LT5980B - Farmacinė kompozicija, skirta gydyti diabetą ir metabolinius sutrikimus - Google Patents

Farmacinė kompozicija, skirta gydyti diabetą ir metabolinius sutrikimus Download PDF

Info

Publication number
LT5980B
LT5980B LT2013018A LT2013018A LT5980B LT 5980 B LT5980 B LT 5980B LT 2013018 A LT2013018 A LT 2013018A LT 2013018 A LT2013018 A LT 2013018A LT 5980 B LT5980 B LT 5980B
Authority
LT
Lithuania
Prior art keywords
leu
ser
glu
gly
pro
Prior art date
Application number
LT2013018A
Other languages
English (en)
Other versions
LT2013018A (lt
Inventor
Iljiich Oleg Epshtein
Original Assignee
Epshtein Iliich Oleg
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=44899155&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=LT5980(B) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from RU2010130348/15A external-priority patent/RU2531048C2/ru
Priority claimed from RU2011127051/15A external-priority patent/RU2509572C2/ru
Application filed by Epshtein Iliich Oleg filed Critical Epshtein Iliich Oleg
Publication of LT2013018A publication Critical patent/LT2013018A/lt
Publication of LT5980B publication Critical patent/LT5980B/lt

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2869Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against hormone receptors
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0004Homeopathy; Vitalisation; Resonance; Dynamisation, e.g. esoteric applications; Oxygenation of blood
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P5/00Drugs for disorders of the endocrine system
    • A61P5/48Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones
    • A61P5/50Drugs for disorders of the endocrine system of the pancreatic hormones for increasing or potentiating the activity of insulin
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K16/00Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507Comprising a combination of two or more separate antibodies

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Išradimas skirtas farmacinei kompozicijai, akirtai panaudoti paciento, sergančio diabetu ar kitais metaboliniais sutrikimais, gydymui, kompozicija apima a) aktyvuotą-potencijuotą antikūno žmogaus insulino receptoriui formą ir b) aktyvuotą-potencijuotą antikūno endotelinei NO-sintazei formą.

Description

Cukrinis diabetas yra chroninė liga, apibūdinama kaip hiperglikemija (aukštas cukraus lygis kraujyje). Besitęsiantis gliukozės kiekio kraujyje didėjimas padidina su diabetu susijusių komplikacijų, tokių kaip inkstų pažeidimas, regos netekimas, širdies ligos ir kojų opos, riziką.
Yra du pagrindiniai diabeto tipai: I tipo diabetas ir II tipo diabetas. I tipo diabete hiperglikemija išsivysto dėl to, kad kasa negali gaminti insulino. Šio tipo diabetas paprastai pasireiškia vaikystėje ar ankstyvoje pilnametystėje. II tipo diabete kasa geba gaminti insuliną, bet negali pakankamai patenkinti kūno poreikių. Problema yra ta, kad kūno atsakas į insuliną nėra tinkamas, kas, savo ruožtu, sumažina gliukozės įsisavinimą ląstelėse, ir to išdava yra nenormaliai padidintas gliukozės kiekis kraujyje. Po daugelio metų alinančio darbo kasa gali galiausiai susirgti ir nebegalėti gaminti insulino, tuomet asmeniui, sergančiam II tipo diabetu, gali prireikti gydymo insulinu.
Insulinas yra natūralus hormonas, gaminamas kasos, perneša gliukozę iš kraujotakos į ląstelių vidų. Taigi, pagrindinė insulino paskirtis yra reguliuoti gliukozės pernešimą į ląsteles, tuo pačiu mažinant gliukozės kiekį kraujyje.
Insulino veikimas kontroliuojamas heterotetramerinio receptoriaus, kuris yra plazmos membranoje, aktyvavimu. Insulino receptorius yra glikoproteinas, sudarytas iš dviejų ekstraląstelinių α-subvienetų ir dviejų transmembraninių β-subvienetų, sujungtų disulfidiniais ryšiais (Ulrich et ai., Nature, 313:756-61, 1985). asubvienetuose yra insuliną surišantis domenas, ir β-subvieneto viduląstelinėje dalyje yra insuliną reguliuojanti tirozino proteino kinazė (enzimas, kuris katalizuoja aukštos energijos grupės pernašą nuo donoro ( paprastai ATP) prie akceptoriaus).
Kai insulino molekulė, kurią išskyrė kasos beta ląstelės, pasiekia ląstelę, ji susijungia su insulino receptoriumi daugumos ląstelių paviršiuje. Kai tik insulinas prisijungia, insulino receptoriaus β-subvieneto esminė fosfotransferazės funkcija yra aktyvuojama, dėl to įvyksta eilės ekstraląstelinių baltymų tirozino fosforilinimas. Kai tik insulino receptorius buvo aktyvintas, tuomet fosforilinimas nulemia gliukozės atsargų didėjimą ir dėl tos priežasties gliukozės kiekio kraujyje mažėjimą.
Efektyvi gliukozės kiekio kontrolė sunkiai pasiekiama ilgai trunkantiems laikotarpiams net su tiksliausiu gydymo insulinu būdu labiausiai motyvuotiems pacientams. Tokiu būdu, yra nuolatinis poreikis naujų vaistinių produktų, turinčių norimą terapinį veiksmingumą, ligų ir metabolinių sutrikimų gydymui.
Azoto oksidas (NO) yra dujinė molekulė, kuri, kaip buvo parodyta, veikia perduodant signalą įvairiuose biologiniuose procesuose. Endotelinės kilmės NO yra pagrindinė vaskulinį tonusą reguliuojanti molekulė ir jos ryšys su kraujagyslių ligomis pakankamai seniai pripažintas. NO slopina daugelį procesų, kurie, kaip žinoma, susiję su aterosklerotinių plokštelių susidarymu, įskaitant monocitų adheziją, trombocitų agregaciją ir kraujagyslių lygiųjų raumenų ląstelių proliferaciją. Kitas svarbus endotelinio NO vaidmuo yra vaskuliarinių sienelių apsauga nuo oksidacinio streso, kurį sukelia jo paties metaboliniai produktai ir lipidų bei lipoproteinų oksidacijos produktai. Endotelio funkcijos sutrikimas pasireiškia labai ankstyvose aterosklerozės stadijose. Dėl to galima, kad lokalinio NO prieinamumo stoka galėjo būti galutinė bendra priežastis, dėl kurios pagreitėja žmonių aterogenezė. Be to, kaip parodyta, dėl jo vaidmens vaskuliariniame endotelyje, NO prieinamumas moduliuoja lipoproteinų metabolizmą. Buvo paskelbta apie neigiamą koreliaciją tarp NO metabolinių produktų koncentracijos plazmoje ir bendrojo ir mažo tankio lipoproteinų [LDL} cholesterolio kiekio plazmoje, tuo metu kai didelio tankio lipoproteinai [HDL] gerina hipercholesteroleminių subjektų vaskuliarinę funkciją. NO netekimas turi ryškų poveikį šios ligos vystymuisi. Cukrinis diabetas yra susijęs su padidintu sergamumu ir mirtingumu, sukeltu visų pirma aterosklerozės pagreitintu išsivystymu. Be to, pranešimai rodo, kad diabetas pažeidė plaučių funkcijas. Buvo pateiktas teiginys, kad atsparumas insulinui sąlygoja kvėpavimo takų uždegimą. Habib et ai., Nitric Oxide Measurement From Blood To Lungs, Is There A Link? Pak J Physiol 2007;3(1 J.
Azoto oksidas sintezuojamas endotelyje iš L-arginino veikiant azoto oksido sintazei (NO-sintazei). NO-sintazė yra skirtingų izoformų, įskaitant konstitutyvinę formą (cNOS) ir indukuojamą formą (iNOS). Konstutyvinė forma yra normaliose endotelinėse ląstelėse, neuronuose ir kai kuriuose kituose audiniuose.
Ypatingai praskiestos (arba ultra mažos) antikūnų, potencijuotų naudojant homeopatinę technologiją, formos terapinis veikimas buvo atrastas šio patentinio išradimo pateikėjo, Dr. Oleg I. Epshtein. JAV patentas Nr. 7582294 aprašo vaistą gėrybinės prostatos hiperplazijos ar prostatito gydymui, vartojant pagal homeopatinę metodiką aktyvuotą antikūnų prieš prostatos specifinį antigeną (PSA) formą. JAV patentas Nr. 7700096 aprašo pagal homeopatinę metodiką potencijuotą antikūnų prieš endotelinę NO-sintazę formą. Pagal homeopatinę metodiką potencijuotą antikūnų prieš endotelinę NO-sintazę forma yra parduodama Rusijos Federacijoje ir kitose šalyse Impaza® pavadinimu.
TRUMPAS IŠRADIMO APRAŠYMAS
Pagal vieną aspektą šiame išradime pateikiama farmacinė kompozicija, skirta vartoti pacientui, sergančiam diabeto susirgimais arba kitais metaboliniais sutrikimais, kompozicija apima a) aktyvuotą-potencijuotą antikūno prieš žmogaus insulino receptorių formą ir b) aktyvuotą- potencijuotą antikūno prieš endotelinę NO-sintazę formą.
Pagal vieną aspektą šiame išradime pateikiama farmacinė kompozicija, skirta vartoti pacientui, sergančiam diabeto susirgimais arba kitais metaboliniais sutrikimais, kompozicija apima a) aktyvuotą-potencijuotą antikūno prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą formą ir b) aktyvuotą-potencijuotą antikūno prieš endotelinę NO-sintazę formą.
Viename variante farmacinė kompozicija pagal šio aspekto išradimą apima a) aktyvuotą- potencijuotą antikūno prieš žmogaus insulino receptorių formą ir b) aktyvuotąpotencijuotą antikūno prieš endotelinę NO-sintazę formą, kur insulino receptoriaus molekulė sudaryta mažiausia iš vieno α-subvieneto ir mažiausia iš vieno β-subvieneto.
Viename variante farmacinė kompozicija pagal šio aspekto išradimą apima aktyvuotą-potencijuotą antikūno prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto Cgalinj fragmentą formą ar aktyvuotą-potencijuotą antikūno prieš žmogaus insulino receptorių formą yra C12, C30 ir C200 homeopatinių praskiedimų mišinių formoje, impregnuotoje kietame nešiklyje, Aktyvuotą-potencijuotą antikūno prieš endotelinę NO-sintazę forma yra C12, C30 ir C200 praskiedimų pagal homeopatinę metodiką mišinių formoje, gali būti vėliau impregnuojama j kietą nešiklį.
Kitame variante farmacinė kompozicija pagal šio aspekto išradimą apima aktyvuotą-potencijuotą antikūno prieš endotelinę NO-sintazę formą yra C12, C30 ir C200 praskiedimų mišinių formoje impregnuotoje kietame nešiklyje. Aktyvuotapotencijuota antikūno prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą forma arba aktyvuota-potencijuota antikūno prieš žmogaus insulino receptorių forma yra CI2, C30 ir C200 praskiedimų pagal homeopatinę metodiką mišinių formoje, gali būti vėliau impregnuojama kietame nešiklyje.
Optimaliu atveju aktyvuota-potencijuota antikūno prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinj fragmentą forma ar aktyvuota-potencijuota antikūno prieš žmogaus insulino receptorių forma yra monokloninis, polikloninis ar natūralus antikūnas, dar geriau, polikloninis antikūnas. Viename variante pagal šio aspekto išradimą aktyvuota-potencijuota antikūno prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinj fragmentą forma arba aktyvuota-potencijuota antikūno prieš žmogaus insulino receptorių forma yra pagaminama panaudojant seką vieno po kito einančių 100-kartinių praskiedimų, susietų su kiekvieno praskiedimo purtymu.
Optimaliu atveju aktyvuota-potencijuota antikūno prieš endotelinę NO-sintazę forma yra monokloninis, polikloninis ar natūralus antikūnas, daug geriau, polikloninis antikūnas. Viename variante pagal šio aspekto išradimą aktyvuota-potencijuota antikūno prieš endotelinę NO-sintazę forma yra pagaminama panaudojant seką vieno po kito einančių 100-kartinių praskiedimų, susietų su kiekvieno praskiedimo purtymu
Kitu aspektu išradimas apima farmacinės kompozicijos, sudarytos iš a) aktyvuotos-potencjjuotos antikūno prieš žmogaus insulino receptorių formos ir b) aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš endotelinę NO-sintazę formos, panaudojimą gydymui paciento, sergančio I tipo diabetu.
Kitu aspektu išradimas apima farmacinės kompozicijos, sudarytos iš a) aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinj fragmentą formos ir b) aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš endotelinę NO sintazę formos, panaudojimą gydymui paciento, sergančio I tipo diabetu.
Kitu aspektu išradimas apima farmacinės kompozicijos, sudarytos iš a) aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš žmogaus insulino receptorių formos ir b) aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš endotelinę NO-sintazę formos, panaudojimą gydymui paciento, sergančio II tipo diabetu.
Kitu aspektu išradimas apima farmacinės kompozicijos, sudarytos iš a) aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą formos ir b) aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš endotelinę NO-sintazę formos, panaudojimą gydymui paciento, sergančio II tipo diabetu.
Kitu aspektu išradimas apima farmacinės kompozicijos, sudarytos iš a) aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš žmogaus insulino receptorių formos ir b) aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš endotelinę NO sintazę formos, panaudojimą gliukozės kiekio kraujyje žinduoliuose sumažinimui.
Kitu aspektu išradimas apima farmacinės kompozicijos, sudarytos iš a) aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą formos ir b) aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš endotelinę NO-sintazę formos panaudojimą sumažinti gliukozės kiekį kraujyje žinduoliuose.
Kitu aspektu išradimas apima farmacinės kompozicijos, sudarytos iš a) aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš žmogaus insulino receptorių formos ir b) aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš endotelinę NO-sintazę formos, panaudojimą gydyti atsparumą insulinui žinduoliuose.
Kitu aspektu išradimas apima farmacinės kompozicijos, sudarytos iš a) aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą formos ir b) aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš endotelinę NO-sintazę formos, panaudojimą gydyti atsparumą insulinui žinduoliuose.
Viename variante pagal šio aspekto išradimą įvedama nuo vienos iki dviejų vienetinių dozuotų aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą formos formų ar aktyvuotospotencijuotos antikūno prieš žmogaus insulino receptorių formos formų ir nuo vienos iki dviejų vienetinių dozuotų aktyvuotos-potencijuotos antikūno prieš endotelinę NOsintazę formos formų, vartojant kiekvieną dozuotą formą nuo vieno iki keturių kartų per dieną. Geriausia, nuo vienos iki dviejų vienetinių dozuotų formų, kiekvienos iš jų sudarytos iš aktyvuotų-potencijuotų antikūnų formų, yra įvedamos du kartus per dieną.
TRUMPAS BRĖŽINIŲ FIGŪRŲ APRAŠYMAS
Fig. 1 iliustruoja tirtųjų preparatų poveikį į žiurkių, turinčių streptozotocinu sukeltą cukrinį diabetą, gliukozės kiekį kraujo plazmoje.
Fig. 2 iliustruoja tirtųjų preparatų poveikį 14-tą dieną po injekcijos į ploto po koncentracijos priklausomybės nuo laiko kreive (AUC) gliukozės tolerancijos tyrime su žiurkėmis, turinčiomis streptozotocinu sukeltą cukrinį diabetą.
Fig. 3 iliustruoja tirtųjų preparatų poveikį į žiurkių, turinčių streptozotocinu sukeltą cukrinį diabetą, gliukozės kiekį kraujo plazmoje.
Fig. 4 iliustruoja tirtųjų preparatų poveikį 28-tą dieną po injekcijos į ploto po koncentracijos priklausomybės nuo laiko kreive (AUC) gliukozės tolerancijos tyrime su žiurkėmis, turinčiomis spontaninį nuo insulino nepriklausomą cukrinį diabetą.
Fig. 5 iliustruoja gliukozės ir glikuoto hemoglobino kiekių pokyčius pacientams, sergantiems I tipo cukriniu diabetu, duodamų IR Ab + NOS Ab preparatų fone.
Fig. 6 iliustruoja gliukozės ir glikuoto hemoglobino kiekių pokyčius pacientams, sergantiems II tipo cukriniu diabetu, duodamų IR Ab + NOS Ab preparatų fone.
IŠSAMUS IŠRADIMO APRAŠYMAS
Šis išradimas yra apibūdintas remiantis aprašymo gale pridėta apibrėžtimi. Dėl šios apibrėžties toliau einančiame terminų aprašyme pateikiami su ja susiję apibrėžimai.
Čia naudojamas terminas „antikūnas“ reiškia imunoglobuliną, kuris specifiškai rišasi su kitos molekulės tam tikra erdvine ir poliarine struktūra (ir todėl apibrėžiamas kaip komplementarus su ja). Antikūnai, išvardinti apibrėžties punktuose, gali apimti visą imunoglobuliną arba jo fragmentus, gali būti natūralūs, polikloniniai ar monokloniniai ir gali apimti įvairias klases ar izotipus, tokius kaip IgA, IgD, IgE, IgGI, lgG2a, lgG2b and lgG3, IgM, ir t.t. Jų fragmentai gali apimti Fab, Fv and F(ab')2, Fab', ar panašūs. Singuliarinis antikūnas apima pliuralinius antikūnus.
Terminas „aktyvuota-potencijuota forma“ ar atitinkamai „potencijuota forma“, čia minimų antikūnų atžvilgiu yra naudojamas bet kokio pradinio antikūno tirpalo homeopatinės potenciacijos produktui pažymėti. „Homeopatinė potenciacija“ reiškia homeopatinių metodų panaudojimą homeopatinei potencijai suteikti pradinio tam tikros medžiagos tirpalo atžvilgiu. Nors ir nėra tuo apribota, “homeopatinė potenciacija“ gali apimti, pavyzdžiui, pakartotinus vieną po kito einančius skiedimus, susietus su išoriniu apdorojimu, ypatingai vertikaliu (mechaniniu) purtymu. Kitaip tariant, pradinis antikūno tirpalas yra daug kartų skiedžiamas ir kiekvienas gautas tirpalas daug kartų vertikaliai purtomas pagal homeopatinę technologiją. Tinkamiausia pradinio antikūno tirpalo koncentracija tirpiklyje (geriau, vandenyje ar vandens-etilo alkoholio mišinyje) yra nuo apie 0,5 iki apie 5,0 mg/ml ribose. Tinkamiausia kiekvieno komponento, t.y. antikūno tirpalo, pagaminimo metodika yra pirminio matricinio antikūnų tirpalo (motininės tinktūros) mišinio trijų antikūno vandeninių ar vandeninių-alkoholinių praskiedimų, praskiestų 10012, 1OO30 ir 1OO200 kartų, atitinkamai, kas yra ekvivalentiška 100-kartiniams homeopatiniams praskiedimams (CI2, C30 ir C200) panaudojimas arba pirminio matricinio antikūnų tirpalo mišinio trijų antikūno vandeninių ar vandeninių-alkoholinių praskiedimų, praskiestų 10012, 1OO30 ir 1OO50 kartų, atitinkamai, kas yra ekvivalentiška 100kartiniams homeopatiniams praskiedimams (CI2, C30 ir C50) panaudojimas. Homeopatinės potenciacijos pavyzdžiai yra aprašyti JAV patentuose Nr. 7572441 ir 7582294, kurie yra įtraukti čia kaip literatūros šaltiniai ir anksčiau minėtam tikslui. Tuo metu kai terminas „aktyvuota-potencijuota forma naudojamas apibrėžtyje, pavyzdžiuose yra naudojamas terminas „ultra mažos dozės“. Terminas „ultra mažos dozės“ tapo tiriamos srities terminu, kuris buvo sukurtas šioje mokslo srityje, atsiradusioje tiriant ir naudojant homeopatiniu būdu praskiestą ar potencijuotą medžiagos formą. Terminas „ultra maža dozė“ ar „ultra mažos dozės“ yra pilnai atitinkantis ir visų pirma yra sinonimas apibrėžtyje naudojamam terminui „aktyvuotapotencijuota“ forma.
Kitaip tariant, antikūnas yra „aktyvuotos-potencijuotos arba „potencijuotos formos tuomet kai yra trys faktoriai. Pirma, „aktyvuota-potencijuota antikūno forma yra homeopatijos srityje gerai žinomo gamybos proceso produktas. Antra, „aktyvuotapotencijuota“ antikūno forma turi biologinį aktyvumą, nustatomą visų pripažintais moderniosios farmakologijos metodais. Ir trečia, „aktyvuotos-potencijuotos“ antikūno formos turimas biologinis aktyvumas negali būti paaiškintas homeopatinio proceso galutinio produkto antikūno molekuline forma.
Pavyzdžiui, aktyvuota-potencijuota antikūnų forma gali būti gauta paveikiant pradinę išskirto antikūno molekulinę formą daugeliu vienas po kito einančių praskiedimų, susietų su išoriniu poveikiu, tokiu kaip mechaninis purtymas. Išorinis apdorojimas koncentracijos mažinimo eigoje gali būti taip pat atliktas, pavyzdžiui, veikiant ultragarso, elektromagnetiniais ar kitais fizikiniais veiksniais. V. Schvvabe „Homeopathic medicines“, M., 1967, JAV patentai Nr. 7229648 ir 4311897, kurie yra pridedami kaip literatūros šaltiniai pilnai ir minėtiems tikslams, aprašo tokius būdus, kurie yra visų pripažinti homeopatinės potenciacijos metodais homeopatijos srityje. Ši metodika duoda galimybę gauti vienodą pradinės molekulinės formos antikūno molekulių koncentracijos mažėjimą, ši procedūra kartojama tol, kol pasiekiama norima homeopatinė potencija. Individualiam antikūnui reikiama homeopatinė potencija gali būti nustatyta atliekant tarpinių praskiedimų biologinį testavimą pagal norimą farmakologinį modelį. Nors tai ir neapriboja, „homeopatinis potencijavimas“ gali būti pasiektas, pavyzdžiui, atliekant pakartotinus vienas po kito einančius skiedimus, susietus su išoriniu poveikiu, ypač vertikaliu (mechaniniu) purtymu. Kitaip tariant pradinis antikūno tirpalas yra skiedžiamas daug vienas po kito einančių kartų ir kiekvienas gautas tirpalas daug kartų vertikaliai purtomas pagal homeopatinės technologijos reikalavimus. Tinkamiausia pradinio antikūno tirpalo koncentracija tirpiklyje, geriau, vandenyje ar vandens-etilo alkoholio mišinyje yra nuo apie 0,5 iki apie 5,0 mg/ml ribose. Tinkamiausia kiekvieno komponento, t.y. antikūno tirpalo, pagaminimo metodika yra panaudojimas mišinio trijų antikūno vandeninių arba vandeninių-alkoholinių praskiedimų pirminio matricinio antikūno tirpalo, praskiestų 10012, 1OO30 and 10O200 kartų, kas yra ekvivalentiška 100-kartiniams homeopatiniams praskiedinams C12, C30, C200 pirminio matricinio tirpalo (motininės tinktūros) trijų vandeninių ar vandeninių-alkoholinių praskiedimų mišinį arba antikūnų, praskiestų 10012, 1OO30 ir 1OO50 kartų, atitinkamai, kas atitinka 100-kartiniams homeopatiniams praskiedimams C12, C30, C50, pirminio matricinio tirpalo (motininės tinktūros) trijų vandeninių ar vandeninių-alkoholinių praskiedimų mišinį. Pavyzdžiai, kaip gauti norimą potenciją yra pateikti, pavyzdžiui, v.s. Patent Nos. 7,229,648 ir 4,311,897, kurie yra įtraukti čia kaip literatūros šaltiniai ir anksčiau minėtam tikslui. Metodika, tinkama čia aprašytai, pritaikyta „aktyvuotai-potencijuotai“' antikūnų formai gauti, smulkiai aprašoma toliau.
Požiūris i žmonių homeopatinį gydymą yra gana kontraversiškas. Nepaisant to, kad šis išradimas susijęs su priimtomis homeopatinėmis metodikomis „aktyvuotaipotencijuotai“ antikūnų formai gauti, jis nesiremia vien tik žmonių homeopatija aktyvumo požiūriu. Šios paraiškos pateikėjai netikėtai atrado ir, naudodami priimtus farmakologinius modelius, pakankamai aiškiai pademonstravo, kad tirpiklis, galiausiai gautas iš vienas po kito einančių antikūno pradinės molekulinės formos praskiedimų, turi apibrėžtą aktyvumą, nesusijusį su buvimu šio antikūno molekulinės formos pėdsakų tiksliniame praskiedime. Čia yra pateiktas aktyvuotos-potencijuotos formos antikūno biologinis aktyvumas naudojant visų pripažintus farmakologinius aktyvumo modelius tiek in vitro eksperimentuose, tiek ir in vivo tyrimuose su tinkamais gyvūnų modeliais. Toliau aprašyti eksperimentai pateikia biologinio aktyvumo įrodymus šiuose modeliuose. Žmonių klinikiniai tyrimai taip pat rodo, kad aktyvumas, pastebėtas bandymuose su gyvūnais, be to gali būti gerai pritaikomas žmonių terapijoje. Tyrimai su žmonėmis taip pat rodo, kad čia aprašytos „aktyvuotospotencijuotos“ formos gali būti tinkamos tam tikrų žmonių ligų arba sutrikimų, kurie medicinos moksle yra visuotinai priimti kaip patologinės būklės, gydymui.
Be to, apibrėžties antikūno „aktyvuota-potencijuota“ forma apima tik tirpalus arba kietus preparatus, kurių biologinio aktyvumo negalima paaiškinti molekulinės formos antikūno, likusio iš pradinio, startinio tirpalo, biologiniu aktyvumu. Kitaip tariant, nors ir galima manyti, kad antikūno „aktyvuotoje-potencijuotoje“' formoje gali būti pradinės molekulinės formos antikūno pėdsakai, šios srities specialistai su tam tikru patikimumo laipsniu negalėtų priskirti stebimo biologinio aktyvumo priimtuose farmakologiniuose modeliuose likusio antikūno molekulinei formai dėl ypatingai mažų šio antikūno molekulinės formos koncentracijų, likusių po vienas po kito einančių praskiedimų. Nors išradimas ir nėra apribotas kokios nors konkrečios teorijos, šio išradimo „aktyvuotos-potencijuotos“ formos antikūnų biologinis aktyvumas nėra priskirtinas antikūno pradinei molekulinei formai. Geriau, kai „aktyvuotospotencijuotos“ formos antikūnas yra skystoje arba kietoje formoje, kurioje molekulinės formos antikūno koncentracija yra žemiau visuotinai priimtų analitinių metodų, tokių kaip kapiliarinė elektroforezė arba didelio efektyvumo skysčių chromatografija, detektavimo ribos. Ypač gerai, kai aktyvuotos-potencijuotos formos antikūnas yra skystoje arba kietoje formoje, kurioje molekulinės formos antikūno koncentracija yra mažesnė už Avogadro skaičių. Terapinių medžiagų molekulinių formų farmakologijoje įprasta konstruoti dozės-atsako kreivę, kurioje braižoma farmakologinio atsako priklausomybė nuo subjektui skiriamos arba testuojamos in vitro veikliosios medžiagos koncentracijos. Mažiausias vaisto kiekis, kuris duoda kokį nors detektuojamą atsaką, yra žinomas kaip slenkstinė dozė. Ypatingai svarstytina ir pageidautina, kad „aktyvuotos-potencijuotos“ formos antikūnai, turėtų molekulinės formos antikūno, jeigu aplamai jo turi, koncentraciją, mažesnę už molekulinės formos antikūno slenkstinę dozę duotam biologiniam modeliui.
Šis išradimas apima farmacinę kompoziciją, skirtą duoti pacientui, sergančiam diabeto ligomis ar kitais metaboliniais sutrikimais, apimantis a) antikūno aktyvuotą-potencijuotą prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą formą ar antikūno aktyvuotą-potencijuotą prieš žmogaus insulino receptorių formą ir b) antikūno aktyvuotą-potencijuotą prieš endotelinę NO- sintazę formą. Kaip buvo pasakyta anksčiau, kiekvienas iš individualių derinio komponentų yra gerai žinomi kaip individualūs vaistai. Tokiu būdu, šio patentinio išradimo pateikėjai nelauktai nustatė, kad derinio davimas yra naudingas gydant pacientus, sergančius diabetu ir atsparumu insulinui, ir toliau mažina gliukozės kieki kraujyje. Nors pateikėjas nesurištas šia teorija „pagreitintojo“ hipotezė teigia, kad I tipo cukrinis diabetas (DM) ir II tipo cukrinis diabetas yra tos pačios ligos, apibūdinamos atsparumu insulinui, kurių vystymąsi j I tipo DM ar II tipo DM nulemia paciento genotipas. Ši hipotezė nepaneigia autoimuninių procesų vaidmens; taigi, lieka abejonių dėl pirminio vaidmens. „Pagreitintojo“ hipotezė skirsto cukrinį diabetą i I tipo diabetą ir II tipo diabetą pagal progresavimo greitį: sergantiems I tipo diabetu patologinių pakitimų greitas vystymasis nurodo klinikinių ligos simptomų patvirtinimo ankstyvą pradžią. Hipotezė buvo pasiūlyta 2001 ir iki šiol patvirtinta 6 nepriklausomų klinikinių tyrimų rezultatais (see VVilkin, T.J. The accelerator hypothesis: a review of the evidence for insulin resistance as the basis for type [1] as wel1 as type II diabetes. // International Journal for Obesity. 2009: Vol. 33 - p. 716-726.). Pagrindinį vaidmenį abiejų diabeto tipų patogenezėje vaidina atsparumas insulinui, kurio sumažėjimas sąlygoja abiejų I tipo diabeto ir II tipo diabeto klinikinės eigos sušvelnėjimą (ž. Cellular mechanisms of insulin resistance. VVorld Congress on insulin Resistance Syndrome, 2009, Diabetes Care. 2010: Vol. 33, N8, pp. 103-108.).
Insulino β-subvieneto receptoriaus vaidmuo insulino signalo kelyje yra žinomas. Po insulino susijungimo su receptorium ir β-subvieneto aktyvavimo procesas galėjo eiti dvejomis kryptimis: fosfatidilinozitol 3-kinazė (PI 3-K) ar MAP kinazė (MAP-K). Pirmasis kelias atrodo reikalingas daugumos metabolinio ir antiapoptinių insulino poveikių realizavimui, ir alternatyvus kelias yra surištas su ne metaboliniais, proliferaciniais ir mitogeniniais poveikiais. Kas liečia atsparumą insulinui, buvo parodyta, kad tiktai metabolinis atsparumas insulinui, susijęs su β-subvieneto aktyvacija P13-K keliu, vaidina ypatingą vaidmenį nustatant cukrinio diabeto vystymąsi, (žr. Muntoni, S, Muntoni, S. Insulin Resistance: Pathophysiology and Rationale for Treatment, Ann. Nutr. Metab. 2011: Vol. 58, N1, pp. 25-36). Apibrėžties farmacinė kompozicija užtikrina poveikį metaboliniam insulino atsparumui.
Farmacinė kompozicija pagal šį išradimo aspektą gali būti skystos formos arba kietos formos. Visos farmacinėje kompozicijoje esančios antikūnų aktyvuotospotencijuotos formos yra pagamintos iš pradinės molekulinės antikūno formos, panaudojant homeopatijos srityje priimtus būdus. Pradiniai antikūnai gali būti monokloniniai arba polikloniniai antikūnai, gauti žinomais būdais, pavyzdžiui tokiais, kaip aprašyti imunotechnikoje: lmmunotechniques, G. Frimel, M., „Meditsyna“, 1987, p. 9-33; „Hum. Antibodies. Monoclonal and recombinant antibodies, 30 years after“ by Laffly E., Sodoyer R. - 2005 - Vol. 14. - N 1-2. P.33-55; abu jie pridedami kaip literatūros šaltiniai.
Monokloniniai antikūnai gali būti gaunami, pvz., panaudojant hibridomų technologiją. Pradinė proceso stadija apima imunizaciją, paremtą principais, jau ištobulintais gaminant polikloninius antiserumų preparatus. Kitos darbo stadijos apima hibridinių ląstelių, generuojančių identiško specifiškumo antikūnų klonus, paruošimą. Jų išskirstymas atliekamas naudojant tuos pačius metodus, kaip ir polikloninio antiserumo gavimo atveju.
Polikloniniai antikūnai gali būti gaunami panaudojant aktyviąją gyvūnų imunizaciją. Šiam tikslui, pavyzdžiui, tinkami gyvūnai (pvz. triušiai) gauna eilę atitinkamo antigeno, pavyzdžiui, ar NO-sintazės ir žmogaus insulino β-subvienetų Cgalinio fragmento receptoriaus ar endotelinės NO-sintazės ir žmogaus insulino receptoriaus injekcijų. Gyvūno imuninė sistema generuoja atitinkamus antikūnus, kurie išskiriami iš gyvūnų žinomu būdu. Ši metodika duoda galimybę gauti monospecifiniu antikūnu praturtintą serumą. Jeigu norima, antikūnų turintis serumas gali būti gryninamas, pavyzdžiui, naudojant giminingumo chromatografiją, frakcionavimą nusodinant druska arba jonų mainų chromatografiją, Gautas išgrynintas antikūnu praturtintas serumas gali būti naudojamas kaip pradinė medžiaga antikūnų aktyvuotai-potencijuotai formai gauti. Tinkamiausia gauto pradinio antikūno tirpalo koncentracija tirpiklyje (geriau vandenyje arba vandens-etilo alkoholio mišinyje) yra nuo apie 0,5 iki apie 5,0 mg/ml.
Tinkamiausia kiekvieno komponento pagaminimo metodika yra panaudojimas mišinio trijų antikūno vandeninių arba vandeninių-alkoholinių praskiedimų pirminio matricinio antikūnų tirpalo, praskiesto atitinkamai 10012, 1OO30 ir 10O200 kartų, kas yra ekvivalentiška 100-kartiniams homeopatiniams praskiedimams C12, C30 ir C200. Norint pagaminti šio išradimo derinio kietą dozuotą vienetinę formą, nešiklio masė yra impregnuojama norimu praskiedimu, gautu homeopatinio proceso metu. Norint pagaminti šio išradimo derinio kietą dozuotą formą, nešiklio masė impregnuojama kiekvienu praskiedimu. Norimo derinio dozuotai formai paruošti tinka abi impregnavimo tvarkos.
Tinkamiausiame išradimo įgyvendinimo variante pradinė medžiaga aktyvuotai-potencijuotai formai, kurią apima šio išradimo derinys, gauti yra polikloninis gyvūne sukeltas antikūnas prieš atitinkamą antigeną, būtent žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą ar žmogaus insulino receptorių ir endotelinę NO-sintazę. Norint gauti polikloninių antikūnų prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinj fragmentą norimas antigenas gali būti įvedamas kaip imunogenas laboratoriniam gyvūnui, geriausia triušiams. Peptidai, kuriems skiriamas ypatingas dėmesys, gali turėti mažiausia apie 3 aminorūgštis, paprastai mažiausia 10 bet kurioje sekos pusėje, geriausia turinčius mažiausia 3 aminorūgštis C-galinėje pusėje. Manoma, kad šios žmogaus insulino receptoriaus sekos yra ypatingai tinkami antigenai:
Visas žmogaus insulino receptoriaus a-subvienetas:
SEQ ID NO: 1
His Leu Tyr
30
Pro Gly Glu Vai Cys Pro Gly Met Asp Ile Arg Asn Asn Leu Thr
31 35 40 45
Arg Leu His Glu Leu Glu Asn Cys Ser Vai Ile Glu Gly His Leu
46 50 55 60
Gln Ile Leu Leu Met Phe Lys Thr Arg Pro Glu Asp Phe Arg Asp
61 65 70 75
Leu Ser Phe Pro Lys Leu Ile Met Ile Thr Asp Tyr Leu Leu Leu
76 80 85 90
Phe Arg Vai Tyr Gly Leu Glu Ser Leu Lys Asp Leu Phe Pro Asn
91 95 100 105
Leu Thr Vai Ile Arg Gly Ser Arg Leu Phe Phe Asn Tyr Ala Leu
106 110 115 120
Vai Ile Phe Glu Met Vai His Leu Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Asn
121 125 130 135
Leu Met Asn Ile Thr Arg Gly Ser Vai Arg Ile Glu Lys Asn Asn
136 140 145 150
Glu Leu Cys Tyr Leu Ala Thr Ile Asp Trp Ser Arg Ile Leu Asp
151 155 160 165
Ser Vai Glu Asp Asn Tyr Ile Vai Leu Asn Lys Asp Asp Asn Glu
166 170 175 180
Glu Cys Gly Asp Ile Cys Pro Gly Thr Ala Lys Gly Lys Thr Asn
181 185 190 195
Cys Pro Ala Thr Vai Ile Asn Gly Gln Phe Vai Glu Arg Cys Trp
196 200 205 210
Thr His Ser His Cys Gln Lys Vai Cys Pro Thr Ile Cys Lys Ser
211 215 220 225
His Gly Cys Thr Ala Glu Gly Leu Cys Cys His Ser Glu Cys Leu
226 230 235 240
Gly Asn Cys Ser Gln Pro Asp Asp Pro Thr Lys Cys Vai Ala Cys
241 245 250 255
Arg Asn Phe Tyr Leu Asp Gly Arg Cys Vai Glu Thr Cys Pro Pro
256 260 265 270
Pro Tyr Tyr His Phe Gln Asp Trp Arg Cys Vai Asn Phe Ser Phe
271 275 280 285
Cys Gln Asp Leu His His Lys Cys Lys Asn Ser Arg Arg Gln Gly
286 290 295 300
Cys His Gln Tyr Vai Ile His Asn Asn Lys Cys Ile Pro Glu Cys
301 305 310 315
Pro Ser Gly Tyr Thr Met Asn Ser Ser Asn Leu Leu Cys Thr Pro
316 320 325 330
Cys Leu Gly Pro Cys Pro Lys Vai Cys His Leu Leu Glu Gly Glu
331 335 340 345
Lys Thr Ile Asp Ser Vai Thr Ser Ala Gln Glu Leu Arg Gly Cys
346 350 355 360
Thr Vai Ile Asn Gly Ser Leu Ile Ile Asn Ile Arg Gly Gly Asn
361 365 370 375
Asn Leu Ala Ala Glu Leu Glu Ala Asn Leu Gly Leu Ile Glu Glu
376 380 385 390
Ile Ser Gly Tyr Leu Lys Ile Arg Arg Ser Tyr Ala Leu Vai Ser
391 395 400 405
Leu Ser Phe Phe Arg Lys Leu Arg Leu Ile Arg Gly Glu Thr Leu
406 410 415 420
Glu Ile Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Ala Leu Asp Asn Gln Asn Leu
421 425 430 435
Arg Gln Leu Trp Asp Trp Ser Lys His Asn Leu Thr Ile Thr Gln
436 440 445 450
Gly Lys Leu Phe Phe His Tyr Asn Pro Lys Leu Cys Leu Ser Glu
451 455 460 465
Ile His Lys Met Glu Glu Vai Ser Gly Thr Lys Gly Arg Gln Glu
466 470 475 480
Arg Asn Asp Ile Ala Leu Lys Thr Asn Gly Asp Gln Ala Ser Cys
481 485 490 495
Glu Asn Glu Leu Leu Lys Phe Ser Tyr Ile Arg Thr Ser Phe Asp
496 500 505 510
Lys Ile Leu Leu Arg Trp Glu Pro Tyr Trp Pro Pro Asp Phe Arg
511 515 510 525
Asp Leu Leu Gly Phe Met Leu Phe Tyr Lys Glu Ala Pro Tyr Gln
526 530 535 540
Asn Vai Thr Glu Phe Asp Gly Gln Asp Ala Cys Gly Ser Asn Ser
541 545 550 555
Trp Thr Vai Vai Asp Ile Asp Pro Pro Leu Arg Ser Asn Asp Pro
556 560 565 570
Lys Ser Gln Asn His Pro Gly Trp Leu Met Arg Gly Leu Lys Pro
571 575 580 585
Trp Thr Gln Tyr Ala Ile Phe Vai Lys Thr Leu Vai Thr Phe Ser
586 590 595 600
Asp Glu Arg Arg Thr Tyr Gly Ala Lys Ser Asp Ile Ile Tyr Vai
601 605 610 615
Gln Thr Asp Ala Thr Asn Pro Ser Vai Pro Leu Asp Pro Ile Ser
616 620 625 630
Vai Ser Asn Ser Ser Ser Gln Ile Ile Leu Lys Trp Lys Pro Pro
631 635 640 645
Ser Asp Pro Asn Gly Asn Ile Thr His Tyr Leu Vai Phe Trp Glu
646 650 655 660
Arg Gln Ala Glu Asp Ser Glu Leu Phe Glu Leu Asp Tyr Cys Leu
661 665 670 675
Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ser Arg Thr Trp Ser Pro Pro Phe Glu
676 680 685 690
Ser Glu Asp Ser Gln Lys His Asn Gln Ser Glu Tyr Glu Asp Ser
691 695 700 705
Ala Gly Glu Cys Cys Ser Cys Pro Lys Thr Asp Ser Gln Ile Leu
706 710 715 720
Lys Glu Leu Glu Glu Ser Ser Phe Arg Lys Thr Phe Glu Asp Tyr
721 725 730 735
Leu His Asn Vai Vai Phe Vai Pro Arg Lys Thr Ser Ser Gly Thr
736 740 745 750
Gly Ala Glu Asp Pro Arg Pro Ser Arg Lys Arg Arg
751 755 760 762
Žmogaus insulino receptoriaus α-subvieneto fragmentai:
SEQIDNO:2
Leu Gly Leu Tyr Asn
131 135
Leu Met Asn Ile Thr Arg Gly Ser Vai
136
140
144
SEQIDNO:3
Lys Gly Lys Thr Asn
191 195
Cys Pro Ala Thr Vai Ile Asn Gly
196 200 203
SEQID NO: 4
Trp Ser Lys His Asn Leu Thr Ile Thr Gln 441 445 450
Gly Lys Leu
451 453
SEQIDNO:5
Asn Vai Thr Glu Phe Asp Gly Gln Asp Ala Cys Gly Ser Asn Ser
541 545 550 555
Trp Thr Vai Vai Asp
556 560
SEQIDNO:6
Asp Ile Ile Tyr Vai
611 615
Gln Thr Asp Ala Thr
616 620
SEQIDNO:7
Tyr Glu Asp Ser
702 705
Ala Gly Glu Cys Cys Ser Cys Pro Lys Thr Asp Ser Gln Ile
706 710 715 719
Visas žmogaus insulino receptoriaus β-subvienetas: SEQIDNO:8
Ser Leu Gly
763 765
Asp Vai Gly Asn Vai Thr Vai Ala Vai Pro Thr Vai Ala Ala Phe
766 770 775 780
Pro Asn Thr Ser Ser Thr Ser Vai Pro Thr Ser Pro Glu Glu His
781
785
790
795
Arg Pro Phe Glu Lys Vai Vai Asn Lys Glu Ser Leu Vai Ile Ser
796 800 805 810
Gly Leu Arg His Phe Thr Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gln Ala Cys
811 815 820 825
Asn Gln Asp Thr Pro Glu Glu Arg Cys Ser Vai Ala Ala Tyr Vai
826 830 835 840
Ser Ala Arg Thr Met Pro Glu Ala Lys Ala Asp Asp Ile Vai Gly
841 845 850 855
Pro Vai Thr His Glu Ile Phe Glu Asn Asn Vai Vai His Leu Met
856 860 865 870
Trp Gln Glu Pro Lys Glu Pro Asn Gly Leu Ile Vai Leu Tyr Glu
871 875 880 885
Vai Ser Tyr Arg Arg Tyr Gly Asp Glu Glu Leu His Leu Cys Vai
886 890 895 900
Ser Arg Lys His Phe Ala Leu Glu Arg Gly Cys Arg Leu Arg Gly
901 905 910 915
Leu Ser Pro Gly Asn Tyr Ser Vai Arg Ile Arg Ala Thr Ser Leu
916 920 925 930
Ala Gly Asn Gly Ser Trp Thr Glu Pro Thr Tyr Phe Tyr Vai Thr
931 935 940 945
Asp Tyr Leu Asp Vai Pro Ser Asn Ile Ala Lys Ile Ile Ile Gly
946 950 955 960
Pro Leu Ile Phe Vai Phe Leu Phe Ser Vai Vai Ile Gly Ser Ile
961 965 970 975
Tyr Leu Phe Leu Arg Lys Arg Gln Pro Asp Gly Pro Leu Gly Pro
976 980 985 990
Leu Tyr Ala Ser Ser Asn Pro Glu Tyr Leu Ser Ala Ser Asp Vai
991 995 1000 1005
Phe Pro Cys Ser Vai Tyr Vai Pro Asp Glu Trp Glu Vai Ser Arg
1006 1010 1015 1020
Glu Lys Ile Thr Leu Leu Arg Glu Leu Gly Gln Gly Ser Phe Gly
1021 1025 1030 1035
Met Vai Tyr Glu Gly Asn Ala Arg Asp Ile Ile Lys Gly Glu Ala
1036 1140 1145 1050
Glu Thr Arg Vai Ala Vai Lys Thr Vai Asn Glu Ser Ala Ser Leu
1051 Arg Glu Arg 1155 Ile Glu Phe Leu Asn 1160 Glu Ala Ser Vai Met 1065 Lys Gly
1066 Phe Thr Cys 1170 His His Vai Vai Arg 1175 Leu Leu Gly Vai Vai 1080 Ser Lys
1081 Gly Gln Pro 1185 Thr Leu Vai Vai Met 1190 Glu Leu Met Ala His 1095 Gly Asp
1096 Leu Lys Ser 1100 Tyr Leu Arg Ser Leu 1105 Arg Pro Glu Ala Glu 1110 Asn Asn
1111 Pro Gly Arg 1115 Pro Pro Pro Thr Leu 1120 Gln Glu Met Ile Gln 1125 Met Ala
1126 Ala Glu Ile 1130 Ala Asp Gly Met Ala 1135 Tyr Leu Asn Ala Lys 1140 Lys Phe
1141 Vai His Arg 1145 Asp Leu Ala Ala Arg 1150 Asn Cys Met Vai Ala 1155 His Asp
1156 Phe Thr Vai 1160 Lys Ile Gly Asp Phe 1165 Gly Met Thr Arg Asp 1170 Ile Tyr
1171 Glu Thr Asp 1175 Tyr Tyr Arg Lys Gly 1180 Gly Lys Gly Leu Leu 1185 Pro Vai
1186 Arg Trp Met 1190 Ala Pro Glu Ser Leu 1195 Lys Asp Gly Vai Phe 1200 Thr Thr
1201 Ser Ser Asp 1205 Met Trp Ser Phe Gly 1210 Vai Vai Leu Trp Glu 1215 Ile Thr
1216 Ser Leu Ala 1220 Glu Gln Pro Tyr Gln 1225 Gly Leu Ser Asn Glu 1230 Gln Vai
1231 Leu Lys Phe 1235 Vai Met Asp Gly Gly 1240 Tyr Leu Asp Gln Pro 1245 Asp Asn
1246 Cys Pro Glu 1250 Arg Vai Thr Asp Leu 1255 Met Arg Met Cys Trp 1260 Gln Phe
1261 1265 1270 1275
Asn Pro Lys Met Arg Pro Thr Phe Leu Glu Ile Vai Asn Leu Leu
1276 Lys Asp Asp 1280 Leu His Pro Ser Phe 1285 Pro Glu Vai Ser Phe 1290 Phe His
1291 1295 1300 1305
Ser Glu Glu Asn Lys Ala Pro Glu Ser Glu Glu Leu Glu Met Glu
1306 1310 1315 1320
Phe Glu Asp Met Glu Asn Vai Pro Leu Asp Arg Ser Ser His Cys
1321 1325 1330 1335
Gln Arg Glu Glu Ala Gly Gly Arg Asp Gly Gly Ser Ser Leu Gly
1336 1340 1345 1350
Phe Lys Arg Ser Tyr Glu Glu His Ile Pro Tyr Thr His Met Asn
1351 1355 1360 1365
Gly Gly Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn
1366 1370 1375 1380
Pro Ser
13811382
Žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinio fragmento fragmentai: SEQIDNO:9
Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro
1368 1370 1375 1377
SEQIDNO: 10
Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn
1372 1375 1380
Pro Ser
13811382
SEQIDNO: 11
Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr
13691370 1375
SEQ ID NO: 12
Gly Gly Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn
1366 1370 1375 1380
Pro Ser
13811382
SEQ IDNO: 13
Asn
1365
Gly Gly Lys Lys Asn Gly Arg Ile Leu Thr Leu Pro Arg Ser Asn
1366 1370 1375 1380
Pro Ser
13811382
Žmogaus insulino panaudojimas antigenu taip pat yra svarstomas. Tinkama
seka tokiam antigenui yra ši:
SEQIDNO: 14
Met Ala Thr Gly Gly Arg Arg Gly Ala Ala Ala Ala Pro Leu Leu
1 5 10 15
Vai Ala Vai Ala Ala Leu Leu Leu Gly Ala Ala Gly His Leu Tyr
16 20 25 30
Pro Gly Glu Vai Cys Pro Gly Met Asp Ile Arg Asn Asn Leu Thr
31 35 40 45
Arg Leu His Glu Leu Glu Asn Cys Ser Vai Ile Glu Gly His Leu
46 50 55 60
Gln Ile Leu Leu Met Phe Lys Thr Arg Pro Glu Asp Phe Arg Asp
61 65 70 75
Leu Ser Phe Pro Lys Leu Ile Met Ile Thr Asp Tyr Leu Leu Leu
76 80 85 90
Phe Arg Vai Tyr Gly Leu Glu Ser Leu Lys Asp Leu Phe Pro Asn
91 95 100 105
Leu Thr Vai Ile Arg Gly Ser Arg Leu Phe Phe Asn Tyr Ala Leu
106 110 115 120
Vai Ile Phe Glu Met Vai His Leu Lys Glu Leu Gly Leu Tyr Asn
121 125 130 135
Leu Met Asn Ile Thr Arg Gly Ser Vai Arg Ile Glu Lys Asn Asn
136 140 145 150
Glu Leu Cys Tyr Leu Ala Thr Ile Asp Trp Ser Arg Ile Leu Asp
151 155 160 165
Ser Vai Glu Asp Asn Tyr Ile Vai Leu Asn Lys Asp Asp Asn Glu
166 170 175 180
Glu Cys Gly Asp Ile Cys Pro Gly Thr Ala Lys Gly Lys Thr Asn
181 185 190 195
Cys Pro Ala Thr Vai Ile Asn Gly Gln Phe Vai Glu Arg Cys Trp
196 200 205 210
Thr His Ser His Cys Gln Lys Vai Cys Pro Thr Ile Cys Lys Ser
211 215 220 225
His Gly Cys Thr Ala Glu Gly Leu Cys Cys His Ser Glu Cys Leu
226 230 235 240
Gly Asn Cys Ser Gln Pro Asp Asp Pro Thr Lys Cys Vai Ala Cys
241 245 250 255
Arg Asn Phe Tyr Leu Asp Gly Arg Cys Vai Glu Thr Cys Pro Pro
256 260 265 270
Pro Tyr Tyr His Phe Gln Asp Trp Arg Cys Vai Asn Phe Ser Phe
271 275 280 285
Cys Gln Asp Leu His His Lys Cys Lys Asn Ser Arg Arg Gln Gly
286 290 295 300
Cys His Gln Tyr Vai Ile His Asn Asn Lys Cys Ile Pro Glu Cys
301 305 310 315
Pro Ser Gly Tyr Thr Met Asn Ser Ser Asn Leu Leu Cys Thr Pro
316 320 325 330
Cys Leu Gly Pro Cys Pro Lys Vai Cys His Leu Leu Glu Gly Glu
331 335 340 345
Lys Thr Ile Asp Ser Vai Thr Ser Ala Gln Glu Leu Arg Gly Cys
346 350 355 360
Thr Vai Ile Asn Gly Ser Leu Ile Ile Asn Ile Arg Gly Gly Asn
361 365 370 375
Asn Leu Ala Ala Glu Leu Glu Ala Asn Leu Gly Leu Ile Glu Glu
376 380 385 390
Ile Ser Gly Tyr Leu Lys Ile Arg Arg Ser Tyr Ala Leu Vai Ser
391 395 400 405
Leu Ser Phe Phe Arg Lys Leu Arg Leu Ile Arg Gly Glu Thr Leu
406 410 415 420
Glu Ile Gly Asn Tyr Ser Phe Tyr Ala Leu Asp Asn Gln Asn Leu
421 425 430 435
Arg Gln Leu Trp Asp Trp Ser Lys His Asn Leu Thr Ile Thr Gln
436 Gly Lys Leu Phe 440 Phe His Tyr Asn Pro 445 Lys Leu Cys Leu Ser 450 Glu
451 455 460 465
Ile His Lys Met Glu Glu Vai Ser Gly Thr Lys Gly Arg Gln Glu
466 470 475 480
Arg Asn Asp Ile Ala Leu Lys Thr Asn Gly Asp Gln Ala Ser Cys
481 485 490 495
Glu Asn Glu Leu Leu Lys Phe Ser Tyr Ile Arg Thr Ser Phe Asp
496 500 505 510
Lys Ile Leu Leu Arg Trp Glu Pro Tyr Trp Pro Pro Asp Phe Arg
511 515 510 525
Asp Leu Leu Gly Phe Met Leu Phe Tyr Lys Glu Ala Pro Tyr Gln
526 530 535 540
Asn Vai Thr Glu Phe Asp Gly Gln Asp Ala Cys Gly Ser Asn Ser
541 545 550 555
Trp Thr Vai Vai Asp Ile Asp Pro Pro Leu Arg Ser Asn Asp Pro
556 560 565 570
Lys Ser Gln Asn His Pro Gly Trp Leu Met Arg Gly Leu Lys Pro
571 575 580 585
Trp Thr Gln Tyr Ala Ile Phe Vai Lys Thr Leu Vai Thr Phe Ser
586 590 595 600
Asp Glu Arg Arg Thr Tyr Gly Ala Lys Ser Asp Ile Ile Tyr Vai
601 605 610 615
Gln Thr Asp Ala Thr Asn Pro Ser Vai Pro Leu Asp Pro Ile Ser
616 620 625 630
Vai Ser Asn Ser Ser Ser Gln Ile Ile Leu Lys Trp Lys Pro Pro
631 635 640 645
Ser Asp Pro Asn Gly Asn Ile Thr His Tyr Leu Vai Phe Trp Glu
646 650 655 660
Arg Gln Ala Glu Asp Ser Glu Leu Phe Glu Leu Asp Tyr Cys Leu
661 665 670 675
Lys Gly Leu Lys Leu Pro Ser Arg Thr Trp Ser Pro Pro Phe Glu
676 680 685 690
Ser Glu Asp Ser Gln Lys His Asn Gln Ser Glu Tyr Glu Asp Ser
691 695 700 705
Ala Gly Glu Cys Cys Ser Cys Pro Lys Thr Asp Ser Gln Ile Leu
706 710 715 720
Lys Glu Leu Glu Glu Ser Ser Phe Arg Lys Thr Phe Glu Asp Tyr
721 725 730 735
Leu His Asn Vai Vai Phe Vai Pro Arg Lys Thr Ser Ser Gly Thr
736 740 745 750
Gly Ala Glu Asp Pro Arg Pro Ser Arg Lys Arg Arg Ser Leu Gly
751 755 760 765
Asp Vai Gly Asn Vai Thr Vai Ala Vai Pro Thr Vai Ala Ala Phe
766 770 775 780
Pro Asn Thr Ser Ser Thr Ser Vai Pro Thr Ser Pro Glu Glu His
781 785 790 795
Arg Pro Phe Glu Lys Vai Vai Asn Lys Glu Ser Leu Vai Ile Ser
796 800 805 810
Gly Leu Arg His Phe Thr Gly Tyr Arg Ile Glu Leu Gln Ala Cys
811 815 820 825
Asn Gln Asp Thr Pro Glu Glu Arg Cys Ser Vai Ala Ala Tyr Vai
826 830 835 840
Ser Ala Arg Thr Met Pro Glu Ala Lys Ala Asp Asp Ile Vai Gly
841 845 850 855
Pro Vai Thr His Glu Ile Phe Glu Asn Asn Vai Vai His Leu Met
856 860 865 870
Trp Gln Glu Pro Lys Glu Pro Asn Gly Leu Ile Vai Leu Tyr Glu
871 875 880 885
Vai Ser Tyr Arg Arg Tyr Gly Asp Glu Glu Leu His Leu Cys Vai
886 890 895 900
Ser Arg Lys His Phe Ala Leu Glu Arg Gly Cys Arg Leu Arg Gly
901 905 910 915
Leu Ser Pro Gly Asn Tyr Ser Vai Arg Ile Arg Ala Thr Ser Leu
916 920 925 930
Ala Gly Asn Gly Ser Trp Thr Glu Pro Thr Tyr Phe Tyr Vai Thr
931 935 940 945
Asp Tyr Leu Asp Vai Pro Ser Asn Ile Ala Lys Ile Ile Ile Gly
946 950 955 960
Pro Leu Ile Phe Vai Phe Leu Phe Ser Vai Vai Ile Gly Ser Ile
961 965 970 975
Tyr Leu Phe Leu Arg Lys Arg Gln Pro Asp Gly Pro Leu Gly Pro
976 Leu Tyr Ala 980 Ser Ser Asn Pro Glu 985 Tyr Leu Ser Ala Ser 990 Asp Vai
991 Phe Pro Cys 995 Ser Vai Tyr Vai Pro 1000 Asp Glu Trp Glu Vai 1005 Ser Arg
1006 Glu Lys Ile 1010 Thr Leu Leu Arg Glu 1015 Leu Gly Gln Gly Ser 1020 Phe Gly
1021 Met Vai Tyr 1025 Glu Gly Asn Ala Arg 1030 Asp Ile Ile Lys Gly 1035 Glu Ala
1036 1140 1145 1050
Glu Thr Arg Vai Ala Vai Lys Thr Vai Asn Glu Ser Ala Ser Leu
1051 Arg Glu Arg 1155 Ile Glu Phe Leu Asn 1160 Glu Ala Ser Vai Met 1065 Lys Gly
1066 Phe Thr Cys 1170 His His Vai Vai Arg 1175 Leu Leu Gly Vai Vai 1080 Ser Lys
1081 Gly Gln Pro 1185 Thr Leu Vai Vai Met 1190 Glu Leu Met Ala His 1095 Gly Asp
1096 Leu Lys Ser 1100 Tyr Leu Arg Ser Leu 1105 Arg Pro Glu Ala Glu 1110 Asn Asn
1111 Pro Gly Arg 1115 Pro Pro Pro Thr Leu 1120 Gln Glu Met Ile Gln 1125 Met Ala
1126 Ala Glu Ile 1130 Ala Asp Gly Met Ala 1135 Tyr Leu Asn Ala Lys 1140 Lys Phe
1141 Vai His Arg 1145 Asp Leu Ala Ala Arg 1150 Asn Cys Met Vai Ala 1155 His Asp
1156 Phe Thr Vai 1160 Lys Ile Gly Asp Phe 1165 Gly Met Thr Arg Asp 1170 Ile Tyr
1171 Glu Thr Asp 1175 Tyr Tyr Arg Lys Gly 1180 Gly Lys Gly Leu Leu 1185 Pro Vai
1186 Arg Trp Met 1190 Ala Pro Glu Ser Leu 1195 Lys Asp Gly Vai Phe 1200 Thr Thr
1201 Ser Ser Asp 1205 Met Trp Ser Phe Gly 1210 Vai Vai Leu Trp Glu 1215 Ile Thr
1216 1220 1225 1230
Ser Leu Ala Glu Gln Pro Tyr Gln Gly Leu Ser Asn Glu Gln Vai
1231 Leu Lys Phe 1235 Vai Met Asp Gly Gly 1240 Tyr Leu Asp Gln Pro 1245 Asp Asn
1246 Cys Pro Glu 1250 Arg Vai Thr Asp Leu 1255 Met Arg Met Cys Trp 1260 Gln Phe
1261 1265 1270 1275
Asn Pro Lys Met Arg Pro Thr Phe Leu Glu Ile Vai Asn Leu Leu
1276 Lys Asp Asp 1280 Leu His Pro Ser Phe 1285 Pro Glu Vai Ser Phe 1290 Phe His
1291 Ser Glu Glu 1295 Asn Lys Ala Pro Glu 1300 Ser Glu Glu Leu Glu 1305 Met Glu
1306 Phe Glu Asp 1310 Met Glu Asn Vai Pro 1315 Leu Asp Arg Ser Ser 1320 His Cys
1321 Gln Arg Glu 1325 Glu Ala Gly Gly Arg 1330 Asp Gly Gly Ser Ser 1335 Leu Gly
1336 Phe Lys Arg 1340 Ser Tyr Glu Glu His 1345 Ile Pro Tyr Thr His 1350 Met Asn
1351 Gly Gly Lys 1355 Lys Asn Gly Arg Ile 1360 Leu Thr Leu Pro Arg 1365 Ser Asn
1366 Pro Ser 1370 1375 1380
13811382
Pradinių plolikloninių antikūnų prieš žmogaus insulino receptoriaus βsubvieneto C-galinį fragmentą pavyzdinė metodika gali būti aprašyta taip. Norint padidinti polikloninių antikūnų kiekį triušių kraujyje, buvo atliekamos 1-3 norimo antigeno intraveninės injekcijos triušiams ir po 7-9 dienų paimamas kraujas. Po imunizacijos kraujo mėginiai tiriami antikūno kiekiui nustatyti. Paprastai tirpaus antigeno maksimalus imuninės reakcijos lygis pasiekiamas po 40-60 dienų nuo pirmosios antigeno injekcijos. Pasibaigus pirmam imunizacijos ciklui, triušiams duodamas 30 dienų reabilitacijos laikotarpis, po kurio pakartotinai imunizacija atliekama kitomis 1-3 intraveninėmis injekcijomis.
Norimus antigenus turinčiam antiserumui gauti, paimamas imunizuotų triušių kraujas ir supilamas į 50 ml centrifūgos mėgintuvėlį. Medine mentele nuimami ant mėgintuvėlio sienelių susidarę produkto gumulėliai ir į gumulą mėgintuvėlio centre įstatoma lazdelė. Po to kraujas patalpinamas j šaldytuvą nakčiai ir laikomas apie 40°C temperatūroje. Kitą dieną išimamas ant mentelės esantis gumulas ir likęs skystis centrifuguojamas 10 min esant 13000 apsisukimų. Skystas nuopilas yra reikiamas antiserumas. Gautasis antiserumas paprastai yra geltonos spalvos. J antiserumą pridedama 20% NaN3 (koncentracija pagal masę), kad galutinė koncentracija būtų 0,02% ir laikomas užšaldytas -20°C temperatūroje (arba be NaN3 -70°C temperatūroje). Norint atskirti reikiamus antikūnus prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą iš antiserumo, tinka toliau aprašyta kietafazinės absorbcijos seka:
ml triušio antiserumo praskiedžiama du kartus su 0,15 M NaCI, po ko pridedama 6,26 g Na2S04, sumaišoma ir inkubuojama 12-16 valandų 4°C temperatūroje. Nuosėdos nucentrifuguojamos, praskiedžiama 10ml fosfatinio buferio ir dializuojama prieš tą patį buferį per naktį kambario temperatūroje. Pašalinus nuosėdas, tirpalas supilamas į DEAE-celiuliozės kolonėlę, subalansuotą pagal fosfatinį buferį. Antikūno frakcija nustatoma matuojant eliuato optinį tankį esant 280 nm bangos ilgiui.
Išskirti negryninti antikūnai gryninami naudojant giminingumo chromatografijos metodą pririšant gautuosius antikūnus prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą, esantiems ant chromatografinės terpės netirpios matricos, o po to eliuuojant koncentruotais vandeniniais druskų tirpalais.
Gautasis buferinis tirpalas yra naudojamas kaip pradinis tirpalas homeopatinio skiedimo procese, naudojamam antikūnų aktyvuotai-potencijuotai formai paruošti. Tinkamiausia antigenu išgrynintų polikloninių triušio antikūnų prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą pradinio matricinio tirpalo koncentracija yra nuo 0,5 iki 5,0 mg/ml, geriau, nuo 2,0 iki 3,0 mg/ml.
Polikloniniai antikūnai prieš endotelinę NO-sintazę taip pat gali būti gauti pagal analogišką metodologiją naudojant adjuvantą. Norint gauti polikloninius antikūnus prieš NO-sintazę, imunogenu (antigenu) galima naudoti visą toliau aprašytos sekos jaučio endotelinės NO-sintazės molekulę: SEQ ID NO: 15
Met Gly Asn Leu Lys Ser Vai Gly Gln Glu Pro Gly Pro Pro Cys
1 5 10 15
Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Cys Gly Lys Gln Gly
16 20 25 30
Pro Ala Ser Pro Ala Pro Glu Pro Ser Arg Ala Pro Ala Pro Ala
31 35 40 45
Thr Pro His Ala Pro Asp His Ser Pro Ala Pro Asn Ser Pro Thr
46 50 55 60
Leu Thr Arg Pro Pro Glu Gly Pro Lys Phe Pro Arg Vai Lys Asn
61 65 70 75
Trp Glu Leu GLys er Ile Thr Tyr Asp Thr Leu Cys Ala Gln Ser
76 80 85 90
Gln Gln Asp Gly Pro Cys Thr Pro Arg Cys Cys Leu GLys i er Leu
91 95 100 105
Vai Leu Pro Arg Lys Leu Gln Thr Arg Pro Ser Pro Gly Pro Pro
106 110 115 120
Pro Ala Glu Gln Leu Leu Ser Gln Ala Arg Asp Phe Ile Asn Gln
121 125 130 135
Tyr Tyr Ser Ser Ile Lys Arg Ser GLys er Gln Ala His Glu Glu
136 140 145 150
Arg Leu Gln Glu Vai Glu Ala Glu Vai Ala Ser Thr Gly Thr Tyr
151 155 160 165
His Leu Arg Glu Ser Glu Leu Vai Phe Gly Ala Lys Gln Ala Trp
166 170 175 180
Arg Asn Ala Pro Arg Cys Vai Gly Arg Ile Gln Trp Gly Lys Leu
181 185 190 195
Gln Vai Phe Asp Ala Arg Asp Cys Ser Ser Ala Gln Glu Met Phe
196 200 205 210
Thr Tyr Ile Cys Asn His Ile Lys Tyr Ala Thr Asn Arg Gly Asn
211 215 220 225
Leu Arg Ser Ala Ile Thr Vai Phe Pro Gln Arg Ala Pro Gly Arg
226 230 235 240
Gly Asp Phe Arg Ile Trp Asn Ser Gln Leu Vai Arg Tyr Ala Gly
241 245 250 255
Tyr Arg Gln Gln Asp GLys er Vai Arg Gly Asp Pro Ala Asn Vai
256 260 265 270
Glu Ile Thr Glu Leu Cys Ile Gln His Gly Trp Thr Pro Gly Asn
271 275 280 285
Gly Arg Phe Asp Vai Leu Pro Leu Leu Leu Gln Ala Pro Asp Glu
286 290 295 300
Ala Pro Glu Leu Phe Vai Leu Pro Pro Glu Leu Vai Leu Glu Vai
301 305 310 315
Pro Leu Glu His Pro Thr Leu Glu Trp Phe Ala Ala Leu Gly Leu
316 320 325 330
Arg Trp Tyr Ala Leu Pro Ala Vai Ser Asn Met Leu Leu Glu Ile
331 335 340 345
Gly Gly Leu Glu Phe Ser Ala Ala Pro Phe Ser Gly Trp Tyr Met
346 350 355 360
Ser Thr Glu Ile Gly Thr Arg Asn Leu Cys Asp Pro His Arg Tyr
361 365 370 375
Asn Ile Leu Glu Asp Vai Ala Vai Cys Met Asp Leu Asp Thr Arg
376 380 385 390
Thr Thr Ser Ser Leu Trp Lys Asp Lys Ala Ala Vai Glu Ile Asn
391 395 400 405
Leu Ala Vai Leu His Ser Phe Gln Leu Ala Lys Vai Thr Ile Vai
406 410 415 420
Asp His His Ala Ala Thr Vai Ser Phe Met Lys His Leu Asp Asn
421 425 430 435
Glu Gln Lys Ala Arg Gly Gly Cys Pro Ala Asp Trp Ala Trp Ile
436 440 445 450
Vai Pro Pro Ile Ser GLys er Leu Thr Pro Vai Phe His Gln Glu
451
455
460
465
Met Vai Asn Tyr Ile Leu Ser Pro Ala Phe Arg Tyr Gln Pro Asp
466 470 475 480
Pro Trp Lys GLy Ser Ala Thr Lys Gly Ala Gly Ile Thr Arg Lys
481 485 490 495
Lys Thr Phe Lys Glu Vai Ala Asn Ala Vai Lys Ile Ser Ala Ser
496 500 505 510
Leu Met Gly Thr Leu Met Ala Lys Arg Vai Lys Ala Thr Ile Leu
511 515 510 525
Tyr Ala Ser Glu Thr Gly Arg Ala Gln Ser Tyr Ala Gln Gln Leu
526 530 535 540
Gly Arg Leu Phe Arg Lys Ala Phe Asp Pro Arg Vai Leu Cys Met
541 545 550 555
Asp Glu Tyr Asp Vai Vai Ser Leu Glu His Glu Ala Leu Vai Leu
556 560 565 570
Vai Vai Thr Ser Thr Phe Gly Asn Gly Asp Pro Pro Glu Asn Gly
571 575 580 585
Glu Ser Phe Ala Ala Ala Leu Met Glu Met Ser Gly Pro Tyr Asn
586 590 595 600
Ser Ser Pro Arg Pro Glu Gln His Lys Ser Tyr Lys Ile Arg Phe
601 605 610 615
Asn Ser Vai Ser Cys Ser Asp Pro Leu Vai Ser Ser Trp Arg Arg
616 620 625 630
Lys Arg Lys Glu Ser Ser Asn Thr Asp Ser Ala Gly Ala Leu Gly
631 635 640 645
Thr Leu Arg Phe Cys Vai Phe Gly Leu GLy Ser Arg Ala Tyr Pro
646 650 655 660
His Phe Cys Ala Phe Ala Arg Ala Vai Asp Thr Arg Leu Glu Glu
661 665 670 675
Leu Gly Gly Glu Arg Leu Leu Gln Leu Gly Gln Gly Asp Glu Leu
676 680 685 690
Cys Gly Gln Glu Glu Ala Phe Arg Gly Trp Ala Lys Ala Ala Phe
691 695 700 705
Gln Ala Ser Cys Glu Thr Phe Cys Vai Gly Glu Glu Ala Lys Ala
706 710 715 720
Ala Ala Gln Asp Ile Phe Ser Pro Lys Arg Ser Trp Lys Arg Gln
721 725 730 735
Arg Tyr Arg Leu Ser Thr Gln Ala Glu Gly Leu Gln Leu Leu Pro
736 740 745 750
Gly Leu Ile His Vai His Arg Arg Lys Met Phe Gln Ala Thr Vai
751 755 760 765
Leu Ser Vai Glu Asn Leu Gln Ser Ser Lys Ser Thr Arg Ala Thr
766 770 775 780
Ile Leu Vai Arg Leu Asp Thr Ala Gly Gln Glu Gly Leu Gln Tyr
781 785 790 795
Gln Pro Gly Asp His Ile Gly Ile Cys Pro Pro Asn Arg Pro Gly
796 800 805 810
Leu Vai Glu Ala Leu Leu Ser Arg Vai Glu Asp Pro Pro Pro Pro
811 815 820 825
Thr Glu Ser Vai Ala Vai Glu Gln Leu Glu Lys GLys er Pro Gly
826 830 835 840
Gly Pro Pro Pro Ser Trp Vai Arg Asp Pro Arg Leu Pro Pro Cys
841 845 850 855
Thr Leu Arg Gln Ala Leu Thr Phe Phe Leu Asp Ile Thr Ser Pro
856 860 865 870
Pro Ser Pro Arg Leu Leu Arg Leu Leu Ser Thr Leu Ala Glu Glu
871 875 880 885
Pro Ser Glu Gln Gln Glu Leu Glu Thr Leu Ser Gln Asp Pro Arg
886 890 895 900
Arg Tyr Glu Glu Trp Lys Trp Phe Arg Cys Pro Thr Leu Leu Glu
901 905 910 915
Vai Leu Glu Gln Phe Pro Ser Vai Ala Leu Pro Ala Pro Leu Leu
916 920 925 930
Leu Thr Gln Leu Pro Leu Leu Gln Pro Arg Tyr Tyr Ser Vai Ser
931 935 940 945
Ser Ala Pro Asn Ala His Pro Gly Glu Vai His Leu Thr Vai Ala
946 950 955 960
Vai Leu Ala Tyr Arg Thr Gln Asp Gly Leu Gly Pro Leu His Tyr
961 965 970 975
Gly Vai Cys Ser Thr Trp Leu Ser Gln Leu Lys Thr Gly Asp Pro
976 980 985 990
Vai Pro Cys Phe Ile Arg Gly Ala Pro Ser Phe Arg Leu Pro Pro
991 995 1000 1005
Asp Pro Tyr Vai Pro Cys Ile Leu Vai Gly Pro Gly Thr Gly Ile
1006 1010 1015 1020
Ala Pro Phe Arg Gly Phe Trp Gln Glu Arg Leu His Asp Ile Glu
1021 1025 1030 1035
Ser Lys Gly Leu Gln Pro Ala Pro Met Thr Leu Vai Phe Gly Cys
1036 1040 1045 1050
Arg Cys Ser Gln Leu Asp His Leu Tyr Arg Asp Glu Vai Gln Asp
1051 1055 1060 1065
Ala Gln Glu Arg Gly Vai Phe Gly Arg Vai Leu Thr Ala Phe Ser
1066 1070 1075 1080
Arg Glu Pro Asp Ser Pro Lys Thr Tyr Vai Gln Asp Ile Leu Arg
1081 1085 1090 1095
Thr Glu Leu Ala Ala Glu Vai His Arg Vai Leu Cys Leu Glu Arg
1096 1100 1105 1110
Gly His Met Phe Vai Cys Gly Asp Vai Thr Met Ala Thr Ser Vai
1111 1115 1120 1125
Leu Gln Thr Vai Gln Arg Ile Leu Ala Thr Glu Gly Asp Met Glu
1126 1130 1135 1140
Leu Asp Glu Ala Gly Asp Vai Ile Gly Vai Leu Arg Asp Gln Gln
1141 1145 1150 1155
Arg Tyr His Glu Asp Ile Phe Gly Leu Thr Leu Arg Thr Gln Glu
1156 1160 1165 1170
Vai Thr Ser Arg Ile Arg Thr Gln Ser Phe Ser Leu Gln Glu Arg
1171 1175 1180 1185
His Leu Arg Gly Ala Vai Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro
1186 1190 1195 1200
Asp Thr Pro Gly Pro
1201 1205
Polikloniniai antikūnai prieš endotelinę NO-sintazę gali būti gauti naudojant visą šios sekos žmogaus NO-sintazės molekulę:
SEQIDNO:16
Met Gly Asn Leu Lys Ser Vai Ala Gln Glu Pro Gly Pro Pro Cys
1 5 10 15
Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Gly Leu Cys Gly Lys Gln Gly
16 20 25 30
Pro Ala Thr Pro Ala Pro Glu Pro Ser Arg Ala Pro Ala Ser Leu
31 35 40 45
Leu Pro Pro Ala Pro Glu His Ser Pro Pro Ser Ser Pro Leu Thr
46 50 55 60
Gln Pro Pro Glu Gly Pro Lys Phe Pro Arg Vai Lys Asn Trp Glu
61 65 70 75
Vai GLys er Ile Thr Tyr Asp Thr Leu Ser Ala Gln Ala Gln Gln
76 80 85 90
Asp Gly Pro Cys Thr Pro Arg Arg Cys Leu GLys er Leu Vai Phe
91 95 100 105
Pro Arg Lys Leu Gln Gly Arg Pro Ser Pro Gly Pro Pro Ala Pro
106 110 115 120
Glu Gln Leu Leu Ser Gln Ala Arg Asp Phe Ile Asn Gln Tyr Tyr
121 125 130 135
Ser Ser Ile Lys Arg Ser GLys er Gln Ala His Glu Gln Arg Leu
136 140 145 150
Gln Glu Vai Glu Ala Glu Vai Ala Ala Thr Gly Thr Tyr Gln Leu
151 155 160 165
Arg Glu Ser Glu Leu Vai Phe Gly Ala Lys Gln Ala Trp Arg Asn
166 170 175 180
Ala Pro Arg Cys Vai Gly Arg Ile Gln Trp Gly Lys Leu Gln Vai
181 185 190 195
Phe Asp Ala Arg Asp Cys Arg Ser Ala Gln Glu Met Phe Thr Tyr
196 200 205 210
Ile Cys Asn His Ile Lys Tyr Ala Thr Asn Arg Gly Asn Leu Arg
211 215 220 225
Ser Ala Ile Thr Vai Phe Pro Gln Arg Cys Pro Gly Arg Gly Asp
226 230 235 240
Phe Arg Ile Trp Asn Ser Gln Leu Vai Arg Tyr Ala Gly Tyr Arg
241 245 250 255
Gln Gln Asp GLy Ser Vai Arg Gly Asp Pro Ala Asn Vai Glu Ile
256 260 265 270
Thr Glu Leu Cys Ile Gln His Gly Trp Thr Pro Gly Asn Gly Arg
271 275 280 285
Phe Asp Vai Leu Pro Leu Leu Leu Gln Ala Pro Asp Glu Pro Pro
286 290 295 300
Glu Leu Phe Leu Leu Pro Pro Glu Leu Vai Leu Glu Vai Pro Leu
301 305 310 315
Glu His Pro Thr Leu Glu Trp Phe Ala Ala Leu Gly Leu Arg Trp
316 320 325 330
Tyr Ala Leu Pro Ala Vai Ser Asn Met Leu Leu Glu Ile Gly Gly
331 335 340 345
Leu Glu Phe Pro Ala Ala Pro Phe Ser Gly Trp Tyr Met Ser Thr
346 350 355 360
Glu Ile Gly Thr Arg Asn Leu Cys Asp Pro His Arg Tyr Asn Ile
361 365 370 375
Leu Glu Asp Vai Ala Vai Cys Met Asp Leu Asp Thr Arg Thr Thr
376 380 385 390
Ser Ser Leu Trp Lys Asp Lys Ala Ala Vai Glu Ile Asn Vai Ala
391 395 400 405
Vai Leu His Ser Tyr Gln Leu Ala Lys Vai Thr Ile Vai Asp His
406 410 415 420
His Ala Ala Thr Ala Ser Phe Met Lys His Leu Glu Asn Glu Gln
421 425 430 435
Lys Ala Arg Gly Gly Cys Pro Ala Asp Trp Ala Trp Ile Vai Pro
436 440 445 450
Pro Ile Ser GLys er Leu Thr Pro Vai Phe His Gln Glu Met Vai
451 455 460 465
Asn Tyr Phe Leu Ser Pro Ala Phe Arg Tyr Gln Pro Asp Pro Trp
466 470 475 480
Lys Gly Ser Ala Ala Lys Gly Thr Gly Ile Thr Arg Lys Lys Thr
481 485 490 495
Phe Lys Glu Vai Ala Asn Ala Vai Lys Ile Ser Ala Ser Leu Met
496 500 505 510
Gly Thr Vai Met Ala Lys Arg Vai Lys Ala Thr Ile Leu Tyr Gly
511 515 510 525
Ser Glu Thr Gly Arg Ala Gln Ser Tyr Ala Gln Gln Leu Gly Arg
526 530 535 540
Leu Phe Arg Lys Ala Phe Asp Pro Arg Vai Leu Cys Met Asp Glu
541 545 550 555
Tyr Asp Vai Vai Ser Leu Glu His Glu Thr Leu Vai Leu Vai Vai
556 560 565 570
Thr Ser Thr Phe Gly Asn Gly Asp Pro Pro Glu Asn Gly Glu Ser
571 575 580 585
Phe Ala Ala Ala Leu Met Glu Met Ser Gly Pro Tyr Asn Ser Ser
586 590 595 600
Pro Arg Pro Glu Gln His Lys Ser Tyr Lys Ile Arg Phe Asn Ser
601 605 610 615
Ile Ser Cys Ser Asp Pro Leu Vai Ser Ser Trp Arg Arg Lys Arg
616 620 625 630
Lys Glu Ser Ser Asn Thr Asp Ser Ala Gly Ala Leu Gly Thr Leu
631 635 640 645
Arg Phe Cys Vai Phe Gly Leu GLys er Arg Ala Tyr Pro His Phe
646 650 655 660
Cys Ala Phe Ala Arg Ala Vai Asp Thr Arg Leu Glu Glu Leu Gly
661 665 670 675
Gly Glu Arg Leu Leu Gln Leu Gly Gln Gly Asp Glu Leu Cys Gly
676 680 685 690
Gln Glu Glu Ala Phe Arg Gly Trp Ala Gln Ala Ala Phe Gln Ala
691 695 700 705
Ala Cys Glu Thr Phe Cys Vai Gly Glu Asp Ala Lys Ala Ala Ala
706 710 715 720
Arg Asp Ile Phe Ser Pro Lys Arg Ser Trp Lys Arg Gln Arg Tyr
721 725 730 735
Arg Leu Ser Ala Gln Ala Glu Gly Leu Gln Leu Leu Pro Gly Leu
736 740 745 750
Ile His Vai His Arg Arg Lys Met Phe Gln Ala Thr. Ile Arg Ser
751 755 760 765
Vai Glu Asn Leu Gln Ser Ser Lys Ser Thr Arg Ala Thr Ile Leu
766 770 775 780
Vai Arg Leu Asp Thr Gly Gly Gln Glu Gly Leu Gln Tyr Gln Pro
781 785 790 795
Gly Asp His Ile Gly Vai Cys Pro Pro Asn Arg Pro Gly Leu Vai
796 800 805 810
Glu Ala Leu Leu Ser Arg Vai Glu Asp Pro Pro Ala Pro Thr Glu
811 815 820 825
Pro Vai Ala Vai Glu Gln Leu Glu Lys Gly Ser Pro Gly Gly Pro
826 830 835 840
Pro Pro Gly Trp Vai Arg Asp Pro Arg Leu Pro Pro Cys Thr Leu
841 845 850 855
Arg Gln Ala Leu Thr Phe Phe Leu Asp Ile Thr Ser Pro Pro Ser
856 860 865 870
Pro Gln Leu Leu Arg Leu Leu Ser Thr Leu Ala Glu Glu Pro Arg
871 875 880 885
Glu Gln Gln Glu Leu Glu Ala Leu Ser Gln Asp Pro Arg Arg Tyr
886 890 895 900
Glu Glu Trp Lys Trp Phe Arg Cys Pro Thr Leu Leu Glu Vai Leu
901 905 910 915
Glu Gln Phe Pro Ser Vai Ala Leu Pro Ala Pro Leu Leu Leu Thr
916 920 925 930
Gln Leu Pro Leu Leu Gln Pro Arg Tyr Tyr Ser Vai Ser Ser Ala
931 935 940 945
Pro Ser Thr His Pro Gly Glu Ile His Leu Thr Vai Ala Vai Leu
946 950 955 960
Ala Tyr Arg Thr Gln Asp Gly Leu Gly Pro Leu His Tyr Gly Vai
961 965 970 975
Cys Ser Thr Trp Leu Ser Gln Leu Lys Pro Gly Asp Pro Vai Pro
976 980 985 990
Cys Phe Ile Arg Gly Ala Pro Ser Phe Arg Leu Pro Pro Asp Pro
991 995 1000 1005
Ser Leu Pro Cys Ile Leu Vai Gly Pro Gly Thr Gly Ile Ala Pro
1006 1010 1015 1020
Phe Arg Gly Phe Trp Gln Glu Arg Leu His Asp Ile Glu Ser Lys
1021 1025 1030 1035
GIy Leu Gln Pro Thr Pro Met Thr Leu Vai Phe Gly Cys Arg Cys
1036 1040 1045 1050
Ser Gln Leu Asp His Leu Tyr Arg Asp Glu Vai Gln Asn Ala Gln
1051 1055 1060 1065
Gln Arg Gly Vai Phe Gly Arg Vai Leu Thr Ala Phe Ser Arg Glu
1066 1070 1075 1080
Pro Asp Asn Pro Lys Thr Tyr Vai Gln Asp Ile Leu Arg Thr Glu
1081 1085 1090 1095
Leu Ala Ala Glu Vai His Arg Vai Leu Cys Leu Glu Arg Gly His
1096 1100 1105 1110
Met Phe Vai Cys Gly Asp Vai Thr Met Ala Thr Asn Vai Leu Gln
1111 1115 1120 1125
Thr Vai Gln Arg Ile Leu Ala Thr Glu Gly Asp Met Glu Leu Asp
1126 1130 1135 1140
Glu Ala Gly Asp Vai Ile Gly Vai Leu Arg Asp Gln Gln Arg Tyr
1141 1145 1150 1155
His Glu Asp Ile Phe Gly Leu Thr Leu Arg Thr Gln Glu Vai Thr
1156 1160 1165 1170
Ser Arg Ile Arg Thr Gln Ser Phe Ser Leu Gln Glu Arg Gln Leu
1171 1175 1180 1185
Arg Gly Ala Vai Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Ser Asp Thr
1186 1190 1195 1200
Asn Ser Pro
1201 1203
Šios endotelinės NO-sintazės sekos, manoma, yra ypatingai tinkami antigenai:
SEQIDNO: 17 Pro Trp Ala Phe
1192 1195
SEQIDNO: 18
Gly Ala Vai Pro
1189 1192
SEQIDNO: 19
Arg
1185
His Leu Arg Gly Ala Vai Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 1186 1190 1195 1200
Asp Thr Pro Gly Pro
1201 1205
SEQIDNO: 20
Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 11941195 1200
Asp Thr Pro Gly Pro
1201 1205
SEQIDNO:21
His Leu Arg Gly Ala Vai Pro Trp Ala Phe Asp 1186 1190 11951196
SEQID NO: 22
His Leu Arg Gly Ala Vai Pro Trp Ala Phe Asp Pro Pro Gly Pro 1186 1190 1195 1200
Asp Thr Pro Gly Pro
1201 1205
Kiekvieno derinio komponento aktyvuota-potencijuota forma gali būti pagaminama iš pradinio tirpalo, panaudojant homeopatinį potencijavimą, geriausia naudojant proporcinį koncentracijos mažinimo metodą, darant kiekvieno pirmiau pagaminto tirpalo (pradedant nuo pirminio tirpalo) 1 dalies serijinius praskiedimus 9 dalimis (10-kartinis praskiedimas) ar 99 dalimis (100-kartinis praskiedimas) ar 999 dalimis (1000-kartinis praskiedimas) neutralaus tirpiklio, susietą su išoriniu poveikiu. Geriausia, kai išorinis poveikis yra daugkartinis kiekvieno praskiedimo vertikalus purtymas (dinamizacija). Geriau, kad kiekvienam kitam praskiedimui būtų naudojamos atskiros talpos iki reikalaujamo potencijos lygio ar praskiedimo koeficiento. Šis būdas yra gerai žinomas homeopatijos srityje. Žr., pavyzdžiui, V. Schvvabe Homeopathic medicines, M., 1967, p. 14-29, kuris čia duodamas kaip literatūros šaltinis minėtam tikslui.
Pavyzdžiui, norint pagaminti 12-ą šimtakartinį praskiedimą (pažymėtą CI2), viena pradinio matricinio antikūnų prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą tirpalo, kurio koncentracija 3,0 mg/ml, dalis praskiedžiama 99 dalimis neutralaus vandeninio ar vandeninio-alkoholinio tirpiklio (geriausia, 15% etilo alkoholio) ir purtoma vertikaliai daug kartų (10 ir daugiau), gaunant 1-ą šimtakartinį praskiedimą (pažymėtą C1). 2-as šimtakartinis praskiedimas (C2) gaunamas iš 1-jo šimtakartinio praskiedimo C1. Ši procedūra kartojama 11 kartų, gaunant 12-ą šimtakartinį praskiedimą C12. Taigi, 12-as šimtakartinis praskiedimas C12 atitinka tirpalą gautą atlikus 12-ą serijinių praskiedimų paėmus vieną dalį pradinio matricinio antikūnų prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą tirpalo, kuriame antikūnų koncentracija yra 3,0 mglml, su 99 dalimis neutralaus tirpiklio skirtingose talpose, kuris yra ekvivalentiškas 100-kartiniam homeopatiniam praskiedimui C12. Panašios procedūros naudojant atitinkamą praskiedimo koeficientą yra atliekamos norimiems C30 ir C200 praskiedimams gauti.
Tarpiniai praskiedimai gali būti naudojami aktyvumui pagal norimą biologinį modelį tyrimams. Tinkamiausios aktyvuotos-potencijuotos formos abiems antikūnams, įeinantiems į šio išradimo derinį, yra praskiedimų C12, C30 ir C200 mišinys. Naudojant veikliosios medžiagos kaip biologiškai aktyvaus skysto komponento įvairių homeopatinių praskiedimų (pirmiausia 100-kartinių) mišinį, kiekvienas kompozicijos (pavyzdžiui, C12, C30, C200 ) komponentas pagaminamas atskirai pagal anksčiau aprašytą metodiką, kol gaunamas priešpaskutinis praskiedimas (pvz., iki C11, C29 ir C199, atitinkamai) ir tada viena kiekvieno komponento dalis įdedama į vieną talpą pagal mišinio kompoziciją ir sumaišoma su reikiamu kiekiu tirpiklio (pavyzdžiui, su 97 dalimis 100-kartiniam praskiedimui).
Galima naudoti veikliąją medžiagą kaip įvairių homeopatinių praskiedimų mišinį, pvz. dešimtkartinių ir/ar šimtakartinių (D 20, C30, C100 ar C12, C30, C50 ir t.t.), kurių veiksmingumas eksperimentiškai patvirtintas tiriant praskiedimą pagal tinkamą biologinį modelį, pavyzdžiui, pagal čia pateikiamų pavyzdžių modelius.
Potencijavimo ir koncentracijos mažėjimo eigoje purtymas vertikalia kryptimi gali būti keičiamas išoriniu poveikiu ultragarsu, elektromagnetiniu lauku ar bet kuria panašia homeopatijos srityje priimta išorinio poveikio priemone.
Geriau, farmacinė kompozicija pagal išradimą gali būti skysta ar kieta vienetinė dozuota forma. Farmacinės kompozicijos priimtina skystoji forma yra geriau santykiu 1:1 aktyvuotos potencijuotos antikūnų prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą formos ir aktyvuotos potencijuotos antikūnų prieš endotelinę NO-sintazę formos mišinys. Pageidautinas skystas nešiklis yra vanduo ar vandens-etilo alkoholio mišinys.
Geriau, farmacinės kompozicijos kietoji vienetinė dozuota forma pagal išradimą gali būti gaunama naudojant impregnavimui kietą farmaciniu požiūriu priimtiną nešiklį maišant su aktyvuotos-potencijuotos formos vandens ar vandensalkoholio tirpalų komponento mišiniu, pirmiausia 1:1 santykiu, ir naudojama skystoje dozuotoje formoje. Iš kitos pusės, nešiklis gali būti impregnuotas nuosekliai kiekvienu reikiamu atskiedimu. Abi impregnavimo tvarkos yra priimtinos.
Pageidautina kietos dozuotos formos farmacines kompozicijas gaminti iš farmaciniu požiūriu priimtino nešiklio granulių, kurios prieš tai buvo prisotintos aktyvuotos-potencijuotos antikūnų prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą formos ir aktyvuotos-potencijuotos antikūnų prieš endotelinę NOsintazę formos vandeniniais arba vandeniniais-alkoholiniais praskiedimais. Kieta dozuota forma gali būti bet kokios farmacijoje žinomos formos, įskaitant tabletę, kapsulę, piliulę ir kitas. Neaktyviomis farmacinėmis sudedamosiomis dalimis galima naudoti gliukozę, sacharozę, maltozę, amilumą, izomaltozę, izomaltą ir kitus mono-, oligo- ir polisacharidus, naudojamus vaistų gamyboje, o taip pat ir ankščiau minėtų neaktyvių farmacinių sudedamųjų dalių su kitomis farmaciniu požiūriu priimtinomis pagalbinėmis medžiagomis, pavyzdžiui, izomaltu, krospovidonu, natrio ciklamatu, natrio sacharinu, bevandene citrinų rūgštimi ir t.t., įskaitant lubrikantus, disintegrantus, rišiklius ir nuspalvinančius agentus. Tinkamiausi nešikliai yra laktozė ir izomaltas. į farmacinę dozuotą formą taip pat gali įeiti standartinės farmacinės pagalbinės medžiagos, pavyzdžiui, mikrokristalinė celiuliozė ir magnio stearatas.
Norint pagaminti kietą peroralinę formą, 100-300 ųm dydžio laktozės granulės impregnuojamos antikūnų prieš histaminą aktyvuotos-potencijuotos formos, antikūnų prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą aktyvuotos-potencijuotos formos ir antikūnų prieš endotelinę NO-sintazę aktyvuotos potencijuotos formos vandens ar vandens-alkoholio tirpalais santykiu 1 kg antikūno tirpalo nuo 5 iki 10 kg laktozės (nuo 1:5 iki 1:10). Impregnavimui gauti, laktozės granulės laikomos iki jsotinimo suskystintame verdančiame sluoksnyje verdančio sluoksnio įrenginyje (pavyzdžiui, Huttlin Pilotlab by Huttlin GmbH), po to džiovinamos pašildyto oro srove mažesnėje nei 40°C temperatūroje. Nustatytas išdžiovintų granulių kiekis (nuo 10 iki 34 masės dalių), įsotintų antikūnų aktyvuotapotencijuota forma, patalpinamas į maišytuvą ir sumaišoma su nuo 25 iki 45 masės dalių neprisotintos grynos laktozės (naudojama kainos sumažinimui ir bei technologinio proceso supaprastinimui ir pagreitinimui ne sumažinant gydymo veiksmingumo) kartu su nuo 0,1 iki 1 masės dalies magnio stearato ir nuo 3 iki 10 masės dalių mikrokrlstalinės celiuliozės. Gauta tablečių masė vienodai išmaišoma ir daromos tabletės tiesioginio sauso presavimo būdu (pvz. Korsch -XL 400 tablečių presu) suformuojant nuo 150 iki 500 mg apvalias tabletes, geriausia 300 mg. Pagaminus tabletes, gaunamos 300 mg piliulės, kurios įsotintos vandeniniu alkoholiniu tirpalu (3,0 - 6,0 mg/piliulei) derinio, sudaryto iš antikūnų prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą aktyvuotos-potencijuotos formos ir antikūnų prieš endotelinę NO-sintazę aktyvuotos-potencijuotos formos. Kiekvienas komponentas, naudotas impregnuoti nešiklį, yra 100-kartinių homeopatinių praskiedimų, geriausia C12, C30 ir C50 mišinio ar 100-kartinių homeopatinių praskiedimų C12, C30 ir C200 mišinio formos.
Nors išradimas ir nėra apribotas kokios nors konkrečios teorijos, manoma, kad čia aprašytos aktyvuotos-potencijuotos antikūnų formos neturi tokio šio antikūno molekulinės formos kiekio, kad jo pakaktų biologinim aktyvumui, kurį būtų galima priskirti tokiai formai. Šio išradimo vaistinio derinio biologinis aktyvumas plačiai parodytas pridedamais pavyzdžiais.
Farmacinė kompozicija pagal šį išradimą gali būti panaudota pacientų, sergančių bet kurio tipo diabetu, gydymui.
Minėtoji farmacinė kompozicija gali būti naudojama cukrinio diabeto gydymui kaip hiperglikemijos monoterapija ir kompleksiniame gydyme kaip priedas insulino pakaitiniam gydyme; ir/ar su peroraliniais hipoglikeminiais agentais, tokiais kaip biguanidai (metforminas); sulfonilkarbamidai (glibenklamidas, glipizidas, gliklazidas, glikvidonas, glimepiridas): tiazolidindionai (roziglitazonas); α-gliukozidazės slopintojai (akarbozė) ir t.t., taip pat kaip priedas palydinčiajam gydymui cukrinio diabeto, kad apsaugotų nuo diabeto komplikacijų.
Kaip parodyta pridėtuose pavyzdžiuose, kompozicijos pagal išradimą vartojimas tokiems pacientams pagerina gliukozės lygį kraujyje.
PAVYZDŽIAI pavyzdys
Abiejuose eksperimentiniuose tyrimuose tiriami ultra mažų dozių antikūnų prieš insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą, išgrynintų ant antigeno remiantis giminingumu, gautų pradinio matricinio tirpalo 10012, 1003°, 1OO200 kartų superpraskiedimu (ULD anti-IR), ultra mažų dozių antikūnų prieš endotelinę NOsintazę, išgrynintų ant antigeno remiantis giminingumu, gautų pradinio matricinio tirpalo 10012, 100, 1OO200 kartų superpraskiedimu (ULD anti-ULD anti-eNOS), taip pat ir ultra mažų dozių antikūnų prieš insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą ir ultra mažų dozių antikūnų prieš endotelinę NO-sintazę (ULD anti-IR + ULD anti-eNOS) poveikiai.
Pagal pasaulinės sveikatos organizacijos (WH0) kriterijus cukrinis diabetas (I ir II tipai) charakterizuojamas gliukozės kiekio kraujyje padidėjimu (hiperglikemija) ir gliukozės tolerancijos sutrikimu. Pastarasis gali būti sukeltas nenormalia insulino sekrecija ir/ar sumažėjusiu periferinių audinių jautrumu insulinui. Gliukozės tolerancijos testas, pagrįstas kūno audinių gebėjimo sunaudoti gliukozę dinaminiu įvertinimu, yra jautrus būdas įvertinti kūno audinių gliukozės tolerancijos sutrikimą.
tyrimas
Šiame tyrime buvo panaudota 150 VVistar žiurkių patinėlių (svoris tyrimo pradžioje buvo 250-300g, 3,5-4 mėnesių amžiaus). 10 žiurkių buvo sveikos. Likusioms intraveniniu būdu buvo suleista 50 mg/kg streptozotocino dozė (eksperimentinis cukrinio diabeto modelis). Praėjus 72 valandoms po streptozotocino injekcijos, buvo atrinktos žiurkės, kurių gliukozės kiekis plazmoje ne mažesnis nei 12 mmol/l, padalintos j 7 grupes (po 20 žiurkių kiekvienoje grupėje), kurioms 21-os dienos laikotarpiu buvo duodamas distiliuotas vanduo (5 ml/kg/per dieną, vieną kartą per dieną, į skrandį), insulinas® (8 vienetai/kg/per dieną, suleidžiant po oda), Rosiglitazonas® (8 mg/kg/per dieną, du kartus per dieną, j skrandį), ULD anti-IR (2,5 mg/kg/per dieną 5 ml/kg/per dieną tūryje, vieną kartą per dieną, j skrandį), ULD antiIR + ULD anti-eNOS (5 ml/kg/per dieną, vieną kartą per dieną, į skrandį) ir taip pat Rosiglitazonas® ir insulinas® kartu, arba ULD anti-IR + ULD anti-eNOS ir insulinas® pagal režimus, atitinkančius kiekvieną preparatą (kaip aprašyta anksčiau). Sveikos žiurkės gavo tą patį distiliuoto vandens tūrį. 7-tą, 14-tą ir 21-ą preparato įvedimo dienomis žiurkėms buvo matuojamas gliukozės kiekis kraujo plazmoje neėdus fermentiniu metodu (gliukozės oksidazės metodu) naudojant gliukozės FKD rinkinius (Rusija).
Peroralinis gliukozės tolerancijos testas (OGTT) buvo atliekamas 14-tą tyrimo dieną (14-tą preparato gavimo dieną) standartiniu metodu (Du Vigneaud and Karr, 1925). Žiurkėms 18 valandų buvo neduodama vandens. Šešiasdešimt minučių prieš tyrimą joms paskutini kartą buvo duota tiriamosios medžiagos. Sveikos žiurkės gavo tą patį distiliuoto vandens tūrį. Gliukozė buvo įvedama peroraliniu būdu 50 % (pagal masę) vandeninio tirpalo pavidalu (1 g/kg žiurkės svorio). Gliukozės kiekis serume kraujo mėginyje iš uodegos venos buvo matuotas naudojant „Gliukozės FKD“ rinkinį (000 „Pharmaceutical and clinical diagnostics, Rusija, www.fkd.ru) po O, 30, 60, 90, 120 min. Buvo skaičiuojami plotų po gliukozės koncentracijos kraujyje priklausomybės nuo laiko kreive vidurkiai (AUC).
Streptozotocino injekcijos žymiai padidino gliukozės kieki žiurkių kraujo plazmoje lyginant su sveikais gyvūnais (18 mmol/l lyginant su 3,5 mmol/l, p <0,05). ULD anti-IR grupėje 7-ą, 14-ą ir 21-ą preparato įvedimo dienomis gliukozės kiekis vidutiniškai 22-28 % buvo mažesnis nei kontrolinėje grupėje, tačiau skirtumai nepasiekė statistiškai patikimo lygio. ULD anti-IR ir anti-eNOS derinys buvo veiksmingesnis; gliukozės kiekio sumažėjimas 14-tą ir 21-ą eksperimento dieną buvo atitinkamai 47% ir 42% (p <0,05 lyginant su kontrole). Etaloninis preparatas (Rosiglitazonas) taip pat sumažino gliukozės kieki 14-tą ir 21-ą eksperimento dieną; be to poveikis pasiekė statistinį reikšmingumą tik 14-tą eksperimento dieną (36%, p<0,05 lyginant su kontrole).
Insulinas, suleistas imant ‘Λ veiksmingos dozės (parinkta preliminariniame tyrime) efektyviausiai mažino gliukozės kiekį per visus stebėjimo laikotarpius (iki sveikųjų žiurkių kontrolės lygio) (1. Fig.). Reikia atsižvelgti, kad tyrime buvo naudojamas trumpo veikimo insulinas, o gliukozės kiekis plazmoje buvo matuojamas praėjus 1 valandai po injekcijos, kas taip pat turėjo įtakos 12 insulino dozės poveikiui į gliukozės kiekį plazmoje. Dėl to jo fone nebuvo galima gerai nustatyti, koks yra insulino ir rosiglitazono arba insulino ir ULD anti-IR + anti-eNOS bendro vartojimo poveikis.
Gliukozės tolerancijos sutrikdymas (gliukozės, kurią sunaudoja kūnas, sumažėjimas) yra vienas iš svarbiausių cukrinio diabeto diagnostinių ir gydymo rodiklių. Sveikųjų gyvūnų atveju peroraliniame gliukozės tolerancijos teste (14-tą preparatų leidimo dieną) kompleksinis preparatas ULD anti-IR + ULD anti-eNOS ir insulinas veiksmingiausiai padidino gliukozės toleranciją, kai buvo įvedamas vienas. Rosiglitazonas taip pat sumažino plotą po gliukozės koncentracijos kraujyje priklausomybės nuo laiko kreive (padidinta gliukozės tolerancija), tačiau jo veiksmingumas nebuvo statistiškai reikšmingas, lyginant su kontroline grupe (2. Fig.).
tyrimas
Šiame tyrime buvo panaudoti 36 Goto-Kakizaki žiurkių patinėliai (svoris tyrimo pradžioje buvo 250-280g, 10-12 savaičių amžiaus). Šios linijos žiurkės pasižymi nuo insulino nepriklausomo cukrinio diabeto savaiminiu atsiradimu. Gyvūnai buvo padalinti į 3 grupes (po 12 gyvūnų kiekvienoje grupėje) ir 28 dienas gavo arba distiliuotą vandenį (5 mllkg, vieną kartą per dieną, į skrandį) arba ULD anti-IR (2,5 mglkg, vieną kartą per dieną, į skrandį) arba ULD anti-IR + ULD anti-eNOS (5 mglkg, vieną kartą per dieną į skrandį), Gliukozės kiekis kraujo plazmoje buvo matuotas gliukozės analizatoriumi (Beckman, Fullerton, Kalifornija, JAV) prieš pradedant preparatų įvedimą ir 4-ą, 8-ą, 12-ą, 16-ą, 20-ą, 24-ą, 28-tą preparato įvedimo dienomis. 28-tą dieną buvo atliktas gliukozės tolerancijos tyrimas (gliukozė, peroraliniu būdu, 1 g/kg).
ULD anti-IR injekcijos lėmė žymų (p<O,05) gliukozės kiekio žiurkių kraujo plazmoje sumažėjimą, tačiau ULD anti-IR + ULD anti-eNOS komplekso panaudojimas buvo veiksmingesnis (p<O,OOI lyginant su kontrole) (3. Fig.).
Rezultatai buvo patvirtinti duomenims, gautais atliekant gliukozės tolerancijos testą, kuris buvo vykdomas 28-tą preparatų įvedimo dieną (4. Fig.). ULD anti-IR injekcijos padidino gliukozės toleranciją (statistiškai nereikšmingą sumažėjimą 44% AUC lyginant su kontrole). Tuo pačiu metu šio parametro (AUC) sumažėjimas, kurį sukėlė ULD anti-IR + ULD anti-eNOS komplekso suleidimas, buvo 62 % ir jis buvo statistiškai reikšmingas, lyginant su kontrole (p<0,05).
pavyzdys
Klinikiniai tyrimai derinio, sudaryto iš antikūnų prieš insulino receptoriaus βsubvieneto C-galinį fragmentą ultra mažų dozių (ULD anti-IR) ir antikūnų prieš endotelinę NO-sintazę ultra mažų dozių (ULD anti-eNOS), kiekviena jų homeopatinių atskiedimų C12, C30 ir C200, impregnuotų izomalte, vandens-alkoholio mišinio formoje, buvo atliekami su žmonėmis.
Atviro žymėjimo nepalyginamieji ULD anti-IR + ULD anti-eNOS veiksmingumo ir saugumo tyrimai pacientams, sergantiems I tipo cukriniu diabetu (DM), apėmė pacientus su Ί tipo DM nuo lengvo iki vidutinio sunkumo be rimtų makro- ir mikrovaskulinės patologijos diagnozėmis. Po to kai buvo gautas pacientų savanoriškas informuotas sutikimas dalyvauti klinikiniuose tyrimuose, buvo atliktas pirminis tyrimas, kurio tikslas buvo nustatyti, ar pacientas atitinka įtraukimo/atmetimo kriterijus. Prieš atliekant tyrimus, buvo duotas dviejų savaičių „išplovimo“' laikotarpis, kurio metu buvo atliktas pacientų sveikatos patikrinimas (nusiskundimai, glikemija nevalgius, glikuotas hemoglobinas, paros glikemijos profilis ir lipoproteinograma, taip pat ir gydymo veiksmingumas ir saugumas buvo vertinami). 12-os savaičių tyrime pagrindiniai galutiniai taškai buvo matuojami per „išplovimo“ savaites, po to po 6 ir 12 savaičių gydymo. 4 pacientams „išplovimo“' laikotarpiu ir tyrimų pabaigoje buvo atliekamas pastovus glikemijos lygio stebėjimas CGMS sistema. Nepertraukiama gliukozės matavimo sistema (CGMS) leidžia kontroliuoti gliukozės kiekį 3 dienų laikotarpyje. Tyrimų rezultatai parodo, kaip keičiasi gliukozės kiekis per 3 dienas, priklausomai nuo gydymo insulinu ir gyvenimo būdo. Šie duomenys padeda nustatyti didelio ar mažo gliukozės kiekio laikotarpius priklausomai nuo dietos, medikamentų gavimo ar fizinio krūvio. Sistema grafinėje formoje rodo minimalų gliukozės kiekį 2,2 mmol/l, maksimalias reikšmes iki 22,2 mmol/l, ir taip pat paros gliukozės kiekio kraujyje vidurkį.
Pacientai, sergantys I tipo DM, vidutinio sunkumo, nepakankamumo stadijoje, gavo standartinį gydymą insulinu prieš tyrimą ir tyrimo laikotarpiu:
1. Ilgo veikimo insulinai (Protaphanas®, Lantusas®) vidutinėmis dozėmis nuo 12 iki 26 vienetai/per dieną.
2. Trumpo veikimo insulinai (Apidra®, Novorapidas®, Aktropidas® ) vidutinėmis dozėmis:
ryte 8-10 vienetai I per dieną per pietus 8-12 vienetai / per dieną vakare 8-13 vienetai / per dieną.
Patvirtinus paciento galimybę dalyvauti, pacientas yra įjungiamas j tyrimus ir papildomai prie standartinio I tipo DM gydymo gavo ULD anti-IR + ULD anti-eNOS preparatus; vartojimo režimas priklausė nuo I tipo DM sunkumo ir kompensacijos laipsnio. Pacientai, įjungti j tyrimus, buvo gydomi ULD anti-IR + ULD anti-eNOS preparatais skirtingomis dozėmis:
1. Keturi pacientai - po 1 tabletę 4 kartus dienoje 8:00 ryte, 12:00 po pietų, 6:00 vakare, 10:00 vakare.
2. Du pacientai - po 1 tabletę 2 kartus dienoje 8:00 ryte, 6:00 vakare.
3-ą ir 8-ą savaitę buvo kontroliuojamas taip pat paros glikemijos profilis (aštuonių taškų matavimas) ir su pacientais kontaktuojama telefonu („vizitai“ telefonu). Klinikiniai patikrinimai buvo atliekami kiekvieną savaitę. Iš viso pacientai buvo stebimi 14 savaičių.
Šeši pacientai buvo įjungti j tyrimus, penki jų užbaigė pilnai pagal tyrimo protokolą. Glikemijos įvertinimas buvo atliekamas aštuonių taškų paros gliukozės profiliu įjungimo etape ir po 3, 6 ir 12 gydymo savaičių. Glikuoto hemoglobino kiekis buvo nustatytas įjungimo etape ir po 12 savaičių gydymo.
Visi pacientai, sergantys I tipo DM, įjungti į tyrimus, pastebėjo, kad po 6 savaičių gydymo tiriamais vaistais paros glikemiją turėjo tendenciją mažėti. Pagal aštuonių taškų paros gliukozės profilį buvo užregistruotas vidutinis 20% glikemijos sumažėjimas pacientams, sergantiems I tipo DM. Po 12 savaičių gydymo glikuoto hemoglobino buvo vidutiniškai 10-15% mažiau lyginant su įjungimo etapo reikšme.
Pagal nepertraukiamo gliukozės matavimo sistemos (CGMS) rezultatus 3-jų mėnesių gydymas ULD anti-IR + ULD anti-eNOS visiems pacientams sumažino vidutinę paros glikemiją ir glikemijos minimumo ir maksimumo svyravimus lyginant su įjungimo etapo duomenimis 15-20%. Pacientui No. 103, sergančiam I tipo DM, nepakankamumo stadijoje, buvo nelauktai stebimas žymus paros glikemijos sumažėjimas 48% (1 savaitė - 8,0 mmol/L, 12 savaičių - 4,8 mmol/L), kas pareikalavo insulino terapijos korekcijos (trumpo veikimo insulino paros dozės sumažinimas iki 8 vienetai/per dieną). Vidutinio gliukozės kiekio kraujyje ir glikuoto hemoglobino kitimai parodyti 5 Fig.
Tyrimų eigoje nebuvo užregistruota jokių šalutinių poreikių poveikių, įskaitant rimtus, kas rodo preparatų saugumą.
pavyzdys
Klinikiniai tyrimai derinio, sudaryto iš antikūnų prieš insulino receptoriaus βsubvieneto C-galinį fragmentą ultra mažų dozių (ULD anti-IR) ir antikūnų prieš endotelinę NO-sintazę ultra mažų dozių (ULD anti-eNOS), kiekviena jų homeopatinių atskiedimų C12, C30 ir C200, impregnuotų izomalte, vandens-alkoholio mišinio formoje, buvo atliekami su žmonėmis.
Atviro žymėjimo nepalyginamieji ULD anti-IR + ULD anti-eNOS veiksmingumo ir saugumo tyrimai pacientams, sergantiems 2 tipo cukriniu diabetu (DM), apėmė pacientus su 2 tipo DM nuo lengvo iki vidutinio sunkumo be rimtų makro- ir mikrovaskulinių patologijų diagnozėmis, kurie gavo vidutinę metformino terapinę dozę. Po to kai buvo gautas pacientų savanoriškas informuotas sutikimas dalyvauti klinikiniuose tyrimuose, buvo atliktas pirminis tyrimas, turintis tikslą nustatyti, ar pacientas atitinka įtraukimo/atmetimo kriterijus. Patvirtinus galimybę dalyvauti tyrimuose, pacientas gavo 1 tabletę Subbetta 4 kartus per dieną papildomai šalia standartinio 2 tipo DM gydymo. Prieš atliekant tyrimus buvo duotas dviejų savaičių „išplovimo“ laikotarpis, kurio metu buvo atliktas pacientų sveikatos patikrinimas (nusiskundimai, glikemiją nevalgius, glikuotas hemoglobinas, paros glikemijos profilis ir lipoproteinograma, atsparumo insulinui indekso rodikliai (HOMA), taip pat ir gydymo veiksmingumas ir saugumas buvo vertinamas). 12-os savaičių tyrime pagrindiniai galutiniai taškai buvo išmatuoti per „išplovimo“' savaites, po to 6-ą ir 12-ą gydymo savaites. 4 pacientams „išplovimo“ laikotarpiu ir tyrimų pabaigoje
Al buvo atliekamas nepertraukiamas glikemijos lygio stebėjimas CGMS sistema. 3-ią ir 8-ą savaitę aštuonių taškų glikemijos profilis papildomai buvo kontroliuojamas ir atliekami telefoniniai „vizitai“. Klinikinė būklė stebima kiekvieną savaitę. Iš viso pacientas buvo stebimas 14 savaičių.
Vienuolika pacientų, sergančių 2 tipo DM nepakankamumo stadijoje, buvo įjungti į tyrimą. Vienas pacientas savanoriškai pasitraukė iš tyrimo. Likę pacientai tęsė gydymą. Pagal aštuonių taškų paros profilio duomenis pacientams, sergantiems 2 tipo DM, 6-ą savaitę buvo registruojamas vidutinis glikemijos sumažėjimas 20%. 12-ą savaitę buvo nustatytas vidutinis glikuoto hemoglobino sumažėjimas 15-19% lyginant su įjungimo etapo reikšme.
savaičių laikotarpiu VISŲ pacientų kraujo testo parametrai (eritrocitai, hemoglobinas, leukocitai, trombocitai, leukocitų formulė, ESR), lipoproteinograma, EKG, hepatinės funkcijos tyrimas (ALT, AST, bilirubinas ir jo frakcijos) pasiliko normos ribose. Atsparumas insulinui, nustatytas HOMA-IR testu, sumažėja vidutiniškai 17-19% lyginant su įjungimo etapo reikšme.
savaičių trukmės tyrime nebuvo užregistruota jokių pašalinių poveikių, įskaitant rimtus, kas rodo preparatų saugumą. Jokių nenormalumų kepenų veikloje taip pat nebuvo pastebėta.
Vidutinio gliukozės kiekio kraujyje ir glikuoto hemoglobino kiekio kitimai yra parodyti 6 Fig.
pavyzdys
Pacientas X. (vyras, 74 metų amžiaus), diagnozuotas II tipo diabetas, gaudavo 5 mg dozę maninilo (Glibenclamide, Berlin Chemie) 2 kartus per dieną. Nepaisant gaunamo gydymo prieš trejus metus ant kulniakaulio kaulo pasirodė gili nekrotinė pėdos opa. Pacientas buvo du kartus hospitalizuotas chirurginėje palatoje; tokiu būdu, gydymas nedavė žymesnio pagerėjimo. Apibrėžties farmacinė kompozicija, 250 mg tabletė, apimanti aktyvuotą-potencijuotą antikūnų prieš insulino receptoriaus β-subvieneto C-galą (Ab IR) formą ir endotelinę NO-sintazę (Ab NOS) formą (ultra mažos dozės), impregnuotą ant izomalto kaip vandens-etanolio homeopatinių praskiedimų C12, C30, C200 (Ab Rl + Ab NOS) mišinį buvo duodama papildomai šalia gydymo maninilu. Po vieno mėnesio gydymo maninilo® dozė sumažinama iki 5 mg per dieną (viena tabletė prieš miegą). Gliukozės kiekis kraujyje sumažėjo iki normalaus dydžio (nuo 8-10 mmol/l iki 5-6 mmol/l). Šis gydymas sustabdė pėdos opos vystymąsi. Opa apsivalė nuo nekrotinės masės ir pasidengė odele. Apžiūrėjus pėdą matome, kad opa dingo, ant kulniakaulio kaulo stebima pleiskanotos odos apvali balta sritis (3,5 cm skersmens).

Claims (16)

  1. IŠRADIMO APIBRĖŽTIS
    1. Farmacinė kompozicija, apimanti a) aktyvuotą-potencijuotą antikūno prieš žmogaus insulino receptorių formą ir b) aktyvuotą-potencijuotą antikūno prieš endotelinę NO-sintazę formą.
  2. 2. Farmacinė kompozicija, apimanti a) aktyvuotą-potencijuotą antikūno prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-terminalinj fragmentą formą ir b) aktyvuotą-potencijuotą antikūno prieš endotelinę NO-sintazę formą.
  3. 3. Farmacinė kompozicija pagal 1 punktą, apimanti a) aktyvuotą-potencijuotą antikūno prieš žmogaus insulino receptorių formą ir b) aktyvuotą-potencijuotą antikūno prieš endotelinę NO-sintazę formą, besiskirianti tuo, kad insulino receptoriaus molekulė yra sudaryta iš vieno α-subvieneto ir vieno β-subvieneto.
  4. 4. Farmacinė kompozicija pagal 1 punktą, besiskirianti tuo, kad apima farmaciniu požiūriu priimtiną kietą nešiklį ir a) aktyvuotą-potencijuotą formą antikūno prieš žmogaus insulino receptoriaus β-subvieneto C-galinį fragmentą C12, C30 ir C200 homeopatinių praskiedimų, impregnuotų j minėtąjį kietą nešiklį, mišinio formoje ir b) aktyvuotą-potencijuotą formą antikūno prieš endotelinę NO-sintazę C12, C30 ir C200 homeopatinių praskiedimų, impregnuotų į minėtąjį kietą nešiklį, mišinio formoje.
  5. 5. Farmacinė kompozicija pagal vieną iš 1-4 punktų, besiskirianti tuo, kad aktyvuota-potencijuota kiekvieno antikūno forma pagaminta, panaudojant vieną po kito einančius 100-kartinius praskiedimus, susietus su kiekvieno praskiedimo purtymu.
  6. 6. Farmacinė kompozicija pagal 1 punktą, besiskirianti tuo, kad minėtasis žmogaus insulino receptorius sudarytas iš sekos, pateiktos SEQ ID NO: 1.
  7. 7. Farmacinė kompozicija pagal 1 punktą, besiskirianti tuo, kad minėtoji endotelinė NO-sintazė sudaryta iš sekos, pateiktos SEQ ID NO:2.
  8. 8. Farmacinė kompozicija pagal vieną iš 1-7 punktų, skirta panaudoti žmonėms I tipo diabeto gydymui ir prevencijai.
  9. 9. Farmacinė kompozicija pagal vieną iš 1-7 punktų, skirta panaudoti žmonėms II tipo diabeto gydymui ir prevencijai.
  10. 10. Farmacinė kompozicija pagal vieną iš 1-7 punktų, skirta panaudoti žinduoliams sumažinti gliukozės kiekį kraujyje.
  11. 11. Farmacinė kompozicija pagal vieną iš 1-7 punktų, skirta panaudoti žinduoliams gydyti atsparumą insulinui.
  12. 12. Farmacinė kompozicija pagal vieną iš 8-11 punktų, besiskirianti tuo, kad minėtos farmacinės kompozicijos skiriama pacientui viena arba dvi dozuotos vienetinės formos.
  13. 13. Farmacinė kompozicija pagal 12 punktą, besiskirianti tuo, kad minėtos dozuotos formos (dozuotų formų) skiriama nuo vieno iki keturių kartų per dieną.
  14. 14. Farmacinė kompozicija pagal 13 punktą, besiskirianti tuo, kad minėtos dozuotos formos (dozuotų formų) skiriama tris kartus per dieną.
  15. 15. Farmacinė kompozicija pagal 8 punktą, besiskirianti tuo, kad minėtoji farmacinė kompozicija dar turi insulino ar kitų papildomų farmacinių agentų, tinkamų I tipo diabeto gydymui.
  16. 16. Farmacinė kompozicija pagal 9 punktą, besiskirianti tuo, kad minėtoji farmacinė kompozicija dar turi papildomų farmacinių agentų, tinkamų II tipo diabeto gydymui.
    Ghunezės kiekis kraujo plazmoje, mtnol/l
    2C
    A _________________——„..............-.....—........................-.........,--------------------.--------------,
    0 7 Preparatų injekcijų dienos 14 $v«iki Diet, vanduo Ri Ab i Rl Ab -NOSAb ..............Rl Ab + NOS Ab + insulinas Insulinas
    skinumai yra statlstlSkal reikšmingi kontrolės atžvilgiu (distiliuotas vanduo), p < 0.05
LT2013018A 2010-07-21 2013-02-19 Farmacinė kompozicija, skirta gydyti diabetą ir metabolinius sutrikimus LT5980B (lt)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2010130348/15A RU2531048C2 (ru) 2010-07-21 2010-07-21 Лекарственное средство для уменьшения резистентности к инсулину и лечения сахарного диабета и способ повышения эффективности лечения сахарного диабета инсулином и/или гипогликемическими препаратами
RU2011127051/15A RU2509572C2 (ru) 2011-07-01 2011-07-01 Лекарственное средство для уменьшения резистентности к инсулину и для лечения сахарного диабета, способ уменьшения резистентности к инсулину, способ лечения сахарного диабета и способ лечения сахарного диабета инсулином и/или гипогликемическими препаратами

Publications (2)

Publication Number Publication Date
LT2013018A LT2013018A (lt) 2013-10-25
LT5980B true LT5980B (lt) 2013-12-27

Family

ID=44899155

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
LT2013018A LT5980B (lt) 2010-07-21 2013-02-19 Farmacinė kompozicija, skirta gydyti diabetą ir metabolinius sutrikimus

Country Status (29)

Country Link
US (1) US8617555B2 (lt)
EP (2) EP2595658A2 (lt)
JP (2) JP2013533268A (lt)
KR (2) KR20180127515A (lt)
CN (1) CN103118707A (lt)
AR (1) AR082312A1 (lt)
AU (1) AU2011281240B2 (lt)
BR (1) BR112013001299A2 (lt)
CA (1) CA2805961A1 (lt)
CL (1) CL2013000200A1 (lt)
CZ (1) CZ2013124A3 (lt)
DE (1) DE112011102396T5 (lt)
DK (1) DK201370089A (lt)
EA (1) EA029847B1 (lt)
EE (1) EE05761B1 (lt)
ES (1) ES2445846R1 (lt)
FI (1) FI20135152L (lt)
FR (1) FR2962913A1 (lt)
GB (2) GB2552405B (lt)
IT (1) ITTO20110627A1 (lt)
LT (1) LT5980B (lt)
MX (1) MX2013000804A (lt)
MY (1) MY160979A (lt)
NO (1) NO20130265A1 (lt)
NZ (1) NZ606964A (lt)
PE (1) PE20130815A1 (lt)
SE (1) SE1350212A1 (lt)
SG (1) SG187578A1 (lt)
WO (1) WO2012010966A2 (lt)

Families Citing this family (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2181297C2 (ru) * 2000-06-20 2002-04-20 Эпштейн Олег Ильич Способ лечения патологического синдрома и лекарственное средство
UA76638C2 (en) 2002-08-02 2006-08-15 Oleh Illich Epshtein Homeopathic medication based on anti-interferon antibodies and method for treating a pathological syndrome associated with interferon
RU2309732C1 (ru) * 2006-03-13 2007-11-10 Олег Ильич Эпштейн Спрессованная твердая оральная форма лекарственного препарата и способ получения твердой оральной формы лекарственного препарата
EP2036574A4 (en) * 2006-06-06 2009-07-01 Oleg Iliich Epshtein MEDICAL AGENT FOR THE TREATMENT OF FAT, DIABETES AND DISEASES IN CONNECTION WITH IMPROVED GLUCOSE TOLERANCE
US9308275B2 (en) * 2010-07-15 2016-04-12 Oleg Iliich Epshtein Method of increasing the effect of an activated-potentiated form of an antibody
CA2805091A1 (en) 2010-07-15 2012-01-19 Oleg Iliich Epshtein Pharmaceutical compositions comprising a homopathically potentized form of an antibody to human cannabinoid receptor
DE112011102362T5 (de) 2010-07-15 2013-04-25 Oleg Iliich Epshtein Pharmazeutische Kombinationszusammensetzung und Verfahren zur Behandlung von Erkrankungen oder Zuständen, die mit neurodegenerativen Erkrankungen in Verbindung stehen
EA029199B1 (ru) 2010-07-21 2018-02-28 Олег Ильич Эпштейн Комбинированная фармацевтическая композиция для лечения синдрома дефицита внимания и гиперактивности и способы лечения синдрома дефицита внимания и гиперактивности
SG10201505676RA (en) * 2010-07-21 2015-08-28 Oleg Iliich Epshtein Combination pharmaceutical compositions and method of treatment of vertigo, kinetosis and vegetative-vascular dystonia
DE112011102412T5 (de) 2010-07-21 2013-07-04 Oleg Iliich Epshtein Pharmazeutische Kombinationszusammensetzung und Verfahren zur Behandlung von mit Atemwegserkrankungen bzw. Atemwegsleiden assoziierten Erkrankungen bzw. Leiden
EA030513B1 (ru) * 2010-08-06 2018-08-31 Олег Ильич ЭПШТЕЙН Комбинированная фармацевтическая композиция и способ лечения и профилактики инфекционных заболеваний
TWI588153B (zh) * 2012-05-18 2017-06-21 中國醫藥大學 多胜肽、編碼該多胜肽之核酸分子、以及該多胜肽之應用
RU2013111961A (ru) 2013-03-18 2014-09-27 Олег Ильич Эпштейн Способ определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем
RU2013111962A (ru) 2013-03-18 2014-09-27 Олег Ильич Эпштейн Способ определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7582294B2 (en) 2002-08-02 2009-09-01 Oleg Oliich Epshtein Medicament for treating prostate diseases
US7700096B2 (en) 2002-08-02 2010-04-20 Oleg Iliich Epshtein Medicinal agent for treating erectile dysfunction

Family Cites Families (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4311897A (en) 1979-08-28 1982-01-19 Union Carbide Corporation Plasma arc torch and nozzle assembly
US5811437A (en) * 1996-05-21 1998-09-22 Eli Lilly And Company Methods of increasing nitric oxide synthesis
US6150500A (en) * 1996-07-12 2000-11-21 Salerno; John C. Activators of endothelial nitric oxide synthase
WO1999026657A1 (en) * 1997-11-25 1999-06-03 Musc Foundation For Research Development Inhibitors of nitric oxide synthase
US6933272B1 (en) * 1998-09-22 2005-08-23 Erik Helmerhorst Use of non-peptidyl compounds for the treatment of insulin related ailments
RU2181297C2 (ru) * 2000-06-20 2002-04-20 Эпштейн Олег Ильич Способ лечения патологического синдрома и лекарственное средство
UA76638C2 (en) 2002-08-02 2006-08-15 Oleh Illich Epshtein Homeopathic medication based on anti-interferon antibodies and method for treating a pathological syndrome associated with interferon
EP1534302A4 (en) * 2002-08-22 2009-01-07 Nutrition 21 Inc ARGININILICATE / INOSITOL COMPLEX AND ITS USE
US7229648B2 (en) 2003-03-14 2007-06-12 Dreyer Lee R Homeopathic formulations useful for treating pain and/or inflammation
CA2554045A1 (en) * 2004-01-20 2005-07-28 Astellas Pharma Inc. Method for treating erectile dysfunction
EP2036574A4 (en) * 2006-06-06 2009-07-01 Oleg Iliich Epshtein MEDICAL AGENT FOR THE TREATMENT OF FAT, DIABETES AND DISEASES IN CONNECTION WITH IMPROVED GLUCOSE TOLERANCE
RU2438707C2 (ru) * 2006-06-06 2012-01-10 Олег Ильич Эпштейн Лекарственное средство для перорального лечения сахарного диабета и других заболеваний, сопровождающихся нарушением толерантности к глюкозе, и способ получения твердой лекарственной формы для пероральной терапии сахарного диабета и других заболеваний, сопровождающихся нарушением толерантности к глюкозе
GB0812019D0 (en) * 2008-07-02 2008-08-06 Asterion Ltd Insulin
US9308275B2 (en) * 2010-07-15 2016-04-12 Oleg Iliich Epshtein Method of increasing the effect of an activated-potentiated form of an antibody
DE112011102362T5 (de) * 2010-07-15 2013-04-25 Oleg Iliich Epshtein Pharmazeutische Kombinationszusammensetzung und Verfahren zur Behandlung von Erkrankungen oder Zuständen, die mit neurodegenerativen Erkrankungen in Verbindung stehen
CA2805091A1 (en) * 2010-07-15 2012-01-19 Oleg Iliich Epshtein Pharmaceutical compositions comprising a homopathically potentized form of an antibody to human cannabinoid receptor
SG10201505676RA (en) * 2010-07-21 2015-08-28 Oleg Iliich Epshtein Combination pharmaceutical compositions and method of treatment of vertigo, kinetosis and vegetative-vascular dystonia
DE112011102412T5 (de) * 2010-07-21 2013-07-04 Oleg Iliich Epshtein Pharmazeutische Kombinationszusammensetzung und Verfahren zur Behandlung von mit Atemwegserkrankungen bzw. Atemwegsleiden assoziierten Erkrankungen bzw. Leiden

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7582294B2 (en) 2002-08-02 2009-09-01 Oleg Oliich Epshtein Medicament for treating prostate diseases
US7700096B2 (en) 2002-08-02 2010-04-20 Oleg Iliich Epshtein Medicinal agent for treating erectile dysfunction

Also Published As

Publication number Publication date
ES2445846R1 (es) 2015-01-02
DE112011102396T5 (de) 2013-05-02
CZ2013124A3 (cs) 2013-06-12
SE1350212A1 (sv) 2013-04-22
GB2552405B (en) 2018-05-30
WO2012010966A2 (en) 2012-01-26
ITTO20110627A1 (it) 2012-01-22
EA029847B1 (ru) 2018-05-31
NZ606964A (en) 2015-08-28
CL2013000200A1 (es) 2015-01-23
GB2552405A (en) 2018-01-24
FI20135152L (fi) 2013-02-21
GB201302924D0 (en) 2013-04-03
MX2013000804A (es) 2013-10-28
EA201300124A1 (ru) 2013-12-30
EE05761B1 (et) 2016-03-15
US20130064824A1 (en) 2013-03-14
DK201370089A (en) 2013-02-19
EP2595658A2 (en) 2013-05-29
CN103118707A (zh) 2013-05-22
GB201707872D0 (en) 2017-06-28
BR112013001299A2 (pt) 2017-11-21
LT2013018A (lt) 2013-10-25
JP2013533268A (ja) 2013-08-22
GB2496799A (en) 2013-05-22
KR20130103486A (ko) 2013-09-23
SG187578A1 (en) 2013-03-28
ES2445846A2 (es) 2014-03-05
GB2496799B (en) 2017-11-22
US8617555B2 (en) 2013-12-31
EP3693018A1 (en) 2020-08-12
KR20180127515A (ko) 2018-11-28
MY160979A (en) 2017-03-31
AU2011281240A1 (en) 2013-03-07
NO20130265A1 (no) 2013-04-18
PE20130815A1 (es) 2013-07-18
EE201300007A (et) 2013-08-15
CA2805961A1 (en) 2012-01-26
FR2962913A1 (fr) 2012-01-27
AU2011281240B2 (en) 2016-07-07
WO2012010966A3 (en) 2012-03-29
JP2016222684A (ja) 2016-12-28
AR082312A1 (es) 2012-11-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
LT5980B (lt) Farmacinė kompozicija, skirta gydyti diabetą ir metabolinius sutrikimus
KR102249078B1 (ko) 요법에 사용하기 위한 항-아드레노메둘린 (adm) 항체 또는 항-adm 항체 단편 또는 항-adm 비-ig 스캐폴드
DK1997481T3 (en) Solid oral form of a medical composition and method of preparation thereof
AU2011278039B2 (en) A combination pharmaceutical composition and methods of treating diseases or conditions associated with the cardiovascular system
AU2011281244A1 (en) A method of treating attention deficit hyperactivity disorder
EA029791B1 (ru) Фармацевтическая композиция и способ ингибирования продукции или усиления элиминации белка p24 вич
KR20140014059A (ko) 활성화되고 강화된 형태의 항체의 효과를 증가시키는 방법
CN114630681A (zh) 包含actrii受体拮抗剂的肝疾病或障碍的治疗
JP2023544832A (ja) 1型糖尿病の治療および予防のための方法および組成物
RU2565401C2 (ru) Способ лечения сахарного диабета и комбинированное лекарственное средство
RU2509572C2 (ru) Лекарственное средство для уменьшения резистентности к инсулину и для лечения сахарного диабета, способ уменьшения резистентности к инсулину, способ лечения сахарного диабета и способ лечения сахарного диабета инсулином и/или гипогликемическими препаратами
RU2531048C2 (ru) Лекарственное средство для уменьшения резистентности к инсулину и лечения сахарного диабета и способ повышения эффективности лечения сахарного диабета инсулином и/или гипогликемическими препаратами
RU2523451C2 (ru) Способ лечения хронической сердечной недостаточности и фармацевтическая композиция для лечения хронической сердечной недостаточности
RU2542414C2 (ru) Лекарственное средство для лечения эректильных дисфункций и способ лечения эректильных дисфункций
RU2531049C2 (ru) Лекарственное средство для лечения заболеваний предстательной железы и способ лечения заболеваний предстательной железы

Legal Events

Date Code Title Description
BB1A Patent application published

Effective date: 20131025

FG9A Patent granted

Effective date: 20131227

MM9A Lapsed patents

Effective date: 20190715