ES2610881T3 - Gel protector basado en quitosano y polisacárido oxidado - Google Patents

Abstract

Una capa de fluido para su uso en un método para retornar a un estado normal, una superficie de tejido mucoso lesionada, inflamada o quirúrgicamente reparada en el oído, nariz o garganta, cuyo método comprende: a) aplicar a tal superficie de tejido una capa de fluido que contiene una mezcla de quitosano y un polisacárido oxidado que contiene grupos aldehído capaces de promover la rápida reticulación del quitosano, estando el quitosano y el polisacárido oxidado presentes en cantidades suficientes para formar una capa de gel protector in situ, y b) dejar que la mezcla forme una capa de gel protector in situ.

Description

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DESCRIPCION

Gel protector basado en quitosano y polisacarido oxidado Campo de la invencion

La presente invencion se refiere a polisacaridos y a materiales para su uso en o sobre tejido y estructuras en los ofdos, nariz y garganta.

Antecedentes

Para la reparacion quirurgica o administracion de farmacos se han usado determinados materiales de polisacarido. Los documentos referentes a tales materiales incluyen las patentes de EE.UU. N.° 6.514.522 (Domb) y 7.053.068 B2 (Prinz), las publicaciones de solicitud de patente de EE.UU. N.° US 2005/0176620 A1 (Prestwych et al.) y US 2005/0238702 A1 (Ishihara et al.), la solicitud de patente canadiense N.° 2 348 842 A1 (Bernkop-Schnurch), las solicitudes PCT publicadas N.° wO 98/31712 A2 (B.F. Goodrich Co.), los documentos WO 01/00246 A2 (Bentley et al.) yWO 03/020771 A1 (Mucobiomer Biotechnologische Forschungs-und Entwicklungs GmbH), Mi et al., Synthesis and Characterization of a Novel Chitosan-Based Network Prepared Using Naturally-Occurring Crosslinker, J Polym Sci, Part A: Polym Chem, 38, 2804-2814 (2000), Mi et al., Synthesis and characterization of biodegradable TPP/genipin co-crosslinked chitosan gel beads, Polymer, 44, 6521-30 (2003), Roldo et al., Mucoadhesive thiolated chitosans as platforms for oral controlled drug delivery: synthesis and in vitro evaluation, European Journal of Pharmaceutics and Biopharmaceutics, 57, 115-121 (2004), Krauland et al., Viscoelastic Properties of a New in situ Gelling Thiolated Chitosan Conjugate, Drug Development And Industrial Pharmacy, 31, 885-893 (2005), Bernkop- Schnurch, Thiomers: A new generation of mucoadhesive polymers, Advanced Drug Delivery Reviews, 57, 1569-1582 (2005), Bernkop-Schnurch et al., Thiomers: Preparation and in vitro evaluation of a mucoadhesive nanoparticulate drug delivery system, International Journal of Pharmaceutics, 317, 76-81 (2006) yWeng et al., Rheological Characterization of in Situ Crosslinkable Hydrogels Formulated from Oxidized Dextran and N-Carboxyethyl Chitosan, Biomacromolecules, 8, 1109-1115 (2007). El documento US 2008/075657 describe la colocacion de hidrogeles dentro de discos intervertebrales.

Sumario de la invencion

La presente invencion proporciona una capa de fluido para su uso en un metodo de retorno de una superficie de tejido mucoso lesionada, inflamada o quirurgicamente reparada en el ofdo, nariz o garganta, a un estado normal, comprendiendo la capa quitosano y un polisacarido oxidado que contiene grupos aldehudo con capacidad de promover la rapida reticulacion del quitosano en cantidades suficientes para formar una capa de gel protector in situ. La capa de gel protector ayuda a retornar la superficie de tejido lesionada, inflamada o quirurgicamente reparada, a un estado normal, por ejemplo, mediante uno o mas mecanismos de curacion tales como modulacion de una respuesta inflamatoria, fagocitosis, remodelacion de la mucosa, reciliacion u otra restauracion completa o parcial de la funcion normal.

La capa de fluido es para su uso en un metodo que comprende:

a) aplicar a tal tejido la capa de fluido que contiene la mezcla de quitosano y un polisacarido oxidado, y

b) dejar que la mezcla forme una capa de gel protector in situ.

La capa de fluido desvelada se aplica deseablemente por pulverizacion, y esta envasada en un dispensador pulverizador multicomponente.

Breve descripcion del dibujo

La Fig. 1 es una vista esquematica que muestra el metodo desvelado;

la Fig. 2 es una vista en perspectiva de un instrumento dispensador que puede usarse en el metodo desvelado; la Fig. 3 es una grafica que muestra las propiedades antimicrobianas de dos capas de gel reticuladas in situ formadas a partir de quitosano y polisacarido oxidado, y de un control de caldo de triptona y soja; la Fig. 4 es una grafica que muestra la actividad antimicrobiana en funcion del tiempo para tres capas de gel reticuladas in situ formadas a partir de quitosano y polisacarido oxidado, y para un control de caldo de triptona y soja;

la Fig. 5 es una grafica que muestra el comportamiento de liberacion de farmaco para tres capas de gel reticuladas in situ; y

la Fig. 6 es una grafica que muestra la degradacion de una capa de gel reticulada in situ.

Los sfmbolos de referencia similares en las diversas figuras del dibujo indican elementos similares. Los elementos en el dibujo no estan a escala.

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Descripcion detallada

La siguiente descripcion detallada describe ciertas realizaciones y no debe tomarse en un sentido limitante. Todos los pesos, cantidades y relaciones en el presente documento son en peso, a menos que se indique espedficamente de otro modo. Los terminos mostrados a continuacion tienen los siguientes significados:

El termino "adhesion" se refiere a pegar conjuntamente una estructura del cuerpo o material protesico con tejido, a pegar conjuntamente tejido con tejido con el que esta en contacto mtimo durante periodos prolongados, o a la formacion de tejido que conecta estructuras del cuerpo, materiales protesicos o tejidos entre sf a traves de un espacio normalmente abierto.

El termino "antimicrobiano" se refiere a una capacidad para producir mas de un 90 % de reduccion numerica (concretamente, al menos una reduccion del orden de 1 log) en una poblacion de uno o mas de Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae o Moraxella catarrhalis.

Los terminos "unido" y "adherido", cuando se usa en referencia a una biopelfcula bacteriana y una superficie, significan que la biopelfcula se establece sobre y al menos recubre o cubre parcialmente la superficie, y tiene alguna resistencia a la eliminacion de la superficie. Como la naturaleza de esta relacion es compleja y poco entendida, no esta previsto mecanismo de union particular o adherencia por tal uso.

El termino "biopelfcula bacteriana" significa una comunidad de bacterias unida a una superficie, estando los organismos en la comunidad contenidos dentro de una matriz de polisacarido extracelular (EPS) producida por las bacterias.

El termino "biocompatible", cuando se usa en referencia a una sustancia, significa que la sustancia no presenta efectos perjudiciales o inapropiados significativos en el cuerpo.

El termino "biodegradable", cuando se usa en referencia a una sustancia, significa que la sustancia se degradara o erosionara in vivo para formar especies qmmicas o ffsicas mas pequenas. Tal proceso de degradacion puede ser enzimatico, qmmico o ffsico.

El termino "biorresorbible", cuando se usa en referencia a una sustancia, significa que la sustancia es capaz de ser absorbida por el cuerpo.

El termino "cohesivo", cuando se usa en referencia a un lfquido o gel, significa que el lfquido o gel, cuando se pone sobre una superficie de nivel, tendera a (pero no necesita en todos los casos) pegarse a la misma y a formar una masa unitaria.

El termino "desmenuzado", cuando se usa en referencia a un material en partfculas, significa que las partfculas han sido fracturadas y reducidas en tamano cortando, moliendo, pulverizando, triturando u otro proceso de fracturacion de partfculas empleando fuerza externamente aplicada.

El termino "conforme", cuando se usa en referencia a una composicion aplicada a tejido u otra estructura del cuerpo, significa que la composicion puede formar una capa sustancialmente continua sobre un area a la que se ha aplicado la composicion.

Los terminos "desprender", "quitar" y "alterar", cuando se usan en referencia a una biopelfcula bacteriana unida o adherida a una superficie, significan que al menos una cantidad significativa de la biopelfcula inicialmente presente sobre la superficie ya no esta unida o adherida a la superficie. No esta previsto mecanismo particular de desprendimiento, eliminacion o alteracion por tal uso.

El termino "fluido", cuando se usa en referencia a una sustancia, significa que la sustancia es un lfquido que tiene un modulo de perdida (G") superior a su modulo de almacenamiento (G') y una tangente de perdida (tan 8) superior a 1.

El termino "gel", cuando se usa en referencia a una sustancia, significa que la sustancia es deformable (concretamente, no es un solido), G" es inferior a G' y tan 8 es inferior a 1.

El termino "gelificacion", cuando se usa con respecto a la formacion de una capa de gel, significa el tiempo al cual G" es igual a G' y tan 8 es igual a 1.

El termino "hemostasico" significa un dispositivo o material que detiene el flujo sangumeo.

El termino "hidrogel", cuando se usa en referencia a un gel, significa que el gel es hidrofilo y contiene agua.

El termino "hidratado", cuando se usa en referencia a un dispositivo o sustancia, significa que el dispositivo o sustancia contiene agua qmmicamente unida distribuida manera uniforme. Un dispositivo o sustancia

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"completamente hidratado" es capaz de absorber agua de hidratacion adicional. Un dispositivo o sustancia "parcialmente hidratado" es capaz de absorber agua de hidratacion adicional.

El termino "ofdo interno" significa los canales semicirculares y la coclea.

El termino '^do medio" significa la region definida por la membrana timpanica, las estructuras interiores tales como la cadena osicular, el revestimiento circundante y las estructuras colindantes tales como el mastoide.

El termino "mucoadhesivo", cuando se usa en referencia a un dispositivo o sustancia, significa que el dispositivo o sustancia se adherira al moco que cubre el epitelio.

El termino "cavidades nasales o de los senos" se refiere a los diversos tejidos que definen las vfas y camaras normalmente llenas de aire dentro de la nariz y los senos que incluyen, pero no se limitan a, los orificios nasales o narinas, la concha nasal o cornetes, los senos frontales, etmoides, esfenoides y maxilares, ostia de los senos y la nasofaringe.

El termino "polisacarido" incluye derivados de polisacaridos y polisacaridos modificados, ademas de derivados de especies de polisacarido individuales y especies de polisacarido individuales modificados. Por ejemplo, el termino "carboximetilcelulosa" incluye derivados de carboximetilcelulosa y carboximetilcelulosas modificadas, el termino "quitosano" incluye derivados de quitosano y quitosanos modificados, y el termino "almidon" incluye derivados de almidon y almidones modificados.

El termino "protector", cuando se usa en referencia a una capa de una composicion encima de tejido, significa que la capa puede ayudar a regresar una superficie de tejido lesionada, inflamada o quirurgicamente reparada a un estado normal, por ejemplo, mediante uno o mas mecanismos de curacion tales como modulacion de una respuesta inflamatoria, fagocitosis, remodelacion de la mucosa, reciliacion u otra restauracion completa o parcial de la funcion normal.

El termino "tiempo de residencia", cuando se usa en referencia a una capa de gel protector encima de tejido, significa el periodo de tiempo durante el cual la capa de gel o porcion de la misma queda en su lugar in vivo bajo observacion macroscopica.

El termino "solvatar" significa formar una solucion o dispersion que contiene un disolvente u otro vetuculo dentro del que se disuelve o suspende un soluto.

El termino "sustancialmente libre de colageno" significa que contiene una cantidad suficientemente baja de colageno como para no plantear un posible riesgo de transmision de o infeccion con encefalopatfa espongiforme bovina (EEB) o enfermedad de Creutzfeldt-Jakob de variante (vCJD).

El termino "delgada", cuando se usa en referencia a una capa protectora encima de tejido, significa que tiene un espesor promedio inferior a aproximadamente dos milfmetros.

Con referencia a la Fig. 1, el metodo desvelado puede realizarse, por ejemplo, en las cavidades nasales o de los senos 100 de un paciente, que incluyen los senos maxilares 110a, 110b y los senos frontales 112a, 112b, a los que puede accederse por las narinas 114a, 114b. Debe observarse que las caractensticas externas del paciente, que incluyen las narinas 114a, 114b, se muestran en lmeas discontinuas. Cuando el paciente sufre, por ejemplo, rinosinusitis cronica, uno o mas sitios de tratamiento tales como el sitio de tratamiento 116 asociado a una superficie del seno maxilar 110a puede ser medica o, si necesita, quirurgicamente tratado. El sitio de tratamiento 116 incluye epitelio ciliado del seno maxilar 110a y puede incluir una capa asociada de bacterias que habitan en una biopelfcula asociada (no mostrada en la Fig. 1). El sitio de tratamiento no necesita ser tejido natural y puede en su lugar ser una estructura artificial (no mostrada en la Fig. 1) tal como un relleno sinusal o protesis endovascular que tambien puede cubrirse al menos en parte con una capa de biopelfcula bacteriana. Si esta presente, la biopelfcula puede eliminarse usando un sistema de solvatacion (por ejemplo, el sistema de solvatacion descrito en la publicacion de solicitud de patente de EE.UU. N.° US 2007/0264310 A1) que puede aplicarse al sitio de tratamiento 116 usando un introductor 120 con un tubo de administracion articulable 122 que contiene un conducto de irrigacion (oculto en la Fig. 1) a traves del cual el sistema de solvatacion puede circular a una boquilla 124 en el extremo distal del introductor 122 y de allf al sitio de tratamiento. El sistema de solvatacion y los residuos de la biopelfcula pueden eliminarse del sitio de tratamiento mediante un conducto de aspiracion (oculto en la Fig. 1). La composicion desvelada que comprende quitosano y polisacarido oxidado puede asimismo aplicarse al sitio de tratamiento usando el mismo conducto de irrigacion o uno diferente en el introductor 120. Aquellos expertos en la materia apreciaran que la composicion desvelada (y si se usa, el sistema de solvatacion) puede aplicarse al sitio de tratamiento usando otros metodos o dispositivos. Otros metodos a modo de ejemplo incluyen pulverizacion electrica u otra aplicacion de pulverizacion, lavado, nebulizado, limpieza con mopa, aplicacion por mecha, goteo y trepanacion, y otros dispositivos a modo de ejemplo incluyen boquillas de pulverizacion (por ejemplo, boquillas de pulverizacion de un solo componente o de multiples componentes) y jeringas (por ejemplo, jeringas de vidrio o de plastico de un solo cilindro o de multiples cilindros y peras de goma). El metodo de tratamiento tambien puede realizarse en otras partes del cuerpo como se

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describe en el presente documento.

La Fig. 2 muestra un instrumento 200 a modo de ejemplo que puede usarse en el metodo de tratamiento desvelado. El instrumento 200 incluye un asa 202 y un introductor 222 cuyo extremo distal 224 (citado generalmente) incluye una boquilla de pulverizacion, conductos de irrigacion y aspiracion (no numerados por separado en la Fig. 2). El instrumento 200 puede incluir opcionalmente adicionalmente un primer conjunto de activador 226 (citado generalmente) y un segundo conjunto de activador 228 (citado generalmente). Una rueda de control 230 en el primer conjunto de activador 226 puede ser operable por un usuario para efectuar la flexion del introductor 222, y una rueda de control 232 en el segundo conjunto de activador 228 puede ser operable por un usuario para efectuar el movimiento o giro con respecto al introductor 222 de lfquido pulverizado desde el extremo distal 224 del introductor 222. El asa 202 sirve generalmente como carcasa para diversos otros componentes del instrumento 200 y como soporte para el introductor 222. El asa 202 puede tener una forma similar a la sujecion de una pistola, que define una porcion de sujecion 234 y una nariz 236. La porcion de sujecion 234 esta dimensionada y formada para ser agarrada por la mano de un usuario, mientras que la nariz 236 esta adaptada para conexion para el introductor 222. El accionador 238 y un sensor y valvula asociados (no mostrados en la Fig. 2) pueden usarse para controlar el flujo de gel rehidratado desvelado (y si se usa, el sistema de solvatacion desvelado) mediante el tubo de irrigacion 240 y de aqu mediante la boquilla de pulverizacion en el extremo distal 224 y sobre el sitio de tratamiento deseado. El accionador 238 puede proporcionarse con un intervalo multidireccional de movimiento y asociado a uno o mas sensores y valvulas adicionales (no mostrados en la Fig. 2) para controlar la eliminacion de un sitio de tratamiento del sistema de solvatacion, residuo de biopelfcula y otros residuos mediante el conducto de aspiracion en el extremo distal 224 y de ah al tubo de aspiracion 242. El accionador 238 tambien puede usarse para controlar el flujo del gel rehidratado desvelado mediante una luz separada en el tubo de irrigacion 240 y de ah mediante la boquilla de pulverizacion en el extremo distal 224 y sobre el sitio de tratamiento deseado.

La composicion aplicada que comprende quitosano y polisacarido oxidado puede llenar el sitio de tratamiento (por ejemplo, una cavidad nasal o de los senos), en cuyo caso la capa desvelada de tal composicion puede ser muy gruesa y no estar expuesta al aire u otros gases cercanos, y con diferentes espesores a traves de la capa. La composicion desvelada tambien puede aplicarse como una pelfcula delgada u otro recubrimiento conforme, en cuyo caso la capa desvelada puede ser relativamente delgada y estar expuesta al aire u otros gases cercanos, y con un espesor sustancialmente uniforme en toda la capa. Despues de la gelificacion, la capa de gel protector puede ser viscosa, elastica o viscoelastica. La capa de gel protector se adhiere deseablemente a los tejidos mucosos en el sitio de tratamiento y resiste al desprendimiento u otra alteracion hasta que tenga lugar la degradacion natural o resorcion de la capa de gel, por ejemplo, despues de un tiempo de residencia in vivo de un dfa a algunos (por ejemplo, 2, 3 o 4) dfas, semanas o meses. Mientras tanto, la recolonizacion o reinfeccion bacteriana puede ser significativamente reducida o prevenida, y puede tener lugar curacion y reciliacion mejorada. La capa de gel protector puede proporcionar diversas ventajas terapeuticas que incluyen, pero no se limitan a, repelencia de la adhesion bacteriana, propiedades antiinfecciosas, modulacion inmunitaria local, proteccion de tejido, reduccion o eliminacion del dolor o hemorragia, reduccion en la inflamacion, optimizacion del entorno para el recrecimiento ciliar, reduccion en adherencias a la anatoirna cntica, y similares. Estas ventajas pueden surgir debido a una variedad de mecanismos que incluyen a) destruccion de bacterias, b) inhibicion de la colonizacion bacteriana, c) inhibicion de la adherencia de bacterias al tejido, d) reduccion de la morbilidad de tejido o formacion de abscesos, e) reduccion o prevencion de la reaparicion de enfermedades (por ejemplo, espedficamente reduccion de la inflamacion cronica relacionada con toxina bacteriana y EPS), f) recubrimiento y proteccion de tejido durante la curacion, tal como por el mantenimiento de una herida humeda que promueve la agregacion de plaquetas, o por el cierre de una herida seca sin excesiva formacion escabrosa, g) hemostasia, h) optimizacion del entorno para la reciliacion de la mucosa, i) aceleracion del crecimiento o recrecimiento de cilios y j) administracion de agente(s) terapeutico(s) al sitio de tratamiento. Deseablemente, la capa de gel protector se adherira a una porcion de la mucosa mientras que deja los cilios en porciones sin adherir libres para que experimenten un movimiento de cilios ntmico natural (concretamente, batido ciliar), si se desea tambien distribuira agentes antimicrobianos o agentes terapeuticos adicionales, y deseablemente disuadira o prevendra que las bacterias se adhieran al sitio de tratamiento.

En la capa de fluido y metodo desvelados, puede emplearse una amplia variedad de quitosanos (incluyendo sales y otros derivados de quitosano). Pueden obtenerse quitosanos no modificados a modo de ejemplo y sus sales (incluyendo sales de citrato, nitrato, lactato, fosfato, cloruro y glutamato) a partir de una variedad de fuentes comerciales que incluyen KitoZyme S.A., Fluka Chemie AG, la unidad NovaMatrix de FMC BioPolymer AS y Sigma- Aldrich Co. El quitosano tambien puede sintetizarse por desacetilacion de quitina (poli-N-acetil-D-glucosamina) para eliminar grupos acetilo sobre el atomo de nitrogeno mediante hidrolisis. El polfmero resultante tiene una pluralidad de unidades de repeticion (por ejemplo, de aproximadamente 30 a aproximadamente 3000 unidades de repeticion, de aproximadamente 60 a aproximadamente 600 unidades de repeticion, u otra cantidad de este tipo como pueda desear el uso final elegido), conteniendo algunas o todas grupos amino desacetilados (por ejemplo, aproximadamente del 30 a aproximadamente el 100 % o aproximadamente del 60 a aproximadamente el 95 % de las unidades de repeticion totales), conteniendo las unidades de repeticion restantes (caso de haberlas) grupos amino acetilados. El polfmero es cationico y puede considerarse que esta compuesto por monomeros de glucosamina. El quitosano puede tener una variedad de pesos moleculares promedio en numero, por ejemplo, aproximadamente 5 a aproximadamente 2000 kDa, aproximadamente 10 a aproximadamente 500 kDa, o aproximadamente 10 a aproximadamente 100 kDa. El quitosano puede ser, por ejemplo, un material de peso

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molecular ultrabajo que tiene un peso molecular promedio en numero inferior a aproximadamente 50 kDa, un material de peso molecular bajo que tiene un peso molecular promedio en numero de aproximadamente 50 a aproximadamente 200 kDa, un material de peso molecular medio que tiene un peso molecular promedio en numero de aproximadamente 200 a aproximadamente 500 kDa o un material de peso molecular alto que tiene un peso molecular promedio en numero superior a aproximadamente 500 kDa. Tambien pueden emplearse derivados de quitosano, por ejemplo, derivados en los que uno o mas grupos hidroxilo o amino se han modificado con el fin de alterar la solubilidad o las caractensticas de mucoadhesion del derivado. Derivados a modo de ejemplo incluyen quitosanos tiolados, y derivados de quitosano no tiolados tales como quitosanos acetilados, alquilados o sulfonatados (por ejemplo, eteres de O-alquilo, esteres de O-acilo, trimetilquitosanos cationizados y quitosanos modificados con polietilenglicol). Pueden obtenerse derivados de quitosano de una variedad de fuentes. Por ejemplo, pueden obtenerse quitosanos tiolados de ThioMatrix Forschungs Beratungs GmbH y Mucobiomer Biotechnologische Forschungs- und Entwicklungs GmbH o prepararse haciendo reaccionar el quitosano con un reactante tiolado adecuado, por ejemplo, como se describe en la solicitud PCT publicada N.° WO 03/020771 A1 anteriormente mencionada o en los artfculos de Roldo et al., Krauland et al., Bernkop-Schnurch y Bernkop-Schnurch et al. anteriormente mencionados.

El quitosano se obtiene deseablemente en forma de partfculas secas, por ejemplo, como granulos fluidos cuyo diametro de partfcula promedio es inferior a aproximadamente 1 mm, inferior a aproximadamente 100 pm, aproximadamente 1 a aproximadamente 80 pm, o inferior a 1 pm. El quitosano preferentemente se envasa y transporta a un usuario en tal forma de partfculas secas para reducir la degradacion del quitosano durante el almacenamiento prolongado. El fluido de quitosano puede formarse, por ejemplo, disolviendo el quitosano en agua u otro disolvente adecuado justo antes de uso. Las cantidades de quitosano recomendadas dependeran del peso molecular del quitosano, y pueden ser, por ejemplo, aproximadamente del 1 a aproximadamente el 20 %, aproximadamente del 1 a aproximadamente el 10% o aproximadamente del 1 a aproximadamente el 5% de la solucion resultante. La solicitud publicada de EE.UU. N.° Us 2009/0291911 A1 describe una tecnica preferida para rehidratar un quitosano, dispersando partfculas de quitosano fluidas en un dispersante polar miscible en agua biocompatible, y combinando la dispersion con suficiente disolvente acuoso para que las partfculas lo conviertan en un hidrogel cohesivo. El quitosano puede desmenuzarse, pero deseablemente no esta desmenuzado.

En la capa de fluido y metodo desvelados, puede emplearse una amplia variedad de polisacaridos oxidados. Como ejemplos de polisacaridos se incluyen agares, alginatos, carrageninas, celulosas, quitinas, quitosano (permitiendo asf que el quitosano se reticule usando su homologo oxidado), sulfatos de condroitina, dextranos, galactomananos, glucogenos, acidos hialuronicos, almidones y otros polisacaridos biocompatibles capaces de ser oxidados. Se prefieren polisacaridos oxidados tales como celulosa oxidada, quitina, quitosano, sulfato de condroitina, dextrano, glucogeno, acido hialuronico y almidon. El polisacarido se oxida a un grado suficiente para proporcionar grupos aldehfdo que pueden promover la rapida reticulacion del quitosano cuando el quitosano y el polisacarido oxidado se combinan en solucion acuosa. Como agentes de oxidacion representativos o tecnicas se incluyen el uso de a) peryoato de sodio, b) ion hipoclorito en presencia de catalizadores de di-terc-alquilnitroxilo, c) oxidacion catalizada por metal, usando por ejemplo rutenio, d) oxidacion anhidra usando, por ejemplo, dioxido de nitrogeno en, por ejemplo, un halocarbono, e) oxidacion enzimatica o quimio-enzimatica de almidon, guar y otros polisacaridos, y otros agentes de oxidacion y tecnicas que seran conocidos para las personas que tienen experiencia habitual en la materia. Dependiendo del agente de oxidacion o tecnica seleccionada, puede emplearse una variedad de grados de oxidacion, grados de polimerizacion y sitios de oxidacion. Por ejemplo, la oxidacion puede dirigirse a un grupo hidroxilo primario (por ejemplo, el grupo 6-hidroxilo en las unidades de anhidroglucosa de glucanos), produciendo carboxil-polisacaridos con estructuras de anillo preservadas. La oxidacion tambien puede dirigirse a una funcion de diol vecina presente en un anillo de monosacarido (por ejemplo, el sitio C2-C3 en unidades de anhidroglucosa), produciendo la escision de las unidades monosacarido y la produccion de grupos funcionales dialdehfdo o dicarboxilo. El contenido de dialdehfdo de un polisacarido oxidado tal puede oscilar de un grado de oxidacion de, por ejemplo, el 2 % a practicamente el 100 %, por ejemplo, superior al 30 % o superior al 50 % de los sitios de oxidacion disponibles. El polisacarido oxidado tambien puede contener otros grupos funcionales, por ejemplo, grupos hidroxialquilo, grupos cationicos, grupos carboxilo y otros grupos acidos. Como una generalizacion, pueden emplearse cantidades reducidas de polisacarido oxidado en la capa de fluido desvelada y metodo ya que el grado de oxidacion del polisacarido es elevado.

El polisacarido oxidado se disuelve deseablemente en agua u otro disolvente adecuado antes de uso. Cantidades de polisacarido oxidado recomendadas normalmente dependeran del peso molecular del polisacarido oxidado, y pueden ser, por ejemplo, aproximadamente del 1 a aproximadamente el 20 %, aproximadamente del 1 a aproximadamente el 10% o aproximadamente del 1 a aproximadamente el 5% de la solucion resultante. La solucion de polisacarido oxidado normalmente se mantiene separada de la solucion de quitosano hasta justo antes de uso.

En comparacion con la reticulacion usando un aldehfdo de peso molecular bajo, tal como glutaraldehfdo o genipina, los polisacaridos oxidados parecen proporcionar una gelificacion mas rapida, mientras que evitan el uso de aldehfdos de peso molecular bajo posiblemente menos bioaceptables. Ademas de su capacidad para reaccionar con grupos amina en el quitosano, los grupos aldehfdo en el polisacarido oxidado pueden tambien potenciar la mucoadhesion. Los polisacaridos oxidados pueden proporcionar beneficios adicionales, que incluyen

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biodegradabilidad, biorresorbabilidad, administracion de farmaco o propiedades hemostaticas mejoradas o mejor controladas. La presencia de iones fosfato parece acelerar la reaccion de reticulacion. El fosfato puede proporcionarse usando solucion salina tamponada con fosfato (PBS) como disolvente para uno o ambos del quitosano y polisacarido oxidado.

Deseablemente se emplean suficiente quitosano y polisacarido oxidado de manera que se forme una capa de gel protector en menos de 30 minutos despues de que el quitosano y el polisacarido oxidado se mezclen, y mas preferentemente en menos de 20 minutos, menos de 10 minutos, menos de 5 minutos o esencialmente inmediatamente despues de la mezcla. La mezcla de fluido resultante puede, por ejemplo, contener quitosano y polisacarido oxidado en una cantidad combinada que representa aproximadamente del 1 a aproximadamente el 20 %, aproximadamente del 1 a aproximadamente el 10 % o aproximadamente del 1 a aproximadamente el 5 % de la composicion. El quitosano y el polisacarido oxidado pueden combinarse, por ejemplo, en una relacion de aproximadamente 10:1 a aproximadamente 1:20, aproximadamente 5:1 a aproximadamente 1:10, o aproximadamente 3:1 a aproximadamente 1:5. Estas relaciones dependen del grado de oxidacion del (de los) polisacarido(s) oxidado(s), usandose generalmente cantidades de polisacarido oxidado mas bajas cuando se empleen polisacaridos mas altamente oxidados. Para algunas aplicaciones, la cantidad de quitosano preferentemente sera de hasta poder ser factible, con el fin de proporcionar buenas propiedades antimicrobianas, y en tales casos sera preferible usar una baja cantidad de polisacarido altamente oxidado para obtener la rapida formacion de gel.

Las composiciones desveladas estan deseablemente sustancialmente libres de colageno. Preferentemente, las composiciones estan suficientemente libres de colageno (por ejemplo, no conteniendo colageno en absoluto), de manera que sean vendibles en el mundo para su uso sin restriccion en los seres humanos.

Las composiciones desveladas pueden incluir opcionalmente una variedad de otros componentes. Estos otros componentes pueden disponerse antes de la mezcla en la primera parte, segunda parte o ambas partes de una composicion de dos partes. Otros componentes a modo de ejemplo incluyen agua y otros disolventes (por ejemplo, alcoholes), acidos, bases, agentes de tamponamiento, agentes antimicrobianos, agentes terapeuticos y otros adyuvantes. Un acido, base o agente de tamponamiento puede mantener, por ejemplo, la composicion a un pH apropiado para contacto con tejido humano, por ejemplo, un pH superior a 5, un pH proximo a neutro, o un pH inferior a 8,5. Agentes de tamponamiento a modo de ejemplo incluyen barbitona sodica, glicinamida, glicina, cloruro de potasio, fosfato de potasio, hidrogenoftalato de potasio, acetato sodico, citrato de sodio, fosfato de sodio y sus acidos conjugados.

Las composiciones desveladas son deseablemente inherentemente antimicrobianas sin requerir la adicion de un agente antimicrobiano separado. La actividad antimicrobiana puede influirse por la proporcion de quitosano en la composicion (tendiendo proporciones de quitosano mas altas a proporcionar mayor actividad antimicrobiana) y por el numero de atomos de hidrogeno de amina del quitosano disponibles. Por consiguiente, el uso de derivados de quitosano que contienen bajos numeros de atomos de hidrogeno amino disponibles (tales como los derivados de N- carboxietilo deseados en el artfculo de Weng et al. anteriormente mencionado) puede ser contraindicado. En cualquier caso, puede emplearse un agente antimicrobiano separado si se desea. Un lista util de tales agentes antimicrobianos puede encontrarse, por ejemplo, en la publicacion de solicitud de patente de EE.UU. N.° US 2007/0264310 A1 anteriormente mencionada.

Agentes terapeuticos a modo de ejemplo que pueden emplearse en las composiciones desveladas incluyen cualquier material adecuado para su uso en el sitio de tratamiento previsto, que incluye analgesicos, anticolinergicos, agentes antifungicos, antihistammicos, agentes antiinflamatorios esteroideos o no esteroideos, agentes antiparasfticos, agentes antivirales, composiciones biostaticas, agentes quimioterapeuticos/antineoplasicos, citocinas, descongestivos, agentes hemostaticos (por ejemplo, trombina), inmunosupresores, mucoltticos, acidos nucleicos, peptidos, protemas, esteroides, vasoconstrictores, vitaminas, mezclas de los mismos, y otros materiales terapeuticos que seran conocidos para aquellos expertos en la materia. Una lista util de tales agentes terapeuticos puede encontrarse, por ejemplo, en la publicacion de solicitud de patente de EE.UU. N.° US 2007/02643 10 A1 anteriormente mencionada.

Otros adyuvantes que pueden incluirse en las composiciones desveladas incluyen tintes, pigmentos y otros colorantes (por ejemplo, FD & C Red No. 3, FD & C Red No. 20, FD & C Yellow No. 6, FD & C Blue No,2, D & C Green No. 5, D & C Orange No. 4, D & C Red No. 8, caramelo, dioxido de titanio, colorantes de frutas o verduras tales como polvo de remolacha o beta-caroteno, curcuma, pimenton y otros materiales que seran bien conocidos para aquellos expertos en la materia); indicadores; aromatizantes o edulcorantes que incluyen, pero no se limitan a, aceite de ams, cereza, aceite de canela, aceite de cftrico (por ejemplo, aceite de limon, lima o naranja), cacao, eucalipto, aromaticos herbales (por ejemplo, aceite de clavo, aceite de salvia o aceite de casia), lactosa, maltosa, mentol, aceite de hierbabuena, sacarina, ciclamato sodico, aceite de menta, sorbitol, sacarosa, vainilla, aceite de gaulteria, xilitol y mezclas de los mismos; antioxidantes; agentes antiespumantes; y modificadores de la reologfa que incluyentes espesantes y tixotropos. Las composiciones desveladas deseablemente no contienen componentes que posiblemente pudieran danar los tejidos o estructuras de la mucosa, por ejemplo, tejidos en las cavidades nasales o de los senos.

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En aquellos casos en los que se desee eliminar el agua del tejido, por ejemplo, para eliminar fluido de polipos o tejido edematoso, puede emplearse un agente hiperosmolar en las composiciones desveladas. Agentes hiperosmolares a modo de ejemplo incluyen furosemida, gel de cloruro sodico y otras preparaciones de sal que extraen agua del tejido o sustancias que cambian directamente o indirectamente el contenido osmolar de la capa mucosa. Si se desea liberacion sostenida o liberacion retardada de un agente terapeutico, tambien puede incluirse un modificador del agente de liberacion.

La composicion desvelada normalmente se sometera a esterilizacion y se dispondra en envases sellados adecuados (por ejemplo, una jeringa multicomponente, un vial o viales, o una bolsa multi-camara hecha de materiales adecuados) antes del transporte a un usuario final. Puede llevarse a cabo personalizacion adicional de las propiedades usando un procedimiento de esterilizacion tal como procesamiento por radiacion gamma o haz de electrones (haz E) para producir la escision en cadena controlada. Puede emplearse esterilizacion con radiacion ionizante fna (por ejemplo, esterilizacion por haz E fno) para limitar el grado de escision en cadena, como se trata en la solicitud PCT en tramitacion junto con la presente WO 2009/132229 A2, presentada incluso la fecha de esta. Tanto si se esteriliza como si no, la primera parte que contiene el quitosano normalmente se mantendra separada de la segunda parte que contiene el polisacarido oxidado hasta justo antes de uso.

Las composiciones desveladas pueden usarse deseablemente como una parte de una pauta de tratamiento multi- etapa que altera una biopelfcula bacteriana y disuade su retorno. Por ejemplo, pueden llevarse a cabo una serie de etapas que pueden ser ampliamente clasificadas como limpieza/alteracion, destruccion, aireacion, proteccion/recubrimiento y curacion. La etapa de limpieza/alteracion puede llevarse a cabo administrando un sistema de solvatacion como se trata anteriormente a proposito de la Fig. 1 y la Fig. 2. La etapa de destruccion puede llevarse a cabo aplicando un agente antimicrobiano adecuado al sitio de tratamiento. Esto puede llevarse a cabo, por ejemplo, incluyendo un agente antimicrobiano en el sistema de solvatacion, como una composicion aplicada por separado, o en tanto el sistema de solvatacion como en una composicion aplicada por separado. Un agente antimicrobiano tambien puede aplicarse o administrarse posoperatoriamente. La etapa de aireacion puede llevarse a cabo proporcionando pasadizos de aire o mejorando los pasadizos de aire a los tejidos tratados abriendo pasos ocluidos o parcialmente ocluidos, por ejemplo, los senos u ostia de los senos para administraciones nasales. Esto puede llevarse a cabo, por ejemplo, eliminando quirurgicamente estructuras de tejido obstructivas o desplazando manualmente tales estructuras. La etapa de proteccion/recubrimiento puede llevarse a cabo recubriendo al menos parte del tejido asf tratado con la composicion desvelada que contiene quitosano y polisacarido oxidado como se ha descrito anteriormente. La etapa de curacion puede llevarse a cabo permitiendo que la superficie de tejido limpia, protegida y sellada experimente un retorno a un estado normal, por ejemplo, mediante uno o mas mecanismos de curacion tales como modulacion de una respuesta inflamatoria, fagocitosis, remodelacion de la mucosa, reciliacion o restauracion completa o parcial de la funcion normal. La pauta de tratamiento multi-etapa puede incluir o ir seguida de una etapa de despeje en la que la composicion desvelada que contiene quitosano y polisacarido oxidado es suficientemente biodegradable o biorresorbible para desaparecer del sitio de tratamiento en un periodo de tiempo deseado, por ejemplo, mas de 1 dfa, mas de 3 dfas, o aproximadamente 4 a 7 dfas, y deseablemente sin dejar grandes trozos solidos. El metodo desvelado puede llevarse a cabo ventajosamente sin requerir cirugfa, por ejemplo, aplicando y quitando el sistema de solvatacion opcional y aplicando la composicion desvelada que contiene quitosano y polisacarido oxidado mediante tecnicas de aspiracion/succion normales o por el simple lavado del tejido afectado. Puede realizarse una serie comparable de etapas en una pauta de tratamiento multi-etapa en una porcion del ofdo medio o interno. Mas detalles referentes a tal pauta pueden encontrarse en la publicacion de solicitud de patente de EE.UU. N.° US 2007/0264310 A1.

La invencion se ilustra ademas en los siguientes ejemplos no limitantes.

Ejemplo 1

Formulaciones de gel

Se prepararon soluciones de quitosano disolviendo cantidades variables de glutamato de quitosano (PROTASAN™ UP G 113 o PROTASAN UP G 213 de la unidad NovaMatrix de FMC BioPolymer AS) durante la noche en PBS. Se preparo una solucion de almidon oxidado (OXST) disolviendo dialdehndo polimerico P9265 (de Sigma-Aldrich) en PBS mientras que se calentaba a 80 °C durante 1-2 horas. Se prepararon soluciones de metilcelulosa (MC) oxidada e hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC) oxidada haciendo reaccionar Me o HPMC con peryoato de sodio, liofilizando los productos resultantes y disolviendo los productos liofilizados en PBS. Las soluciones de quitosano y las soluciones de polisacarido oxidado resultantes se mezclaron en diversas relaciones y concentraciones. Las mediciones reologicas determinaron el tiempo de gelificacion y el modulo de almacenamiento (G') para los hidrogeles resultantes. Los resultados se muestran a continuacion en la Tabla 1.

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Tabla 1

Tiempo de gelificacion y modulo de almacenamiento G'

Serie N.°

Quitosano Polisacarido oxidado Relacion entre quitosano: polisacarido oxidado Conc. total (%) Tiempo de gelificacion (min) G'(Pa)

1

G 113 OXST 2:1 5 < 21 5.200

2

G 113 OXST 1:1 5 < 2' 4.000

3

G 113 OXST 1:2 5 < 21

4

G 113 OXST 2:1 3,75 < 21 800

5

G 113 OXST 1:1 3,33 3,2 400

6

G 113 OXST 1:2 3 6,4 200

7

G 213 OXST 2:1 2,5 < 21 750

8

G 213 OXST 1:1 2,5 < 21 450

9

G 113 MC oxidada 1:2 7,5 < 1 dfa

10

G 113 MC oxidada 1:10 5 < 21

11

G 113 MC oxidada 1:5 5 < 21 100

12

G 113 MC oxidada 1:1 5 < 1 dfa

13

G 113 MC oxidada 5:1 5 sin gelificacion

14

G 113 HPMC oxidada 1:4 12,5 < 60

15

G 113 HPMC oxidada 1:2 7,5 < 1 dfa

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G 113 HPMC oxidada 1:1 5 sin gelificacion

1 Gelifico antes de empezar la medicion del reometro

Cada una de las formulaciones de quitosano/polisacarido oxidado mostradas en la Tabla 1 tuvo una viscosidad por debajo de 500 cP, y debe ser inyectable en un sitio de tratamiento de tejido mucoso usando, por ejemplo, un dispositivo como el mostrado en la Fig. 2 o una variedad de otros dispositivos que seran conocidos para los expertos habituales en la materia. Las formulaciones mostradas en la Tabla 1 tambien deben ser pulverizables sobre un sitio de tratamiento mucoso. Debido a la rapidez con la que se produjo la gelificacion para algunas formulaciones, la aplicacion por pulverizacion sena en muchos casos un modo preferido de aplicacion. La formulacion de la serie N.° 2 (Quitosano G 113/OXST 1:1 a una concentracion total del 5%) se aplico por pulverizacion usando un aplicador asistido por gas (regulador FibriJet™ SA-6030, de Micromedics, Inc., que controla un conjunto de pulverizacion FibriJet SA-3652 equipado con un par de jeringas de 3 cc). La solucion de OXST se coloro usando azul de toluidina para facilitar ver la capa de fluido aplicada. Se obtuvo un gel delgado fuerte que formo rapidamente.

Ejemplo 2

Propiedades antimicrobianas

Se evaluaron las formulaciones de la serie N.° 7 y 8 de la Tabla 1 (Quitosano G 213/OXST 2:1 y 1:1 a una concentracion total del 2,5 %, respectivamente, mostradas como las barras B y C en la Fig. 3) para determinar su actividad antimicrobiana frente a S. aureus, usando un procedimiento en placa cuyo lfmite de deteccion era log 2. Las formulaciones de gel se colocaron por duplicado en condiciones esteriles directamente en una placa de cultivo de tejido de poliestireno de 24 pocillos. Cada pocillo se incubo con 1 ml (25.000 unidades formadoras de colonias) de una suspension bacteriana de S. aureus (ATCC 25923). Se incubaron controles positivos con 1 ml de caldo de triptona y soja (TSB). Despues de 6 horas de incubacion a 37 °C, el medio se transfirio a tubos nuevos y se realizaron diluciones de diez veces en serie. Se sembraron alfcuotas de diez pl de la dilucion apropiada por triplicado en placas de agar de triptona y soja usando el metodo de monitorizacion de la dilucion (Jett B.D. et al., Biotechniques, 23, 648-650 (1997)). Las placas se incubaron a 37 °C durante 24 horas y se contaron las unidades formadoras de colonias (UFC). Como se muestra en la Fig. 3, ambas formulaciones presentaron destruccion completa (reduccion superior a 6 log) de las bacterias frente al control de TSB (vease la barra A en la Fig. 3).

Se evaluaron las formulaciones de la serie N.° 2, 10 y 11 de la Tabla 1 (Quitosano G 113/OXST 1:1, Quitosano G 113/MC oxidada 1:10 y Quitosano G 113/MC oxidada 1:5 a una concentracion total del 5%, respectivamente, mostradas como las curvas B, C y D en la Fig. 4) como se ha descrito anteriormente para determinar su actividad antimicrobiana en funcion del tiempo frente a S. aureus, usando una carga bacteriana de 140.000 UFC/ml, registrandose las mediciones 1, 3 y 6 horas frente a un control de TSB (vease la curva A en la Fig. 4). Como se muestra en la Fig. 4, se observo destruccion completa despues de 6 horas para los geles preparados a partir de las tres formulaciones de quitosano/polisacarido oxidado, observandose destruccion significativa despues de 3 horas. La formulacion de Quitosano G 213/OXST parecio proporcionar destruccion mas rapida que las formulaciones de Quitosano G 113/MC oxidada.

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Ejemplo 3

Administracion de farmaco

Se usaron las formulaciones de la serie N.° 1, 2 y 3 de la Tabla 1 (Quitosano G 113/OXST 2:1, 1:1 y 1:2 a una concentracion total del 5 %, respectivamente, mostradas como las curvas A, B y C en la Fig. 5) para preparar hidrogeles cargados de farmaco en tampon PBS mezclando las soluciones de quitosano y de almidon oxidado con fosfato de dexametasona como farmaco que va a administrate. Como se muestra en la Fig. 5, se obtuvo liberacion relativamente rapida pero controlada durante hasta 3 d^as para el fosfato de dexametasona, posiblemente ayudado por una interaccion entre el farmaco anionico y el polfmero de quitosano cationico.

Ejemplo 4

Degradacion

Se determino el comportamiento de degradacion de diversas formulaciones de gel de quitosano/polisacarido oxidado poniendo los geles en diversos sistemas de tampon, que incluyen PBS a pH 7,4 con y sin lisozima (1 mg/ml), PBS con lipasa, acido 2-(N-morfolino)etanosulfonico (MES) a pH 6,0 y trishidroximetilaminometano (TRIS) a pH 7,4. Se determino la perdida de peso en diversos momentos de tiempo hasta los 28 dfas. La perdida de peso se produjo usando todos los sistemas tampon, quedando aproximadamente el 30-60 % del peso de muestra original (seco) despues de 28 dfas. Los geles con contenido de almidon oxidado mas alto presentaron mayor perdida de peso. Los resultados de perdida de peso para el quitosano/polisacarido oxidado en PBS a pH 7,4 y 37 °C (sin lisozima) se muestran en la Fig. 6.

Parecio que los geles basados en almidon oxidado se degradaban en un material 'tipo vaina', mientras que parecio que los geles basados en celulosa oxidada segrnan como geles durante la degradacion. Los geles basados en celulosa oxidada pueden ser hemostaticos.

Los resultados en los Ejemplos 1-4 muestran que el quitosano y los polisacaridos oxidados pueden combinarse para preparar formulaciones inyectables o pulverizables que forman rapidamente capas de gel protectoras fuertes in situ con propiedades antimicrobianas inherentes. Las formulaciones fueron en cada caso pulverizables, antibacterianas, biodegradables o biorresorbibles y capaces de servir de armazon para la administracion de farmaco.

Aunque se han ilustrado y descrito realizaciones espedficas en el presente documento para fines de descripcion de las realizaciones preferidas, se apreciara por aquellos expertos habituales en la materia que una amplia variedad de implementaciones alternativas o equivalentes calculadas para lograr los mismos fines pueden sustituir las realizaciones espedficas mostradas y descritas. La presente solicitud pretende cubrir cualquier adaptacion o variacion de las realizaciones preferidas tratadas en el presente documento. Por tanto, se pretende manifiestamente que la presente invencion se limite solo por las reivindicaciones y los equivalentes de las mismas.

Claims (15)

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   REIVINDICACIONES

   1. Una capa de fluido para su uso en un metodo para retornar a un estado normal, una superficie de tejido mucoso lesionada, inflamada o quirurgicamente reparada en el ofdo, nariz o garganta, cuyo metodo comprende:

   a) aplicar a tal superficie de tejido una capa de fluido que contiene una mezcla de quitosano y un polisacarido oxidado que contiene grupos aldefudo capaces de promover la rapida reticulacion del quitosano, estando el quitosano y el polisacarido oxidado presentes en cantidades suficientes para formar una capa de gel protector in situ, y

   b) dejar que la mezcla forme una capa de gel protector in situ.
2. 2. Una capa de fluido para su uso segun la reivindicacion 1, en la que el quitosano es un quitosano no modificado o una sal de quitosano.
3. 3. Una capa de fluido para su uso segun la reivindicacion 1, en la que el quitosano es un derivado de quitosano en el que uno o mas grupos hidroxilo o amino del quitosano se han modificado para alterar la solubilidad o las caractensticas de mucoadhesion del derivado.
4. 4. Una capa de fluido para su uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que el polisacarido oxidado comprende almidon, celulosa, quitina, quitosano, sulfato de condroitina, dextrano, glucogeno o acido hialuronico.
5. 5. Una capa de fluido para su uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que el quitosano y el polisacarido oxidado se combinan en una relacion de 10:1 a 1:20.
6. 6. Una capa de fluido para su uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en la que el quitosano y el polisacarido oxidado se combinan en una relacion de 3:1 a 1:5.
7. 7. Una capa de fluido para su uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6, que comprende ademas iones fosfato.
8. 8. Una capa de fluido para su uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que dicho metodo comprende aplicar la capa de fluido a una cavidad nasal o de los senos.
9. 9. Una capa de fluido para su uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que dicho metodo comprende aplicar la capa de fluido a un ofdo medio o interno.
10. 10. Una capa de fluido para su uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que dicho metodo comprende aplicar la capa de fluido a una garganta.
11. 11. Una capa de fluido para su uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que dicho metodo comprende aplicar la capa de fluido de una jeringa de multiples cilindros.
12. 12. Una capa de fluido para su uso segun una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en la que dicho metodo comprende aplicar la capa de fluido pulverizando.
13. 13. Una capa de fluido para su uso segun la reivindicacion 1, en la que la capa de gel protector se forma en menos de 5 minutos despues de mezclar el quitosano y el polisacarido oxidado.
14. 14. Una capa de fluido para su uso segun la reivindicacion 1, en la que la capa de fluido es un gel basado en celulosa que deja un gel durante la degradacion.
15. 15. Una capa de fluido para su uso segun la reivindicacion 1, en la que la capa de gel protector es biodegradable o biorresorbible, y desaparece de la superficie del tejido en un periodo de tiempo superior a un dfa y sin dejar grandes trozos solidos.