CN110051838A - 与激光联用的光敏剂及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种与激光联用的光敏剂，其以立方液晶作为载体，与激光联用的光敏剂的主药为四羧基锌酞菁，其化学式为：光敏剂的小角X射线衍射峰位比为与光敏剂的联用的的激光来自于CO2激光器，CO2激光器的具体参数为：CO2激光的辐射能为238mJ/cm2，最佳照射功率为150mW、最佳照射时间为5min，暗孵育时间为4h。本发明还记载了与激光联用的光敏剂的制备方法以及与激光联用的光敏剂作为治疗基底细胞癌的药物的应用。

Description

与激光联用的光敏剂及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及基底细胞癌临床治疗领域，具体是一种与激光联用的光敏剂及其制备方法和应用。
背景技术
基底细胞癌发病率约占皮肤肿瘤的75％，患者多为老人，临床诊断时往往已呈恶性且出于心理和身体原因，一般不选择手术治疗。发病初期为基底较硬的斑状丘疹或呈疣状突起逐步破溃形成溃疡。基底细胞癌的临床治疗方法包括放疗、外用细胞毒药物治疗、液氮冷冻、激光治疗以及光动力疗法，其中局部药物治疗和二氧化碳激光疗法由于其损伤小、效果明显、作用局部等优势受到较多重视。基底细胞癌与其他浅表肿瘤如黑色素瘤不同，其表面有一层硬痂。局部给药治疗时，影响药物或光线进入，传统的药物促渗透技术如透皮促进剂很难获得理想的促渗透效果。物理促渗透技术，如微针则比较适合有弹性和平整的皮肤，对于较硬和凹凸不平的基底细胞癌的结痂表面，并不适合。因此，需要一种能够克服基底细胞癌的硬痂结构并有效治疗基底细胞癌的药物。
发明内容
本发明的一个目的是解决至少上述问题，并提供至少后面将说明的优点。
本发明公开了一种与激光联用的光敏剂。本发明治疗效果好，本发明将CO2与光动力药物组合应用。其中四羧基锌酞菁为光动力治疗药物，具有热稳定好、吸收波长范围宽、单线态氧量子产率高的优势。本发明是由单油酸甘油酯、无水乙醇、超纯水制备的一种经皮给药制剂，具有涂展性较好、附着性强、普适性强、载药量大、靶向性强、毒副作用小的优势。
本发明还有一个目的是与激光联用的光敏剂的制备方法，以4-硝基邻苯二腈为原料，先制备四羧基锌酞菁，再对四羧基锌酞菁进行纯化，再制备载四羧基锌酞菁的立方液晶，即为与激光联用的光敏剂。
本发明还有一个目的是提供与激光联用的光敏剂的应用，其用于制备治疗基底细胞癌的药物。
为了实现根据本发明的这些目的和其它优点，提供了一种与激光联用的光敏剂，所述与激光联用的光敏剂以立方液晶作为载体，所述与激光联用的光敏剂的主药为四羧基锌酞菁，其化学式为：
优选的是，所述与激光联用的光敏剂的小角X射线衍射峰位比为
优选的是，所述与激光联用的光敏剂中所采用的激光来自于CO2激光器，其中，CO2激光器的CO2激光的辐射能为238mJ/cm2，最佳照射功率为150mW、最佳照射时间为5min，暗孵育时间为4h。
优选的是，所述与激光联用的光敏剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将3.3～3.5重量份的4-硝基邻苯二腈与100重量份的四氢呋喃混合后搅拌，再加入3.3～3.4重量份的4-羟基苯甲酸并搅拌，得到第一混合液；在无氧的室温条件下向第一混合液中加34～35重量份的无水K2CO3静置得到第二混合液；先将第二混合液与冰水以1:2的体积比混合，调节至pH＝1后避光静置然后减压抽滤，再用超纯水洗涤滤饼至中性，将滤饼在温度为45℃的条件下减压干燥处理，收集滤饼上的残留物，得4-(4-羧基苯氧基)邻苯二腈；
步骤二、将0.2658重量份由步骤一制得的4-(4-羧基苯氧基)邻苯二腈置于烧瓶中，加入7.5重量份的N,N-二甲基亚酰胺后将烧瓶置于恒温油浴装置中加热至60℃，得到第三混合液；先向第三混合液中加入0.1372重量份的ZnCl2并搅拌溶解，然后向其中加入0.3重量份的1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯，升温至200℃回流12h，再与15重量份浓度为2mol/L的盐酸溶液混合并静置过夜，得到粗产物。
步骤三、将0.5299重量份由步骤二制得的粗产物加入15重量份的四氢呋喃中后加入到色谱柱中，利用四氢呋喃进行洗脱并收集绿色液体，合并产物并减压回收溶剂后在温度为45℃的条件下真空干燥，得到四羧基锌酞菁。
步骤四、称取1～3重量份的单油酸甘油酯和0.1～0.2份的无水乙醇于离心管中，将离心管置于温度为60℃的水浴中加热，向离心管中加入8.8～16.8重量份由步骤三制得的四羧基锌酞菁并在200r/min的速率下搅拌，搅拌的同时加入超纯水，搅拌均匀后制得与激光联用的光敏剂。
优选的是，在步骤一中，无氧的室温的条件是向第一混合液中加入无水K2CO3的过程中通入N2来实现的。
与激光联用的光敏剂作为制备治疗基底细胞癌的药物的应用。
本发明至少包括以下有益效果：
第一、本发明以酞菁类化合物作为光动力疗法的光敏剂，光敏剂聚集在肿瘤组织，经相应光照射后，将周围环境中的氧气转化为毒性的氧自由基或单线态氧，杀伤肿瘤及损伤肿瘤微血管等，达到治疗肿瘤的目的。而酞菁类化合物具有较强的吸收，热稳定性和化学稳定性高，制备工艺简单，生产成本低，对环境无毒无害，是一类非常有前途的光敏剂。四羧基锌酞菁具有热稳定好、吸收波长范围宽、单线态氧量子产率高、增加了酞菁类光敏剂的亲水性的优势。
第二、本发明采用立方液晶作为递送载体，立方液晶具有水和两亲性材料形成的双连续网络结构，形成独特的内部双水道结构，适用于作为亲脂性和亲水性药物递送载体。立方液晶的优势是具有涂展性较好、附着性强、普适性强、载药量大、靶向性强、毒副作用小等优点。
第三、CO2激光作用皮肤后可形成孔洞，效果类似微针，能和微针一样会产生促进药物渗透的作用。本发明采用CO2激光器作为光针输出设备，输出10600nm红外激光，光束经聚焦镜输出时，聚焦点产生的高温能将靶组织气化，可用于切割烧灼，起到致孔或切割组织作用，通过调节能量大小达到不同致孔深度，致孔速度快、效果好。光针和微针的区别是光针在微孔周围有小范围的热凝固区域，这个区域的温度大于65℃，这个温度可以使血液凝固所以不会产生出血；微针在皮肤上产生微孔，直接破坏皮肤的组织结构，微孔没有热作用即热凝固和热效应所以不会产生胶原的收缩和新生。
第四、光针作用于裸鼠皮肤后，涂敷四羧基锌酞菁立方液晶，四羧基锌酞菁的透皮效果增加。低能量光针能显著促进四羧基锌酞菁立方液晶透皮吸收，对BCC生长抑制效果优于单独使用光针或四羧基锌酞菁立方液晶。高能量光针可协同四羧基锌酞菁立方液晶清除肿瘤，且没有复发。小动物活体成像结果表明四羧基锌酞菁立方液晶在不同能量光针作用下皮肤局部滞留性较好，在主要脏器中几乎没有分布。动物实验均验证了光针联合光敏剂立方液晶治疗基底细胞癌的效果。单次给药皮肤刺激性试验表明家兔皮肤未出现明显红斑及水肿情况，证明了四羧基锌酞菁立方液晶刺激性较小，适于局部应用。
本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。
附图说明
图1为不同能量密度的CO2激光促进载四羧基锌酞菁立方液晶透皮对比图；
图2为低能量光针联合光敏剂立方液晶对荷瘤裸鼠瘤体积的影响图；
图3为低能量光针联合光敏剂立方液晶治疗荷瘤裸鼠肿瘤状态图；
图4为高能量光针联合光敏剂立方液晶治疗荷瘤裸鼠肿瘤状态图；
图5为不同能量密度光针联合载四羧基锌酞菁立方液晶对裸鼠全身分布的影响图；
图6不同能量光针联合载四羧基锌酞菁立方液晶不同时间点裸鼠脏器小动物活体成像图；
图7为不同时间点不同处理部位家兔皮肤状态图。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
<实施例1>
与激光联用的光敏剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将3.3重量份的4-硝基邻苯二腈与100重量份的四氢呋喃混合后搅拌，再加入3.3重量份的4-羟基苯甲酸并搅拌，得到第一混合液；在无氧的室温条件下向第一混合液中加34重量份的无水K2CO3反应并静置72h，得到第二混合液；先将第二混合液与冰水以1:2的体积比混合，调节至pH＝1后避光静置12h然后减压抽滤，再用超纯水洗涤滤饼至中性，将滤饼在温度为45℃的条件下减压干燥处理12h，收集滤饼上的残留物，得4-(4-羧基苯氧基)邻苯二腈；
步骤二、将0.2658重量份由步骤一制得的4-(4-羧基苯氧基)邻苯二腈置于烧瓶中，加入7.5重量份的N,N-二甲基亚酰胺后将烧瓶置于恒温油浴装置中加热至60℃，得到第三混合液；先向第三混合液中加入0.1372重量份的ZnCl2并搅拌溶解，然后向其中加入0.3重量份的1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯，升温至200℃回流12h，再与15重量份浓度为2mol/L的盐酸溶液混合并静置过夜，得到粗产物。
步骤三、将0.5299重量份由步骤二制得的粗产物加入15重量份的四氢呋喃中后加入到色谱柱中，静置20min，注意溶液高过色谱柱面1cm。利用四氢呋喃进行洗脱并收集绿色液体，合并产物并减压回收溶剂后在温度为45℃的条件下真空干燥12h，得到四羧基锌酞菁。
步骤四、称取1重量份的单油酸甘油酯和0.1份的无水乙醇于离心管中，将离心管置于温度为60℃的水浴中加热，向离心管中加入8.8重量份由步骤三制得的四羧基锌酞菁并在200r/min的速率下搅拌，搅拌的同时加入超纯水，搅拌均匀后制得与激光联用的光敏剂。
<实施例2>
与激光联用的光敏剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将3.5重量份的4-硝基邻苯二腈与100重量份的四氢呋喃混合后搅拌，再加入3.4重量份的4-羟基苯甲酸并搅拌，得到第一混合液；在无氧的室温条件下向第一混合液中加35重量份的无水K2CO3反应并静置72h，得到第二混合液；先将第二混合液与冰水以1:2的体积比混合，调节至pH＝1后避光静置12h然后减压抽滤，再用超纯水洗涤滤饼至中性，将滤饼在温度为45℃的条件下减压干燥处理12h，收集滤饼上的残留物，得4-(4-羧基苯氧基)邻苯二腈；
步骤二、将0.2658重量份由步骤一制得的4-(4-羧基苯氧基)邻苯二腈置于烧瓶中，加入7.5重量份的N,N-二甲基亚酰胺后将烧瓶置于恒温油浴装置中加热至60℃，得到第三混合液；先向第三混合液中加入0.1372重量份的ZnCl2并搅拌溶解，然后向其中加入0.3重量份的1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯，升温至200℃回流12h，再与15重量份浓度为2mol/L的盐酸溶液混合并静置过夜，得到粗产物。
步骤三、将0.5299重量份由步骤二制得的粗产物加入15重量份的四氢呋喃中后加入到色谱柱中，静置20min，注意溶液高过色谱柱面1cm。利用四氢呋喃进行洗脱并收集绿色液体，合并产物并减压回收溶剂后在温度为45℃的条件下真空干燥12h，得到四羧基锌酞菁。
步骤四、称取3重量份的单油酸甘油酯和0.2份的无水乙醇于离心管中，将离心管置于温度为60℃的水浴中加热，向离心管中加入8.8重量份由步骤三制得的四羧基锌酞菁并在200r/min的速率下搅拌，搅拌的同时加入超纯水，搅拌均匀后制得与激光联用的光敏剂。
<实施例3>
与激光联用的光敏剂的制备方法，包括以下步骤：
步骤一、将3.4664重量份的4-硝基邻苯二腈与100重量份的四氢呋喃混合后搅拌，再加入3.3207重量份的4-羟基苯甲酸并搅拌，得到第一混合液；在无氧的室温条件下向第一混合液中加34.0385重量份的无水K2CO3反应并静置72h，得到第二混合液；先将第二混合液与冰水以1:2的体积比混合，调节至pH＝1后避光静置12h然后减压抽滤，再用超纯水洗涤滤饼至中性，将滤饼在温度为45℃的条件下减压干燥处理12h，收集滤饼上的残留物，得4-(4-羧基苯氧基)邻苯二腈；
步骤二、将0.2658重量份由步骤一制得的4-(4-羧基苯氧基)邻苯二腈置于烧瓶中，加入7.5重量份的N,N-二甲基亚酰胺后将烧瓶置于恒温油浴装置中加热至60℃，得到第三混合液；先向第三混合液中加入0.1372重量份的ZnCl2并搅拌溶解，然后向其中加入0.3重量份的1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯，升温至200℃回流12h，再与15重量份浓度为2mol/L的盐酸溶液混合并静置过夜，得到粗产物。
步骤三、将0.5299重量份由步骤二制得的粗产物加入15重量份的四氢呋喃中后加入到色谱柱中，静置20min，注意溶液高过色谱柱面1cm。利用四氢呋喃进行洗脱并收集绿色液体，合并产物并减压回收溶剂后在温度为45℃的条件下真空干燥12h，得到四羧基锌酞菁。
步骤四、称取1.6重量份的单油酸甘油酯和0.15份的无水乙醇于离心管中，将离心管置于温度为60℃的水浴中加热，向离心管中加入10重量份由步骤三制得的四羧基锌酞菁并在200r/min的速率下搅拌，搅拌的同时加入超纯水，搅拌均匀后制得与激光联用的光敏剂。
<对比实验1>
对比实验1中所述ZnPC4立方液晶即为与激光联用的光敏剂，通过实施例3记录的方法制备得到。所述光针即为来自于CO2激光器的激光。
裸鼠，雌性，体重20～23g，北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号：SCXK-(京)2016-0006，饲养条件：SPF级。
A-431细胞(货号:CBP60330,Cobioer)。
将A-431细胞培养瓶从二氧化碳培养箱中取出，于显微镜下观察细胞贴壁情况。当A-431细胞数量为80％左右、细胞贴壁状态良好时可进行皮下植瘤实验。将观察好的细胞培养瓶放入洁净工作台中，倒掉上清液，加1ml胰酶润洗，再加1ml胰酶静置2min弃去，显微镜下观察细胞状态，待细胞被消化80％时加培养基终止消化；吹打细胞使分散，置于15ml离心管中，设置离心力100g，离心5min，弃去上清液，用0.2ml培养液吹打分散，将其注射入裸鼠皮下，定时观察肿瘤生长状态。
肿瘤生长至一定体积时进行瘤块接种。取下瘤块，置于PBS中，剪切至适宜大小，用瘤块接种装置分别接种于SPF级裸鼠背部。注意无菌操作以及消毒，防止裸鼠皮肤感染。定期测量肿瘤大小，肿瘤生长至50-100mm3时开始给药治疗。
取25只肿瘤生长均匀的裸鼠，平均分成5组。各组的处理方法如下：
模型组：模型组裸鼠肿瘤不作处理；
低能量光针组：低能量光针组裸鼠肿瘤组织进行53mJ/cm2光针制孔；
ZnPC4立方液晶组：ZnPC4立方液晶组裸鼠肿瘤组织给予0.2g/cm2ZnPC4立方液晶，暗孵育4h后进行150mW的660nm激光照射处理5min；
低能量光针联合5-ALA立方液晶组：低能量光针联合5-ALA立方液晶组裸鼠肿瘤先进行53mJ/cm2能量密度光针制孔，再给予0.2g/cm25-ALA立方液晶，暗孵育4h后进行150mW的660nm激光照射处理5min；
低能量光针联合ZnPC4立方液晶组：低能量光针联合ZnPC4立方液晶组裸鼠肿瘤组织先进行53mJ/cm2能量密度光针制孔，再给予0.2g/cm2的ZnPC4立方液晶，暗孵育4h后进行150mW的660nm激光照射处理5min。
分别于第1、14、32天进行上述给药处理，给药时间根据裸鼠恢复时间安排。
每天观察裸鼠肿瘤变化情况、生存状态、死亡情况，并拍照记录。裸鼠每天进行体重称量。肿瘤尺寸用游标卡尺测径器测定，计算肿瘤体积。最后处死裸鼠取瘤块称重、拍照，取肝、肺、脾、肿瘤部位皮肤分别置于10％甲醛溶液中保存，石蜡包埋，进行苏木精-伊红(H.E.)染色，制备切片；取肿瘤部位皮肤保存于-80℃环境下，进行VEGF切片制备，显微镜下观察病理变化。
1.不同能量密度光针促进ZnPC4立方液晶透皮性能
如图1所示，直接涂抹ZnPC4立方液晶的裸鼠，ZnPC4主要聚集在皮肤表面，几乎不向皮肤内部渗透，这与皮肤致密的角质层结构有关；8h时ZnPC4立方液晶依然滞留于皮肤表面，说明ZnPC4立方液晶在皮肤表面的滞留时间长，适用于包载经皮肤、黏膜缓释类药物。27mJ/cm2和54mJ/cm2激光处理后涂抹ZnPC4立方液晶裸鼠皮肤表面可见明显的激光孔，ZnPC4明显向皮肤内部结构扩散，表明激光致孔确实具有促进药物经皮吸收的作用；1h时ZnPC4到达致孔部位的边缘；随时间增加，渗透量不断增加，4h后ZnPC4渗透量增加不明显，这也为后期ZnPC4给药后暗孵育时间提供基础。与27mJ/cm2相比，经54mJ/cm2的激光处理裸鼠皮肤后ZnPC4渗透深度及渗透量更多，说明随着激光强度的增强，ZnPC4渗透深度及渗透量会相应的增加，治疗效果更好，为光针能量密度的选择提供了依据。
2.裸鼠肿瘤变化情况
如图2所示，随时间增加，模型组的肿瘤体积不断增大。ZnPC4立方液晶组和低能量光针组的肿瘤体积给药初期增长会减慢，但后期增长速度加快甚至超越模型组，可能与BCC在遭到破坏后更容易转移有关。低能量光针联合ZnPC4立方液晶组和低能量光针联合5-ALA立方液晶组裸鼠肿瘤给药后可以得到有效控制，但需多次给药才能更好地抑制肿瘤生长。说明分别单独使用ZnPC4立方液晶和低能量强度的光针对裸鼠的肿瘤体积的抑制作用较小，在后期肿瘤的增长速度甚至更快；而结合低能量强度的光针和ZnPC4立方液晶使用，可以有效控制肿瘤体积，但需多次给药才能更好地抑制肿瘤生长。
如图3所示，在进行给药时，裸鼠第一次给药后8天痂几乎全部脱落，但第二次给药后，16天痂才全部脱落。主要由于接种了肿瘤的裸鼠随着时间身体状况变差，自身恢复能力变差导致。
<对比实验2>
对比实验2中所述ZnPC4立方液晶即为与激光联用的光敏剂，通过实施例3记录的方法制备得到。所诉光针即为来自于CO2激光器的激光。
裸鼠，雌性，体重20～23g，北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证号：SCXK-(京)2016-0006，饲养条件：SPF级。
A-431细胞(货号:CBP60330,Cobioer)。
将A-431细胞培养瓶从二氧化碳培养箱中取出，于显微镜下观察细胞贴壁情况。当A-431细胞数量为80％左右、细胞贴壁状态良好时可进行皮下植瘤实验。将观察好的细胞培养瓶放入洁净工作台中，倒掉上清液，加1ml胰酶润洗，再加1ml胰酶静置2min弃去，显微镜下观察细胞状态，待细胞被消化80％时加培养基终止消化；吹打细胞使分散，置于15ml离心管中，设置离心力100g，离心5min，弃去上清液，用0.2ml培养液吹打分散，将其注射入裸鼠皮下，定时观察肿瘤生长状态。
肿瘤生长至一定体积时进行瘤块接种。取下瘤块，置于PBS中，剪切至适宜大小，用瘤块接种装置分别接种于SPF级裸鼠背部。注意无菌操作以及消毒，防止裸鼠皮肤感染。定期测量肿瘤大小，肿瘤生长至50-100mm3时开始给药治疗。
取25只肿瘤大小相似的裸鼠，平均分成5组。各组的处理方法如下：
模型组：模型组裸鼠肿瘤组织部位不作处理；
高能量光针组：高能量光针组裸鼠肿瘤组织进行238mJ/cm2光针消除；
ZnPC4立方液晶组：ZnPC4立方液晶组裸鼠肿瘤组织给予0.2g/cm2ZnPC4立方液晶，暗孵育4h时后进行150mJ的660nm激光照射处理5min；
高能量光针联合5-ALA立方液晶组：高能量光针联合5-ALA立方液晶组裸鼠肿瘤组织先进行238mJ/cm2光针消除，再给予0.2g/cm25-ALA立方液晶，暗孵育4h后进行150mJ的660nm激光照射处理5min；
高能量光针联合ZnPC4立方液晶组：高能量光针联合ZnPC4立方液晶组裸鼠肿瘤组织先进行238mJ/cm2光针消除，再给予0.2g/cm2ZnPC4立方液晶，暗孵育4h后进行150mJ的660nm激光照射处理5min。
分别于第1、14、32天进行给药处理，给药时间根据裸鼠恢复时间安排；
每天观察裸鼠肿瘤生长情况、生存状态、复发及死亡情况，并拍照记录。裸鼠每天进行体重称量。肿瘤尺寸用游标卡尺测径器测定，计算肿瘤体积。最后处死裸鼠取瘤块称重量、拍照，取肝、肺、脾、肿瘤部位皮肤分别置于10％甲醛溶液中保存，石蜡包埋，进行苏木精-伊红(H.E.)染色，制备切片；取肿瘤部位皮肤保存于-80℃环境下，进行VEGF切片制备，显微镜下观察病理变化。
1.裸鼠肿瘤变化
如图4所示，随时间增加，模型组的肿瘤体积在不断增大。只涂抹ZnPC4立方液晶组肿瘤体积开始增长会减慢，但后期会超越模型组，不能得到有效控制，主要是皮肤结构影响ZnPC4立方液晶渗透进入肿瘤组织内部起到抑制肿瘤生长的作用，且肿瘤在遭到破坏时出现增长加快的原因。高能量光针组可直接消除基底细胞癌肿瘤，但到后期会出现40％复发现象，复发率较高，原因为高能量光针在消除肿瘤组织时可能会存在残余癌细胞，这些癌细胞会继续增长导致。高能量光针联合ZnPC4立方液晶组和高能量光针联合5-ALA立方液晶组裸鼠肿瘤均可一次性消除，且复发率极低，裸鼠生存状态较好，主要是高能量光针将肿瘤消除后进一步联合光敏剂将残余的癌细胞消灭的原因。因此，高能量光针联合光敏剂立方液晶治疗基底细胞癌的效果非常明显。
<对比实验3>
对比实验3中所述ZnPC4立方液晶即为与激光联用的光敏剂，通过实施例3记录的方法制备得到。所诉光针即为来自于CO2激光器的激光。
取12只裸鼠，随机分成4组，每组3只。各组的处理方法如下：
对照组：对照组裸鼠皮肤不做任何处理；
ZnPC4立方液晶组：ZnPC4立方液晶组裸鼠皮肤不进行光针处理，直接涂抹0.2g/cm2的ZnPC4立方液晶；
低能量光针(53mJ/cm2)联合ZnPC4立方液晶组：低能量光针联合ZnPC4立方液晶组先进行相应能量密度光针制孔，再涂抹0.2g/cm2的ZnPC4立方液晶，整个实验注意避光处理。
高能量光针(238mJ/cm2)联合ZnPC4立方液晶组：高能量光针联合ZnPC4立方液晶组先进行相应能量密度光针制孔，再涂抹0.2g/cm2的ZnPC4立方液晶，整个实验注意避光处理。
分别于裸鼠背部皮肤处理前、处理后0、1、2、4h进行荧光成像观察实验。
1.光针联合ZnPC4立方液晶进行治疗后在裸鼠体内的滞留性
如图5所示，经小动物活体成像仪检测，ZnPC4立方液晶在皮肤局部滞留时间较长，因此，可以起到缓释作用。不同能量密度光针处理皮肤后涂抹ZnPC4立方液晶在裸鼠的其他部位均未发现荧光，表明ZnPC4立方液晶局部滞留性较好，局部给药后只在局部起作用，可降低全身毒性，减少副反应。这与ZnPC4的亲脂性有关，不利于药物的全身血液循环，因此ZnPC4是一种较好的局部应用光敏剂。
2.光针联合ZnPC4立方液晶对裸鼠脏器的影响
分别于裸鼠背部皮肤给药后2、4、8h进行裸鼠脏器解剖，观察ZnPC4在心、肝、脾、肺、肾、膀胱中的分布情况。结果见图6。
如图6所示，经小动物活体成像仪检测，于不同给药时间点解剖四组裸鼠的心、肝、脾、肺、肾、膀胱脏器，均未出现荧光。表明ZnPC4立方液晶在脏器中几乎不分布，进一步证明了ZnPC4立方液晶给药全身毒性小，副作用小的特点。
<对比实验4>
对比实验4中所述ZnPC4立方液晶即为与激光联用的光敏剂，通过实施例3记录的方法制备得到。
刺激性试验可观察动物的血管、肌肉、皮肤、粘膜等部位接触受试物后是否引起红肿、充血、渗出、变性或坏死等局部反应来评价药物的给药安全性，因此采用家兔考察ZnPC4立方液晶对其皮肤的刺激性。
实验材料：
新西兰兔，雌雄各半，体重2～2.5kg，北京海淀区兴隆实验动物养殖厂，动物合格证号：SCXK(京)2016-0003，饲养条件：普通级。
实验方法：
对照组：称取0.15g无水乙醇和1.6gGMO于离心管中，60℃水浴加热，于旋涡混合器搅拌下加入0.75ml超纯水，搅拌均匀，即得空白立方液晶。
ZnPC4立方液晶组：称取0.15g无水乙醇和1.6gGMO于离心管中，60℃水浴加热，加入10mg ZnPC4溶解，于旋涡混合器搅拌下加入0.75ml超纯水，搅拌均匀，即得4mg/g ZnPC4立方液晶。
取6只家兔，雌、雄各半。试验前24h在背部对给药区进行脱毛处理。去毛范围左、右侧各3cm×3cm。避免因去毛而受损伤，有损伤的皮肤不宜进行试验。左、右侧背部分别为赋形剂给药区和ZnPC4立方液晶给药区。左下部和右下部用药位置划“井”字至渗血。分别于对应位置涂抹0.2g/cm2受试物，用纱布覆盖，再用医用胶布加以固定。贴敷4h后，除去受试物并用温水清洁给药部位。
分别于去除受试物后0.5、1、24、48、72、96、132、156、180和204h于自然光线下观察皮肤状况有无红斑和水肿情况。
如图7所示，经对每一时间点受试物及赋形剂皮肤状态观察，家兔皮肤均未出现明显红斑及水肿情况，可证明ZnPC4立方液晶经皮肤给药后无刺激性。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

Claims (6)

1.与激光联用的光敏剂，其特征在于，所述与激光联用的光敏剂以立方液晶作为载体，所述与激光联用的光敏剂的主药为四羧基锌酞菁，其化学式为：
2.如权利要求1所述的与激光联用的光敏剂，其特征在于，所述与激光联用的光敏剂的小角X射线衍射峰位比为
3.如权利要求1所述的与激光联用的光敏剂，其特征在于，所述与激光联用的光敏剂中所采用的激光来自于CO2激光器，其中，CO2激光器的CO2激光的辐射能为238mJ/cm2，最佳照射功率为150mW、最佳照射时间为5min，暗孵育时间为4h。
4.如权利要求1所述的与激光联用的光敏剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤一、将3.3～3.5重量份的4-硝基邻苯二腈与100重量份的四氢呋喃混合后搅拌，再加入3.3～3.4重量份的4-羟基苯甲酸并搅拌，得到第一混合液；在无氧的室温条件下向第一混合液中加34～35重量份的无水K2CO3静置得到第二混合液；先将第二混合液与冰水以1:2的体积比混合，调节至pH＝1后避光静置然后减压抽滤，再用超纯水洗涤滤饼至中性，将滤饼在温度为45℃的条件下减压干燥处理，收集滤饼上的残留物，得4-(4-羧基苯氧基)邻苯二腈；
步骤二、将0.2658重量份由步骤一制得的4-(4-羧基苯氧基)邻苯二腈置于烧瓶中，加入7.5重量份的N,N-二甲基亚酰胺后将烧瓶置于恒温油浴装置中加热至60℃，得到第三混合液；先向第三混合液中加入0.1372重量份的ZnCl2并搅拌溶解，然后向其中加入0.3重量份的1,8-二氮杂二环[5.4.0]十一碳-7-烯，升温至200℃回流12h，再与15重量份浓度为2mol/L的盐酸溶液混合并静置过夜，得到粗产物。
步骤三、将0.5299重量份由步骤二制得的粗产物加入15重量份的四氢呋喃中后加入到色谱柱中，利用四氢呋喃进行洗脱并收集绿色液体，合并产物并减压回收溶剂后在温度为45℃的条件下真空干燥，得到四羧基锌酞菁。
步骤四、称取1～3重量份的单油酸甘油酯和0.1～0.2份的无水乙醇于离心管中，将离心管置于温度为60℃的水浴中加热，向离心管中加入8.8～16.8重量份由步骤三制得的四羧基锌酞菁并在200r/min的速率下搅拌，搅拌的同时加入超纯水，搅拌均匀后制得与激光联用的光敏剂。
5.如权利要求2所述的与激光联用的光敏剂的制备方法，其特征在于，在步骤一中，无氧的室温的条件是向第一混合液中加入无水K2CO3的过程中通入N2来实现的。
6.如权利要求1所述与激光联用的光敏剂作为制备治疗基底细胞癌的药物的应用。
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