EA029791B1 - Фармацевтическая композиция и способ ингибирования продукции или усиления элиминации белка p24 вич - Google Patents

Фармацевтическая композиция и способ ингибирования продукции или усиления элиминации белка p24 вич Download PDF

Info

Publication number
EA029791B1
EA029791B1 EA201300138A EA201300138A EA029791B1 EA 029791 B1 EA029791 B1 EA 029791B1 EA 201300138 A EA201300138 A EA 201300138A EA 201300138 A EA201300138 A EA 201300138A EA 029791 B1 EA029791 B1 EA 029791B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
luz
lei
uyei
antibodies
agde
Prior art date
Application number
EA201300138A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201300138A1 (ru
Inventor
Олег Ильич ЭПШТЕЙН
Сергей Александрович ТАРАСОВ
Original Assignee
Олег Ильич ЭПШТЕЙН
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Олег Ильич ЭПШТЕЙН filed Critical Олег Ильич ЭПШТЕЙН
Publication of EA201300138A1 publication Critical patent/EA201300138A1/ru
Publication of EA029791B1 publication Critical patent/EA029791B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
    • A61K41/0004—Homeopathy; Vitalisation; Resonance; Dynamisation, e.g. esoteric applications; Oxygenation of blood
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/44—Antibodies bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
    • C07K16/2812—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against CD4

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей активированную-потенцированную форму антител к CD4-рецептору, и способу ингибирования продукции или усиления элиминации белка Р24 ВИЧ.

Description

Изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей активированнуюпотенцированную форму антител к СЭ4-рецептору, и способу ингибирования продукции или усиления элиминации белка Р24 ВИЧ.
029791 В1
029791
Область применения
Предлагаемое изобретение относится к фармацевтической композиции и методу ингибирования продукции или усиления элиминации белка Р24 ВИЧ.
Предшествующий уровень техники
Изобретение относится к области медицины и может использоваться для ингибирования продукции или усиления элиминации белка Р24 ВИЧ.
Из уровня техники известен белок Р24, обнаруживаемый в человеческом организме (см. Пападопулос-Элеопулос Е., Тернер В.Ф., Пападимитриу Дж.М., "Является ли положительный результат вестернблот доказательством ВИЧ-инфекции?"// Биотехнология (Нью-Йорк), 1993, Июнь, 11 (6): 696-707).
Использование антител к молекулам СЭ4. конъюгированным с антихемокиновыми рецепторами, для лечения ВИЧ-1 известно из уровня техники (\УО 01/43779 А2, А61К 47/48, 2001). Однако экспериментальные данные о терапевтической эффективности этого препарата в указанных источниках отсутствуют.
Терапевтический эффект сверхразбавленных форм (или сверхмалых форм) антител, потенцированных по гомеопатической технологии (активированно-потенцированная форма) был обнаружен доктором Олегом Эпштейном. Например, патент США № 7582294 раскрывает фармацевтическую композицию для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы и простатита путем введения гомеопатически активированной формы антител к простатоспецифическому антигену (ПСА). Было доказано, что сверхмалые дозы антител к гамма-интерферону являются полезными в лечении и профилактике лечения заболеваний вирусной этиологии; см. патент США № 7572441, ссылка на который указывается в этом документе.
СЭ4 (кластер дифференцировки 4), или СИ4 рецептор иммунокомпетентных клеток, представляет собой гликопротеин, который экспрессируется на поверхности иммунокомпетентных клеток, таких как лейкоциты, клетки Т-хелперы, регуляторные Т-клетки, моноциты, макрофаги и дендритные клетки. Как и большинство рецепторов/маркеров клеточной поверхности, СИ4 является членом суперсемейства иммуноглобулинов. СЭ4 является одним из рецепторов, которые помогают рецептору Т-клетки (РТК) с антиген-представляющей клеткой. Используя фракцию, которая находится внутри Т-клетки, СЭ4 усиливает сигнал, генерируемый РТК, привлекая фермент, известный как лимфоцит-специфический протеин тирозинкиназы, который необходим для активации многих молекул, участвующих в сигнальном каскаде активированной Т-клетки. СЭ4 также непосредственно взаимодействует с молекулами МНС (главный комплекс гистосовместимости) класса II на поверхности антиген-представляющих клеток с использованием своего внеклеточного домена. ВИЧ-1 использует СЭ4 для проникновения в Т-клетку-хозяина и достигает этого путем связывания протеина вирусной оболочки, известного как др120, с СИ4. Связывание с СИ4 создает сдвиг в конформации др120, что позволяет ВИЧ-1 связываться с корецептором, который экспрессируется на клетке-хозяине. Эти корецепторы являются хемокиновыми рецепторами ССК5 или СХСК4; какой из этих корецепторов используется во время инфицирования зависит от того, заражает вирус макрофаг, или клетку Т-хелпер. После структурных изменений в других вирусных белках (др41) ВИЧ вводит пептид слияния в клетку-хозяина, что позволяет внешней оболочке вируса сливаться с клеточной мембраной; см. Мицели М.С., Парнс Дж.Р. Роль СИ4 и СИ8 в активации и дифференциации Тклеток// Αάν. 1ттипо1., 1993, 53: 59-122.
Настоящее изобретение включает фармацевтическую композицию и метод ингибирования продукции или усиления элиминации белка Р24.
Решение поставленной задачи обеспечивается тем, что фармацевтическая композиция для ингибирования продукции или усиления элиминации белка Р24 содержит активированно-потенцированную форму антител к СИ4 рецептору.
Раскрытие изобретения
С одной точки зрения, изобретение представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую активированно-потенцированную форму антител к СИ4 рецептору. Как вариант, фармацевтическая композиция дополнительно содержит твердый носитель, при этом указанная активированнопотенцированная форма антител к СИ4 рецептору насыщает указанный твердый носитель. Как вариант, фармацевтическая композиция выполнена в форме таблетки.
Предпочтительно фармацевтическая композиция, содержащая указанную активированнопотенцированную форму антител к СИ4 рецептору, выполнена в виде смеси гомеопатических разведений С12, С30 и С200. Особо предусмотрено, что указанная смесь гомеопатических разведений С12, С30 и С200 импрегнирована на твердый носитель.
Активированная-потенцированная форма антител к рецептору СЭ4 может быть моноклональным, поликлональным или естественным антителом. Специально предполагается, что активированнопотенцированная форма антител к рецептору СЭ4 является поликлональным антителом. Изобретение относится к активированно-потенцированным формам антител к антигену(ам), содержащему последовательности, указанные в описании и заявленные в формуле изобретения.
Как вариант, фармацевтическая композиция содержит активированно-потенцированную форму антител к СЭ4 рецептору, приготовленную путем последовательных сотенных разведений в сочетании со
- 1 029791
встряхиванием каждого разведения. Предпочтительным является вертикальное встряхивание.
В другом аспекте изобретение относится к методу ингибирования продукции или усиления элиминации белка Р24, причем указанный метод включает введение активированно-потенцированной формы антител к СЭ4 рецептору, тем самым ингибируя продукцию или усиливая элиминацию белка Р24. Предпочтительно активированно-потенцированная форма антитела к СЭ4 рецептору вводится в виде фармацевтической композиции.
В одном из вариантов фармацевтическая композиция вводится в виде твердой лекарственной формы для перорального применения, которая содержит фармацевтически приемлемый носитель и указанную активированно-потенцированную форму антител к СЭ4 рецептору, насыщающую указанный носитель. Как вариант, указанная твердая оральная лекарственная форма выполнена в виде таблетки. Раскрыты разные варианты и методы.
В соответствии с изобретением, относящемуся к методу, фармацевтическая композиция может приниматься в виде одной или двух единичных лекарственных форм, каждая из которых может приниматься от одного до четырех раз в день. Как вариант, фармацевтическая композиция принимается два раза в день; каждый прием состоит из двух лекарственных форм для перорального применения. В другом варианте, фармацевтическая композиция принимается в виде одной или двух единичных лекарственных форм, каждая из которых принимается два раза в день. Все варианты и методы, которые описываются в отношении фармацевтической композиции, могут использоваться в отношении метода.
Варианты осуществления изобретения
Изобретение определено с учетом прилагаемых пунктов формулы. С учетом пунктов формулы был составлен нижеследующий терминологический список, включающий соответствующие определения.
Приведенный термин "антитела" служит для обозначения иммуноглобулина, который специфически связывается с другой молекулой, имеющей особую пространственную и полярную организацию, вследствие чего определяется как комплементарный. Антитела, упоминаемые в пунктах формулы изобретения, могут быть представлены цельной молекулой иммуноглобулина или ее фрагментом, могут относиться к естественным, поликлональным или моноклональным антителам, а также включать различные классы и изотипы, такие как 1§А, 1§ϋ, 1дЕ, 1дО1, 1§О2а, 1дО2Ь и 1дО3, 1§т и др. Антитела, представленные фрагментами молекул, могут включать РаЬ, Εν и Р(аЬ')2, РаЬ' и пр.
Термины "активированная" или "потенцированная форма", соответственно используемые по отношению к описываемым антителам, служат для обозначения продукта гомеопатического потенцирования любого исходного раствора антител. Под "гомеопатическим потенцированием" следует понимать применение методов гомеопатии для придания исходному раствору соответствующего вещества гомеопатической активности. Будучи довольно многочисленными, способы "гомеопатического потенцирования" могут, например, включать повторное последовательное разведение исходного вещества в сочетании с внешним воздействием, как правило, (механическим) встряхиванием. Другими словами, исходный раствор антител подвергается последовательному повторному разведению при множественном вертикальном встряхивании каждого полученного разведения, в соответствии с гомеопатической методикой. Оптимальная исходная концентрация антител в растворителе (предпочтительно воде или смеси воды и этилового спирта) варьируется от 0,5 до 5,0 мг/мл. В процедуре получения каждого повторного компонента (раствора антител) рекомендуется использовать смесь трех водных или водно-спиртовых разведений первичного (матричного) раствора (матричной настойки) антител с кратностью разведения в 10012, 10030 и 100200 раз соответственно, что эквивалентно сотенным гомеопатическим разведениям С12, С30 и С200. Примеры гомеопатического потенцирования представлены в описаниях патентов США №№ 7572441 и 7582294, которые в совокупности включены сюда путем ссылки в соответствии с указанной целью. Если в пунктах формулы изобретения применяется термин "активированно-потенцированная форма", то в приведенных ниже примерах употребляется формулировка "сверхмалая доза" или "сверхмалые дозы". Термин "сверхмалые дозы" имеет узкоограниченное употребление и применяется исключительно в рамках области исследования, для которой он был изначально предложен, а именно изучение и использование гомеопатически разведенных и потенцированных форм вещества. Термин "сверхмалая доза" или "сверхмалые дозы" приводится в качестве полного заместителя и исходного аналога понятия "активированно-потенцированная" форма, упоминаемого в пунктах описания формулы.
Иначе говоря, антитело может рассматриваться в качестве "активированно-потенцированной" формы при выполнении трех условий. Первым из них является тот факт, что антитело - это продукт широко применяемого в гомеопатии процесса получения веществ. Второе условие заключается в том, что "активированно-потенцированная форма" антител должна обладать биологической активностью, определяемой современными методами фармакологического анализа. И наконец, третье условие предполагает, что биологическая активность, проявленная "активированно-потенцированной" формой антител, не может быть приписана присутствию в конечном продукте гомеопатического процесса их молекулярной формы.
Так, активированно-потенцированную форму антител можно приготовить, подвергнув исходные антитела, выделенные в молекулярной форме, серии последовательных разведений в сочетании с внешним воздействием, например встряхиванием. В качестве внешнего воздействия в процессе снижения концентрации вещества может использоваться обработка ультразвуком, электромагнитным полем или
- 2 029791
другими физическими способами. В работе В. Швабе "Гомеопатические лекарственные средства", М., 1967, патенты США N0. 7229648 и 4311897, которые в совокупности включены сюда путем ссылки в соответствии с указанной целью, описаны процессы, которые представляют собой способы потенцирования, широко применяемые в гомеопатии. В результате данной процедуры происходит равномерное снижение концентрации исходных молекул антител. Процедуру повторяют до тех пор, пока не будет получена желаемая гомеопатическая потенция. Требуемая гомеопатическая потенция отдельных антител может быть определена путем биологического анализа на желаемой фармакологической модели. Являясь довольно многочисленными, способы "гомеопатического потенцирования" могут, например, включать повторное последовательное разведение исходного вещества в сочетании с внешним воздействием, главным образом (механическим) встряхиванием. Другими словами, исходный раствор антител подвергается последовательному повторному разведению при множественном вертикальном встряхивании каждого полученного разведения в соответствии с гомеопатической методикой. Оптимальная начальная концентрация антител в растворителе (предпочтительно воде или смеси воды и этилового спирта) варьируется от 0,5 до 5,0 мг/мл. Для процедуры получения каждого последующего компонента (раствора антител) рекомендуется использовать смесь трех водных или водно-спиртовых разведений первичного (матричного) раствора (матричной настойки) антител с кратностью разведения в 100 , 100 и 100 раз соответственно, что эквивалентно сотенным гомеопатическим разведениям С12, С30 и С200, или смеси трех водных или водно-спиртовых разведений исходного матричного раствора (матричной настойки) антител с кратностью дилюции 100 , 100 и 100 соответственно, что эквивалентно сотенным гомеопатическим разведениям С12, С30 и С50. Примеры получения желаемых потенций также представлены в настоящей заявке и, в частности, могут быть найдены в патентах США № 7229648 и 4311897, которые в совокупности включены сюда путем ссылки в соответствии с указанной целью. Подробное описание процедуры, применимой к описываемой "активированно-потенцированной" форме антител, приводится ниже.
Вопрос о применение гомеопатических средств в лечении человеческих заболеваний вызывает множество споров. Хотя настоящее изобретение основывается на широко применяемых в гомеопатии процессах получения активированно-потенцированной формы антител, доказательство его активности не сводится к лишь гомеопатическим методам, применяемым по отношению к человеку. Автором заявленного изобретения было сделано любопытное открытие, в полной мере доказанное на распространенных фармакологических моделях и свидетельствующее о том, что растворитель, полученный в результате серии последовательных разведений антител в своей исходной молекулярной форме, обладает определенной активностью, которая не может быть отнесена к присутствию следов молекул исходной субстанции в целевом растворе. "Активированная-потенцированная форма" антител, представленная в настоящей заявке, протестирована на наличие биологической активности на широко применяемых фармакологических моделях для исследования активности как в соответствующих экспериментах ίη νίίτο, так и в ίη νίνο испытаниях на животных. Результаты нижеописанных экспериментов, проведенных с использованных данных моделей, служат доказательством наличия заявленной биологической активности. Результаты клинических испытания на человеке, которые также приведены ниже, среди прочего, указывают на то, что активность, наблюдаемая в экспериментах на животных, может быть успешно перенесена на лечение человеческих заболеваний. Проведенные испытания, результаты которых приведены далее, свидетельствуют о биологической активности в таких моделях; это связано с большим антивирусным и, возможно, иммунотропным действием, интенсификацией активации СБ4-лимфоцитов и увеличением количества рецепторов на поверхности СБ4-клеток.
Кроме того, заявленная "активированно-потенцированная" форма антител включает только те растворы и твердые формы препаратов, биологическая активность которых не может быть приписана присутствию антител, сохранившихся в своей исходной молекулярной форме после разведения матричного раствора. Иначе говоря, несмотря на предположение о том, что "активированно-потенцированная" форма антител может содержать остатки первичных антител в своей молекулярной форме, наличие должного опыта в соответствующей области науки не позволяет с какой-либо степенью достоверности соотнести наличие биологической активности, наблюдаемой на распространенных фармакологических моделях, с присутствием антител, сохранивших свою молекулярную форму, в связи с предельно низким содержанием таковых в растворе после его последовательного разведения. Хотя изобретение не ограничено ни одной из конкретных теорий, биологическая активность "активированно-потенцированной" формы антител, составляющей основу данного изобретения, не может быть приписана их исходной молекулярной форме. Предпочтительно, чтобы содержание молекул первичной субстанции (антител) в конечном продукте разведения, представленном жидкой или твердой "активированно-потенцированной" формой антител, была ниже определяемого уровня основных применяемых методов анализа, таких как капиллярный электрофорез или высокоэффективная жидкостная хроматография. Особенно предпочтительной является такая жидкая или твердая "активированно-потенцированная" форма, концентрация молекул исходного вещества в которой ниже числа Авогадро. В фармакологии молекулярных форм терапевтических веществ одним из распространенных методов анализа является построение кривой "доза-эффект", на которую наносятся данные, отражающие уровень фармакологической реакции в отношении к концентрации активного препарата, вводимого испытуемым или исследуемого ίη νίίτο. Минимальный объем лекарст- 3 029791
венного препарата, проявляющий сколько-нибудь определяемую реакцию, называют "пороговой дозой". Особый акцент делается на то, что предпочтительная концентрация антител, сохранивших свою молекулярную форму (если таковые присутствуют) в "активированно-потенцированной" форме вещества, должна быть ниже значения пороговой дозы молекул исходных антител для данной биологической модели. При описании конкретных лекарственных композиций в прилагаемых примерах применяется термин "сверхмалые дозы" (СМД), который не фигурирует в пунктах формулы изобретения настоящей заявки.
Настоящее изобретение представляет собой фармацевтическую композицию, содержащую активированно-потенцированную форму антител к СИ4 рецептору, приготовленную в соответствии с гомеопатической технологией потенцирования путем многократного, последовательного разведения и промежуточного внешнего действия встряхивания, что более подробно описано ниже. Согласно изобретению фармацевтическая композиция особенно полезна для ингибирования продукции и усиления элиминации белка Р24. Как показано в примерах, фармацевтическая композиция обладает неожиданным терапевтическим действием, которое проявляется, в частности, в определенной терапевтической эффективности при лечении заболеваний, связанных с повышением продукции белка Р24.
Согласно изобретению фармацевтическая композиция расширяет арсенал препаратов, способных ингибировать продукцию и усилить элиминацию белка Р24.
В соответствии с этим аспектом изобретения фармацевтическая композиция может быть в жидком или в твердом виде. Активированная-потенцированная форма антител, входящая в состав фармацевтической композиции, готовится из начальной молекулярной формы антитела с помощью процесса, принятого в гомеопатической медицине. Начальные антитела могут быть моноклональными или поликлональными, приготовленными в соответствии с известными методами, например, описанными в "Иммунологических методах"/ Фримель Г. - М.: Медицина, 1987, с. 9-33; "Антитела человека. Моноклональные и рекомбинантные антитела, 30 лет спустя"/ Лаффли Е., Содоер Р. - 2005 - Т. 14. - № 1-2, с. 33-55, ссылки на которые указываются в документе.
Моноклональные антитела можно получить, например, с помощью технологии гибридомы. Начальная стадия процесса включает иммунизацию, основанную на уже разработанных в ходе подготовки поликлональных антисывороток принципах. Дальнейшие стадии работы связаны с производством гибридных клеток, генерирующих клонов антител с одинаковой специфичностью. Их выделение осуществляется с использованием тех же методов, что и в случае приготовления поликлональной антисыворотки.
Поликлональные антитела можно получить с помощью активной иммунизации животных. С этой целью подходящим животным (например, кроликам) вводят серию инъекций с соответствующим антигеном (СИ4 рецептор). Иммунная система животных генерирует соответствующие антитела, которые собираются с животных известным способом. Эта процедура позволяет приготовить моноспецифическую богатую антителами сыворотку.
При желании, сыворотку, содержащую антитела, можно очистить, например, с помощью аффинной хроматографии, фракционирования путем осаждения солей или ионно-обменной хроматографии. Очищенная богатая антителами сыворотка, полученная в результате этого процесса, может использоваться в качестве исходного материала для приготовления активированно-потенцированной формы антител. Предпочтительная концентрация полученного исходного раствора антител в растворителе, водной или водно-спиртовой смеси, составляет примерно от 0,5 до 5,0 мг/мл,
В соответствии с настоящим изобретением предпочтительный порядок приготовления каждого из
компонентов комбинированного препарата включает использование смеси трех водно-спиртовых разве12 30 50
дений первичного матричного раствора антител, разбавленных в 100 , 100 и 100 раз соответственно,
что эквивалентно сотенным гомеопатическим разведениям С12, С30 и С50, или разбавленных в 10012,
30 200
100 и 100 раз соответственно, что эквивалентно сотенным гомеопатическим разведениям С12, С30 и С200. Для приготовления твердой лекарственной формы твердый носитель обрабатывают желаемым разведением, полученным в результате гомеопатического процесса. Для получения единичной твердой лекарственной формы комбинированного препарата изобретения масса носителя пропитывается каждым из разведений. Обе процедуры пропитывания предназначены для приготовления требуемой лекарственной формы комбинированного препарата.
В предпочтительном варианте изобретения исходным материалом для приготовления активировано-потенцированной формы, которая составляет фармацевтическую композицию изобретения, является поликлональное антитело животного происхождения к соответствующему антигену, а именно рецептору СИ4. Для получения активированно-потенцированной формы поликлональных антител к рецептору СИ4 желаемый антиген вводится в качестве иммуногена в лабораторное животное, предпочтительно в кроликов. Поликлональные антитела к рецептору СИ4 можно получить, используя полную молекулу рецептора СИ4 человека следующей последовательности:
- 4 029791
3Ε(3Π)ΝΟ:1
Ме1 Азп Агд О1у Уа1 Рго РЬе Агд Ηϊδ Ьеи Ьеи Ьеи Уа1 Ьеи О1п Ьеи 15 10 15
А1а Ьеи Ьеи Рго А1а А1а ТЬг С1п О1у Ьуз Ьуз Уа1 Уа1 Ьеи О1у Ьуз
20 25 30
Ьуз О1у Αδρ ТЬг Уа1 О1и Ьеи ТЬг Суз ТЬг А1а Зег О1п Ьуз Ьуз Зег
35 40 45
Не О1п РЬе Ηϊδ Тгр Ьуз Αδη Зег Αδη Οίη Не Ьуз Не Ьеи О1у Αδη
50 55 60
Οίη О1у Зег РЬе Ьеи ТЬг Ьуз О1у Рго Зег Ьуз Ьеи Αδη Αδρ Агд А1а 65 70 75 80
Αδρ Зег Агд Агд Зег Ьеи Тгр Αδρ Οίη О1у Αδη РЬе Рго Ьеи Не Не
85 90 95
Ьуз Αδη Ьеи Ьуз Не О1и Азр Зег Азр ТЬг Туг Не Суз О1и Уа1 О1и
100 105 110
Азр О1п Ьуз О1и О1и Уа1 О1п Ьеи Ьеи Уа1 РЬе О1у Ьеи ТЬг А1а Азп
115 120 125
Зег Азр ТЬг Ηϊδ Ьеи Ьеи О1п О1у О1п Зег Ьеи ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи О1и
130 135 140
Зег Рго Рго О1у Зег Зег Рго Зег Уа1 О1п Суз Агд Зег Рго Агд О1у 145 150 155 160
Ьуз Азп Не О1п О1у О1у Ьуз ТЬг Ьеи Зег Уа1 Зег О1п Ьеи О1и Ьеи
165 170 175
О1п Азр Зег О1у ТЬг Тгр ТЬг Суз ТЬг Уа1 Ьеи О1п Азп О1п Ьуз Ьуз
180 185 190
Уа1 О1и РЬе Ьуз Не Азр Не Уа1 Уа1 Ьеи А1а РЬе О1п Ьуз А1а Зег
195 200 205
Зег Не Уа1 Туг Ьуз Ьуз О1и О1у О1и О1п Уа1 О1и РЬе Зег РЬе Рго
210 215 220
Ьеи А1а РЬе ТЬг Уа101и Ьуз Ьеи ТЬг О1у Зег О1у О1и Ьеи Тгр Тгр 225 230 235 240
О1п А1а О1и Агд А1а Зег Зег Зег Ьуз Зег Тгр Не ТЬг РЬе Азр Ьеи
245 250 255
- 5 029791
Ьуз Азп Ьуз О1и Уа1 8ег Уа1 Ьуз Агд Уа1 ТЬг О1п Азр Рго Ьуз Ьеи 260 265 270
С1п Ме!01у Ьуз Ьуз Ьеи Рго Ьеи ΗΪ8 Ьеи ТЬг Ьеи Рго (Нп А1а Ьеи 275 280 285
Рго (Нп Туг А1а О1у Зег (Ну Азп Ьеи ТЬг Ьеи А1а Ьеи (Ии А1а Ьуз
290 295 300
ТЬг (Ну Ьуз Ьеи ΗΪ8 (Нп (Ни Уа1 Азп Ьеи Уа1 Уа1 Ме! Агд А1а ТЬг 305 310 315 320
С1п Ьеи (Нп Ьуз Азп Ьеи ТЬг Суз (Ни Уа1 Тгр (Ну Рго ТЬг Зег Рго
325 330 335
Ьуз Ьеи Ме! Ьеи Зег Ьеи Ьуз Ьеи О1и Азп Ьуз (Ни А1а Ьуз Уа1 Зег
340 345 350
Ьуз Агд С1и Ьуз А1а Уа1 Тгр Уа1 Ьеи Азп Рго О1и А1а (Ну Ме! Тгр
355 360 365
О1п Суз Ьеи Ьеи Зег Азр Зег О1у О1п Уа1 Ьеи Ьеи О1и Зег Азп Не
370 375 380
Ьуз Уа1 Ьеи Рго ТЬг Тгр Зег ТЬг Рго Уа1 О1п Рго Ме! А1а Ьеи Не 385 390 395 400
Уа1 Ьеи О1у С1у Уа1 А1а О1у Ьеи Ьеи Ьеи РЬе Не С1у Ьеи (Ну Не
405 410 415
РЬе РЬе Суз Уа1 Агд Суз Агд РНз Агд Агд Агд О1п А1а О1и Агд Ме!
420 425 430
Зег (Нп Не Ьуз Агд Ьеи Ьеи Зег (Ни Ьуз Ьуз ТЬг Суз (Нп Суз Рго
435 440 445
ΗΪ5 Агд РЬе (Нп Ьуз ТЬг Суз Зег Рго Не
450 455
Поликлональные антитела к рецептору С1)4 можно получить, используя полипептидный фрагмент рецептора С1)4. выбранного, например, со следующей аминокислотной последовательности:
5Е0 ГО N0:2
(Ну Ьуз Ьуз Уа1 Уа1 Ьеи (Ну Ьуз Ьуз (Ну Азр ТЬг Уа1 СНи Ьеи ТЪг 15 10 15
- 6 029791
Суз ТЬг А1а 8ег О1п Ьуз Ьуз Зег Не О1п РЬе ΗΪ8 Тгр Ьуз Азп 8ег 20 25 30
Азп О1п Не Ьуз Не Ьеи О1у Азп О1п (Ну 8ег РЬе Ьеи ТЬг Ьуз (Ну 35 40 45
Рго Зег Ьуз Ьеи Азп Азр Агд А1а Азр 8ег Агд Агд 8ег Ьеи Тгр Азр
50 55 60
(Нп О1у Азп РЬе Рго Ьеи Не Не Ьуз Азп Ьеи Ьуз Не О1и Азр 8ег 65 70 75 80
Азр ТЬг Туг Не Суз (Ни Уа1 С1и Азр (Нп Ьуз О1и СНи Уа1 (Нп Ьеи
85 90 95
Ьеи Уа1 РНе О1у Ьеи ТЬг А1а Азп 8ег Азр ТЬг РИз Ьеи Ьеи С1п (Ну
100 105 110
О1п Зег Ьеи ТЬг Ьеи ТЬг Ьеи О1и 5ег Рго Рго О1у Зег Зег Рго Зег
115 120 125
Уа1 О1п Суз Агд Зег Рго Агд (Ну Ьуз Азп Не О1п О1у (Ну Ьуз ТЬг
130 135 140
Ьеи Зег Уа1 Зег (Нп Ьеи (Ни Ьеи С1п Азр Зег (Ну ТЬг Тгр ТЬг Суз 145 150 155 160
ТЬг Уа1 Ьеи (Нп Азп (Нп Ьуз Ьуз Уа1 СНи РЬе Ьуз Не Азр Не Уа1
165 170 175
Уа1 Ьеи А1а РЬе О1п Ьуз А1а Зег Зег Не Уа1 Туг Ьуз Ьуз (Ни (Ну
180 185 190
(Ии (Нп Уа1 (Ии РНе Зег РЬе Рго Ьеи А1а РЬе ТЬг Уа1 (Ни Ьуз Ьеи
195 200 205
ТЬг (Ну Зег (Ну (Ни Ьеи Тгр Тгр (Нп А1а О1и Агд А1а Зег Зет Зег
210 215 220
Ьуз Зег Тгр Не ТЬг РЬе Азр Ьеи Ьуз Азп Ьуз (Ии Уа1 Зег Уа1 Ьуз 225 230 235 240
Агд Уа1 ТЬг (Нп Азр Рго Ьуз Ьеи (Нп Ме1 (Ну Ьуз Ьуз Ьеи Рго Ьеи
245 250 255
ΗΪ8 Ьеи ТЬг Ьеи Рго (Нп А1а Ьеи Рго (Нп Туг А1а (Ну Зег (Ну Азп
260 265 270
Ьеи ТЬг Ьеи А1а Ьеи (Ни А1а Ьуз ТЬг (Ну Ьуз Ьеи РНз (Нп (Ии Уа1
275 280 285
- 7 029791
Азп Ьеи Уа1 Уа1 Ме! Аг§ А1а ТЪг О1п Ьеи О1п Ьуз Азп Ьеи ТЪг Суз
290 295 300
О1и Уа1 Тгр О1у Рго ТЪг 8ег Рго Ьуз Ьеи Ме! Ьеи Зег Ьеи Ьуз Ьеи 305 310 315 320
О1и Азп Ьуз О1и А1а Ьуз Уа1 Зег Ьуз Аг§ О1и Ьуз А1а Уа1 Тгр Уа1
325 330 335
Ьеи Азп Рго О1и А1а О1у Ме! Тгр О1п Суз Ьеи Ьеи 8ег Азр 8ег О1у
340 345 350
С1п Уа1 Ьеи Ьеи О1и 8ег Азп Не Ьуз Уа1 Ьеи Рго ТЪг Тгр Зег ТЪг
355 360 365
Рго Уа1 О1п Рго Ме! А1а Ьеи Не Уа1 Ьеи О1у О1у Уа1 А1а 01 у Ьеи
370 375 380
Ьеи Ьеи РЪе Не О1у Ьеи О1у Не РЪе РЪе Суз Уа1 Аг§ Суз Аг§ ΗΪ3 385 390 395 400
Аг§ Аг§ Аг§ О1п А1а О1и Аг§ Ме! Зег О1п Не Ьуз Аг§ Ьеи Ьеи Зег
405 410 415
СЯи Ьуз Ьуз ТЪг Суз О1п Суз Рго №з Аг§ РЪе С1п Ьуз ТЪг Суз Зег
420 425 430
Рго Не
ЗЕО ГО N0:3
Не О1у Ьеи О1у Не РЪе РЪе Суз Уа1 Аг§ Суз Аг§ РНз Аг§ Аг§ Аг§
412 415 420 425
О1п А1а О1и Аг§ Ме! Зег О1п Не Ьуз Аг§ Ьеи Ьеи Зег О1и Ьуз Ьуз
430 435 440
ТЪг Суз О1п Суз Рго ΗΪ3 Аг§ РЪе О1п Ьуз ТЪг Суз Зег Рго Не
445 450 455
- 8 029791
ЗЕ<3 ГО N0:4
О1у Ьуз Ьуз Уа1 Уа1 Ьеи О1у Ьуз Ьуз О1у Азр ТЬг Уа1 О1и Ьеи ТЬг 26 30 35 40
Суз ТЬг А1а Зег О1п Ьуз Ьуз Зег Не О1п РЬе ΗΪ8 Тгр Ьуз Азп Зег
45 50 55
Азп О1п Не Ьуз
60
ЗЕР ГО N0:5
Азр ТЬг Туг Не Суз О1и Уа1 О1и Азр О1п Ьуз О1и О1и Уа1 О1п 91 95 100 105
ЗЕР ГО N0:6
Ьуз О1и О1и Уа1 О1п Ьеи Ьеи Уа1 РЬе О1у Ьеи ТЬг А1а Азп Зег Азр 115 120 125 130
ТЬг ΗΪ5 Ьеи Ьеи О1п О1у О1п Зег Ьеи
135 139
Примерный порядок подготовки исходных поликлональных антител к С’1)4 рецептору выглядит следующим образом. За 7-9 дней до забора крови, для повышения уровня поликлональных антител в потоке крови кроликов, им внутривенно вводят 1 -3 инъекции желаемого антигена. После иммунизации образцы крови используются для тестирования уровня антител. Как правило, максимальный уровень иммунной реакции растворимого антигена достигается в течение 40-60 дней после первой инъекции антигена. В завершение первого цикла иммунизации кроликам отводится 30-дневный реабилитационный период, после чего с помощью 1-3 внутривенных инъекций проводится повторная иммунизация.
Для получения антисыворотки с содержанием нужных антител кровь иммунизированных кроликов собирается и помещается в 50-мл центрифужную пробирку. Сгустки, сформированные на краях пробирки, снимаются с помощью деревянного шпателя, а стержень помещается в сгусток посередине пробирки. После этого кровь помещают в холодильник при температуре около 40°С на одну ночь. На следующий день сгусток на шпателе удаляется, а оставшаяся жидкость центрифугируется в течение 10 мин при 13000 об/мин. Супернатант и является целевой антисывороткой. Обычно полученная антисыворотка имеет желтый цвет. 20% \а\3 (весовая концентрация) добавляют в антисыворотку для получения окончательной концентрации в 0,02%, после чего до использования ее хранят в замороженном состоянии при температуре - 20°С или при температуре -70°С без добавления ΝΝ3. Для выделения целевых антител к СО4 рецептору из антисыворотки подходит следующая последовательность твердофазовой абсорбции: 10 мл антисыворотки кролика разбавляют вдвое с 0,15 М №С1, после чего добавляют 6,26 г Να28Ο4, перемешивают и выдерживают в течение 12-16 ч при температуре 4°С. Осадок удаляют центрифугированием, разводят в 10 мл фосфатного буфера и диализируют в том же буфере в течение одной ночи при комнатной температуре. После удаления осадка раствор наносят на ДЭАЭ-целлюлозную колонку, уравновешенную фосфатным буфером. Доля антитела определяется путем измерения оптической плотности элюата при 280 нм.
Выделенные неочищенные антитела очищаются с помощью аффинной хроматографии путем присоединения полученных антител к СО4 рецептору, который находится на нерастворимом матриксе хроматографической среды, с последующим элюированием концентрированными водными растворами солей.
Буферный раствор, полученный в результате, используется в качестве исходного раствора для процесса гомеопатического разведения для получения активированно-потенцированной формы антител. Желаемая концентрация исходного матричного раствора с очищенными от антигена поликлональными антителами кролика к СО4 рецептору составляет 0,5-5,0 мг/мл, преимущественно 2,0-3,0 мг/мл.
- 9 029791
Активированно-потенцированную форму антитела к СЭ4 рецептору можно приготовить из исходного раствора путем гомеопатического потенцирования, используя метод пропорционального уменьшения концентрации последовательным разведением 1 части каждого предыдущего раствора (начиная с исходного раствора) в 9 частях (для десятичных разведений), или в 99 частях (для сотенных разведений), или в 999 частях (для тысячных разведений) нейтрального растворителя, начиная с концентрации исходного раствора антитела в растворителе (как правило, это водная или водно-спиртовая смесь) диапазоном от 0,5 до 5,0 мг/мл в сочетании с внешним воздействием. Как правило, под внешним воздействием подразумевается многократное вертикальное встряхивание (динамизация) каждого разведения. Как правило, для каждого последующего разведения для получения необходимого уровня активности, или фактора разведения, используются отдельные контейнеры. Этот метод считается общепринятым в гомеопатии; см., например, работу Швабе В. Гомеопатические лекарственные средства. - М., 1967, с. 14-29, ссылка на которую содержится в настоящей заявке.
Например, для приготовления 12-сотенного разведения (обозначается как С12) одну часть исходного матричного раствора антител к СЭ4 рецептору с концентрацией 3,0 мг/мл растворяют в 99 частях нейтрального водного или водно-спиртового растворителя (преимущественно 15% этиловый спирт), а затем многократно вертикально встряхивают (10 и более раз) для получения первого сотенного разведения (обозначается как С1). 2-е сотенное разведение (С2) получают из 1-го сотенного разведения С1. Для приготовления 12-го сотенного разведения С12 эта процедура повторяется 11 раз. Таким образом, 12-е сотенное разведение С12 представляет собой раствор, полученный с помощью 12 последовательных разведений одной части исходного матричного раствора антител к гамма-интерферону с концентрацией 3,0 мг/мл в 99 частях нейтрального растворителя в различных емкостях, что эквивалентно сотенному гомеопатическому разведению С12. Аналогичные процедуры с соответствующим коэффициентом разбавления выполняются для получения разведений С30, С50 и С200. Промежуточные разведения могут тестироваться на желаемой биологической модели для проверки активности. Предпочтительными активированно-потенцированными формами препарата изобретения считается смесь разведений С12, С30 и С50 или С12, С30 и С200. При использовании смеси различных гомеопатических разведений (в основном сотенных) активного вещества в качестве компонентов биологически активной жидкости каждый компонент композиции препарата (например, С12, С30, С50, С200) готовится отдельно согласно описанной выше процедуре до получения предпоследнего разведения (например, до получения С11, С29 и С199 соответственно), а потом одна часть каждого компонента помещается в одну емкость согласно составу смеси и смешивается с необходимым количеством растворителя (например, с 97 частями для получения сотенного разведения).
Активное вещество может использоваться как смесь различных гомеопатических разведений, например десятичных и/или сотенных (Ό20, С30, С100 или С12, С30, С50 или С12, С30, С200 и т.д.), эффективность которой определяется экспериментально путем тестирования разведений на соответствующих биологических моделях, например на моделях, приведенных в настоящей заявке в примерах.
В процессе снижения потенцирования и концентрации вертикальные встряхивания могут заменяться внешним воздействием ультразвука, электромагнитных полей или любыми другими процессами внешнего воздействия, которые используются в гомеопатии.
Как правило, фармацевтическая композиция изобретения находится в виде жидкой или твердой единичной лекарственной формы. Соответствующим жидким носителем является вода или водноспиртовая смесь.
Твердую единичную лекарственную форму препарата изобретения можно получить путем насыщения твердого фармацевтически приемлемого носителя смесью активированно-потенцированной формы водных или водно-спиртовых растворов активных компонентов. Кроме того, носитель можно насыщать последовательно в каждом соответствующем разведении. Оба метода импрегнирования считаются приемлемыми.
Как правило, фармацевтическая композиция в твердой единичной лекарственной форме готовится из гранул фармацевтически приемлемого носителя, предварительно насыщенного водными или водноспиртовыми разведенными активированно-потенцированной формы антител к СЭ4 рецептору. Твердая лекарственная форма может быть выполнена в любой форме, принятой в фармацевтической сфере, в том числе в виде таблеток, капсул, пастилок для рассасывания и в другой форме. В качестве неактивных фармацевтических ингредиентов можно использовать глюкозу, сахарозу, мальтозу, крахмал, изомальтозу, изомальт и другие моно-, олиго- и полисахариды, которые применяются в производстве фармацевтических препаратов, а также технологические смеси вышеуказанных неактивных фармацевтических ингредиентов с другими фармацевтически приемлемыми наполнителями, например с изомальтом, кросповидоном, цикламатом натрия, сахарином, безводной лимонной кислотой и т.д., включая смазывающие вещества, разрыхлители, связывающие вещества и красители. Предпочтительными носителями являются лактоза и изомальт. Фармацевтическая лекарственная форма может дополнительно включать стандартные фармацевтические наполнители, например микрокристаллическую целлюлозу, стеарат магния и лимонную кислоту.
Для приготовления твердых лекарственных форм для перорального применения 100-300 мкм гра- 10 029791
нул лактозы насыщают водными или водно-спиртовыми растворами активированно-потенцированной формы антител к СБ4 рецептору в соотношении 1 кг раствора антител к 5 или 10 кг лактозы (1:5-1:10). Для осуществления насыщения гранулы лактозы подвергаются насыщению и орошению в псевдоожиженном кипящем слое соответствующего оборудования (например, ΉϋίΙίΐη РПоОаЬ" производства Ηϋΐίίίη СшЬН) с последующей сушкой в потоке воздуха, нагретом при температуре ниже 40°С. Рассчитанное количество высушенных гранул (от 10 до 34 вес.ч.), насыщенных активированно-потенцированной формой антител, помещают в смеситель и смешивают с 25-45 вес.ч. "ненасыщенной" чистой лактозы (используется в целях сокращения расходов, упрощения и ускорения технологического процесса без снижения эффективности лечения), вместе с 0,1-1 вес.ч. стеарата магния и от 3 до 10 вес.ч. микрокристаллической целлюлозы. Полученная таблетмасса равномерно смешивается и таблетируется путем прямого сухого прессования (например, в таблеточном прессе Котксй - ХЬ 400) для получения круглых таблеток массой от 150 до 500 мг, преимущественно 300 мг. После таблетирования полученные 300 мг таблетки насыщаются водно-спиртовым раствором (3,0-6,0 мг/таблетку) активированно-потенцированной формы антител к СБ4 рецептору в форме смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30 и С50 или смеси сотенных гомеопатических разведений С12, С30 и С200.
Хотя изобретение не ограничивается какой-либо конкретной теорией, однако считается, что активированно-потенцированная форма антител, описанная в этом документе, не содержит молекулярной формы антител в том количестве, которое необходимо для выявления биологической активности такой молекулярной формой. Биологическая активность комбинированного препарата (фармацевтической композиции) изобретения полностью проиллюстрирована в приведенных примерах.
Как правило, в лечении комбинация по настоящему изобретению применяется от одного до четырех раз в день или дважды в день, причем одна или две единичные лекарственные формы композиции используются за прием.
Далее изобретение проиллюстрировано с использованием ссылок на указанные примеры.
Примеры
Пример 1.
Оценка эффективности ингибирования производства или усиления ликвидации белка Р24 путем сверхмалых доз поликлональных антител кролика к СБ4 рецептору (смесь гомеопатических разведений С12+С30+С50) (иЬБ АЬ СБ4 = СМД Ат СБ4) была проведена с использованием мононуклеарных клеток периферической крови человека, инфицированных штаммом Н1У-1-БА1 в экспериментальных условиях.
Мононуклеарные клетки периферической крови человека выделялись из крови серонегативного здорового донора путем центрифугирования на градиенте плотности Нсо11-Нурас|ис. Клетки стимулировались в течение 3 дней с использованием 1 мкг/мл фитогемагглютинина Р и 5 МЕ/мл рекомбинантного интерлейкина-2 человека.
Для оценки эффективности ингибирования производства или усиления ликвидации белка Р24 продукты были помещены в лунку, содержащую 100 мкл активированных мононуклеаров за 24 ч до или 15 мин после инфицирования клеток штаммом Н1У-1-БА1 в дозе 100 ТСГО50 (50 мкл инокулуму штамма Н1У-1-БА1). Перед размещением в лунку СМД Ат СБ4 (сверхмалые дозы антител к СБ4 рецептору) (12,5 мкл) или исходный азидотимидин смешивались со средой ΡΡΜΙ1640 (Б1РСО) для получения конечного объема образца 50 мкл.
Супернатант собирался на 7-й день после заражения клеток. Активность продуктов измеряли путем ингибирования уровня основного нуклеокапсидного белка р24 в супернатанте мононуклеарных клеток периферической крови человека, используя набор Рс1го1ск для ИФА.
Было показано, что СМД Ат СБ4 ингибируют белок Р24 на 86±10% в случае их добавления в лунку за 24 ч до заражения и на 51 ±3% в случае добавления через 15 мин после заражения клеток штаммом Н1У-1-БА1. Таким образом, эта экспериментальная модель продемонстрировала активность сверхмалых доз поликлональных антител кролика к СБ4 (смесь гомеопатических разведений С12+С30+С50) при ингибировании производства или усилении ликвидации белка Р24.
- 11 029791
Перечень последовательностей
<110> Эпштейн Олег Ильич
<120> ФАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ КОМПОЗИЦИЯ И СПОСОБ ИНГИБИРОВАНИЯ ПРОДУКЦИИ ИЛИ УСИЛЕНИЯ ЭЛИМИНАЦИИ БЕЛКА Р24 ВИЧ <140> ЕА2О13ОО138 <141> 2013-02-14
<150> КЦ2010133046
<151> 2010-08-06
<160> 6
<170> ВтББАР 1.0
<210> 1
<211> 458
<212> РРТ
<213> Ното зартепз
<400> 1
Μβΐ АЗП Агд с! у Уа1 РГО рЬе Агд нт 5 ьеи ьеи ьеи Уа1 ьеи С1п ьеи
1 5 10 15
а! а ьеи ьеи Рго а! а а! а тЬг с!п с! у ЬУЗ ьуз Уа! Уа! ьеи с! у ьуз
20 25 30
ьуз с!у АЗр ТЬг Уа! с!и ьеи тЬг Суз ТЬг А1а Бег С1п ьуз ЬУЗ Бег
35 40 45
11е С1п РЬе НТ 5 тгр ьуз АЗП Бег АЗП С1п 11е ьуз 11е ьеи с! у А5П
50 55 60
С1п с!у Бег РЬе ьеи ТЬг ЬУЗ С1у рго Бег ьуз ьеи А5П Азр Агд а! а
65 70 75 80
Азр Бег Агд Агд Бег ьеи тгр А5р с!п С! у А5П РЬе Рго ьеи 11е 11е
85 90 95
ЬУ5 АЗП ьеи Ьуз Пе с!и А5р Бег А5р ТЬг Туг 11е Суз С! и уа! С! и
100 105 110
А5р с!п ьуз с!и с!и Уа1 с!п ьеи ьеи уа! РЬе с! у ьеи ТЬг а! а А5П
115 120 125
Бег АЗр ТЬг НТ 5 ьеи |_еи с!п с!у с!п Бег ьеи тЬг ьеи тЬг ьеи С! и
130 135 140
Бег РГО РГО С1у Бег Бег РГО Бег Уа1 с!п суз Агд Бег РГО Агд С! у
145 150 155 160
ьуз АЗП 11е е!п с!у е!у ьуз тЬг ьеи Бег уа! Бег с!п ьеи с! и ьеи
165 170 175
С1п АЗр Бег с!у ТЬг тгр ТЬг Суз тЬг Уа! ьеи С1п АЗП С1п ЬУЗ ьуз
180 185 190
Уа1 с!и РЬе ЬУЗ 11е Азр 11е уа! уа! ьеи а! а РЬе с!п ЬУЗ А1а Бег
195 200 205
Бег 11е Уа1 туг ьуз ьуз С1и с!у с! и с!п уа! с! и РЬе Бег РЬе РГО
210 215 220
Ьеи А1а РЬе ТЬг Уа1 с!и ьуз ) ьеи ТЬг с! у Бег С! у С! и ьеи тгр тгр
225 23( 235 240
С1п А1а с!и Агд А1а Бег Бег Бег ьуз Бег тгр ) 11е тЬг рЬе А5Р ьеи
245 25( 255
ьуз АЗП ьуз С1и Уа! Бег Уа1 ьуз Агд Уа! ТЬг С1п АЗр РГО ЬУЗ ьеи
260 265 270
С1п Ме1 С1у ЬУЗ ьуз ьеи РГО ьеи нтз ьеи тЬг ьеи РГО с!п А1а ьеи
275 280 285
РГО С1п Туг А1а С1у Бег с1у АЗП ьеи тЬг ьеи а! а ьеи С! и а! а ьуз
290 295 300
тЬг с!у ьуз ьеи нтз б!п С1и Уа! АЗП Ьеи уа! уа! Μεΐ Агд а! а тЬг
305 310 315 320
С1п 1_еи С1п Ьуз Азп Ьеи ТЬг суз С1и Уа! Тгр ) С! у РГО тЬг Бег РГО
325 33( 335
ЬУЗ 1_еи мет ьеи Бег ьеи ЬУЗ ьеи С1и А5П ьуз С! и а! а Ьу5 Уа! Бег
340 345 350
- 12 029791
ьуз Агд С1и ьуз А1а Уа! тгр Уа! ьеи Азп Рго С1и А1а С1у МеС Тгр
355 360 365
С1п Су5 |_еи ьеи 5ег Азр Бег 01 у 01 η Уа! ьеи ьеи 01 и Бег Азп 11 е
370 37Е 380
Ьуз Уа1 ьеи РГО ТКг тгр Бег ТКг Рго Уа1 01 п Рго мес А1а ьеи Не
385 390 395 400
Уа1 ьеи 01 у О1у Уа1 А1а 01 у ьеи ьеи ьеи РКе 11е С1у ьеи С1у Пе
405 410 415
РКе РКе Су5 Уа1 Агд Суз Агд НТ 5 Агд Агд Агд 01 п А1а С1и Агд Мес
420 425 430
5ег С1п 11е ьуз Агд ьеи ьеи Бег 01 и ьуз ьуз ТКг Су 5 01 п Суз Рго
435 440 445
НТЗ Агд РКе 01 η ЬУЗ тКг Суз Бег Рго 11е
450 455
<210> 2
<211> 434 <212> РЯТ <213> Ното зартепз
<400> 2
с1у Ьуз ьуз 1 Уа1 Уа1 5 ьеи 01 у ьуз ьуз 01у Азр ТКг Уа1 10 0'1и ьеи 15 тКг
Суз тКг А1а Бег С1п ьуз ьуз Бег 11е 01п рКе Нтз Тгр ьуз АЗП Бег
20 25 30
Азп с1п 11е Ьуз 11е Ьеи 01 у азп с1п с1у Бег рКе ьеи тКг ьуз С1у
35 40 45
Рго Бег ьуз ьеи Азп Азр Агд А1а Азр Бег Агд Агд Бег ьеи тгр Азр
50 55 60
С1п 01 у Азп рКе Рго ьеи 11е 11е ьуз азп ьеи ьуз 11е С1и АЗр Бег
65 70 75 80
Азр тКг туг 11е Суз С1и уа1 с!и Азр С1п ьуз С1и с1и Уа1 С1п ьеи
85 90 95
ьеи Уа1 РКе С1у ьеи ТКг А1а Азп Бег Азр тКг нтз ьеи ьеи С1п е1у
100 105 110
С1п Бег ьеи тКг ьеи ТКг ьеи о1и Бег рго рго о1у Бег Бег РГО Бег
115 120 125
Уа1 С1п Суз Агд Бег Рго Агд С1у Ьуз Азп 11е С1п с!у С1у Ьуз ТКг
130 135 140
ьеи Бег Уа1 Бег о!п ьеи с!и ьеи о!п Азр Бег с!у тКг тгр тКг Суз
145 150 155 160
тКг уа! ьеи С1п А5П С1п Ьуз ьуз Уа1 С1и РКе ьуз 11е Азр 11 е Уа1
165 170 175
Уа1 ьеи А1а РКе с!п Ьуз А1а Бег Бег 11е Уа1 туг ьуз ьуз С1и С1у
180 185 190
С1и с1п уа! С1и РКе Бег РКе Рго ьеи А1а РКе тКг уа! С1и ьуз ьеи
195 200 205
тКг с!у Бег С1у С1и ьеи тгр тгр с1п А1а с!и Агд А1а Бег Бег Бег
210 215 220
ьуз Бег тгр 11 е тКг РКе Азр ьеи ьуз Азп ьуз С1и Уа! Бег Уа1 ьуз
225 230 235 240
Агд Уа1 тКг 01п Азр РГО ьуз ьеи о!п мес о!у ьуз ьу5 Ьеи РГО Ьеи
245 250 255
нтз ьеи тКг ьеи РГО с!п А1а ьеи рго с!п туг А1а С1у Бег С1у АЗП
260 265 270
ьеи тКг ьеи А1а ьеи С1и А1а ьуз тКг с1у ьуз ьеи нт 5 С1п С1и Уа1
275 280 285
азп ьеи Уа1 Уа1 мес Агд А1а тКг с1п ьеи с1п ьуз Азп ьеи ТКг суз
290 295 300
С1и Уа! тгр 01 у РГО тКг Бег рго ьуз ьеи мес ьеи Бег ьеи Ьуз ьеи
305 310 315 320
С1и Азп Ьуз С1и А1а ьуз Уа1 Бег ьуз Агд С1и ьуз А1а уа1 тгр уа1
325 330 335
ьеи Азп Рго С1и А1а С1у мес тгр С1п Суз ьеи ьеи Бег Азр Бег с1у
340 345 350
С1п Уа1 Ьеи Ьеи С1и Бег Азп ίίе ьуз Уа1 ьеи рго тКг тгр Бег тКг
355 360 365
Рго Уа1 01п РГО мес А1а ьеи 11е Уа! ьеи о1у о!у Уа! А1а с!у ьеи
370 375 380
- 13 029791
Ьеи Ьеи РНе Не С1у Ьеи С1у 11е РЬе РНе суз Уа1 Агд суз Агд нтз
385 390 395 400
Агд Агд Агд С1п А1а С1и Агд Μεΐ Зег С1п 11 е Ьуз Агд ьеи ьеи Зег
405 410 415
С1и Ьуз ьуз тНг Суз с1п суз Рго ΗΪ 5 Агд РНе С1п ьуз ТНг суз Зег
420 425 430
рго 11е
<210> 3
<211> 47
<212> РКТ
<213> Ното зартепз
<400> 3
11е С1у Ьеи с1у 11е РНе РНе суз Уа1 Агд Суз Агд НТ 5 Агд Агд Агд
412 415 420 425
С1п А1а С1и Агд Μβΐ Зег е1п 11е ьуз Агд ьеи ьеи 5ег С1и ьуз ьуз
430 435 440
ТНг Суз С1п Суз Рго Нтз Агд РНе С1п ьуз тНг Суз зег Рго 11е
445 450 455
<210> 4
<211> 36
<212> РКТ
<213> Ното зартепз
<400> 4
С1у 26 ьуз ьуз Уа1 Уа1 30 ьеи С1у ьуз ьуз С1у 35 Азр тНг Уа1 С1и Ьеи 40 тНг
Суз ТНг А1а Зег С1п ьуз ьуз зег 11е С1п РНе нтз Тгр ьуз АЗП Зег
45 50 55
АЗП с!п 11 е ьуз
60
<210> 5
<211> 15
<212> РКТ
<213> Ното зартепз
<400> 5
Азр ТНг туг IIе Суз с1и Уа1 С1и Азр с1п Ьуз с1и с1и Уа1 С1п 91 95 100 105
<210> 6
<211> 25
<212> РКТ
<213> Ното зартепз
<400> 6
Ьуз с1и С1и Уа1 С1п ьеи ьеи Уа1 РНе с!у ьеи ТНг А1а Азп зег Азр 115 120 125 130
тНг нтз ьеи ьеи С1п с1у С1п зег ьеи
135 139
- 14
029791

Claims (6)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Фармацевтическая композиция для ингибирования продукции или усиления элиминации нуклеокапсидного белка Р24 ВИЧ, содержащая активированно-потенцированную форму антитела к полноразмерному СГО4 рецептору или его фрагменту и фармацевтически приемлемые добавки, причем указанная активированно-потенцированная форма антитела приготовлена путем последовательного многократного разведения исходного раствора антитела со встряхиванием каждого разведения по гомеопатической технологии.
  2. 2. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанное антитело направлено к полноразмерному СЭ4-рецептору с последовательностью 8ЕО ГО N0: 1.
  3. 3. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что указанное антитело направлено к фрагменту СГО4-рецептора. имеющему последовательность, выбранную из группы, состоящей из 8Е0 ГО N0: 2, 8ЕО ГО N0: 3, 8ЕО ГО N0: 4, 8ЕО ГО N0: 5, 8ЕО ГО N0: 6.
  4. 4. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что содержит активированнопотенцированную форму антитела к СИ4-рецептору в виде смеси гомеопатических разведений С12, С30 и С50, нанесенных на твердый носитель.
  5. 5. Фармацевтическая композиция по п.1, отличающаяся тем, что содержит активированнопотенцированную форму антитела к СИ4-рецептору в виде смеси гомеопатических разведений С12, С30 и С200, нанесенных на твердый носитель.
  6. 6. Способ ингибирования продукции или усиления элиминации нуклеокапсидного белка Р24 ВИЧ, включающий введение фармацевтической композиции по любому из пп.1-5.
EA201300138A 2010-08-06 2011-07-15 Фармацевтическая композиция и способ ингибирования продукции или усиления элиминации белка p24 вич EA029791B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
RU2010133046/15A RU2517084C2 (ru) 2010-08-06 2010-08-06 Способ и средство для ингибирования продукции или усиления элиминации белка р24
PCT/IB2011/002355 WO2012017322A2 (en) 2010-08-06 2011-07-15 Pharmaceutical composition and method of inhibiting of production or amplifying elimination of p24 protein

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201300138A1 EA201300138A1 (ru) 2014-03-31
EA029791B1 true EA029791B1 (ru) 2018-05-31

Family

ID=44899160

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201300138A EA029791B1 (ru) 2010-08-06 2011-07-15 Фармацевтическая композиция и способ ингибирования продукции или усиления элиминации белка p24 вич

Country Status (15)

Country Link
US (2) US20120263726A1 (ru)
JP (1) JP2013535483A (ru)
CN (1) CN103179987A (ru)
AU (1) AU2011287286A1 (ru)
CA (1) CA2807523A1 (ru)
DE (1) DE112011102639T5 (ru)
EA (1) EA029791B1 (ru)
ES (1) ES2415029R1 (ru)
GB (1) GB2496356A (ru)
IT (1) ITTO20110636A1 (ru)
MX (1) MX2013001450A (ru)
RU (1) RU2517084C2 (ru)
SG (1) SG187735A1 (ru)
UA (1) UA112752C2 (ru)
WO (1) WO2012017322A2 (ru)

Families Citing this family (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2181297C2 (ru) 2000-06-20 2002-04-20 Эпштейн Олег Ильич Способ лечения патологического синдрома и лекарственное средство
RU2309732C1 (ru) * 2006-03-13 2007-11-10 Олег Ильич Эпштейн Спрессованная твердая оральная форма лекарственного препарата и способ получения твердой оральной формы лекарственного препарата
EP2593474A2 (en) 2010-07-15 2013-05-22 Oleg Iliich Epshtein Combination pharmaceutical composition and methods of treating diseases or conditions associated with neurodegenerative diseases
EP2593140A2 (en) 2010-07-15 2013-05-22 Oleg Iliich Epshtein A method of increasing the effect of an activated-potentiated form of an antibody
MX2013000807A (es) 2010-07-21 2013-10-28 Oleg Iliich Epshtein Un metodo para el tratamiento del trastorno de hiperactividad con deficit de atencion.
RU2013111961A (ru) 2013-03-18 2014-09-27 Олег Ильич Эпштейн Способ определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем
RU2013111962A (ru) 2013-03-18 2014-09-27 Олег Ильич Эпштейн Способ определения выраженности модифицирующей активности, ассоциированной с носителем
RU2603623C2 (ru) * 2014-06-06 2016-11-27 Олег Ильич Эпштейн Ветеринарная композиция и способ улучшения жизнеспособности животных, стимуляции прироста живой массы млекопитающих и птиц, повышения эффективности иммунизации, профилактики и/или лечения инфекционных заболеваний (варианты)

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003055518A1 (fr) * 2001-12-26 2003-07-10 Goldberg, Evgeny Danilovich Procede de traitement d'etats immuno-pathologiques et medicament correspondant
US20100166762A1 (en) * 2000-06-20 2010-07-01 Oleg Iliich Epshtein Method of treating a pathological syndrome

Family Cites Families (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4311897A (en) 1979-08-28 1982-01-19 Union Carbide Corporation Plasma arc torch and nozzle assembly
DE4236069A1 (de) * 1992-10-26 1994-04-28 Werner Dr Bergmann Arzneimittel, insbesondere für orale Einnahme
US5567604A (en) * 1993-04-23 1996-10-22 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-viral guanosine-rich oligonucleotides
KR100667121B1 (ko) * 1996-10-10 2007-01-12 프로브 인터내쇼날 바이러스 감염증 치료를 위한 조성물 및 방법
WO2001016182A2 (en) * 1999-08-27 2001-03-08 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services POLYPEPTIDES THAT BIND HIV gp120 AND RELATED NUCLEIC ACIDS, ANTIBODIES, COMPOSITIONS, AND METHODS OF USE
WO2001043779A2 (en) * 1999-12-16 2001-06-21 Tanox, Inc. Anti-hiv-1 conjugates for treatment of hiv disease
AU2003246119B2 (en) * 2002-06-28 2008-02-21 Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. Anti-HIV agent
UA76638C2 (en) 2002-08-02 2006-08-15 Oleh Illich Epshtein Homeopathic medication based on anti-interferon antibodies and method for treating a pathological syndrome associated with interferon
UA76641C2 (ru) 2002-08-02 2006-08-15 Олєг Ільіч Епштєйн Гомеопатическое лекарственное средство и способ лечения заболеваний предстательной железы
CN100341573C (zh) * 2002-09-27 2007-10-10 唐纳士公司 用于预防和治疗获得性免疫缺陷综合症的协同组合物
GB2414670B (en) 2003-03-14 2008-03-19 Nutrition Res Inc Homeopathic formulations useful for treating pain and/or inflammation
RU2393873C2 (ru) * 2005-05-02 2010-07-10 Майметикс Корпорейшн Антитело или его фрагмент, имеющие нейтрализующую активность в отношении вич, но не в отношении il2
RU2315058C1 (ru) * 2006-09-27 2008-01-20 Институт органической химии Уфимского научного центра РАН Гликопептид глицирризиновой кислоты с глицил-l-фенилаланином, проявляющий анти-вич-1 активность
US20120263725A1 (en) * 2010-08-06 2012-10-18 Epshtein Oleg Iiiich Pharmaceutical composition and methods of treating and preventing the diseases caused by HIV or associated with HIV

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20100166762A1 (en) * 2000-06-20 2010-07-01 Oleg Iliich Epshtein Method of treating a pathological syndrome
WO2003055518A1 (fr) * 2001-12-26 2003-07-10 Goldberg, Evgeny Danilovich Procede de traitement d'etats immuno-pathologiques et medicament correspondant

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JONAS WAYNE B ET AL: "A critical overview of homeopathy.", ANNALS OF INTERNAL MEDICINE, AMERICAN COLLEGE OF PHYSICIANS, NEW YORK, NY; US, vol. 138, no. 5, 4 March 2003 (2003-03-04), NEW YORK, NY; US, pages 393 - 399, XP002355318, ISSN: 0003-4819 *
SHANG, A. HUWILER-MUNTENER, K. NARTEY, L. JUNI, P. DORIG, S. STERNE, J.A. PEWSNER, D. EGGER, M.: "Are the clinical effects of homoeopathy placebo effects? Comparative study of placebo-controlled trials of homoeopathy and allopathy", THE LANCET (LETTERS TO THE EDITOR), THE LANCET PUBLISHING GROUP, GB, vol. 366, no. 9487, 27 August 2005 (2005-08-27), GB, pages 726 - 732, XP005043950, ISSN: 0140-6736, DOI: 10.1016/S0140-6736(05)67177-2 *
STEPHANIE PLANQUE, SALAS MARIA, MITSUDA YUKIE, SIENCZYK MARCIN, ESCOBAR MIGUEL A, MOONEY JASON P, MORRIS MARY-KATE, NISHIYAMA YASU: "Neutralization of genetically diverse HIV-1 strains by IgA antibodies to the gp120–CD4-binding site from long-term survivors of HIV infection", AIDS, vol. 24, no. 6, 1 March 2010 (2010-03-01), pages 875 - 884, XP055018578, ISSN: 02699370, DOI: 10.1097/QAD.0b013e3283376e88 *
VICKERS A J: "CLINICAL TRIALS OF HOMEOPATHY AND PLACEBO: ANALYSIS OF A SCIENTIFIC DEBATE", JOURNAL OF ALTERNATIVE AND COMPLEMENTARY MEDICINE, MARY ANN LIEBERT, NEW YORK, NY,, US, vol. 06, no. 01, 1 February 2000 (2000-02-01), US, pages 49 - 56, XP008055722, ISSN: 1075-5535 *

Also Published As

Publication number Publication date
GB201303865D0 (en) 2013-04-17
MX2013001450A (es) 2013-10-25
UA112752C2 (uk) 2016-10-25
CA2807523A1 (en) 2012-02-09
RU2010133046A (ru) 2012-02-20
WO2012017322A3 (en) 2012-04-19
SG187735A1 (en) 2013-03-28
EA201300138A1 (ru) 2014-03-31
US20130315964A1 (en) 2013-11-28
WO2012017322A2 (en) 2012-02-09
JP2013535483A (ja) 2013-09-12
DE112011102639T5 (de) 2013-10-02
ES2415029R1 (es) 2013-09-17
ES2415029A8 (es) 2013-09-16
US20120263726A1 (en) 2012-10-18
CN103179987A (zh) 2013-06-26
RU2517084C2 (ru) 2014-05-27
GB2496356A (en) 2013-05-08
ITTO20110636A1 (it) 2012-02-07
ES2415029A2 (es) 2013-07-23
AU2011287286A1 (en) 2013-03-14

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA029791B1 (ru) Фармацевтическая композиция и способ ингибирования продукции или усиления элиминации белка p24 вич
AU2011287292B2 (en) Combination pharmaceutical composition and methods of treating and preventing the infectious diseases
KR100547049B1 (ko) 바이러스 감염증 치료를 위한 조성물 및 방법
EA029436B1 (ru) Комбинированная фармацевтическая композиция для лечения рассеянного склероза и инфекционных заболеваний, сопровождающихся нейротоксическими нарушениями, и способы лечения указанных заболеваний
RU2535033C2 (ru) Лекарственное средство и способ профилактики инфицирования вич, профилактики и лечения заболеваний, вызываемых вич или ассоциированных с вич, в том числе спида
US20120263725A1 (en) Pharmaceutical composition and methods of treating and preventing the diseases caused by HIV or associated with HIV
US20120294899A1 (en) Pharmaceutical composition and methods of treating and preventing the diseases caused by HIV or associated with HIV
US20130171161A1 (en) Method and composition for the treatment of diseases caused by or associated with hiv
JPS63294795A (ja) ヒト免疫不全ウイルス（ｈｉｖ）の検出と治療のための方法および物質
EA032021B1 (ru) Фармацевтическая композиция и способ лечения и профилактики заболеваний, вызванных и/или ассоциированных с вич
RU2542414C2 (ru) Лекарственное средство для лечения эректильных дисфункций и способ лечения эректильных дисфункций
RU2531049C2 (ru) Лекарственное средство для лечения заболеваний предстательной железы и способ лечения заболеваний предстательной железы
RU2441023C1 (ru) Лекарственное средство для лечения рассеянного склероза и способ лечения рассеянного склероза

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU