ES2555662T3 - Preparado de huevo con propiedades regeneradoras, analgésicas y/o anti-inflamatorias - Google Patents

Abstract

Preparado de huevo que comprende una mezcla de yema y clara extraídas de un huevo fertilizado incubado durante un periodo comprendido entre 18 horas y 36 horas, en la que la mezcla de yema y clara está en una proporción en la que la cantidad de clara está comprendida entre 2% y 40% en volumen con respecto al volumen de la yema.

Description

Preparado de huevo con propiedades regeneradoras, analgesicas y/o anti-inflamatorias

5 La presente invencion se refiere a un preparado que contiene huevo fertilizado y a su procedimiento de preparacion. Tambien se refiere a su uso terapeutico como agente regenerador, agente analgesico y/o agente anti-inflamatorio, y a su uso cosmetico. Tambien se refiere al alimento funcional, suplemento dietetico o composicion farmaceutica o veterinaria que contiene el preparado de huevo de la invencion.

10 ESTADO DE LA TECNICA ANTERIOR

La inflamacion forma parte de la respuesta biologica compleja de los tejidos vasculares a estfmulos perjudiciales, tales como patogenos, celulas danadas o irritantes. La inflamacion es un intento de proteccion del organismo de eliminar los estfmulos perjudiciales e iniciar el proceso de curacion.

15

Se caracteriza por fenestracion del sistema microvascular, fuga de elementos de la sangre a los espacios intersticiales y migracion de leucocitos al tejido inflamado. A nivel macroscopico, esto normalmente va acompanado por los signos clfnicos conocidos de eritema, edema, hiperalgesia y dolor.

20 Sin inflamacion, las heridas y las infecciones nunca se curarfan. De forma similar, la destruccion progresiva del tejido comprometerfa la supervivencia del organismo. Sin embargo, la inflamacion cronica tambien puede ocasionar una serie de enfermedades tales como fiebre del heno, aterosclerosis, artritis reumatoide e incluso cancer (por ejemplo, carcinoma de vesfcula biliar). Es por esta razon por lo que la inflamacion normalmente es regulada estrictamente por el cuerpo.

25

L. Coussens et al. en “Inflammation and cancer”, Nature 2002, vol. 420, pp. 860-867 describen que el cancer es una afeccion relacionada con la inflamacion. Datos recientes han extendido el concepto de que la inflamacion es un componente crftico de la progresion tumoral. Muchos canceres surgen a partir de sitios de infeccion, irritacion cronica e inflamacion. Cada vez esta mas claro que el microentorno del tumor, que esta organizado en gran medida 30 por celulas inflamatorias, es un participante indispensable en el proceso neoplasico, promoviendo la proliferacion, supervivencia y migracion.

En resumen, la respuesta inflamatoria produce gran parte de las molestias ffsicas que se han asociado con diferentes enfermedades y lesiones. Es conocida la administracion de agentes farmacologicos que reducen las 35 molestias ffsicas de la respuesta inflamatoria. Se usan farmacos anti-inflamatorios para el tratamiento de un amplio espectro de trastornos y el mismo farmaco con frecuencia se usa para tratar enfermedades diferentes. La mayorfa de las veces, el tratamiento con farmacos anti-inflamatorios no es para la enfermedad, sino para los sfntomas.

Los huevos, en particular los huevos de gallina, han sido el objeto de una intensa investigacion qufmica, bioqufmica 40 y de tecnologfa de alimentos durante muchas decadas, debido a su importancia en la nutricion humana y a su importancia como fuente de protefnas. Tambien se conoce el uso de productos de huevo para el tratamiento de varios trastornos asociados con la inflamacion.

EP0904090 describe una composicion anti-inflamatoria producida en productos alimentarios naturales, 45 particularmente en productos de huevo. Se encontro la actividad anti-inflamatoria en una fraccion aislada a partir tanto de la yema como de la clara de un huevo.

CA2197050 describe el uso de huevos con cascara fertilizados incubados en el tratamiento y prevencion de canceres.

50

WO0191777 describe un farmaco que consiste en compuestos proteicos activados obtenidos usando un procedimiento que implica calentamiento, precipitacion y purificacion de una mezcla que contiene yema y clara de un huevo, y colofonia de resina de pino o aceite de acfculas de pino, asf como su uso en el tratamiento de tuberculosis, diversos canceres y otras enfermedades inflamatorias.

55

Finalmente, WO2009115429 describe una preparacion alimentaria y composicion farmaceutica que contiene un extracto embrionario y sus usos en varios trastornos relacionados con la inflamacion, en particular, se describe su uso para la prevencion de la sequedad de la piel, la prevencion de la perdida de cabello, la estimulacion de las defensas indicadas para combatir infecciones o enfermedades parasitarias en perros y gatos, el tratamiento de 60 canceres, asf como su uso como agente regenerador, agente anti-degenerativo o agente anti-inflamatorio.

Por lo que se conoce en la tecnica, se deduce que el uso de productos naturales tales como preparaciones de huevo tiene un gran interes en el campo de la medicina para tratar trastornos asociados con la inflamacion. De esta

manera, tendrfa un gran interes en la industria la provision de un preparado de huevo mejorada para tratar varios trastornos relacionados con la inflamacion.

EXPLICACION DE LA INVENCION 5

Los inventores han encontrado que un preparado de huevo que comprende una mezcla de yema y clara extrafda a partir de un huevo fertilizado que se ha incubado durante un corto periodo de tiempo, tiene propiedades analgesicas y/o anti-inflamatorias. Tambien se ha encontrado que tiene propiedades regeneradoras. El preparado de la invencion ha resultado ser mas eficaz que otros preparados de huevo, y con respecto a otros agentes regeneradores, 10 analgesicos y/o anti-inflamatorios conocidos, tiene la ventaja del origen natural del preparado, lo cual implica que no es toxico y no produce efectos secundarios.

No hay nada en la tecnica que sugiera que un preparado de huevo con una mezcla de yema y clara en una proporcion especffica procedente de un huevo incubado durante un periodo comprendido entre 18 y 36 horas podrfa 15 conferir al preparado las excelentes propiedades regeneradoras, analgesicas y anti-inflamatorias encontradas en el preparado de huevo de la invencion.

Ademas, los inventores han encontrado que el preparafo de huevo de la invencion es tambien util como agente de cuidado de la piel y el cuidado del cabello o pelaje.

20

Por consiguiente, un primer aspecto de la presente invencion se refiere a un preparado de huevo que comprende una mezcla de yema y clara extrafdas de un huevo fertilizado incubado durante un periodo comprendido entre 18 horas y 36 horas, estando la mezcla de yema y clara en una proporcion en la que la cantidad de la clara esta comprendida entre 2% y 40% en volumen con respecto al volumen de la yema.

25

Un segundo aspecto de la invencion se refiere a un procedimiento para preparar el preparado de huevo definido anteriormente, que comprende: (a) incubar un huevo fertilizado durante un periodo comprendido entre 18 horas y 36 horas; (b) recoger una cantidad de yema y una cantidad de clara del huevo fertilizado incubado obtenido en la etapa anterior, y mezclar la yema y la clara en una proporcion en la que la cantidad de la clara esta comprendida entre 2% 30 y 40% en volumen con respecto al volumen de la yema; (c) homogeneizar la mezcla de yema y clara obtenida en la etapa b); y (d) fijar las propiedades del preparado de huevo obtenido en la etapa (c).

Es posible usar el preparado de la invencion como parte de la composicion nutricional de alimentos. Dicho alimento funcional tiene un efecto positivo sobre la salud de las personas. De esta manera, un tercer aspecto de la presente 35 invencion se refiere a un alimento funcional que comprende el preparado de huevo de la invencion. Tambien es posible usar el preparado de la invencion como parte de un suplemento dietetico. De esta manera, un cuarto aspecto de la presente invencion se refiere a un suplemento dietetico que comprende el preparado de huevo de la invencion.

Un quinto aspecto de la invencion se refiere a una composicion farmaceutica que comprende un preparado de huevo 40 como se ha definido anteriormente, junto con excipientes o portadores farmaceuticos. Preferiblemente, la composicion farmaceutica comprende una cantidad efectiva del preparado de huevo definido anteriormente, junto con uno o mas excipientes o portadores farmaceuticos.

Un sexto aspecto de la invencion se refiere a una composicion veterinaria que comprende un preparado de huevo 45 como se ha definido anteriormente, junto con excipientes o portadores veterinarios. Preferiblemente, la composicion veterinaria comprende una cantidad efectiva del preparado de huevo definido anteriormente, junto con uno o mas excipientes o portadores veterinarios.

Un septimo aspecto de la invecion se refiere a una composicion cosmetica que comprende una cantidad efectiva del 50 preparado de huevo definido anteriormente, junto con uno o mas excipientes o portadores cosmeticos.

El hecho de que el preparado de la presente invencion muestre excelentes propiedades analgesicas es ventajoso para su uso para el tratamiento del dolor agudo cronico en afecciones relacionadas con el dolor. Por consiguiente, un octavo aspecto de la presente invencion se refiere al preparado definido anteriormente, para uso como agente 55 analgesico para el tratamiento del dolor agudo o cronico en afecciones relacionadas con el dolor.

El hecho de que el preparado de la presente invencion muestre excelentes propiedades regeneradoras permite su uso como agentes regenerativos de tejidos. La yema de huevo y la clara de huevo comprenden protefnas. Entre ellas se encuentran factores de crecimiento. Los factores de crecimiento controlan el crecimiento embrionario. Se 60 han descrito numerosos factores de crecimiento, por ejemplo IGF (factor de crecimiento de insulina), FGF (factor de crecimiento de fibroblastos), NFG (factor de crecimiento nervioso) y EGF (factor de crecimiento epidermico) entre otros. El patron de expresion de los diferentes factores de crecimiento varfa en las diferentes etapas del desarrollo y tambien varfa en la yema y la clara. Los inventores han conseguido la extraccion de los factores proteicos que tienen

actividad de proliferacion celular en el punto en el que su actividad es maxima. De esta manera, este hecho contribuye a las excelentes propiedades regeneradoras del preparado de la invencion.

La apoptosis se ha implicado en enfermedades degenerativas. La muestra de la invencion inhibio la apoptosis. Por 5 lo tanto, esta actividad de inhibicion proporciona propiedades anti-degenerativas. Por lo tanto, un noveno aspecto de la presente invencion se refiere al preparado definido anteriormente, para uso como agente regenerador para el tratamiento de afecciones degenerativas.

Ademas, el hecho de que el preparado de la presente invencion muestre excelentes propiedades anti-inflamatorias 10 es ventajoso para su uso como agente anti-inflamatorio para el tratamiento de afecciones inflamatorias. Por lo tanto, un decimo aspecto de la presente invencion se refiere al preparado de huevo definido anteriormente, para uso como agente anti-inflamatorio para el tratamiento de afecciones inflamatorias.

Finalmente, puesto que el preparado de huevo de la invencion es tambien util para el cuidado de la piel y el cabello o 15 pelaje, un aspecto decimoprimero de la invencion se refiere al uso cosmetico de un preparado de huevo como se ha definido anteriormente como agente de cuidado de la piel, y un decimosegundo aspecto de la invencion se refiere al uso cosmetico de un preparado de huevo como se ha definido anteriormente como agente de cuidado del cabello o pelaje.

20 BREVE DESCRIPCION DE LOS DIBUJOS

La FIG. 1 muestra el porcentaje de viabilidad celular en HMEC para diferentes muestras comparativas, extracto embrionario (1), huevo no incubado (3), huevo no fertilizado (6), y control enzimatico (4), asf como para la muestra de la invencion, extracto de yema (2). Las muestras se diluyeron a un 0.5% (columna en blanco) y a un 1% (columna 25 en negro).

La FIG. 2 muestra la cantidad promedio de alimentos (en gramos) ingeridos por ratas alimentadas con diferentes muestras, incluyendo la muestra de la invencion, extracto de yema (2), y las muestras comparativas: extracto embrionario (1), huevo no incubado (3), huevo no fertilizado (6) y control de agua (7).

30

La FIG. 3 muestra el aumento de peso diario en terminos de porcentaje para ratas macho (columna en negro) y ratas hembra (columna en banco) alimentadas con diferentes muestras, incluyendo la muestra de la invencion, extracto de yema (2), y las muestras comparativas: extracto embrionario (1), huevo no incubado (3), huevo no fertilizado (6) y el control de agua (7).

35

La FIG. 4 muestra la inmunorreactividad de pAKT, expresada en porcentaje de inmunorreactividad de pAKT de la muestra/porcentaje de inmunorreactividad de pAKT del control del medio. Las diferentes muestras son muestras comparativas, extracto embrionario (1), huevo no incubado (3), control enzimatico (4), control del medio (5), huevo no fertilizado (6); y la muestra de la invencion, extracto de yema (2).

40

La FIG. 5 muestra la inmunorreactividad de p70S6, expresada en porcentaje de inmunorreactividad de p70S6 de la muestra/porcentaje de inmunorreactividad de p70S6 del control del medio. Las diferentes muestras son muestras comparativas, extracto embrionario (1), huevo no incubado (3), control enzimatico (4), control del medio (5), huevo no fertilizado (6); y la muestra de la invencion, extracto de yema (2).

45

La FIG. 6 muestra la inmunorreactividad de la caspasa 3, expresada en porcentaje de inmunorreactividad de caspasa 3 de la muestra/porcentaje de inmunorreactividad de caspasa 3 del control del medio. Las diferentes muestras son muestras comparativas, extracto embrionario (1), huevo no incubado (3), control enzimatico (4) y el control del medio (5), asf como para la muestra de la invencion, extracto de yema (2).

50

La FIG. 7 muestra los resultados de un modelo animal de encefalopatfa autoinmune experimental (EAE) (Grupo D: animales sin tratar; Grupo E: tratamiento con huevo no fertilizado (6), y Grupo F: (tratamiento con el preparado de huevo de la invencion, extracto de yema (2)). La FIG. 7A muestra el dfa de inicio de los sfntomas clfnicos. La FIG. 7B muestra la puntuacion clfnica mas alta alcanzada en la fase de pico. La FIG. 7C muestra la puntuacion clfnica mas 55 baja alcanzada en la fase cronica.

La FIG. 8 muestra los resultados de regeneracion neuronal en un modelo de axotomfa. Los animales sometidos a pruebas se dividieron en los siguientes grupos: animales control no sometidos a axotomfa: Grupo A (sin tratar), Grupo B (tratamiento con huevo no fertilizado (6)), y Grupo C (tratamiento con extracto de yema (2)), y animales 60 axotomizados: Grupo D (tratamiento con huevo no fertilizado (6)), y el Grupo E (tratamiento con extracto de yema (2)). La FIG. 8A muestra la cuantificacion de neuronas Fluorogold positivas de los animales de los grupos A, B y C; columna en blanco: lado izquierdo, y columna en negro: lado derecho. La FIG. 8B muestra la cuantificacion neuronas Fluorogold positivas de los animales no sometidos a axotomfa (Grupos B, y C), y del lado no lesionado contralateral en animales axotomizados (Grupos D y E). La FIG. 8C muestra la cuantificacion de neuronas

Fluorogold positivas del lado ipsilateral en animales axotomizados (Grupos D y E). La linea horizontal por encima de 400 indica el grado de regeneracion inusual.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION 5

Como se ha mencionado anteriormente, un aspecto de la presente invencion se refiere a un preparado de huevo que comprende una mezcla de yema y clara extrafdas de un huevo fertilizado incubado durante un periodo comprendido entre 18 horas y 36 horas, estando la mezcla de yema y clara en una proporcion en la que la cantidad de la clara esta comprendida entre 2% y 40% en volumen con respecto al volumen de la yema. En una realizacion 10 preferida, el preparado de huevo consiste en una mezcla de yema y clara extrafdas de un huevo fertilizado incubado durante un periodo comprendido entre 18 horas y 36 horas, estando la mezcla de yema y clara en una proporcion en la que la cantidad de la clara esta comprendida entre 2% y 40% en volumen con respecto al volumen de la yema.

El preparado de la invencion es mas activo cuando la clara esta en un porcentaje igual o mayor de 5%. Por lo tanto, 15 en una realizacion preferida, la cantidad de clara esta comprendida entre 5% y 40% en volumen con respecto al volumen de la yema. En otra realizacion preferida, la cantidad de clara esta comprendida entre 5% y 30% en volumen con respecto al volumen de la yema. En otra realizacion mas preferida, la cantidad de clara esta comprendida entre 7% y 15% en volumen con respecto al volumen de la yema. En otra realizacion aun mas preferida, la cantidad de clara es 10% en volumen con respecto al volumen de la yema.

20

Hay dos tipos de clara en el huevo, fluida y densa. En particular, la clara de huevo esta compuesta por varias partes: una parte externa que contiene clara fluida (denominada aquf como clara fluida externa); una parte interna que contiene clara fluida (denominada aquf como clara fluida interna), que esta unida a la yema rodeandola, y una parte de clara densa (denominada aquf como clara densa), que se localiza entre las dos partes de clara fluida.

25

En una realizacion preferida, la clara del preparado de huevo de la invencion es clara fluida. En una realizacion mas preferida, la clara del preparado de huevo de la invencion es clara fluida interna.

Los inventores han encontrado que la clara fluida interna representa aproximadamente el 40% en volumen con 30 respecto al volumen de la yema. Cuando el preparado de huevo comprende un % superior de clara, de modo que el preparado de huevo contiene clara fluida interna y tambien contiene clara fluida externa y/o clara densa, el preparado queda mas diluido porque la clara adicional no tiene las propiedades ventajosas de la clara fluida blanca, aunque el preparado de huevo aun mantiene sus propiedades terapeuticas y cosmeticas. Asf, en una realizacion particular, el preparado de huevo de la invencion comprende ademas clara fluida externa y/o clara densa, en una 35 cantidad tal que la suma de clara fluida interna, clara fluida externa, y clara densa en el preparado de huevo es de hasta un 99% en volumen con respecto a la suma de los volumenes de yema y clara total.

El termino “incubado”, como se usa aqrn, se refiere a mantener constante la temperature de incubacion del huevo. En una realizacion preferida, la temperatura de incubacion esta comprendida entre 34 °C y 41 °C. En una realizacion 40 mas preferida, la temperatura de incubacion esta comprendida entre 35.5 y 37 °C. En una realizacion aun mas preferida, la temperatura de incubacion esta comprendida entre 35.5-36.8 °C. En estas condiciones especfficas de temperatura no es posible el desarrollo del embrion de pollo.

En una realizacion particular, la temperatura se selecciona entre las siguientes temperaturas: 34 °C, 35 °C, 36 °C, 37 45 °C, 38 °C, 39 °C, 40 °C, 41 °C.

Como se ha mencionado anteriormente, el periodo de incubacion esta comprendido entre 18 horas y 36 horas, este periodo comprende la fase de gastrula.

50 La expresion “fase de gastrula”, como se usa aqrn, se refiere a una fase temprana en el desarrollo embrionario de las aves, durante la cual la blastula de una sola capa se reorganiza en una estructura trilaminar conocida como gastrula. Estas tres capas germinales se conocen como ectodermo, mesodermo y endodermo. La gastrulacion del pollo finaliza despues de 24-28 horas de incubacion.

55 Los huevos incubados durante dicho periodo comprendido entre 18 y 36 horas en una fase de pre-gastrula, fase de gastrula y fase de post-gastrula muestran el patron de expresion de los diferentes factores de crecimiento en las concentraciones optimas para uso del preparado de la invencion como agente regenerativo, anti-inflamatorio y analgesico.

60 En una realizacion preferida, los huevos usados son huevos de aves. En una realizacion mas preferida, los huevos usados son de aves criadas para la produccion de huevos, por ejemplo gallinas, gansos, patos, codornices, pavos, avestruces, faisanes y palomas. En una realizacion particular, los huevos son huevos de gallina.

El preparado de huevo de la invencion se prepara por un procedimiento que comprende: (a) incubar un huevo fertilizado durante un periodo comprendido entre 18 horas y 36 horas; (b) recoger una cantidad de yema y una cantidad de clara del huevo fertilizado incubado obtenido en la etapa anterior, y mezclar la yema y la clara en una proporcion en la que la cantidad de la clara esta comprendida entre 2% y 40% en volumen con respecto al volumen 5 de la yema; (c) homogeneizar la mezcla de yema y clara obtenida en la etapa (b); y (d) fijar las propiedades del preparado de huevo obtenido en la etapa (c).

En una realizacion preferida, el periodo esta comprendido entre 20 y 28 horas. En otra realizacion preferida, el periodo esta comprendido entre 22 y 26 horas. En una realizacion mas preferida, el periodo es de 24 horas.

10

En otra realizacion preferida, la etapa a) se lleva a cabo a una temperatura seleccionada entre las siguientes temperaturas, 34 °C, 35 °C, 36 °C, 37 °C, 38 °C, 39 °C, 40 °C, 41 °C, durante un periodo comprendido entre 22 y 26 horas.

15 Las protefnas presentes en el preparado de huevo, por ejemplo, los factores de crecimiento, son inestables, puede producirse la desnaturalizacion de protefnas con una alta temperatura entre otras caracterfsticas ffsicas. De esta manera, en una realizacion preferida, el procedimiento comprende ademas la etapa adicional de refrigerar el huevo incubado obtenido en la etapa (a).

20 La etapa de fijacion de las propiedades (d) se realiza para detener el proceso y conservar las propiedades del preparado de huevo obtenido en la etapa (c).

La etapa de fijacion de las propiedades comprende reducir la temperatura por debajo de 34 °C, mas preferiblemente por debajo de 0°C, mas preferiblemente aproximadamente a -18 °C. En una realizacion preferida, la etapa de fijacion 25 de las propiedades es una etapa de congelacion. En otra realizacion preferida, la etapa de fijacion de las propiedades es una etapa de liofilizacion.

Opcionalmente, cuando el preparado de huevo comprende ademas clara fluida externa y/o clara densa, el procedimiento comprende ademas la etapa de mezclar la cantidad especffica de clara fluida externa y/o clara densa. 30

El preparado de huevo de la presente invencion tambien puede definirse como un preparado de huevo obtenible por el procedimiento definido anteriormente. Asf, tambien forma parte de la invencion un preparado de huevo que comprende una mezcla de yema y clara en una proporcion en la que la cantidad de la clara esta comprendida entre 2% y 40% en volumen con respecto al volumen de la yema, obtenible por un procedimiento de preparacion que 35 comprende las siguientes etapas: (a) incubar un huevo fertilizado durante un periodo comprendido entre 18 horas y 36 horas; (b) recoger una cantidad de yema y una cantidad de clara del huevo fertilizado incubado obtenido en la etapa anterior, y mezclar la yema y la clara en una proporcion en la que la cantidad de la clara esta comprendida entre 2% y 40% en volumen con respecto al volumen de la yema; (c) homogeneizar la mezcla de yema y clara obtenida en la etapa (b); y (d) fijar las propiedades del preparado de huevo obtenido en la etapa (c). Son 40 realizaciones preferidas preparados de huevo obtenibles por cualquiera de las realizaciones preferidas del procedimiento definido anteriormente.

El preparado de huevo "obtenible por" el procedimiento de la invencion definido anteriormente se utiliza aquf para definir el preparado de huevo por el procedimiento de su obtencion y se refiere al preparado de huevo obtenible

45 mediante el procedimiento de preparacion que comprende las etapas a), b), c), y d) definido anteriormente. A efectos

de la invencion, las expresiones "obtenible", "obtenido" y expresiones equivalentes se utilizan indistintamente, y en cualquier caso, la expresion "obtenible" abarca la expresion "obtenido".

Tambien forman parte de la invencion un alimento funcional o un suplemento dietetico que comprende el preparado 50 de huevo de la invencion, asf como composiciones farmaceuticas o veterinarias que comprenden el preparado de huevo definido anteriormente.

La expresion “alimento funcional”, como se usa aquf, se refiere a un alimento al que se ha anadido el producto de huevo de la presente invencion. En general, los alimentos funcionales son parte de la gama de productos que los 55 individuos pueden consumir para mejorar su salud y/o contribuir a reducir su carga de enfermedad.

La expresion “suplemento dietetico”, como se usa aqrn, se refiere a un preparado destinado a suplementar la dieta y proporcionar nutrientes tales como vitaminas, minerales, fibra, acidos grasos o aminoacidos, que pueden estar ausentes o pueden no haberse consumido en cantidades suficientes en la dieta de una persona. La expresion

60 suplemento dietetico pretende incluir los terminos usados generalmente en el campo, por ejemplo, suplemento

nutraceutico o enriquecido.

Es posible la administracion del preparado de la invencion sin ningun aditivo, excipiente o portador.

Alternativamente, el preparado de huevo de la invencion puede comprender compuestos adicionales, por ejemplo aditivos. Ejemplos de aditivos incluyen antioxidantes tales como vitamina C, saborizantes tales como acido glutamico, conservantes tales como extracto de romero, o estabilizantes tales como agar o pectina.

5 En una realizacion preferida, el preparado de huevo de la invencion se administra en mamfferos, incluyendo seres humanos.

El preparado de huevo de la invencion puede ser una forma de dosificacion oral. En una realizacion preferida, la forma de dosificacion oral es un lfquido. En una realizacion preferida, la administracion del preparado de huevo es la 10 administracion sublingual.

En otra realizacion preferida, el preparado de la invencion es una forma solida seca, particularmente una forma en polvo. El preparado de huevo en una forma en polvo puede se una forma liofilizada. El preparado liofilizado se puede mezclar facilmente con otros compuestos, por ejemplo aditivos, y tiene una vida util que facilita la fabricacion, 15 envasado, transporte y almacenamiento.

En una realizacion preferida, el preparado de la presente invencion se introduce en capsulas o perlas.

En una realizacion preferida, el preparado de la presente invencion se introduce en micelas.

20

El preparado de huevo de la invencion tambien puede ser aplicado por la administracion topica. Las composiciones topicas de la invencion se pueden formular en diversas formas que incluyen, pero no se limitan a, soluciones, aerosoles y pulverizadores sin aerosol, mascaras faciales, cremas de afeitar, polvos, espumas, lociones, geles, barras, unguentos, pastas, cremas, champus, cremas de enjuague, acondicionadores para el cabello, geles de 25 ducha, jabones para el cuerpo o jabones para la cara. Generalmente, las composiciones topicas pueden comprender desde un 1% a un 15% en volumen del preparado de huevo de la invencion con respecto al volumen total de la composicion.

Las composiciones topicas de la invencion pueden prepararse segun metodos bien conocidos en el estado de la 30 tecnica. Los excipientes y/o portadores adecuados, y sus cantidades, pueden ser determinadas facilmente por los expertos en la tecnica segun el tipo de formulacion esta preparando.

Como se ha mencionado anteriormente, la presente invencion se refiere a composiciones farmaceuticas, composiciones veterinarias y composiciones cosmeticas que comprenden una cantidad efectiva del preparado de 35 huevo definido anteriormente, junto con uno o mas excipientes o portadores farmaceuticos, veterinarios o cosmeticos.

A efectos de la invencion, la expresion “cantidad efectiva” significa una cantidad que es suficiente para obtener el efecto esperado. En el caso de las composiciones farmaceuticas y veterinarias, la cantidad efectiva es la “cantidad 40 terapeuticamente efectiva” y se refiere a la cantidad de un compuesto que, cuando se administra, es suficiente para prevenir el desarrollo, o aliviar en alguna medida uno o mas de los sfntomas del trastorno, enfermedad o afeccion a tratar. Por supuesto, la dosis particular de compuesto administrada segun esta invencion se determinara por las circunstancias particulares del caso, incluyendo el compuesto administrado, la via de administracion, la afeccion particular a tratar y consideraciones similares.

45

La expresion “excipientes o portadores farmaceuticamente o veterinariamente aceptables” se refiere a materiales, composiciones o portadores farmaceutica o veterinariamente aceptables para el uso en la tecnologfa farmaceutica o veterinaria para la preparacion de composiciones con uso medico. Cada componente debe ser farmaceutica o veterinariamente aceptable en el sentido de ser compatible con los demas ingredientes de la composicion 50 farmaceutica o veterinaria. Tambien debe ser adecuado para uso en contacto con el tejido u organo de seres humanos o animales sin toxicidad excesiva, irritacion, respuesta alergica, inmunogenicidad o cualquier otro problema o complicacion en proporcion a una relacion razonable de beneficios/riesgos.

La expresion "excipientes o portadores cosmeticamente aceptables" se refiere a aquellos excipientes o portadores 55 adecuados para su uso en contacto con la piel humana o animal sin excesiva toxicidad, incompatibilidad, inestabilidad, respuesta alergica, entre otros.

Las composiciones farmaceuticas y veterinarias preferiblemente son para administracion oral, y pueden presentarse como lfquidos, polvos, comprimidos, comprimidos recubiertos o capsulas. En una realizacion preferida, las 60 composiciones farmaceuticas, veterinarias, y cosmeticas son para administracion oral, y pueden presentarse como lfquidos, polvos, comprimidos, comprimidos recubiertos, capsulas o perlas. En otra realizacion preferida, las composiciones farmaceuticas, veterinarias, y cosmeticas son para la administracion topica.

Como se ha mencionado anteriormente, forma parte de la invencion el preparado de huevo para uso en el tratamiento del dolor agudo o cronico en afecciones relacionadas con el dolor, es decir, para uso como agente analgesico. Este aspecto de la invencion tambien puede formularse como uso del preparado de huevo de la presente invencion para la preparacion de un medicamento para el tratamiento del dolor agudo o cronico en 5 afecciones relacionadas con el dolor. La invencion tambien se refiere a un metodo de tratamiento de un mamffero, incluyendo un ser humano, que padece dolor agudo o cronico, comprendiendo dicho metodo la administracion a dicho mamffero, incluyendo un ser humano, de una cantidad terapeuticamente efectiva del preparado de huevo de la presente invencion, junto con excipientes o portadores aceptables.

10 Preferiblemente, el tratamiento es un tratamiento coadyuvante. De esta manera, el preparado de huevo de la invencion puede administrarse en combinacion con otros agentes analgesicos conocidos.

En una realizacion preferida, la dosis del preparado de huevo se selecciona entre 5-30 mL. En otra realizacion preferida, la dosis se selecciona entre 5-15 mL. En una realizacion particular, la dosis se selecciona entre las 15 siguientes: 5 mL, 10 mL, 15 mL, 20 mL, 25 mL y 30 mL del preparado de huevo.

Generalmente, la dosis diaria para un mamffero del preparado de huevo de la invencion para uso con finalidades terapeuticas en el campo farmaceutico o veterinario es de 3-48 mL, que se puede administrar con excipientes o portadores farmaceuticamente o veterinariamente aceptables como se ha definido anteriormente. En una realizacion 20 mas preferida, la dosis diaria es 5-30 mL. En una realizacion aun mas preferida, la dosis diaria es 5-15 mL. En una realizacion particular, la dosis diaria se selecciona entre las siguientes: 3 mL, 5 mL, 6 mL, 9 mL, 10 mL, 12 mL, 15 mL, 18 mL, 20 mL, 21 mL, 24 mL, 25 mL, 27 mL, 30 mL, 36 mL, 42 mL, y 48 mL de preparado de huevo. La dosis especffica a ser administrada dependera de diversos factores, tales como el tipo de mamffero, incluyendo un ser humano, su peso, asf como la severidad de los sfntomas.

25

Como se ha mencionado anteriormente, el preparado de huevo de la invencion se pueden administrar en mamfferos, incluyendo seres humanos, sin ningun tipo de aditivos, excipientes o portadores, o en la forma de una composicion farmaceutica, veterinaria o cosmetica. En general, la dosis utilizada para fines cosmeticos es mas baja que la dosis utilizada con fines terapeuticos.

30

La expresion “agente analgesico”, como se usa aqm, se refiere a un agente con el objetivo de aliviar el dolor agudo o cronico. El dolor cronico significa un dolor que continua durante seis meses, que aparece despues de la recuperacion de un tejido danado que produce dolor agudo.

35 En una realizacion preferida, la afeccion relacionada con el dolor se selecciona entre artritis, artrosis y dolor de espalda. En otra realizacion preferida, la afeccion relacionada con el dolor es el sfndrome de fatiga cronica. En una realizacion mas preferida, la afeccion relacionada con el dolor es fibromialgia.

Tambien forma parte de la invencion el preparado de huevo para uso en el tratamiento de afecciones degenerativas, 40 es decir, para uso como agente anti-degenerativo. Este aspecto de la invencion tambien puede formularse como uso del preparado de huevo de la presente invencion para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de afecciones degenerativas. La invencion tambien se refiere a un metodo de tratamiento de un mamffero, incluyendo un ser humano, que padece una afeccion degenerativa, comprendiendo dicho metodo la administracion a dicho mamffero, incluyendo un ser humano, de una cantidad terapeuticamente efectiva del preparado de huevo de la 45 presente invencion, junto con excipientes o portadores aceptables.

Preferiblemente, el tratamiento es un tratamiento coadyuvante. De esta manera, el preparado de huevo de la invencion puede administrarse en combinacion con otros agentes regeneradores conocidos.

50 La expresion “agente regenerador”, como se usa en el presente documento, se refiere a un agente para promover la formacion o regeneracion de tejidos.

En una realizacion preferida, la afeccion degenerativa es el envejecimiento de la piel. En una realizacion mas preferida, la afeccion es psoriasis. En otra realizacion preferida, la afeccion es esclerosis multiple. En otra realizacion 55 preferida, la afeccion es hernia de disco vertebral. En otra realizacion preferida, la afeccion es artritis reumatoide. En otra realizacion preferida, la afeccion es ataxia de Friedreich. En otra realizacion preferida, la afeccion es una enfermedad neurodegenerativa. Los ejemplos de dichas enfermedades neurodegenerativas incluyen enfermedad de Parkinson, enfermedad de Huntington, enfermedad de Alzheimer, demencia senil y esclerosis lateral amiloide (ELA).

60 En otra realizacion, el preparado de huevo de la invencion se utiliza en el tratamiento de cicatrices, quemaduras y abrasiones.

Como se ha mencionado anteriormente, forma parte de la invencion el preparado de huevo para uso en el tratamiento de afecciones inflamatorias, es decir, para uso como agente anti-inflamatorio. Este aspecto de la

invencion tambien puede formularse como uso del preparado de huevo de la presente invencion para la preparacion de un medicamento para el tratamiento de afecciones relacionadas con la inflamacion. La invencion tambien se refiere a un metodo de tratamiento de un mairnfero, incluyendo un ser humano, que padece una afeccion inflamatoria, comprendiendo dicho metodo la administracion a dicho marnffero, incluyendo un ser humano, de una 5 cantidad terapeuticamente efectiva del preparado de huevo de la presente invencion, junto con excipientes o portadores aceptables.

Preferiblemente, el tratamiento es un tratamiento coadyuvante. De esta manera, el preparado de huevo de la invencion puede administrarse en combinacion con otros agentes anti-inflamatorios conocidos.

10

La expresion “anti-mflamatono”, como se usa en el presente documento, se refiere a un agente destinado a reducir la inflamacion.

En una realizacion preferida, la afeccion inflamatoria es cancer. En otra realizacion preferida, la afeccion es 15 enfermedad pulmonar obstructiva cronica. En otra realizacion preferida, la afeccion es esclerosis multiple.

A efectos de la presente descripcion, el termino "tratamiento" significa compensacion por una disfuncion fisiologica y mas generalmente reduccion o eliminacion de un trastorno indeseable, la manifestacion del cual es especialmente una consecuencia de esta disfuncion.

20

En otra realizacion preferida, el preparado de huevo de la invencion se administra a gatos, perros y caballos. En el caso de los perros, se ha demostrado eficacia en el tratamiento de los trastornos musculoesqueleticos tales como contusiones, artritis o artrosis, mejorando la inflamacion, el dolor y la movilidad; asf como en enfermedades del sistema nervioso tales enfermedades inflamatorias (por ejemplo, meningitis causada por virus o la hernia de disco 25 con afectacion de la medula espinal), mejorando la inflamacion, la regeneracion y la funcionalidad nerviosa.

En gatos, se ha demostrado eficacia en animales que sufren inmunosupresion.

En el caso de los caballos, se ha demostrado eficacia en el tratamiento de cojera aguda o cronica y problemas de movilidad causados por enfermedades degenerativas relacionadas con la edad o adquiridas, tales como la artritis, 30 perdida de elasticidad y calcificaciones de los tendones. Tambien ha demostrado su eficacia en el tratamiento de la cojera aguda o cronica u otros trastornos debidos a problemas musculares, de tendones, huesos, cartflagos o estructuras relacionadas con las articulaciones, y en el tratamiento de la cojera aguda o cronica debida a los trastornos casco del equino o trastornos no articulares. Tambien se puede utilizar en los penodos de recuperacion tales como la recuperacion de la cirugfa y la recuperacion de la inmovilizacion, como tratamiento coadyuvante en 35 combinacion con analgesicos y/o farmacos anti-inflamatorios, y como tratamiento coadyuvante en casos de malnutricion y bajo rendimiento deportivo. El preparado de huevo de la invencion tambien puede utilizarse para mejorar el rendimiento y la recuperacion despues de las competiciones equinas o situaciones que impliquen una alta energfa o gasto metabolico. Tambien podna ser util en el tratamiento de enfermedades neurodegenerativas, enfermedades vasculares, enfermedades iatrogenicas, enfermedades traumaticas, congenitas, enfermedades 40 metabolicas, trastornos inmunologicos, y enfermedades idiopaticas.

Como se ha se mencionado anteriormente, el preparado de huevo de la invencion tambien puede utilizarse para fines cosmeticos. Asf, la presente invencion se refiere tambien a un uso cosmetico del preparado de huevo definido anteriormente como un agente de cuidado de la piel. El cuidado de la piel puede comprender la mejora de al menos 45 uno de los siguientes smtomas: aspereza, descamacion, deshidratacion, tirantez, grietas, y falta de elasticidad. Tambien forma parte de la invencion, un metodo cosmetico para el cuidado de la piel de un mai^ero, incluyendo un ser humano, comprendiendo dicho metodo la administracion a dicho mai^ero, incluyendo un ser humano, de una cantidad efectiva del preparado de huevo definido anteriormente, junto con excipientes o portadores aceptables. En particular, el mai^ero, incluyendo un ser humano, puede padecer o es susceptible de padecer por lo menos uno de 50 los siguientes smtomas: aspereza, descamacion, tirantez deshidratacion, agrietamiento, y la falta de elasticidad.

Ademas, la presente invencion se refiere tambien a un uso cosmetico de un preparado de huevo como se ha definido anteriormente como un agente de cuidado del cabello o pelaje. El cuidado del cabello o pelaje puede comprender la mejora de la estructura del cabello o pelaje y/o las propiedades ffsico-opticas del cabello o pelaje. 55 Ejemplos de propiedades ffsico-opticas del cabello o pelaje incluyen: brillo, sequedad, suavidad y flexibilidad. En una realizacion preferida, el cuidado del cabello o pelaje comprende la prevencion de la perdida de cabello o pelaje y/o promover el crecimiento del cabello o pelaje. Tambien forma parte de la invencion, un metodo cosmetico para el cuidado del cabello o pelaje de un mai^ero, incluyendo un ser humano, comprendiendo dicho metodo la administracion a dicho mai^ero, incluyendo un ser humano, de una cantidad efectiva del preparado de huevo 60 definido anteriormente, junto con excipientes o portadores aceptables. En particular, el cuidado del cabello o pelaje comprende la mejora de la estructura del cabello o pelaje y/o las propiedades ffsico-opticas del cabello o pelaje, la prevencion de la perdida de cabello o pelaje y/o promover el crecimiento del cabello o pelaje.

La expresion "cosmetico" esta destinada a indicar un uso destinado, principalmente, a proporcionar un efecto estetico y/o de confort, en particular, para mejorar la apariencia de la piel, espedficamente las propiedades de la piel.

5 A lo largo de la descripcion y las reivindicaciones, el termino “comprender” y las variaciones de dicho termino no pretenden excluir otras caractensticas tecnicas, aditivos, componentes o etapas. Ademas, la palabra "comprende" engloba el caso "consiste en". Para los expertos en la materia seran evidentes otros objetos, ventajas y caractensticas de la invencion tras el examen de la descripcion o pueden aprenderse por la practica de la invencion. Los siguientes ejemplos y dibujos se proporcionan a modo de ilustracion.

10

EJEMPLOS

Las muestras incubadas que se describen en los ejemplos siguientes se obtuvieron mediante la incubacion de un huevo de gallina fertilizado a una temperatura de 36.8 °C durante 24 horas, la succion y homogeneizacion de la 15 cantidad especificada de yema y clara, y la congelacion de la mezcla a -18 °C.

Ejemplo 1: Ensayos de toxicidad oral aguda

Muestra comparativa 1, extracto embrionario (1). Un huevo de gallina fertilizado se retiro de la incubadora despues 20 de 24 horas. El contenido obtenido despues de romper la cascara, formado por la yema y la clara, se deposito en una bandeja esteril. La yema se agito balanceando la bandeja hasta que el germen embrionario se localizo en una posicion dorsal y centrada. En dicha posicion, se realizo la succion de dicho germen embrionario. Alguna cantidad de yema o clara pudo haberse succionado.

25 Muestra 2, extracto de yema (2). Un huevo de gallina fertilizado se retiro de la incubadora despues de 24 horas. El contenido obtenido despues de romper la cascara, formado por la yema y la clara, se deposito en una bandeja esteril; se succionaron 5.5 mL de yema y 0.5 mL de clara.

Muestra comparativa 3, huevo no incubado (3). Se rompio un huevo de gallina fertilizado no incubado y se 30 depositaron la yema y la clara en una bandeja esteril; se succionaron 5.5 mL de yema y 0.5 mL de clara.

Muestra comparativa 4, control enzimatico (4): pepsina y lipasa.

Muestra comparativa 5, control del medio, (5): medio de cultivo.

35

Muestra comparativa 6, huevo no fertilizado (6): Se rompio un huevo de gallina no fertilizado y la yema y la clara se depositaron en una bandeja esteril; se succionaron 5.5 mL de yema y 0.5 mL de clara.

Muestra comparativa 7, control de agua (7): 6.0 mL de agua.

40 Estas muestras se usaron en los ensayos de toxicidad in vivo e in vitro. Los controles usados en los ensayos in vitro en in vivo se describen a continuacion.

Ensayo de toxicidad aguda in vitro. Ensayo de viabilidad celular

45 Se realizo una digestion enzimatica (pepsina 200 mg/ml a 37 °C, pH 1.5, 1 hora, y lipasa 14 mg/ml, 37°C, pH 7.5, 1.5 horas) de las muestras (extracto embrionario comparativo (1), extracto de yema (2), huevo no incubado comparativo (3), huevo no fertilizado comparativo (6), y control enzimatico comparativo (4)). Las muestras se filtraron (0.45 pm) y se diluyeron a concentraciones de 0.5% y 1.0% en volumen en el medio de cultivo.

50 Se evaluo la viabilidad celular de HMEC (Celulas Endoteliales Microvasculares Humanas) mediante el metodo de cristal violeta. En este ensayo, el tinte tine el ADN de las celulas. La cantidad de tinte es proporcional al numero de celulas vivas en el cultivo.

La FIG. 1 muestra los resultados. No hay diferencias significativas en la viabilidad celular entre el preparado de la 55 invencion (muestra (2)) y las muestras comparativas, incluyendo el control enzimatico.

Ensayo de toxicidad oral aguda in vivo

Se usaron ratas Sprague Dawley macho y hembra en una relacion 6/4. Las ratas teman 4 semanas de edad. Los 60 animales se estabularon individualmente. Para la alimentacion se uso una dieta de laboratorio convencional para roedores (Harlan 2014) con un suministro ilimitado de agua potable. Las muestras (extracto embrionario comparativo (1), extracto de yema (2), huevo no incubado comparativo (3), huevo no fertilizado comparativo (6), y control de agua comparativo (7)) se administraron por sonda orogastrica. Todos los animales se sometieron a un seguimiento de 14 dfas para evaluar la tasa de mortalidad.

Los animales se dosificaron, uno cada vez, en una progresion ordenada de una sola dosis (5 mg/kg, 50 mg/kg, 300 mg/kg y 2000 mg/kg) a un mmimo de intervalos de 48 horas. El primer animal recibio una dosis de 5 mg/kg. Si el animal sobrevivfa, la dosis para el segundo animal era de 50 mg/kg. Si el animal sobrevivfa, la dosis para el tercer 5 animal era de 300 mg/kg. Finalmente, la dosis para el cuarto animal fue de 2000 mg/kg.

No hubo toxicidad para ninguna dosis en ninguna de las muestras (muestra 1, muestra 2 y muestra 3 definidas anteriormente).

10 La administracion oral aguda de las muestras definidas anteriormente no indujo toxicidad aguda a una dosis maxima de 2000 mg/kg despues de 24 horas de la administracion, ni cualquier otro signo de la induccion de la mortalidad.

Ademas, la ingestion y el crecimiento de los animales son similares en los animales que se alimentaron con las diferentes muestras tal como se muestra en la FIG. 2. La FIG. 3 muestra el aumento de peso diario en terminos de 15 porcentaje para ratas macho (columna en negro) y para ratas hembra (columna en blanco). Este aumento de peso se calculo como la media de los aumentos con respecto al valor de peso de la ultima medicion por dfa y se expresa en terminos de porcentaje. Las ratas se pesaron a intervalos de dos dfas despues de la administracion de la muestra.

20 Ejemplo 2. Efecto de las diferentes muestras en el modelo celular HMEC

Basandose en los resultados previos, se realizo un ensayo de las rutas de senalizacion de los factores de crecimiento de insulina. Se monitorizo la expresion de las protemas pAKT y p70S6K en diferentes muestras. Estas muestras fueron: extracto embrionario comparativo (1), extracto de yema (2), huevo no incubado comparativo (3), 25 huevo no fertilizado comparativo (6), control enzimatico comparativo (4), y control del medio comparativo (5)

La tecnica analftica usada para detectar las protemas pAKT y p70S6K fue transferencia de Western.

La FIG. 4 y la FIG. 5 muestran los resultados. La muestra 2 presenta la mayor activacion de p70S6K y pAKT.

30

Ejemplo 3. Inhibicion de la apoptosis

La apoptosis, o muerte celular programada, es un mecanismo celular clave implicado en una amplia diversidad de procesos fisiologicos.

35

Se realizaron ensayos de activacion de caspasa usando extractos celulares. Las celulas se trataron durante 4 horas con TNFa (factor de necrosis tumoral) 20 ng/mL con ciclohexamida 30 microgramos/mL, y con las muestras 1, 2, 3, 4 y 5. Se determinaron los niveles de caspasa 3.

40 La FIG. 6 muestra la inmunorreactividad de la caspasa 3 de las muestras. La muestra de la invencion, muestra 2, inhibio la apoptosis en una mayor cantidad que las otras muestras.

Ejemplo 4-10. Usos clmicos

45 Los ejemplos 4-10 se refieren al uso clmico del preparado de la invencion. En los ejemplos 4-10 las dosificaciones fueron:

Dosis A: 3 mL de muestra 2.

Dosis B: 6 mL de muestra 2 o 6 mL de muestra 8 (un huevo de gallina fertilizado se retiro de la incubadora despues 50 de 24 horas. Se succionaron 3.6 mL de yema y 2.4 mL de clara). La muestra 2 o la muestra 8 se administraron en un modelo aleatorio.

Las dosificaciones se mantuvieron congeladas. Las dosificaciones se descongelaron a temperatura ambiente diez minutos antes de la ingestion. La ingestion se realizo una hora antes de las comidas. La administracion fue 55 sublingual.

Ejemplo 4

Paciente: mujer, 46 anos. Sin habitos toxicos. Paciente alergica a la penicilina.

60 Historia clmica: extraccion de calculos amigdalinos, hiperlaxitud de ligamentos, smdrome patelofemoral bilateral, mastopatia fibroqmstica, traumatismo de trafico y herpes zoster.

Trastornos medicos: fibromialgia (grado III), smdrome de fatiga cronica (grado II), smdrome depresivo adaptativo, hipoparatiroidismo, sequedad de mucosas e hiperlaxitud de ligamentos.

Desde 2009 la fatiga aumento y la paciente no podia trabajar. Con fecha 22.11.2010 la paciente sufrio dolor lumbar, escoliosis, artrosis cervical y lumbar, dolor general y severo durante los ultimos anos, fatiga muscular despues de esfuerzos muy pequenos, contractura muscular, insomnio, anorgasmia, inestabilidad motora. Se vio afectada la 5 memoria y concentracion de la paciente. La paciente no podia conducir.

Se detecto por metodos analfticos un bajo nivel de hormona paratiroidea (PTH) y un bajo nivel de vitamina D. La hormona estimuladora del tiroides estaba ligeramente elevada (3,74). EMG (electromiografia) normal. Radiograffa de columna con signos degenerativos a nivel de L4/l5 y L5/s1 y una reduccion en la altura del espacio entre vertebras. 10 La radiograffa de vertebras cervicales revelo la presencia de osteofitos C3/C4. Los ultrasonidos de rinon y vejiga fueron normales. La densitometrfa mostro osteopenia.

Tratamiento: Lyrica 75 (Pregabalina), Valdoxan (Agomelatina), Naprosyn (naproxeno), Myolastan (tetrazepam), Alprazolam (una triazolobenzodiazepina), Duphalax (lactulosa), Condrosan (Condroitfn sulfato), Hidroferol 15 (calcifediol), Optovte B12 (cianocobalamina), Viscofresh (carmelosa sodica), Melatonina.

La paciente inicio el tratamiento con dos dosis de B antes del desayuno, la segunda semana de mayo de 2011, durante un mes. Despues, la paciente tomo cuatro dosis de B antes del desayuno y la comida. Durante el mes de agosto, la paciente tomo cinco dosis de B, dos antes del desayuno, dos antes de la comida y una antes de la cena.

20

Despues de cuatro meses se redujeron el dolor muscular y la fatiga. La paciente recupero la actividad ffsica y el buen humor. La paciente mejoro el estado de animo deprimido, la concentracion, la memoria, la vida sexual y el sueno.

25 Estos resultados demuestran que el preparado de huevo de la invencion comprende algunos nutrientes esenciales que restauran la homeostasis perdida por la fibromialgia y el sfndrome de fatiga cronica.

Ejemplo 5

30 Paciente: mujer, 32 anos. Trastornos medicos: psoriasis guttata e hipotiroidismo, estres y sfntomas depresivos.

Historia clfnica: sfntomas de reaccion alergica, analgesicos y antibioticos betalactamicos, paciente alergica.

Tratamiento: antihistamfnicos y cortisona 35

En junio de 2010, la paciente inicio el tratamiento con cuatro dosis de A, dos antes del desayuno y dos antes de las comidas, durante cuatro meses. Despues, la paciente tomo tres dosis de B, dos antes del desayuno y una antes de la comida. Actualmente, la paciente toma dos dosis de B antes del desayuno.

40 Despues del segundo mes, mejoraron la psoriasis y los sfntomas alergicos.

Estos resultados demuestran que el tejido danado se regenera. El preparado de la invencion comprende multiples factores de crecimiento en un punto con alta actividad que permite la estimulacion de un mecanismo antigenico natural de la piel.

45

Ejemplo 6

Paciente: Mujer, 62 anos. Trastornos medicos: gammopatfa monoclonal.

50 Historia clfnica: En 2001 cancer de mama. Se extirparon las dos glandulas mamarias.

En mayo de 2010, la paciente inicio el tratamiento con dos dosis de A antes del desayuno. Despues la paciente tomo tres dosis de B, dos antes del desayuno y una antes de la comida.

55 En julio de 2011 desaparecio la gammopatfa monoclonal.

Ejemplo 7

Paciente: hombre, 55 anos. Trastornos medicos: esclerosis multiple desde 1989. Primer brote en 1985. El primer 60 analisis mostro trastornos multifocales desmielinizantes del sistema nervioso central. Anomalfas del potencial evocado somatosensorial (PES) cervical. El potencial evocado auditivo (PEA) del tronco cerebral mostro protuberancias.

Historia clfnica: en 1989 el paciente se sometio a una cirugfa neurologica, seis anos antes el paciente habfa mostrado la aparicion repentina de una rotacion externa del pie derecho, que se deterioro progresivamente para mejorar despues sin tratamiento. En 1985, el paciente mostro un episodio de vision doble limitado en el tiempo. Posteriormente, mostro debilidad en la extremidad contralateral inferior. En la exploracion neurologica se verifico la 5 presencia de un sfndrome residual vestibular, nistagmo rotatorio horizontal en la mirada a la derecha externa, curvatura conjugada de los indices a la izquierda. Romberg positivo. Tambien la anulacion de reflejos abdominales cutaneos y reflejos indiferentes plantares cutaneos. El paciente mostro multiples lesiones desmielinizantes periventriculares de predominancia frontal y occipital izquierda, otra en el brazo posterior de la capsula izquierda interna y pequenas lesiones nodulillares en el cerebro y tronco. No se verificaron lesiones medulares.

10

En enero de 2011, el paciente mostro esclerosis multiple, estrenimiento, incontinencia urinaria, el paciente llevaba un cateter permanente en la vejiga, ulcera de decubito, intolerancia a movicol (macrogol), el paciente no tenia habitos toxicos, sin alergias ni intolerancias alimentarias, sin movilidad, el paciente usaba silla de ruedas para moverse, y el paciente estaba consciente. La calidad de vida durante 25 anos de evolucion degenerativa de la enfermedad habfa 15 mostrado diferentes condiciones con repercusion en el estado mental. La comunicacion verbal estaba danada aunque el paciente realizaba el esfuerzo de comunicarse con un nivel muy bajo de sonido, observandose niveles de ansiedad. El paciente realizaba un tratamiento homeopatico y fisioterapia una vez por semana.

En febrero de 2011, el paciente inicio el tratamiento con cinco dosis de B, tres antes del desayuno y dos antes de la 20 comida, durante tres meses. Despues, el paciente tomo dos dosis de A y cinco dosis de B, dos dosis de A y dos dosis de B antes del desayuno, dos dosis de B antes de la comida y una dosis de B antes de la cena.

Despues del tratamiento, el fisioterapeuta se dio cuenta de que el paciente desarrollaba fuerza en la extremidad inferior. El paciente mostro movimiento voluntario de los pies y los dedos y el paciente sentfa sensibilidad profunda. 25 Despues del tratamiento, la defecacion era normal y no habfa flatulencia.

Ejemplo 8

Paciente: hombre, 55 anos. Trastornos medicos: sfndrome de cola de caballo que empezo por hernia de disco con 30 lesion axonal bilateral extremadamente grave L5-S1. Sin signos de reinervacion aparentes desde 2004.

Historia clfnica: el paciente padece dolor lumbar continuado. En 2004 condujo a paralisis de la parte inferior del cuerpo. Se diagnostico ciatica. Despues de tres dfas con dolor se diagnostico hernia de disco. El paciente se sometio a cirugfa en una clfnica. Despues de la operacion, el paciente inicio la rehabilitacion. La rehabilitacion se 35 prolongo durante cuatro meses. Despues de la rehabilitacion, el paciente mostro movilidad en el pie izquierdo. El paciente se ponfa de pie. El paciente experimentaba dolor lumbar intenso. El paciente perdio sensibilidad y movilidad en el pie derecho. Caminaba con dificultad.

En abril de 2011, el paciente inicio el tratamiento con ocho dosis de B, cuatro antes del desayuno y cuatro antes de 40 la comida, durante cinco meses.

Despues de tres semanas, el paciente tenia mas energfa. Despues de cuatro semanas, el paciente no sentfa dolor lumbar. El paciente sentfa el pie derecho y elevaba los dedos.

45 En agosto de 2011, se encontraron los primeros signos de reinervacion en los musculos de las pantorrillas. La reinervacion colateral del musculo tibial izquierdo interior aumento progresivamente.

Ejemplo 9

50 Paciente: mujer, 20 anos. Trastornos medicos: ataxia de Friedreich con varios sfntomas, por ejemplo, debilidad muscular en los brazos y piernas, la paciente tenia dificultad para caminar y no podia caminar sola.

Historia clfnica: la paciente se sometio a un tratamiento con celulas madre.

55 En mayo de 2011, la paciente comenzo el tratamiento con una dosis de B antes del desayuno. Durante tres meses, la dosis se aumento hasta seis dosis de B, tres antes de la comida y tres antes de la cena.

El tratamiento restauro la vitalidad de la paciente. La paciente se volvio mas resistente al esfuerzo ffsico. La paciente mejoro la sensibilidad en los pies. La paciente mejoro la coordinacion de las extremidades inferiores.

Ejemplo 10

Paciente: hombre, 76 anos. Trastornos medicos: enfermedad pulmonar obstructiva cronica (EPOC) de grado IV, diabetes II, fibrilacion auricular, trombosis venosa profunda de extremidades inferiores, hipoventilacion, smdrome 5 respiratorio agudo severo.

Historia clmica: terapia con oxfgeno y tratamiento permanente con antibioticos.

En 2005, el paciente sufrio enfisema pulmonar. El paciente tema una historia de fumador. El paciente fumo hasta los 10 60 anos. En 2009 el paciente sufrio taquicardia, dolor toracico. El paciente sufrio taquicardia supraventricular paroxfstica. Oxfgeno domiciliario. En 2010, el paciente se trato para una flebitis bilateral con sintrom. Terapia con bifosfonato. Aplastamiento patologico en T7. El paciente sufna letargia y bradicardia con desvanecimiento.

En mayo de 2011, el paciente inicio el tratamiento con tres dosis de B, dos antes del desayuno y una antes de la 15 comida. Un mes despues, la dosis aumento hasta seis dosis de B, dos antes del desayuno, dos antes de la comida y dos antes de la cena.

Despues del tratamiento, el paciente se sintio mejor, el tratamiento restauro la vitalidad del paciente. El paciente mejoro el problema de gastritis. El paciente mejoro los smtomas de la EPOC. La crisis respiratoria recurrente 20 desaparecio. No fue necesario el oxfgeno domiciliario. Tres meses despues de que el paciente iniciara el tratamiento, el paciente no necesitaba el oxfgeno.

Ejemplo 11: Estudio de encefalopatfa autoinmune experimental

25 La encefalopatfa autoinmune experimental (EAE) es un modelo animal utilizado para el estudio de la esclerosis multiple (EM). En este modelo de EAE, la activacion del sistema inmune fue inducida por la inmunizacion con glicoprotema oligodendrocftica de la mielina (MOG). Unos 10 dfas despues de la inmunizacion con MOG (fase de inicio), los animales comenzaron a sufrir de alteraciones motoras que aumentaron gradualmente llegando a su punto maximo despues de 20-21 dfas (fase de pico). En los dfas siguientes, los animales experimentaron una remision 30 hasta progresar a una fase cronica en el dfa 30. Algunos de los animales no llegaron a la fase cronica y murieron durante la fase pico.

El estudio doble ciego se llevo a cabo con 6 grupos experimentales de ratones hembras C57BL/6:

35 • Grupo A: animales control sin induccion de EAE, sin tratar (n = 4).

• Grupo B: animales control sin induccion de EAE tratados con placebo (muestra comparativa 6, huevo no fertilizado (6)) (n = 4).

• Grupo C: animales control sin induccion de EAE tratados con el preparado de huevo de la invencion (extracto de yema (2)) (n = 4).

40 • Grupo D: animales con EAE inducida sin tratamiento (n = 10).

• Grupo E: animales con EAE inducida tratados con placebo (muestra comparativa 6, huevo no fertilizado (6) (n = 10).

• Grupo F: animales con EAE tratados con el preparado de huevo de la invencion (extracto de yema (2)) (n = 10).

45 La induccion de EAE se realizo mediante inmunizacion subcutanea en la region trasera con una emulsion de MOG35-55 (peptido encefalitogenico de la glicoprotema oligodendrocftica de la mielina) en adyuvante completo de Freund que contema Mycobacterium tuberculosis inactivado. Ademas, los ratones recibieron una administracion toxina pertussis inmediatamente y 48 horas despues de la inmunizacion. Los diferentes tratamientos se administraron diariamente, a la misma hora durante 43 dfas, a partir del dfa de la vacunacion hasta el dfa del 50 sacrificio. Se uso la administracion oral. Los animales tuvieron acceso al tratamiento durante dos horas en una jaula aislada. En el caso de que el animal no hubiera tomado toda la dosis, esta se administro mediante una jeringa. La dosis administrada fue de 0.5 mL por animal por dfa. Durante el estudio los animales fueron mantenidos bajo condiciones de temperatura y humedad controladas y tuvieron acceso a agua y alimentos ad libitum.

55 Diariamente se registro el peso y los smtomas clmicos de los animales. Los smtomas clmicos se evaluaron mediante la prueba de puntuacion clmica siguiente: 0: sin smtomas clmicos, 0,5: perdida parcial de tono de cola, 1: paralisis de la cola; 2: paraparesia del tren posterior; 3: paralisis completa de las extremidades traseras, 4: tetraparesia, y 5: tetraplejia.

60 Resultados

1) Los efectos de la administracion del preparado de huevo de la invencion (extracto de yema (2)) en animales control sin induccion de EAE (Grupo C) fueron comparables a los observados en los grupos de control A y B, sin cambios en el peso y smtomas clmicos.

2) La administracion del preparado de huevo de la invencion (extracto de yema (2)) en animales con EAE inducida (Grupo F) mostro efectos beneficiosos en comparacion con los grupos D y E. En particular, la perdida de peso se evito en parte en los animales del Grupo F.

5

3) La administracion del preparado de huevo de la invencion (extracto de yema (2)) en animales con EAE inducida (Grupo F) tambien indujo cambios importantes en el curso clfnico de la EAE con respecto a los grupos D y E. Asf, los animales del Grupo F mostraron una menor gravedad general en el curso clfnico de la enfermedad (FIG. 7). Se observaron diferencias en la fase de inicio, donde los animales del Grupo F mostraron un retraso en el dfa de la

10 aparicion de los sfntomas con respecto a los animales de los grupos D y E (FIG. 7A). Los valores de puntuacion clfnica mas altos en la fase de pico para los animales del Grupo F (alrededor de 3) fueron inferiores a la de los animales de los grupos D y E (en algunos casos se llego incluso a tetraparesia, puntuacion 4) (FIG. 7B). Durante la fase cronica, los animales del Grupo F se cronificaron con unos valores de puntuacion clfnica mas bajos, alrededor de 1.5. En contraste, los animales del Grupo D mostraron una mayor variabilidad, alcanzando distintos grados de 15 afectacion clfnica (FIG. 7C).

4) Por ultimo, se observo una reduccion significativa de la mortalidad en los animales del Grupo F en comparacion con los animales del Grupo D. En particular, el 20% de los animales del Grupo F murio, mientras que el 45% de los animales del Grupo D murio.

20

Modelo de la regeneracion neuronal

La axotomfa es un modelo de lesion neuronal utilizada para el estudio de la regeneracion neuronal. En este modelo, el nervio facial derecho fue seccionado (axotomfa) a nivel del formane. La axotomfa conduce a la degeneracion 25 walleriana de todos los axones seccionados y la degeneracion retrograda en un numero importante de las neuronas motoras ubicadas en el nucleo del tronco cerebral facial ipsilateral. Es conocido que solo aquellas neuronas del nucleo facial que son capaces de regenerar sus axones son capaces de sobrevivir. El nucleo facial contralateral no lesionado puede ser utilizado como control.

30 El estudio se realizo con 5 grupos experimentales de ratones C57BL/6:

• Grupo A: animales control no sometidos a axotoirna y sin tratar.

• Grupo B: animales control no sometido a axotomfa tratados con placebo (muestra comparativa 6, huevo no fertilizado (6)) (n = 4).

• Grupo C: animales control no sometidos a axotomfa tratados con el preparado de huevo de la invencion (extracto 35 de yema (2)) (n = 4).

• Grupo D: animales axotomizados tratados con placebo (muestra comparativa 6, huevo no fertilizado (6)) (n = 8).

• Grupo E: animales axotomizados tratados con el preparado de huevo de la invencion (extracto de yema (2)) (n = 10).

40 Los diferentes tratamientos se administraron diariamente a la misma hora desde el dfa de axotomfa hasta el dfa del sacrificio. La dosis administrada fue de 0.5 mL por animal por dfa. Los animales tuvieron acceso al tratamiento durante dos horas en una jaula aislada. En el caso de que el animal no hubiera tomado toda la dosis, esta se administro mediante una jeringa. Durante el estudio los animales fueron mantenidos bajo condiciones de temperatura y humedad controladas y tuvieron acceso a agua y alimentos ad libitum.

45

El analisis de la regeneracion axonal se llevo a cabo mediante la cuantificacion de las neuronas motoras del nucleo facial marcadas retrogradamente con Fluorogold. Este marcador retrogrado se inyecto por via subcutanea a nivel de las vibrisas en ambos lados (ipsilateral y contralateral) a los 35 dfas de la axotomfa. En este momento, las neuronas supervivientes fueron capaces de regenerar los axones hasta sus tejidos diana.

50

Los axones regenerados de las neuronas del nucleo facial que llegaron al territorio donde se inyecto el Fluorogold, lo incorporaron y lo transportaron retrogradamente hasta el soma neuronal, el cual emitio fluorescencia intensa en la longitud de onda apropiada (385 nm).

55 Despues de 7 dfas adicionales de supervivencia, es decir, 42 dfas despues de la axotomfa, los animales de los diferentes grupos se anestesiaron, se sacrificaron por perfusion cardfaca con paraformaldehfdo al 4% en fosfato 0.1 M pH 7.4 y tampon y fueron convenientemente procesados para su examen histologico. Para este fin, cada uno de los cerebros despues de ser conservado en 30% de sacarosa y congelado en isopentano se secciono utilizando un criostato, y todos los cortes obtenidos, con un espesor de 30 micras, se recogieron en portaobjetos de vidrio 60 gelatinizados. Las fotograffas de todas las secciones que contienen el nucleo facial ipsilateral y contralateral de cada animal fueron tomadas con un microscopio de epifluorescencia para su posterior cuantificacion. El contaje de los perfiles neuronales fluorescentes (marcados con Fluorogold) se llevo a cabo sobre las fotograffas obtenidas y, posteriormente, se aplico la correccion de Abercrombie para evaluar estereologicamente el numero real de neuronas

marcadas en cada nucleo facial. Los datos obtenidos fueron analizados estadfsticamente mediante test de ANOVA y T de Student.

Resultados

5

1) No se observaron diferencias significativas en el numero de neuronas marcadas con Fluorogold en animales tratados no sometidos a axotomfa (Grupos B y C) (FIG.8A). Esto indica que el tratamiento con el preparado de huevo de la invencion (Grupo C) en los 42 dfas de administracion continua es seguro y no produce ningun tipo de neurodegeneracion en el nucleo facial objeto de este estudio.

10

2) El numero de neuronas marcadas con Fluorogold en animales axotomizados tratados (Grupos D y E) y en animales tratados no sometidos a axotomfa (Grupos B y C) fue similar (FIG. 8B). Esto valida el lado contralateral de los grupos D y E como control en el estudio cuantitativo.

15 3) En los grupos D y E, la axotomfa del nervio facial indujo la degeneracion de un porcentaje significativo de las neuronas en el nucleo facial (FIG. 8C) que se tradujo en un menor numero de neuronas marcadas con Fluorogold cuando se comparan los lados ipsilateral y contralateral. Sin embargo, el tratamiento con el preparado de huevo de la invencion (muestra 2) (Grupo E) ejercio un efecto beneficioso en una proporcion significativa de la poblacion de animales axotomizados. Esto fue demostrado por un mayor grado inusual de regeneracion, referido como el grado 20 de regeneracion axonal que es superior a 50% de un valor esperado promedio de la regeneracion. En la FIG. 8C la lfnea horizontal por encima de 400 indica el grado de regeneracion inusual. Aproximadamente el 38% de los animales del Grupo E y solo el 14% de los animales del Grupo D mostro un numero inusualmente alto de neuronas marcadas con Fluorogold.

25 REFERENCIAS CITADAS EN LA SOLICITUD

- L. Coussens et al. in “Inflammation and cancer”, Nature 2002, vol. 420, pp. 860-867

- EP0904090

- CA2197050 30 - WO0191777

- WO2009115429

Claims (12)

1. REIVINDICACIONES

   1. Preparado de huevo que comprende una mezcla de yema y clara extrafdas de un huevo fertilizado incubado durante un periodo comprendido entre 18 horas y 36 horas, en la que la mezcla de yema y clara esta en una

   5 proporcion en la que la cantidad de clara esta comprendida entre 2% y 40% en volumen con respecto al volumen de la yema.
2. 2. Preparado de huevo segun la reivindicacion 1, donde la cantidad de clara esta comprendida entre 5% y 30% en volumen con respecto al volumen de la yema.

   10
3. 3. Preparado de huevo de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1-2, donde la cantidad de clara es 10% en volumen con respecto al volumen de la yema.
4. 4. Preparado de huevo segun cualquiera de las reivindicaciones 1-3, donde la clara es clara fluida interna.

   15
5. 5. Preparado de huevo segun cualquiera de las reivindicaciones 1-4, que ademas comprende clara fluida externa y/o clara densa, en una cantidad tal que la suma de clara fluida interna, clara fluida externa y clara densa en el preparado de es de hasta 99% en volumen con respecto a la suma de los volumenes de yema y clara total.

   20 6. Procedimiento para preparar el preparado de huevo definido en cualquiera de las reivindicaciones 1-5, que comprende:

   (a) incubar un huevo fertilizado durante un periodo comprendido entre 18 horas y 36 horas; y opcionalmente refrigerar el huevo incubado obtenido;

   (b) recoger una cantidad de yema y una cantidad de clara del huevo fertilizado incubado obtenido en la etapa 25 anterior, y mezclar la yema y la clara en una proporcion en la que la cantidad de clara esta comprendida entre 2% y

   40% en volumen con respecto al volumen de la yema;

   (c) homogeneizar la mezcla de yema y clara obtenida en la etapa b); y

   (d) fijar las propiedades del preparado de huevo obtenido en la etapa c).

   30 7. Procedimiento segun la reivindicacion 6, donde la etapa de inactivacion comprende una etapa de congelacion o una etapa de liofilizacion.
6. 8. Alimento funcional o suplemento dietetico que comprende un preparado de huevo como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-5.

   35
7. 9. Composicion farmaceutica, veterinaria o cosmetica, que comprende una cantidad efectiva de un preparado de huevo como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-5, junto con uno o mas excipientes o portadores farmaceuticos, veterinarios o cosmeticos, respectivamente.

   40 10. Preparado de huevo como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-5, para uso como agente analgesico para el tratamiento del dolor agudo o cronico en afecciones relacionadas con el dolor.
8. 11. Preparado de huevo para uso segun la reivindicacion 10, donde la afeccion relacionada con el dolor es fibromialgia.

   45
9. 12. Preparado de huevo como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-5, para uso como agente regenerador para el tratamiento de afecciones degenerativas.
10. 13. Preparado de huevo para uso segun la reivindicacion 12, donde la afeccion relacionada se selecciona del grupo 50 que consiste en psoriasis, esclerosis multiple y ataxia de Friedreich.
11. 14. Preparado de huevo como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-5, para uso como agente anti- inflamatorio para el tratamiento de afecciones inflamatorias.

    55 15. Preparado de huevo para uso segun la reivindicacion 14, donde la afeccion es cancer.
12. 16. Uso cosmetico del preparado de huevo como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1-5, como agente de cuidado de la piel, o como agente de cuidado del cabello o pelaje.