ES2227203T3 - Metodos para tratar la infeccion por el virus de la hepatitis delta con beta-1-2'-desoxinucleosidos. - Google Patents

Metodos para tratar la infeccion por el virus de la hepatitis delta con beta-1-2'-desoxinucleosidos.

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ES2227203T3 ES01937785T ES01937785T ES2227203T3 ES 2227203 T3 ES2227203 T3 ES 2227203T3 ES 01937785 T ES01937785 T ES 01937785T ES 01937785 T ES01937785 T ES 01937785T ES 2227203 T3 ES2227203 T3 ES 2227203T3
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Abstract

Uso de un 20-desoxi-beta-L-eritro-pentofuranonucleósido de la fórmula **(Fórmula)** o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de un huésped infectado con el virus de la hepatitis D, fórmula en la que R1 se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cíclico, CO-alquilo CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquil- sulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado fosfato; y BASE es una base purina o pirimidina que opcionalmente puede estar sustituida.

Description

Métodos para tratar la infección por el virus de la hepatitis delta con \beta-L-2'-desoxinucleósidos.
Esta solicitud reivindica la prioridad de la solicitud provisional de patente U.S. nº. 60/207.538, presentada el 26 de mayo de 2.000.
Campo de la invención
Esta invención corresponde al área de composiciones para el tratamiento de un huésped infectado con el virus de la hepatitis delta (denominada también "HDV"), y a su uso, que incluye administrar una cantidad efectiva de un
\beta-L-2'-desoxi-nucleósido definido o una de sus sales o prodroga farmacéuticamente aceptable.
Antecedentes de la invención
La hepatitis de tipo D, la forma más severa de la hepatitis viral, está causada por la infección con el virus de la hepatitis delta (HDV), un satélite subviral del virus de la hepatitis B (HBV) (Smedile, A. y otros, Prog Liver Dis 1994, 12, 157-75). Comparada con otros agentes de la hepatitis viral, la infección aguda con HDV está asociada, más frecuentemente, con la hepatitis fulminante, una forma rápidamente progresiva, a menudo fatal, de la enfermedad en la que se destruyen cantidades masivas del hígado. Típicamente, la hepatitis crónica de tipo D se caracteriza por lesiones necroinflamatorias, similares a la HBV crónica, pero más severas, y frecuentemente progresa a cirrosis y fallo hepático, siendo la causa de una asociación desproporcionada de infección crónica por HDV con enfermedad terminal hepática (Smedile, A. y otros, Prog Liver Dis 1994, 12, 157-75; Rizetto, M y otros, Ann Intern Med 1983, 98, 437-41). Aunque la infección con HDV afecta a menos individuos que la de HBV sola, el fallo hepático agudo o crónico resultante es una indicación común para el trasplante de higado en Europa así como en Norteamérica (Smedile, A. y Rizetto, M, Int J Clin Lab Res 1992, 22, 211-215; Wright, T.L. y Pereira, B., Liver Transplant Suregery, 1995, 1, 30-42). La enfermedad crónica afecta a 15 millones de personas en el mundo, de las que aproximadamente 70.000 están en EE.UU. El Centro para Control de Enfermedades estima en 1.000 muertes al año por infección con HDV en EE.UU (Alter, M.J. y Hadler, S.C., Prog Clin Bio Res 1993, 382, 243-250; Alter, M.J. y Mast, E.E. Gastroenterol Clin North Am, 1994, 23, 437-55.)
Actualmente no hay una terapia efectiva, generalmente aceptada, para la hepatitis de tipo D y el trasplante de hígado es la única opción para la enfermedad hepática en la etapa terminal. Aunque el interferón alfa ha tenido un éxito moderado en el tratamiento de algunos casos de hepatitis de tipo D, la necesidad de mejores opciones de tratamiento está indicada por las dosis muy altas requeridas, las respuestas variables, las frecuentes recividas al cesar el tratamiento y las dificultades en la administración del fármaco (Thomas, H.C. y otros, Prog Clin Biol Res, 1987, 234, 277-90; Hoofnagle, J. y otros, Prog Clin Biol Res, 1987, 234, 291-8; Rosina, F. y otros, Prog Clin Biol Res, 1987, 234, Rosina, F. y otros, Hepatology, 1991, 13, 1052-6; Farci, P. y otros, N Engl J Med, 1994, 330, 88-94; Hadziyannis, S.J., J Hepatol 1991, 13 (Supl. 1) S21-6; Di Marco, V. y otros, J. Viral Hepat 1996, 3, 123-8; Porres, J.C. y otros, J Hepatol 1989, 9, 338-44).
El virión de HDV está compuesto por un núcleo de ribonucleoproteína y una envoltura. El núcleo contiene RNA de HDV y antígeno de hepatitis delta (HDAg), que es la única proteína codificada por el virus (Wang, K.S. y otros, Nature, 1986, 323, 508-14). La envoltura está formada por la proteína superficial del antígeno (antígeno superficial de la hepatitis B, o HBsAg) del virus del favorecedor, hepatitis B (Bonino, F., Infect Immun 1984, 43, 1000-5; Bonino, F. y otros, Hepatology, 1981, 1, 127-31; Bonino, F. y otros, J. Virology, 1986, 58, 945-50). La envoltura es la única función de ayuda que tiene el HBV. El HDV es capaz de replicar su RNA dentro de las células en ausencia de HBV (Kuo, M.Y. y otros, J. Virol 1989, 63, 1945-50), pero requiere el HBsAg para el empaquetado y liberación de los viriones de HDV (Wu, J.C. y otros, J Virol 1991, 65, 1099-104; Ryu, W.S. y otros, J Virol 1992, 66, 2310-2315) así como para ser infectivo (Sureau, C. y otros, J Virol, 1992, 66, 1241-5). Como resultado de la dependencia de HDV sobre el HBV el HDV infecta los individuos sólo en asociación con el HBV.
La lamivudina (\beta-L-2',3'-didesoxi-3'-tiacidina, 3TC) es un nucleósido sintético que han demostrado ser efectivo para tratar la infección por HIV y HBV. Véase la patente U.S. nº. 5.539.116, expedida a Liotta y otros. Se sabe que la lamivudina causa una supresión sostenida de la replicación de HBV durante el tratamiento (Nevens, F. y otros, Gastroenterology, 1997, 113, 1258-1263). Sin embargo, la lamiduvina no mejora la actividad de la enfermedad ni rebaja los niveles de HDV-RNA en pacientes con hepatitis delta crónica (Lau, D.T, y otros, Hepatology, 1999, 30, 546-9). Recientemente se ha aprobado en EE.UU. y en varios otros países la lamivudina para el tratamiento de la infección crónica por HBV. Un tratamiento prolongado de vehículos crónicos de HBV con lamivudina conduce a niveles rebajados de HBV en suero y una histología mejorada del hígado (Lai, C.L. y otros, N Engl J Med, 1998, 339, 61-8; Tyrrell, D. y otros, Hepatology 1993, 18, 112A; Nevens, F. y otros, Gastroenterology, 1997, 113, 1258-63; Dienstag, J.L. y otros, N Engl J Med, 1995, 333, 1657-61). A pesar de los efectos espectaculares sobre el HBV, el tratamiento con lamivudina de pacientes con infección crónica con HBV y HDV tiene poco efecto sobre los niveles de HDV en circulación; y, lo que es más importante, no hay mejora de la actividad sobre la enfermedad aún cuando se supriman los niveles de HBV (Honkoop, P. y otros, Hepatology, 1997, 24 (Supl.), 1219 (resumen), Lau, D.T. y otros, Hepatology, 1999, 30, 546-9).
Se han intentado formas adicionales de tratamiento. Por ejemplo, la suramina in vitro bloquea la entrada del virión en hepatocitos, pero es demasiado tóxica para ser aceptable en tratamientos a largo plazo en el hombre (Smedile, A. y otros, Prog Liver Dis 1994, 12, 157-75). El aciclovir intensifica la replicación de HDV in vitro (Smedile, A. y otros, Prog Liver Dis, 1994, 12, 157-75). La ribavirina no afectaba significativamente a los parámetros virológicos o bioquímicos y tenía varios efectos secundarios (Smedile, A. y otros, Prog. Liver Dis, 1994, 12, 157-75). Los análogos sintéticos de la timosina han sido también inefectivos en el tratamiento de la infección por HDV (Smedile, A. y otros, Prog Liver Dis, 1994, 12, 157-75).
Ninguno de los tratamientos descritos para la infección con HDV es generalmente aceptado como efectivo.
A causa de que el virus de la hepatitis de la marmota america (WHV) está íntimamente relacionado con el HBV (una homología de ácido nucleico de aprox. 85%), se ha usado ampliamente como modelo para la infección y
enfermedad con HBV en su huésped natural, la marmota oriental (M. morax) (Gerin, J.L., Gastroenterol Jpn 1990, suplem. 25, 38-42; Tennant, B.C. y otros, Viral Hepatitis and Liver Disease, 1988, 462-464). Se han usado también extensamente marmotas infectadas experimentalmente para análisis y desarrollo de una terapia anti HBV (Zahm, F.E. y otros, Ital J Gastroenterol Hepatol, 1998, 30, 510-6; Tennant, B.C. y otros, Hepatology, 1998, 28, 179-91;
Mason, W.S. y otros, Virology, 1998, 245, 18-32; Korba, B.E. y otros, Hepatology, 1996, 23, 958-63; Hurwitz, S. y otros, Antimicrob Agents Chemother 1998, 42, 2804-2809; Block, T.M. y otros, Nat Med 1998, 4, 610-4; Cullen, J.M. y otros, Antimicrob Agents Chemother, 1997, 41, 2076-82; Fourel, G. y otros, Nature, 1990, 347, 294-8; Gangemi, J. y otros, Antivir Therap, 1997, 1, 64-70; Genovesi, E.V. y otros, Antimicrob Agents Chemother, 1998, 42, 3209-17; Korba, B.E. y otros, Antivir Res, 2000, 45, 19-32; Cote, P.J. y otros, Hepatology 2000, 31, 190-200; Korba, B.E. y otros, Antiviral Therapy, 2000, 5(2), 95-104; Korba, B.E. y otros, Antimicrob Agents Chemother, 2000, 44(6), 1757-60; Korba B.E. y otros, Antimicrob Agents Chemother, 2000, 44(7), 1964-1969). La eficacia de varios agentes anti HBV usados para tratar la infección crónica producida experimentalmente el marmotas (araAMP, ribavirina, AZT, ACV, 3TC, famciclovir, FTC) ha sido paralela a la eficacia de estos agentes administrados a pacientes con HBV tratados en el transcurso de ensayos clínicos. La similar eficacia observada en marmotas infectadas con WHV y personas infectadas con HBV tratadas con agentes anti HBV demuestra que el modelo animal de la marmota puede servir para diseñar terapias anti HBV en el hombre (Zahm, F.E. y otros, Ital J Gastroenterol Hepatol, 1998, 30, 510-6; Tennant, B.C. y otros, Hepatology, 1998, 28, 179-91; Mason, W.S. y otros, Virology, 1998, 245, 18-32; Hurwitz, S.J. y Otros, Antimicrob Agents, Chemother 1998, 42(11), 2004-2809); Fourel, G. y otros, Nature, 1990, 347, 294-8; Gangemi, J. y otros, Antivir Therap 1997, 1, 64-70; Genovesi, E.V. y otros, Antimicrob Agents Chemother, 1998, 42, 3209-17; Korba, B.E. y otros, Antivir Res, 2000, 45(1), 19-32; Korba, B.E. y otros, Antiviral Therapy, 2000, 5(2), 95-104). Como el HBV, el WHV puede soportar la formación de partículas de HDV y la infección, y la marmota oriental ha sido un modelo útil para la infección con HDV (negro, F. y otros, J. Virol 1989, 63, 1612-8; Parana, R, Gerard, F., Lesbordes, J.L., Pichoud, C., Vivitski, L., Lyra, L.G. y Trepo, C., J. Hepatol 1995, 22, 468-73; Ciccaglione, A.T. y otros, Arch Virol 1993, Suplem. 8, 15-21; Bergmann, K.F. y otros, J Immunol 1989, 143, 3714-21; Ponzetto, A. y otros, Proc. Natl Acad Sci USA, 1984, 81, 2208-12; Ponzetto, A. y otros, Prog Cilin Biol Res 1987, 234, 37-46).
La dependencia del HDV de su virus favorecedor, HBV, podría sugerir que al tratamiento con éxito de la infección soporte por HBV seguiría un tratamiento con éxito de la infección por HDV, aunque parece que éste no es el caso, como lo revelan resultados obtenidos recientemente con el fármaco lamivudina (Glaxo-Wellcome, Inc.) (Honkoop, P. y otros, Hepatology, 1997, 24 (suplem.), 1219 (resumen); Lau y otros, Hepatology, 1999, 30, 546-9). El que la lamivudina no tenga efecto sobre pacientes infectados con HBV-HDV subraya el papel directo del HDV en la severidad de la enfermedad en tales pacientes. Aunque la lamivudina inhibe la replicación de HBV y WHV, no afecta a la producción del antígeno viral superficial (Lau, D.T., y otros, Hepatology 1999, 30, 546-9; Doong, S.L. y otros, Proc Natl Acad Sci USA 1991, 88, 8495-9; Korba, B.E. y otros, Hepatology 2000, 32(4 Pt 1), 807-817; Korba, B.E. y otros, Hepatology 2000, 31(5), 1165-1175). El ciclo de vida de HBV y otros representativos de esta familia de virus (por ejemplo, WHV) es singular en cuanto a que el procedimiento de replicación de copias genómicas del virus y la producción de proteínas virales (por ejemplo, antígeno superficiales de HBV o WHV) está regulado diferencialmente (Ganem, D., Hepadnaviridae, en Fields Virology, Fields BN, Knipe D.M., Howlet P, ed., Lippincott-Raven, 1996, Philadelphia, 2703-2737). Por tanto, los agentes antivirales, tales como nucleósidos sintéticos (por ejemplo, lamivudina) que apuntan a dianas polimerasas virales, pueden inhibir significativamente la replicación de HBV (por ejemplo, medida por una reducción de viremia), pero no afectan al nivel de mRNA viral o la producción de proteína viral (medida, por ejemplo, por los niveles de antígeno superficial de HBV en plasma o suero). Puesto que la formación de la envoltura viral por la proteína del antígeno superficial es la única función importante de HBV o WHV para el HDV, el fallo en la inhibición de la producción de HBsAg puede desempeñar un papel en el fallo de la lamivudina para afectar a la replicación de HDV y la enfermedad.
La patente U.S. nº. 5.747.044 describe polipéptidos inmunógenos de HDV producidos recombinantemente, útiles como vacunas.
La patente U.S. nº. 5.932.219, expedida a Chiron, describe el genoma entero del virus de la hepatitis D, una familia de réplicas de cDNA del genoma de HDV entero, y da cuenta de que porciones de estas secuencias de cDNA son útiles como sondas para diagnosticar la presencia de virus en muestras clínicas. La patente describe también proteínas codificadas por el cDNA que son útiles en la producción de vacunas. En particular, la patente. U.S. nº. 5.932.219 describe una vacuna para la hepatitis D que incorpora los polipéptidos virales p24 y p27. La patente U.S. nº. 5.750.350, expedida a Chiron, reivindica un kit útil para el análisis del virus de la hepatitis D, que incluye un péptido codificado por ORF 5 del genoma de HDV. La patente U.S. nº. 5.747.044 reivindica una partícula inmunógena, producida recombinantemente, que genera anticuerpos contra el HDV, partícula que incluye un polipéptido inmunógeno codificado dentro de ORF 5 de la secuencia de nucleótidos de HDV o su complemento.
La patente U.S. nº. 6.020.167, cedida a Medeva Holdings B.V., describe un método para tratar la hepatitis crónica y, en particular, la hepatitis B, que incluye administrar una composición que contiene HBsAg.
La patente U.S. nº. 5.770.584 describe un método para tratar una infección con virus de hepatitis mediante administración de lípidos o derivados alquílicos de lípidos.
La patente U.S. nº. 4.619.896 describe un procedimiento para desenmascarar antígeno delta en la sangre de un animal, que incluye tratar suero con un tensioactivo y, opcionalmente, con un agente disociador de anticuerpo-antígeno. El antígeno delta derivado de la sangre se usa como agente diagnóstico en la detección y determinación de diferentes clases de anticuerpos contra el virus de la hepatitis D.
El registro estatutario H1.345 de invenciones de EE.UU. describe un método para prevenir o tratar el virus de hepatitis administrando un inhibidor de proteína-prenila transferasa.
Sureau y otros, Production of Infectious Hepatitis Delta Virus In Vitro and Neutralization with Antibodies against Hepatitis B Virus Pre-S Antigens, Journal of Virology, 1992, 1241-1245, describen que partículas de HDV producidas en vitro son infecciosas y que (i) las partículas infecciosas se revisten con proteínas de la envoltura de HBV que contienen las regiones pre-S1 y pre-S2, (ii) epítopos de los dominios pre-S1 y pre-S2 de las proteínas de la envoltura de HBV se exponen en la superficie de partículas de HDV y (iii) que anticuerpos dirigidos frente a esos epítopos tienen una actividad neutralizante frente al HDV.
Recientemente, se ha dado cuenta de que L-FMAU es un inhibidor potente de HDV en animales infectados crónicamente (Casey, J.L. y otros, Antiviral Therapy 2000, 5 (Suplem. 1), 32, resumen 057).
Los nucleósidos sintéticos \beta-L-2'-desoxicitidina (\beta-L-2'-dC), \beta-L-2'-desoxitimidina (\beta-L-dT) y \beta-L-2'-desoxi- adenosina (\beta-L-2'-dA) son también conocidos en la técnica. Antonin Holy describió en 1972 por vez primera
\beta-L-dC y \beta-L-dT \beta, Nucleic Acid Components and Their Analogs. CLIII. Preparation of 2'-deoxi-L-Ribonucleosides of the Pyrimidine Series, Collect Czech Chem Commun 1972, 37(12), 4072-87. Morris S. Zedeck y otros describieron por vez primera \beta-L-dA para la inhibición de la síntesis de enzimas inducidas en Pseudomonas testosteroni (Mol Phys 1967, 3(4), 386-95).
Es bien conocido que ciertos 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos tienen actividades antineoplásticas y antivirales seleccionadas. Verri y otros describen el uso de 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos como agentes antineoplásticos y agentes antiherpes (Mol Pharmacol 1997, 51(1), 132-138 y Biochem J 1997, 328(1), 317-20. Saneyoshi y otros demuestran el uso de 2'-desoxi-L-ribonucleósidos como inhibidores inversos de transcriptasa (I) para el control de retrovirus y para el tratamiento de AIDS, Japanese Kokai Tokyo Koho JP 06293645 (1994).
Giovanni y otros probaron 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos contra virus parcialmente pseudorrabiosos (PRV) (Biochem J 1993, 294(2), 381-5).
Los usos quimioterapéuticos de 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos fueron estudiados por Tyrsted y otros, Biochem Biophys Acta 1968, 155(2), 612-22 y Bloch y otros, J. Med. Chem 1967, 10(5), 908-12.
La \beta-L-2'-desoxitimidina (\beta-L-dT) es conocida en la técnica para inhibir la timidina quinasa (TK) del virus simple del herpex tipo 1 (HSV-1). Iotti y otros, en el documento WO 92/08727 dan cuenta de que \beta-L-dT inhibe selectivamente la fosforilación de D-timidina por la HSV-1 TK, pero no por la TK humana. Spaldari y otros señalan que la
L-timidina se fosforila por la timidina quinasa del virus de tipo 1 del herpes simple e inhibe el crecimiento viral, J Med Chem 1992, 35(22), 4214-20.
Recientemente se han descrito en la técnica los nucleósidos sintéticos \beta-L-desoxicitidina (\beta-L-2'-dC), \beta-L-2'-desoxitimidina (\beta-L-dT), \beta-L-2'-desoxiinosina (\beta-L-dI) y \beta-L-2'-desoxiadenosina (\beta-L-2'-dA) para el tratamiento del virus de la hepatitis B. Gilles Gosselin y otros han descrito el uso de \beta-L-dT, \beta-L-dA, \beta-L-dC y \beta-L-dI y sus sales y prodrogas farmacéuticamente aceptables para el tratamiento del virus de la hepatitis B (documento WO 00/09531, PCT/US99/18149).
El documento PCT/US01/09987, presentado por la Universidad de Georgetown, Universidad Cornell y la Fundación de Investigación de la Universidad de Georgia, describe que la administración de un nucleósido o análogo de nucleósido que reduce sustancialmente el nivel de antígeno superficial de la hepatitis B (denominada HBsAg en el documento) en un huésped es útil en el tratamiento de la hepatitis delta por infección viral en ese huésped. En una realización, el documento PCT/US01/09987 describe que la 2'-fluoro-5-metil-\beta-L-arabinofuranosiluridina (L-FMAU) reduce significativamente el nivel de antígeno superficial de la hepatitis B y es así útil en el tratamiento de infecciones de hepatitis delta.
A causa del gran número de personas infectadas con el virus de la hepatitis delta, los efectos devastadores de la infección con virus delta sobre una persona y la falta de tratamientos efectivos, hay una necesidad crítica de un medio nuevo y efectivo para el tratamiento de la infección por el virus de la hepatitis delta.
Por tanto, es un objetivo de la presente invención proporcionar un medio para el tratamiento de un huésped, incluida una persona, infectado con el virus de la hepatitis delta.
Sumario de la invención
Se describe un uso para el tratamiento de la infección de la hepatitis delta en personas u otros huéspedes, que incluye administrar una cantidad efectiva de un 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranucleósido (denominado aquí \beta-L-d-nucleósido o un \beta-L-2'-d-nucleósido, alternativamente) o una de sus sales o fármacos farmacéuticamente aceptable) administrado solo o en combinación o alternación, opcionalmente en un vehículo farmacéuticamente aceptable. El término 2'-desoxi, tal como se usa en esta memoria, se refiere a un nucleósido que no tiene sustituyente en la posición 2'.
Los 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos, o sus sales o fármacos farmacéuticamente aceptables, o las formulaciones farmacéuticamente aceptables que contienen estos compuestos, son útiles en la prevención o tratamiento de infecciones de la hepatitis D y otras dolencias afines tales como inflamación crónica del hígado por HDV, cirrosis, hepatitis aguda, hepatitis fulminante, hepatitis crónica persistente y fatiga. Estos compuestos o formulaciones se pueden usar también, profilácticamente, para prevenir o retardar el progreso de una enfermedad clínica en individuos que están infectados con HDV o que han sido expuestos al HDV.
En una realización de la presente invención, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es un compuesto de la fórmula
1
en la que cada R^{1} se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cíclico,
CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado de fosfato; y
BASE es una base purina o pirimidina que opcionalmente puede estar sustituida.
En otra realización de la presente invención, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-2'-desoxipurina, o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, de la fórmula
2
en la que R^{1} se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cílico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado de fosfato;
Y es OR^{3}, NR^{3}R^{4} o SR^{3};
X^{1} y X^{2} se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cíclico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, halógeno, OR^{5}, NR^{5}NR^{6} o SR^{5}, y
R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} son, independientemente, H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cílico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado de fosfato.
En una realización particular, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-2'-desoxiadenosina. o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, de la fórmula:
3
en la que R^{1} es H, mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado (para formar una prodroga de nucleótido estabilizado).
En una realización preferente, R^{1} es H.
En otra realización particular, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-2'-desoxiguanosina, o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, de la fórmula:
4
en la que R^{1} es H, mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado (para formar una prodroga de nucleótido estabilizado).
En otra realización particular, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-2'-desoxinosina, o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, de la fórmula:
5
en la que R^{1} es H, mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado (para formar una prodroga de nucleótido estabilizado).
En otra realización particular, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-2'-desoxipirimidina, o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, de la fórmula:
6
en la que R^{1} se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cílico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado de fosfato;
Y es OR^{3}, NR^{3}R^{4} o SR^{3};
X^{1} se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cíclico, CO-alquilo,
CO-arilo, CO-alcoxialquilo, halógeno, OR^{5}, NR^{5}NR^{6} o SR^{5}, y
R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} son, independientemente, H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cílico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado de fosfato.
En una realización particular, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-2'-desoxicitidina, o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, de la fórmula:
7
en la que R^{1} es H, mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado (para formar una prodroga de nucleótido estabilizado).
En una realización preferente, R^{1} es H.
En otra realización, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-2'-desoxiuridina, o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, de la fórmula:
8
en la que R^{1} es mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado (para formar un profármaco de nucleótido estabilizado).
En otra realización, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-timidina, o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, de la fórmula:
9
en la que R^{1} es mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado (para formar un profármaco nucleótido estabilizado).
En una realización preferente, R^{1} es H.
En otra realización, el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido, o su sal o profármaco farmacéuticamente aceptable, se administra alternativamente o en combinación con uno o más 2'-desoxi-\beta-L-pentafuranonucleósidos, o una o más de sus sales o profármacos farmacéuticamente aceptables, o uno o más compuestos que exhiben actividad frente al virus de la hepatitis D. Por lo general, durante la terapia de alternación, se administra serialmente una cantidad efectiva de cada agente, mientras que, en la terapia de combinación, se administra junta una dosis de dos o más agentes. Las dosis dependerán de las velocidades de absorción, inactivación o excreción del fármaco así como de otros factores conocidos por los expertos en la técnica. Ha de señalarse que los valores de la dosis variarán también con la severidad de la dolencia a aliviar. Ha de señalarse, además, que para cualquier sujeto particular, se deben ajustar en el tiempo regímenes y programas específicos de dosificación de acuerdo con la necesidad individual y el criterio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones.
En otra realización, la invención incluye un método para el tratamiento de personas infectadas con HDV, que incluye administrar una cantidad para tratar el HDV de una prodroga de los derivados 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos. Un profármaco, tal como se usa aquí, se refiere a un compuesto que se convierte en el nucleósido al administrarlo in vivo. Entre los ejemplos no limitativos están incluidos sales farmacéuticamente aceptables (denominadas, alternativamente, "sales fisiológicamente aceptables"), la 5',N^{4} (citidina) y/o N^{6} (adenosina) acilada o derivados alquilados del compuesto activo, el 5'-fosfolípido y/o los 5'-éter lípidos del compuesto activo.
En una realización preferente, el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido está en forma de una prodroga farmacéuticamente aceptable en la que el 5'-hidroxilo está aciclado con un aminoácido. En una realización más preferente, el aminoácido es valina.
Breve descripción de las figuras
La Figura 1 ilustra un procedimiento general para obtener \beta-L-eritro-pentafuranonucleósidos(\beta-L-dN) usando
L-ribosa o L-xilosa como material de partida.
La Figura 2 ilustra un ejemplo no limitativo de la síntesis de L-desoxiadenosina usando L-ribosa como material de partida.
La Figura 3 ilustra un ejemplo no limitativo de la síntesis de \beta-L-dC(3a) y \beta-L-dT(3b) usando L-arabinosa como material de partida.
La Figura 4 es un gráfico que ilustra el metabolismo de L-dA, L-dC y L-dT en células HepG2 humanas en términos de acumulación y decaimiento. Las células se incubaron con 10 \muM de compuesto.
La Figura 5 es un gráfico que ilustra el efecto antiviral de \beta-L-dA, \beta-L-dT y \beta-L-dC en el modelo de hepatitis crónica marmota.
Descripción detallada de la invención
Se describe el uso de un 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido para la manufactura de un medicamente para el tratamiento de la infección hepatitis delta en seres humanos y otros huéspedes, que comprende administrar una cantidad efectiva de un 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido (denominado alternativamente aquí \beta-L-d-nucleósido o \beta-L-2'-d-nucleósido), o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, administrado solo o en combinación, opcionalmente en un vehículo farmacéuticamente aceptable. El término 2'-desoxi, tal como se usa en esta memoria, se refiere a un nucleósido que no tiene sustituyente en la posición 2'.
Los 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos descritos, o sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptables, o las formulaciones farmacéuticamente aceptables que contienen estos compuestos, son útiles en la prevención y tratamiento de las infecciones de hepatitis D y otras dolencias afines tales como inflamación crónica del hígado causada pr el HVD, cirrosis, hepatitis aguda, hepatitis fulminante, hepatitis crónica persistente y fatiga. Estos compuestos o formulaciones pueden usarse también para prevenir o retardar el progreso de una enfermedad clínica en individuos infectados con HVD o que han sido expuestos al HVD.
En una realización de la presente invención, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es un compuesto de la fórmula:
10
en la que cada R^{1} se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cílico,
CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado de fosfato; y
BASE es una base purina o pirimidina que opcionalmente puede ser sustituida.
En otra realización de la presente invención, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-2'-desoxipurina o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, de la fórmula:
11
en la que R^{1} se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cílico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado de fosfato;
Y es OR^{3}, NR^{3}R^{4} o SR^{3};
X^{1} y X^{2} se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cíclico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, halógeno, OR^{5}, NR^{5}NR^{6} o SR^{5}, y
R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} son, independientemente, H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cílico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado de fosfato.
En una realización particular, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-2'-desoxiadenosina o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, de la fórmula:
12
en la que R^{1} es H, mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo, o un derivado fosfato estabilizado (para formar una prodroga de nucleótido estabilizada).
En una realización preferente, R^{1} es H.
En otra realización particular, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-2'-desoxiguanosina, o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, de la fórmula:
13
en la que R^{1} H, es mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado (para formar una prodroga de nucleótido estabilizado).
En otra realización particular, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-2'-desoxinosina, o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, de la fórmula:
14
en la que R^{1} es H, mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado (para formar una prodroga de nucleótido estabilizado).
En otra realización particular, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-2'-desoxipirimidina, o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, de la fórmula:
15
en la que R^{1} se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cílico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado de fosfato;
Y es OR^{3}, NR^{3}R^{4} o SR^{3};
X^{1} y X^{2} se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cíclico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, halógeno, OR^{5}, NR^{5}NR^{6} o SR^{5}, y
R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} son, independientemente, H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cílico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado de fosfato.
En una realización particular, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-2'-desoxicitidina, o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, de la fórmula:
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en la que R^{1} es H, mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado (para formar un fármaco nucleótido estabilizado).
En una realización preferente, R^{1} es H.
En otra realización, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-2'-desoxiuridina, o una de sus sales o profármacos farmacéuticamente aceptable, de la fórmula:
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en la que R^{1} es H, mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado (para formar un profármaco de nucleótido estabilizado).
En otra realización, el derivado 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es \beta-L-2'-timidina, o una de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptable, de la fórmula:
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en la que R^{1} es H, mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado (para formar una prodroga de nucleótido estabilizado).
En una realización preferente, R^{1} es H.
En otra realización, el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido, o su sal o prodroga farmacéuticamente aceptable, se administra en alternación o en combinación con uno o más 2'-desoxi-\beta-L-pentafuranonucleósidos, o una o más de sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptables, o uno o más compuestos que exhiben actividad frente al virus de la hepatitis D. Por lo general, durante la terapia de alternación, se administra serialmente una cantidad efectiva de cada agente, mientras que, en la terapia de combinación, se administra junta una dosis de dos o más agentes. Las dosis dependerán de las velocidades de absorción, inactivación o excreción del fármaco así como de otros factores conocidos por los expertos en la técnica. Ha de señalarse que los valores de la dosis variarán también con la severidad de la dolencia a aliviar. Ha de señalarse, además, que para cualquier sujeto particular se deben ajustar en el tiempo regímenes y programas específicos de dosificación de acuerdo con la necesidad individual y el criterio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones.
En otra realización, la invención incluye un método para el tratamiento de personas infectadas con HDV, que incluye administrar una cantidad para tratar el HDV de una prodroga o de los derivados 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos. Una prodroga, tal como se usa aquí el término, se refiere a un compuesto que se convierte en el nucleósido al administrarlo in vivo. Entre los ejemplos no limitativos están incluidos sales farmacéuticamente aceptables (denominadas, alternativamente, "sales fisiológicamente aceptables"), la 5',N^{4} (citidina) y/o N^{6} (adenosina) acilada o derivados alquilados del compuesto activo, el 5'-fosfolípido y/o los 5'-éter lípidos del compuesto activo.
En una realización preferente, el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido está en forma de una prodroga farmacéuticamente aceptable en el que el 5'-hidroxilo está aciclado con un aminoácido. En una realización más preferente, el aminoácido es valina.
Estereoquímica
Como se muestra seguidamente, un nucleósido contiene al menos dos átomos de carbono (*) quirales críticos. Generalmente, los sustituyentes sobre los carbonos quirales [la base purina o pirimidina especificada (designado como sustituyente C1 cuando se usa la numeración del intermedio del anillo de azúcar) y CH_{2}OH (designado sustituyente C4)] del nucleósido pueden ser cis (en el mismo lado) o trans (en lados opuestos) con respecto al sistema del anillo del azúcar. Tanto las modificaciones isómeras cis como las trans constan de un par de isómeros ópticos. Por tanto, cada compuesto tiene cuatro estereoisómeros individuales. Los cuatro estereoisómeros están representados por las configuraciones siguientes (cuando se orienta el resto de azúcar en un plano horizontal de menera que el resto -O- esté en la parte posterior): (1) cis, con ambos grupos "arriba", que se denomina \beta-D; (2) imagen del espejo, esto es, cis con ambos grupos "abajo", que es la imagen del espejo denominada \beta-L; (3) trans, con el sustituyente C4 "arriba" y el sustituyente C1 "abajo" (denominado \alpha-D; y (4) trans, con el sustituyente C4 "abajo" y el sustituyente C1 "arriba" (denominado \alpha-L:). Los dos enantiómeros cis juntos se denominan mezcla racémica de los enantiómeros \beta, y los dos enantiómeros trans se denominan mezcla racémica de enantiómeros \alpha.
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Seguidamente se ilustran los cuatro estereoisómeros posibles de los compuestos reivindicados.
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Definiciones
Tal como se usa aquí, el término "sustancialmente en forma de un isómero individual" o "en forma aislada" se refiere a un 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido que está en al menos aproximadamente 95% y, preferiblemente, en al menos 98% o 99% en la subconfiguración designada. En una realización preferente, el compuesto activo se administra con al menos este nivel de pureza al huésped necesitado de la terapia.
Tal como se usa aquí, el término hepatitis D y dolencias afines se refiere a la infección de la hepatitis D, inflamación crónica del hígado asociada con HDV, cirrosis, hepatitis aguda, hepatitis fulminante, hepatitis crónica persistente y fatiga. El método de la presente invención incluye el uso de derivados 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos, sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptables, profilácticamente para prevenir o retardar el progreso de una enfermedad clínica en individuos que están infectados con HBV o que han sido expuestos al HBV.
Tal como se usa aquí, el término alquilo, a no ser que se especifique lo contrario, se refiere a un hidrocarburo saturado de cadena lineal, ramificada o cíclico, primario, secundario o terciario, típicamente de C_{1-18}, preferiblemente C_{1-6} e incluye, específicamente aunque no exclusivamente, metilo, trifluorometilo, etilo, propilo, butilo, pentilo, hexilo, isopropilo, isobutilo, s-butilo, t-butilo, isopentilo, amilo, t-pentilo, ciclopentilo y ciclohexilo. El grupo alquilo puede estar opcionalmente sustituido con uno o más restos seleccionados entre el grupo constituido por hidroxilo, amino, alquilamino, arilamino, alcoxi, ariloxi, nitro, ciano, ácido sulfónico, sulfato, ácido fosfónico, fosfato o fosfonato, protegido o no protegido según sea necesario, como lo conocen los expertos en la técnica según se expone, por ejemplo, por Greene y otros en Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, 2ª edición, 1991, que se incorpora aquí por referencia.
Tal como se usa aquí, el término acilo se refiere a un resto de fórmula -C(O)R', en la que R' es alquilo, arilo, arilalquilo, heteroaromático, alcoxialquilo (incluido metoximetilo), arilalquilo (incluido bencilo), ariloxialquilo (tal como fenoximetilo) o arilo (incluido fenilo) opcionalmente sustituido con halógeno, alquilo C_{1-4} o alcoxi C_{1-4}, o el resto de un aminoácido. El término acilo incluye específicamente, pero no exclusivamente, acetilo, propionilo, butirilo, pentanoílo, 3-metilbutirilo, hidrogenosuccinato, 3-clorobenzoato, benzoílo, acetilo, pivaloílo, mesilato, propionilo, valerilo, caproico, caprílico, cáprico, laúrico, mirístico, palmítico, esteárico y oleico, y también puede ser un resto de aminoácido.
Tal como se usa aquí, el término base purina o pirimidina incluye, aunque no únicamente, adenina, N^{6}-alquilpurinas, N^{6}-acilpurinas (en las que acilo es C(O)(alquilo, arilo, alquilarilo o arilalquilo), N^{6}-bencilpurina, N^{6}-halopurina, N^{6}-vinilpurina, N^{6}-purina acetilénica, N^{6}-acilpurina, N^{6}-hidroxialquilpurina, N^{6}-tioalquilpurina, N^{2}-alquilpurinas, N^{2}-alquil-6-tiopurinas, timina, cistosina, 5-fluorocistosina, 5-metilcistosina, 6-azapirimidina, incluida 6-azacistosina, 2- y/o 4-mercaptopirimidina, uracilo, 5-halouracilo, incluido 5-fluorouracilo, C^{5}-alquilpirimidinas, C^{5}-bencilpirimidinas, C^{5}-halopirimidinas, C^{5}-vinilpirimidina, C^{5}-pirimidina acetilénica, C^{5}-acilpirimidina, C^{5}-hidroxialquilpurina, C^{5}-amidopirimidina, C^{5}-cianopirimidina, C^{5}-nitropirimidina, C^{5}-aminopirimidina, N^{2}-alquilpurinas, N^{2}-alquil-6-tiopurinas, 5-azacitidinilo, 5-azauracililo, triazolpiridinilo, imidazolopiridinilo, pirrolo-pirimidinilo y pirazolopirimidinilo.
Entre los ejemplos de bases están incluidas citosina, 5-fluorocistosina, 5-bromocistosina, 5-yodocistosina, 5-clorocitosina, uracil, 5-fluorouracil, 5-bromouracil, 5-yodouracil, 5-metiluracil, timina, adenina, guanina, inosina, xantina, 2,6-diaminopurina, 6-aminopurina, 6-cloropurina y 2,6-dicloropurina, 6-bromopurina, 2,6-dibromopurina, 6-yodopurina, 2,6-diyodopurina, hipoxantina, 2-(Br, Fl, Cl o I)-purina opcionalmente con un sustituyente que incluye un grupo amino o carboxilo en la posición 6, y 6-(Br, Cl o I) -purina opcionalmente con un sustituyente que incluye un grupo amino o carbonilo en la posición 2, 5-bromovinilcitosina, 5-bromoviniluracilo, 5-bromoetenilcitosina, 5-bromoeteniluracilo, 5-trifluorometilcitosina y 5-trifluorometiluracilo.
El término prodroga, tal como se usa aquí, se refiere a un compuesto que se convierte en el nucleósido al administrarlo in vivo. Son ejemplos no limitativos, sales farmacéuticamente aceptables (alternativamente denominadas "sales fisiológicamente aceptables"), los derivados 5' y/o los N^{4} o N^{6} acilados o alquilados del compuesto activo y los derivados 5'-fosfolípido y 5'-eter lípido del compuesto activo.
El término huésped, tal como se usa aquí, se refiere a un organismo unicelular o multicelular en el que puede replicar el virus, incluidas líneas celulares y animales, preferiblemente personas. Alternativamente, el huésped puede portar una parte del genoma viral de la hepatitis delta, cuya replicación o función puede alterarse por los compuestos de la presente invención. El término huésped se refiere específicamente a células infectadas, células transfectadas con la totalidad o una parte del genoma de HDV y animales, en particular, primates (incluidos chimpancés) y seres humanos. En la mayor parte de las aplicaciones de la presente invención en animales, el huésped es un paciente humano. La presente invención, sin embargo, anticipa claramente ciertas aplicaciones veterinarias, en ciertas indicaciones (como chimpancés).
Sales y prodrogas farmacéuticamente aceptables
Tal como se usa aquí, el término sales o complejos farmacéuticamente aceptables se refiere a sales o complejos de los 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos que retienen la actividad biológica deseada del compuesto madre y exhiben mínimos efectos tóxicos, si los ejercen. Entre los ejemplos no limitativos de tales sales están (a) sales de adición de ácido formadas con ácidos inorgánicos (por ejemplo, ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido sulfúrico, ácido fosfórico, ácido nítrico, etc.) y sales formadas con ácidos orgánicos tales como ácido acético, ácido oxálico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido málico, ácido ascórbico, ácido benzoico, ácido tánico, ácido palmoico, ácido algínico, ácido poliglutámico, ácidos naftalenosulfónicos, ácidos naftalenodisulfónicos y ácido poligalacturónico; (b) sales de adición de base formadas con cationes tales como sodio, potasio, zinc, calcio, bismuto, bario, magnesio, aluminio, cobre, cobalto, níquel, cadmio, sodio potasio, etc., o con un catión orgánico formado a partir de N,N-dibenciletilendiamina, amonio o etilendiamina; o (c) combinaciones de (a) y (b), por ejemplo, una sal tanato de zinc, etc.
Los 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos se pueden proporcionar como un 5'-fosfolípido o 5'-eterlípido, según se describe en las siguientes referencias: Kucera, L.S., Lyer, N, Leake, R., Raben, A., Modest, E.J., D.L.W y Piantadosi, C., Novel membraneinteractive ether lipid analogs that inhibit infectious HIV-1 production and induce defective virus formation, AIDS Res Hum Retroviruses, 1990, 6, 491-501; Piantadosi, C.J., Marasco, C.J., S. L. Morris-Natschke, K.L. Meyer, F. Gumus, J.R. Surles, K.S. Ishaq, L.S. Kucera, N. Lyer, C.A. Wallen, S. Piantadosi y E.J.
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El 2-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido se puede convertir en un éster farmacéuticamente aceptable por reacción con un agente esterificante apropiado, por ejemplo, un haluro de ácido o un anhídrido. El nucleósido o su profármaco farmacéuticamente aceptable se puede convertir de manera convencional en una de sus sales farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, por tratamiento con una base o un ácido apropiado. El éster o la sal se puede convertir en el nucleósido madre mediante, por ejemplo, hidrólisis.
Las modificaciones de los compuestos activos, específicamente en las posiciones N^{4}, N^{6} y 5'-O, pueden afectar a la biodisponibilidad y la velocidad de metabolismo de las especies activas, proporcionando así un control del suministro de las especies activas.
Una realización preferente de la presente invención es un método para el tratamiento de infecciones por HDV en personas u otros animales huésped, que incluye administrar una cantidad efectiva de uno o más derivados de
2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos seleccionados entre el grupo constituido por \beta-L-2'-desoxiadenosina,
\beta-L-2'-desoxicitidina, \beta-L-2'-desoxiuridina, \beta-L-2'-guanosina, \beta-L-2'-desoxiinosina y \beta-L-2'-desoxitimidina, o una de sus prodrogas fisiológicamente aceptable, incluidos un fosfato, un derivado 5' y/o N^{4} o N^{6} alquilado o acilado, o una de sus sales fisiológicamente aceptable, opcionalmente en un vehículo farmacéuticamente aceptable. Los compuestos de esta invención poseen una actividad anti HDV directa o se metabolizan a un compuesto o varios compuestos que
exhiben actividad anti HDV. En una realización preferente, el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido se administra sustancialmente en forma de un isómero único, esto es, con como mínimo 95% de la estereoconfiguración indicada.
Cualquiera de los nucleósidos descritos aquí se puede administrar como prodroga estabilizada para aumentar la actividad, biodisponibilidad, estabilidad u otras propiedades que alteran el nucleósido. Se conocen varios ligandos prodroga de nucleótidos. Por lo general, la alquilación, acilación u otra modificación lipófila del mono-, di- o trifosfato del nucleósido aumentará la estabilidad del nucleósido. Son ejemplos de grupos sustituyentes que pueden reemplazar uno o más hidrógenos en el resto de fosfato, alquilo, arilo, esteroides, carbohidratos (incluidos azúcares), 1,2-diacilglicerol y alcoholes. Muchos han sido descritos por R. Jones y N. Bischofberger, Antiviral Research, 1995, 27, 1-17. Cualquiera de éstos se puede usar en combinación con los nucleósidos descritos para conseguir el efecto deseado.
En una realización, el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido se proporciona como profármaco lipófilo
5'-hidroxilo. Entre los ejemplos no limitativos de patentes U.S. que describen sustituyentes lipófilos adecuados que se pueden incorporar covalentemente al nucleósido, preferiblemente en la posición 5'-OH del nucleósido o las preparaciones lipofílicas, están incluidas las patentes U.S. nos. 5.149.794 (2 sept. 1992, exped. a Yatvin y otros), 5.194.654 (16 marzo, 1993, exped. a Hostetler y otros,), 5.223.263, (29 junio 1993, exped. a Hostetler y otros), 5.256.641 (26 octubre 1993, exped. a Yatvin y otros); 5.411.957 (2 mayo 1995, exped. a Hostetler y otros), 5.463.092 (31 octubre 1995, exped. a Hostetler y otros), 5.543.389 (6 agosto 1996, exped. a Yatvin y otros), 5.543.390 (6 agosto 1996, exped. a Yatvin y otros), 5.543.391 (6 agosto 1996, exped. a Yatvin y otros) y 5.554.728 (10 septiembre 1996, exped. a Basava y otros).
Entre las solicitudes de patentes extranjeras que describen sustituyentes lipófilos que se pueden unir a los derivados 2'-desoxi-\beta-L-eritro- pentofuranonucleósido de la presente invención, o a preparaciones lipófilas, están incluidos los documentos WO 89/02733, WO 90/00555, WO/16920, WO 91/18914, WO 93/00910, WO 94/26273, WO 96/15132, EP 0 350 287, EP 93917054.4 y Wo 91/19721.
Son ejemplos adicionales no limitativos de 2'-desoxi-L-eritro-pentofuranonucleósidos los que contienen sustituyentes descritos en las publicaciones siguientes. Estos derivatizados de 2'-desoxi-L-eritro-pentofuranonucleósidos se pueden usar para las indicaciones descritas en el texto o de otra forma como agentes antivirales, incluido el uso como agentes anti HBV (Ho, D.H.W., Distribution of kinase and deaminase of 1\beta-D-arabinofuranosylycytosine in tissues of man and mouse, Cancer Res 1979, 2816-2820, Holy, A., Isopolar phosphorous-modified nucleotide analogues, en Advances in Antiviral Drug Design, De Clercq (Ed.), JAI Press, 1993, vol I, 179-231; Hong, C.I., Nechaev, A. y West, C.R., Synthesis and antitumor activity of 1\beta-D-arabinofuranosylcytosine conjugates of cortisol and cortisone, Biochem Biophys Rs Commun, 1979a, 88, 1223-1229; Hong, C.I., Nechaev, A., Kirisits, A.J., Bucheit, D.J. y West, C.R., Nucleoside conjugates as potential antitumor agents. 3. 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Composiciones farmacéuticas
Las composiciones farmacéuticas basadas en derivados de 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósico de la presente invención se pueden preparar de manera que incluyan el compuesto antes descrito, o una de sus sales o prodrogas, en una cantidad terapéuticamente efectiva para tratar una infecciónn de hepatitis D, opcionalmente en combinación con un aditivo, vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable. La cantidad terapéuticamente aceptable puede variar con la infección o dolencia a tratar, su severidad, el régimen de tratamiento a emplear, la farmococinética del agente usado así como el paciente tratado.
En un aspecto de acuerdo con la invención, el compuesto de acuerdo con la presente invención se formula, preferiblemente, mezclado con un vehículo farmacéuticamente aceptable. Por lo general, es preferible administrar la composición farmacéutica en forma oral, pero se pueden administrar formulaciones por vía parenteral, intravenosa, intramuscular, transdérmica, bucal subcutánea, con supositorios y por otras vías. Preferiblemente, las formulaciones intravenosas e intramusculares se administran en solución fisiológica. Un experto corriente en la técnica puede modificar la formulación dentro de las directrices de la memoria para disponer de numerosas formulaciones para una vía de administración particular sin convertir en inestables las composiciones de la presente invención ni comprometer su actividad terapéutica. En particular, mediante una modificación rutinaria del compuesto deseado (formación de una sal, esterificación, etc.) se puede hacer fácilmente que sea más soluble en agua u otro vehículo, por ejemplo.
En ciertas formas farmacéuticas de dosificación, se prefiere la forma prodroga del compuesto, que incluye especialmente derivados acilados (acetilados u otros) y éter, ésteres fosfato y varias formas de sales de los presentes compuestos. Un experto corriente en la técnica puede identificar cómo modificar fácilmente el presente compuesto en una forma de prodroga para facilitar el compuesto activo a una diana dentro del organismo o paciente huésped. El experto aprovechará también la ventaja de los favorables parámetros farmacocinéticos de la forma de prodroga, cuando se pueda emplear, para suministrar el compuesto deseado a un sitio diana dentro del organismo o paciente huésped para maximizar el efecto deseado del compuesto en el tratamiento de la infección de hepatitis D.
La cantidad de compuesto incluida en las formulaciones terapéuticamente activas, de acuerdo con la presente invención, es una cantidad efectiva para tratar la infección o dolencia, en realizaciones preferentes, una infección de hepatitis D. Generalmente, una cantidad terapéuticamente efectiva de la presente invención en forma de dosificación farmacéutica está en el intervalo de aproximadamente 0,1 mg/kg a aproximadamente 100 mg/kg o más, dependiendo del compuesto usado, la dolencia o infección que se está tratando y la vía de administración. A los fines de la presente invención, una cantidad profiláctica o preventivamente efectiva de las composiciones de acuerdo con la presente invención, está incluida en el mismo intervalo de composiciones que el dado para una cantidad terapéuticamente efectiva y, usualmente, es la misma que una cantidad terapéuticamente efectiva.
La administración del compuesto activo puede variar de una administración continua (goteo intravenoso) a varias administraciones al día (por ejemplo, 4 al día, 2 al día, etc.) y puede hacerse por vía oral, tópica, parenteral, intramuscular, intravenosa, subcutánea, transdérmica (que puede incluir un agente que intensifique la penetración), bucal y rectal con supositorio, entre otras. También se pueden usar comprimidos entéricos revestidos para acrecentar la biodisponibilidad y estabilidad de los compuestos administrados por vía oral. La forma de dosificación más efectiva dependerá de la farmacocinética del agente particular escogido, así como de la severidad de la enfermedad del paciente. Se prefieren en particular las formas de dosificación oral a causa de la facilidad de administración y la previsible acogida favorable por el paciente.
Para preparar las composiciones farmacéuticas de acuerdo con la presente invención, preferiblemente se mezcla una cantidad terapéuticamente efectiva de uno o más de los compuestos de acuerdo con la presente invención con un vehículo farmacéuticamente aceptable de conformidad con técnicas galénicas convencionales para producir una dosis. El vehículo puede tener una amplia variedad de formas dependiendo de la preparación deseada para administración, por ejemplo, oral o parenteral. Al preparar composiciones farmacéuticas en forma de dosis oral, se puede usar cualquiera de los medios farmacéuticos usuales. Así, para preparados líquidos orales tales como suspensiones, elixires y soluciones, el grupo de vehículos y aditivos adecuados que se pueden usar incluye agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes saboreadores, agentes colorantes, etc. Para preparados sólidos orales tales como polvos, comprimidos, cápsulas, y para preparados sólidos tales como supositorios, el grupo de vehículos y aditivos adecuados que se pueden usar incluye almidones, azúcares tales como dextrosa, manitol, lactosa y vehículos afines, diluyentes, agentes de granulación, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes, etc. Si se desea, los comprimidos o cápsulas pueden ser entéricos revestidos por técnicas estándar para una liberación sostenida. El uso de estas formas de dosificación puede favorecer significativamente la biodisponibilidad de los compuestos en el paciente.
Para formulaciones parenterales, usualmente el vehículo comprenderá agua estéril o solución acuosa de cloruro sódico, aunque también se pueden incluir otros ingredientes como los que coadyuvan a la dispersión. Cuando se ha de usar agua estéril y mantenerla estéril, las composiciones y vehículos se pueden esterilizar también. También pueden prepararse suspensiones inyectables, en cuyo caso se pueden emplear vehículos líquidos apropiados, agentes supensivos, etc.
También se pueden preparar por métodos convencionales suspensiones liposomales (incluidos liposomas que apuntan a dianas de antígenos virales) para producir vehículos farmacéuticamente aceptables. Esto puede ser apropiado para aportar nucleósidos libres, nucleósidos acilo o formas prodroga de éster fosfato de los compuestos nucleósidos de acuerdo con la presente invención.
En realizaciones particularmente preferentes de acuerdo con la presente invención, los compuestos y composiciones se usan para tratar, prevenir o retardar el inicio de las infecciones de hepatitis D. Preferiblemente, para tratar, prevenir o retrasar el inicio de la infección, las composiciones se administrarán en forma de dosis orales en cantidades que varían de aproximadamente 250 microgramos a aproximadamente 1 gramo o más al menos una vez al día, preferiblemente hasta como máximo cuatro veces al día. Los presentes compuestos preferiblemente se administran por vía oral, pero se pueden administrar parenteralmente, tópicamente o en forma de supositorios.
Los compuestos de la presente invención, a causa de su baja toxicidad para las células huésped en ciertos casos, pueden emplearse ventajosamente para prevenir profilácticamente la infección de hepatitis D o para prevenir la presencia de síntomas clínicos asociados con la infección viral. Así, La presente invención abarca también métodos para tratamiento profiláctico de una infección viral y, en particular, la infección de hepatitis D. En este aspecto, de acuerdo con la presente invención, las composiciones presentes se usan para prevenir o retrasar el inicio de una infección de hepatitis D. El método profiláctico comprende la administración a un paciente que necesita tal tratamiento, o que tiene riesgo de desarrollar enfermedad por el HDV, una cantidad de un compuesto de acuerdo con la presente invención efectiva para aliviar, prevenir o demorar el inicio de la infección viral. En el tratamiento profiláctico de acuerdo con la presente invención, se prefiere que el compuesto viral empleado tenga una toxicidad baja y, preferiblemente, no sea tóxica para el paciente. Se prefiere particularmente en este aspecto de la presente invención, que el compuesto que se emplea sea muy efectivo frente al virus y que la toxicidad sea mínima para el paciente. Los compuestos de acuerdo con la presente invención que se pueden usar para tratar estos estados de enfermedad se pueden administrar en una cantidad dentro del intervalo de dosificación dado para tratamiento terapéutico (esto es, de aproximadamente 250 microgramos hasta 1 gramo o más de una a cuatro veces al día para una forma oral de dosificación) como agente profiláctico para prevenir la proliferación de la infección de hepatitis D o, alternativamente, para demorar el inicio de la infección de hepatitis D, que se manifiesta en sí por síntomas clínicos.
Además, los compuestos de acuerdo con la presente invención se pueden administrar en combinación o alternando con un o más agentes antivirales, anti-HBV, anti-HCV, anti-HDV o antiherpéticos o interferón, agentes anticáncer o antibacterianos, incluidos otros compuestos de la presente invención. Ciertos compuestos de acuerdo con la presente invención pueden ser efectivos para intensificar la actividad biológica de ciertos agentes de acuerdo con la presente invención por reducir el metabolismo, el catabolismo o la inactivación de otros compuestos y, como tales, se coadministran para lograr este efecto.
Terapia de combinación o alternación
Se ha conocido que las variantes de virus de hepatitis resistentes a fármacos pueden emerger después de un tratamiento prolongado con un agente antiviral. A causa del papel esencial del virus de la hepatitis B en el ciclo de vida del virus de la hepatitis D, los compuestos con actividad antivirus de la hepatitis B se pueden administrar en combinación o alternando con los \beta-2'-L-desoxinucleósidos descritos, y sus sales o prodrogas farmacéuticamente aceptables. Típicamente, la resistencia ocurre por mutación de un gen que codifica una enzima usada en el ciclo de vida viral y, muy típicamente en el caso de HBV, la DNA polimerasa. Recientemente se ha demostrado que la eficacia de un fármaco frente a la infección con HBV puede prolongarse, aumentarse o restablecerse administrando el compuesto en combinación o alternando con un segundo y, acaso, un tercer compuesto antiviral que induce una mutación diferente de la causada por el fármaco principal. Alternativamente, mediante tal terapia de combinación o alternación se puede alterar la farmacocinética, biodistribución u otro parámetro de tal fármaco. En general, típicamente se prefiere la terapia de combinación a la terapia de alternación porque induce múltiples tensiones simultáneas en el virus.
La actividad viral anti-hepatitis D de \beta-L-2'-dA, \beta-L-2'-dC, \beta-L-2'-dU, \beta-L-2'-dG, \beta-L-2'-dT, \beta-L-dI u otros
\beta-L-2'-nucleósidos proporcionados en esta memoria, o las prodrogas, fosfatos o sales de estos compuestos, se puede intensificar administrando uno o más de estos nucleósidos en combinación o alternación. Alternativamente, por ejemplo, uno o más \beta-L-2'-dA, \beta-L-2'-dC, \beta-L-2'-dU, \beta-L-2'-dG, \beta-L-2'-dT, \beta-L-dI u otros \beta-L-2'-nucleósidos proporcionados aquí se puede administrar en combinación o alternación con 3TC, FTC, L-FMAU, DAPD, famciclovir, penciclovir, BMS-200475, bis pom PMEA (adefovir, dipivoxil); lobucavir, ganciclovir o ribavirina.
En cualquiera de las realizaciones descritas en esta memoria, si el \beta-L-2'-nucleósido de la presente invención se administra en combinación o alternación con un segundo inhibidor de polimerasa nucleósido o no nucleósido que está fosforilado a una forma activa, se prefiere que el segundo compuesto sea fosforilado por una enzima que es diferente de la que fosforila el \beta-L-2'-nucleósido de la presente invención in vivo. Los ejemplos de enzimas quinasa con timidina-quinasa, citosina-quinasa, guanosina-quinasa, adenosina-quinasa, desoxicitidina-quinasa, 5'-nucleotidasa y desoxiguanosina-quinasa.
Preparación de los compuestos activos
Los derivados 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos de la presente invención son conocidos en la técnica y se pueden preparar de acuerdo con el método descrito por Holy en Collect Czech Chem Commun, 1972, 37(12), 4072-87 y Mol Phys, 1967, 3(4), 386-95.
En la Figura 1 se presenta un procedimiento general para obtener \beta-eritro-pentofuranonucleósidos (\beta-L-dN) usando L-ribosa o L-xilosa como material de partida.
Los derivados mono-, di- y trifosfato de los nucleósidos activos se pueden preparar como se describe de acuerdo con métodos publicados. El monofosfato se puede preparar de acuerdo con el procedimiento de Imai y otros, J Org Chem, 1969, 34(6), 1547-1550. El difosfato se puede preparar de acuerdo con el procedimiento de Davisson y otros, en J Org Chem, 1987, 52(9), 1794-1801. El trifosfato se puede preparar de acuerdo con el procedimiento de Hoard y otros, en J Am Chem Soc, 1965, 87(8), 1785-1788.
Ejemplos Protocolos experimentales
Los puntos de fusión se determinaron en tubos capilares abiertos en un aparato Gallenkamp MFB-595-010 M y son sin corregir. Los espectros de absorción de rayos UV se registraron en etanol en un espectrofotómetro Uvikon 931 (KONTRON). Los espectros de RMN ^{1}H se obtuvieron a temperatura ambiente en DMSO-d_{6} con un espectrómetro Bruker AC 250 o 400. Los desplazamientos químicos se dan en ppm, fijándose DMSO-d_{5} a 2,49 ppm como referencia. Los experimentos de intercambio, de desacoplamiento o 2D-COSY se realizaron para confirmar las cesiones de protones. Las multiplicidades de señales se representan por s (singlete), d (doblete), dd (doblete de dobletes), t (triplete), q (cuatriplete), anc (ancha), m (multiplete). Todos los valores de J son en Hz. Los espectros de masas FAB se registraron al modo de ion positivo (FAB>0) o negativo (FAB<0) en un espectrómetro de masas JEOL DX 300. La matriz era alcohol 3-nitrobencílico (NBA) o una mezcla (50:50 v/v) de glicerol y tioglicerol (GT). Las rotaciones específicas se midieron en un espectropolarímetro Perkin-Elmer 241 (longitud de paso 1 cm) y se dan en unidades de 10^{-1} grados cm^{2} g^{-1}. Los análisis químicos los hizo el Service de Microanalyses du CNRS, Division de Vernaison (Francia). Los análisis indicados por los símbolos de los elementos o funciones están dentro de \pm 0,4% de los valores teóricos. La cromatografía en capa delgada se hizo sobre hojas de eluminio revestidas de gel de sílice 60 F_{254} (Merck, art. 5554), efectuándose la visualización de productos por absorbancia de rayos UV y carbonizando seguidamente con ácido sulfúrico al 10% en etanol y calentando. La cromatografía en columna se hizo sobre gel de sílice 60 (Merck, art. 9385) a presión atmosférica.
Ejemplo 1 9-(3,5-di-O-benzoil-\beta-L-xilofuranosil)-adenina (3)
Se agitó a temperatura ambiente durante 22 h una solución de 9-(2-O-acetil-3,5-di-O-benzoil-\beta-L-xilofuranosil)adenina 2 [Ref: Gosselin, G., Bergogne, M.C., Imbach, J.L., Synthesis and Antiviral Evaluation of \beta-L-Xylofuranosyl Nucleosides of the Five Naturally Occurring Nucleic Acid Bases, Journal of Heterocyclic Chemistry, 1993, 30, 1229-1233] (8,30 g, 16,05 mmol) e hidrato de hidrazina del 98% (234 ml, 48,5 mmol) en una mezcla de piridina/ácido acético glacial (4/1 v/v, 170 ml). La reacción se apagó añadiendo acetona (40 ml) y se continuó agitando durante una hora más. La mezcla de reacción se redujo a la mitad de su volumen, se diluyó con agua (250 ml) y se sometió a extracción con cloroformo (2 x 150 ml). La capa orgánica se lavó sucesivamente con solución acuosa saturada de bicarbonato sódico (3 x 100 ml) y agua (3 x 100 ml), se secó, se filtró, se concentró y se coevaporó con tolueno y metanol. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH al 0,3% en diclorometano), obteniéndose 3 (5,2 g, 68%) precipitado de diisopropil éter.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta 4,5-4,9 (m, 4H, H-2', H-4', H-5' y H-5''), 5,64 (t, 1H, H-3', J_{2',3'} = 3,5 Hz), 6,3 s anc, 1H, OH-2'), 6,45 (d, 1H, H-1', J_{1',2'} = 4,6 Hz), 7,3 (s anc, 2H, NH_{2}-6), 7,4-7,9 (m, 10H, 2 benzoílos), 8,07 y 8,34 (2s, 2H, H-2 y H-8); ms: matriz G/T, (FAB^{+}) m/z 476 [M+H]^{+}, 136 [BH_{2}]^{+}, FAB^{-}) m/z 474 [M-H]^{-}, 134 [B]^{-}, UV (etanol al 95%): \lambda_{max} 257 nm (\varepsilon 16400), 230 nm (\varepsilon 29300), \lambda_{min} 246 nm (\varepsilon 14800); [\alpha]_{D}^{20}: -64 (c 1,07 CHCl_{3}).
Análisis: Calculado para C_{24}H_{21}N_{5}O_{4} (M = 475,45):
\hskip-0.1cm C 60,43; H 4,45; N 14,73
Hallado: \hskip-0.1cm C 60,41; H 4,68; N 14,27.
Ejemplo 2 9-(3,5-di-O-benzoil-2-desoxi-\beta-L-treo-pento-furanosil)adenina (4)
A una solución del compuesto 3 (1,00 g, 2,11 mmol) en acetonitrilo seco (65 ml) se añadió 4-(dimetilamino)piridina (0,77 g, 6,32 mmol) y cloruro de fenoxitiocarbonilo (0,44 ml, 3,16 mmol). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 2 h. Después de concentrar, el residuo se disolvió en diclorometano (50 ml) y se lavó sucesivamente con agua (2 x 30 ml), solución acuosa 0,5 N de ácido clorhídrico (30 ml) y agua (3 x 30 ml). La capa orgánica se secó, se filtró y se concentró a sequedad. El intermedio tiocarbonilado en bruto se trató directamente con hidruro de tris-(trimetilsilil)silano (0,78 ml, 5,23 mmol) y \alpha,\alpha'-azoisobutironitrilo (AIBN, 0,112 g, 0,69 mmol) en dioxano seco (17 ml) a reflujo durante 2 h. El disolvente se eliminó en vacío y el residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (0-5% de MeOH en diclorometano), obteniéndose el compuesto 4 puro (0,93 g, 96%) como una espuma.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta 2,9-3,1 (m, 2H, H-2' y H-2''), 4,6-4,7 (m, 3H, H-4', H-5' y H-5''), 5,8 (s anc, 1H,
H-3'), 6,43 (dd, 1H, H-1', J_{1',2'} = 3,1 Hz, J_{1',2''} = 7,6 Hz), 7,3 (s anc, 2H, NH_{2}-6), 7,4-7,9 (m, 10H, 2 benzoílos), 8,05 y 8,33 (2s, 2H, H-2 y H-8); ms: matriz G/T, (FAB^{+}) m/z 460 [M+H]^{+}, 325[S]\pm, 136 [BH_{2}]^{+}, (FAB^{-}) m/z
458[M-H]^{-}, 134[B]^{-}; UV (etanol al 95%): \lambda_{max} 261 nm (\varepsilon 14400), 231 nm (\varepsilon 26300), \lambda_{min}249 nm (\varepsilon 12000);
[\alpha]_{D}^{20} = -38 (c 1,04, DMSO).
Ejemplo 3 6-N-(4-monometoxitritil)-9-(3,5-di-O-benzoil-2-desoxi-\beta-L-treo-pentofuranosil)adenina (5)
A una solución del compuesto 4 (0,88 g, 1,92 mmol) en piridina seca (40 ml) se añadió cloruro de 4-momometoxitritilo (1,18 g, 3,84 mmol). La mezcla se agitó a 60ºC durante 24 h. Después de añadir metanol (5 ml), la solución se concentró a sequedad, el residuo se disolvió en diclorometano (50 ml) y se lavó sucesivamente con agua (30 ml), solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (30 ml) y agua (30 ml). Se secó la capa orgánica, se filtró, se concentró y se coevaporó con tolueno, obteniéndose el compuesto 5 puro (1,01 g, 72%) como una espuma.
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \delta2,9-3,0 (m, 2H, H-2' y H-2''), 3,62 (s, 3H, OCH_{3}), 4,6-4,8 (m, 3H, H-4'.H-5' y H-5''), 5,85 (pt, 1H, H-3'), 6,44 (dd, 1H, H-1', J_{1',2'} = 3,1 Hz, J_{1',2''} = 7,3 Hz), 6,9 (s anc, 1H, NH-6), 6,7-6,8 y 7,2-7,4 (2m, 24H, 2 benzoílos y MMTr), 7,97 y 8,13 (2s, 2H, H-2 y H-8); ms: matriz G/T, (FAB^{+}) m/z 732 [M+H]^{+}, (FAB^{-}) m/z
730 [M-H]^{-}; UV (etanol al 95%): \lambda_{max} 274 nm (\varepsilon 12100), 225 (\varepsilon 24200), \lambda_{min} 250 nm (\varepsilon 5900); [\alpha]_{D}^{20} = -16 (c 1,12, DMSO).
Ejemplo 4 6-N-(4-monometoxitritil)-9-(2-desoxi-\beta-L-treo-pentofuranosil)adenina (6)
El compuesto 5 (0,95 g, 1,30 mmol) se trató con una solución (saturada, a -10ºC) de amoniaco en metanol
(40 ml) a temperatura ambiente durante la noche. Después de concentrar, el residuo se disolvió en diclorometano (60 ml) y se lavó con agua (30 ml). La capa acuosa se sometió a extracción dos veces con diclorometano (10 ml). La combinación de las capas orgánicas se secó, se filtró y se concentró. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (0-5% de MeOH en diclorometano), obteniéndose el compuesto 6 puro (0,67 g, 98%) como una espuma.
RMN ^{1}H (CDCl_{3}): \delta 2,6-2,9 (m, 2H, H-2' y H-2''), 3,5 (s anc, 1H, OH-5'), 3,55 (s, 3H, OCH_{3}), 3,9-4,0 (m, 3H,
H-4', H-5' y H-5''), 4,5-4,6 (m, 1H, H-3'), 6,03 (dd, 1H, H-1', J_{1',2'} = 4,0 Hz, J_{1',2''}= 8,8 Hz), 7,0 (s anc, 1H, NH-6), 6,7-6,8 y 7,1-7,4 (2m, 14H, MMTr), 7,40 (d, 1H, OH-3', J_{H,OH} = 10,6 Hz), 7,80 y 7,99 (2s, 2H, H-2 y H-8); ms: matriz G/T, (FAB^{+}) m/z 524 [M+H]^{+}, 408 [BH_{2}]^{+}, (FAB^{-}) m/z 1045 [2M-H]^{-}, 406 [B]^{-}; UV (etanol al 95%: \lambda_{max} 275 nm
(\varepsilon 12300), \lambda_{min} 247 nm (\varepsilon 3600), [\alpha]_{D}^{20} = +28 (c 0) \delta, 94, DMSO).
Ejemplo 5 6-N-(4-monometoxitritil)-9-(2-desoxi-5-O-(4-monometoxitritil)-\beta-L-treo-pentofuranosil)adenina (7)
El compuesto 6 (0,62 g, 1,24 mmol) en piridina seca (25 ml) se trató con cloruro de 4-monometoxitritilo (0,46 g, 1,49 mmol) a temperatura ambiente durante 16 h. Después de añadir metanol (5 ml), la mezcla se concentró a sequedad. El residuo se disolvió en diclorometano (60 ml) y se lavó sucesivamente con agua (40 ml), solución acuosa saturada de NaHCO_{3} (40 ml) y agua (40 ml). La capa orgánica se secó, se filtró, se concentró y se coevaporó con tolueno y metanol. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH al 0-10% en diclorometano), obteniéndose el compuesto 7 (0,71 g, 72%) como una espuma.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta 2,21 (d, 1H, H-2', J_{2',2''} = 14,3 Hz), 2,6-2,7 (m, 1H, H-2''), 3,1-3,3 (2m, 2H, H-5' y H-5''), 3,64 y 3,65 (2s, 6H, 2 x OCH_{3}), 4,1-4,2 (m, 1H, H-4'), 4,2-4,3 (m, 1H, H-3'), 5,68 (d, 1H, OH-3', J_{H,OH} = 5,2 Hz), 6,24 (d, 1H, H-1', J_{1',2''} = 7,0 Hz), 6,7-6,8 y 7,1-7,3 (2m, 29H, 2 MMTr y NH-6), 7,83 y 8,21 (2s, 2H, H-2 y H-8); ms: matriz G/T, (FAB^{+}) m/z 796 [M+H]^{+}, 408 [BH_{2}]^{\text{*}}, (FAB^{-}) m/z 794[M-H]^{-}, 406 [B]^{-}; UV (etanol al 95%): \lambda_{max} 275 nm (\varepsilon 30900), \lambda_{min} 246 nm (\varepsilon 12800); [\alpha]_{D}^{20} = +14 (c 1,03, DMSO).
Ejemplo 6 6-N-(4-monometoxitritil)-9-(3-O-benzoil-2-desoxi-5-O-(4-monometoxitritil)-\beta-L-eritro-pentofuranosil)adenina (8)
Una solución de azodicarboxilato de dietilo (0,38 ml, 2,49 mmol) en tetrahidrofurano seco (20 ml) se añadió a gotas a un solución fría (0ºC) del nucleósido 7 (0,66 g, 0,83 mmol), trifenilfosfina (0,66 g, 2,49 mmol) y ácido benzoico (0,30 g, 2,49 mmol) en THF seco (20 ml). La mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 18 h y se añadió metanol (1 ml). Se eliminaron los disolventes a presión reducida y el material en bruto se purificó por cromatografía en columna con gel de sílice (acetato de etilo al 0-5% en diclorometano), obteniéndose el compuesto 8 ligeramente contaminado con óxido de trifenilfosfina.
Ejemplo 7 6-N-(4-monometoxitritil)-9-(2-desoxi-5-O-(4-monometoxitritil)-\beta-L-eritropentofuranosil)adenina (9)
El compuesto 8 se trató con una solución (saturada, a -10ºC) de amoniaco metanólico (20 ml) a temperatura ambiente durante 24 h y luego la mezcla de reacción se concentró a sequedad. El residuo se disolvió en diclorometano (30 ml) y se lavó con agua (20 ml). La capa acuosa se sometió a extracción con diclorometano (2 x 20 ml) y la combinación de fases orgánicas se secó, se filtró y se concentró. Se obtuvo el compuesto 9 puro (0,50 g, 76% de 7) como una espuma después de purificación por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH al 0-2% en diclorometano):
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta 2,2-2,3 (m, 1H, H-2'), 2,8-2,9 (m, 1H, H-2''), 3,1-3,2 (m, 2H, H-5' y H-5''), 3,64 y 3,65 (2s, 6H, 2 x OCH_{3}), 3,97 (pq, 1H, H-4'), 4,4-4,5 (m, 1H, H-3'), 5,36 (d, 1H, OH-3', J_{H,OH} = 4,5 Hz), 6,34 (t, 1H,
H-1', J_{1',2'} = J_{1',2''} = 6,4 Hz), 6,8-6,9 y 7,1-7,4 (2m, 29H, 2 MMTr y NH-6), 7,81 y 8,32 (2s, 2H, H-2 y H-8); ms: matriz G/T, (FAB^{+}) m/z 796 [M+H]^{+}, (FAB^{-}) m/z 794 [M-H]^{-}, 406 [B]^{-}; UV (etanol al 95%): \lambda_{max} 276 nm (\varepsilon 42600), \lambda_{min} 248 nm (\varepsilon 23300); [\alpha]_{D}^{20} = +29 (c 1,05, DMSO).
Ejemplo 8 2'-desoxi-\beta-L-adenosina (\beta-L-dA)
El compuesto 9 (0,44 g, 0,56 mmol) se trató con una solución acuosa de ácido acético al 80% (17 ml) a temperatura ambiente durante 5 h. La mezcla se concentró a sequedad, el residuo se disolvió en agua (20 ml) y se lavó con dietil éter (2 x 15 ml). La capa acuosa se concentró y se coevaporó con tolueno y metanol. La 2'-desoxi-\beta-L-adenosina (\beta-L-dA) deseada (0,12 g, 83%) se obtuvo después de purificación por cromatografía en columna sobre gel de sílice (MeOH al 0-12% en diclorometano) y filtración a través de una unidad Millex HV-4 (0,45 \mum, Millipore): p.f. 193-194ºC (cristalizada en agua) (Lit. 184-185ºC para el enantiómero L [Ref.: Robins, M.J., Khwaja, T.A., Robins, R.K., J Org Chem 1970, 35, 636-639] y 187-189ºC para el enantiómero D [Ref.: Ness, R.K., en Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry; Zorbach, W.W., Tipson, R.S., Eds., John Wiley and Sons, New York, 1968; vol. 1, 183-187].
RMN ^{1} H (DMSO-d_{6}): \delta 2,2-2,3 y 2,6-2,7 (2m, 2H, H-2' y H-2''), 3,4-3,6 (2m, 2H, H-5' y H-5''), 3,86 (pq, 1H,
H-4'), 4,3-4,4 (m, 1H, H-3'), 5,24 (t, 1H, OH-5', J_{H,OH} = 5,8 Hz), 5,30 (d, 1H, OH-3', J_{H,OH} = 4,0 Hz), 6,32 (dd, 1H, H-1', J_{1',2'} = 6,2 Hz, J_{1',2''} = 7,8 Hz), 7,3 (s anc, 2H, NH_{2}-6), 8,11 y 8,32 (2s, 2H, H-2 y H-8); ms: matriz G/T, (FAB)^{+} m/z 252 [M+H]^{+}, 136 [BH_{2}]^{+}, (FAB)^{-} m/z 250 [M-H]^{-}, 134 [B]^{-}; UV (etanol al 95%): \lambda_{max}226 nm (\varepsilon 14300), \lambda 226 nm (\varepsilon 2100); [\alpha]_{D}^{20} = +25 (c 1,03, H^{2}O), (lit. [\alpha]_{D}^{20} = +23 (c 1,0, H_{2}O) para el enantiómero L [Ref.: Robins, M.J., Khawaja, T.A., Robins, R.K. J Org Chem 1970, 35, 636-639] y [\alpha]_{D}^{20} = -25 (c 0,47, H_{2}O) para el enantiómero D [Ref.: Ness, R.K.,, en Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry; Zorbach, W.W., Tipson, R.S., Eds., John Wiley and Sons, New York, 1968; vol. 1, 183-187].
Análisis: Calculado para C_{10}H_{13}N_{5}=_{3} + 1,5H_{2}O (M = 278,28)
\hskip-0.1cm C 43,16; H 5,80; N 25,17
Hallado: \hskip-0.1cm C 43,63; H 5,45; N 25,33.
Ejemplo 9 1-O-acetil-2,3,5-tri-O-benzoil-\beta-L-ribofuranosa (143)
Como se representa en el Esquema 1, una solución de L-ribosa 140 (150 g, 1 mol; Cultor Science Food, CAS [24559-59-4], lote RIB9711013) en metanol (2 l; P.A. Prolabo, ref. 20847.295) se trató con ácido sulfúrico del 95-97% (12 ml, Merck; ref. 1.00731.1000) y se dejó a +4ºC durante 12 h, luego se neutralizó con piridina (180 ml, del 99% Acros; ref. 131780025). La evaporación dio una mezcla \alpha+\beta de metil ribofuranósidos 141 como un líquido espeso. Una solución de esta mezcla anómera en piridina (1,3 l) se trató con cloruro de benzoílo (580 ml, 5 mol; Fluka, ref. 12930) mientras que se anfriaba y agitaba. La solución se dejó a temperatura ambiente durante 12 h y luego se vertió en hielo (aprox. 10 l) mientras que se agitaba continuamente. La mezcla (aceite en agua) se filtró a través de un lecho de celita. El aceite resultante que quedó sobre el lecho de celita se lavó con agua (3 x 3 l) y luego se disolvió en acetato de etilo (3 l). La fase orgánica se lavó con solución de NaHCO_{3} al 5% (2 l) y agua (2 l), se secó sobre sulfato sódico (Prolabo; ref. 28111.365), se filtró y se evaporó, obteniéndose 1-O-metil-2,3,5-tri-O-benzolil-\alpha/\beta-L-ribofuranosa 142 como un líquido espeso. El aceite se disolvió en anhídrido acético (560 ml; Fluka, ref. 45830) y ácido acético (240 ml; P.A. Carlo Erba; ref. 20104298). La solución, después de añadir a gotas ácido sulfúrico concentrado (80 ml), se mantuvo a +4ºC agitando mecánicamente durante 10 h. La solución se vertió luego en hielo (aprox. 10 l) mientras que se agitaba continuamente. La mezcla (un compuesto oleoso en agua) se filtró a través de un lecho de celita. El sólido gomoso resultante que quedó sobre el lecho de celita se lavó con agua (3 x 3 l) y luego se disolvió en diclorometano (2,5 l; P.A. Merck; ref. 1.06050.6025). La fase orgánica se lavó con NaHCO_{3} al 5% (1 l) y agua (2 x 2 l), se secó sobre sulfato sódico, se filtró y se evaporó, obteniéndose un sólido gomoso 143 que se cristalizó en etanol 95 (Prolabo; ref. 20823.293), obteniéndose 225 g de producto (44%). p.f. 129-130ºC (EtOH al 95%) (la referencia de literatura de Recondo, E.F. y Rinderknecht, H. Eine neue, Einfache Synthese des 1-O-Acetyl-2,3,5-tri-O-\beta-D-Ribofuranosides, Helv. Chim. Acta, 1959, 1171-1173, indica un p.f. de 130-131ºC).
RMN ^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}): \delta: 8,09-7,87 (m, 6H, H_{arom}), 7,62-7,31 (m, 9H, H_{arom}), 6,43 (s, 1H, H_{1}), 5,91 (dd, 1H, H_{3}, J_{3,4} 6,7 Hz; J_{3,32} 4,9 Hz), 5,79 (pd, 1H, H_{2}, J_{2,3}, 4,9 Hz; J_{1,2}<1), 4,78 (m, 2H, H_{4} y H_{5}), 4,51 (dd, 1H, H_{5}, J_{5,5'} 13,1 Hz, J_{5',4} 5,5 Hz), 2,00 (s, 3H, CH_{3}CO); (idéntico a la 1-O-acetil-2,3,5-tri-O-benzoil-\beta-D-ribofuranosa comercial).
Análisis de masas (^{FAB+}, GT) m/z 445 (M-OAc).
Análisis elemental para C_{28}H_{24}O_{9}:
Calculado: C 66,66; H 4,79
Hallado: C H.
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Esquema 1
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Ejemplo 10 \beta-L-adenosina (145)
Como se representa en el Esquema 2, se preparó una suspensión de adenina (19,6 g, 144 mmol; Pharma-Waldhof, ref. 400134.001, lote 45276800) en acetonitrilo (400 ml; Riedel de Hean, ref. 33019, destilado sobre CaH_{2}) con 1-O-acetil-2,3,5-tri-O-benzoil-\beta-L-ribofuranosa 143 (60 g, 119 mmol). A esta suspensión se añadió cloruro estánnico fumante (22 ml, 187 mmol; Fluka, ref. 96558). Después de 12 h, la mezcla de reacción se concentró a un volumen pequeño (aprox. 100 ml) y se añadió bicarbonato sódico (110 g) y agua (120 ml). El sólido blanco resultante (sales de estaño) se sometió a extracción con cloroformo caliente (5 x 200 ml; Across, ref. 22706463). La combinación de los extractos se filtró a través de un lecho de celita. La fase orgánica se lavó con una solución acuosa al 5% de NaHCO_{3} y agua, se secó sobre sulfato sódico (Prolabo; ref. 28111.365), se filtró y se evaporó, obteniéndose el compuesto 144 (60 g, espuma incolora). La espuma se trató con metanol saturado con amoniaco (220 ml) en recipiente cerrado a temperatura ambiente y se agitó durante 4 días. El disolvente se eliminó por evaporación a presión reducida y el polvo resultante se puso en suspensión en acetato de etilo (400 ml; Carlo Erba, ref. 528299) y se mantuvo a reflujo durante 1 h. Después de filtrar, el polvo se recristalizó en agua (220 ml), obteniéndose la L-adenosina 145 (24 g, cristales, 75%). p.f. 233-234ºC (Saneyoshi, M. y Satoh, E., Synthetic Nucleosides and Nucleotides. XIII. Stannic Chloride Ribosylation of Several 6-Substituted Purines, Chem Pharm Bull, 1979, 27, 2518-2521; Nakayama, C. y Saneyoshi, M, Synthetic Nucleosides and Nucleotides. XX. Synthesis of Various 1-\beta-Xylofuranosil-5-Alkiluracils and Related Nucleosides, Nucleosides Nucleotides, 1982, 1, 139-146 dan p.f. de 235º-238ºC).
RMN ^{1}H (200 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 8,34 y 8,12 (2s, 2H, H_{2} y H_{8}), 7,37 (1s, 2H, NH_{2}), 5,86 (d, 1H, H_{1'}, J_{1',2'} 6,2 Hz), 5,43 (m, 2H, OH_{2'} y OH_{5'}), 5,19 (d, 1H, OH_{3'}, J 3,7 Hz), 4,60 (m, H_{2'}), 4,13 (m, 1H, H_{3'}), 3,94 (m, 1H, H_{4'}), 3,69-3,49 (m, 2H, H_{5'a} y H_{5'b}), (idéntica a la adenosina D comercial). Análisis de masas (FAB+, GT) m/z 268
(M+H)^{+}, 136 (BH_{2})^{+}.
Esquema 2
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Ejemplo 11 3',5'-O-(1,1,3,3-tetraisopropil-1,3-disiloxanil)-\beta-L-adenosina (146)
Como se indica en el Esquema 3, el compuesto 145 (47,2 g, 177 mol) se puso en suspensión en piridina (320 ml; del 99%, de Acros, ref. 131780025) y se añadió 1,3-dicloro-1,1,3,3,tetraisopropildisiloxano (63 ml, 201 mmol; Fluka, ref. 36520) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. Se evaporó la piridina y el residuo se repartió entre acetato de etilo (1 l, Carlo Erba, ref. 528299) y una solución al 5% de NaHCO_{3} (600 ml). La fase orgánica se lavó con una solución 0,5 N de HCl (2 x 500 ml) y agua (500 ml), se secó sobre sulfato sódico (Prolabo; ref. 28111.365), se filtró y se evaporó a sequedad. El sólido resultante se cristalizó en acetonitrilo (Riedel-de Haen; ref 33019), obteniéndose el compuesto 146 (81 g, 90%). p.f. 97-98ºC (Robins, M.J. y otros, Nucleic Acid Related Compounds. 42. A general Precedure for the Efficient Deoxygenetion of Secundary Alcohols. Regiospecific and Stereoselective Conversion of Ribonucleosides to 2'-Deoxynucleosides, J Am Chem Soc, 1983, 105, 4059-4065, indican un p.f. de 98ºC para el enantiómero D).
RMN ^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,28 y 7,95 (2s, 2H, H_{2} y H_{8}), 5,96 (d, 1H, J_{1',2'} 1,1 Hz), 5,63 (s, 2H, NH_{2}), 5,10 (dd, 1H, H_{3'}, J_{3',4'} 7,6 Hz, J_{3',2'} 5,5 Hz), 4,57 (dd, 1H, H_{2'}, J_{2',1'} 1,2 Hz; J_{2',3'} 7,6 Hz), 4,15-3,99 (m, 3H, H_{4'}, H_{5'a} y H_{5'b}), 3,31 (s1, 1H, OH_{2'}), 1,06 (m, 28H, protones de isopropilo). Análisis de masas (FAB-, GT) m/z 508 (M-H)^{-}, 134 (B)^{-}; (FAB+, GT) m/z (M+H)^{+}, 136 (BH_{2})^{+}.
Esquema 3
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Ejemplo 12 3',5'-O-(1,1,3,3-tetraisopropil-1,3-disiloxanil)-2'desoxi-\beta-L-adenosina (148)
Al compuesto 146 (34 g, 67 mmol), se añadió acetonitrilo (280 ml; Riedel-de Haen, ref 33019), DMAP (16,5 g, 73 mmol; del 99%, de Acros, ref. 1482702050) y clorotiocarbonato de fenilo (10,2 ml, 73 mml; del 99%, de Acros, ref 215490050), como se representa en el Esquema 4. La solución se agitó a temperatura ambiente durante 12 h. Se evaporó el disolvente y el residuo se repartió entre acetato de etilo (400 ml; Carlo Erba, ref 528299) y una solución 0,5 N de HCl (400 ml). La capa orgánica se lavó con solución de HCl 0,5 N (400 ml) y agua (2 x 400 ml), se secó sobre sulfato sódico (Prolabo, ref 28111.365), se filtró y se evaporó a sequedad, obteniéndose el intermedio como un sólido de color amarillo pálido. El compuesto 147 en bruto se disolvió en dioxano (Merck, ref 1.09671.1000) y se añadió AIBN (3,3 g, 20 mmol; \alpha,\alpha'-azoisobutironitrilo de Fluka, ref 1630) y TTMSS (33 ml, 107 mmol; tris(trimetilsilil)silano de Fluka, ref 93411). La solución se calentó progresivamente hasta reflujo y se agitó durante 2 h. La mezcla de reacción se concentró a un aceite amarillo que se cromatografió [eluyente, diclorometano (Merck, ref 1.06050 6025): metanol (Carlo Erba, ref 309001) 95:2], obteniéndose el compuesto 148 (23 g, espuma incolora, 70%). Se cristalizó en etanol/éter de petróleo una parte alícuota. p.f. 110-11ºC (Robins, M.J., Wilson, J.S. y Hansske, F., Nucleic Acid Related Compounds. 42. A General Procedure for the Efficient Deoxygenation of Secundary Alcohols. Regiosepecific and Stereoselective Conversión of Ribonucleosides to 2'-Deoxynucleosides, J Am Chem Soc, 1983, 105, 4059-4065 dan p.f. de 113-114ºC).
RMN ^{1}H (200 MHz, CDCl_{3}): \delta 8,33 y 8,03 (2s, 2H, H_{2} y H_{8}), 6,30 (dd, 1H, H_{1'}, J 2,85 Hz, J 7,06 Hz), 5,63 (s1, 2H, NH_{2}), 4,96 (m, 1H, H_{3'}), 4,50 (m, 2H, H_{5'a} y H_{5'b}), 2,68 (m, 2H, H_{2'a} y H_{2'b}), 1,08 (m, 28H, protones de isopropilo). Análisis de masas (FAB+, GT) m/z 494 (M+H)^{+}, 136 (BH_{2})^{+}.
\newpage
Esquema 4
25
Ejemplo 13 2'-desoxi-\beta-L-adenosina (149)
Como proponen Zhang, W. y Robins, M.J., Removal of Sylil Protecting Groups from Hydroxil Functions with Ammonium Fluoride in Mehanol, Tetrahedron Lett, 1992, 33, 1177-1180, se agitó a reflujo durante 2 h una solución de 3',5'-O-(1,1,3,3-tetraisopropil-1,3-disiloxanil)-2'-deoxy-L-adenosina 148 (32 g, 65 mmol) y fluoruro amónico (32 g, mml; Fluka, ref 09742) en metanol (Prolabo, ref 20847.295) (Esquema 5). Se añadió gel de sílice (Merck, ref 1.07734.2500)N y la mezcla se evaporó cuidadosamente para obtener un polvo blanco. Este polvo se añadió a la cabecera de una columna de sílice que se eluyó con diclorometano (Merck, ref 1.06050.6025)/metanol 9/1. Se combinaron las fracciones apropiadas y la combinación se evaporó, obteniéndose un polvo blanco que se cristalizó en etanol 95 (Prolabo, ref 20823.293), obteniéndose 12,1 g de producto (75%). p.f. 189-190ºC (EtOH 95) (idéntica a la 2'-desoxi-D-adenosina comercial).
RMN ^{1}H (200 MHz, DMSO-d_{6}): \delta 8,35 y 8,14 (2s, 2H, H_{2} y H_{8}), 7,34 (s1, 2H, NH_{2}), 6,35 (dd, 1H, H_{1'}, J 6,1 Hz, J 7,85 Hz), 5,33 (d, 1H, OH_{2'}, J 4,0 Hz), 5,28 (dd, 1H, H_{3'}, J 5,95 Hz, J 6,6 Hz), 4,42 (m, 1H, OH5'), 3,88 (m, 1H, H_{4'}), 3,63-3,52 (m, 2H, H_{5'a} y H_{5'b}), 2,71 (m, 1H, H_{2'a}), 2,28 (m, 1H, H_{2'b}) (idéntica a la 2'-desoxi-D-adenosina comercial). \alpha_{D} +26º (c 0,5 agua) (2'-desoxi-D-adenosina comercial -25º (c 0,5 agua). UV \lambda_{max}260 nm (\varepsilon 14100) (H_{2}O). Análisis de masas (FAB+, GT) m/z 252 (M+H)^{+}, 136 (BH_{2})^{+}.
Esquema 5
26
Ejemplo 14 1-(3,5-di-O-benzoil-\beta-L-xilofuranosil)-uracilo (11)
Se añadió hidrato de hidrazina (1,4 ml, 28,7 mmol) a una solución de 1-(2-O-acetil-3,5-di-O-benzoil-\beta-L-xilofuranosil)uracilo 10 [Gosselin, G., Bergogne, M.C. e Imbach, J.L, Synthesis and Antiviral Evaluation of \beta-L-Xylofuranosyl Nucleosides of the Five Naturally Occurring Nucleic Acid Bases, Journal of Heterocyclic Chemistry, 1993, 30, 1229.1233] (4,79 g, 9,68 mml) en piridina (60 ml) y ácido acético (15 ml). La solución se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió acetona (35 ml) y la mezcla se agitó durante 30 min. La mezcla de reacción se evaporó a presión reducida. El residuo resultante se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente escalonado de metanol (0-4%) en diclorometano], obteniéndose el compuesto 11 (3,0 g, 68%), que se cristalizó en ciclohexano/diclorometano. p.f. 111-114ºC.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta 11,35 (s anc, 1H, NH), 7,9-7,4 (m, 11H, 2 C_{6}H_{5}CO, H-6), 6,38 (d, 1H, OH-2', J_{OH-2'} = 4,2 Hz), 5,77 (d, 1H, H-1', J_{1',2'} = 1,9 Hz), 5,55 (d, 1H, H-5, J_{5-6} = 8 Hz), 5,54 (dd, 1H, H-3', J_{3',2'} = 3,9 Hz y J_{3'4'} = 1,8 Hz), 4,8 (m, 1H, H-4'), 4,7 (m, 2H, H-5' y H-5''), 4,3 (m, 1H, H-2'). MS: FAB>0 (matriz GT) m/z 453 (M+H)^{+}, 105 (C_{6}H_{5}CO)^{+}: FAB<0 (matriz GT) m/z 451 (M-H)^{-}, 121 (C_{6}H_{5}CO_{2})^{-}, 111 (B)^{-}1.
Análisis: Calculado para C_{23}H_{20}N_{2}O_{8}\cdotH_{2}O:
C 58,09; H 4,76; N 5,96
Hallado C 57,71; H 4,42; N 5,70.
Ejemplo 15 1-(3,5-di-O-benzoil-\beta-L-arabinofuranosil)-uracilo (12)
A una solución de 1-(3,5-di-O-benzoíl-\beta-L-xilofuranosil)uracilo 11 (8 g, 17,7 ml) en una mezcla de benceno anhidro/DMSO (265 ml, 6:4 v/v) se añadió piridina anhidra (1,4 ml), diciclohexilcarbodiimida (10,9 g, 53 mmol) y ácido dicloroacético (0,75 ml). La mezcla resultante se agitó a temperatura ambiente durante 4 h, luego se diluyó con acetato de etilo (400 ml) y se añadió una solución de ácido oxálico (4,8 g, 53 mmol) en metanol (14 ml). Después de agitar durante 1 h, se filtró la solución. El filtrado se lavó con una solución saturada de NaCl (2 x 500 ml), solución de NaOH al 3% (2 x 500 ml) y agua (2 x 500 ml). La fase orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y luego se evaporó a presión reducida. El residuo resultante se disolvió en una mezcla de EtOH absoluto/benceno (140 ml, 2:1 v/v). A esta solución a 0ºC se añadió NaBH_{4} (0,96 g, 26,5 mmol). Después de agitar durante 1 h, la solución se diluyó con acetato de etilo (400 ml) y luego se filtró. El filtrado se lavó con solución saturada de NaCl (400 ml) y agua (400 ml). La fase orgánica se secó sobre Na_{2}SO_{4} y luego se evaporó a presión reducida. El material en bruto resultante se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente escalonado de metanol (0-3%) en diclorometano], obteniéndose el compuesto 12 (5,3 g,66%) que se cristalizó en acetonitrilo. p.f. 182-183ºC.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta 11,35 (s anc, 1H, NH), 8,0-7,5 (m, 11H, 2 C_{6}H_{5}CO, H-6), 6,23 (s anc, 1H, OH-2'), 6,15 (d, 1H, H-1', J_{1'-2'} = 4 Hz), 5,54 (d, 1H, H-5, J_{5-6} = 8,1 Hz), 5,37 (t, 1H, H-3', J_{3'-2'} = J_{3'-4'} = 2,6 Hz), 4,7-4,6 (m, 2H, H-5' y H-5''), 4,5 (m, 1H, H-4'), 4,4 (m, 1H, H-2'). MS: FAB>0 (matriz GT) m/z 453 (M+H)^{+}, 341 (S)^{+}, 113 (BH_{2})_{+}, 105 (C_{6}H_{5}CO)^{+}; FAB<0 (matriz GT) m/z 451 (M-H)^{-}, 121 (C_{6}H_{5}CO_{2})^{-}, 111 (B)^{-}.
Análisis: Calculado para C_{23}H_{20}N_{2}O_{8}:
\hskip-0.1cm C 61,06; H 4,46; N 6,19
Hallado: \hskip-0.1cm C 60,83; H 4,34; N 6,25.
Ejemplo 16 1-(3,5-di-O-benzoíl-2-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranosil)uracilo (13)
A una solución de 1-(3,5-di-O-benzoil-\beta-L-arabinofuranosil)uracilo 12 (5,2 g, 11,4 mmol) en 1,2-dicloroetano anhidro (120 ml) se añadió cloruro de fenoxitiocarbonilo (4,7 ml, 34,3 mmol) y 4-(dimetilamino)piridina (DMAP, 12,5 g, 102,6 mmol). La solución resultante se agitó a temperatura ambiente bajo atmósfera de argón durante 1 h y luego se evaporó a presión reducida. El residuo se disolvió en diclorometano (300 ml) y la solución orgánica se lavó sucesivamente con solución 0,2 N de ácido clorhídrico enfriada con hielo (3 x 200 ml) y agua (2 x 200 ml), se secó sobre Na_{2}SO_{4} y luego se evaporó a presión reducida. El material en bruto se coevaporó varias veces con dioxano anhidro y se disolvió en este disolvente (110 ml). A la solución resultante se añadió, bajo argón, hidruro de tris-(trimetilsilil)silano (4,2 ml, 13,7 mmol) y \alpha,\alpha'-azobisisobutironitrilo (AIBN, 0,6 g, 3,76 mmol). La mezcla de reacción se calentó y agitó a 100ºC durante 1 h bajo argón, luego se enfrió a temperatura ambiente y se evaporó a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente escalonado de metanol (0-5%)], obteniéndose 13 (2,78 g, 56%), que se cristalizó en EtOH. p.f. 223-225ºC.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta 11,4 (s an, 1H, NH), 8,0-7,5 (m, 11H, 2C_{6}H_{5}CO, H-6), 6,28 (t, 1H, H-1', J = 7 Hz), 5,5 (m, 2H, H-1' y H-5), 4,6-4,4 (m, 3H, H-4', H-5' y H-5''), 2,6 (m, 2H, H-2' y H-2''). MS:FAB>0 (matriz GT) m/z 437 (M+H)^{+}, 3325 (S)^{+}; FAB<0 (matriz GT) m/z (M-H)^{-}, 111 (B)^{-}.
Análisis: Calculado para C_{23}H_{20}N_{2}O_{7}:
\hskip-0.1cm C 63,30; H 4,62; N 6,42
Hallado: \hskip-0.1cm C 62,98; H 4,79; N 6,40.
Ejemplo 17 2'-desoxi-\beta-L-citidina (\beta-L-dC)
Se añadió bajo argón reactivo de Lawesson (1,72 g, 4,26 mmol) a una solución de 1-(3,5-di-O-benzoíl-2-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranosil)uracilo (13) (2,66 g, 6,1 mmol) en 1,2-dicloroetano anhidro (120 ml) y la mezcla de reacción se agitó a reflujo durante 2 h. Luego se evaporó el disolvente a presión reducida y el residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente escalonado de acetato de etilo (0-8%) en diclorometano], obteniéndose el intermedio 4-tio como una espuma amarilla. Se calentó a 100ºC durante 3 h, en una bomba de acero inoxidable, una solución de este intermedio tio (1,5 g, 3,31 mmol) en amoniaco metanólico (saturada previamente a -10ºC y herméticamente cerrada) (50 ml) y luego se enfrió a 0ºC. La solución se evaporó a presión reducida. El material en bruto resultante se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente escalonado de metanol (0-20%) en diclorometano]. Finalmente, se combinaron las fracciones apropiadas, la combinación se filtró a través de una unidad Millex HV-4 (Millipore, 0,45 \mum) y se evaporó a presión reducida, obteniéndose la deseada
2'-desoxi-\beta-L-citidina (\beta-L-dC) como una espuma (0,8 g, 80%), que se cristalizó en EtOH absoluto. p.f. 198-199ºC.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta 7,77 (d, 1H, H-6, J_{6-5} = 7,4 Hz), 7,10 (d anc, 2H, NH_{-2}), 6,13 (t, 1H, H-1', J = 6,7 Hz), 5,69 (d, 1H, H-5, J_{5-6} = 7,4 Hz), 5,19 (d, 1H, OH-3', J_{OH-3'} = 4,1 Hz), 4,96 (t, 1H, OH-5', J_{OH-5'} = J_{OH-5''} = 5,2 Hz), 4,1 (m, 1H, H-3'), 3,75 (m, 1H, H-4'), 3,5 (m, 2H, H-5' y H-5''), 2,0 (m, 1H, H-2'), 1,9 (m, 1H, H-2''). MS: FAB> (matriz GT) m/z 228 (M+H)^{+}, 112 (BH_{2})^{+}; FAB<0 (matriz GT) m/z (M-H)^{-}. [[\alpha]_{D}^{20} = -69 (c 0,52, DMSO),
[[\alpha]_{D}^{20} = +76 (c 0,55, DMSO) para una sal comercial hidrocloruro del enantimero D].
Análisis: Calculado para C_{9}H_{13}N_{3}O_{4}:
C 47,57; H 5,77; N 18,49
Hallado C 47,35; H 5,68; N 18,29.
Ejemplo 18 2-amino-\beta-L-arabinofurano[1',2':4,5]-oxazolina (151)
Una mezcla de L-arabinosa (170 g, 1,13 mo; Fluka, >99,5%, ref 10839), cianamida (100 g, 2,38 mol; Fluka, >98%, ref 28330), metanol (300 ml) y NH_{4}OH 6 M (50 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 3 días y luego se mantuvo a -10ºC durante la noche. El producto se recogió por succión, se lavó sucesivamente con metanol y éter y se secó en vacío. Se obtuvieron 130 g (66,0%) del compuesto analíticamente puro 151. p.f. 170-172ºC.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}): \delta ppm 6,35 (s anc, 2H, NH_{2}), 5,15 (d, 1H, H-1, J = 5,6 Hz), 5,45 (s anc, 1H, OH-3), 4,70
(s anc, 1H, OH-5), 4,55 (d, 1H, H-2, J = 5,6 hz), 4,00 (s anc, 1H, H-3), 3,65 (m, 1H, h-4), 3,25 (m, 2H, H-5, H-5').
Ejemplo 19 O^{2,2'}-anhidro-\beta-L-uridina (152)
Una solución del compuesto 151 (98,8 g, 0,57 mol) y propiolato de metilo (98 ml; Fluka, >97%, ref 81863) en etanol acuoso al 50% (740 ml) se mantuvo a reflujo durante 5 h, luego se enfrió y se concentró a presión reducida a la mitad del volumen original. Después de precipitación con acetona (600 ml), se recogió por succión el producto, se lavó con etanol y éter y se secó. Se concentraron parcialmente las aguas madre, se añadió acetona (100 ml) al concentrado, el sólido precipitado se recogió por succión y se lavó con acetona y éter, obteniéndose otra cosecha de producto. Se obtuvieron el total 80 g (62%) del compuesto 152. p.f. 236-240ºC.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta ppm 7,87 (d, 1H, H-6, J = 7,4 Hz), 6,35 (d, 1H, H-1', J = 5,7 Hz), 5,95 (d, 1H, H-5, J = 7,4 Hz), 5,90 (d, 1H, OH-3'), 5,20 (d, 1H, H-2', J = 5,7 Hz), 5,00 (m, 1H, OH-3'), 4,44 (s anc, 1H, H-3'), 4,05 (m, 1H, H-4'), 3,25 (m, 2H, H-5, H-5').
Ejemplo 20 3',5'-di-O-benzoíl-O^{2,2'}-anhidro-\beta-L-uridina (153)
A una solución del compuesto 152 (71,1 g, 0,31 mol) en piridina anhidra (1200 ml) se añadió cloruro de benzoílo (80,4 ml; Fluka, p.a., ref 12930) a 0ºC bajo argón. La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 5 h en ausencia de humedad atmosférica y se apagó añadiendo etanol. Se eliminaron los disolventes a presión reducida y el residuo resultante se coevaporó con tolueno y etanol absoluto. La mezcla en bruto se diluyó luego con etanol y el precipitado se recogió por succión, se lavó sucesivamente con etanol y éter y se secó. Se obtuvieron 129 g (95,8%) del compuesto 153. p.f. 254ºC.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta ppm 8,1-7,4 (m, 11H, C_{6}H_{5}CO, H-6), 6,50 (d, 1H, H-1', J = 5,7 Hz), 5,90 (d, 1H, H-5,
J = 7,5 Hz), 5,80 (d, 1H, H-2', J = 5,8 Hz), 5,70 (d, 1H, H-3'), 4,90 (m, 1H, H-4'), 4,35 (m, 2H, H-5, H-5').
Ejemplo 21 3,5'-di-O-benzoíl-2'-cloro-2'-desoxi-\beta-L-uridina (154)
A una solución del compuesto 153 (60,3 g, 0,139 mol) en dimetilformamida (460 ml) se añadió a 0ºC una solución 3,2 N de HCl en DMF (208 ml, preparada in situ añadiendo 47,2 ml de cloruro de acetilo (Fluka, p.a., ref 00990) a una solución de 27,3 ml de metanol y 133,5 ml de dimetilformamida). La mezcla de reacción se agitó a 100ºC durante 1 h en ausencia de humedad atmosférica, se enfrió y se vertió en agua (4000 ml). El precipitado del compuesto 154 se recogió por succión, se lavó con agua y se recristalizó en etanol. Se recogieron los cristales, se lavaron con etanol frío y éter y se secaron a presión reducida. Se obtuvieron 60,6 g (92,6%) del compuesto 154. p.f. 164-165ºC.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) \delta ppm 8,7 (s anc, 1H, NH), 8,1-7,3 (m, 11H, C_{6}H_{5}CO, H-6), 6,15 (d, 1H, H-1', J = 4,8 Hz), 5,5 (m, 2H, H-5, H-2'), 4,65 (m, 4H, H-3', H-4', H-5', H-5'').
Ejemplo 22 3,5'-di-O-benzoíl-2'-desoxi-\beta-L-uridina (155)
Se mantuvo a reflujo con agitación, durante 5 h, una mezcla del compuesto 154 (60,28 g, 0,128 mol), hidruro de tri-n-butilestaño (95 ml; Fluka, >98%, ref 90915) y azabisisobutironitrilo (0,568 g; Fluka, >98%, ref 11630) en tolueno seco (720 ml) y se enfrió luego. Se recogió el sólido por succión y se lavó con tolueno frío y éter de petróleo. El filtrado se concentró a presión reducida y se diluyó con éter de petróleo para obtener una cosecha adicional del compuesto 155. Se obtuvieron en total 54,28 g (97,2%) del compuesto 155. p.f. 220-221ºC.
RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta ppm 8,91 (s anc, 1H, NH), 8,1-7,5 (m, 11H, C_{6}H_{5}CO y H-6), 6,43 (q, 1H, H-1', J_{1',2'} = 5,7 Hz y J_{1',2''} = 8,3 Hz), 5,7-5,6 (m, 2H, H-3' y H-5), 4,8-4,6 (m, 3H, H-5', H-5'' y H-4'), 2,8-2,7 (m, 1H, H-2'), 2,4-2,3 (m, 1H, H-2'').
Ejemplo 23 3,5'-di-O-benzoíl-2'-desoxi-\beta-L-tiouridina (156)
Se mantuvo a reflujo bajo argón durante la noche una solución del compuesto 155 (69 g, 0,158 mol) y reactivo de Lawesson (74 g; Fluka, >98%, ref 61750) en cloruro de metileno anhidro (3900 ml). Después de evaporar el dispolvente, el residuo en bruto se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente de metanol (0-2%) en cloruro de metileno], obteniéndose el compuesto 156 puro (73 g, 100%).
RMN ^{1}H (CDCl_{3}) \delta ppm 9,5 (s anc, 1H, NH), 8,1-7,4 (m, 10H, C_{6}H_{5}CO), 7,32 (d, 1H, H-6, J = 7,7 Hz), 6,30 (dd, 1H, H-1', J = 5,6 Hz y J = 8,2 Hz), 6,22 (d, 1H, H-5, J = 7,7 Hz), 5,6 (m, 1H, H-3'), 4,7 (m, 2H, H-5', H-5''), 4,5 (m, 1H, H-4'), 2,8 (m, 1H, H-2'), 2,3 (m, 1H, H-2'').
Ejemplo 24 2'-desoxi-\beta-L-citosina
Una solución del compuesto 156 (7,3 g, 0,016 mol) en metanol saturado con amoniaco (73 ml) se calentó a 100ºC en un cilindro de acero inoxidable durante 3 h. Después de enfriar cuidadosamente, se evaporó el disolvente a presión reducida. Se lavó con acetato de etilo una solución acuosa del residuo y se evaporó a sequedad. Este procedimiento se realizó en otras 9 muestras (cada una de 7,3 g) del compuesto 156 (producto de 2'-desoxi-\beta-L-citosina: 73 g). Se combinaron los 10 residuos, se diluyó la combinación con etanol absoluto y se enfrió, obteniéndose 2'-desoxi-\beta-citosina como cristales. Se eliminaron trazas de benzamida de los cristales de 2'-desoxi-\beta-citosina por un procedimiento de extracción sólido-líquido (a reflujo en acetato de etilo durante 1 h). Se obtuvieron 28,75 g (78,6%) del compuesto 2'-desoxi-\beta-citosina. p.f. 141-145ºC.
RMN ^{1}H (DMSO) \delta ppm 8,22 y 8,00 (2 s anc, 2H, NH_{2}), 7,98 (d, 1H, H-6, J = 7,59 Hz), 6,12 (t, 1H, H-1', J = 6,5 Hz y J = 7,6 Hz), 5,89 (d, 1H, H-5, J = 7,59 Hz), 5,3 (s anc, 1H, OH-3'), 5,1 (s anc, 1H, OH-5'), 4,2 (m, 1H, H-3'), 3,80 (q, 1H, H-4', J = 3,6 Hz y J = 6,9 Hz), 3,6-3,5 (m, 2H, H-5', H-5''), 2,2-2,0 (m, 2H, H-2', H-2''). FAB<0 (GT) m/e (M'H)^{-}, 110 (B)^{-}; FAB>0 (GT) 228 (M+H)^{+}, 112 (B+2H)^{+}. [\alpha]_{D}^{20} -56,48 (c = 1,08 en DMSO); UV (pH 7) \lambda_{max} = 270 nm (\varepsilon = 10000).
Ejemplo 25 3',5'-di-O-benzoil-2'-desoxi-5-yodo-\beta-L uridina (157)
Una mezcla del compuesto 155 (105,8 g, 0,242 mol), yodo (76,8 g; Fluka, 9,8%, ref 57650), CAN (66,4 g; nitrato amónico de cerio, de Aldrich, >98,5%, ref 21.547-3) y acetonitrilo (2550 ml) se agitó a 80ºC durante 3 h y luego la mezcla de reacción se enfrió a temperatura ambiente, con lo que cristalizó el compuesto 157 (86,6 g, 63,5%). p.f. 192-194ºC.
RMN ^{1}H (DMSO) \delta ppm: 8,34 (s, 1H, NH), 8,2-7,2 (m, 11H, 2 C_{6}H_{5}CO, H-6), 6,31 (q, 1H, H-1', J = 5,5 Hz y
J = 8,7 Hz), 5,5 (m, 1H, H-3'), 4,7 (m, 2H, H-5', H-5''), 4,5 (m, 1H, H-4'), 2,7 (m, 1H, H-2'), 2,3 (m, 1H, H-2''). FAB<0 (GT) m/e 561 (M-H)^{-}, 237 (B)^{-}; FAB>0 (GT) 563 (M+H)^{+}. [\alpha]_{D}^{20} +39,05 (c = 1,05 en DMSO). UV (EtOH 95) \nu_{max} = 281 nm (\varepsilon = 9000), \nu_{min} = 254 nm (\varepsilon = 4000), \nu_{max} = 229 nm (\varepsilon = 31000).
Análisis: Calculado para C_{23}H_{19}IN_{2}O_{7}:
\hskip-0.1cm C 49,13; H 3,41; N 4,98; I 22,57
Hallado: \hskip-0.1cm C 49,31; H 3,53; N 5,05; I 22,36.
Ejemplo 26 3',5'-di-O-benzoil-2'-desoxi-3-N-toluoil-\beta-L-timidina (159)
A una solución del compuesto 157 (86,6 g, 0,154 mol) en piridina anhidra (1530 ml) que contenía N-etildiisopropilamina (53,6 ml; Aldrich, >99,5%, ref 38.764-9) ae añadió, en porciones a 0ºC, cloruro de p-toluílo (40 ml, Aldrich, 98%, ref 10.663-1). La mezcla de reacción se agitó a temperatura ambiente durante 2 h y luego se añadió agua para apagar la reacción; la mezcla de reacción se sometió luego a extracción con cloruro de metileno. La fase orgánica se lavó con agua, se secó sobre sulfato sódico y se evaporó a sequedad, obteniéndose la 3',5'-di-O-benzoíl-2'-desoxi-3-N-toluoil-5-yodo-\beta-L-uridina (158) que se puede usar en la etapa siguiente sin más purificación.
Una solución de la mezcla en bruto de 158, acetato de paladio (3,44 g; Aldrich, >99,98%, ref 37.987-5), trifenilfosfina (8,0 g; Fluka, > 99%, ref 44.377-8) con trietilamina (4,3 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 45 min. Luego se añadió a gotas a 0ºC, bajo argón, tetrametilestaño (42,4 ml); Aldrich, >99%, ref 14.647-1). Después de agitar a 100-110ºC durante la noche, la mezcla de reacción se vertió en agua y se sometió a extracción con dietil éter. La solución orgánica se secó sobre sulfato sódico y se concentró a presión reducida. El residuo se purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente escalonado de acetato de etilo (0-10%) en tolueno], obteniéndose el compuesto 159 (42,3 g, 48,3% para las dos etapas).
RMN ^{1}H (DMSO) \delta ppm, 8,3-7,2 (m, 15H, 2C_{6}H_{5}CO, 1CH_{3}C_{6}H_{4}CO, H-6), 6,29 (t, 1H, H-1', J = 7,0 Hz), 5,7 (m, 1H, H-3'), 4,7-4,5 (m, 3H, H-5', H-5'', H-4'), 2,7-2,6 (m, 2H, H-2', H-2''). FAB<0, (GT) m/e 567 (M-H)^{-}, 449 (M-CH_{3}C_{6}H_{4}CO)^{-}, 243 (B)^{-}, 121 (C_{6}H_{5}COO)^{-}; FAB>0 (GT) 1137 (2M+H)^{+}, 569 (M+H)^{+}, 325 (M-B)^{-}, 245 (B+2H)^{+}, 119 (CH_{3}C_{6}H_{5}CO)^{+}.
Ejemplo 27 2'-desoxi-\beta-L-timidina
Una solución del compuesto 159 (42,3 g, 0,074 ml) en metanol saturado con amoniaco (1850 ml) se agitó a temperatura ambiente durante 2 días. Después de evaporar el disolvente, el residuo se diluyó con agua y se
lavó varias veces con acetato de etilo. Se separó la capa acuosa, se evaporó a presión reducida y el residuo se
purificó por cromatografía en columna sobre gel de sílice [eluyente: gradiente escalonado de metanol (0-10%) en cloruro de metileno], obteniéndose 2'-desoxi-\beta-L-timidina pura (11,62 g, 64,8%) que se cristalizó en etanol. p.f.
185-188ºC.
RMN ^{1}H (DMSO) \delta ppm 11,3 (s, 1H, NH), 7,70 (s, 1H, H-6), 6,2 (pt, 1H, H-1'), 5,24 (d, 1H, OH-3', J = 4,2 Hz), 5,08 (t, 1H, OH-5', J = 5,1 Hz), 4,2 (m, 1H, H-3'), 3,7 (m, 1H, H-4'), 3,5-3,6 (m, 2H, H-5', H-5''), 2,1-2,0 (m, 2H, H-2', H-2''). FAB<0, (GT) m/e 483 (2M-H)^{-}, 349 (M+T-H)^{-}, 241 (M-H)^{-}, 125 (B)^{-}; FAB>0 (GT) 243 (M+H)^{+}, 127 (B+2H)^{+}. [\alpha]_{D}^{20} -13,0 (c = 1,0 en DMSO); UV (pH 1) \nu_{max} = 267 nm (\varepsilon = 9700), \nu_{min} = 234 nm (\varepsilon = 2000).
Ejemplo 28 Síntesis estereoselectiva de 2'-desoxi-\beta-L-inosina (\beta-L-dI)
Se sintetizó \beta-L-dI por desaminación de 2'-desoxi-\beta-L-adenosina (\beta-L-dA) siguiendo el procedimiento antes descrito en la serie de 9-D-glucopiranosilo (ref: I.Iwai, T. Nishimura y B. Shimizu, Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry, W.W. Aorbach y R.S. Tipson, eds., John Wiley & Sons, Inc., New York, 1968, 1, 135-138).
\newpage
Esquema 6
27
Así, una solución de \beta-L-dA (200 mg) en una mezcla de ácido acético (0,61 ml) y agua (19 ml) se calentó con nitrito sódico (495 mg) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente durante la noche. La solución se evaporó luego a sequedad a presión reducida. Se aplicó a una columna IR-120 (H)^{+} de resina de intercambio iónico una solución acuosa del residuo y la columna se eluyó con agua. Se recogieron fracciones apropiadas y la combinación se evaporó a sequedad, obteniéndose \beta-L-dI puro que se cristalizó en metanol (106 mg, 53% de rendimiento no optimizado). p.f. 209-211ºC. UV (H_{2}O), \lambda_{max} = 247 nm.
RMN ^{1}H (DMSO-d_{6}) = 8,32 y 8,07 (2s, 1H cada una, H-2 y H-8), 6,32 (pt, 1H, H-1, J = 6,7 Hz), 4,4 (m, 1H, H-3'), 3,9 (m, 1H, H-4'), 3,7-3,4 (m, 2H parcialmente oscurecida por HOD, H-5',5''), 2,6 y 2,3 (2m, 1H cada una, H-2' y H-2''). Espectro de masas (maduro, glicerol-tioglicerol, 1:1, v/v), FAB>0: 253 (M+H)^{+}, 137 (base + 2H)^{\text{*}}; FAB<0: 251 (m-H)^{-}, 135 (base). [\alpha]_{D}^{20} = -19,3 (c 0,88, H_{2}O).
Ejemplo 29 Toxicidad de los compuestos
Los análisis de toxicidad se realizaron para estimar si cualesquier efectos antivirales observados son debidos a un efecto general sobre la viabilidad de la célula. El método usado es la medida del efecto de \beta-L-dA, \beta-L-dC y \beta-L-dT sobre el crecimiento celular en ensayos clorogénicos de médula ósea humana, en comparación con la lamuvidina. Los resultados se presentan en la Tabla 1.
TABLA 1
28
Ejemplo 30 Actividad biológica de compuestos fosforilados
Se determinó la capacidad de los derivados trifosfato de \beta-L-dA, \beta-L-dC, \beta-L-dU, \beta-L-2'-dG, \beta-L-dI y \beta-L-dT para inhibir la hepatitis D. La Tabla 2 describe las actividades inhibidoras comparativas de trifosfatos de \beta-L-dT (\beta-L-dT-TP), \beta-L-dC (\beta-L-dC-TP), \beta-L-dU (\beta-L-dU-TP) y \beta-L-dA (\beta-L-dA-TP) sobre la DNA polimerasa del virus de la hepatitis de marmota (WHV) y DNA polimerasas \alpha, \beta y \gamma humanas.
TABLA 2
\vskip1.000000\baselineskip
29
\dotable{\tabskip\tabcolsep#\hfil\tabskip0ptplus1fil\dddarstrut\cr}{
 IC _{50} : Concentración que inhibe 50%\cr 
 \begin{minipage}[t]{152mm}b.  \hskip0.4cm El valor de K _{i} 
se determinó usando DNA activado de timo de ternera como 
cebador-plantilla y dATP como sustrato. Los
inhibidores se analizaron por  análisis gráfico de Dixon. En estas
condiciones, la K _{m}  media de la DNA  polimerasa  \alpha  humana
para dATP es de aproximadamente 2,6  \mu M. La DNA  polimerasa
 \beta  humana presentaba un estado estacionario K _{m}  de  3,33
 \mu M para dATP. La DNA polimerasa  \gamma  humana presentaba una
K _{m}   estacionaria de 5,2
 \mu M.\end{minipage} \cr}
Ejemplo 31 Actividad antiviral de compuestos
Se determinó la actividad antivirus de la hepatitis B de \beta-L-dA, \beta-L-dC, \beta-L-dU, \beta-L-2'-dG y \beta-L-dT en células Hep G-2 (2.2.15) transfectadas. La Tabla 3 ilustra el efecto de \beta-L-dA, \beta-L-dC, \beta-L-dU y \beta-L-dT frente a la replicación del virus de la hepatitis D en células Hep G-2 (2.2.15) transfectadas.
TABLA 3
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30
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Ejemplo 32 Terapia de combinación de compuestos
Se midió en células 2.2.15 el efecto de \beta-L-dA, \beta-L-dC y \beta-L-dT en combinación sobre el crecimiento de la hepatitis B. Los resultados se presentan en la Tabla 4.
TABLA 4
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31
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Cada una de las combinaciones producía una actividad anti-HBV, que era sinérgica. Además, la combinación de L-dA +L-dC+L-dT era también sinérgica en este modelo.
Ejemplo 33
Se midió la inhibición de la replicación de la hepatitis B en células 2.2.15 por \beta-L-dA y \beta-L-dC solas o en combinación. Los resultados se presentan en la Tabla 5.
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(Tabla pasa a página siguiente)
TABLA 5
32
Ejemplo 35 Eficacia de los compuestos
Se determinó la eficacia de L-dA, L-dT y L-dC frente a la infección por hepadnavirus en marmotas (Marmota monax) infectadas crónicamente con el virus de la hepatitis de marmotas (WHV). Este modelo animal de infección con HBV es ampliamente aceptado y ha demostrado ser útil para la evaluación de agentes antivirales dirigidos contra el HBV.
Había tres animales por grupo de fármaco y cuatro animales para control. En el grupo 1, los animales recibieron un control vehículo; el grupo 2 recibió lamivudina (3TC) (10 mg/kg/día); los grupos 3-6 recibieron L-dA (0,01, 0,1, 1,0 y 10,0 mg/kg/día, respectivamente); los grupos 7-10 recibieron L-dT (0,01, 0,1, 1,0, 10 mg/kg/día, respectivamente) y los grupos 11-14 recibieron L-dC (0,01, 0,1, 1,0, 10 mg/kg/día, respectivamente).
Los fármacos se administraron por vía oral una vez al día y se tomaron muestras de sangre los días 0, 1, 3, 7, 14, 21, 28 y, después del tratamiento, los días +1, +3, +7, +14, +28 y +56. La estimación de la actividad y la toxicidad se basó en las reducciones de DNA de WHV en suero: PCR cuantitativa con transferencia.
Los resultados se ilustran en la Figura 5 y la Tabla 6.
TABLA 6 Actividad antiviral de LdA, LdT, LdC en el modelo marmota
33
Los datos revelan que L-dA, LdT y L-dC son muy activas en este modelo in vivo. Primero, la carga viral se reduce a niveles no detectables (L-dT) o casi no detectables (L-dA, L-dC). Segundo, L-dA y L-dC han demostrado ser más activos que 3TC (lamivudina) en este modelo. Tercero, no es detectable rebote viral durante al menos dos semanas de retirar la L-dT. Cuarto, las curvas de dosis-respuesta sugieren que un aumento de la dosis de L-dA y L-dC tendría una actividad antiviral similar a la de L-dT. Quinto, todos los animales que recibieron las fármacos ganaron peso y no se detectó toxicidad alguna relacionada con las fármacos.
Ejemplo 34 Preparación de composiciones farmacéuticas
Se pueden tratar personas u otros huéspedes infectados con hepatitis D administrando una cantidad efectiva de un \beta-2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido, por ejemplo, \beta-L-2'-desoxiadenosina, \beta-L-2'-desoxicitidina, \beta-L-2'-desoxiuridina, \beta-L-1'-desoxiguanidina o \beta-L-2'-desoxitimidina, o una de sus sales o profármacos farmacéuticamente aceptable, en presencia de un vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable. Las sustancias activas se pueden administrar por una vía apropiada, por ejemplo, oralmente, parenteralmente, intravenosamente, intradérmicamente, subcutáneamente o tópicamente, en forma líquida o sólida.
La sustancia activa se incluye en el vehículo o diluyente farmacéuticamente aceptable en cantidad suficiente para suministrar a un paciente una cantidad terapéuticamente efectiva de compuesto para inhibir la replicación viral in vivo, sin causar efectos tóxicos en el paciente tratado. Por "cantidad inhibidora" se entiende una cantidad de ingrediente activo suficiente para ejercer un efecto inhibidor medido, por ejemplo, mediante un ensayo de los descritos aquí.
Una dosis preferida del compuesto para todas las dolencias mencionadas estará en el intervalo de aproximadamente 1 a 50 mg/kg, preferiblemente de 1 a 20 mg/kg de peso corporal por día y, más en general, de 0,1 a aproximadamente 100 mg de peso corporal del receptor por día. El intervalo de dosificación efectiva del profármaco farmacéuticamente aceptable se puede calcular sobre la base del peso del nucleótido madre a suministrar. Si el profármaco exhibe actividad por sí, la dosis efectiva se puede estimar como se ha indicado usando el peso del profármaco o por otros medios conocidos por los expertos en la técnica.
El compuesto se administra convenientemente en cualquier forma de dosificación adecuada, incluida, aunque no únicamente, una forma que contiene de 7 a 3000 mg, preferiblemente de 70 a 1400 mg de ingrediente activo por unidosis. Usualmente, una dosificación de 50-1000 mg es conveniente.
Idealmente, el ingrediente activo se debe administrar para conseguir concentraciones pico del ingrediente activo en plasma de 0,2 a 70 \muM, preferiblemente de aproximadamente 1,0 a 10 \muM. Esto puede conseguirse, por ejemplo, por inyección intravenosa de una solución al 0,1-5% del ingrediente activo, opcionalmente en solución fisiológica, o por administración de un bolus del ingrediente activo.
La concentración del compuesto activo en la composición del fármaco dependerá de las velocidades de absorción, inactivación o excreción del fármaco así como de otros factores conocidos por los expertos en la técnica. Ha de tenerse en cuenta que los valores de la dosificación variarán también con la severidad de la dolencia a aliviar. Ha de tenerse en cuenta, además, que para cualquier sujeto particular, se deben ajustar regímenes de dosificación específicos a lo largo del tiempo de conformidad con la necesidad individual y el criterio profesional de la persona que administra o supervisa la administración de las composiciones, y que los intervalos de concentración que se han dado aquí son meramente a modo de ejemplo y no limitan el ámbito o la práctica de la composición reivindicada. El ingrediente activo se puede administrar de una vez, o puede dividirse en dosis menores a administrar a intervalos de tiempo variables.
Un modo preferente de administración del ingrediente activo es la administración oral. Por lo general, las composiciones orales incluyen un diluyente inerte o un vehículo comestible. Pueden estar contenidas en cápsulas o comprimidos como comprimidos. A los fines de administración terapéutica oral, el compuesto activo se puede incorporar con excipientes y usarse en forma de comprimidos, trociscos o cápsulas. Como parte de la composición pueden incluirse agentes aglutinantes y/o materiales coadyuvantes farmacéuticamente compatibles.
Los comprimidos, píldoras, cápsulas, trociscos, etc. pueden contener cualquiera de los siguientes ingredientes o compuestos de naturaleza similar: un aglutinante tal como celulosa microcristalina, goma tragacanto o gelatina; un excipiente tal como almidón o lactosa,; un agente desintegrante tal como ácido algínico, primogel o almidón de maíz; un lubricante tal como estearato magnésico o Sterotes; un agente deslizante tal como dióxido de silicio coloidal; un edulcorante tal como sacarosa o sacarina; o un agente saboreador tal como menta piperácea, salicilato de metilo o agente saboreador de naranja. Cuando la forma de unidosis es una cápsula, ésta puede contener, además de material del tipo anterior, un vehículo líquido tal como un aceite graso. Además, las formas de unidosis pueden contener otros varios materiales que modifican la forma física de la unidosis, por ejemplo, revestimientos de azúcar, goma laca u otros agentes entéricos.
El compuesto se puede administrar como componente de un elixir, una suspensión, un jarabe, una oblea, chicle, etc. Un jarabe puede contener, además de los compuestos activos, sacarosa como edulcorante y ciertos conservantes, colorantes y tintes y agentes saboreadores.
El compuesto o un derivado de él, o sus sales farmacéuticamente aceptables, se puede mezclar con otros materiales activos que no empeoran la acción deseada, o con materiales que suplementan la acción deseada, tales como antibióticos, agentes antihongos, antiinflamatorios, inhibidores de proteasas, u otros agentes antivirales nucleósidos o no nucleósidos. Las soluciones o suspensiones usadas para aplicación parenteral, intradérmica, subcutánea o tópica pueden incluir los componentes siguientes: un diluyente estéril tal como agua para inyección, solución fisiológica, aceites fijados, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros disolventes sintéticos; agentes antibacterianos tales como alcohol bencílico o metilparabenos; antioxidantes tales como ácido ascórbico o bisulfito sódico; agentes quelatantes tales como ácido etilendiaminatetraacético; tampones tales como acetatos, citratos o fosfatos y agentes para el ajuste de la tonicidad tales como cloruro sódico o dextrosa. La preparación parenteral puede estar contenida en ampollas, jeringas desechables o viales multidosis de vidrio o plástico.
Si el fármaco se administra por vía intravenosa, los vehículos son solución salina fisiológica o solución salina tamponada con fosfato (PBS).
En una realización preferente, los compuestos activos se preparan con vehículos que protegerán el compuesto contra una rápida eliminación del cuerpo, como puede ser una formulación de liberación controlada, incluidos implantes y sistemas microencapsulados de suministro. Se pueden usar polímeros biodegradables, biocompatibles, tales como acetato de etilenvinilo, polianhídridos, ácido poliglicólico, colágeno, poliortoésteres y ácido poliacético. Los métodos para la preparación de tales formulaciones son conocidos por los expertos en la técnica. Los materiales pueden adquirirse comercialmente de Alza Corporation.
Como vehículos farmacéuticamente aceptables se prefieren también suspensiones liposomales (incluidos liposomas que se dirigen a células infectadas diana con anticuerpos monoclonales a antígenos virales). Éstas se pueden preparar de acuerdo con métodos conocidos por los expertos en la técnica, por ejemplo, según se describe en la patente U.S. nº. 4.522.811. Por ejemplo, se pueden preparar formulaciones de liposomas disolviendo lípidos apropiados (tales como estearoilfosfatidiletanolamina, estearoilfosfatidilcolina, araquidoilfosfatidilcolina y colesterol) en un disolvente inorgánico que luego se evapora, dejando una película delgada de lípido seco sobre la superficie del recipiente. Se introduce luego en el recipiente una solución acuosa del compuesto activo o sus derivados monofosfato, difosfato y/o trifosfato. El recipiente se agita luego a mano para liberar material lipídico de los lados del recipiente y dispersar agregados lipídicos, con lo que se forma la suspensión liposomal.

Claims (15)

1. Uso de un 20-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido de la fórmula
34
o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de un huésped infectado con el virus de la hepatitis D,
fórmula en la que
R^{1} se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cíclico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquil- sulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado fosfato; y
BASE es una base purina o pirimidina que opcionalmente puede estar sustituida.
2. El uso de la reivindicación 1, en el que el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es una \beta-L-2'-desoxipurina de la fórmula:
35
o una de sus sales farmacéuticamente aceptable,
fórmula en la que
R^{1} se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cílico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado fosfato;
Y es OR^{3}, NR^{3}R^{4} o SR^{3};
X^{1} y X^{2} se seleccionan independientemente entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cíclico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, halógeno, OR^{5}, NR^{5}NR^{6} o SR^{5}, y
R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} son, independientemente, H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cílico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado de fosfato.
3. El uso de la reivindicación 2, en el que el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es una \beta-L-2'-desoxiadenosina de la fórmula:
36
o una de sus sales farmacéuticamente aceptable,
fórmula en la que
R^{1} es H, mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado.
4. El uso de la reivindicación 2, en el que el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es una \beta-L-2'-desoxiguanosina de la fórmula:
37
o una de sus sales farmacéuticamente aceptable,
fórmula en la que
R^{1} es H, mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado.
5. El uso de la reivindicación 2, en el que el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es una \beta-L-2'-desoxiinosina de la fórmula:
38
o una de sus sales farmacéuticamente aceptable,
fórmula en la que
R^{1} es H, mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado.
6. El uso de la reivindicación 1, en el que el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es una \beta-L-2'-desoxipirimidina de la fórmula:
39
o una de sus sales farmacéuticamente aceptable,
fórmula en la que
R^{1} se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cílico, CO-alquilo,
CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado de fosfato;
Y es OR^{3}, NR^{3}R^{4} o SR^{3};
X^{1} se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cíclico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, halógeno, OR^{5}, NR^{5}NR^{6} o SR^{5}, y
R^{3}, R^{4}, R^{5} y R^{6} son, independientemente, H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cílico, CO-alquilo, CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado de fosfato.
7. El uso de la reivindicación 6, en el que el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es una \beta-L-2'-desoxicitidina de la fórmula:
40
o una de sus sales farmacéuticamente aceptable,
fórmula en la que
R^{1} es H, mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado.
8. El uso de la reivindicación 6, en el que el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es una \beta-L-2'-desoxiuridina de la fórmula:
41
o una de sus sales farmacéuticamente aceptable,
fórmula en la que
R^{1} es mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado.
9. El uso de la reivindicación 6, en el que el 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es una \beta-L-timidina de la fórmula:
42
o una de sus sales farmacéuticamente aceptable,
fórmula en la que
R^{1} es H, mono-, di- o trifosfato, acilo, alquilo o un derivado fosfato estabilizado.
10. El uso de la reivindicación 3, la reivindicación 7 o la reivindicación 9, en el que R^{1} es hidrógeno.
11. El uso de la reivindicación 3, la reivindicación 7 o la reivindicación 9, en el que R^{1} es acilo.
12. El uso de la reivindicación 11, en el que el acilo deriva de un aminoácido.
13. El uso de la reivindicación 12, en el que el aminoácido es valina.
14. Uso de al menos dos 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósidos, en el que cada 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido es, independientemente, de la fórmula
43
o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, en la manufactura de un medicamento para el tratamiento o la profilaxis de un huésped infectado con el virus de la hepatitis D,
fórmula en la que
R^{1} se selecciona entre el grupo constituido por H, alquilo de cadena lineal, ramificada o cíclico, CO-alquilo,
CO-arilo, CO-alcoxialquilo, CO-ariloxialquilo, CO-arilo sustituido, alquilsulfonilo, arilsulfonilo, arilalquilsulfonilo, resto de aminoácido, mono-, di- o trifosfato, o un derivado fosfato; y
BASE es una base purina o pirimidina que opcionalmente puede estar sustituida.
15. Uso de un 2'-desoxi-\beta-L-eritro-pentofuranonucleósido biológicamente activo, o una de sus sales farmacéuticamente aceptable, con un agente antihepatitis B para la manufactura de un medicamento para administración simultánea, separada o secuencial en el tratamiento de un huésped infectado con el virus de la hepatitis D, en el que el agente antihepatitis B se selecciona entre el grupo constituido por FTC, L-FMAU, DAPD, famciclovir, penciclovir, BMS-200475, bis pom PMEA (adefovir, dipivoxil), lobucavir, ganciclovir o ribavirina.
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