество мокроты у больных увеличивалось в 3-4 раза, а в зкость снижалась в 2.5-4 раза, что позвол ло сократить сроки лечени  больных в среднем в 2-2,5 раза.

Хирурги . В хирургических клиниках композицию применили у 48 больных с гнойно-некротическими процессами различной этиологии и локализации, но только дл  наружного применени .

Активность ИКП в композиции составл ла 70-750 ПЕ/мл. Композицию наносили на гнойный очаг под марлевые пов зки, которые мен ли через 1-2 дн , композицию примен ли до полного очищени  раны от гнойных масс, в среднем 3-4 дн .

Предлагаема  композици  нар ду с известным свойством, присущим протеолити- ческим ферментам - гидролизом белков некротических тканей, про вл ет и новое неочевидное свойство - сорбировать на себ  продукты гидролиза, что способствует более эффективному и быстрому очищению гнойных очагов.

Данное свойство композици  про вл ет за счет применени  в качестве носител 

дл  иммобилизации КП и наполнител  поли- этиленгликол  или его гел , которые оказались активными сорбентами продуктов прртеолиза.

Изобретение иллюстрируетс  следующими примерами конкретного выполнени .

Приготовление ПЭГ-гел .

ПЭГ-гель готовили из продажного препарата ПЭГ с мол.м. 1500 кДа (ПЭГ-1500) - 100 г ПЭГ - 1500 плавили в сосуде, погруженном в вод ную баню при 40°С и разводили в 2 л дистиллированной воды. Раствор ПЭГ облучали ускоренными электронами, генерируемыми линейным ускорителем электронов ИЛУ-6 (Институт  дерной физики СО РАН. Новосибирск). Энерги  электронов составл ла 2 Mev, а обща  доза 20,0 мегарад при мощности 40-500 килорад/с. Полученный гель представл ет собо.й бесцветную стекловидную массу.

Иммобилизаци  КП на ПЭГ-1500.

5 г протосубтилина раствор ли в 10% ПЭГ-1&ООвО,1 М ацетатном буфере (рН 8,2), размешива  30 мин при 2-4°С, затем раствор центрифугировали при 7000 Q, 5 мин. Протеолитическа  активность супернатанта была не ниже 1000 протеолитических единиц (ПЕ)/мл. измеренна  стандартным методом . Раствор фильтровали через мембранный фильтр дл  очистки от бактерий , продуцирующих фермент, и облучали ускоренными электронами (обща  доза 1 мегарад), как описано в примере 1. Конечна  активность препарата составила 250- 500ПЕ/мл.

Приготовление композиции.

К 20 г ИКП добавл ли 80 г ПЭГ с мол.м. 1500 кДа или гел  ПЭГ при перемешивании. Конечна  активность ИКП в композиции составила 250 ПЕ/мл. Композици  представл ет собой слегка желтоватую в зкую массу, растворимую в воде. Протеологическа  активность композиции сохран етс  два года при хранении при 2-4°С.

Использование в медицине.

Больна  Ц., 38 лет, поступила в хирургическое отделение- клиники с диагнозом: химический ожог роговицы и коньюктивы правого глаза. Со слов больной, она получила ожог правого глаза концентрированной азотной кислотой.

При поступлении: правый глаз - веки отечные, коньюктива на всем прот жении ишемична  с обширными участками некроза , лимб нечеткий. Рогова  оболочка интенсивно мутна  (фарфорова ), поверхность ее шероховата , отечна . Глубоко лежащие

отделы не видны. Острота зрени  свето- ощущение не коррегируетс . Большой назначено лечение: дезинфицирующие капли, миотические и мидриатические средства. 5 Дл  очищени  пораженной поверхности от нежизнеспособных тканей проведены инс- тилл ции композицией, содержащей, мзс.%.

ИКП с активностью 750 ПЕ/мл20

0 ПЭГ-гель с мол.м.

1500 кДа 3 раза в дечь по 0.2-0,2 мл80

Через сутки после лечени  уменьшилс  отек роговицы, через б суток началась эпи- 5 телизаци  роговицы глаза, завершивша с  через 2 недели восстановлением ее прозрачности . Острота зрени  к этому сроку тоже восстановились и составила уже 0,25-0,3,

Использование в ветеринарии. 0Композицию применили дл  лечени 

гнойно-катарального эндометрита у 119 коров черно-пестрой породы,

Из всех этих коров после отела диагностировали гнойно-катаральный эндометрит. 5 Из половых путей животных наблюдались гнойные выделени , вздутие живота, гипе- терми , учащенное сердцебиение. За период болезни животные потер ли до 29% массы тела.

0 Дл  очищени  полости матки животных от гнойного содержимого и устранени  питательной среды вегетирующей микрофлоры в полость матки с помощью шприца Жане через осеменительную пипетку вводи- 5 ли композицию, содержащую, мае % ИКП с активностью 50 ПЕ/мл10

ПЭГ с мол.м. 1500 кДэ 90 Композицию вводили в количестве 75- 0 100 мл в течение 3 сут ежедневно К концу 2 сут количество выделений резко сократилось , а на 5-е сутки выделений не наблюдалось, температура у животных нормализовалась. восстановилс  аппетит.

5Использование предлагаемой композиции позволит:

повысить эффективность лечени  за счет сокращени  сроков лечени  в среднем в 2 раза, а в р де случаев добитьс  извлече- 0 ни , недостижимого иными способами,

расширить сферу применени  композиции не только дл  лечени  гнойных ран, но и в стоматологии, пульмонологии, офтальмологии и др. област х медицины а также 5 ветеринарии.

(56) Раны и ранева  инфекци , 2Я 29 X. 1986. М„ с. 166-167.

Claims (1)

1. Формула изобретений

   КОМПОЗИЦИЙ ДЛЯ ФЕРМЕНТАТИВНОГО ГИДРОЛИЗА БЕЛКОВ некротических тканей, содержаща  иммобилизованный на водорастворимой матрице комплекс бактериальных нейтральных и щелочных протеаз и наполнитель, отличающа с  тем, что в качестве водорастворимой матрицы м наполнител  используют

   полиэтиленгликоль или гель полиэтмленг- ликол  с мол.м 600 - 2000 кДа, преимущественно 1500 кДа, при соотношении компонентов, мас.%: Иммобилизованный комплекс бактериальных нейтральных и щелочных протеаз с активностью 12-750 ПЕ/мл10-30

   Полиэтиленгликоль или гель полиэтиленгликол 70 - 90