ES2445846A2

ES2445846A2 - Una composición de combinación farmacéutica y su uso para preparar un medicamento destinado al tatamiento de la diabetes de tipo l y los trastornos metabólicos

Info

Publication number: ES2445846A2
Application number: ES201390009A
Authority: ES
Inventors: Oleg Iliich Epshtein
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2010-07-21
Filing date: 2011-07-15
Publication date: 2014-03-05
Also published as: ES2445846R1; DE112011102396T5; CZ2013124A3; SE1350212A1; GB2552405B; WO2012010966A2; ITTO20110627A1; EA029847B1; NZ606964A; CL2013000200A1; GB2552405A; FI20135152L; GB201302924D0; MX2013000804A; EA201300124A1; EE05761B1; US20130064824A1; DK201370089A; EP2595658A2; CN103118707A

Abstract

Una composición de combinación farmacéutica y su uso para preparar un medicamento destinado al tratamiento de la diabetes de tipo I y los trastornos metabólicos. La presente solicitud proporciona una composición farmacéutica para ser usada para preparar un medicamento destinado al tratamiento de la diabetes y otros trastornos metabólicos. La composición comprende a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor de la insulina humana, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo para la NO sintasa endotelial.

Description

Una composición de combinación farmacéutica y su uso para preparar un medicamento destinado al tratamiento de la diabetes de tipo I y los trastornos metabólicos.

Campo

La presente invención está relacionada con el campo de la medicina y puede ser usada para preparar un medicamento destinado al tratamiento y prevención de enfermedades diabéticas y otros trastornos metabólicos.

Antecedentes

La Diabetes Mellitus es una condición crónica caracterizada por hiperglucemia (altos niveles de azúcar en la sangre). El continuo incremento de niveles de glucosa en la sangre aumenta el riesgo de complicaciones relacionadas con la diabetes tales como daños en el riñón, pérdida de la visión, enfermedades cardíacas y úlceras en los pies.

Hay dos grandes tipos de diabetes: diabetes de tipo 1 y diabetes de tipo 2. Con la diabetes de tipo 1, la hiperglucemia se desarrolla porque el páncreas no puede producir insulina. Este tipo de diabetes usualmente aparece en la infancia o adolescencia. En la diabetes de tipo 2, el páncreas es capaz de producir insulina, pero no puede cumplir adecuadamente con los requerimientos del cuerpo. El problema es que el cuerpo humano no responde a la insulina de manera apropiada, lo que se traduce en menos glucosa que es absorbida por las células y da como resultado niveles de glucosa en sangre anormalmente elevados. Después de sobrecargar el páncreas durante varios años, éste eventualmente falla y agota su habilidad para producir insulina, con lo que, ena este punto, una persona con diabetes de tipo 2 puede requerir terapia con insulina.

La insulina, una hormona natural producida por el páncreas, transporta glucosa desde el torrente sanguíneo hasta el interior de las células. De esta forma, el trabajo principal de la insulina es regularizar el transporte de glucosa hacia las células gracias a lo cual disminuye el nivel de glucosa en la sangre.

El efecto de la insulina es controlado a través de la activación de un receptor heterotetramérico el cual se encuentra en la membrana plasmática. El receptor de insulina es una glicoproteína compuesta de dos subunidades alfa extracelulares y dos subunidades beta transmembrana unidas por puentes de disulfuro.(Ullrich et al., Nature, 313:756-61, 1985. Las subunidades alfa contienen el dominio de unión de la insulina, y la porción intracelular de la subunidad beta contiene la proteína tirosina quinasa regulada por la insulina (la enzima que cataliza la transferencia de un grupo de alta energía a partir de un donante (usualmente ATP) hacia un receptor).

Cuando una molécula de insulina es liberada por las células beta del páncreas y llega a una célula, la misma se une al receptor de insulina en la superficie de la mayoría de las células. Una vez la insulina se une, la función intrínseca fosfotransferasa de la subunidad beta del receptor la insulina es activada, dando como resultado la fosforilación de las tirosinas denumerosas proteínas intracelulares. Una vez el receptor de insulina ha sido activado, el evento de fosforilación conduce a incrementar el almacenamiento de glucosa y como consecuencia a un descenso en los niveles de glucosa en la sangre.

Es difícil alcanzar un control efectivo de los niveles de glucosa durante períodos prolongados de tiempo incluso con el método más meticuloso de terapia con insulina en los pacientes con más motivación. Debido a esto hay una necesidad continua de nuevos productos con fármacos con la eficacia terapéutica deseada para el tratamiento de enfermedades y trastornos metabólicos.

El Óxido Nítrico (NO) es una molécula gaseosa que ha sido demostrado que actúa en la señalización de diferentes procesos biológicos. El NO derivado del endotelio es una molécula clave en la regulación del tono vascular y su asociación con enfermedades vasculares ha sido reconocida desde hace mucho tiempo atrás. El NO inhibe muchos procesos conocidos por estar implicados en la formación de la placa aterosclerótica, incluyendo adhesión de monocitos, agregación de plaquetas y proliferación de células del músculo liso vascular. Otro papel importante del NO endotelial es la protección de la pared vascular del estrés oxidativo inducido por sus propios productos metabólicos y por la oxidación de productos de lípidos y lipoproteínas. La disfunción endotelial ocurre en etapas muy tempranas de la aterosclerosis. De esta forma es posible que la deficiencia en la disponibilidad de NO a nivel local pueda ser una vía final común que acelera la aterogénesis en humanos. Además de su papel en el endotelio vascular, ha sido demostrado que la disponibilidad de NO modula el metabolismo de las lipoproteínas. Se ha informado de una correlación negativa entre las concentraciones en plasma de productos metabólicos del NO y los niveles de colesterol en plasma total y asociado a Lipoproteínas de Baja Densidad (LDL), mientras que las Lipoproteínas de Alta Densidad (HDL) mejoran la función vascular en pacientes hipercolesterolémicos. La pérdida de NO tiene efectos considerables en el desarrollo de la enfermedad. La diabetes mellitus está asociada a incrementos en las tasas de mortalidad y mortalidad causados inicialmente por un desarrollo acelerado de enfermedades ateroscleróticas. Además, hay informes que muestran que la diabetes disminuye las funciones pulmonares. Ha sido propuesto que la resistencia a la insulina conduce a una inflamación de las vías respiratorias. Habib et al., Nitric Oxide Measurement From Blood To Lungs, Is There A Link? Pak J Physiol 2007;3(1).)

El óxido nítrico es sintetizado por el endotelio a partir de L-arginina por la óxido nítrico sintasa (NO sintasa). La NO sintasa puede encontrarse en diferentes isoformas, incluyendo una forma constitutiva (cNOS) y una forma inducible (iNOS). La forma constitutiva está presente en células endoteliales normales, neuronas y algunos otros tejidos.

El efecto terapéutico de una forma extremadamente diluida (o ultrabaja) de anticuerpos potenciados por tecnología homeopática ha sido descubierto por el inventor de la presente solicitud de patente, Dr. Oleg I. Epshtein. La patente de EE.UU. No. 7.582.294 divulga un medicamento para el tratamiento de la Hiperplasia Prostática Benigna o prostatitis por administración de una forma homeopáticamente activada de anticuerpos contra el antígeno prostático específico (PSA). La patente de EE.UU. No. 7.700.096 describe una forma potenciada homeopáticamente de anticuerpos contra la NO sintasa endotelial. La forma potenciada homeopáticamente de anticuerpos frente a la NO sintasa endotelial se comercializa en la Federación Rusa y otros países bajo el nombre de Impaza®.

Compendio

En un aspecto, la invención provee una composición farmacéutica para la administración a un paciente que sufre de enfermedades diabéticas y otros trastornos metabólicos. La composición comprende: a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor humano de insulina, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial.

En un aspecto, la invención provee una composición farmacéutica para la administración a un paciente que sufre de enfermedades diabéticas y otros trastornos metabólicos. La composición comprende: a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra un fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial.

En una variante, la composición farmacéutica de este aspecto de la invención comprende: a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor de insulina humano, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial, en donde la molécula del receptor de insulina comprende al menos una subunidad alfa y al menos una subunidad beta.

En una variante, la composición farmacéutica de este aspecto de la invención incluye una forma activada potenciada de un anticuerpo contra un fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina o la forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor humano de insulina en forma de una mezcla de diluciones homeopáticas C12, C30, y C200, impregnadas sobre un soporte sólido. La forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial en forma de mezcla de diluciones homeopáticas C12, C30, y C200, puede ser posteriormente impregnada sobre un soporte sólido.

En otra variante, la composición farmacéutica de este aspecto de la invención incluye la forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial en forma de mezcla de diluciones homeopáticas C12, C30, y C200 impregnadas sobre un soporte sólido. La forma activada potenciada de un anticuerpo contra un fragmento Cterminal de la subunidad beta de un receptor humano de insulina o la forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor humano de insulina está en forma de diluciones homeopáticas C12, C30, y C200 y pueden ser posteriormente impregnadas sobre un soporte sólido.

Preferiblemente, la forma activada potenciada de un anticuerpo contra un fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina o la forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor humano de insulina es un anticuerpo monoclonal, policlonal o natural, más preferiblemente, un anticuerpo policlonal. En una variante de este aspecto de la invención, la forma activada potenciada de un anticuerpo contra un fragmento Cterminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina o la forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor humano de insulina es preparada por sucesivas diluciones centesimales acopladas a agitación de cada dilución.

Preferiblemente, la forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial es un anticuerpo monoclonal, policlonal o natural, más preferiblemente, un anticuerpo policlonal. En una variante de este aspecto de la invención, la forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial es preparada por sucesivas diluciones centesimales acopladas a agitación de cada dilución.

En otro aspecto, la invención provee un método para el tratamiento de un paciente que padece diabetes de tipo I, comprendiendo el método administrar al paciente una combinación de a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor de insulina humano, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial.

En otro aspecto, la invención provee un método para el tratamiento de un paciente que padece diabetes de tipo I, comprendiendo el método administrar al paciente una combinación de a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra un fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial.

En otro aspecto, la invención provee un método para el tratamiento de un paciente que padece diabetes de tipo II, comprendiendo el método administrar al paciente una combinación de a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor humano de insulina, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial.

En otro aspecto, la invención provee un método para el tratamiento de un paciente que padece diabetes de tipo II, comprendiendo el método administrar al paciente una combinación de a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra un fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial.

En otro aspecto, la invención provee un método para reducir el nivel de glucosa en sangre en un mamífero, comprendiendo el método administrar al mamífero una combinación de a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor humano de insulina, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial.

En otro aspecto, la invención provee un método para reducir el nivel de glucosa en sangre en un mamífero, comprendiendo el método administrar al mamífero una combinación de a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra un fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial.

En otro aspecto, la invención provee un método para el tratamiento de la resistencia a la insulina en un mamífero, comprendiendo el método administrar al mamífero una combinación de a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor humano de insulina, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial.

En otro aspecto, la invención provee un método para el tratamiento de la resistencia a la insulina en un mamífero, comprendiendo el método administrar al mamífero una combinación de a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra un fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial.

En otra variante de este aspecto de la invención, se proporciona la administración de una a dos formas de dosificación unitaria de la forma activada potenciada de un anticuerpo contra un fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina o una forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor humano de insulina, y de una a dos formas de dosificación unitaria de la forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial; siendo administrada cada forma de dosificación de una vez al día a cuatro veces al día. Preferiblemente, la administración de una o dos formas de dosificación de cada una de las formas activadas potenciadas de anticuerpos tiene lugar dos veces al día.

Descripción de las figuras

Figura 1 – Ilustra el efecto de las preparaciones probadas sobre los niveles de glucosa en el plasma sanguíneo de ratas con diabetes mellitus inducida por estreptozotocina.

Figura 2 – Ilustra el efecto de las preparaciones probadas en el día 14 de inyección en los indicadores del área bajo la curva de tiempo-concentración (AUC) en la prueba de tolerancia a la glucosa en ratas con diabetes mellitus inducida por estreptozotocina.

Figura 3 – Ilustra el efecto de las preparaciones probadas sobre los niveles de glucosa en el plasma sanguíneo de ratas con diabetes mellitus espontánea no dependiente de insulina.

Figura 4 – Ilustra el efecto de las preparaciones probadas en el día 28 de inyección en los indicadores del área bajo la curva de tiempo-concentración (AUC) en la prueba de tolerancia a la glucosa en ratas con diabetes mellitus espontánea no dependiente de insulina .

Figura 5 – Ilustra las dinámicas de los niveles de glucosa y de hemoglobina glicosilada en pacientes con diabetes mellitus de tipo I contra el antecedente de tomar preparaciones de IR Ab + NOS Ab.

Figura 6 – Ilustra las dinámicas de los niveles de glucosa y de hemoglobina glicosilada en pacientes con diabetes mellitus de tipo II contra el antecedente de tomar preparaciones de IR Ab + NOS Ab.

Descripción detallada

La invención se define con referencia a las reivindicaciones adjuntas. Con respecto a las reivindicaciones, el glosario que sigue provee las definiciones relevantes.

El término “anticuerpo” tal y como es usado en el presente documento se define como una inmunoglobulina que específicamente se une a, y por consiguiente se define como complementaria a, una organización espacial y polar particular de otra molécula. Los anticuerpos mencionados en las reivindicaciones pueden incluir una inmunoglobulina completa o un fragmento de la misma, pueden ser naturales, policlonales o moniclonales, y pueden incluir varias clases e isotipos, tales como IgA, IgD, IgE, IgG1, IgG2a, IgG2b e IgG3, IgM, etc. Los fragmentos de las mismas pueden incluir Fab, Fv y F(ab')2, Fab', y similares. El singular “anticuerpo” incluye el plural “anticuerpos”.

El término “forma activada potenciada o “forma potenciada” respectivamente, en relación con anticuerpos mencionados en el presente documento, se utiliza para designar un producto de la potenciación homeopática de

cualquier solución inicial de anticuerpos. “Potenciación Homeopática” denota el uso de métodos de homeopatía para

impartir potencia homeopática a una solución inicial de la sustancia en cuestión. Aunque no es tan limitado, "la potenciación homeopática" puede implicar, por ejemplo, repetidas diluciones consecutivas en combinación con un tratamiento externo, en particular agitación (mecánica). En otras palabras, una solución inicial de los anticuerpos se somete a diluciones consecutivas repetidas y agitaciones verticales múltiples de cada solución obtenida de acuerdo con técnicas homeopáticas. La concentración preferida de la solución inicial de anticuerpos en el disolvente, preferiblemente agua o una mezcla de agua y alcohol etílico, oscila entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 5,0 mg / ml. El procedimiento preferido para la preparación de cada componente, esto es, la solución de anticuerpos, es el uso de la mezcla de tres diluciones acuosas o acuosas-alcohólicas de la solución de la matriz primaria (tintura madre) de anticuerpos diluidos 10012, 10030 y 100200 veces, respectivamente, lo que equivale centesimal de las diluciones homeopáticas (C12, C30 y C200) o el uso de la mezcla de tres diluciones acuosas o acuosas-alcohólicas de la solución de la matriz primaria de anticuerpos diluidos 10012, 10030 y 10050 veces, respectivamente, lo que equivale a diluciones homeopáticas centesimales (C12, C30 y C50). Se describen ejemplos de la potenciación homeopática en las patentes de EE.UU. No. 7.572.441 y 7.582.294, que se incorporan por referencia al presente documento en su totalidad y para el propósito indicado. Aunque el término "forma activada potenciada" se utiliza en las reivindicaciones, el término "dosis ultrabajas" se usa en los ejemplos. El término "dosis ultrabajas" se convirtió en un término técnico en el campo de la técnica creado por el estudio y uso de la forma homeopáticamente diluida y potenciada de una sustancia. El término "dosis ultrabaja" o "dosis ultrabajas” se entiende básicamente como un sinónimo y un soporte completo para el término forma "activada potenciada" utilizado en las reivindicaciones.

En otras palabras, un anticuerpo está en forma activada potenciada cuando tres factores están presentes. Primero, la forma "activada potenciada" del anticuerpo es un producto de un proceso de preparación bien aceptado en la técnica homeopática. Segundo, la forma "activada potenciada" de un anticuerpo debe tener una actividad biológica determinada por métodos bien aceptados en la farmacología moderna. Y tercero, la actividad biológica exhibida por la forma "activada potenciada" del anticuerpo no puede ser explicada por la presencia de la forma molecular del anticuerpo en el producto final del proceso homeopático.

Por ejemplo, la forma activada potenciada de anticuerpos puede ser preparada sometiendo un anticuerpo aislado inicial en forma molecular a múltiples diluciones consecutivas acopladas a un impacto externo, por ejemplo una agitación mecánica. El tratamiento externo en el curso de la reducción de concentración puede también lograrse, por ejemplo, a través de la exposición a factores ultrasónicos, electromagnéticos, y otros factores físicos. V. Schwabe "Homeopathic medicines", M., 1967, patentes de EE.UU. Nos. 7.229.648 y 4.311.897, las cuales se incorporan por referencia al presente documento en su totalidad y para el propósito indicado, describen dichos procesos que son métodos de potenciación homeopáticos bien aceptados en el técnica homeopática. Este procedimiento da lugar a una disminución uniforme de la concentración molecular de la forma molecular inicial del anticuerpo. Este procedimiento es repetido hasta que la potenciación homeopática deseada es lograda. Para el anticuerpo individual, la potencia homeopática requerida puede ser determinada sometiendo las diluciones intermedias a ensayos

biológicos en el modelo farmacológico deseado. Aunque no es tan limitada, la “potenciación homeopática” puede

incluir, por ejemplo, diluciones repetidas consecutivas combinadas con tratamientos externos, particularmente agitación vertical (mecánica). En otras palabras, una solución inicial de anticuerpos es sometida a diluciones repetidas consecutivas y múltiples agitaciones verticales de cada solución obtenida de acuerdo con la tecnología homeopática. La concentración preferida de la solución inicial de anticuerpo en el disolvente, preferiblemente, agua

o una mezcla de agua y alcohol etílico, oscila entre aproximadamente 0,5 y aproximadamente 5,0 mg/ml. El procedimiento preferido para preparar cada componente, por ejemplo una solución de anticuerpo, es el uso de la mezcla de tres diluciones acuosas o o acuosas-alcohólicas de la solución de la matriz primaria (tintura madre) de anticuerpos diluidos 10012, 10030 and 100200 veces respectivamente, lo que equivale a una dilución homeopática centesimal C12, C30 y C200 de la mezcla de tres diluciones acuosas o acuosas-alcohólicas de la solución de la matriz primaria (tintura madre) de anticuerpos diluidos 10012, 10030 and 10050 veces respectivamente, lo que equivale a una dilución homeopática centesimal C12, C30 y C50. Ejemplos de cómo obtener la potencia deseada son también ofrecidos, por ejemplo, en las patentes de EE.UU. Nos 7.229.648 y 4.311.897, las cuales están incorporadas por referencia con el propósito declarado. El procedimiento aplicable a la forma “activada potenciada” de los anticuerpos descritos en el presente documento se describe con más detalles a continuación.

Ha existido una cantidad considerable de controversia en relación al tratamiento homeopático en seres humanos. Mientras la presente invención se basa en procesos homeopáticos aceptados para obtener la forma activada potenciada de anticuerpos, la misma no se basa solamente en homeopatía en seres humanos para evidenciar la actividad. Sorprendentemente el inventor de la presente solicitus ha descubierto, al vez que ha sido mpliamente demostrado por los moledos farmacológicos aceptados que el solvente obtenido en última instancia por múltiples diluciones de una forma de molécula inicial de un anticuerpo tiene actividad definitiva no relacionada con la presencia de rastros de formas moleculares de anticuerpos en la dilución de destino. La forma activada potenciada del anticuerpo que aquí se propone se pone a prueba para actividad biológica en modelos de actividad farmacológico aceptados, bien sea en experimentos in vitro apropiados, o in vivo en modelos de animales adecuados. Los experimentos que se proveen a continuación muestran evidencia de actividad biológica en dichos modelos. Los ensayos clínicos humanos, también ofrecidos aquí, demuestran, entre otros, que la actividad observada en los modelos animales se puede trasladar perfectamente a la terapia humana. El estudio humano también muestra evidencia de disponibilidad de la forma activada potenciada descrita en este documento para tratar enfermedades en humanos especificadas o desórdenes aceptados como condiciones patológicas en la ciencia médica.

Además, la forma activada potenciada de anticuerpos reivindicada abarca solo soluciones o preparaciones sólidas de actividad biológica de las que no pueden ser explicadas por la presencia de forma molecular del anticuerpo que aún persiste de la muestra inicial. En otras palabras, mientras se considere que la forma activada potenciada del anticuerpo puede contener rastros de la forma inicial de molécula del anticuerpo, algún experto en la materia no podría atribuir la actividad biológica observada en los modelos farmacológicos aceptados a la forma molecular restante del anticuerpo con cualquier grado de plausibilidad debido a las concentraciones extremamente bajas de forma molecular del anticuerpo restantes después de diluciones consecutivas. Mientras la invención no está limitada por ninguna teoría en especial, la actividad biológica de la forma activada potenciada de los anticuerpos de la invención presente no es atribuible a la forma inicial molecular del anticuerpo. La forma activada potenciada de anticuerpo es preferible en forma líquida o sólida en la cual la concentración de la forma inicial molecular del anticuerpo está por debajo del límite de detección de las técnicas analíticas aceptadas, tales como electroforesis capilar y Cromatografía Líquida de Alta Resolución. Lo ideal es tener la forma “activa concentrada” del anticuerpo en forma líquida o sólida en la cual la concentración de la forma inicial molecular esté por debajo del número de Avogadro. En farmacología de formas moleculares de sustancias terapéuticas, es común crear una “curva de dosisrespuesta” en la cual el nivel de respuesta farmacológica es trazado teniendo en cuenta la concentración del

fármaco activo administrado al sujeto o probado in-vitro. El nivel mínimo del fármaco para el cual produce una respuesta detectable es conocido como umbral de dosis. Se prefiere que la forma activada potenciada de los anticuerpos contengan anticuerpos moleculares, si existen, en una concentración menor a la dosis umbral para la forma molecular del anticuerpo en el proceso biológico dado.

La presente invención presenta una composición farmacéutica para administrar a un paciente que sufre de Diabetes y otros desórdenes metabólicos, que comprende a) una forma activada potenciada de un anticuerpo hacia un fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de la insulina, o una forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor humano de insulina; y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial. Como se indica anteriormente en el presente documento, cada uno de los componentes individuales de la combinación es generalmente conocido por sus propios usos médicos. Sin embargo, los inventores de la presente solicitud de patente sorprendentemente descubrieron que la administración de la combinación supone una ayuda significativa en el tratamiento de pacientes con Diabetes y resistencia a la insulina, reduciendo aún más los niveles de glucosa en la sangre. Mientras el solicitante no se queda en ésta teoría, la

hipótesis “acelerador” asume que Diabetes Mellitus (DM) de Tipo 1 y Diabetes Mellitus (DM) de Tipo 2 son la misma

enfermedad caracterizadas por la resistencia a la insulina, cuyos desarrollos dentro del Tipo 1 de DM y Tipo 2 de DMestá determinado por el genotipo del paciente. Ésta hipótesis no niega el rol de procesos autoinmunes, sin embargo,

pone en duda su rol primario. La hipótesis “acelerador” divide Tipo 1 y Tipo 2 DM de acuerdo a la velocidad de

progreso: En la DM Tipo 1, un desarrollo rápido de cambios patológicos determina la aparición más temprana de de síntomas clínicos de enfermedades. La hipótesis fue propuesta por primera vez en el año 2001 y actualmente está confirmada por el resultado de 6 estudios clínicos independientes (referirse a Wilkin, T.J. The accelerator hypothesis: a review of the evidence for insulin resistance as the basis for type [I] as well as type II diabetes. // International Journal for Obesity. 2009: Vol. 33 -p. 716-726.). La resistencia a la insulina es un aspecto importante en la patogenia de ambos tipos de diabetes , cuya reducción conlleva una mejora de los síntomas clínicos en ambos tipos de Diabetes (Tipo 1 y 2) (referirse a Cellular mechanisms of insulin resistance. World Congress on Insulin Resistance Syndrome, 2009, Diabetes Care. 2010: Vol. 33, N8, pp. 103-108.). El rol que juega la subunidad beta del receptor de insulina en la señal de insulina es conocido. Después de la unión de la insulina con el receptor y la activación de la subunidad beta, la señal puede ir en dos direcciones diferentes: fosfatidilinositol 3-quinasa (PI 3- K) o MAP quinasa (MAP – K). La primera trayectoria parece ser necesaria para la realización de la mayoría de los efectos metabólicos y antiapoptótico de la insulina, y la mientras que la alternativa está conectada con su efecto no-metabólico, proliferativo y mitogénico. En el caso de la resistencia a la insulina, se ha demostrado que la resistencia a la insulina metabólica juega un papel importante a la hora de determinar el desarrollo de Diabetes Mellitus solo en los casos en los que está conectada con la activación de la subunidad beta a lo largo de la trayectoria P13 – K.. (Referirse a Muntoni, S, Muntoni, S. Insulin Resistance: Pathophysiology and Rationale for Treatment, Ann. Nutr. Metab. 2011: Vol. 58, N1, pp. 25-36). La composición farmacéutica reivindicada asegura un efecto en la resistencia metabólica a la insulina.

La composición farmacéutica de acuerdo con este aspecto de la invención puede estar en forma líquida o en forma sólida. Cada una de las formas activas potenciadas de los anticuerpos incluidos en la composición farmacéutica se prepara a partir de una forma de molécula inicial del anticuerpo vía un proceso aceptado por el arte homeopático. Los anticuerpos iniciales pueden ser monoclonales, o policlonales preparados de acuerdo a procesos conocidos, por ejemplo, como se describe en Immunotechniques, G. Frimel, M., “Meditsyna”, 1987, p. 9-33; “Hum. Antibodies.

Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after” by Laffly E., Sodoyer R. – 2005 – Vol. 14. – N 1-2. P.33-55, ambas incorporadas en el presente documento como referencias.

Los anticuerpos monoclonales pueden ser obtenidos, por ejemplo, gracias a la tecnología del hibridoma. La fase inicial del proceso incluye una inmunización basada en los principios ya desarrollados en el transcurso de la preparación del antisuero policlonal. Las siguientes etapas de trabajo incluyen producción de células híbridas generando clones de anticuerpos con idéntica especificidad. Su aislamiento y separación se realiza usando los mismos métodos que en el caso de la preparación del antisuero policlonal.

Los anticuerpos policlonales pueden ser obtenido vía inmunización activa de animales. Para esto, por ejemplo, animales adecuados (por ejemplo: conejos), reciben una serie de inyecciones de un antígeno apropiado, bien sea NO sintasa endotelial y fragmentos C-terminales de la subunidad beta del receptor humano de la insulina; o la NO sintasa endotelial y el receptor humano de insulina. El sistema inmune de los animales genera anticuerpos correspondientes, los cuales son extraídos del animal de una manera conocida. Este procedimiento habilita la preparación de un suero rico en anticuerpos monoespecíficos. Si se desea, el suero que contiene anticuerpos puede ser purificado, por ejemplo utilizando la cromatografía de afinidad, el fraccionamiento por precipitación de sales, o la cromatografía de intercambio iónico. El suero purificado resultante y enriquecido con anticuerpos puede ser usado como un material de inicio para la preparación de la forma activada potenciada de los anticuerpos. La concentración ideal final de la solución inicial de anticuerpo en el solvente, preferiblemente agua o mezcla de agua con alcohol etílico, va desde los 0.5 a los 5.0 mg/ml.

El procedimiento ideal para preparar cada componente es el uso de mezclas de tres diluciones de agua y alcohol de la solución de la matriz primaria (tintura madre) de anticuerpos diluidos en 10012, 10030 and 100200 veces respectivamente, lo que equivale a una dilución homeopática centésimal C12, C30 y C200. Para preparar una dosis en forma sólida, se trata un soporte sólido con la dilución deseada y obtenida a través del proceso homeopático. Para obtener una forma de dosificación sólida de la combinación de la invención, el soporte debe estar impregnado con cada una de las diluciones. El orden de impregnación es indiferente para preparar la forma de dosificación.

En el caso ideal, el material inicial para la preparación de la forma activada potenciada que consiste en una combinación de la invención de anticuerpo policlonal de animales para el correspondiente antígeno, llamado fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina, o, la NO sintasa endotelial y el receptor humano de insulina. Para obtener la forma activada potenciada de anticuerpos policlonales al fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina, el antígeno deseado puede ser inyectado como inmunógeno dentro de un animal de laboratorio, preferiblemente conejos. Péptidos de interés particular pueden incluir al menos tres aminoácidos, generalmente por lo menos unos 10 a ambos lados de la secuencia, preferiblemente con un mínimo de 3 aminoácidos en el extremo C-terminal. Las siguientes secuencias del receptores de la insulina humana se contemplan específicamente como antígenos apropiados:

Toda la subunidad alfa del receptor de la insulina humana.

SEQ ID NO: 1

His Leu Tyr

28 30

Pro Gly Glu Val Cys Pro Gly Met Asp Ile Arg Asn Asn Leu Thr

31 35 40 45

Arg Leu His Glu Leu Glu Asn Cys Ser Val Ile Glu Gly His Leu

46 50 55 60

Gln Ile Leu Leu Met Phe Lys Thr Arg Pro Glu Asp Phe Arg Asp

61 65 70 75

Leu Ser Phe Pro Lys Leu Ile Met Ile Thr Asp Tyr Leu Leu Leu

76 80 85 90

Phe Arg Val Tyr Gly Leu Glu Ser Leu Lys Asp Leu Phe Pro Asn

91 95 100 105

Leu Thr Val Ile Arg Gly Ser Arg Leu Phe Phe Asn Tyr Ala Leu

106 110 115 120 Val Ile Phe Glu Met Val His Leu Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Asn 121 125 130 135 Leu Met Asn Ile Thr Arg Gly Ser Val Arg Ile Glu Lys Asn Asn 136 140 145 150 Glu Leu Cys Tyr Leu Ala Thr Ile Asp Trp Ser Arg Ile Leu Asp 151 155 160 165 Ser Val Glu Asp Asn Tyr Ile Val Leu Asn Lys Asp Asp Asn Glu 166 170 175 180 Glu Cys Gly Asp Ile Cys Pro Gly Thr Ala Lys Gly Lys Thr Asn 181 185 190 195 Cys Pro Ala Thr Val Ile Asn Gly Gln Phe Val Glu Arg Cys Trp 196 200 205 210 Thr His Ser His Cys Gln Lys Val Cys Pro Thr Ile Cys Lys Ser 211 215 220 225 His Gly Cys Thr Ala Glu Gly Leu Cys Cys His Ser Glu Cys Leu 226 230 235 240 Gly Asn Cys Ser Gln Pro Asp Asp Pro Thr Lys Cys Val Ala Cys 241 245 250 255 Arg Asn Phe Tyr Leu Asp Gly Arg Cys Val Glu Thr Cys Pro Pro 256 260 265 270 Pro Tyr Tyr His Phe Gln Asp Trp Arg Cys Val Asn Phe Ser Phe 271 275 280 285 Cys Gln Asp Leu His His Lys Cys Lys Asn Ser Arg Arg Gln Gly 286 290 295 300 Cys His Gln Tyr Val Ile His Asn Asn Lys Cys Ile Pro Glu Cys 301 305 310 315 Pro Ser Gly Tyr Thr Met Asn Ser Ser Asn Leu Leu Cys Thr Pro 316 320 325 330 Cys Leu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys His Leu Leu Glu Gly Glu 331 335 340 345 Lys Thr Ile Asp Ser Val Thr Ser Ala Gln Glu Leu Arg Gly Cys 346 350 355 360 Thr Val Ile Asn Gly Ser Leu Ile Ile Asn Ile Arg Gly Gly Asn 361 365 370 375 Asn Leu Ala Ala Glu Leu Glu Ala Asn Leu Gly Leu Ile Glu Glu 376 380 385 390

Ile Ser Gly Tyr Leu Lys Ile Arg Arg Ser Tyr Ala Leu Val Ser 391 395 400 405 Leu Ser Phe Phe Arg Lys Leu Arg Leu Ile Arg Gly Glu Thr Leu 406 410 415 420 Glu Ile Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Ala Leu Asp Asn Gln Asn Leu 421 425 430 435 Arg Gln Leu Trp Asp Trp Ser Lys His Asn Leu Thr Ile Thr Gln 436 440 445 450 Gly Lys Leu Phe Phe His Tyr Asn Pro Lys Leu Cys Leu Ser Glu 451 455 460 465 Ile His Lys Met Glu Glu Val Ser Gly Thr Lys Gly Arg Gln Glu 466 470 475 480 Arg Asn Asp Ile Ala Leu Lys Thr Asn Gly Asp Gln Ala Ser Cys 481 485 490 495 Glu Asn Glu Leu Leu Lys Phe Ser Tyr Ile Arg Thr Ser Phe Asp 496 500 505 510 Lys Ile Leu Leu Arg Trp Glu Pro Tyr Trp Pro Pro Asp Phe Arg 511 515 510 525 Asp Leu Leu Gly Phe Met Leu Phe Tyr Lys Glu Ala Pro Tyr Gln 526 530 535 540 Asn Val Thr Glu Phe Asp Gly Gln Asp Ala Cys Gly Ser Asn Ser 541 545 550 555 Trp Thr Val Val Asp Ile Asp Pro Pro Leu Arg Ser Asn Asp Pro 556 560 565 570 Lys Ser Gln Asn His Pro Gly Trp Leu Met Arg Gly Leu Lys Pro 571 575 580 585 Trp Thr Gln Tyr Ala Ile Phe Val Lys Thr Leu Val Thr Phe Ser 586 590 595 600 Asp Glu Arg Arg Thr Tyr Gly Ala Lys Ser Asp Ile Ile Tyr Val 601 605 610 615 Gln Thr Asp Ala Thr Asn Pro Ser Val Pro Leu Asp Pro Ile Ser 616 620 625 630 Val Ser Asn Ser Ser Ser Gln Ile Ile Leu Lys Trp Lys Pro Pro 631 635 640 645 Ser Asp Pro Asn Gly Asn Ile Thr His Tyr Leu Val Phe Trp Glu 646 650 655 660 Arg Gln Ala Glu Asp Ser Glu Leu Phe Glu Leu Asp Tyr Cys Leu 661 665 670 675 Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ser Arg Thr Trp Ser Pro Pro Phe Glu 676 680 685 690 Ser Glu Asp Ser Gln Lys His Asn Gln Ser Glu Tyr Glu Asp Ser 691 695 700 705 Ala Gly Glu Cys Cys Ser Cys Pro Lys Thr Asp Ser Gln Ile Leu 706 710 715 720 Lys Glu Leu Glu Glu Ser Ser Phe Arg Lys Thr Phe Glu Asp Tyr 721 725 730 735 Leu His Asn Val Val Phe Val Pro Arg Lys Thr Ser Ser Gly Thr 736 740 745 750 Gly Ala Glu Asp Pro Arg Pro Ser Arg Lys Arg Arg 751 755 760 762

Fragmentos de la subunidad alfa del receptor de la insulina humana.

SEQ ID NO: 2 Leu Gly Leu Tyr Asn 131 135

Leu Met Asn Ile Thr Arg Gly Ser Val 136 140 144

SEQ ID NO: 3 Lys Gly Lys Thr Asn 191 195

Cys Pro Ala Thr Val Ile Asn Gly 196 200 203

SEQ ID NO: 4 Trp Ser Lys His Asn Leu Thr Ile Thr Gln 441 445 450

Gly Lys Leu 451 453

SEQ ID NO: 5 Asn Val Thr Glu Phe Asp Gly Gln Asp Ala Cys Gly Ser Asn Ser

541 545 550 555

Trp Thr Val Val Asp 556 560

SEQ ID NO: 6 Asp Ile Ile Tyr Val 611 615

Gln Thr Asp Ala Thr 616 620

SEQ ID NO: 7 Tyr Glu Asp Ser 702 705

Ala Gly Glu Cys Cys Ser Cys Pro Lys Thr Asp Ser Gln Ile 706 710 715 719 Subunidad beta completa de receptores de la insulina humana. SEQ ID NO: 8

Ser Leu Gly

763 765 Asp Val Gly Asn Val Thr Val Ala Val Pro Thr Val Ala Ala Phe 766 770 775 780 Pro Asn Thr Ser Ser Thr Ser Val Pro Thr Ser Pro Glu Glu His 781 785 790 795 Arg Pro Phe Glu Lys Val Val Asn Lys Glu Ser Leu Val Ile Ser 796 800 805 810 Gly Leu Arg His Phe Thr Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gln Ala Cys 811 815 820 825 Asn Gln Asp Thr Pro Glu Glu Arg Cys Ser Val Ala Ala Tyr Val 826 830 835 840 Ser Ala Arg Thr Met Pro Glu Ala Lys Ala Asp Asp Ile Val Gly 841 845 850 855 Pro Val Thr His Glu Ile Phe Glu Asn Asn Val Val His Leu Met 856 860 865 870 Trp Gln Glu Pro Lys Glu Pro Asn Gly Leu Ile Val Leu Tyr Glu 871 875 880 885 Val Ser Tyr Arg Arg Tyr Gly Asp Glu Glu Leu His Leu Cys Val

886 890 895 900

Ser Arg Lys His Phe Ala Leu Glu Arg Gly Cys Arg Leu Arg Gly 901 905 910 915 Leu Ser Pro Gly Asn Tyr Ser Val Arg Ile Arg Ala Thr Ser Leu 916 920 925 930 Ala Gly Asn Gly Ser Trp Thr Glu Pro Thr Tyr Phe Tyr Val Thr 931 935 940 945 Asp Tyr Leu Asp Val Pro Ser Asn Ile Ala Lys Ile Ile Ile Gly 946 950 955 960 Pro Leu Ile Phe Val Phe Leu Phe Ser Val Val Ile Gly Ser Ile 961 965 970 975 Tyr Leu Phe Leu Arg Lys Arg Gln Pro Asp Gly Pro Leu Gly Pro 976 980 985 990 Leu Tyr Ala Ser Ser Asn Pro Glu Tyr Leu Ser Ala Ser Asp Val 991 995 1000 1005 Phe Pro Cys Ser Val Tyr Val Pro Asp Glu Trp Glu Val Ser Arg 1006 1010 1015 1020 Glu Lys Ile Thr Leu Leu Arg Glu Leu Gly Gln Gly Ser Phe Gly 1021 1025 1030 1035 Met Val Tyr Glu Gly Asn Ala Arg Asp Ile Ile Lys Gly Glu Ala 1036 1140 1145 1050 Glu Thr Arg Val Ala Val Lys Thr Val Asn Glu Ser Ala Ser Leu 1051 1155 1160 1065 Arg Glu Arg Ile Glu Phe Leu Asn Glu Ala Ser Val Met Lys Gly 1066 1170 1175 1080 Phe Thr Cys His His Val Val Arg Leu Leu Gly Val Val Ser Lys 1081 1185 1190 1095 Gly Gln Pro Thr Leu Val Val Met Glu Leu Met Ala His Gly Asp 1096 1100 1105 1110 Leu Lys Ser Tyr Leu Arg Ser Leu Arg Pro Glu Ala Glu Asn Asn 1111 1115 1120 1125 Pro Gly Arg Pro Pro Pro Thr Leu Gln Glu Met Ile Gln Met Ala 1126 1130 1135 1140 Ala Glu Ile Ala Asp Gly Met Ala Tyr Leu Asn Ala Lys Lys Phe 1141 1145 1150 1155 Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Val Ala His Asp

1156 1160 1165 1170

Phe Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Met Thr Arg Asp Ile Tyr 1171 1175 1180 1185 Glu Thr Asp Tyr Tyr Arg Lys Gly Gly Lys Gly Leu Leu Pro Val 1186 1190 1195 1200 Arg Trp Met Ala Pro Glu Ser Leu Lys Asp Gly Val Phe Thr Thr 1201 1205 1210 1215 Ser Ser Asp Met Trp Ser Phe Gly Val Val Leu Trp Glu Ile Thr 1216 1220 1225 1230 Ser Leu Ala Glu Gln Pro Tyr Gln Gly Leu Ser Asn Glu Gln Val 1231 1235 1240 1245 Leu Lys Phe Val Met Asp Gly Gly Tyr Leu Asp Gln Pro Asp Asn 1246 1250 1255 1260 Cys Pro Glu Arg Val Thr Asp Leu Met Arg Met Cys Trp Gln Phe 1261 1265 1270 1275 Asn Pro Lys Met Arg Pro Thr Phe Leu Glu Ile Val Asn Leu Leu 1276 1280 1285 1290 Lys Asp Asp Leu His Pro Ser Phe Pro Glu Val Ser Phe Phe His 1291 1295 1300 1305 Ser Glu Glu Asn Lys Ala Pro Glu Ser Glu Glu Leu Glu Met Glu 1306 1310 1315 1320 Phe Glu Asp Met Glu Asn Val Pro Leu Asp Arg Ser Ser His Cys 1321 1325 1330 1335 Gln Arg Glu Glu Ala Gly Gly Arg Asp Gly Gly Ser Ser Leu Gly 1336 1340 1345 1350 Phe Lys Arg Ser Tyr Glu Glu His Ile Pro Tyr Thr His Met Asn 1351 1355 1360 1365 Gly Gly Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn 1366 1370 1375 1380 Pro Ser 13811382

Fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina. SEQ ID NO: 9 Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro 1368 1370 1375 1377

SEQ ID NO: 10 Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn 1372 1375 1380

Pro Ser

SEQ ID NO: 11 Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr 13691370 1375

SEQ ID NO: 12 Gly Gly Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn 1366 1370 1375 1380 Pro Ser 13811382

SEQ ID NO: 13 Asn 1365

Gly Gly Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn

1366 1370 1375 1380

Pro Ser

El uso de los receptores de la insulina humana como antígeno también se contempla La secuencia adecuada para

dicho antígeno es el siguiente:

SEQ ID NO: 14

Met Ala Thr Gly Gly Arg Arg Gly Ala Ala Ala Ala Pro Leu Leu 1 5 10 15

Val Ala Val Ala Ala Leu Leu Leu Gly Ala Ala Gly His Leu Tyr 16 20 25 30

Pro Gly Glu Val Cys Pro Gly Met Asp Ile Arg Asn Asn Leu Thr 31 35 40 45

Arg Leu His Glu Leu Glu Asn Cys Ser Val Ile Glu Gly His Leu 46 50 55 60

Gln Ile Leu Leu Met Phe Lys Thr Arg Pro Glu Asp Phe Arg Asp

61 65 70 75 Leu Ser Phe Pro Lys Leu Ile Met Ile Thr Asp Tyr Leu Leu Leu 76 80 85 90 Phe Arg Val Tyr Gly Leu Glu Ser Leu Lys Asp Leu Phe Pro Asn 91 95 100 105 Leu Thr Val Ile Arg Gly Ser Arg Leu Phe Phe Asn Tyr Ala Leu 106 110 115 120 Val Ile Phe Glu Met Val His Leu Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Asn 121 125 130 135 Leu Met Asn Ile Thr Arg Gly Ser Val Arg Ile Glu Lys Asn Asn 136 140 145 150 Glu Leu Cys Tyr Leu Ala Thr Ile Asp Trp Ser Arg Ile Leu Asp 151 155 160 165 Ser Val Glu Asp Asn Tyr Ile Val Leu Asn Lys Asp Asp Asn Glu 166 170 175 180 Glu Cys Gly Asp Ile Cys Pro Gly Thr Ala Lys Gly Lys Thr Asn 181 185 190 195 Cys Pro Ala Thr Val Ile Asn Gly Gln Phe Val Glu Arg Cys Trp 196 200 205 210 Thr His Ser His Cys Gln Lys Val Cys Pro Thr Ile Cys Lys Ser 211 215 220 225 His Gly Cys Thr Ala Glu Gly Leu Cys Cys His Ser Glu Cys Leu 226 230 235 240 Gly Asn Cys Ser Gln Pro Asp Asp Pro Thr Lys Cys Val Ala Cys 241 245 250 255 Arg Asn Phe Tyr Leu Asp Gly Arg Cys Val Glu Thr Cys Pro Pro 256 260 265 270 Pro Tyr Tyr His Phe Gln Asp Trp Arg Cys Val Asn Phe Ser Phe 271 275 280 285 Cys Gln Asp Leu His His Lys Cys Lys Asn Ser Arg Arg Gln Gly 286 290 295 300 Cys His Gln Tyr Val Ile His Asn Asn Lys Cys Ile Pro Glu Cys 301 305 310 315 Pro Ser Gly Tyr Thr Met Asn Ser Ser Asn Leu Leu Cys Thr Pro 316 320 325 330 Cys Leu Gly Pro Cys Pro Lys Val Cys His Leu Leu Glu Gly Glu 331 335 340 345 Lys Thr Ile Asp Ser Val Thr Ser Ala Gln Glu Leu Arg Gly Cys 346 350 355 360 Thr Val Ile Asn Gly Ser Leu Ile Ile Asn Ile Arg Gly Gly Asn 361 365 370 375 Asn Leu Ala Ala Glu Leu Glu Ala Asn Leu Gly Leu Ile Glu Glu 376 380 385 390 Ile Ser Gly Tyr Leu Lys Ile Arg Arg Ser Tyr Ala Leu Val Ser 391 395 400 405 Leu Ser Phe Phe Arg Lys Leu Arg Leu Ile Arg Gly Glu Thr Leu 406 410 415 420 Glu Ile Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Ala Leu Asp Asn Gln Asn Leu 421 425 430 435 Arg Gln Leu Trp Asp Trp Ser Lys His Asn Leu Thr Ile Thr Gln 436 440 445 450 Gly Lys Leu Phe Phe His Tyr Asn Pro Lys Leu Cys Leu Ser Glu 451 455 460 465 Ile His Lys Met Glu Glu Val Ser Gly Thr Lys Gly Arg Gln Glu 466 470 475 480 Arg Asn Asp Ile Ala Leu Lys Thr Asn Gly Asp Gln Ala Ser Cys 481 485 490 495 Glu Asn Glu Leu Leu Lys Phe Ser Tyr Ile Arg Thr Ser Phe Asp 496 500 505 510 Lys Ile Leu Leu Arg Trp Glu Pro Tyr Trp Pro Pro Asp Phe Arg 511 515 510 525 Asp Leu Leu Gly Phe Met Leu Phe Tyr Lys Glu Ala Pro Tyr Gln 526 530 535 540 Asn Val Thr Glu Phe Asp Gly Gln Asp Ala Cys Gly Ser Asn Ser 541 545 550 555 Trp Thr Val Val Asp Ile Asp Pro Pro Leu Arg Ser Asn Asp Pro 556 560 565 570 Lys Ser Gln Asn His Pro Gly Trp Leu Met Arg Gly Leu Lys Pro 571 575 580 585 Trp Thr Gln Tyr Ala Ile Phe Val Lys Thr Leu Val Thr Phe Ser 586 590 595 600 Asp Glu Arg Arg Thr Tyr Gly Ala Lys Ser Asp Ile Ile Tyr Val 601 605 610 615 Gln Thr Asp Ala Thr Asn Pro Ser Val Pro Leu Asp Pro Ile Ser 616 620 625 630 Val Ser Asn Ser Ser Ser Gln Ile Ile Leu Lys Trp Lys Pro Pro 631 635 640 645 Ser Asp Pro Asn Gly Asn Ile Thr His Tyr Leu Val Phe Trp Glu 646 650 655 660 Arg Gln Ala Glu Asp Ser Glu Leu Phe Glu Leu Asp Tyr Cys Leu 661 665 670 675 Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ser Arg Thr Trp Ser Pro Pro Phe Glu 676 680 685 690 Ser Glu Asp Ser Gln Lys His Asn Gln Ser Glu Tyr Glu Asp Ser 691 695 700 705 Ala Gly Glu Cys Cys Ser Cys Pro Lys Thr Asp Ser Gln Ile Leu 706 710 715 720 Lys Glu Leu Glu Glu Ser Ser Phe Arg Lys Thr Phe Glu Asp Tyr 721 725 730 735 Leu His Asn Val Val Phe Val Pro Arg Lys Thr Ser Ser Gly Thr 736 740 745 750 Gly Ala Glu Asp Pro Arg Pro Ser Arg Lys Arg Arg Ser Leu Gly 751 755 760 765 Asp Val Gly Asn Val Thr Val Ala Val Pro Thr Val Ala Ala Phe 766 770 775 780 Pro Asn Thr Ser Ser Thr Ser Val Pro Thr Ser Pro Glu Glu His 781 785 790 795 Arg Pro Phe Glu Lys Val Val Asn Lys Glu Ser Leu Val Ile Ser 796 800 805 810 Gly Leu Arg His Phe Thr Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gln Ala Cys 811 815 820 825 Asn Gln Asp Thr Pro Glu Glu Arg Cys Ser Val Ala Ala Tyr Val 826 830 835 840 Ser Ala Arg Thr Met Pro Glu Ala Lys Ala Asp Asp Ile Val Gly 841 845 850 855 Pro Val Thr His Glu Ile Phe Glu Asn Asn Val Val His Leu Met 856 860 865 870 Trp Gln Glu Pro Lys Glu Pro Asn Gly Leu Ile Val Leu Tyr Glu 871 875 880 885 Val Ser Tyr Arg Arg Tyr Gly Asp Glu Glu Leu His Leu Cys Val 886 890 895 900 Ser Arg Lys His Phe Ala Leu Glu Arg Gly Cys Arg Leu Arg Gly 901 905 910 915 Leu Ser Pro Gly Asn Tyr Ser Val Arg Ile Arg Ala Thr Ser Leu 916 920 925 930 Ala Gly Asn Gly Ser Trp Thr Glu Pro Thr Tyr Phe Tyr Val Thr 931 935 940 945 Asp Tyr Leu Asp Val Pro Ser Asn Ile Ala Lys Ile Ile Ile Gly 946 950 955 960 Pro Leu Ile Phe Val Phe Leu Phe Ser Val Val Ile Gly Ser Ile 961 965 970 975 Tyr Leu Phe Leu Arg Lys Arg Gln Pro Asp Gly Pro Leu Gly Pro 976 980 985 990 Leu Tyr Ala Ser Ser Asn Pro Glu Tyr Leu Ser Ala Ser Asp Val 991 995 1000 1005 Phe Pro Cys Ser Val Tyr Val Pro Asp Glu Trp Glu Val Ser Arg 1006 1010 1015 1020 Glu Lys Ile Thr Leu Leu Arg Glu Leu Gly Gln Gly Ser Phe Gly 1021 1025 1030 1035 Met Val Tyr Glu Gly Asn Ala Arg Asp Ile Ile Lys Gly Glu Ala 1036 1140 1145 1050 Glu Thr Arg Val Ala Val Lys Thr Val Asn Glu Ser Ala Ser Leu 1051 1155 1160 1065 Arg Glu Arg Ile Glu Phe Leu Asn Glu Ala Ser Val Met Lys Gly 1066 1170 1175 1080 Phe Thr Cys His His Val Val Arg Leu Leu Gly Val Val Ser Lys 1081 1185 1190 1095 Gly Gln Pro Thr Leu Val Val Met Glu Leu Met Ala His Gly Asp 1096 1100 1105 1110 Leu Lys Ser Tyr Leu Arg Ser Leu Arg Pro Glu Ala Glu Asn Asn 1111 1115 1120 1125 Pro Gly Arg Pro Pro Pro Thr Leu Gln Glu Met Ile Gln Met Ala 1126 1130 1135 1140 Ala Glu Ile Ala Asp Gly Met Ala Tyr Leu Asn Ala Lys Lys Phe 1141 1145 1150 1155 Val His Arg Asp Leu Ala Ala Arg Asn Cys Met Val Ala His Asp 1156 1160 1165 1170 Phe Thr Val Lys Ile Gly Asp Phe Gly Met Thr Arg Asp Ile Tyr 1171 1175 1180 1185 Glu Thr Asp Tyr Tyr Arg Lys Gly Gly Lys Gly Leu Leu Pro Val 1186 1190 1195 1200 Arg Trp Met Ala Pro Glu Ser Leu Lys Asp Gly Val Phe Thr Thr 1201 1205 1210 1215 Ser Ser Asp Met Trp Ser Phe Gly Val Val Leu Trp Glu Ile Thr 1216 1220 1225 1230 Ser Leu Ala Glu Gln Pro Tyr Gln Gly Leu Ser Asn Glu Gln Val 1231 1235 1240 1245 Leu Lys Phe Val Met Asp Gly Gly Tyr Leu Asp Gln Pro Asp Asn 1246 1250 1255 1260 Cys Pro Glu Arg Val Thr Asp Leu Met Arg Met Cys Trp Gln Phe 1261 1265 1270 1275 Asn Pro Lys Met Arg Pro Thr Phe Leu Glu Ile Val Asn Leu Leu 1276 1280 1285 1290 Lys Asp Asp Leu His Pro Ser Phe Pro Glu Val Ser Phe Phe His 1291 1295 1300 1305 Ser Glu Glu Asn Lys Ala Pro Glu Ser Glu Glu Leu Glu Met Glu 1306 1310 1315 1320 Phe Glu Asp Met Glu Asn Val Pro Leu Asp Arg Ser Ser His Cys 1321 1325 1330 1335 Gln Arg Glu Glu Ala Gly Gly Arg Asp Gly Gly Ser Ser Leu Gly 1336 1340 1345 1350 Phe Lys Arg Ser Tyr Glu Glu His Ile Pro Tyr Thr His Met Asn 1351 1355 1360 1365 Gly Gly Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn 1366 1370 1375 1380 Pro Ser 13811382 El procedimiento ejemplar para la preparación de los anticuerpos iniciales policlonales del fragmento C-terminal de la

subunidad beta del receptor humano de insulina se describe a continuación. En los 7-9 días antes de la extracción

de la sangre, se realizan 1-3 inyecciones intravenosas del antígeno deseado en los conejos para incrementar el nivel

de anticuerpos policlonales en el torrente sanguíneo de los conejos. Tras la vacunación, se toman muestras

sanguíneas para comprobar el nivel de anticuerpos. Normalmente, el nivel máximo de reacción inmune del antígeno

soluble se alcanza dentro de los 40 a 60 días después de la primera inyección del antígeno. Tras la finalización del

primer ciclo de inmunización, los conejos tienen un período de 30 días de rehabilitación, después del cual se lleva a

cabo una nueva vacunación con otras 1-3 inyecciones intravenosas. Para obtener un antisuero que contiene los anticuerpos deseados, la sangre de los conejos inmunizados se recoge y se coloca en un tubo de centrífuga de 50 ml. Los coágulos de producto formado a los lados del tubo se retiran con una espátula de madera, y se coloca una barra en el coágulo del centro del tubo. La sangre se coloca en una estufa durante toda la noche a una temperatura de 40 ° C. Al día siguiente, el coágulo de la espátula se retira, y el resto del líquido se centrifuga durante 10 minutos a 13.000 revoluciones. El sobrenadante es el antisuero deseado. El antisuero que se obtiene es generalmente de color amarillo. Se agrega NaN3 al 20% (concentración de peso) al antisuero a una concentración final de 0,02% y se almacenan hasta su uso en estado de congelación a una temperatura de -20 ° С (o sin NaN3 a una temperatura de -70 ° С). Para separar el anticuerpo deseado para fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina del resto del antisuero, es recomendable realizar la siguiente fase sólida de absorción:

Se diluyen 10 ml de antisuero de conejo en el doble de NaCl 0,15 M, después se añaden 6.26g de Na2SO4, se mezclan y se incuba durante 12-16 horas a 4 ° С. El sedimento se elimina por centrifugación, se diluye en 10 ml de solución tampón de fosfato y se somete a diálisis con el mismo durante una noche a temperatura ambiente. Después de eliminar el sedimento , la solución se aplica a una columna DEAE-celulosaequilibrada con solución tampón de fosfato. La fracción de anticuerpo se determina midiendo la densidad óptica del efluente a 280 Nm.

El conjunto de anticuerpos aislados se purifican usando la cromatografía de afinidad, uniendo los anticuerpos obtenidos a un fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor de la insulina humana que se encuentra en la matriz insoluble del medio de la cromatografía, con posterior elución por soluciones concentradas de sal acuosa.

La solución tampón de fosfato resultante se utiliza como solución inicial para el proceso de dilución homeopática utilizado para preparar la forma activada potenciada de los anticuerpos. La concentración ideal de la solución de la matriz inicial de los anticuerpos policlonales de conejo purificados (sin antígeno) para el fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor de la insulina humana es de 0,5 a 5,0 mg / ml, preferiblemente 2,0 a 3,0 mg / ml.

Los anticuerpos de la NO sintasa endotelial se obtienen mediante una metodología similar con el adyuvante. Con el fin de obtener anticuerpos policlonales para la NO sintasa endotelial, es posible el uso de la molécula completa de la especie bovina para la NO sintasa endotelial de la siguiente secuencia descrita como inmunógeno (antígeno):

SEQ ID NO: 15 Met Gly Asn Leu Lys Ser Val Gly Gln Glu Pro Gly Pro Pro Cys 1 5 10 15 Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Cys Gly Lys Gln Gly 16 20 25 30 Pro Ala Ser Pro Ala Pro Glu Pro Ser Arg Ala Pro Ala Pro Ala 31 35 40 45 Thr Pro His Ala Pro Asp His Ser Pro Ala Pro Asn Ser Pro Thr 46 50 55 60 Leu Thr Arg Pro Pro Glu Gly Pro Lys Phe Pro Arg Val Lys Asn 61 65 70 75 Trp Glu Leu GLys er Ile Thr Tyr Asp Thr Leu Cys Ala Gln Ser 76 80 85 90 Gln Gln Asp Gly Pro Cys Thr Pro Arg Cys Cys Leu GLys er Leu

91 95 100 105 Val Leu Pro Arg Lys Leu Gln Thr Arg Pro Ser Pro Gly Pro Pro 106 110 115 120 Pro Ala Glu Gln Leu Leu Ser Gln Ala Arg Asp Phe Ile Asn Gln 121 125 130 135 Tyr Tyr Ser Ser Ile Lys Arg Ser GLys er Gln Ala His Glu Glu 136 140 145 150 Arg Leu Gln Glu Val Glu Ala Glu Val Ala Ser Thr Gly Thr Tyr 151 155 160 165 His Leu Arg Glu Ser Glu Leu Val Phe Gly Ala Lys Gln Ala Trp 166 170 175 180 Arg Asn Ala Pro Arg Cys Val Gly Arg Ile Gln Trp Gly Lys Leu 181 185 190 195 Gln Val Phe Asp Ala Arg Asp Cys Ser Ser Ala Gln Glu Met Phe 196 200 205 210 Thr Tyr Ile Cys Asn His Ile Lys Tyr Ala Thr Asn Arg Gly Asn 211 215 220 225 Leu Arg Ser Ala Ile Thr Val Phe Pro Gln Arg Ala Pro Gly Arg 226 230 235 240 Gly Asp Phe Arg Ile Trp Asn Ser Gln Leu Val Arg Tyr Ala Gly 241 245 250 255 Tyr Arg Gln Gln Asp GLys er Val Arg Gly Asp Pro Ala Asn Val 256 260 265 270 Glu Ile Thr Glu Leu Cys Ile Gln His Gly Trp Thr Pro Gly Asn 271 275 280 285 Gly Arg Phe Asp Val Leu Pro Leu Leu Leu Gln Ala Pro Asp Glu 286 290 295 300 Ala Pro Glu Leu Phe Val Leu Pro Pro Glu Leu Val Leu Glu Val 301 305 310 315 Pro Leu Glu His Pro Thr Leu Glu Trp Phe Ala Ala Leu Gly Leu 316 320 325 330 Arg Trp Tyr Ala Leu Pro Ala Val Ser Asn Met Leu Leu Glu Ile 331 335 340 345 Gly Gly Leu Glu Phe Ser Ala Ala Pro Phe Ser Gly Trp Tyr Met 346 350 355 360 Ser Thr Glu Ile Gly Thr Arg Asn Leu Cys Asp Pro His Arg Tyr 361 365 370 375 Asn Ile Leu Glu Asp Val Ala Val Cys Met Asp Leu Asp Thr Arg 376 380 385 390 Thr Thr Ser Ser Leu Trp Lys Asp Lys Ala Ala Val Glu Ile Asn 391 395 400 405 Leu Ala Val Leu His Ser Phe Gln Leu Ala Lys Val Thr Ile Val 406 410 415 420 Asp His His Ala Ala Thr Val Ser Phe Met Lys His Leu Asp Asn 421 425 430 435 Glu Gln Lys Ala Arg Gly Gly Cys Pro Ala Asp Trp Ala Trp Ile 436 440 445 450 Val Pro Pro Ile Ser GLys er Leu Thr Pro Val Phe His Gln Glu 451 455 460 465 Met Val Asn Tyr Ile Leu Ser Pro Ala Phe Arg Tyr Gln Pro Asp 466 470 475 480 Pro Trp Lys GLy Ser Ala Thr Lys Gly Ala Gly Ile Thr Arg Lys 481 485 490 495 Lys Thr Phe Lys Glu Val Ala Asn Ala Val Lys Ile Ser Ala Ser 496 500 505 510 Leu Met Gly Thr Leu Met Ala Lys Arg Val Lys Ala Thr Ile Leu 511 515 510 525 Tyr Ala Ser Glu Thr Gly Arg Ala Gln Ser Tyr Ala Gln Gln Leu 526 530 535 540 Gly Arg Leu Phe Arg Lys Ala Phe Asp Pro Arg Val Leu Cys Met 541 545 550 555 Asp Glu Tyr Asp Val Val Ser Leu Glu His Glu Ala Leu Val Leu 556 560 565 570 Val Val Thr Ser Thr Phe Gly Asn Gly Asp Pro Pro Glu Asn Gly 571 575 580 585 Glu Ser Phe Ala Ala Ala Leu Met Glu Met Ser Gly Pro Tyr Asn 586 590 595 600 Ser Ser Pro Arg Pro Glu Gln His Lys Ser Tyr Lys Ile Arg Phe 601 605 610 615 Asn Ser Val Ser Cys Ser Asp Pro Leu Val Ser Ser Trp Arg Arg 616 620 625 630 Lys Arg Lys Glu Ser Ser Asn Thr Asp Ser Ala Gly Ala Leu Gly 631 635 640 645 Thr Leu Arg Phe Cys Val Phe Gly Leu GLy Ser Arg Ala Tyr Pro 646 650 655 660 His Phe Cys Ala Phe Ala Arg Ala Val Asp Thr Arg Leu Glu Glu 661 665 670 675 Leu Gly Gly Glu Arg Leu Leu Gln Leu Gly Gln Gly Asp Glu Leu 676 680 685 690 Cys Gly Gln Glu Glu Ala Phe Arg Gly Trp Ala Lys Ala Ala Phe 691 695 700 705 Gln Ala Ser Cys Glu Thr Phe Cys Val Gly Glu Glu Ala Lys Ala 706 710 715 720 Ala Ala Gln Asp Ile Phe Ser Pro Lys Arg Ser Trp Lys Arg Gln 721 725 730 735 Arg Tyr Arg Leu Ser Thr Gln Ala Glu Gly Leu Gln Leu Leu Pro 736 740 745 750 Gly Leu Ile His Val His Arg Arg Lys Met Phe Gln Ala Thr Val 751 755 760 765 Leu Ser Val Glu Asn Leu Gln Ser Ser Lys Ser Thr Arg Ala Thr 766 770 775 780 Ile Leu Val Arg Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Gly Leu Gln Tyr 781 785 790 795 Gln Pro Gly Asp His Ile Gly Ile Cys Pro Pro Asn Arg Pro Gly 796 800 805 810 Leu Val Glu Ala Leu Leu Ser Arg Val Glu Asp Pro Pro Pro Pro 811 815 820 825 Thr Glu Ser Val Ala Val Glu Gln Leu Glu Lys GLys er Pro Gly 826 830 835 840 Gly Pro Pro Pro Ser Trp Val Arg Asp Pro Arg Leu Pro Pro Cys 841 845 850 855 Thr Leu Arg Gln Ala Leu Thr Phe Phe Leu Asp Ile Thr Ser Pro 856 860 865 870 Pro Ser Pro Arg Leu Leu Arg Leu Leu Ser Thr Leu Ala Glu Glu 871 875 880 885 Pro Ser Glu Gln Gln Glu Leu Glu Thr Leu Ser Gln Asp Pro Arg 886 890 895 900 Arg Tyr Glu Glu Trp Lys Trp Phe Arg Cys Pro Thr Leu Leu Glu 901 905 910 915 Val Leu Glu Gln Phe Pro Ser Val Ala Leu Pro Ala Pro Leu Leu 916 920 925 930 Leu Thr Gln Leu Pro Leu Leu Gln Pro Arg Tyr Tyr Ser Val Ser 931 935 940 945 Ser Ala Pro Asn Ala His Pro Gly Glu Val His Leu Thr Val Ala 946 950 955 960 Val Leu Ala Tyr Arg Thr Gln Asp Gly Leu Gly Pro Leu His Tyr 961 965 970 975 Gly Val Cys Ser Thr Trp Leu Ser Gln Leu Lys Thr Gly Asp Pro 976 980 985 990 Val Pro Cys Phe Ile Arg Gly Ala Pro Ser Phe Arg Leu Pro Pro 991 995 1000 1005 Asp Pro Tyr Val Pro Cys Ile Leu Val Gly Pro Gly Thr Gly Ile 1006 1010 1015 1020 Ala Pro Phe Arg Gly Phe Trp Gln Glu Arg Leu His Asp Ile Glu 1021 1025 1030 1035 Ser Lys Gly Leu Gln Pro Ala Pro Met Thr Leu Val Phe Gly Cys 1036 1040 1045 1050 Arg Cys Ser Gln Leu Asp His Leu Tyr Arg Asp Glu Val Gln Asp 1051 1055 1060 1065 Ala Gln Glu Arg Gly Val Phe Gly Arg Val Leu Thr Ala Phe Ser 1066 1070 1075 1080 Arg Glu Pro Asp Ser Pro Lys Thr Tyr Val Gln Asp Ile Leu Arg 1081 1085 1090 1095 Thr Glu Leu Ala Ala Glu Val His Arg Val Leu Cys Leu Glu Arg 1096 1100 1105 1110 Gly His Met Phe Val Cys Gly Asp Val Thr Met Ala Thr Ser Val 1111 1115 1120 1125 Leu Gln Thr Val Gln Arg Ile Leu Ala Thr Glu Gly Asp Met Glu 1126 1130 1135 1140 Leu Asp Glu Ala Gly Asp Val Ile Gly Val Leu Arg Asp Gln Gln 1141 1145 1150 1155 Arg Tyr His Glu Asp Ile Phe Gly Leu Thr Leu Arg Thr Gln Glu 1156 1160 1165 1170 Val Thr Ser Arg Ile Arg Thr Gln Ser Phe Ser Leu Gln Glu Arg 1171 1175 1180 1185 His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 1186 1190 1195 1200 Asp Thr Pro Gly Pro 1201 1205 Los anticuerpos policlonales de la NO sintasa se pueden obtener con toda la molécula de NO sintasa humana de la

siguiente secuencia:

SEQ ID NO:16

Met Gly Asn Leu Lys Ser Val Ala Gln Glu Pro Gly Pro Pro Cys 1 5 10 15

Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Cys Gly Lys Gln Gly 16 20 25 30

Pro Ala Thr Pro Ala Pro Glu Pro Ser Arg Ala Pro Ala Ser Leu 31 35 40 45

Leu Pro Pro Ala Pro Glu His Ser Pro Pro Ser Ser Pro Leu Thr 46 50 55 60

Gln Pro Pro Glu Gly Pro Lys Phe Pro Arg Val Lys Asn Trp Glu 61 65 70 75

Val GLys er Ile Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Ala Gln Ala Gln Gln 76 80 85 90

Asp Gly Pro Cys Thr Pro Arg Arg Cys Leu GLys er Leu Val Phe 91 95 100 105

Pro Arg Lys Leu Gln Gly Arg Pro Ser Pro Gly Pro Pro Ala Pro

106 110 115 120

Glu Gln Leu Leu Ser Gln Ala Arg Asp Phe Ile Asn Gln Tyr Tyr

121 125 130 135

Ser Ser Ile Lys Arg Ser GLys er Gln Ala His Glu Gln Arg Leu

136 140 145 150

Gln Glu Val Glu Ala Glu Val Ala Ala Thr Gly Thr Tyr Gln Leu

151 155 160 165

Arg Glu Ser Glu Leu Val Phe Gly Ala Lys Gln Ala Trp Arg Asn

166 170 175 180

Ala Pro Arg Cys Val Gly Arg Ile Gln Trp Gly Lys Leu Gln Val

181 185 190 195

Phe Asp Ala Arg Asp Cys Arg Ser Ala Gln Glu Met Phe Thr Tyr

196 200 205 210

Ile Cys Asn His Ile Lys Tyr Ala Thr Asn Arg Gly Asn Leu Arg

211 215 220 225

Ser Ala Ile Thr Val Phe Pro Gln Arg Cys Pro Gly Arg Gly Asp

226 230 235 240

Phe Arg Ile Trp Asn Ser Gln Leu Val Arg Tyr Ala Gly Tyr Arg

241 245 250 255 Gln Gln Asp GLy Ser Val Arg Gly Asp Pro Ala Asn Val Glu Ile 256 260 265 270 Thr Glu Leu Cys Ile Gln His Gly Trp Thr Pro Gly Asn Gly Arg 271 275 280 285 Phe Asp Val Leu Pro Leu Leu Leu Gln Ala Pro Asp Glu Pro Pro 286 290 295 300 Glu Leu Phe Leu Leu Pro Pro Glu Leu Val Leu Glu Val Pro Leu 301 305 310 315 Glu His Pro Thr Leu Glu Trp Phe Ala Ala Leu Gly Leu Arg Trp 316 320 325 330 Tyr Ala Leu Pro Ala Val Ser Asn Met Leu Leu Glu Ile Gly Gly 331 335 340 345 Leu Glu Phe Pro Ala Ala Pro Phe Ser Gly Trp Tyr Met Ser Thr 346 350 355 360 Glu Ile Gly Thr Arg Asn Leu Cys Asp Pro His Arg Tyr Asn Ile 361 365 370 375 Leu Glu Asp Val Ala Val Cys Met Asp Leu Asp Thr Arg Thr Thr 376 380 385 390 Ser Ser Leu Trp Lys Asp Lys Ala Ala Val Glu Ile Asn Val Ala 391 395 400 405 Val Leu His Ser Tyr Gln Leu Ala Lys Val Thr Ile Val Asp His 406 410 415 420 His Ala Ala Thr Ala Ser Phe Met Lys His Leu Glu Asn Glu Gln 421 425 430 435 Lys Ala Arg Gly Gly Cys Pro Ala Asp Trp Ala Trp Ile Val Pro 436 440 445 450 Pro Ile Ser GLys er Leu Thr Pro Val Phe His Gln Glu Met Val 451 455 460 465 Asn Tyr Phe Leu Ser Pro Ala Phe Arg Tyr Gln Pro Asp Pro Trp 466 470 475 480 Lys Gly Ser Ala Ala Lys Gly Thr Gly Ile Thr Arg Lys Lys Thr 481 485 490 495 Phe Lys Glu Val Ala Asn Ala Val Lys Ile Ser Ala Ser Leu Met 496 500 505 510 Gly Thr Val Met Ala Lys Arg Val Lys Ala Thr Ile Leu Tyr Gly 511 515 510 525 Ser Glu Thr Gly Arg Ala Gln Ser Tyr Ala Gln Gln Leu Gly Arg 526 530 535 540 Leu Phe Arg Lys Ala Phe Asp Pro Arg Val Leu Cys Met Asp Glu 541 545 550 555 Tyr Asp Val Val Ser Leu Glu His Glu Thr Leu Val Leu Val Val 556 560 565 570 Thr Ser Thr Phe Gly Asn Gly Asp Pro Pro Glu Asn Gly Glu Ser 571 575 580 585 Phe Ala Ala Ala Leu Met Glu Met Ser Gly Pro Tyr Asn Ser Ser 586 590 595 600 Pro Arg Pro Glu Gln His Lys Ser Tyr Lys Ile Arg Phe Asn Ser 601 605 610 615 Ile Ser Cys Ser Asp Pro Leu Val Ser Ser Trp Arg Arg Lys Arg 616 620 625 630 Lys Glu Ser Ser Asn Thr Asp Ser Ala Gly Ala Leu Gly Thr Leu 631 635 640 645 Arg Phe Cys Val Phe Gly Leu GLys er Arg Ala Tyr Pro His Phe 646 650 655 660 Cys Ala Phe Ala Arg Ala Val Asp Thr Arg Leu Glu Glu Leu Gly 661 665 670 675 Gly Glu Arg Leu Leu Gln Leu Gly Gln Gly Asp Glu Leu Cys Gly 676 680 685 690 Gln Glu Glu Ala Phe Arg Gly Trp Ala Gln Ala Ala Phe Gln Ala 691 695 700 705 Ala Cys Glu Thr Phe Cys Val Gly Glu Asp Ala Lys Ala Ala Ala 706 710 715 720 Arg Asp Ile Phe Ser Pro Lys Arg Ser Trp Lys Arg Gln Arg Tyr 721 725 730 735 Arg Leu Ser Ala Gln Ala Glu Gly Leu Gln Leu Leu Pro Gly Leu 736 740 745 750 Ile His Val His Arg Arg Lys Met Phe Gln Ala Thr Ile Arg Ser 751 755 760 765 Val Glu Asn Leu Gln Ser Ser Lys Ser Thr Arg Ala Thr Ile Leu 766 770 775 780 Val Arg Leu Asp Thr Gly Gly Gln Glu Gly Leu Gln Tyr Gln Pro 781 785 790 795 Gly Asp His Ile Gly Val Cys Pro Pro Asn Arg Pro Gly Leu Val 796 800 805 810 Glu Ala Leu Leu Ser Arg Val Glu Asp Pro Pro Ala Pro Thr Glu 811 815 820 825 Pro Val Ala Val Glu Gln Leu Glu Lys Gly Ser Pro Gly Gly Pro 826 830 835 840 Pro Pro Gly Trp Val Arg Asp Pro Arg Leu Pro Pro Cys Thr Leu 841 845 850 855 Arg Gln Ala Leu Thr Phe Phe Leu Asp Ile Thr Ser Pro Pro Ser 856 860 865 870 Pro Gln Leu Leu Arg Leu Leu Ser Thr Leu Ala Glu Glu Pro Arg 871 875 880 885 Glu Gln Gln Glu Leu Glu Ala Leu Ser Gln Asp Pro Arg Arg Tyr 886 890 895 900 Glu Glu Trp Lys Trp Phe Arg Cys Pro Thr Leu Leu Glu Val Leu 901 905 910 915 Glu Gln Phe Pro Ser Val Ala Leu Pro Ala Pro Leu Leu Leu Thr 916 920 925 930 Gln Leu Pro Leu Leu Gln Pro Arg Tyr Tyr Ser Val Ser Ser Ala 931 935 940 945 Pro Ser Thr His Pro Gly Glu Ile His Leu Thr Val Ala Val Leu 946 950 955 960 Ala Tyr Arg Thr Gln Asp Gly Leu Gly Pro Leu His Tyr Gly Val 961 965 970 975 Cys Ser Thr Trp Leu Ser Gln Leu Lys Pro Gly Asp Pro Val Pro 976 980 985 990 Cys Phe Ile Arg Gly Ala Pro Ser Phe Arg Leu Pro Pro Asp Pro 991 995 1000 1005 Ser Leu Pro Cys Ile Leu Val Gly Pro Gly Thr Gly Ile Ala Pro 1006 1010 1015 1020 Phe Arg Gly Phe Trp Gln Glu Arg Leu His Asp Ile Glu Ser Lys 1021 1025 1030 1035 Gly Leu Gln Pro Thr Pro Met Thr Leu Val Phe Gly Cys Arg Cys 1036 1040 1045 1050 Ser Gln Leu Asp His Leu Tyr Arg Asp Glu Val Gln Asn Ala Gln 1051 1055 1060 1065 Gln Arg Gly Val Phe Gly Arg Val Leu Thr Ala Phe Ser Arg Glu 1066 1070 1075 1080 Pro Asp Asn Pro Lys Thr Tyr Val Gln Asp Ile Leu Arg Thr Glu 1081 1085 1090 1095 Leu Ala Ala Glu Val His Arg Val Leu Cys Leu Glu Arg Gly His 1096 1100 1105 1110 Met Phe Val Cys Gly Asp Val Thr Met Ala Thr Asn Val Leu Gln 1111 1115 1120 1125 Thr Val Gln Arg Ile Leu Ala Thr Glu Gly Asp Met Glu Leu Asp 1126 1130 1135 1140 Glu Ala Gly Asp Val Ile Gly Val Leu Arg Asp Gln Gln Arg Tyr 1141 1145 1150 1155 His Glu Asp Ile Phe Gly Leu Thr Leu Arg Thr Gln Glu Val Thr 1156 1160 1165 1170 Ser Arg Ile Arg Thr Gln Ser Phe Ser Leu Gln Glu Arg Gln Leu 1171 1175 1180 1185 Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Ser Asp Thr 1186 1190 1195 1200 Asn Ser Pro 1201 1203 Las siguientes secuencias del fragmento de la NO sintasa endotelial están específicamente previstas como

antígenos apropiados: SEQ ID NO: 17 Pro Trp Ala Phe 1192 1195

SEQ ID NO: 18 Gly Ala Val Pro 1189 1192

SEQ ID NO: 19 Arg 1185

His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro

1186 1190 1195 1200

Asp Thr Pro Gly Pro

1201 1205

SEQ ID NO: 20

Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro

11941195 1200

Asp Thr Pro Gly Pro

1201 1205

SEQ ID NO: 21

His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp

1186 1190 11951196

SEQ ID NO: 22

His Leu Arg Gly Ala Val Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro

1186 1190 1195 1200

Asp Thr Pro Gly Pro

1201 1205

La forma activada potenciada de cada componente de la combinación puede ser preparado a partir de la solución inicial de dinamización homeopática, utilizando preferentemente el método de disminución de la concentración proporcional de dilución en serie de una parte de cada solución anterior (a partir de la solución inicial) en 9 partes (por dilución decimal), o en 99 partes (para la dilución centesimal), o en 999 partes (para la dilución milésimas) de un disolvente neutro, junto con el impacto externo. Preferiblemente, el impacto externo consiste en sacudir varias veces de forma vertical (dinamización) cada dilución Preferiblemente, los contenedores se utilizan por separado para cada dilución posterior hasta el nivel de potencia requerida, o el factor de dilución Este método es bien aceptado en la técnica homeopática. Referirse a V. Schwabe "Homeopathic medicines", M., 1967, p. 14-29, incorporado aquí como referencia para el propósito indicado.

Por ejemplo, para preparar una dilución de 12 centésimas (denominado C12), una parte de la solución de la matriz inicial de anticuerpos contra el fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina con la concentración de 3,0 mg / ml se diluye en 99 partes de solución acuosa neutral muchas o solución acuosa de alcohol disolvente (preferiblemente, el 15%, alcohol etílico) y luego se agitan verticalmente (10 y más veces) para crear la primera dilución centesimal (denotada como C1). La dilución centesimal segunda (C2) se prepara a partir de la dilución C1 primera centesimal. Este procedimiento se repite 11 veces para preparar la 12ª dilución centesimal C12. Así, el 12º de dilución centesimal C12 representa una solución obtenida por 12 diluciones seriadas de una parte de la solución de la matriz inicial de anticuerpos contra el fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina con la concentración de 3,0 mg / ml en 99 partes de un disolvente neutro en diferentes contenedores, lo que equivale a la dilución homeopática centesimal C12. Procedimientos similares con el factor de dilución correspondiente se realizan para obtener diluciones C30 y C200. Las diluciones intermedias pueden ser probadas en un modelo biológico deseado para comprobar la actividad. El ideal activado de formas potenciadas por los anticuerpos que comprende la combinación de la invención es una mezcla de C12, C30, C200 y diluciones. Cuando se utiliza la mezcla de varias diluciones homeopáticas (principalmente centesimal) de la sustancia activa como componente líquido biológicamente activo, cada componente de la composición (por ejemplo, C12, C30, C200) se prepara por separado de acuerdo con el procedimiento antes descrito hasta que la próxima y última dilución se obtiene (por ejemplo, hasta C11, C29 y C199, respectivamente), y luego una parte de cada componente se agrega en un contenedor de acuerdo con la composición de la mezcla y se mezcla con la cantidad necesaria de solvente (por ejemplo, con 97 piezas para la dilución centesimal).

Es posible el uso de la sustancia activa como mezcla de varias diluciones homeopáticas, por ejemplo, decimal y / o centesimal (D 20, C 30, C100 o C12, C30, C50, etc.), la eficiencia de las cuales se determina experimentalmente mediante pruebas de la dilución en un modelo biológico adecuado, por ejemplo, en los modelos descritos en los ejemplos en este documento.

En el curso de la disminución de la potenciación y la concentración, la sacudida vertical puede ser sustituida por la exposición externa a los ultrasonidos, campos electromagnéticos o cualquier otro procedimiento similar de impacto externo aceptado en el arte homeopática.

Preferiblemente, la composición farmacéutica de la invención puede estar en forma de un líquido o en la forma de dosificación sólida. La forma ideal de líquido de la composición farmacéutica es una mezcla, preferiblemente, en una proporción de 1:1 de la forma activada potenciada de anticuerpos del fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina y la forma activada potenciada de anticuerpos de la NO sintasa endotelial. El soporte líquido ideal es el agua o agua con una mezcla de alcohol etílico.

La forma de dosificación sólida de la composición farmacéutica de la invención puede ser preparada mediante el uso de impregnación de un soporte sólido farmacéuticamente aceptable con la mezcla de la solución acuosa de forma activada potenciada o soluciones acuosas-alcohólicas de los componentes activos, éstos se mezclan, principalmente en una proporción de 1:1 y se utiliza en forma de dosificación líquida. Por otra parte, el soporte puede ser impregnado consecutivamente con cada dilución necesaria. Ambos órdenes de impregnación son aceptables.

Preferiblemente, la dosificación de la composición farmacéutica de forma sólida es preparada a partir de los gránulos del soporte farmacéuticamente aceptable, el cual estaba saturado previamente con las diluciones acuosas o acuoso-alcohólicas de forma activada potenciada de anticuerpos frente al fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina y la forma activada potenciada de anticuerpos frente a la NO sintasa endotelial. La forma de dosificación sólida puede ser en cualquier forma conocida en la técnica farmacéutica, incluyendo una tableta, cápsula, pastilla oral, y otros. Como ingredientes farmacéuticos inactivos se puede utilizar la glucosa, sacarosa, maltosa, almidón, isomaltosa, isomalt y otros mono-oligo y polisacáridos utilizados en la fabricación de productos farmacéuticos, al igual que en mezclas tecnológicas de los ingredientes inactivos farmacéuticos mencionados con otros excipientes farmacéuticamente aceptables (por ejemplo, isomalt, crospovidona, ciclamato sódico, sacarina de sodio, ácido cítrico anhidro, etc.), incluidos los lubricantes, disgregantes, aglutinantes y agentes colorantes. Los medios de transporte preferidos son la lactosa e isomalt. La forma farmacéutica puede además incluir excipientes farmacéuticos estándar, por ejemplo, celulosa microcristalina y estearato de magnesio.

Para preparar la forma oral sólida, 100-300 micros gránulos de lactosa son impregnados con soluciones acuosas o acuoso-alcohólicas de forma activada potenciada de anticuerpos a la histamina, forma activada potenciada de anticuerpos hacia el fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina y la forma activada potenciada de anticuerpos frente a la NO sintasa endotelial en la proporción de 1 kg de solución de anticuerpos de 5 a 10 kg de lactosa (1:5 a 1:10). Para que la impregnación pueda ocurrir, los gránulos de lactosa son expuestos al riego de saturación en la cama de fluido en ebullición en una planta de la cama de ebullición (por ejemplo, "Hüttlin Pilotlab" por Hüttlin GmbH) con posterior secado a través de flujo de aire caliente a una temperatura por debajo de

40˚С. La cantidad estimada de los gránulos secos (10 a 34 partes de peso) saturada con la forma activada

potenciada de anticuerpos se coloca en la mesa de mezclas, y se mezcla con 25 a 45 partes en peso de lactosa pura "no-saturada" (utilizado para los fines de la reducción de costes y la simplificación y aceleración de los procesos tecnológicos sin disminuir la eficiencia del tratamiento), junto con 0,1 a 1 partes en peso de estearato de magnesio, y de 3 a 10 partes en peso de celulosa microcristalina. La masa de tableta obtenida es uniformemente mixta, y en tabletas por contacto directo de prensado en seco (por ejemplo, en una Prensa de Tabletas Korsch - XL 400), para formar pastillas redondas de 150 a 500 mg, preferiblemente, de 300 mg. Después del proceso de elaborar tabletas, pastillas de 300 mg se obtienen mediante la saturación con una solución acuosa de alcohol en la solución (desde 3,0 hasta 6,0 mg / pastilla) de la combinación de la forma activada potenciada de anticuerpos del fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina y la forma activada potenciada de anticuerpos a la NO sintasa endotelial. Cada componente de la combinación utilizada para impregnar el soporte está en forma de una mezcla de diluciones homeopáticas centesimales C12, C30, y C50, o una mezcla de diluciones homeopáticas centesimales C12, C30 y C200.

Mientras que la invención no se limita a ninguna teoría específica, se cree que la forma activada potenciada de los anticuerpos descritos en este documento no contiene la forma molecular de los anticuerpos en la cantidad suficiente para tener actividad biológica atribuida tal forma molecular. La actividad biológica de la combinación de la invención es ampliamente demostrada en los ejemplos adjuntos.

La composición farmacéutica de la invención puede ser utilizada para la administración a pacientes con cualquier tipo de diabetes.

Dicha composición farmacéutica se puede utilizada en el tratamiento de la Diabetes Mellitus como una monoterapia de la hiperglucemia y de la terapia compleja como un complemento a la terapia de reemplazo de insulina; y/o con hipoglucemiantes orales, tales como biguanidas (metformina), sulfonilureas (glibenclamide, glipizida, gliclazida, glicvidone, glimepirida), las tiazolidinedionas (rosiglitazona), inhibidores de alfa glucosidasa (acarbosa), etc., así como complemento para acompañar la terapia de la Diabetes Mellitus para prevenir complicaciones relacionadas a la diabetes.

Como se muestra en los ejemplos adjuntos, la administración de la combinación de la invención de estos pacientes mejora los niveles de glucosa en la sangre.

Ejemplos

Ejemplo 1.

Los dos estudios experimentales han investigado los efectos de los anticuerpos contra el fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor de la insulina humana purificado por afinidad de antígeno, en dosis ultra-baja, que se obtiene por la súper dilución de la solución de matriz inicial en 10012, 10030, 100200 veces (ULD anti-IR), los anticuerpos de la NO sintasa endotelial purificados por afinidad de antígeno, en dosis ultrabaja, que se obtiene por la hiper-dilución de la solución de la matriz inicial en 10012, 10030, 100200 (ULD anti-ULD anti-eNOS), así como la combinación de dosis ultrabajas de anticuerpos contra el fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor de la insulina y de dosis muy bajas de anticuerpos contra la NO sintasa endotelial (ULD anti-IR + ULD anti-eNOS).

Según el criterio de la Organización Mundial de la Salud (OMS), la Diabetes Mellitus (Tipo 1 y 2) se caracteriza porun aumento en el nivel de glucosa en la sangre (hiperglucemia) y por alterciones de tolerancia a la glucosa. Ésta última puede ser causada por una secreción anormal de insulina y/o por disminución de sensibilidad a la insulina de los tejidos periféricos. La prueba de tolerancia a la glucosa, se basa en la evaluación de la capacidad de los tejidos del cuerpo para utilizar la glucosa, es un método sensible para evaluar el problema de la alteración de la tolerancia a la glucosa del cuerpo.

Estudio 1.

En el estudio, se utilizaron 150 ratas Wistar machos (peso al inicio del estudio de 250 a 300 g, edad 3,5 a 4 meses). 10 ratas permanecieron intactas a modo de control. Al resto se les inyectó por vía intravenosa una dosis de estreptozotocina de 50 mg / kg (modelo experimental de Diabetes Mellitus). 72 horas después de la inyección de estreptozotocina, las ratas con niveles de glucosa en el plasma sanguíneo de menos de 12 mmol / l fueron seleccionadas, divididas en 7 grupos (20 ratas en cada uno). En los siguientes 21 días se les administró agua destilada (5 ml / kg / día, una vez al día por vía intragástrica), Insulina® (8 unidades / kg / día, por vía subcutánea), Rosiglitazona® (8 mg / kg / día, dos veces al día por vía intragástrica), ULD anti-IR (2,5 ml / kg / día en un volumen de 5 ml / kg / día, una vez al día por vía intragástrica), ULD anti-IR + ULD anti-ENOS (5 ml / kg / día, una vez al día por vía intragástrica), y también Insulina® y Rosiglitazona® de forma conjunta o ULD anti-IR + ULD anti-eNOS e Insulina®, de acuerdo con los regímenes correspondientes a cada preparación (tal y como se describió anteriormente). Las ratas intactas recibieron el mismo volumen de agua destilada. En los días 7, 14 y 21 desde la inyección de preparados en ratas, se midieron de forma rápida los niveles de glucosa en la sangre con el método

enzimático (método de la glucosa oxidasa) utilizando " kits de glucosa FKD” (Rusia).

De acuerdo con el método estándar (Du Vigneaud y Karr, 1925) se llevó a cabo la prueba oral de tolerancia a la glucosa (SOG) el día 14 del estudio (día 14 desde la administración de la preparación). Las ratas no tuvieron acceso a agua durante 18 horas. 60 minutos antes de la prueba se les dio las últimas sustancias de la prueba. Las ratas control recibieron agua destilada en el mismo volumen. La glucosa se administra por vía oral solución de glucosa en agua al 50% (1 g / kg de peso del animal). La glucosa en suero se obtuvo de muestras de sangre extraída de la vena de la cola y se midió mediante el uso del " kit de glucosa FKD” (ООО "Pharamaceutical and clinical diagnostics, Russia, www.fkd.ru”) después de 0, 30, 60, 90, 120 min. El área media bajo la curva de concentración de glucosa (AUC) en sangre a lo largo del tiempo se ha calculado.

La inyección de estreptozotocina llevó a un aumento sustancial de la glucosa en el plasma sanguíneo de las ratas en comparación con animales control (18 mmol / l frente a 3,5 mmol / l, p <0,05). En el grupo ULD anti-IR, los días 7, 14 y 21 desde la inyección de la preparación, el nivel de glucosa fue menor que en el grupo control una media del 22 al 28%, sin embargo, las diferencias no alcanzaron un nivel estadísticamente significativo. La combinación de ULD anti-IR y anti eNOS fue más eficaz, siendo la disminución del nivel de glucosa en los días 14 y 21 del experimento del 47% y 42% respectivamente (p <0,05 frente a control). La preparación de referencia, la Rosiglitazona, también redujo los niveles de glucosa en los días 14 y 21 del experimento, en los que, el efecto fue estadísticamente significativo únicamente en el día 14 del experimento (36%, p <0,05 frente a control).

La insulina inyectada a la mitad de la dosis efectiva (seleccionado en el estudio preliminar) disminuye el nivel de glucosa en todos los períodos de observación (hasta el nivel del control intacto). (Figura 1). Hay que tener en cuenta que se utilizó insulina de acción corta en el estudio de la glucosa en plasma y la sangre se midió una hora después de su inyección, lo que también influyó en el efecto de la dosis media de insulina en el nivel de glucosa en la sangre. En este contexto, no fue posible determinar completamente el efecto del uso combinado de la insulina y la rosiglitazona o la insulina y el complejo ULD anti-IR + anti-eNOS.

La alteración de la tolerancia a la glucosa (disminución de la glucosa por el consumo del cuerpo) es uno de los indicadores más importantes en el diagnóstico y el tratamiento de la Diabetes Mellitus. En los animales control, en la prueba oral de tolerancia a la glucosa (día 14 desde la inyección de preparados), se aumentó la tolerancia a la glucosa cuando la preparación de complejos ULD anti-IR + ULD anti-eNOS y la insulina fueron administradas por separado. La rosiglitazona también redujo el área bajo la curva de concentración a lo largo del tiempo (mayor tolerancia a la glucosa), sin embargo, su eficacia no fue estadísticamente significativa frente al grupo control (Figura 2).

Estudio 2.

En el estudio, se utilizaron 36 ratas Goto-Kakizaki machos (peso al inicio del estudio de 250-280 g, edad 10-12 semanas). Las ratas de esta línea se caracterizan por el desarrollo espontáneo de la Diabetes no dependiente de la insulina. Los animales fueron divididos en 3 grupos (12 ratas en cada uno) y recibieron agua destilada (5 ml / kg una vez al día por vía intragástrica), o ULD anti-IR (2,5 ml / kg una vez al día por vía intragástrica), o ULD anti-IR + ULD anti-ENOS (5 ml / kg una vez al día por vía intragástrica) durante 28 días. El nivel de glucosa en plasma se midió con la ayuda de un analizador de glucosa (Beckman, Fullerton, California, EE.UU.) antes de iniciar la inyección de las preparaciones y en los días 4, 8, 12, 16, 20, 24, 28 de inyección de las preparaciones. El día 28, se hizo una prueba de tolerancia a la glucosa (glucosa por vía oral, 1 g / kg).

La inyección de ULD anti-IR llevó a una disminución significativa (p <0,05) en el nivel de glucosa en el plasma sanguíneo de las ratas, sin embargo, la utilización de complejos ULD anti-IR + ULD anti-eNOS fue más eficaz (p <0,001 frente a control) (Figura 3).

Los resultados fueron confirmados por los datos de la prueba de tolerancia a la glucosa realizada el día 28 desde la inyección de preparados (Figura 4). La inyección de ULD anti-IR llevó a un aumento en la tolerancia a la glucosa (disminución estadísticamente significativa en un 44% en la curva de concentración con respecto al control). Al mismo tiempo, la reducción de este parámetro (AUC), causada por la inyección de complejo ULD anti-IR + ULD antieNOS fue del 62% y fue estadísticamente significativa frente al control (p <0,05).

Ejemplo 2

Se realizó un estudio clínico en seres humanos de la combinación de dosis ultrabaja de anticuerpos contra el fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina (ULD anti-IR) y de muy baja dosis de anticuerpos frente a la NO sintasa endotelial (ULD anti-eNOS), cada uno en forma de mezcla de agua y alcohol de las diluciones homeopáticas centesimales C12, C30 y C200 impregnados en isomaltosa.

Un estudio abierto no comparativo de la eficacia y seguridad de ULD anti-IR + ULD anti-eNOS en los pacientes con Diabetes Mellitus (DM) Tipo 1, incluyendo pacientes con un diagnóstico de la DM Tipo 1 de intensidad leve a moderada, sin signos de patología graves macro- y micro-vasculares. Después de obtener el consentimiento voluntario del paciente para la participación en el ensayo clínico, un estudio inicial se realizó con el propósito de establecer si el paciente cumplía con los criterios de inclusión / exclusión. Antes del inicio del estudio se realizó un "período de prueba" de dos semanas, durante el cual se hizo un examen de los pacientes (quejas, glucemia en ayunas, hemoglobina glicosilada, perfil glucémico diario y lipoproteinograma así y la eficacia y seguridad de los actuales tratamiento fueron evaluados). En un estudio de 12 semanas, los parámetros clave se midieron en las semanas de “prueba”, y luego en las semanas 6 y 12 del tratamiento. En 4 pacientes, durante la "prueba" y al final del estudio, la supervisión continua del nivel de glucemia se llevó a cabo con la ayuda del sistema CGMS. El sistema de control de la glucosa continua (CGMS) hace que sea posible controlar el nivel de glucosa a lo largo de tres días. Los resultados muestran cómo el nivel de glucosa cambia durante los 3 días, dependiendo de la terapia con insulina y el estilo de vida. Estos datos ayudan a diferenciar los períodos de nivel de glucosa alta o baja en función de la dieta, la ingesta de medicamentos o la carga física. La gráfica muestra un nivel de glucosa mínimo de 2,2 mmol / L, valores máximos de hasta 22,2 mmol / L, y también el nivel medio diario de glucosa en sangre.

Los pacientes con DM de Tipo 1, de leve a moderada gravedad, en la fase de descompensación, recibieron la terapia de insulina estándar antes de la inclusión y durante el estudio:

1.: Insulinas de acción prolongada (Protaphane®, Lantus®) en dosis medias de 12 a 26 U / día.

2.: Las insulinas de acción corta (Apidra®, NovoRapid®, Aktropid®) en dosis medias:

•: Mañana 8-10 U / día

•: Almuerzo 8-12 U / día

•: Cena 8-13 U / día.

Después de confirmar la aptitud del paciente para participar, el paciente se incluyó en el estudio y, como un añadido a la terapia estándar de la DM de Tipo 1 recibió la preparación ULD anti-IR + ULD anti-eNOS; la pauta de administración dependió del grado de la severidad y la compensación de la DM Tipo 1. Los pacientes incluidos en el estudio recibieron terapia en distintos preparados a distintas dosis de ULD anti-IR + ULD anti-eNOS:

1.: Cuatro pacientes — 1 comprimido 4 veces al día a las 8:00 AM, 12:00 PM, 6:00 PM, 10:00 PM.

2.: Dos pacientes — 1 comprimido 2 veces al día a las 8:00 AM, 6:00 PM.

En las semanas 3 y 8, el perfil glucémico diario también fue controlado (ocho puntos de medición) y los pacientes

fueron contactados por teléfono ("visitas” telefónicas). Los exámenes clínicos fueron realizados cada semana. En

total, los pacientes fueron observados durante 14 semanas.

Seis pacientes fueron incluidos en el estudio, cinco de los cuales lo completaron de acuerdo con el protocolo del estudio. La evaluación de la glucemia se realizó a partir de ocho mediciones de glucosa elaborando un perfil diario al comienzo y después de la semana 3, 6 y 12 del tratamiento. El nivel de hemoglobina glicosilada se determinó en un inicio y después de 12 semanas de tratamiento.

Todos los pacientes de DM Tipo 1 incluidos en el estudio advirtieron que la glucemia diaria tendía a disminuir después de un tratamiento de 6 semanas con los fármacos del estudio. De acuerdo con las ocho mediciones del perfil diario de glucosa, se registró una reducción media de glucemia del 20% en los pacientes con DM de Tipo 1. Después de 12 semanas de tratamiento, la hemoglobina glucosilada fue en promedio un 10-15% más baja en comparación con el valor de referencia.

De acuerdo con los resultados aportados por la monitorización continua de glucosa con el sistema CGMS en todos los pacientes, la terapia de 3 meses con ULD anti-IR + ULD anti-Enos resultó en una reducción de la glucemia media diaria y la disminución de las oscilaciones de los niveles máximos y mínimos de glucemia en un 15 a 20 % desde el valor de referencia.

En el paciente Nº 103 con DM Tipo 1 en una fase de descompensación, se observó una caída inesperada significativa del 48%en la glucemia todos los días (1 semana - 8,0 mmol / L, 12 semanas - 4,8 mmol / L), que supuso una corrección del tratamiento de insulina (reducción de la dosis diaria de insulina de acción corta hasta 8 U / d). La evolución de la glucemia media y la hemoglobina glicosilada se muestra en la Figura 5.

En el curso del estudio, no se registraron situaciones adversas de ningún tipo lo que prueba la seguridad de la preparación.

Ejemplo 3

Se realizó un estudio clínico en seres humanos de la combinación de dosis ultrabaja de anticuerpos contra el fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina (ULD anti-IR) y de dosis muy bajas de anticuerpos frente a la NO sintasa endotelial (ULD anti-eNOS), cada uno en forma de mezcla de agua y alcohol de las diluciones homeopáticas centesimales C12, C30 y C200 impregnados en isomaltosa.

Un estudio abierto no comparativo de la eficacia y seguridad de ULD anti-IR + ULD anti-eNOS en los pacientes con Diabetes Mellitus Tipo 2 (DM) incluyó a pacientes con un diagnóstico de la DM Tipo 2 de severidad leve a moderada, sin patologías macro- o micro-vascular, quienes recibieron dosis terapéuticas medias de Metformina. Después de obtener el consentimiento informado voluntario del paciente para la participación en el ensayo clínico, un estudio inicial se realizó con el propósito de establecer si el paciente cumplía los criterios de inclusión / exclusión. Tras la confirmación de la aptitud para poder participar en el estudio, el paciente recibió 1 comprimido de Subbetta 4 veces al día, además de la terapia estándar de DM tipo 2. Un tiempo de dos semanas denominado "período de prueba" fue proporcionado antes del inicio del estudio, durante el cual un examen de los pacientes se llevó a cabo (quejas, glucemia en ayunas, hemoglobina glicosilada, perfil glucémico diario y lipoproteinograma, indicadores del índice de resistencia a la insulina (HOMA-IR), así como la evaluación de la eficacia y seguridad del tratamiento actual). En un estudio de 12 semanas, los parámetros clave se midieron en las semanas del "período de prueba", y luego en las semanas 6 y 12 del tratamiento. En 4 pacientes, durante el " período de prueba" y al final del estudio, la supervisión continua del nivel de glucemia se llevó a cabo con la ayuda del sistema CGMS. En las semanas 3 y 8, ocho puntos

del perfil glucémico fueron adicionalmente controlados y se realizaron “visitas telefónicas”. La condición clínica se

revisó cada semana. En total, el paciente fue observado durante 14 semanas.

Once pacientes con Diabetes (DM) Tipo 2 en la fase de descompensación se incluyeron en el estudio. Uno de los pacientes voluntariamente abandonó el estudio. El resto de los pacientes siguen el tratamiento. En pacientes con DM tipo 2, de acuerdo con los datos de los perfiles diarios elaborados a patir de ocho mediciones, se registró una caída promedio de la glucemia de un 20% en la semana 6. En la semana 12, se observó un descenso medio en la hemoglobina glucosilada del 15 al 19% del valor de referencia.

En todos los pacientes en el transcurso de las 12 semanas, los parámetros de los análisis de sangre (eritrocitos, hemoglobina, leucocitos, plaquetas, fórmula leucocitaria, velocidad de sedimentación globular), lipoproteinograma, electrocardiograma, prueba de función hepática (ALT, AST, bilirrubina y sus fracciones) se mantuvieron dentro de los límites normales. La resistencia a la insulina, determinada por la prueba de HOMA-IR, cayó en un promedio de 1719% del valor de referencia.

En el transcurso de las 12 semanas de estudio, no se registraron eventos adversos de ninguna clase, lo que demuestra la seguridad de la preparación. Tampoco se observaron anormalidades en la actividad funcional del hígado.

La evolución media de la glucemia y la hemoglobina glicosilada se muestra en la figura 6.

Ejemplo 4

Un paciente X (varón, 74 años de edad) con diagnóstico de diabetes de tipo 2 ha estado recibiendo una dosis de 5 mg de Maniil® (Glibenclamida, Berlin - Chemie) dos veces al día. Hace 3 años apareció una úlcera necrótica profunda en los pies, concretamente en el hueso calcáneo, a pesar del tratamiento que recibió. El paciente fue 5 hospitalizado dos veces en una sala de cirugía, sin embargo, el tratamiento no resultó en una mejora significativa. Una composición farmacéutica reivindicada, un comprimido de 250 mg, que comprende la forma activada potenciada (dosis ultrabaja) de anticuerpos contra el fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor de insulina (RI Ab) y la NO sintasa endotelial (NOS Ab) impregnada en isomaltosa como una mezcla de diluciones homeopáticas centesimales de agua y etanol C12, C30, C200 (RI Ab + Ab NOS) se añadió a la terapia Maniil®.

10 Como resultado del tratamiento, que se extendió durante un mes, la dosis de Maniil® se redujo a 5 mg al día (un comprimido antes de dormir). Los niveles de glucosa en la sangre disminuyeron a valores normales (de 8-10 mmol / L a 5.6 mmol / L). El tratamiento detuvo el desarrollo de la úlcera del pie. La úlcera se limpió de masas necróticas y de restos de cutículas. Durante el examen de la úlcera se ha comprobado que esta ha sanado, dejando un área blanca (de 3,5 cm de diámetro) correspondiente a la descamación de la piel en la zona del hueso calcáneo.

Claims

REIVINDICACIONES

1.

Una composición farmacéutica que comprende a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor humano de insulina, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial.
2.

La composición farmacéutica de la reivindicación 1, que comprende a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra un fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial.
3.

La composición farmacéutica de la reivindicación 1, que comprende a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor humano de insulina, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial, en donde la molécula del receptor de insulina consiste en una subunidad alfa y una subunidad beta.
4.

La composición farmacéutica de la reivindicación 1, que comprende un soporte sólido farmacéuticamente aceptable, y a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra un fragmento C-terminal de la subunidad beta del receptor humano de insulina en forma de una mezcla de diluciones homeopáticas C12, C30 y C200 impregnados sobre dicho soporte sólido, y b) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial en forma de mezcla de diluciones homeopáticas C12, C30 y C200 impregnado en dicho soporte sólido.
5.

La composición farmacéutica de las reivindicaciones 1, 2, 3, ó 4, en donde dicho anticuerpo contra el receptor humano de insulina es un anticuerpo monoclonal, policlonal o natural.
6.

La composición farmacéutica de la reivindicación 5, en donde dicho anticuerpo contra el receptor humano de insulina es un anticuerpo policlonal.
7.

La composición farmacéutica de las reivindicaciones 1, 2, 3, ó 4, en donde dicho anticuerpo contra la NO sintasa endotelial es un anticuerpo monoclonal, policlonal o natural.
8.

La composición farmacéutica de la reivindicación 7, en donde dicho anticuerpo contra la NO sintasa endotelial es un anticuerpo policlonal.
9.

La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en donde dicho receptor humano de insulina consiste en la secuencia seleccionada del grupo que consiste en SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 , SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ NO ID: 14
10.

La composición farmacéutica de la reivindicación 1, en donde la NO sintasa endotelial consiste en la secuencia proporcionada en la SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22.
11.

Uso de una composición farmacéutica de la reivindicación 1, para preparar un medicamento destinado al tratamiento de la diabetes de tipo I en un paciente humano.
12.

El uso de la reivindicación 11, en donde el medicamento se prepara para administrar la composición farmacéutica a un paciente en una forma de dosificación sólida para administración.
13.

El uso de la reivindicación 11, en donde la forma de dosificación es un comprimido.
14.

El uso de la reivindicación 13, en donde dicho comprimido se prepara para ser administrado de una vez al día a cuatro veces al día.
15.

El uso de la reivindicación 15, en donde dicho comprimido se prepara para ser administrado dos veces al día.
16.

El uso de la reivindicación 15, en donde dicho comprimido se prepara para ser administrado cuatro veces al día.
17.

Uso de una composición farmacéutica de la reivindicación 1, para preparar un medicamento destinado al tratamiento de la diabetes de tipo II en un paciente humano.
18.

El uso de la reivindicación 17, en donde el medicamento se prepara para administrar la composición farmacéutica en una forma de dosificación sólida para administración.
19.

El uso de la reivindicación 18, en donde dicha forma de dosificación es un comprimido.
20.

El uso de la reivindicación 19, en donde el comprimido se prepara para ser administrado de una vez al día a cuatro veces al día.
21.

El uso de la reivindicación 19, en donde el comprimido se prepara para ser administrado cuatro veces al día.
22.

El uso de la reivindicación 11, comprendiendo dicho uso además que la preparación del medicamento es

para administrar insulina u otros agentes farmacéuticos adicionales adecuados para el tratamiento de la diabetes de 5 tipo I.
23.

El uso de la reivindicación 17, comprendiendo dicho uso además que la preparación del medicamento es para administrar agentes farmacéuticos adicionales adecuados para el tratamiento de la diabetes de tipo II.
24.

Un método para preparar una composición farmacéutica de la reivindicación 1, proveyendo a) una forma activada potenciada de un anticuerpo contra el receptor de la insulina humana y b) una forma activada potenciada

10 de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial, cada uno preparado por dilución consecutiva y repetida, y varias agitaciones de cada solución obtenida de acuerdo a técnicas homeopáticas, y entonces, o bien combinando las soluciones potenciadas mediante su mezcla, o, alternativamente, impregnando una masa soporte con dicha solución combinada o con las soluciones por separado.
25. El método de la reivindicación 24, donde la composición farmacéutica a preparar es una composición

15 farmacéutica de la reivindicación 6, y la forma activada potenciada de un anticuerpo contra un receptor humano de insulina es preparada por sucesivas diluciones centesimales, junto con agitación de cada dilución
26. El método de la reivindicación 24, donde la composición farmacéutica a preparar es una composición farmacéutica de la reivindicación 8, en donde la forma activada potenciada de un anticuerpo contra la NO sintasa endotelial es preparada por sucesivas diluciones centesimales, junto con agitación de cada dilución.

20 27. El método de la reivindicación 24, en donde la composición farmacéutica se prepara en forma de comprimido, y en donde dicho comprimido se obtiene por compresión directa.