ES2243572T3 - Composicion farmaceutica que comprende un ester de acido 5-aminolevulinico como agente fotoquimioterapeutico y un agente mucoadhesivo. - Google Patents

Abstract

Una composición farmacéutica que comprende un agente fotoquimioterapéutico y un agente mucoadhesivo, donde dicho agente fotoquimioterapéutico es un éster de ALA o derivado del mismo, opcionalmente con al menos un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptables.

Description

Composición farmacéutica que comprende un éster de ácido 5-aminolevulínico como agente fotoquimioterapéutico y un agente mucoadhesivo.

La presente invención se refiere a composiciones farmacéuticas para uso en el tratamiento o diagnóstico de trastornos o anormalidades de las superficies del cuerpo revestidas de epitelio, particularmente las superficies revestidas de mucosa, por fotoquimioterapia con ésteres de ALA o derivados del mismo en combinación con agentes mucoadhesivos.

La fotoquimioterapia o terapia fotodinámica (PDT) como también es conocida, es una técnica para el tratamiento de varias anormalidades o trastornos de la piel u otros órganos del epitelio, especialmente lesiones cancerosas o precancerosas, así como ciertas lesiones no malignas, por ejemplo alteraciones de la piel tales como la soriasis.

La fotoquimioterapia envuelve la aplicación de agentes fotosensibilizantes (fotoquimioterapéuticos) al área afectada del cuerpo, seguido por la exposición a la luz fotoactivante para activar los agentes fotosensibilizantes y convertirlos en la forma citotóxica, en donde las células afectadas son eliminadas o su potencial proliferativo disminuido.

Se conocen un número de agentes fotosensibilizantes, que incluyen principalmente los psoralenos, las porfirinas, las clorinas y las ftalocianinas. Dichos fármacos se convierten en tóxicos cuando se exponen a la luz.

Los fármacos fotosensibilizantes pueden ejercer sus efectos por una variedad de mecanismos, directa o indirectamente. Así, por ejemplo, ciertos fotosensibilizantes se convierten directamente en tóxicos cuando se activan por la luz, mientras que otros actúan generando especies tóxicas, por ejemplo agentes oxidantes tales como oxígeno monomolecular u otros radicales libres derivados del oxígeno, que son extremadamente destructivos para el material celular y biomoléculas tales como lípidos, proteínas y ácidos nucleicos.

Los psoralenos son un ejemplo de fotosensibilizantes que actúan directamente; con la exposición a la luz forman aductos y entrecruzamientos entre las dos hebras de las moléculas de DNA, inhibiendo por tanto la síntesis de DNA. El riesgo desafortunado de esta terapia es que pueden ocurrir efectos secundarios mutagénicos y carcinogénicos no deseados.

Esta desventaja puede evitarse seleccionando los fotosensibilizantes con un modo de actuación alternativo indirecto. Por ejemplo, las porfirinas, que actúan indirectamente por generación de especies oxigenadas tóxicas, no tienen ningún efecto mutagénico secundario y representan los candidatos más favorables para la fotoquimioterapia. Las porfirinas son precursores naturales en la síntesis de la hemo. En particular, la hemo se produce cuando el hierro (Fe^{3+}) se incorpora en la protoporfirina IX (Pp) por la acción de la enzima ferroquelatasa. La Pp es un fotosensibilizante extremadamente potente, mientras que la hemo no tiene ningún efecto fotosensibilizante.

Uno de tales fármacos basados en la porfirina, Photofrin®, ha sido recientemente aprobado como fotosensibilizante en la terapia de ciertos cánceres. La principal desventaja es que como tiene que administrarse por vía parenteral, generalmente intravenosa, puede causar fotosensibilización en la piel que puede durar varias semanas después de la inyección i.v. El Photofrin® consiste en oligómeros grandes de porfirina y no penetra fácilmente la piel cuando se aplica por vía tópica. Problemas similares existen con otros fotosensibilizantes basados en porfirinas tales como los llamados "derivados hematoporfirínicos" (Hpd) que se han descrito también para uso en la fotoquimioterapia del cáncer (véase por ejemplo S. Dougherty. J. Natl. Cancer Ins., 1974, 52; 1333; Kelly y Snell, J. Urol, 1976, 115: 150). La Hpd es una mezcla compleja obtenida por tratamiento de la hematoporfirina con ácido acético y ácido sulfúrico, a continuación el producto acetilado se disuelve en un medio alcalino. Claramente, hay desventajas usando una mezcla indefinida como fármaco. Además ya que la Hpd tiene que administrarse por inyección, sufre del mismo tipo de inconvenientes de fotosensibilización no deseada que el Photofrin®.

Para obviar estos problemas, se han investigado los precursores de Pp en relación con su potencial fotoquimioterapéutico. En particular se ha investigado el precursor de Pp ácido 5-aminolevulínico (ALA) como un agente fotoquimioterapéutico para ciertos cánceres de la piel. ALA, que se forma a partir de la succinil CoA y la glicina en la primera etapa de la síntesis de la hemo, puede hasta cierto punto penetrar la piel y conducir a una acumulación localizada de Pp; ya que la formación de la ferroquelatasa (la metaloenzima) es la etapa limitante de la velocidad en la síntesis de la hemo, un exceso de ALA conduce a la acumulación de Pp, el agente fotosensibilizante. Así, mediante la aplicación tópica de ALA a los tumores de la piel, y después de la exposición durante varias horas de los tumores a la luz, puede obtenerse un efecto fotoquimioterapéutico beneficioso (véase por ejemplo el documento de patente internacional WO91/01727). Puesto que la piel que cubre los carcinomas de células escamosas y basilomas es más fácilmente penetrada por ALA que la piel sana, y puesto que la concentración de ferroquelatasa es baja en los tumores de la piel, se ha encontrado que la aplicación tópica de ALA conduce a una producción aumentada selectiva de Pp en los tumores.

Sin embargo, la fotoquimioterapia con ALA no es siempre enteramente satisfactoria. ALA no puede penetrar todos los tumores y otros tejidos con suficiente eficacia para permitir el tratamiento de una gama variada de tumores u otras condiciones y ALA tiende también a ser inestable en las formulaciones farmacéuticas. Estos problemas han sido, hasta cierto punto, resueltos con el uso de los ésteres de ALA que muestran ventajas tales como mejor selectividad por los tejidos anormales, localización no sistémica de los agentes administrados, mejor disponibilidad y producción de PpTX y sensación de dolor reducida en la administración (véase los documentos de patente internacional WO 98/30242 y WO 96/28412). La base de datos Xfire, registros 3060978, 5347132, 5499790, 5620924, 5633390, 5991317 y 6517740 (Beilstein); Cosmo Sogo Kenkyusho KK, Resumen de patente de Japón, Vol 16; Nº. 156 (C-0930), 16. 4. 1992; documento de patente europea EP-A-316179 (Tokuyama Soda KK); documento de patente del Reino Unido GB-A-2058077 (Hudson et al) y documento de patente alemana DE-A-2411382 (Boehringer Sohn Ingelheim) describen derivados de ésteres alquílicos del ácido 5-aminolevulínico, y derivados y sales del mismo y procedimientos para su preparación.

Sin embargo, estos compuestos todavía tienen algunas limitaciones para tratar todas las anormalidades o trastornos y hay por tanto todavía una necesidad de mejores agentes fotoquimioterapéuticos para tratar anormalidades o trastornos.

La presente invención está dirigida a esta necesidad y en particular tiene el objetivo de proporcionar agentes fotoquimioterapéuticos en composiciones que muestran propiedades mejoradas para el tratamiento de superficies del cuerpo revestidas de epitelio, particularmente superficies revestidas de mucosa.

Sorprendentemente se ha encontrado ahora que el uso de agentes bioadhesivos, particularmente agentes mucoadhesivos, en combinación con ésteres de ALA o derivados del mismo como agentes fotoquimioterapéuticos ofrece ventajas significativas en el tratamiento y diagnóstico de anormalidades, trastornos o alteraciones de las superficies del cuerpo revestidas de epitelio, particularmente las superficies revestidas de mucosa.

Los bioadhesivos son una clase de moléculas que se sabe que interaccionan con los materiales de naturaleza biológica durante un periodo extendido de tiempo por fuerzas interfaciales que originan la fijación a una localización biológica específica. La unión se logra por mecanismos complejos no específicos, generalmente vía enlaces no covalentes tales como fuerzas electrostáticas, fuerzas de van der Waals, enlaces de hidrógeno e interacciones hidrófóbas. (Para revisiones de la materia véase por ejemplo Lehr, 1996, Eur. J. Drug Metab. Pharmacokin., 21 (2), p139-148; Lehr, 1994, Crit. Rev. Therap. Drug Carrier Syst., 11 (2 y 3), p119-160.)

Los agentes mucoadhesivos son una clase especial de agentes bioadhesivos que se unen a la mucosa, particularmente la glicoproteína mucina que está presente en la capa de la mucosa. La mucosa se produce en los ojos, oído, nariz y boca. También está revistiendo los tractos respiratorio, gastrointestinal y reproductivo primariamente para protección y lubricación. La membrana de la mucosa (o mucosa) puede ser de espesor variable y puede ser suave o rugosa y puede estar cubierta de vellosidades, microvellosidades o cilios.

Generalmente la unión de los mucoadhesivos a la mucina es suficientemente fuerte para que la eliminación ocurra primeramente a través del reemplazamiento de la mucina, esto es, el enlace mucina- mucina es más débil que el mucina- mucoadhesivo. Además, algunos agentes que exhiben afinidad por la superficie de las mucosas se unen a las células del epitelio que yacen debajo de la capa de la mucosa, por ejemplo lectinas, por medio de receptores específicos que median las interacciones. Como se utiliza aquí, "agentes mucoadhesivos" se refiere a agentes que tienen afinidad por la superficie de la mucosa, por ejemplo, se adhieren a esa superficie a través de la formación de enlaces (generalmente de naturaleza no covalente), si el enlace ocurre a través de interacción con la mucosa y/o las células de debajo.

En un primer aspecto, la presente invención proporciona una composición, preferiblemente una composición farmacéutica, que comprende un éster de ALA o un derivado del mismo como un agente quimioterapéutico y un agente mucoadhesivo, como se describe aquí, opcionalmente con al menos un agente adyuvante para la penetración de la superficie y opcionalmente con uno o más agentes quelantes, opcionalmente con al menos un vehículo o excipientes farmacéuticamente aceptables. Se apreciará de esta discusión que el agente mucoadhesivo puede en si mismo comprender el vehículo o excipiente y así en esos casos, un vehículo adicional o excipiente puede opcionalmente estar presente.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona una composición farmacéutica para su uso como medicamento, preferiblemente para el tratamiento o diagnóstico de trastornos o anormalidades de las superficies revestidas de epitelio, preferiblemente superficies revestidas de mucosa, que comprende un éster de ALA o un derivado del mismo como agente fotoquimioterapéutico con un agente mucoadhesivo, opcionalmente con al menos un agente adyuvante para la penetración de la superficie y opcionalmente con uno o más agentes quelantes. Esto logra aumentar la fotoquimioterapia cuando se compara con el uso de los agentes fotoquimioterapéuticos solos.

Desde un punto de vista alternativo, la invención puede considerarse que proporciona el uso de un éster de ALA o un derivado del mismo como agente fotoquimioterapéutico junto con un mucoadhesivo, opcionalmente con al menos un agente adyuvante para la penetración de la superficie y opcionalmente con uno o más agentes quelantes en la preparación de una composición para el tratamiento o diagnóstico de trastornos o anormalidades de las superficies revestidas de epitelio, preferiblemente superficies revestidas de mucosa.

Como se mencionó anteriormente, la invención se extiende a nuevas composiciones de ésteres de ALA o derivados de los mismos como agentes fotoquimioterapéuticos y mucoadhesivos, opcionalmente con al menos un agente adyuvante para la penetración de la superficie y opcionalmente con uno o más agentes quelantes. Estos diferentes componentes de la composición pueden administrarse por rutas diferentes y/o a tiempos diferentes. Así, visto desde un aspecto adicional, la invención proporciona un producto que comprende un éster de ALA o un derivado del mismo como un agente fotoquimioterapéutico y un mucoadhesivo, opcionalmente con al menos un agente adyuvante para la penetración de la superficie y opcionalmente uno o más agentes quelantes como una preparación combinada para uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento o diagnóstico de trastornos o anormalidades de las superficies revestidas de epitelio, preferiblemente revestidas de mucosa.

Además forma un aspecto adicional de la invención, el uso de un éster de ALA o un derivado del mismo como un agente fotoquimioterapéutico y mucoadhesivo, opcionalmente con al menos un agente adyuvante para la penetración de la superficie y opcionalmente uno o más agentes quelantes en la preparación de un producto de uso simultáneo, separado o secuencial en el tratamiento o diagnóstico de trastornos o anormalidades de las superficies revestidas de epitelio, preferiblemente superficies revestidas de mucosa.

Tal como se usa aquí, "agente fotoquimioterapéutico" se refiere a ésteres de ALA o derivados del mismo que son fotosensibles, por ejemplo, fotosensibilizantes y a los que por la aplicación de luz fotoactivante se convierten a una forma citotóxica o dan lugar a una especie citotóxica.

"Derivados" incluyen las sales farmacéuticamente aceptables y agentes químicamente modificados. Preferiblemente, los ésteres de ALA y sus derivados comprenden un compuesto de la fórmula general I,

(I)R^{2}{}_{2}N-CH_{2}COCH_{2}-CH_{2}CO-OR^{1}

(en donde

R^{1} y R^{2} cada uno independientemente representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo lineal, ramificado o cíclico opcionalmente sustituido que puede opcionalmente ser interrumpido por uno o más grupos -O-, NR^{3}-, -S- o PR^{3}-, con el provisto de que R^{1} es diferente de hidrógeno; y

R^{3} es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1-6} y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos.

Como se usa aquí, a menos que se especifique de otra forma, el término "alquilo" incluye cualquier cadena larga o corta, grupo hidrocarburo lineal, ramificado o cíclico, alifático, saturado o insaturado opcionalmente mono o polisustituido por grupos hidroxi, alcoxi, aciloxi, nitro, alcoxicarboniloxi, amino, aril, oxo, halo (por ejemplo fluoro o cloro), grupos -SR^{3}, NR^{3}_{2}, o PR^{3}_{2} (en los que R^{3} es como se definió anteriormente). Los grupos alquilo insaturados pueden ser mono o poliinsaturados e incluye ambos grupos alquenilos y alquinilos. Dichos grupos pueden contener hasta 40, pero preferiblemente 30, por ejemplo de 7 a 30 átomos de carbono. Sin embargo, los grupos alquilo que contienen hasta 20, por ejemplo hasta 10, o sea de 3 a 10 átomos de carbono, más preferiblemente de 6 a 8 átomos de carbono son los preferidos. En particular, se prefieren los hidrocarburos saturados de cadena lineal que tienen hasta 10 átomos de carbono, por ejemplo grupos hexilo, heptilo u octilo. Los alquilos inferiores tales como metilo, etilo y propilo pueden, sin embargo, usarse alternativamente.

Como se usa aquí los anillos heterocíclicos son preferiblemente C_{6-7} y opcionalmente contienen uno o más heteroátomos adicionales seleccionados de oxígeno, nitrógeno y azufre.

Los grupos alquilo sustituidos pueden estar mono o polisustituidos. Así grupos adecuados R^{1} y R^{2} incluyen por ejemplo alquilo no sustituido, alcoxialquilo, hidroxialcoxialquilo, polihidroxialquilo, hidroxipolialquilenoxialquilo, oxialquilo, polioxialquilo y semejantes.

El término "acil" como se usa aquí incluye ambos grupos carboxilato y carbonato, así, los grupos alquilo sustituidos por el grupo aciloxi incluyen por ejemplo alquilcarboniloxialquilo. En tales grupos cualquiera de los restos de alquileno tienen preferiblemente los átomos de carbono como se definió aquí para los grupos alquilo.

Los grupos R^{1} alquílicos sustituidos preferidos incluyen aquellos que llevan uno o más grupos oxígeno, preferiblemente grupos alquilo C_{4-12} de cadena lineal, (por ejemplo alquilo C_{8-10}), sustituidos por uno, dos o tres (preferiblemente dos o tres) grupos oxígeno. Ejemplos de tales grupos incluyen los grupos 3,6-dioxo-1-octilo y 3,6,9-trioxo-1-decanoilo.

Los grupos R^{1} alquilo particularmente preferidos que pueden estar presentes en los compuestos de la fórmula I incluyen alquilo C_{1-6}, preferiblemente alquilo C_{1-4}, particularmente preferiblemente alquilo C_{1} o C_{4} (por ejemplo metilo) sustituidos (preferiblemente terminalmente sustituidos) por un grupo arilo. Los grupos arilo preferidos incluyen fenilo, difenilo y monocíclicos de 5-7 miembros por ejemplo heteroaromáticos de 5 o 6 miembros especialmente fenilo y tales grupos pueden ellos mismos opcionalmente estar sustituidos, por ejemplo por uno o más (por ejemplo uno o dos) grupos alquilo C_{1-6} (preferiblemente alquilo C_{1-4}, por ejemplo metilo), alcoxi (por ejemplo metoxi), nitro, fluoro, cloro o trifluorometilo. Grupos heteroaromáticos adecuados incluyen aquellos que contienen al menos un heteroátomo seleccionado de oxígeno, azufre y nitrógeno. Un grupo heteroaromático preferido es piridina.

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Grupos alquilo sustituidos R^{1} y R^{2} representativos incluyen alcoximetilo, alcoxietilo y alcoxipropilo o grupos aciloximetilo, aciloxietilo y aciloxipropilo por ejemplo pivaloiloximetilo.

Los compuestos preferidos para el uso según la invención incluyen aquellos donde R^{1} y/o R^{2}, preferiblemente R^{1} representa un grupo alquilo no sustituido o un grupo alquilo sustituido por arilo (por ejemplo un grupo bencilo), en el que el grupo arilo mismo puede también estar sustituido como se describió aquí. Especialmente, R^{1} es un grupo alquilo C_{1-16}, por ejemplo un grupo alquilo C_{6} o un grupo bencilo, ambos grupos pueden estar opcionalmente sustituidos. Particularmente preferible los ésteres de ALA son compuestos en los que R^{1} es como se describió anteriormente, y en el N terminal ambos grupos R^{2} son átomos de hidrógeno.

Los ésteres de ALA no derivatizados (o sea cuando R^{1} no es un átomo de hidrógeno) también forman agentes fotoquimioterapéuticos preferidos.

Particularmente preferidos para el uso en la invención son aquellos compuestos de la fórmula I en los que R^{1} representa un grupo alquilo no sustituido (por ejemplo alquilo C_{1-6}) o un grupo alquilo (por ejemplo C_{1-2}) sustituido por un grupo arilo (por ejemplo fenilo) y/o cada R^{2} representa un átomo de hidrógeno.

Compuestos de la fórmula I especialmente preferidos incluyen éster de 1-metilpentil ALA, éster de p-isopropilbencil ALA, éster de p-metilbencil ALA, éster de bencil ALA, éster de 2-feniletil ALA, éster de hexil ALA, éster de ciclohexil ALA, éster de 4-metilpentil ALA, éster de p-[trifluorometil]bencil ALA, éster de p-[t-butil]bencil ALA, éster de p-nitrobencil ALA, éster de 1-etilbutil ALA, éster de 2 metilpentil ALA, éster de 4-fenilbutil ALA, éster de p-fluorobencil ALA, éster de 3,3-dimetil-1-butil ALA, éster de 2-fluorobencil ALA, éster de 2,3,4,5,6-pentafluorobencil ALA, éster de 4-clorobencil ALA, éster de 2-metoxietil ALA, éster de 3-nitrobencil ALA, éster de 3,4-[di-cloro)bencil ALA, éster de 3,6-dioxo-1-octil ALA, éster de 3-fluorobencil ALA, éster de 3, 6, 9-trioxo-1-decil ALA, éster de 3-piridinilmetil ALA, éster de 4-difenil-metil ALA, éster de 4-metoxi-bencil ALA, éster de 2-metilbencil ALA, bencil-5-[(1-acetiloxietoxi)-carbonil]amino levulinato, y éster de 3-metilbencil ALA.

Los más preferidos para el uso en el método de la invención son 5-ALA, éster metílico de 5-ALA, éster hexílico de 5-ALA y éster bencílico de 5-ALA.

Los compuestos fotoquimioterapéuticos de la invención mencionados anteriormente pueden prepararse usando procesos estándares y procedimientos bien conocidos en la técnica. Por ejemplo, en el caso de esterificación de compuestos estos pueden envolver protección y desprotección de los grupos adecuados de forma que solamente los grupos requeridos permanecen activos y toman parte en la reacción en las condiciones de esterificación. Los métodos apropiados para la preparación de los ésteres de ALA se describen en el documento de patente internacional WO96/28412.

Como se mencionó anteriormente, el éster de ALA o derivado del mismo como agentes fotoquimioterapéuticos usados en las composiciones de la invención pueden tener la forma de sales farmacéuticamente aceptables. Tales sales preferiblemente son sales de adición de ácido con ácidos orgánicos o inorgánicos fisiológicamente aceptables. Los ácidos adecuados incluyen, por ejemplo, ácidos hidroclorhídrico, hidrobromhídrico, sulfúrico, fosfórico, acético, láctico, cítrico tartárico, succínico, maleico, fumárico y ascórbico. Las sales hidrófobas pueden también convenientemente producirse, por ejemplo, por precipitación. Las sales apropiadas incluyen, por ejemplo, acetato, bromuro, cloruro, citrato, hidrocloruro, maleato, mesilato, nitrato, fosfato, sulfato, tartrato, oleato, estearato, tosilato, de calcio, de meglumina y sales de potasio y sodio. Procedimientos para la formación de la sal son convencionales en la técnica.

Los agentes mucoadhesivos que pueden usarse en las composiciones de la invención pueden ser naturales o sintéticos, polianiónicos, policatiónicos o neutros, solubles en agua o insolubles en agua, pero son preferiblemente grandes (por ejemplo tienen un peso molecular de 500 a 3.000 kDa, por ejemplo 1.000 a 2.000 kDa), entrecruzados, insolubles en agua ( por ejemplo que contienen 0,05 a 2%, por ejemplo 0,75 a 1,5% de entrecruzado por peso de polímero total, antes de cualquier grado de hidratación), y son polímeros que se hinchan en agua capaces de formar enlaces de hidrógeno. Preferiblemente los mucoadhesivos según la invención tienen una fuerza mucoadhesiva mayor de 100 especialmente preferiblemente mayor de 120, particularmente mayor de 150, como se establece según el método de Smart et al., 1984, J. Pharm. Pharmacol., 36, p295-299, expresada como un porcentaje relativo a un estándar in vitro.

Mucoadhesivos apropiados incluyen, pero no están limitados a los polímeros basados en contenidos de poli(ácido carboxílico), tales como ácido poli(acrílico, maleico, itacónico, citracónico, hidroxietilmetacrílico o metacrílico) que tienen grupos de enlace de hidrógeno fuertes, o derivados de los mismos tales como sales y ésteres. Alternativamente, pueden usarse derivados de celulosa tales como metilcelulosa, etilcelulosa, metiletilcelulosa, hidroximetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxi-propilcelulosa, hidroxietiletilcelulosa, carboximetilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa o ésteres de celulosa o éteres o derivados o sales de los mismos. Otro polímeros naturales o sintéticos pueden también usarse como gomas, por ejemplo goma de xantán, goma de guar, goma de garrofín, gomas de tragacanto, goma de Baraya, goma de ghatti, goma de cholla, goma de semilla de lino (psillium) y goma arábiga; arcillas como arcillas de manomorillonita, por ejemplo Veegun, arcilla de attapulgite; polisacáridos tales como dextrano, pectina, amilopectina, agar, mannan o ácido poligalactónico o almidones tales como hidroxipropilalmidón o almidón de carboximetilo; formulaciones lipófilas que contienen polisacáridos, por ejemplo Orabase (Bristol Myers Squibb); carbohidratos tales como los polisustituidos con grupos como sulfatos, fosfatos, sulfonatos o fosfonatos, por ejemplo octasulfato de sacarosa; polipéptidos tales como caseína, gluten, gelatina, adhesivo de fibrina; quitosán (lactato o glutamato) o carboximetilquitina; glicosaminaglicanos tales como ácido hialurónico; metales o sales solubles en agua del ácido algínico tales como alginato de sodio o alginato de magnesio; escleroglucan; adhesivos que contienen óxido de bismuto u óxido de aluminio; aterocolágeno; polímeros de polivinilo tales como alcoholes polivinílicos, éteres polivinilmetílicos, polivinilpirrolidona, polímeros de vinilo policarboxilados (tales como ácido poliacrílico como se mencionó anteriormente); polixilixanos; poliéteres; óxidos de polietileno y glicoles; polialcoxis y poliacrilamidas y derivados y sales de los mismos.

Pueden también usarse los mucoadhesivos que se unen a la capa de las células del epitelio que yace debajo de la capa de la mucosa. Esto permite una adhesión más duradera y específica debido a la relativamente lenta sustitución de las células del epitelio comparadas con las de la mucosa (días frente a horas). Así por ejemplo, las interacciones mediadas por el receptor pueden alcanzarse usando lecitinas de planta o de bacteria, por ejemplo, (glico)proteínas de origen no inmunológico que se unen a polisacáridos o glicoconjugados, que específicamente se unen a restos de azúcar de la membrana de la célula del epitelio. También pueden usarse las llamadas lecitinas "reversas" de mamíferos en los que los receptores en la célula del epitelio se unen a azúcares del agente que se añade. Otros bioadhesivos (por ejemplo factores de adhesión o invasión, por ejemplo adhesinas o invasinas bacterianas que se unen a las integrinas) de bacteria o virus pueden usarse para el tratamiento de tejidos particulares, fenotipos, trastornos etc ya que se unen a ciertas células del epitelio solamente.

Los mucoadhesivos poliméricos anteriormente descritos pueden también estar entrecruzados y pueden estar en forma de copolímeros. Preferiblemente se emplean los polímeros del ácido poli(acrílico) (o copolímeros, por ejemplo con éteres alílicos o acrilatos bi- o polifuncionales que hacen el polímero insoluble), que preferiblemente se han entrecruzado, por ejemplo usando un polialquenilpoliéter, que tienen un peso molecular alto y son tixotrópicos. Mucoadhesivos adecuados de este tipo están comercializados (por ejemplo por Goodrich) como polycarbofil, por ejemplo Noveon AA-1, carbomer (Carbopol), por ejemplo Carbopol EX165, EX214, 434, 910, 934, 934P, 940, 941, 951, 974P y 1342.

Algunos de los mucoadhesivos preferidos para el uso en las composiciones de la invención incluyen así, hidrogeles poliacrílicos, quitosán, alcohol polivinílico, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato sódico, escleroglucan, goma de xantan, pectina, orabase y ácido poligalactónico.

Los mucoadhesivos anteriormente mencionados pueden prepararse usando procesos estándares y procedimientos bien conocidos en la técnica, aunque muchos están comercializados, por ejemplo por Goodrich, EDH, Hercules, Dow Chemical Co.

Como se ha mencionado anteriormente en relación con los ésteres de ALA o sus derivados como agentes fotoquimioterapéuticos, pueden emplearse derivados o sales de los mucoadhesivos. Sales adecuadas son como se ha descrito anteriormente en conexión con los agentes fotoquimioterapéuticos. Los derivados de los mucoadhesivos incluyen agentes modificados químicamente que retienen las propiedades mucoadhesivas. Dichos derivados incluyen aquellos que se han modificado para incluir el agente fotoquimioterapéutico, por ejemplo pueden formarse sales tales como el alginato del éster metílico de ALA o ésteres tales como los formados entre el ALA y la hidroxipropilcelulosa.

Por "farmacéuticamente aceptable" o "fisiológicamente aceptable" se entiende que el ingrediente debe ser compatible con otros ingredientes de la composición así como fisiológicamente aceptable al sujeto.

El éster de ALA o derivado del mismo como agente fotoquimioterapéutico y el mucoadhesivo pueden combinarse en una composición o producto de la invención por cualquier medio adecuado dependiendo de la condición a tratar o diagnosticar. Por ejemplo, dependiendo del agente mucoadhesivo la composición puede formularse como una película seca polimérica, comprimido o polvo. En este caso la adhesión probablemente ocurrirá vía hidratación, como es el caso con los derivados de la celulosa. Otras formulaciones pueden aplicarse en un estado semi o totalmente hidratado (por ejemplo hidrogeles, tales como los polímeros del ácido poli(acrílico), el ácido hialurónico y el quitosán), por ejemplo usando una solución acuosa.

El éster de ALA o derivado del mismo como agente fotoquimioterapéutico puede unirse a o conjugarse con, o asociarse con, o simplemente administrarse con, el agente mucoadhesivo. Se apreciará que uno o más de cada tipo de agente pueden usarse en cualquier formulación. La formulación pude existir en cualquier forma de dosificación adecuada, por ejemplo como una emulsión o en liposomas, niosomas, microesferas, nanopartículas o semejantes en las que el mucoadhesivo está presente solo en una parte de la forma de dosificación, por ejemplo en la superficie exterior. El agente fotoquimioterapéutico puede a continuación absorberse en, incorporarse en o unirse a estas formas. Se prefiere el uso de soluciones, suspensiones (particularmente suspensiones finas en las que los componentes tienen un tamaño de partícula pequeño), geles y emulsiones.

Como se ha mencionado anteriormente, la composición de la invención y sus sales tienen propiedades farmacológicas valuables, principalmente como agentes fotosensibilizantes para uso en superficies revestidas de epitelio, preferiblemente revestidas de mucosa, lo que las hace útiles como agentes fotoquimioterapéuticos en estos lugares.

Como se ha mencionado anteriormente, la presente invención por lo tanto proporciona una composición farmacéutica que comprende un éster de ALA o derivado del mismo como un compuesto fotoquimioterapéutico y un agente mucoadhesivo como se ha descrito aquí anteriormente, o sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, opcionalmente con al menos un vehículo farmacéutico o excipiente.

Las formulaciones comprenden un éster de ALA o derivados del mismo como agentes fotoquimioterapéuticos seleccionados de los compuestos anteriores de la fórmula I, y de sus derivados, con agentes mucoadhesivos seleccionados de los hidrogeles poliacrílicos, quitosán, alcohol polivinílico, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato sódico, escleroglucan y goma de xantan. Particularmente preferidas son las formulaciones que contienen ésteres de ALA (tales como por ejemplo alquiloC_{1-16}, por ejemplo éster hexílico de ALA) con el ácido poliacrílico, quitosán, pectina, ácido poligalactónico o orabase.

Las anormalidades y trastornos que pueden tratarse según la presente invención incluyen cualquier anormalidad o trastorno maligno, premaligno y no maligno que responde a la fotoquimioterapia, por ejemplo tumores u otros crecimientos, particularmente carcinomas de células basales, displasias u otros crecimientos y otras enfermedades e infecciones, por ejemplo infección bacteriana, vírica o fúngica, por ejemplo infecciones del virus del Herpes. La invención es particularmente adecuada para el tratamiento de enfermedades, trastornos o anormalidades donde se forman lesiones definidas a las que pueden aplicarse directamente las composiciones (lesiones se usa aquí en su sentido amplio incluyendo tumores y semejantes).

Las superficies corporales que pueden tratarse según la invención incluyen superficies revestidas de epitelio, preferiblemente superficies revestidas de mucosa que cubren tejidos que se comunican directa o indirectamente con el entorno exterior, por ejemplo, el tracto respiratorio, gastrointestinal y genito-urinario y el canal auricular. Como se usa aquí "superficies revestidas de epitelio" se refiere a las superficies del cuerpo donde la capa más superior comprende células epiteliales. Estas células pueden estar o no cubiertas con una capa sustancialmente acuosa o de gel, o sea, de mucosa.

Superficies revestidas de mucosa ejemplarizantes incluyen: (i) la córnea y la conjuntiva; (ii) el revestimiento de la boca, faringe, esófago, estómago, intestinos y apéndices intestinales, recto, y conducto anal; (iii) el revestimiento de los pasajes nasales, senos nasales, nasofaringe, tráquea, bronquios, y bronquiolos; (iv) el revestimiento de los uréteres, vejiga urinaria y uretra; (v) el revestimiento de la vagina, cérvix uterino y útero; y (vi) el revestimiento del canal auricular.

Las composiciones de la invención pueden formularse de forma convencional con uno o más vehículos fisiológicamente aceptables o excipientes, según métodos bien conocidas en la técnica. Cuando sea adecuado, en un modo de realización preferido, las composiciones según la invención se esterilizan, por ejemplo, por irradiación \gamma, autoclave o esterilización por calefacción antes o después de la adición de un vehículo o excipiente cuando lo haya, para proporcionar formulaciones estériles.

Pueden administrarse las composiciones por vía tópica (o sea por administración intestinal, bucal, sublingual, gingival, palatal, nasal, pulmonar, vaginal, rectal u ocular), oral o parenteral. Se prefieren las composiciones tópicas, que incluyen geles, cremas, ungüentos, nebulizadores, lociones, salvas, bastoncillos, jabones, polvos, comprimidos, películas, pesarios, aerosoles, gotas, soluciones y cualquiera de las otras formas farmacéuticas convencionales de la técnica.

Los ungüentos, geles y cremas pueden, por ejemplo, formularse con una base acuosa o aceitosa por medio de la adición de agentes espesantes y/o gelificantes adecuados. Las lociones pueden formularse con una base acuosa o aceitosa y, en general, contendrán también uno o más agentes emulsificantes, dispersantes, suspensores, espesantes o colorantes. Pueden formarse polvos con la ayuda de cualquier base en polvo adecuada. Pueden formularse gotas y soluciones con una base acuosa o no acuosa que también comprende uno o más agentes dispersantes, solubilizantes o suspensores. Los nebulizadores en aerosol se administran convenientemente desde paquetes presurizados, usando un propelente adecuado. Se apreciará que dependiendo del mucoadhesivo usado en la formulación de la invención algunas de las propiedades mencionadas anteriormente pueden ser intrínsicamente proporcionadas por el mucoadhesivo de la formulación.

Alternativamente, las composiciones pueden proporcionarse en una forma adaptada a administración oral o parenteral. Así, formas farmacéuticas alternativas incluyen comprimidos sencillos o recubiertos, cápsulas, suspensiones y soluciones que contienen el componente activo opcionalmente con uno o más vehículos y/o diluyentes convencionales inertes, por ejemplo con almidón de maíz, lactosa, sacarosa, celulosa microcristalina, estearato magnésico, polivinilpirrolidona, ácido cítrico, ácido tartárico, agua, agua/etanol, agua/glicerol, agua/sorbitol, agua/polietilenglicol, propilenglicol, alcohol estearílico, carboximetilcelulosa o sustancias grasas tales como la grasa sólida o mezclas adecuadas de los mismos, cuando estos no están ya presentes como mucoadhesivos en las composiciones de la invención.

Las composiciones pueden adicionalmente incluir agentes lubricantes, humectantes, emulsionantes, suspensores, preservantes, edulcorantes, saborizantes, mejoradores de la adsorción, o sea agentes que penetran la superficie, como se menciona a continuación, y semejantes. Las composiciones de la invención pueden formularse para proporcionar la liberación rápida, sostenida o retardada del ingrediente activo después de la administración al paciente empleando procedimientos bien conocidos en la técnica. Pueden también usarse agentes solubilizantes y/o estabilizantes, por ejemplo ciclodextrinas (CD) \alpha, \beta y \gamma y la ciclodextrina HP- \beta.

La concentración de los ésteres ALA fotoquimioterapéuticos o sus derivados y agentes mucoadhesivos como se ha descrito anteriormente en las composiciones de la invención, depende de la naturaleza de los compuestos en la composición, la forma de administración, la condición que se trata y el paciente y pueden variarse o ajustarse según se elija. Generalmente, sin embargo, la concentración está en el intervalo de 0,01 a 50% del agente fotoquimioterapéutico, por ejemplo, 0,05 a 20%, 1 a 10% (peso/peso de la preparación final para la administración) son adecuadas. En las aplicaciones terapéuticas la concentración de los esteres de ALA o sus derivados como agentes fotoquimioterapéuticos en el intervalo de 0,1 a 50% es adecuada, por ejemplo, 0,2 a 30% (p/p).

El agente mucoadhesivo puede estar presente a una concentración de 0,05 a 50%, por ejemplo, 0,1 a 25%, 0,2 a 10% (peso/peso de la preparación final).

La formulación se administra preferentemente por vía tópica, aunque la administración puede darse a distancia, en el extremo superior de un tracto que contiene el lugar de administración, por ejemplo, administración oral para un trastorno gástrico. Convenientemente, se selecciona el mucoadhesivo para que tenga mejores propiedades adhesivas en el lugar de interés, por ejemplo, usando mucoadhesivos que poseen propiedades adhesivas que cambian con distintos pHs, o con estados de hidratación diferentes o que están implicados en interacciones específicas tipo receptor a fin de introducir especificidad para un área particular.

Puede conseguirse la administración tópica en lugares inaccesibles con procedimientos conocidas en la técnica, por ejemplo, usando catéteres u otros sistemas de administración de fármacos adecuados.

Después de la administración en la superficie, el área tratada se expone a la luz para conseguir el efecto fotoquimioterapéutico. Los métodos de irradiación de distintas áreas del cuerpo, por ejemplo con lámparas o láser son bien conocidos en la técnica (véase por ejemplo Van den Bergh, Chemistry in Britain, Mayo 1986 p. 430-439). En regiones inaccesibles esto puede conseguirse convenientemente usando fibras ópticas.

La duración del tiempo de exposición a la luz después de la administración dependerá de la naturaleza de la condición que se esté tratando, la composición y la forma de administración. Generalmente puede estar en el orden de 0,5 a 48 horas, por ejemplo de 1 a 10 horas.

La irradiación se aplicará en general a un nivel de dosificación de 40 a 200 Julios/cm^{2}, por ejemplo a 100 Julios/cm^{2}.

La longitud de onda de la luz usada para la irradiación puede seleccionarse para conseguir un efecto fotoquimioterapéutico más eficaz. Convencionalmente, cuando se usan las porfirinas en la fotoquimioterapia se irradian con una luz que está alrededor del máximo de absorción de la porfirina. Así, por ejemplo, en el caso del uso de ALA en la técnica anterior en la fotoquimioterapia del cáncer de piel, se usaron longitudes de onda en la región de 350-640 nm, preferiblemente 610-635 nm. Sin embargo, seleccionando un intervalo amplio de longitudes de onda para la irradiación, que se extiendan más allá del máximo de absorción de la porfirina, el efecto fotosensibilizante puede aumentarse. Aunque no se desea limitarse a ninguna teoría, se piensa que esto se debe al hecho de que cuando se expone la Pp, y otras porfirinas, a luz de longitud de onda dentro de su propio espectro de absorción, se degradan a varios fotoproductos incluyendo en particular fotoprotoporfirina (PPp). La PPp en un derivado del cloro y tiene un efecto fotosensibilizante considerable; su espectro de absorción se extiende a longitudes de onda más largas que las que absorbe la Pp, esto es hasta casi 700 nm (la Pp no absorbe casi luz por encima de 650 nm). De esta manera en la fotoquimioterapia convencional, las longitudes de onda usadas no excitan la PPp y por lo tanto no se obtiene el beneficio de su efecto fotosensibilizante adicional. Se ha descubierto que la irradiación con longitudes de onda en el intervalo de 500-700 nm es particularmente eficaz. Es particularmente importante incluir las longitudes de onda de 630 y 690 nm.

El aspecto adicional de la invención proporciona así el uso de una composición como se ha definido anteriormente para la preparación de un medicamento para el tratamiento fotoquimioterapéutico o diagnóstico de trastornos o anormalidades de superficies revestidas de epitelio del cuerpo humano o animal, preferiblemente superficies revestidas de mucosa. El tratamiento comprende administrar a las superficies afectadas una composición como se ha definido anteriormente, y exponer dichas superficies a la luz, preferiblemente a luz en la región de longitudes de onda de 300-800 nm, por ejemplo, 500-700 nm.

Las composiciones para el uso de la invención pueden formularse y/o administrarse con otros agentes fotosensibilizantes, ésteres de ALA pueden administrarse por ejemplo con ALA o Photofrin®, o con más de un mucoadhesivo, o con otros componentes activos que pueden aumentar el efecto fotoquimioterapéutico. Como se ha mencionado anteriormente, pueden también incluirse agentes quelantes. Estos pueden mejorar la estabilidad del agente fotoquimioterapéutico o mejorar la acumulación de la Pp; la quelación del hierro por los agentes quelantes previene su incorporación en la Pp para formar el hemo por la acción de la enzima ferroquelatasa, conduciendo por tanto a una acumulación de Pp. Así se mejora el efecto fotosensibilizante.

Agentes quelantes de los ácidos aminopolicarboxílicos son particularmente adecuados para este uso, incluyendo cualquiera de los agentes quelantes descritos en la bibliografía para la destoxificación de metales o para la quelación de iones de metales paramagnéticos en los agentes de contraste de la imagen por resonancia magnética. Pueden mencionarse particularmente EDTA, CDTA (ácido tetraacético de diaminociclohexano), DTPA y DOTA y derivados/análogos bien conocidos de los mismos. Se prefiere la EDTA. Para conseguir el efecto quelante del hierro, pueden también usarse desferrioxamina y otros sideróforos, por ejemplo junto con agentes quelantes de ácidos aminopolicarboxílicos tales como EDTA.

El agente quelante puede usarse convenientemente a una concentración de 1 a 20% por ejemplo, 2 a 10% (p/p).

Además, se ha descubierto que los agentes adyuvantes para la penetración de la superficie y especialmente los dialquilsulfóxidos tal como el dimetilsulfóxido (DMSO) pueden tener un efecto beneficioso en cuanto a aumentar el efecto fotoquimioterapéutico. Esto se describe en detalle en el documento de patente internacional WO95/07077.

El agente adyuvante para la penetración de la superficie puede ser cualquiera de los agentes adyuvantes para la penetración de membranas descritos en la literatura farmacéutica o sea agentes quelantes (por ejemplo EDTA), tensioactivos (por ejemplo el dodecilsulfato sódico), no tensioactivos, sales de la bilis (por ejemplo deoxicolato sódico), y ácidos grasos (por ejemplo ácido oleico). Ejemplos de agentes adyuvantes para la penetración de la superficie adecuados incluyen HPE-101 (comercializado por Hisamitsu), DMSO y otros dialquilsulfóxidos, en particular n-decilmetil-sulfóxido (NDMS), dimetilsulfoacetamida, dimetilformamida (DMFA), dimetilacetamida, glicoles, varios derivados de la pirrolidona (Woodford et al., J. Toxicol. Cut. & Ocular Toxicology, 1986, 5: 167-177), y Azone® (Stoughton et al., Drug Dpv. Ind. Pharm. 1983, 9: 725-744) o mezclas de los mismos. Sin embargo se prefiere el DMSO debido a su actividad anti-histamínica y antiinflamatoria y su efecto estimulante en la actividad de las enzimas ALA-sintetasa y ALA-deshidrogenasa.

El agente penetrador de la superficie puede proporcionarse convenientemente en un intervalo de concentración del 0,2 al 50% (p/p), por ejemplo alrededor del 10% (p/p).

Las composiciones de la invención usadas según la invención pueden además formularse y/o administrarse con otros agentes, para mejorar la eficacia de PDT. Así, por ejemplo, cuando se tratan tumores, por ejemplo, inhibidores de la angiogénesis (fármacos antiangiogénicos) que se ha descubierto son útiles en el tratamiento de tumores (O'Reilly et al., Nature Medicine, 2, p689-692, 1996; Yamamoto et al., Anticancer Research, 14, p1-4, 1994; y Brooks et al., J. Clin. Invest., 96, p1815-1822, 1995) pueden usarse junto con composiciones de la invención en PDT para dañar más el sistema vascular del tumor. Los inhibidores de la angiogénesis que pueden usarse incluyen TNP-470 (AGM-1470, un análogo sintético de un producto de secrección fúngico llamado fumagilina; Takeda Chemical Industries Ltd., Osaka, Japon), angiostatina (Surgical Research Lab. en Children's Hospital Medical Center de Harvard Medical School) y los antagonistas de la integrina \alpha_{v}\beta_{3} (o sea el anticuerpo monoclonal de la integrina \alpha_{v}\beta_{3}, Scripps Research Institute, La Jolla, CA).

Alternativamente, o adicionalmente, pueden usarse agentes inmunoterapéuticos (por ejemplo anticuerpos o efectores tales como el factor de activación de macrófagos) o agentes quimioterapéuticos para mejorar la PDT según la invención. La administración de estos agentes suplementarios debería hacerse en los términos de vía de administración, concentración y formulación, según los métodos conocidos de uso de estos agentes. Estos agentes adicionales pueden administrarse antes, después o durante la PDT, dependiendo de su función. Por ejemplo, los inhibidores de la angiogénesis pueden añadirse 5 a 10 días después de la PDT para prevenir el crecimiento de nuevo del tumor.

Otros agentes anticancerígenos pueden de forma semejante usarse en combinación con una composición de la invención, o como parte de la formulación o como un tratamiento separado que se administra simultáneamente, por separado o secuencialmente.

Se ha descubierto también que la glucosa ayuda a la PDT cuando se administra por vía tópica o sistémica. Aunque no se desea limitarse a ninguna teoría, parece ser que la administración de la glucosa causa una disminución del pH lo que aumenta las propiedades hidrófobas de las protoporfirinas, por ejemplo ALA, de manera que pueden penetrar las células más fácilmente. Cuando se está considerando la administración por vía tópica, la formulación, por ejemplo una crema, puede convenientemente contener 0,01% a 10% de glucosa (p/p).

Según la condición tratada, y la naturaleza de la composición, la composición para uso de la invención puede coadministrarse con dichos otros agentes opcionales, por ejemplo en una composición única o pueden administrarse secuencialmente o por separado. De hecho, en muchos casos un efecto fotoquimioterapéutico particularmente beneficioso puede obtenerse con pretratamiento con el agente coadyuvante de la penetración de la superficie en una etapa separada, antes de la administración de los compuestos de uso en la invención.

Además, en algunos casos puede ser beneficioso un pretratamiento con el agente adyuvante de la penetración de la superficie, seguido de la administración del agente fotoquimioterapéutico con el agente adyuvante de la penetración de la superficie. Cuando se usa un agente adyuvante de la penetración de la superficie en el pretratamiento se puede usar éste a altas concentraciones, esto es hasta un 100% (p/p). Si se usa dicha etapa de pretratamiento, el agente fotoquimioterapéutico puede después administrarse hasta varias horas después del pretratamiento por ejemplo, en un intervalo de 5- 60 minutos después del pretratamiento.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona también un kit para uso en la fotoquimioterapia o en el diagnóstico de trastornos o anormalidades de superficies del cuerpo revestidas de epitelio, preferiblemente superficies del cuerpo revestidas de mucosa que comprende:

(a)

un primer recipiente que contiene un éster de ALA o uno de sus derivados como agente fotoquimioterapéutico como se ha descrito aquí anteriormente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

(b)

un segundo recipiente que contiene un agente mucoadhesivo como se ha descrito aquí anteriormente o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

(c)

un tercer recipiente que contiene al menos un agente adyuvante de la penetración de la superficie; y opcionalmente

(d)

uno o más agentes quelantes contenidos dentro de dichos primer, segundo o tercer recipiente o en un cuarto recipiente.

Se apreciará que el método de terapia usando los compuestos que se han descrito aquí anteriormente inevitablemente implica la fluorescencia del trastorno o anormalidad que se trata. Mientras que la intensidad de esta fluorescencia puede usarse para eliminar células anormales, la localización de la fluorescencia puede usarse para visualizar el tamaño, magnitud y situación de la anormalidad o trastorno.

La anormalidad o trastorno así identificados o confirmados en el lugar de investigación pueden a continuación tratarse con técnicas terapéuticas alternativas, por ejemplo, tratamiento quirúrgico o químico, o por el método de terapia de la invención con un aumento continuado de fluorescencia o con aplicaciones adicionales de las composiciones de la invención en el lugar apropiado. Se apreciará que las técnicas de diagnóstico pueden requerir niveles más bajos de fluorescencia para la visualización que los usados en los tratamientos terapéuticos. Así, generalmente, intervalos de concentración de 0,2 a 30% por ejemplo, 1-5% (p/p), son adecuados. Los lugares, métodos y formas de administración se han considerado antes en relación con los usos terapéuticos y son también aplicables a los usos diagnósticos como se describen aquí.

Las composiciones de uso en la invención pueden también usarse en técnicas de diagnóstico in vitro, por ejemplo, para examinar células contenidas en los fluidos corporales. La fluorescencia mayor asociada con los tejidos no normales puede ser convenientemente indicativa de una anormalidad o trastorno. Este método es muy sensible y puede usarse en la detección temprana de anormalidades o trastornos, por ejemplo para carcinomas de la vejiga o el pulmón examinando las células epiteliales de la orina o las muestras de esputo, respectivamente. Otros fluidos corporales útiles que pueden usarse para diagnóstico además de la orina y el esputo incluyen la sangre, semen, lágrimas, fluido espinal etc. Las muestras de tejido o preparaciones pueden también evaluarse, por ejemplo por biopsia de tejido. La técnica puede hacerse particularmente exitosamente usando mucoadhesivos que se unen a las células epiteliales debajo de la mucosa más que a la mucosa misma. Así la presente invención se extiende al uso de composiciones de la invención para el diagnóstico según los métodos mencionados anteriormente para la fotoquimiotarapia, y productos y kits para realizar dicho diagnóstico.

Un aspecto adicional de la invención se refiere a un método de diagnóstico in vitro de anormalidades o trastornos de las superficies revestidas de epitelio, preferiblemente las revestidas de mucosa, ensayando una muestra del fluido corporal o tejido de un paciente, dicho método comprende al menos las etapas siguientes:

i)

mezclar dicho fluido corporal o tejido con una composición como se ha descrito aquí anteriormente,

ii)

exponer dicha mezcla a la luz.

iii)

Verificar el nivel de fluorescencia

iv)

Comparar el nivel de fluorescencia a los niveles de control

A continuación se describirá la invención en más detalle en los siguientes ejemplos no limitativos en los que las Figuras referidas son como sigue:

La Figura 1 muestra la fluorescencia de la piel después de la administración tópica de varias concentraciones del hidrocloruro de 5-aminolevulinato de metilo (P-1202) en Quitosán CL110 en la que los triángulos sólidos, los cuadrados sólidos, los hexágonos sombreados, los triángulos invertidos sombreados y los cuadrados parcialmente rellenos muestran formulaciones de mucoadhesivo 1 a 5, respectivamente;

La Figura 2 muestra la fluorescencia de la piel después de la administración tópica de del hidrocloruro de 5-aminolevulinato de hexilo con varios agentes mucoadhesivos en la que los cuadrados sólidos, los triángulos sombreados, los triángulos invertidos sólidos, los cuadrados sombreados, los hexágonos sólidos y los círculos sólidos muestran formulaciones de mucoadhesivo 6 a 11, respectivamente; y

La Figura 3 muestra la fluorescencia de la piel después de la administración tópica del hidrocloruro de 5-aminolevulinato de hexilo al 5 o 10% con varios agentes mucoadhesivos en la que los cuadrados sólidos, los triángulos sólidos, los triángulos invertidos sombreados, los círculos abiertos, los triángulos abiertos y los círculos sólidos muestran formulaciones de mucoadhesivo 12 a 17, respectivamente, y en la que las barras en esta y las figuras anteriores muestran el error estándar de la media.

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Ejemplo 1 Gel mucoadhesivo

Se disuelve hidroximetilcelulosa (1,0 g) en agua (100 ml) a 70ºC. La mezcla se enfría y el éster hexílico de 5-ALA.HCl (preparado según el documento de patente internacional WO96/28412) (300 mg) se disuelve en la mezcla a 30ºC. Se reparte EL gel en partes iguales en tubos de 2 ml. Cada tubo contiene 2 ml de 0,3% del éster hexílico de 5-ALA en un gel mucoadhesivo para uso único en la boca y/o el esófago.

Ejemplo 2 Métodos

Se usaron en el estudio Balb/c ratones, tipo sin pelo, sin timo que pesaban 20-22 g, obtenidos del departamento de animales de laboratorio, DNR.

Cada ratón recibió 0,05-0,1 g de formulación aplicada por vía tópica al lomo derecho del cuerpo, distribuida por igual y cubierta con una venda (Opsite Flexigrid; Smith and Nephew Medical Ltd., Hull, Inglaterra). El aparato de medida de punta de fibra consistía en un manojo de fibras ópticas conectadas a un espectrofluorímetro que producía luz de excitación de 407 nm. La luz de excitación se condujo a través de la mitad de las fibras a la piel del ratón. El espectro de emisión de fluorescencia resultante (550-750 nm) se recogió y condujo a través de las fibras remanentes a un fotomultiplicador para la cuantificación.

Después de la administración de las formulaciones, el espectro de fluorescencia de la piel se midió por el método de fibra óptica a distintos intervalos de tiempo después de la administración.

Se usó la piel de los ratones de tipo sin pelo en el Ejemplo anterior y se cree que es un buen modelo de la mucosa superficial en ciertos órganos internos huecos puesto que, histológicamente, la piel es parecida a las mucosas de la cavidad oral, esófago, cerviz etc.

Las formulaciones ensayadas comprendían ésteres de metilo o hexilo con Quitosán (Protosan CL 110, de Norsk Hydro, Pronota Medical Products, Oslo), pasta de Orabase® (Bristol Myers Squibb), pectina (tipo GENU: LM-104 AS-Z o X-8902, pectina de Copenhague; o Classic AU201 o CU501, ambas de Herbstreith & Fox KG), glutamato de quitosán (PMC Biopolymer 905-360-01), lactato de quitosán (FMC Biopolymer 810-361-05), ácio poliacrílico (Fluka), ácido poligalactónico (Sigma) o metilhidropropilcelulosum 4000 (NMD, Oslo).

Las formulaciones se usaron como se detalla a continuación donde m-ALA es el hidrocloruro de 5-aminolevulinato de metilo y h-ALA es el hidrocloruro de 5-aminolevulinato de hexilo:

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(Tabla pasa a página siguiente)

2

3

4

Resultados

Los resultados se muestran en las Figuras 1 a 3.

Ejemplo 3 Estudio

Se añadió azul de metileno (0,1% en peso) a cada una de las formulaciones Muco-6, Muco-10, Muco-13 y Muco-14, descritas en el Ejemplo 2. Se usó como control el ungüento de Merck que contenía la misma concentración de azul de metileno.

Se aplicó cada formulación por turno a la boca, lengua y entre los dientes de un hombre. Se usó inspección visual de la boca para determinar la extensión de la mancha azul después de alrededor de una hora. Todas las formulaciones probadas (o sea Muco-6, Muco-10, Muco-13 y Muco-14), mostraron propiedades mucoadhesivas mejoradas con relación al control. La formulación Muco-6 demostró una mucoadhesión particularmente buena.

Claims (26)

1. Una composición farmacéutica que comprende un agente fotoquimioterapéutico y un agente mucoadhesivo, donde dicho agente fotoquimioterapéutico es un éster de ALA o derivado del mismo, opcionalmente con al menos un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptables.

2. Una composición según la reivindicación 1, que comprende además al menos un agente adyuvante de la penetración de la superficie y/o uno o más agentes quelantes.

3. Una composición según la reivindicación 1 o 2, donde dicho agente fotoquimioterapéutico está presente en una concentración de 0,01 a 50% en peso.

4. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, donde dicho agente mucoadhesivo está presente en una concentración de 0,05 a 50% en peso.

5. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde dicho agente es un compuesto de fórmula I:

R^{2}{}_{2}N-CH_{2}COCH_{2}-CH_{2}CO-OR^{1}

(en donde

R^{1} y R^{2} cada uno independientemente representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo lineal, ramificado o cíclico opcionalmente sustituido que puede opcionalmente ser interrumpido por uno o más grupos -O-, NR^{3}-, -S- o PR^{3}-, con el provisto de que R^{1} es diferente de hidrógeno; y

R^{3} es un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1-6} o una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

6. Una composición según la reivindicación 5, donde en la fórmula I, R^{1} representa o un grupo alquilo no sustituido (por ejemplo alquiloC_{1-6}) o un grupo alquilo (por ejemplo alquiloC_{1-2}) sustituido por un grupo arilo (por ejemplo fenilo) y/o cada R^{2} representa un átomo de hidrógeno.

7. Una composición según las reivindicaciones 5 o 6, donde R^{1} representa un grupo alquilo C_{1-16}.

8. Una composición según la reivindicación 7, donde R^{1} es un hidrocarburo saturado de cadena lineal seleccionado de entre hexilo, heptilo y octilo.

9. Una composición según la reivindicación 5, donde en la fórmula I, R^{1} representa un grupo bencilo sustituido y cada R^{2} representa un átomo de hidrógeno.

10. Una composición según la reivindicación 9, donde dicho agente fotoquimioterapéutico es el éster de p-isopropilbencil ALA, éster de p-metilbencil ALA, éster de p-[trifluorometil]-bencil ALA, éster de p-[t-butil]bencil ALA, éster de p-nitrobencil ALA, éster de p-fluorobencil ALA, éster de 2-fluorobencil ALA, éster de 2,3,4,5,6-pentafluorobencil ALA, éster de 4-clorobencil ALA, éster de 3-nitrobencil ALA, éster de 3-fluorobencil ALA, éster de 4-metoxi-bencil ALA, éster de 2-metilbencil ALA o éster 3-metilbencil ALA.

11. Una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, donde el éster de ALA es el éster metílico de 5-ALA, éster hexílico de 5-ALA o éster bencílico de 5-ALA.

12. Una composición según cualquiera de las reivindicaciones anteriores donde dicho agente mucoadhesivo en un polímero que se hincha en el agua capaz de formar enlaces de hidrógeno.

13. Una composición según la reivindicación 12, donde dicho polímero se selecciona de polímeros basados en poli(ácido carboxílico), derivados de la celulosa o ésteres o éteres de la celulosa, gomas, arcillas, polisacáridos, almidones formulaciones lipófilas que contienen polisacáridos, carbohidratos opcionalmente sustituidos por grupos sulfato, fosfato, sulfonato, o fosfonato, polipéptidos, quitosán (lactato o glutamato) o carboximetilquitina, glicosaminoglicanos, metales o sales solubles en agua del ácido algínico, escleroglucan, adhesivos que contienen óxido de bismuto u óxido de aluminio, aterocolágeno, polímeros de polivinilo, polixilosanos, poliéteres, óxidos de polietileno y glicoles, polialcoxis y poliacrilamida y derivados y sales de los mismos.

14. Una composición según la reivindicación 13, donde dicho mucoadhesivo se selecciona de ácido poli(acrílico, maleico, itacónico, citracónico, hidroxietilmetacrílico o metacrílico) metilcelulosa, etilcelulosa, metiletilcelulosa hidroximetilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilcelulosa, hidroxietiletilcelulosa, carboximetilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, goma de xantan, goma de guar, goma de semilla de garrofín, gomas de tragacanto, goma de Karaya, goma de ghatti, goma de cholla, goma de semilla de lino (psillium) y goma arábiga, Veegun, arcilla de attapulgite; dextrano, pectina, amilopectina, agar, mannan, ácido poligalactónico, almidón de hidroxipropilo, almidón de carboximetilo, Orabase®, octasulfato de sacarosa; caseína, gluten, gelatina, adhesivo de fibrina, ácido hialurónico, alginato sódico o alginato de magnesio, alcoholes polivinílicos, éteres polivinilmetílicos, polivinilpirrolidona, polímeros de vinilo policarboxilados y derivados y sales de los mismos.

15. Una composición según la reivindicación 1, junto con un agente mucoadhesivo seleccionado de hidrogeles poliacrílicos, quitosán, alcohol polivinílico, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, alginato sódico, escleroglucan, goma de xantan, pepsina, ácido poligalactónico y orabase.

16. Una composición según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 15, donde dicha composición está en forma de un ungüento, gel o crema con una base acuosa.

17. Una composición como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones anteriores para uso como un medicamento.

18. Una composición según la reivindicación 17, para uso en el tratamiento o diagnóstico de trastornos o anormalidades de superficies revestidas de epitelio.

19. Una composición según la reivindicación 18, donde dichas superficies revestidas de epitelio son superficies revestidas de mucosa.

20. Una composición según la reivindicación 19, donde dichas superficies revestidas de mucosa son el revestimiento de la boca, faringe, esófago, estómago, intestinos y apéndices intestinales, recto, conducto del ano, pasajes nasales, senos nasales, nasofaringe, tráquea, bronquios, bronquiolos, uréter, vejiga urinaria, uretra, vagina, cerviz uterino o útero.

21. Una composición según cualquiera de las reivindicaciones 18 a 20, para uso en el tratamiento de anormalidades o trastornos malignos, premalignos y no malignos que responden a la fotoquimioterapia, preferiblemente tumores u otros crecimientos, particularmente carcinomas de células basales, displasias u otros crecimientos, y otras enfermedades o infecciones por ejemplo infecciones bacterianas, víricas o fúngicas por ejemplo infecciones del virus del Herpes.

22. El uso de un agente fotoquimioterapéutico como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 o de la 5 a la 11, con un mucoadhesivo como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 o de la 12 a la 15, opcionalmente con al menos un agente adyuvante de la penetración de la superficie y opcionalmente con uno o más agentes quelantes en la preparación de una composición para el tratamiento o diagnóstico de trastornos o anormalidades, como se definen en la reivindicación 18 o 21, de superficies revestidas de epitelio como se definen en una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 20.

23. Un producto que comprende un agente fotoquimioterapéutico como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 o de la 5 a la 11, y un mucoadhesivo como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 o de la 12 a la 15, opcionalmente con al menos un agente adyuvante de la penetración de la superficie y opcionalmente con uno o más agentes quelantes como una preparación combinada de uso simultáneo, separado o secuencial para tratar o diagnosticar trastornos o anormalidades, como se definen en las reivindicaciones 18 o 21, de las superficies revestidas de epitelio como se definen en una cualquiera de las reivindicaciones 18 a 20.

24. El uso de un agente fotoquimioterapéutico como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 o de la 5 a la 11, y un mucoadhesivo como se define en cualquiera de las reivindicaciones 1 o de la12 a la 15, opcionalmente con al menos un agente adyuvante de la penetración de la superficie y opcionalmente uno o más agentes quelantes en la preparación de un producto de uso simultáneo, separado o secuencial para tratar o diagnosticar trastornos o anormalidades, como se definen en las reivindicaciones 18 o 21, de las superficies revestidas de epitelio como se definen en cualquiera de las reivindicaciones 18 a 20.

25. Un kit para uso en la fotoquimioterapia o diagnóstico de trastornos o anormalidades de superficies corporales revestidas de epitelio, preferiblemente como se definen en las reivindicaciones 19 o 20, que comprende:

a)

un primer recipiente que contiene un agente fotoquimioterapéutico como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 o de la 5 a la 11, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

b)

un segundo recipiente que contiene un agente mucoadhesivo como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 o de la 12 a la 15, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,

c)

un tercer recipiente que contiene al menos un agente adyuvante de la penetración de la superficie; y opcionalmente

d)

uno o más agentes quelantes contenidos dentro de dichos primer, segundo o tercer recipiente o en un cuarto recipiente.

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26. Un método de diagnóstico in vitro de anormalidades o trastornos de las superficies revestidas de epitelio, preferiblemente como se ha definido en las reivindicaciones 19 o 20, por medio del ensayo de una muestra de fluido corporal o tejido de un paciente, dicho método comprende al menos las siguientes etapas:

i)

mezclar dicho fluido corporal o tejido con una composición como se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones de 1 a 16,

ii)

exponer dicha mezcla a la luz,

iii)

verificar el nivel de fluorescencia,

iv)

comparar el nivel de fluorescencia con los niveles de control.