CN1444483A

CN1444483A - 用β－L－2′－脱氧核苷治疗丁型肝炎病毒感染的方法

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Publication number: CN1444483A
Application number: CN01813429A
Authority: CN
Inventors: J·-P·索马多斯; M·L·布赖安特
Original assignee: Idenix Cayman Ltd
Current assignee: Novartis AG
Priority date: 2000-05-26
Filing date: 2001-05-29
Publication date: 2003-09-24
Anticipated expiration: 2021-05-29
Also published as: HK1050999A1; AU2001263484B2; IL153078A0; ZA200210100B; WO2001091737A3; US20020035085A1; DE60105424D1; EP1292313B1; JP2004513070A; CN100490818C; BR0111195A; ZA200404304B; WO2001091737A2; AU2006252214A1; CA2410488A1; EP1292313A2; ES2227203T3; CA2410488C; ATE275406T1; TR200402565T4

Abstract

治疗感染丁型肝炎的宿主的方法和组合物，包括施用丁型肝炎治疗有效量的所述2’－脱氧－β－L－赤－呋喃戊糖核苷或其可药用盐或前药。

Description

用β-L-2’-脱氧核苷治疗丁型肝炎病毒感染的方法

本申请要求于2000年5月26日提交的第60/207,538号美国临时申请的优先权。

发明领域

本发明涉及治疗被丁型肝炎病毒(hepatitis delta virus)(还称为“HDV”)感染的宿主的方法和组合物，包括施用有效量的本文所定义的β-L-2’-脱氧核苷或其可药用盐或前药。

发明背景

丁型肝炎—病毒性肝炎的最严重形式是由于感染丁型(δ型)肝炎病毒(HDV)—乙型肝炎病毒(HBV)的一种卫星亚病毒(Smedile，A.等人.Prog Liver Dis 1994，12，157-75)。与其它病毒性肝炎相比，急性HDV感染经常与暴发性肝炎—其中有大量肝细胞被破坏的一种进展迅速的经常致命类型的疾病。慢性丁型肝炎的特征一般是坏死性炎性损伤，该损伤类似于慢性HBV感染，但是更严重，并经常迅速进展成肝硬化和肝衰竭，这是慢性HDV感染与最终的肝脏疾病不成比例地相关的原因(Smedile，A.等人. Prog Liver Dis 1994，12，157-75；Rizzetto，M.等人. Ann Intern Med 1983，98，437-41)。虽然HDV感染影响的个体要比单独的HBV少，但是在欧洲和北美洲，其所导致的急性或慢性肝衰竭是肝移植的常见指征(Smedile，A.和Rizzetto，M. Int J Clin Lab Res 1992，22，211-215；Wright，T.L.和Pereira，B. Liver Transplant Surgery 1995，1，30-42)。在全球范围内，慢性病影响着一千五百万人，有约70,000在美国。据疾病控制中心估计，在美国每年有1,000例死亡是由于HDV感染所致(Alter，M.J.和Hadler，S.C. Prog Clin Biol Res 1993，382，243-50；Alter，M.J.和Mast，E.E. Gastroenterol Clin North Am 1994，23，437-55)。

目前对于丁型肝炎没有任何通常可接受的治疗，肝移植成为相关晚期肝脏疾病的唯一选择。虽然α-干扰素在治疗丁型肝炎的某些病例中取得了中度成功，但是由于需要非常高的剂量、可变的反应、停止治疗后的频繁复发、以及难以给药，仍然需要更好的治疗选择(Thomas，H.C.等人. Prog Clin Biol Res 1987，234，277-90；Hoofnagle，J.等人. Prog Clin Biol Res 1987，234，291-8；Rosina，F.等人. Prog Clin Biol Res 1987，234，299-303；Rosina，F.等人. Hepatology1991，13，1052-6；Farci，P.等人. N Engl J Med 1994，330，88-94；Hadziyannis，S.J. J Hepatol 1991，13(Suppl 1)，S21-6；Di Marco，V.等人. J Viral Hepat 1996，3，123-8；Porres，J.C.等人. J Hepatol 1989，9，338-44)。

HDV病毒体是由核糖核蛋白核与包膜构成的。核含有HDV-RNA、丁型肝炎抗原(HDAg)—是该病毒编码的唯一蛋白(Wang，K.S.等人.Nature 1986，323，508-14)。包膜是由辅助病毒—乙型肝炎病毒的表面抗原蛋白(乙型肝炎病毒表面抗原，或HBsAg)形成的(Bonino，F.Infect Immun 1984，43，1000-5；Bonino，F.等人. Hepatology 1981，1，127-31；Bonino，F.等人. J Virol 1986，58，945-50)。包膜是HBV提供的唯一辅助功能。HDV能够在没有HBV存在的情况下在细胞内复制其RNA(Kuo，M.Y.等人. J Virol 1989，63，1945-50)，但是需要HBsAg来包装和释放HDV病毒体(Wu，J.C.等人. J Virol1991，65，1099-104；Ryu，W.S.等人. J Virol 1992，66，2310-2315.)，以及传染(Sureau，C.，等人. J Virol.1992，66，1241-5)。作为HDV依赖HBV的结果，HDV仅感染与HBV有关的个体。

拉米夫定(lamivudine)(β-L-2’，3’-双脱氧-3’-硫胞苷，3TC)是合成的核苷，其表现出治疗HIV和HBV感染的有效性。参见Liotta等人的U.S.专利5,539,116。已知在治疗期间拉米夫定引起HBV复制的持续抑制(Nevens，F.等人. Gastroenterology 1997，113，1258-1263)。然而，在慢性丁型肝炎患者中，拉米夫定不能改善疾病活动或降低HDV-RNA水平(Lau，D.T.等人. Hepatology 1999，30，546-9)。最近美国和几个其它国家批准了拉米夫定来治疗慢性HBV感染。用拉米夫定长期治疗慢性HBV载体导致血清中HBV的水平下降并改善了肝脏组织(Lai，C.L.等人. N Engl J Med 1998，339，61-8；Tyrrell，D.等人. Hepatology 1993，18，112A；Nevens，F.等人.Gastroenterology 1997，113，1258-63；Dienstag，J.L.等人. N Engl J Med 1995，333，1657-61)。尽管对HBV有显著效果，但是用拉米夫定治疗慢性感染HBV和HDV的患者对于HDV的循环水平具有很小的效果；更重要的是，即使抑制了HBV水平，对于疾病活动也没有任何改善(Honkoop，P.等人. Hepatology 1997，24(Suppl)，1219(Abstract)；Lau，D.T.等人. Hepatology 1999，30，546-9)。

已经尝试了其它类型治疗。例如，苏拉明(suramin)在体外阻断病毒体进入肝细胞，但是由于其毒性太强而不能长期用于人(Smedile，A.等人. Prog Liver Dis 1994，12，157-75)。阿昔洛韦在体外增强了HDV复制(Smedile，A.等人. Prog Liver Dis 1994，12，157-75)。利巴韦林不能显著影响病毒或生化参数，并具有严重的副作用(Smedile，A.等人. Prog Liver Dis 1994，12，157-75)。胸腺素的合成类似物在HDV感染的治疗中也没有效果(Smedile，A.等人.Prog Liver Dis 1994，12，157-75)。

上述HDV感染治疗通常都不是有效的。

因为土拨鼠肝炎病毒(WHV)与HBV非常相关(约85％的核酸同源性)，其已经在其天然宿主东方土拨鼠(M.monax)中广泛用作HBV感染和疾病的模型(Gerin，J.L. Gastroenterol Jpn 1990，25 Supp，38-42；Tennant，B.C.等人. Viral Hepatitis and Liver Disease1988，462-464)。在实验上感染的土拨鼠还广泛用于分析和开发抗HBV治疗(Zahm，F.E.等人. Ital J Gastroenterol Hepatol 1998，30，510-6；Tennant，B.C.等人. Hepatology 1998，28，179-91；Mason，W.S.等人. Virology 1998，245，18-32；Korba，B.E.等人.Hepatology 1996，23，958-63；Hurwitz，S.等人. Antimicrob Agents Chemother 1998，42，2804-2809；Block，T.M.等人. Nat Med1998，4，610-4；Cullen，J.M.等人. Antimicrob Agents Chemother1997，41，2076-82；Fourel，G.等人. Nature 1990，347，294-8；Gangemi，J.等人. Antivir Therap 1997，1，64-70；Genovesi，E.V.等人. Antimicrob Agents Chemother 1998，42，3209-17；Korba，B.E.等人. Antiviral Res 2000，45，19-32；Cote，P.J.等人.Hepatology 2000，31，190-200；Korba，B.E.等人. Antiviral Therapy 2000，5(2)，95-104；Korba，B.E.等人. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 2000，44(6)，1757-60；Korba，B.E.等人. Antimicrobial Agents and Chemotherapy 2000，44(7)，1964-1969)。用于在实验上治疗土拨鼠慢性WHV感染的几种抗HBV剂(araAMP、利巴韦林、AZT、ACV、3TC、famciclovir、FTC)的效力与在临床试验中施用给HBV患者的这些活性剂的效力精确地平行。在用抗HBV剂治疗的感染WHV的土拨鼠和感染HBV的人中观察到了类似疗效，这证实了土拨鼠动物模型可预测在人中的抗HBV治疗(Zahm，F.E.等人. Ital J Gastroenterol Hepatol 1998，30，510-6；Tennant，B.C.等人. Hepatology 1998，28，179-91；Mason，W.S.等人.Virology 1998，245，18-32；Hurwitz，S.J.等人. Antimicrob Agents Chemother 1998，42(11)，2804-2809；Fourel，G.等人.Nature 1990，347，294-8；Gangemi，J.等人. Antivir Therap 1997，1，64-70；Genovesi，E.V.等人. Antimicrob Agents Chemother 1998，42，3209-17；Korba，B.E.等人. Antiviral Res 2000，45(1)，19-32；Korba，B.E.等人. Hepatology 2000，32(4 Pt 1)，807-817；Korba，B.E.等人. Hepatology 2000，31(5)，1165-1175；Korba，B.E.等人. Antiviral Therapy 2000，5(2)，95-104)。象HBV一样，WHV可支持HDV颗粒形成和感染，并且东方土拨鼠已经是HDV感染的有用模型(Negro，F.等人. J Virol 1989，63，1612-8；Parana，R.，Gerard，F.，Lesbordes，J.L.，Pichoud，C.，Vitvitski，L.，Lyra，L.G.&Trepo，C.J Hepatol 1995，22，468-73；Ciccaglione，A.R.等人. Arch Virol 1993，Suppl 8，15-21；Bergmann，K.F.等人.JImmunol 1989，143，3714-21；Ponzetto，A.等人. Proc Natl Acad Sci USA 1984，81，2208-12；Ponzetto，A.等人. Prog Clin Biol Res 1987，234，37-46)。

HDV对其辅助病毒HBV的依赖性可能启发人们，成功地治疗支持性HBV感染将成功地治疗HDV感染，虽然最近用药物拉米夫定获得的结果表明并不是这样的(Glaxo-Wellcome，Inc.)(Honkoop，P.等人.Hepatology 1997，24(Suppl)，1219(摘要)；Lau，D.T.等人.Hepatology 1999，30，546-9)。拉米夫定在感染HBV-HDV的患者中对疾病缺乏疗效这一事实着重强调了在这样的患者中HDV在疾病严重性中的直接作用。虽然拉米夫定抑制HBV和WHV复制，但是其不影响病毒表面抗原的生成(Lau，D.T.等人. Hepatology 1999，30，546-9；Doong，S.L.等人. Proc Natl Acad Sci USA 1991，88，8495-9；Korba，B.E.等人. Hepatology 2000，32(4 Pt 1)，807-817；Korba，B.E.等人. Hepatology 2000，31(5)，1165-1175)。HBV和该家族的其它代表性病毒(例如WHV)的生命循环是独特的，其独特之处在于病毒复制基因组拷贝和生成病毒蛋白(例如HBV或WHV表面抗原)的过程是差别控制的(Ganem，D.Hepadnaviridae，″FieldsVirology″，Fields BN，Knipe DM，Howley P，ed.Lippincott-Raven1996 Philadelphia，2703-2737)。因此，以病毒聚合酶为靶目标的抗病毒剂例如合成核苷(例如拉米夫定)可显著抑制HBV复制(例如通过病毒血症减轻测量的)，但是不影响病毒mRNA或病毒蛋白生成(例如通过血浆或血清中HBV表面的水平测量的)。因为通过表面抗原蛋白形成病毒包膜是唯一对HDV重要的HBV和WHY功能，所以不能抑制HBsAg生成可能是拉米夫定不能影响HDV复制和疾病的原因。

U.S.专利5,747,044公开了可用作疫苗的重组生成的致免疫HDV多肽。

Chiron的U.S.专利5,932,219公开了丁型肝炎病毒的完整基因组，完整HDV基因组的家族cDNA复制物，并指出这些cDNA序列的部分可用作探针来诊断病毒在临床样本中的存在。该专利还公开了用于生成疫苗的由cDNA编码的蛋白。特别是该专利公开了掺入p24和p27病毒多肽的丁型肝炎的疫苗。Chiron的U.S.专利5,750,350要求保护可用于分析丁型肝炎病毒的试剂盒，其中包含HDV基因组的ORF5编码的多肽。U.S.专利5,747,044要求保护增加抗HDV的抗体的重组生成的致免疫颗粒，所述颗粒包括由HDV核苷酸序列的ORF5编码的致免疫多肽或其补体。

Medeva Holdings B.V.的U.S.专利6,020,167公开了治疗慢性肝炎、特别是乙肝的方法，包括施用含有HBsAg的组合物。

U.S.专利5,770,584公开了治疗肝炎病毒感染的方法，包括施用烷基脂质或烷基脂质衍生物。

U.S.专利4,619,896公开了解掩蔽动物血液中的δ抗原的方法，包括用表面活性剂和任选抗体-抗原分离剂处理血清。使用血液衍生的δ抗原作为诊断剂来检测和测定丁型肝炎病毒的不同类型抗体。

美国法定发明登记H1,345公开了通过施用蛋白-异戊二烯基转移酶抑制剂来预防或治疗肝炎病毒的方法。

Sureau，等人.“用直接抗乙肝病毒Pre-S抗原的抗体在体外生成传染性丁型肝炎病毒和中和”， Journal of Virology 1992，1241-1245公开了在体外生成的HDV颗粒是传染性的，并且(i)传染性颗粒包被着含有pre-S1和pre-S2区域的HBV包膜蛋白，(ii)HBV包膜蛋白的pre-S1和pre-S2域的表位在HDV颗粒表面上暴露，和(iii)直接抗这些表位的抗体具有抗HDV的中和活性。

最近，据报道L-FMAU是慢性感染动物中的HDV的有效抑制剂(Casey，J.L.等人.， Antiviral Therapy 2000，5(Suppl.1)，32，摘要057)。

合成核苷β-L-2’-脱氧胞苷(β-L-2’-dC)、β-L-2’-脱氧胸苷(β-L-dT)和β-L-2’-脱氧腺苷(β-L-2’-dA)也是本领域已知的。Antonin Holy在1972年首先公开了β-L-dC和β-L-dT，“核酸组分及其类似物.CLIII.制备嘧啶系列2’-脱氧-L-核糖基核苷”， Collect Czech Chem Commun1972，37(12)，4072-87。Morris S.Zedeck等人.首先公开了用于抑制睾丸酮假单胞菌(Pseudomonas testosteroni)中的诱导酶合成的β-L-dA( Mol Phys 1967，3(4)，386-95)。

已知一些2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷具有抗肿瘤和选择的抗病毒活性。Verri等人公开了2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷作为抗肿瘤剂和抗疱疹剂的应用( Mol Pharmacol 1997，51(1)，132-138和Biochem J 1997，328(1)，317-20)。Saneyoshi等人证实了2’-脱氧-L-核糖基核苷作为控制逆转录病毒和治疗AIDS的逆转录酶(I)抑制剂的应用，Japanese Kokai Tokyo Koho JP 06293645(1994)。

Giovanni等人测试了2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷抗部分假狂犬病病毒(PRV)的活性( Biochem J 1993，294(2)，381-5)。

已有人研究了2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷的化疗应用，见Tyrsted等人. Biochem Biophys Acta 1968，155(2)，619-22和Bloch，等人. J Med Chem 1967，10(5)，908-12。

在本领域中已知β-L-2’-脱氧胸苷(β-L-dT)能抑制1型单纯性疱疹病毒(HSV-1)胸苷激酶(TK)。Iotti等人在WO 92/08727中指出，β-L-dT选择性地抑制HSV-1 TK将D-胸苷磷酸化，但不抑制人TK将D-胸苷磷酸化。Spaldari等人报道，L-胸苷被1型单纯性疱疹病毒胸苷激酶磷酸化，并抑制病毒生长， J Med Chem 1992，35(22)，4214-20。

最近本领域已公开了合成核苷β-L-2’-脱氧胞苷(β-L-2’-dC)、β-L-2’-脱氧胸苷(β-L-dT)、β-L-2’-脱氧肌苷(β-L-dI)和β-L-2’-脱氧腺苷(β-L-2′-dA)可用于治疗乙肝病毒。Gilles Gosselin等人在WO00/09531(PCT/US99/18149)中公开了β-L-dT、β-L-dA、β-L-dC和β-L-dI及其可药用盐和其前药在治疗乙肝病毒中的应用。

Georgetown University，Cornell University和theUniversity of Georgia Research Foundation，Inc.的PCT/US01/09987描述了施用能够实质性地降低宿主中乙肝表面抗原(在下文中称为HBsAg)水平的核苷或核苷类似物可用于治疗该宿主中的丁型肝炎病毒感染。PCT/US01/09987在一个实施方案中描述了2′-氟-5-甲基-β-L-阿拉伯呋喃糖基尿苷(L-FMAU)可显著降低乙肝表面抗原水平，并因此可用于治疗丁型肝炎感染。

由于有大量人口感染了丁型肝炎病毒，丁型肝炎病毒对个人有毁灭性的影响，并且缺乏有效的治疗，所以非常需要新的且有效的丁型肝炎病毒感染治疗。

因此，本发明的目的是提供治疗感染丁型肝炎病毒的宿主包括人的方法。

发明概述

本发明公开了治疗人和其它宿主中丁型肝炎感染的方法，包括施用有效量的生物活性2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷(下文中称为β-L-d-核苷或β-L-2’-d-核苷)或其可药用盐或前药，所述活性剂单独给药或联合给药，并任选在可药用载体中给药。在本说明书中所用的术语2’-脱氧是指核苷在2’-位上没有任何取代基。

所公开的2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷或其可药用前药或盐或含有这些化合物的可药用制剂可用于预防和治疗丁型肝炎感染和其它相关病症例如HDV引起的慢性肝脏炎症、肝硬变、急性肝炎、暴发性肝炎、慢性持久性肝炎、和疲劳。这些化合物或制剂还可预防性地使用以预防或延迟感染了HDV或已受到HDV影响的个体中的临床疾病进程。

在一个本发明实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物是下式化合物

其中R¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯(monophosphate)、二磷酸酯(diphosphate)、三磷酸酯(triphosphate)、或磷酸酯衍生物(phosphate derivative)；且BASE是可任选被取代的嘌呤或嘧啶碱基。

在另一本发明实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物是下式所示β-L-2’-脱氧嘌呤或其可药用盐或前药：

其中R¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物；Y是OR³、NR³R⁴或SR³；且X¹和X²独立地选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、卤素、OR⁵、NR⁵NR⁶或SR⁵；且R³、R⁴、R⁵和R⁶独立地为H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物。

在一个特别的实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物是下式所示β-L-2’-脱氧腺苷或其可药用盐或前药：其中R¹是H、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、酰基、烷基、或稳定的磷酸酯衍生物(以形成稳定的核苷酸前药)。

在优选的实施方案中，R¹是H。

在另一特别的实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物是下式所示β-L-2’-脱氧鸟苷或其可药用盐或前药：其中R¹是H、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、酰基、烷基、或稳定的磷酸酯衍生物(以形成稳定的核苷酸前药)。

在另一特别的实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物是下式所示β-L-2’-脱氧肌苷或其可药用盐或前药：其中R¹是H、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、酰基、烷基、或稳定的磷酸酯衍生物(以形成稳定的核苷酸前药)。

在另一本发明实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物是下式所示β-L-2’-脱氧嘧啶或其可药用盐或前药：

其中R¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物；Y是OR³、NR³R⁴或SR³；且X¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、卤素、OR⁵、NR⁵NR⁶或SR⁵；且R³、R⁴、R⁵和R⁶独立地为H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物。

在一个特别的实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物是下式所示β-L-2’-脱氧胞苷或其可药用盐或前药：

其中R¹是H、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、酰基、烷基、或稳定的磷酸酯衍生物(以形成稳定的核苷酸前药)。

在优选的实施方案中，R¹是H。

在另一实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物是下式所示β-L-2’-脱氧尿苷或其可药用盐或前药：其中R¹是H、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、酰基、烷基、或稳定的磷酸酯衍生物(以形成稳定的核苷酸前药)。

在另一实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物是下式所示β-L-胸苷或其可药用盐或前药：其中R¹是H、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、酰基、烷基、或稳定的磷酸酯衍生物(以形成稳定的核苷酸前药)。

在优选的实施方案中，R¹是H。

在另一实施方案中，将2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷、其可药用盐或前药交替给药，或者与一种或多种其它2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷、其可药用盐或前药、或一种或多种表现出抗丁型肝炎病毒活性的其它化合物联合给药。一般情况下，在交替治疗期间，是连续地施用有效剂量的每种治疗剂，而在联合治疗中，是一起施用有效剂量的两种或更多种治疗剂。剂量将取决于药物的吸收、失活和排泄速度以及本领域技术人员已知的其它因素。应当注意，剂量将随着所治疗的病症的严重程度而变。还应当理解，对于任何特定个体，应当依据个体需要和施用或监控施用组合物的人的职业判断来随着时间的延长调节具体给药剂量方案和时间。

在另一实施方案中，本发明包括治疗感染HDV的人的方法，包括施用HDV治疗量的所公开的2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物的前药。本文所用的前药是指给药后在体内转化成核苷的化合物。非限制性实例包括活性化合物的可药用盐(或称为“生理可接受盐”)、5′，N⁴(胞苷)和/或N⁶(腺苷)酰化或烷基化衍生物，活性化合物的5’-磷脂和/或5’-醚脂质。

在优选的实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷呈可药用前药的形式，其中5’-羟基被氨基酸酰化。在更优选的实施方案中，所述氨基酸是缬氨酸。

附图简述

附图1图解说明了使用L-核糖或L-木糖作为原料获得β-L-赤-呋喃戊糖核苷(β-L-dN)的一般方法。

附图2图解说明了使用L-核糖作为原料合成L-脱氧腺苷的非限制性实例。

附图3图解说明了使用L-阿拉伯糖作为原料合成β-L-dC(3a)和β-L-dT(3b)的非限制性实例。

附图4是表明依据累积和衰退的L-dA、L-dC和L-dT在人HepG2细胞中的代谢的图。将细胞用10μM化合物培养。

附图5是表明β-L-dA、β-L-dT和β-L-dC在土拨鼠慢性肝炎模型中的抗病毒作用的图。

发明详述

其中R¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物；且BASE是可任选被取代的嘌呤或嘧啶碱基。

在优选的实施方案中，R¹是H。

在另一特别的实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物是下式所示β-L-2’-脱氧鸟苷或其可药用盐或前药：

在另一特别的实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物是下式所示β-L-2’-脱氧肌苷或其可药用盐或前药：

其中R¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物；Y是OR³、NR³R⁴或SR³；且X¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO一芳基、CO-烷氧基烷基、卤素、OR⁵、NR⁵NR⁶或SR⁵；且R³、R⁴、R⁵和R⁶独立地为H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物。

在优选的实施方案中，R¹是H。

在另一实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物是下式所示β-L-2’-脱氧尿苷或其可药用盐或前药：

在另一实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物是下式所示β-L-胸苷或其可药用盐或前药：

在优选的实施方案中，R¹是H。

在另一实施方案中，将2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷、其可药用盐或前药交替给药，或者与一种或多种其它2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷、其可药用盐或前药、或一种或多种表现出抗丁型肝炎病毒活性的其它化合物联合给药。一般情况下，在交替治疗期间，是逐次地施用有效剂量的每种治疗剂，而在联合治疗中，是一起施用有效剂量的两种或更多种治疗剂。剂量将取决于药物的吸收、失活和排泄速度以及本领域技术人员已知的其它因素。应当注意，剂量将随着所治疗的病症的严重程度而变。还应当理解，对于任何特定个体，应当依据个体需要和施用或监控施用组合物的人的职业判断来随着时间的延长调节具体给药剂量方案和时间。

在优选的实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷呈可药用前药的形式，其中5’-羟基被氨基酸酰化。在更优选的实施方案中，所述氨基酸是缬氨酸。立体化学

如下所示，核苷含有至少两个决定性的手性碳原子(*)。一般情况下，相对于糖环系，核苷手性碳上的取代基[具体的嘌呤或嘧啶碱基(当使用糖环中间体编号方式时，称为C1取代基)和CH₂OH(称为C4取代基)]可以是顺式(在同一侧)或反式(在相反侧)。顺式和反式外消旋体都是由一对旋光异构体组成的。因此，每一化合物具有4种单独的立体异构体。这4种立体异构体由下列构型代表(当糖部分以水平面定向例如-O-部分在后面时)：(1)两个基团都“在上面”的顺式，称为β-D；(2)镜像，即两个基团都“在下面”的顺式，称为β-L；(3)其中C4取代基“在上面”、C1取代基“在下面”的反式(称为α-D)；和(4)其中C4取代基“在下面”、C1取代基“在上面”的反式(称为α-L)。在一起的两种顺式对映体称为β-对映体的外消旋混合物，两种反式对映体称为α-对映体的外消旋混合物。

本发明化合物的4种可能的立体异构体如下所示

顺式(β)反式(α)定义

本文所用术语“基本上呈一种单独的异构体形式”是指至少约95％、优选至少98％或99％的2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷呈所指出的立体构型。在优选的实施方案中，活性化合物以至少该纯度水平施用给需要治疗的宿主。

本文所用术语丁型肝炎和相关病症是指丁型肝炎感染、与HDV有关的慢性肝脏炎症、肝硬变、急性肝炎、暴发性肝炎、慢性持久性肝炎、和疲劳。本发明方法包括使用2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物、其可药用盐或前药来预防性地预防或延迟感染了或已经受到HBV影响的个体中的临床疾病进展。

除非另有说明，否则本文所用术语烷基是指饱和直链、支链或环状伯、仲、或叔烃基，一般是C₁-C₁₈烃基、优选C₁-C₆烃基，并具体包括但不限于甲基、三氟甲基、乙基、丙基、丁基、戊基、己基、异丙基、异丁基、仲丁基、叔丁基、异戊基、戊基、叔戊基、环戊基、和环己基。烷基可任选被一个或多个选自下列的基团取代：羟基、氨基、烷基氨基、芳基氨基、烷氧基、芳氧基、硝基、氰基、磺酸、硫酸酯(sulfate)、膦酸、磷酸酯(phosphate)、或膦酸酯(phosphonate)，所述基团是未保护或按照需要保护的，这样的保护是本领域技术人员已知的，例如参见Greene，等人.，“有机合成中的保护基，”John Wiley and Sons，第二版，1991，引入本发明以作参考。

本文所用术语酰基是指式-C(O)R’基团，其中R’是烷基、芳基、烷芳基、芳烷基、杂芳基、烷氧基烷基(包括甲氧基甲基)、芳基烷基(包括苄基)、芳氧基烷基(例如苯氧基甲基)或芳基(包括苯基)，所述基团可任选被下列基团取代：卤素、C₁-C₄烷基或C₁-C₄烷氧基，或者是氨基酸残基。术语酰基具体包括但不限于乙酰基、丙酰基、丁酰基、戊酰基、3-甲基丁酰基、琥珀酸氢酯(hydrogen succinate)、3-氯苯甲酸酯(3-chlorobenzoate)、苯甲酰基、乙酰基、新戊酰基、甲磺酸酯(mesylate)、丙酰基、戊酰基、己酰基、辛酰基、癸酰基、月桂酰基、肉豆蔻酰基、棕榈酰基、硬脂酰基、和油酰基，并且还可以是氨基酸残基。

本文所用术语嘌呤或嘧啶碱基包括但不限于：腺嘌呤、N⁶-烷基嘌呤、N⁶-酰基嘌呤(其中酰基是C(O)(烷基、芳基、烷基芳基、或芳基烷基)、N⁶-苄基嘌呤、N⁶-卤代嘌呤、N⁶-乙烯基嘌呤、N⁶-炔基(acetylenic)嘌呤、N⁶-酰基嘌呤、N⁶-羟基烷基嘌呤、N⁶-硫烷基(thioalkyl)嘌呤、N²-烷基嘌呤、N²-烷基-6-硫代嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、5-氟胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、6-氮杂嘧啶，包括6-氮杂胞嘧啶，2-和/或4-巯基嘧啶、尿嘧啶、5-卤代尿嘧啶，包括5-氟尿嘧啶，C⁵-烷基嘧啶、C⁵-苄基嘧啶、C⁵-卤代嘧啶、C⁵-乙烯基嘧啶、C⁵-炔基嘧啶、C⁵-酰基嘧啶、C⁵-羟基烷基嘌呤、C⁵-酰氨基嘧啶、C⁵-氰基嘧啶、C⁵-硝基嘧啶、C⁵-氨基嘧啶、N²-烷基嘌呤、N²-烷基-6-硫代嘌呤、5-氮杂胞苷基、5-氮杂尿嘧啶基、三唑并吡啶基、咪唑并吡啶基、吡咯并嘧啶基、和吡唑并嘧啶基。

碱基的实例包括胞嘧啶、5-氟胞嘧啶、5-溴胞嘧啶、5-碘胞嘧啶、5-氯胞嘧啶、尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-碘尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、胸腺嘧啶、腺嘌呤、鸟嘌呤、肌苷、黄嘌呤、2，6-二氨基嘌呤、6-氨基嘌呤、6-氯嘌呤和2，6-二氯嘌呤、6-溴嘌呤、2，6-二溴嘌呤、6-碘嘌呤、2，6-二碘嘌呤、次黄嘌呤、2-(Br、F、Cl或I)-嘌呤，所述碱基任选被包括氨基或羰基在内的取代基在6-位上取代，和6-(Br、Cl、或I)-嘌呤，所述碱基任选被包括氨基或羰基在内的取代基在2-位上取代，5-溴乙烯基胞嘧啶、5-溴乙烯基尿嘧啶、5-溴乙烯基胞嘧啶、5-溴乙烯基尿嘧啶、5-三氟甲基胞嘧啶、和5-三氟甲基尿嘧啶。

本文所用术语前药是指给药后在体内转化成核苷的化合物。非限制性实例包括活性化合物的可药用盐(或称为“生理可接受盐”)、5′和/或N⁴或N⁶酰化或烷基化衍生物，活性化合物的5’-磷脂和/或5’-醚脂质衍生物。

本文所用术语宿主是指病毒可在其中复制的单细胞或多细胞生物体，包括细胞系和动物，优选人。或者，宿主可携带丁型肝炎病毒基因组，本发明化合物可改变其复制或功能。术语宿主特定地指感染的细胞，用所有或部分HDV基因组转染的细胞，和动物，特别是灵长目动物(包括黑猩猩)和人。在本发明的大多数动物应用中，宿主是人患者。然而，在一些适应征中，通过本发明可清楚地预期兽医应用(例如黑猩猩)。可药用盐和前药

本文所用术语可药用盐或复合物是指保留期望的母体化合物的生物活性并表现出(如果有的话)最小不利毒性作用的2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷的盐或复合物。这样的盐的非限制性实例是(a)与无机酸(例如盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、硝酸等)形成的酸加成盐，和与有机酸形成的盐，所述有机酸是例如乙酸、草酸、酒石酸、琥珀酸、苹果酸、抗坏血酸、苯甲酸、鞣酸、palmoicacid、藻酸、聚谷氨酸、萘磺酸、萘二磺酸和聚半乳糖醛酸；(b)与阳离子例如钠、钾、锌、钙、铋、钡、镁、铝、铜、钴、镍、镉、钠、钾等形成的碱加成盐，或与由N，N-二苄基乙二胺、铵、或乙二胺形成的有机阳离子形成的碱加成盐；或(c)(a)和(b)的组合；例如鞣酸锌盐等。

2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷可作为如在下述文献中公开的5’-磷脂或5’-醚脂质提供：Kucera，L.S.；Lyer，N.；Leake，E.；Raben，A.；Modest，E.J.；D.L.W.；和Piantadosi，C.“抑制传染性HIV-1生成和引起缺陷病毒形成的新的膜相互作用醚脂质类似物”， AIDS Res Hum Retroviruses，1990，6，491-501；Piantadosi，C.，J.MarascoC.J.，S.L.Morris-Natschke，K.L.Meyer，F.Gumus，J.R.Surles，K.S.Ishaq，L.S.Kucera，N.Lyer，C.A.Wallen，S.Piantadosi，和E.J.Modest“合成与评价具有抗-HIV活性的新的醚脂质核苷缀合物”， J Med Chem，1991，34，1408-1414；Hostetler，K.Y.；Richman，D.D.；Carson，D.A.；Stuhmiller，L.M.；vanWijk，G.M.T.；和van den Bosch，H.“31-脱氧胸苷二磷酸酯二肉豆蔻酰基甘油—一种31-脱氧胸苷的脂质前药在CEM和HT4-6C细胞中显著增强抑制1型人免疫缺陷病毒复制”， Antimicrob Agents Chemother 1992，36，2025-2029；Hostetler，K.Y.，Stuhmiller，L.M.；Lenting，H.B.；van den Bosch，H.；和Richman，D.D.“叠氮胸苷和其它抗病毒核苷的磷脂类似物的合成以及抗逆转录病毒活性”，J Biol Chem，1990，265，6112-7。

可通过与合适的酯化剂例如酰卤或酸酐反应将2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷转化成可药用酯。可以以常规方法例如通过用合适的碱或酸处理来将核苷或其可药用前药转化成其可药用盐。可通过例如水解将酯或盐转化成母核苷。

将活性化合物具体在N⁴，N⁶和5’-O位修饰可影响活性化合物的生物利用度和代谢速度，由此提供控制活性物质的释放。

本发明的优选实施方案是治疗人或其它宿主动物中的HDV感染的方法，包括施用有效量的一种或多种选自下列的2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物：β-L-2’-脱氧腺苷、β-L-2’-脱氧胞苷、β-L-2’-脱氧尿苷、β-L-2’-鸟苷、β-L-2’-脱氧肌苷、和β-L-2’-脱氧胸苷，或其生理可接受前药，包括磷酸酯，5’和/或N⁴或N⁶烷基化或酰化衍生物，或其生理所接受的盐，并任选在可药用载体中施用所述化合物。本发明化合物具有直接的抗HDV活性，或者代谢成表现出抗HDV活性的化合物。在优选的实施方案中，2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷基本上以单独的异构体形式，即至少有约95％呈所指出的立体构型的形式给药。

任何本文所描述的核苷可作为稳定的前药施用，以提高活性、生物利用度、稳定性或改变核苷的其它性质。有多种核苷酸前药配体是已知的。一般情况下，将核苷的一磷酸酯、二磷酸酯或三磷酸酯进行烷基化、酰化或其它亲脂性修饰可提高核苷酸的稳定性。可代替磷酸酯部分上的一个或多个氢的取代基的实例是烷基、芳基、甾族化合物、碳水化合物(包括糖)、1，2-二酰基甘油和醇。其中有很多是描述在R.Jones和N.Bischofberger， -Antiviral Research，1995，27，1-17中。它们都可以与本发明所公开的核苷联合使用来达到所期望的效果。

在一个实施方案中，提供了作为5’-羟基亲脂性前药的2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷。公开了可共价引入到核苷中、优选引入到核苷的5’-OH上的适宜的亲脂性取代基或亲脂性制备物的U.S.专利的非限制性实例包括U.S.专利5,149,794(1992年9月22日，Yatvin等人.)；5,194,654(1993年3月16日，Hostetler等人.，5,223,263(1993年6月29日，Hostetler等人.)；5,256,641(1993年10月26日，Yatvin等人.)；5,411,947(1995年5月2日，Hostetler等人.)；5,463,092(1995年10月31日，Hostetler等人.)；5,543,389(1996年8月6日，Yatvin等人.)；5,543,390(1996年8月6日，Yatvin等人.)；5,543,391(1996年8月6日，Yatvin等人.)；和5,554,728(1996年9月10日；Basava等人.)。

公开了可连接到本发明2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物上的亲脂性取代基或亲脂性制备物的国外专利申请包括WO 89/02733、WO 90/00555、WO 91/16920、WO 91/18914、WO 93/00910、WO 94/26273、WO 96/15132、EP 0350287、EP 93917054.4、和WO 91/19721。

2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷的其它非限制性实例是含有如在下列出版物中描述的取代基的那些。这些衍生化的2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷可用于本文中所述的适应症，或用作抗病毒剂，包括抗HBV剂(Ho，D.H.W.“1β-D-呋喃阿拉伯糖胞嘧啶的激酶和脱氨基酶在人和小鼠组织中的分布”， Cancer Res 1973，33，2816-2820；Holy，A.“同极性磷修饰的核苷酸类似物”，Advances in Antiviral DrugDesign，De Clercq(Ed.)，JAI Press：1993，Vol.I，179-231；Hong，C.I.，Nechaev，A.，和West，C.R.“皮质醇和可的松的1β-D-呋喃阿拉伯糖胞嘧啶缀合物的合成和抗肿瘤活性”， Biochem Biophys Rs Commun，1979a，88，1223-1229；Hong，C.I.，Nechaev，A.，Kirisits，A.J.Buchheit，D.J.和West，C.R.“作为可能的抗肿瘤剂的核苷缀合物。3.皮质类固醇和所选的亲脂性醇的1-(β-D-呋喃阿拉伯糖基)胞嘧啶缀合物的合成和抗肿瘤活性”， J Med Chem，1980，28，171-177；Hostetler，K.Y.，Stuhmiller，L.M.，Lenting，H.B.M.van den Bosch，H.和Richman，D.D.“叠氮基胸苷和其它抗病毒核苷的磷脂类似物的合成和抗逆转录病毒活性”， J Biol Chem，1990，265，6112-6117；Hostetler，K.Y.，Carson，D.A.和Richman，D.D.“磷脂酰基叠氮基胸苷：在CEM细胞中抗逆转录病毒的机制”， J Biol Chem，1991，266，11714-11717；Hostetler，K.Y.，Korba，B.Sridhar，C.，Gardener，M.“磷脂酰基二脱氧胞苷在感染乙肝的细胞中的抗病毒活性以及在小鼠中增强肝脏吸收”， Antiviral Res，1994a，24，59-67；Hostetler，KY.，Richman，D.D.，Sridhar，C.N.Felgner，P.L，Felgner，J.，Ricci，J.，Gardener，M.F.Selleseth，D.W.和Ellls，M.N.“磷脂酰基叠氮基胸苷和磷脂酰基-ddC：评价在小鼠淋巴组织中的摄取和在感染人免疫缺陷病毒的细胞中以及在感染rauscher白血病病毒的小鼠中的抗病毒活性”，Antimicrobial Agents Chemother 1994b，38，2792-2797；Hunston，R.N.，Jones，A.A.McGuigan，C.，Walker，R.T.，Balzarini，J.，和De Clercq，E.“衍生自2’-脱氧-5-氟尿苷的某些环磷酸三酯的合成和生物性质”， J Med Chem，1984，27，440-444；Ji，Y.H.，Moog，C.，Schmitt，G.，Bischoff，P.和Luu，B.“作为可能的抗肿瘤剂的7β-羟基胆固醇和嘧啶核苷的一磷酸二酯：合成和初步评价抗肿瘤活性”， J Med Chem，1990，33，2264-2270；Jones，A.S.，McGuigan，C.，Walker，R.T.，Balzarini，J.和DeClercq，E.“某些核苷环氨基磷酸酯的合成、性质和生物活性”， J Chem Soc Perkin Trans I，1984，1471-1474；Juodka，B.A.和Smart，J.“二核糖核苷—一种(P→N)氨基酸衍生物的合成”， Coll Czech Chem Comm，1974，39，363-968；Kataoka，S.，Imai，J.，Yama ji，N.，Kato，M.，Saito，M.，Kawada，T.和Imai，S.“烷基化cAMP衍生物；选择性合成和生物活性”， Nucleic Acids Res Sym Ser，1989，21，1-2；Kataoka，S.，Uchida，R.和Yama ji，N.“腺苷3′，5′环磷酸酯(cAMP)苄基和甲基三酯的方便合成”， Heterocycles，1991，32，1351-1356；Kinchington，D.，Harvey，J.J.，O′Connor，T.J.，Jones，B.C.N.M.，Devine，K.G.，Taylor-Robinson，D.，Jeffries，D.J.和McGuigan，C.“比较zidovudine氨基磷酸酯与二氨基磷酸酯衍生物在体外抗HIV和MuLV的抗病毒作用”， Antiviral Chem Chemother，1992，3，107-112；Kodama，K.，Morozumi，M.，Saitoh，K.I.，Kuninaka，H.，Yoshino，H.和Saneyoshi，M.“1-β-D-呋喃阿拉伯糖基胞嘧啶-5’-硬脂基磷酸酯—一种1-β-D-呋喃阿拉伯糖基胞嘧啶的口服活性衍生物的抗肿瘤活性和药理性质”， Jpn J Cancer Res，1989，80，679-685；Korty，M.和Engels，J.“腺苷和鸟苷3’，5’-磷酸苄酯对豚鼠心室心肌的作用”， Naunyn-Schmiedeberg′s Arch Pharmacol，1979，310，103-111；Kumar，A.，Goe，P.L.，Jones，A.S.Walker，R.T.Balzarini，J.和De Clercq，E.“某些环氨基磷酸酯核苷衍生物的合成和生物评价”， J Med Chem，1990，33，2368-2375；LeBec，C.，和Huynh-Dinh，T.“作为抗癌前药的5-氟尿苷和阿拉伯胞苷的亲脂性磷酸三酯的合成”， Tetrahedron Lett，1991，32，6553-6556；Lichtenstein，J.，Barner，H.D.和Cohen，S.S.“大肠杆菌外源性补充的核苷代谢”，J Biol Chem 1960，235，457-465；Lucthy，J.，Von Daeniken，A.，Friederich，J.Manthey，B.，Zweifel，J.，Schlatter，C.和Benn，M.H.“三种天然氰基环硫烷烃的合成和毒性特征”， Mitt Geg Lebensmittelunters Hyg1981，72，131-133( Chem Abstr，95，127093)；McGuigan，C.Tollerfield，S.M.和Riley，P.A.“抗病毒药物Ar a的某些磷酸三酯衍生物的合成和生物评价”， Nucleic Acids Res，1989，17，6065-6075；McGuigan，C.，Devine，K.G.，O′Connor，T.J.，Galpin，S.A.，Jeffries，D.J.和Kinchington，D.“作为抗HIV化合物的3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷(AZT)的新氨基磷酸酯衍生物的合成和评价”，Antiviral Chem Chemother，1990a，1，107-113；McGuigan，C.，O′Connor，T.J.，Nicholls，S.R.Nickson，C.and Kinchington，D.“某些新的AZT和ddCyd的取代的二烷基磷酸酯衍生物的合成和抗HIV活性”， Antiviral Chem Chemother，1990b，1，355-360；McGuigan，C.，Nicholls，S.R.，O′Connor，T.J.，和Kinchington，D.“作为可能的抗AIDS药物的3’-修饰的核苷的某些新的二烷基磷酸酯衍生物的合成”， Antiviral Chem Chemother，1990c，1，25-33；McGuigan，C.，Devine，K.G.，O′Connor，T.J.，和Kinchington，D.“3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷(AZT)的某些卤代氨基磷酸酯衍生物的合成和抗HIV活性；三氯乙基甲氧基丙氨酰基化合物的强效活性”，Antiviral Res，1991，15，255-263；McGuigan，C.，Pathirana，R.N.，Mahmood，N.，Devine，K.G.和Hay，A.J.“在抗AZT作用的细胞系中AZT的芳基磷酸酯衍生物保留抗HIV-1的活性”， Antiviral Res，1992，17，311-321；McGuigan，C.，Pathirana，R.N.，Choi，S.M.，Kinchington，D.和O′Connor，T.J.“作为HIV抑制剂的AZT的氨基磷酸酯衍生物；对羧基末端的研究”， Antiviral Chem Chemother，1993a，4，97-101；McGuigan，C.，Pathirana，R.N.，Balzarini，J.和De Clercq，E.“通过AZT的芳基磷酸酯衍生物来细胞内递送生物活性AZT核苷酸” J Med Chem，1993b，36，1048-1052。

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可制得基于本发明2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物的药物组合物，其中包含治疗丁型肝炎感染有效量的上述化合物或其盐或前药，并任选包含可药用添加剂、载体或赋形剂。治疗有效量可随着所治疗的感染或病症、其严重程度、所采用的治疗方案、所用治疗剂的药动学、以及所治疗的患者而变。

一方面，优选将本发明化合物与可药用载体混合来配制。一般情况下，优选将药物组合物以口服剂型给药，但是制剂可通过非胃肠道、静脉内、肌内、透皮、颊、皮下、栓剂或其它途径来给药。静脉内和肌内制剂优选在无菌盐水中给药。本领域技术人员可在说明书的教导内改进制剂，以提供适用于特定给药途径的多种制剂，同时不使得本发明组合物不稳定或损害其治疗活性。特别是修饰所需化合物以使其在水或其它载体中溶解度更高，例如可易于通过常规修饰(成盐、酯化等)来完成。

在一些药物剂型中，化合物的前药形式，尤其是包括酰化(乙酰化或其它)和其它衍生物，磷酸酯以及本发明化合物的各种盐形式是优选的。本领域普通技术人员应当认识到如何简单地将本发明化合物修饰成前药形式以促进活性化合物向宿主生物体或患者内的靶位点递送。本领域技术人员也能利用适用的前药形式的有利药动学参数，以将所需化合物递送到宿主生物体或患者内的靶位点上，最大发挥化合物在丁型肝炎感染治疗中的作用。

包含在本发明治疗活性制剂中的化合物的量是用于治疗感染或病症的有效量，—在优选的实施方案中是治疗丁型肝炎感染的有效量。一般情况下，本发明化合物在药物剂型中的治疗有效量通常为约0.1mg/kg-约100mg/kg或更多，其取决于所用的化合物、所治疗的病症或感染和给药途径。对于本发明目的，本发明组合物的预防有效量落在上述治疗有效量的相同范围内，并通常与治疗有效量相同。

活性化合物的给药可以为连续给药(静脉内滴注)到每天口服给药数次(例如Q.I.D.、B.I.D.等)不等，并可以包括口服、局部、非胃肠道、肌内、静脉内、皮下、透皮(可包含渗透促进剂)、颊和栓剂给药等其它给药途径。还可以使用肠溶包衣片剂来提高通过口服给药途径施用的化合物的生物利用度和稳定性。最有效的剂型将取决于所选的特定活性剂的药动学、以及患者疾病的严重程度。口服剂型是特别优选的，因为其易于给药以及可预见的患者能较好地配合。

为了制备本发明药物组合物，优选依据常规药物混合技术，将治疗有效量的一种或多种本发明化合物与可药用载体混合，以制得剂型。根据给药例如口服或非胃肠道给药所需的剂型，载体可呈多种不同的形式。在制备口服剂型的药物组合物时，可使用任何常用的药物介质。因此，对于液体口服制剂例如悬浮液、酏剂和溶液，可使用合适的载体和添加剂，包括水、二醇、油、醇，矫味剂、防腐剂、着色剂等。对于固体口服制剂例如粉剂、片剂、胶囊，和固体制剂例如栓剂，可使用合适的载体和添加剂，包括淀粉，糖载体例如葡萄糖、甘露醇、乳糖和相关载体，稀释剂、制粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等。如果需要的话，可通过标准技术将片剂或胶囊包上肠溶衣以达到缓释效果。使用这些剂型可显著影响化合物在患者中的生物利用度。

对于非胃肠道给药制剂，载体通常包含无菌水或氯化钠水溶液，也可以包含其它组分，包括促进分散的组分。当使用无菌水并维持无菌时，还必须将组合物和载体灭菌。还可以制备可注射的悬浮液，其中可使用合适的液体载体、悬浮剂等。

还可以通过生产可药用载体的常规方法制备脂质体悬浮液(包括靶向病毒抗原的脂质体)。对于递送游离核苷、酰基核苷、或本发明核苷化合物的磷酸酯前药形式，这可能是合适的。

在特别优选的本发明实施方案中，使用化合物和组合物来治疗、预防或延迟丁型肝炎感染发作。优选地，为了治疗、预防或延迟感染发作，口服剂型形式的组合物以约250微克-约1克或更多的量给药，每天给药至少1次或优选最高达4次。本发明化合物优选口服给药，但是可非胃肠道给药、局部给药或以栓剂的形式给药。

在一些情况下，由于其对宿主细胞的低毒性，本发明化合物可有利地用于预防丁型肝炎感染或预防与病毒感染有关的临床症状的发生。因此，本发明还包括预防性地治疗病毒感染、特别是丁型肝炎感染的方法。在本发明该方面，使用本发明组合物来预防或延迟丁型肝炎感染的发作。该预防方法包括给需要这样的治疗的患者或有发展成HDV疾病的危险性的患者施用减轻、预防或延迟病毒感染发作有效量的本发明化合物。在本发明预防性治疗中，对于患者，所用的抗病毒化合物应当是低毒性的或者优选没有毒性。在本发明该方面特别优选的是，所用的化合物应当最大限度有效地抗病毒，并对患者表现出最低毒性。可用于治疗这些疾病的本发明化合物可以作为预防活性剂以与治疗相同的剂量范围给药(即，对于口服剂型，约250微克-约1克或更多，每天给药1-4次)以预防丁型肝炎感染的增殖，或拖延自身在临床症状中表现出来的丁型肝炎感染的发作。

此外，本发明化合物可以与一种或多种抗病毒剂、抗HBV剂、抗HCV剂、抗HDV剂或抗疱疹病毒剂或干扰素、抗癌剂或抗菌剂，包括其它本发明化合物联合给药或交替给药。一些本发明化合物可通过减少代谢、异化作用或使其它化合物失效来有效地增强一些本发明活性剂的生物活性，因此可联合给药。联合治疗或交替治疗

已经认识到，用抗病毒剂长期治疗后，可出现肝炎病毒的抗药变种。由于乙肝病毒在丁型肝炎病毒的生命周期中的必需作用，具有抗乙肝病毒活性的化合物可以与本发明β-2’-L-脱氧核苷、其可药用盐或前药联合或交替给药。抗药性主要是由于编码用于病毒生命周期的酶，最经常是HBV、DNA聚合酶的基因发生突变所致。最近，已经证实了，通过联合或交替施用第二种、和也许第三种，诱导与主要药物所引起的突变不同的突变的抗病毒化合物，可延长、增强或恢复抗HBV感染药物的效力。或者，通过这样的联合或交替治疗可改变药物的药动学、生物分布、或其它参数。一般情况下，相对于交替治疗，联合治疗是优选的，因为其对病毒同时产生多种作用。

本发明提供的β-L-2’-dA、β-L-2’-dC、β-L-2’-dU、β-L-2’-dG、β-L-2’-dT、β-L-dI、或其它β-L-2’-核苷、或这些化合物的前药、磷酸酯或盐的抗丁型肝炎病毒活性可通过联合或交替施用两种或更多种这些核苷来得到加强。或者，例如，可将一种或多种本发明提供的β-L-2’-dA、β-L-2’-dC、β-L-2’-dU、β-L-2’-dG、β-L-2’-dT、β-L-dI、或其它β-L-2’-核苷与3TC、FTC、L-FMAU、DAPD、泛西洛维、喷西洛维、BMS-200475、bis pom PMEA(adefovir、dipivoxil)、lobucavir、更昔洛维、或利巴韦林联合或交替给药。

在本文所述的任何实施方案中，如果本发明β-L-2’-核苷与被磷酰化成活性形式的第二种核苷或非核苷聚合物酶抑制剂联合或交替给药，第二种化合物在体内优选被不同于磷酰化所选的本发明β-L-2’-核苷的酶磷酰化。激酶的实例有胸苷激酶、胞嘧啶激酶、鸟苷激酶、腺苷激酶、脱氧胞苷激酶、5’-核苷酸酶、和脱氧鸟苷激酶。制备活性化合物

本发明2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷衍生物是本领域已知的，并且可依据Holy， Collect Czech Chem Commun，1972，37(12)，4072-87和 Mol Phys，1967，3(4)，386-95中公开的方法制得。

附图1显示了使用L-核糖或L-木糖作为原料获得β-L-赤-呋喃戊糖核苷(β-L-dN)的一般方法。

本发明活性核苷的一磷酸酯、二磷酸酯和三磷酸酯衍生物可依据出版的方法制得。一磷酸酯可依据Imai等人.， J Org Chem，1969，34(6)，1547-1550的方法制得。二磷酸酯可依据Davisson等人.， J Org Chem，1987，52(9)，1794-1801的方法制得。三磷酸酯可依据Hoard等人.， J Am Chem Soc，1965，87(8)，1785-1788的方法制得。

实施例实验方案

熔点是在开口的毛细管中在Gallenkamp MFB-595-010M仪器上测定的，并且未校正。UV吸收光谱是在Uvikon 931(KONTRON)分光光度计上在乙醇中记录的。¹H-NMR光谱是在DMSO-d₆中用Bruker AC250或400光谱计于室温测定的。化学位移以ppm给出，将DMSO-d₅设定为2.49ppm作为参照。进行氘交换、去偶实验或2D-COSY以证实质子分配。信号多重态用s(单峰)、d(双峰)、dd(双双峰)、t(三重峰)、q(四重峰)、br(宽峰)、m(多重峰)代表。所有J-值都是以Hz给出。FAB质谱是以正-(FAB＞0)或负-(FAB＜0)离子模式在JEOLDX 300质谱仪上记录的。基质是3-硝基苄醇(NBA)或甘油与硫代甘油(GT)的混合物(50∶50，v/v)。比旋度是在Perkin-Elmer 241分光偏振计(通路长度为1cm)上测定的，并以10^-1°cm^-2g^-1为单位给出。元素分析是通过“Servicede Microanalyses du CNRS，Division deVernaison”(France)进行的。因素符号或函数指定的分析在±0.4％理论值内。薄层色谱是在预涂布的Silica Gel60F₂₅₄铝片(Merck，Art.5554)上进行的，产物的显形是通过UV吸光，然后用10％硫酸乙醇溶液炭化并加热来完成的。柱色谱法是用Silica Gel60(Merck，Art.9385)在常压进行的。实施例1 9-(3，5-二-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖基)腺嘌呤(3)

将9-(2-O-乙酰基-3，5-二-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖基)腺嘌呤2[参见：Gosselin，G.；Bergogne，M.-C.；Imbach，J.-L.“五种天然核酸碱基的β-L-呋喃木糖基核苷的合成和抗病毒评价”， Journal of Heterocyclic Chemistry.1993，30，1229-1233](8.30g，16.05mmol)和肼水合物98％(234mL，48.5mmol)在吡啶/冰醋酸混合物(4/1，v/v，170mL)内的溶液于室温搅拌22小时。通过加入丙酮(40mL)并继续搅拌1小时来中止反应。将该反应混合物的体积减至一半，用水(250mL)稀释，用氯仿萃取(2×150mL)。将有机层依次用饱和碳酸氢钠水溶液(3×100mL)和水(3×100mL)洗涤，干燥，过滤，浓缩，并与甲苯和甲醇共蒸发。通过硅胶柱色谱纯化残余物(0-3％MeOH在二氯甲烷中的混合物)，获得了3(5.2g，68％)，用二异丙基醚沉淀：

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ4.5-4.9(m，4H，H-2’，H-4’，H-5’和H-5”)，5.64(t，1H，H-3’，J_2’3’＝J_3’，4’＝3.5Hz)，6.3(br s，1H，OH-2’)，6.45(d，1H，H-1’，J_1’，2’＝4.6Hz)，7.3(br s，2H，NH₂-6)，7.4-7.9(m，10H，2苯甲酰基)，8.07和8.34(2s，2H，H-2和H-8)；ms：基质G/T，(FAB⁺)m/z 476[M+H]⁺，136[BH₂]⁺，(FAB^-)m/z 474[M-H]^-，134[B]^-；UV(95％乙醇)：λ_max 257nm(∈16400)，230nm(∈29300)，λmin 246nm(∈14800)；[α]_D ²⁰＝-64(c 1.07，CHCl₃).元素分析C₂₄H₂₁N₅O₄(M＝475.45)计算值：C，60.43；H，4.45；N，14.73.实测值：C，60.41；H，4.68；N，14.27.实施例2 9-(3，5-二-O-苯甲酰基-2-脱氧-β-L-苏-呋喃戊糖基)腺嘌呤(4)

向化合物3(1.00g，2.11mmol)在无水乙腈(65mL)内的溶液中加入4-(二甲基氨基)吡啶(0.77g，6.32mmol)和苯氧基硫代甲酰氯(0.44mL，3.16mmol)。将该混合物在室温搅拌2小时。浓缩后，将残余物溶解在二氯甲烷(50mL)中，并依次用水(2×30mL)、盐酸水溶液0.5N(30mL)和水(3×30mL)洗涤。将有机层干燥，过滤并浓缩至干。将该硫代羰基化中间体直接与三-(三甲基甲硅烷基)硅烷氢化物(0.78mL，5.23mmol)和α，α’-偶氮异丁腈(AIBN，0.112g，0.69mmol)在干燥的二氧杂环己烷(17mL)中回流2小时。真空除去溶剂，通过硅胶柱色谱纯化残余物(0-5％MeOH在二氯甲烷中的混合物)，获得了纯的4(0.93g，96％)，为泡沫状物：

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ2.9-3.1(m，2H，H-2’和H-2”)，4.6-4.7(m，3H，H-4’，H-5’和H-5”)，5.8(br s，1H，H-3’)，6.43(dd，1H，H-1’，J_1’，2’＝3.1Hz，J_1’，2”＝7.6Hz)，7.3(br s，2H，NH₂-6)，7.4-7.9(m，10H，2苯甲酰基)，8.05和8.33(2s，2H，H-2和H-8)；ms：基质G/T，(FAB⁺)m/z 460[M+H]⁺，325[S]⁺，136[BH₂]⁺，(FAB^-)m/z 458[M-H]^-，134[B]^-；UV(95％乙醇)：λ_max 261nm(∈14400)，231nm(∈26300)，λ_min 249nm(∈12000)；[α]_D ²⁰＝-38(c1.04，DMSO).实施例3 6-N-(4-一甲氧基三苯甲基)-9-(3，5-二-O-苯甲酰基-2-脱氧-β-L-苏-呋喃戊糖基)腺嘌呤(5)

向化合物4(0.88g，1.92mmol)在无水吡啶(40mL)内的溶液中加入4-一甲氧基三苯甲基氯(1.18g，3.84mmol)。将该混合物在60℃搅拌24小时。加入甲醇(5mL)后，将该溶液浓缩至干，将残余物溶解在二氯甲烷(50mL)中，并依次用水(30mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(30mL)和水(30mL)洗涤。将有机层干燥，过滤，浓缩，与甲苯共蒸发，获得了纯的5(1.01g，72％)，为泡沫状物：

¹H NMR(CDCl₃)：δ2.9-3.0(m，2H，H-2’和H-2”)，3.62(s，3H，OCH₃)，4.6-4.8(m，3H，H-4’，H-5’和H-5”)，5.85(pt，1H，H-3’)，6.44(dd，1H，H-1’，J_1’，2’＝3.1Hz，J_1’，2”＝7.3Hz)，6.9(br s，1H，NH-6)，6.7-6.8和7.2-7.4(2m，24H，2苯甲酰基和MMTr)，7.97和8.13(2s，2H，H-2 and H-8)；ms：基质G/T，(FAB⁺)m/z 732[M+H]⁺，(FAB^-)m/z 730[M-H]^-；UV(95％乙醇)：λ_max 274nm(∈12100)，225nm(∈24200)，λ_min 250nm(∈5900)；[α]_D ²⁰＝-16(c 1.12，DMSO).实施例4 6-N-(4-一甲氧基三苯甲基)-9-(2-脱氧-β-L-苏-呋喃戊糖基)腺嘌呤(6)

在室温将化合物5(0.95g，1.30mmol)用氨的甲醇溶液(40mL)(在-10℃饱和的)处理过夜。浓缩后，将残余物溶解在二氯甲烷(60mL)中，并用水(30mL)洗涤。将水层用二氯甲烷(10mL)萃取2次。将合并的有机层干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残余物(0-5％MeOH在二氯甲烷中的混合物)，获得了纯的6(0.67g，98％)，为泡沫状物：

¹H NMR(CDCl₃)：δ2.6-2.9(m，2H，H-2’和H-2”)，3.5(br s，1H，OH-5’)，3.55(s，3H，OCH₃)，3.9-4.0(m，3H，H-4’，H-5’和H-5”)，4.5-4.6(m，1H，H-3’)，6.03(dd，1H，H-1’，J_1’，2’＝4.0Hz，J_1’，2”＝8.8Hz)，7.0(br s，1H，NH-6)，6.7-6.8和7.1-7.4(2m，14H，MMTr)，7.40(d，1H，OH-3’，J_H，OH＝10.6Hz)，7.80和7.99(2s，2H，H-2和H-8)；ms：基质G/T，(FAB⁺)m/z 524[M+H]⁺，408[BH₂]⁺，(FAB^-)m/z 1045[2M-H]^-，522[M-H]^-，406[B]^-；UV(95％乙醇)：λ_max 275nm(∈12300)，λ_min 247nm(∈3600)；[α]_D ²⁰＝+28(c 0.94，DMSO).实施例5 6-N-(4-一甲氧基三苯甲基)-9-(2-脱氧-5-O-(4-一甲氧基三苯甲基)-β-L-苏-呋喃戊糖基)腺嘌呤(7)

在室温将在无水吡啶(25mL)中的化合物6(0.62g，1.24mmol)用4-一甲氧基三苯甲基氯(0.46g，1.49mmol)处理16小时。加入甲醇(5mL)后，将该混合物浓缩至干。将残余物溶解在二氯甲烷(60mL)中，并依次用水(40mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(40mL)和水(3×40mL)洗涤。将有机层干燥，过滤，浓缩。与甲苯和甲醇共蒸发。通过硅胶柱色谱纯化残余物(0-10％MeOH在二氯甲烷中的混合物)，获得了7(0.71g，72％)，为泡沫状物：

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ2.21(d，1H，H-2’J_2’，2”＝14.3Hz)，2.6-2.7(m，1H，H-2”)，3.1-3.3(2m，2H，H-5’和H-5”)，3.64和3.65(2s，6H，2xOCH₃)，4.1-4.2(m，1H，H-4’)，4.2-4.3(m，1H，H-3’)，5.68(d，1H，OH-3’，J_H，OH＝5.2Hz)，6.24(d，1H，H-1’，J_1’，2”＝7.0Hz)，6.7-6.8和7.1-7.3(2m，29H，2MMTr和NH-6)，7.83和8.21(2s，2H，H-2和H-8)；ms：基质G/T，(FAB⁺)m/z796[M+H]⁺，408[BH₂]⁺，(FAB^-)m/z794[M-H]^-，406[B]^-；UV(95％乙醇)：λ_max 275nm(∈30900)，λ_min 246nm(∈12800)；[α]_D ²⁰＝+14(c 1.03，DMSO).实施例6 6-N-(4-一甲氧基三苯甲基)-9-(3-O-苯甲酰基-2-脱氧-5-O-(4-一甲氧基三苯甲基)-β-L-赤-呋喃戊糖基)腺嘌呤(8)

将偶氮二甲酸二乙酯(0.38mL，2.49mmol)在无水四氢呋喃(20mL)中的溶液滴加到核苷7(0.66g，0.83mmol)、三苯基膦(0.66g，2.49mmol)和苯甲酸(0.30g，2.49mmol)在无水THF(20mL)内的冷(0℃)溶液中。将该混合物在室温搅拌18小时，并加入甲醇(1mL)。减压除去溶剂，通过硅胶柱色谱纯化粗产物(0-5％乙酸乙酯在二氯甲烷中的混合物)，获得了化合物8，其中含有少量三苯基膦氧化物。实施例7 6-N-(4-一甲氧基三苯甲基)-9-(2-脱氧-5-O-(4-一甲氧基三苯甲基)-β-L-赤-呋喃戊糖基)腺嘌呤(9)

在室温将化合物8用氨的甲醇溶液(20mL)(在-10℃饱和的)处理24小时，然后将该反应混合物浓缩至干。将残余物溶解在二氯甲烷(30mL)中，并用水(20mL)洗涤。用二氯甲烷(2×20mL)萃取水层，将合并的有机相干燥，过滤并浓缩。通过硅胶柱色谱纯化(0-2％MeOH在二氯甲烷中的混合物)，获得了纯的化合物9(0.50g，76％，按7计)，为泡沫状物：

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ2.2-2.3(m，1H，H-2’)，2.8-2.9(m，1H，H-2”)，3.1-3.2(m，2H，H-5’和H-5”)，3.64和3.65(2s，6H，2xOCH₃)，3.97(pq，1H，H-4’)，4.4-4.5(m，1H，H-3’)，5.36(d，1H，OH-3’，J_H，OH＝4.5Hz)，6.34(t，1H，H-1’，J_1’，2’＝J_1’，2”＝6.4Hz)，6.8-6.9和7.1-7.4(2m，29H，2MMTr和NH-6)，7.81和8.32(2s，2H，H-2和H-8)；ms：基质G/T，(FAB⁺)m/z 796[M+H]⁺，408[BH₂]⁺，(FAB^-)m/z 794[M-H]^-，406[B]^-；UV(95％乙醇)：λ_max 276nm(∈42600)，λ_min 248nm(∈23300)；[α]_D ²⁰＝+29(c 1.05，DMSO).实施例8 2’-脱氧-β-L-腺苷(β-L-dA)

在室温将化合物9(0.44g，0.56mmol)用80％乙酸水溶液(17mL)处理5小时。将该混合物浓缩至干，将残余物溶解在水(20mL)中，并用乙醚(2×15mL)洗涤。将水层浓缩，与甲苯和甲醇共蒸发。通过硅胶柱色谱纯化(0-12％MeOH在二氯甲烷中的混合物)，并经由MillexHV-4装置(0.45μ，微孔)过滤，获得了所需的2’-脱氧-β-L-腺苷(β-L-dA)(0.12g，83％)：mp193-194℃(从水中结晶)(Lit.对于L-对映体是184-185℃[参见：Robins，M.J.；Khwa ja，T.A.；Robins，R.K. J Org Chem 1970，35，636-639]，对于D-对映体是187-189℃[参见：Ness，R.K. Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry；Zorbach，W.W.，Tipson，R.S.，Eds.；J.Wiley和sons：New York，1968；Vol 1，183-187]；

¹H NMR(DMSO-d₆)：δ2.2-2.3和2.6-2.7(2m，2H，H-2’和H-2”)，3.4-3.6(2m，2H，H-5’和H-5”)，3.86(pq，1H，H-4’)，4.3-4.4(m，1H，H-3’)，5.24(t，1H，OH-5’，J_H，OH＝5.8Hz)，5.30(d，1H，OH-3’，J_H，OH＝4.0Hz)，6.32(dd，1H，H-1’，J_1’，2’＝6.2Hz，J_1’，2”＝7.8Hz)，7.3(br s，2H，NH₂-6)，8.11和8.32(2s，2H，H-2和H-8)；ms：基质G/T，(FAB⁺)m/z 252[M+H]⁺，136[BH₂]⁺，(FAB^-)m/z 250[M-H]^-，134[B]^-；UV(95％乙醇)：λ_max 258nm(∈14300)，λ_min 226nm(∈2100)；[α]_D ²⁰＝+25(c 1.03，H₂O)，(Lit.对于L-对映体，[α]₂₀ ^D＝+23(c 1.0，H₂O)[参见：Robins，M.J.；Khwaja，T.A.；Robins，R.K. J Org Chem，1970，35，636-639]，对于D-对映体，[α]₂₀ ^D＝-25(c 0.47，H₂O)[参见：Ness，R.K.， Synthetic Procedures in Nucleic Acid Chemistry；Zorbach，W.W.，Tipson，R.S.，Eds.；J.Wiley和sons：New York，1968；Vol 1，183-187])。

元素分析C₁₀H₁₃N₅O₃+1.5H₂O(M＝278.28)的计算值：C，43.16；H，5.80；N，25.17.实测值：C，43.63；H，5.45；N，25.33。实施例9 1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃核糖(143)

如反应方案1所示，将L-核糖140(150g，1mol；Cultor ScienceFood，CAS[24259-59-4]，批号RIB9711013)在甲醇(2升；P.A.Prolabo；ref 20847.295)中的溶液用95-97％硫酸(12mL；Merck；ref 1.00731.1000)处理，并在+4℃放置12小时，然后用吡啶(180mL；99％Acros；ref 131780025)中和。蒸发，获得了甲基呋喃核糖苷的α，β混合物141，为浆状物。在冷却和机械搅拌下将该端基异构体混合物在吡啶(1.3升)中的溶液用苯甲酰氯(580mL，5mol；Fluka；ref12930)处理。将该溶液在室温放置12小时，然后在连续搅拌下倒入冰上(约10升)。将该混合物(在水中的油)经由硅藻土床(Cellitebed)过滤。将在硅藻土床上的所得油状物用水(3×3升)洗涤，然后溶解在乙酸乙酯(3升)中。将有机相用5％碳酸氢钠溶液(2升)和水(2升)洗涤，用硫酸钠(Prolabo；ref 28111.365)干燥，过滤并蒸发，获得了1-O-甲基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-α/β-L-呋喃核糖142，为浓厚的浆状物。将该油状物溶解在乙酸酐(560mL；Fluka；ref45830)和乙酸(240mL；P.A.carlo erba；ref 20104298)中。滴加浓硫酸(80mL)后，将该溶液在冷(+4℃)的条件下机械搅拌10小时。然后在连续搅拌下将该溶液倒入冰上(约10升)。将该混合物(在水中的油状化合物)经由硅藻土床过滤。将在硅藻土床上的所得树胶状固体用水(3×3升)洗涤，然后溶解在二氯甲烷(2.5升；P.A.Merck；ref1.06050.6025)中，将有机相用5％碳酸氢钠(1升)和水(2×2升)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤并蒸发，获得了树胶状固体143，将其从乙醇95(Prolabo；ref 20823.293)中结晶，获得了225g产物(44％)：mp 129-130℃(EtOH95)(Recondo，E.F.，和Rinderknecht，H.在“1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-β-D-呋喃核糖苷的新的简单的合成法”，Helv.Chim.Acta，1959，1171-1173中报道的值为mp 130-131℃)；

¹H NMR(200MHz，CDCl₃)：δ8.09-7.87(m，6H，H_Arom)，7.62-7.31(m，9H，H_Arom)6.43(s，1H，H₁)，5.91(dd，1H，H₃，J_3，4 6.7Hz；J_3，2 4.9Hz)，5.79(pd，1H，H₂，J_2，3 4,9Hz；J_1，2＜1)，4,78(m，2H，H₄ and H₅)，4,51(dd，1H，H₅，J_5，5’13,1Hz，J5’，4 5,5Hz)，2,00(s，3H，CH₃CO)；(与市售1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-D-呋喃核糖相同)，质谱(FAB⁺，GT)m/z 445(M-OAc)⁺，元素分析C₂₈H₂₄O₉计算值C 66.66 H4.79；实测值C H.

反应方案1实施例10 β-L-腺苷(145)

如反应方案2所示，将腺嘌呤(19.6g，144mmol；Pharma-Waldhof；ref 400134.001批号45276800)悬浮在含有1-O-乙酰基-2，3，5-三-O-苯甲酰基-β-L-呋喃核糖143(60g，119mmol)的乙腈(400mL；Riedel-de Hean；ref 33019；用CaH₂蒸馏过)中，向该悬浮液中加入发烟氯化锡(22mL，187mmol；Fluka；ref 96558)。12小时后，将该反应浓缩至小体积(约100mL)；加入碳酸氢钠(110g)和水(120mL)。用热氯仿(5×200mL；Acros；ref 22706463)萃取所得白色固体(锡盐)。将合并的萃取液经由硅藻土床过滤。将有机相用5％碳酸氢钠溶液和水洗涤，用硫酸钠(Prolabo；ref 28111.365)干燥，过滤并蒸发，获得了化合物144(60g，无色泡沫状物)。将该泡沫状物在密封的容器中用氨饱和的甲醇溶液(220mL)于室温搅拌处理4天。将溶剂减压蒸发，将所得粉末悬浮在乙酸乙酯(400mL；Carloerba；ref 528299)中，回流1小时。过滤后，将粉末从水(220mL)中重结晶，获得了L-腺苷145(24g，晶体，75％)：mp 233-234℃(Saneyoshi，M.，和Satoh，E.：“合成核苷和核苷酸。XIII.氯化锡催化的几种6-取代的嘌呤的核糖基化”， Chem Pharm Bull，1979，27，2518-2521；Nakayama，C.，和Saneyoshi，M.“合成核苷和核苷酸.XX.合成不同的1-β-呋喃木糖基-5-烷基尿嘧啶以及相关核苷”，Nucleosides Nucleotides，1982，1，139-146报道的mp为235-238℃)；

¹H NMR(200MHz，DMSO-D₆)：δ8.34 and 8.12(2s，2H，H₂ and H₈)，7.37(1s，2H，NH₂)，5.86(d，1H，H_1’，J_1’，2’6.2Hz)，5.43(m，2H，OH_2’and OH_5’)，5.19(d，1H，OH_3’，J 3.7Hz)，4,60(m，H_2’)，4.13(m，1H，H_3’)，3.94(m，1H，H_4’)，3.69-3.49(m，2H，H_5’a和H_5’b)，(与市售D-腺苷相同)；质谱分析(FAB+，GT)m/z 268(M+H)⁺，136(BH₂)⁺。

反应方案2

实施例11 3’，5’-O-(1，1，3，3-四异丙基-1，3-二硅噁烷基)-β-L-腺苷(146)

如反应方案3所示，将L-腺苷145(47,2g，177mmol)悬浮在吡啶(320mL；99％，Acros；ref 131780025)中，加入1，3-二氯-1，1，3，3-四异丙基二硅氧烷(63mL，201mmol；Fluka；ref 36520)，并将该混合物在室温搅拌12小时。将吡啶蒸发，并将残余物在乙酸乙酯(1L；Carlo erba；ref 528299)与5％碳酸氢钠溶液(600mL)之间分配。将有机相用0.5N盐酸(2×500mL)和水(500mL)洗涤，用硫酸钠(Prolabo；ref 28111.365)干燥，过滤并蒸发至干。将所得固体从乙腈(Riedel-de Haen；ref 33019)中结晶，获得了化合物146(81g，90％)：mp 97-98℃(Robins，M.J.，等人.“核酸相关化合物。42.将仲醇有效地脱氧的一般方法。将核糖基核苷区域专一性且立体选择性地转化成2’-脱氧核苷”， J Am Chem Soc，1983，105，4059-4065报道的D-对映体的mp为98℃)；

¹H NMR(200MHz，CDCl₃)：δ8.28和7.95(2s，2H，H₂和H₈)，5.96(d，1H，J_1’，2’1,1Hz)，5.63(s，2H，NH₂)，5.10(dd，1H，H_3’，J_3’，4’7.6Hz，J_3’，2’5.5Hz)，4.57(dd，1H，H_2’，J_2’，1’1.2Hz；J_2’，3’7.6Hz)，4.15-3.99(m，3H，H_4’，H_5’a和H_5’b)，3.31(s1，1H，OH_2’)，1.06(m，28H，异丙基质子)；质谱(FAB-，GT)m/z 508(M-H)^-，134(B)^-；(FAB+，GT)m/z 510(M+H]⁺，136(BH₂)⁺.

反应方案3实施例12 3’，5’-O-(1，1，3，3-四异丙基-1，3-二硅噁烷基)-2’-脱氧-β-L-腺苷(148)

如反应方案4所示，向化合物146(34g，67mmol)中加入乙腈(280mL；Riedel-de Haen；ref 33019)、DMAP(16.5g，135mmol；99％，Acros；ref 1482702050)和氯硫代碳酸苯酯(10.2mL，73mmol；99％，Acros；ref 215490050)。将该溶液在室温搅拌12小时。将溶剂蒸发，把残余物在乙酸乙酯(400mL；Carlo Erba；ref 528299)与0.5N盐酸(400mL)之间分配。将有机层用0.5N盐酸(400mL)和水(2×400mL)洗涤，用硫酸钠(Prolabo；ref 28111.365)干燥，过滤并蒸发至干，获得了中间体，为浅黄色固体。将粗产物147溶解在二氧杂环己烷(Merck；ref 1.09671.1000)中，并加入AIBN(3.3g，20mmol；α，α’-偶氮异丁腈，Fluka，ref 11630)和TTMSS(33mL，107mmol；三(三甲基甲硅烷基)硅烷，Fluka；ref 93411)。将该溶液逐渐加热直至回流，并搅拌2小时。将该反应浓缩至黄色油状物，通过色谱法纯化(洗脱剂二氯甲烷(Merck；ref 1.06050.6025)：甲醇(Carlo Erba；ref 309002)95∶5)，获得了化合物148(23g，无色泡沫状物，70％)。将等分试样从乙醇/石油醚中结晶：mp 110-111℃(Robins，M.J.，Wilson，J.S.，和Hansske，“核酸相关化合物。42.将仲醇有效地脱氧的一般方法。将核糖基核苷区域专一性且立体选择性地转化成2’-脱氧核苷”， J Am Chem Soc，1983，105，4059-4065报道的mp为113-114℃)；

¹H NMR(200MHz，CDCl₃)：δ8.33和8.03(2s，2H，H₂和H₈)，6.30(dd，1H，H_1’，J 2.85Hz，J 7.06Hz)，5.63(s1，2H，NH₂)，4.96(m，1H，H_3’)，4.50(m，2H，H_5’a和H_5’b)，2,68(m，2H，H_2’a和H_2’b)，1.08(m，28H，异丙基质子)；质谱(FAB+，GT)m/z 494(M+H)⁺，136(BH₂)⁺.

反应方案4实施例13 2’-脱氧-β-L-腺苷(149)

按照Zhang，W.，和Robins，M.J.在“在甲醇中用氟化铵将甲硅烷基保护基从羟基官能团上除去”， Tetrahedron Lett，1992，33，1177-1180中描述的方法，将3’，5’-O-(1，1，3，3-四异丙基-1，3-二硅噁烷基)-2’-脱氧-β-L-腺苷148(32g，65mmol)和氟化铵(32g，mmol；Fluka；ref 09742)在甲醇(Prolabo；ref 20847.295)中的溶液搅拌回流2小时(反应方案5)。加入硅胶(Merck；ref 1.07734.2500)，并将该混合物小心地蒸发，获得了白色粉末。将该粉末加到二氧化硅柱顶端，用二氯甲烷(Merck；ref 1.06050.6025)/甲醇9/1洗脱。合并适当的级分，蒸发，获得了白色粉末，从乙醇95(Prolabo；ref20823.293)中结晶，获得了12.1g产物(75％)：mp 189-190℃(EtOH95)(与市售2’-脱氧-D-腺苷相同)；

¹H NMR(200MHz，DMSO-D₆)：δ8.35和8.14(2s，2H，H₂和H₈)，7.34(s1，2H，NH₂)，6.35(dd，1H，H_1’，J 6.1Hz，J 7.85Hz)，5.33(d，1H，OH_2’，J 4.0Hz)，5.28(dd，1H，H_3’，J 4.95Hz；J 6.6Hz)，4.42(m，1H，OH5′)，3.88(m，1H，H_4’)，3.63-3.52(m，2H，H_5’a和H_5’b)，2,71(m，1H，H_2’a)，2.28(m，1H，H_2’b).(与市售2’-脱氧-D-腺苷相同)；α_D+26°(c 0.5水)(市售2’-脱氧-D-腺苷-25°(c 0.5 水))；UV λmax 260nm(ε14100)(H₂O)；质谱(FAB+，GT)m/z 252(M+H)⁺，136(BH₂)⁺。

反应方案5实施例14 1-(3，5-二-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖基)尿嘧啶(11)

将肼水合物(1.4mL，28.7mmol)加到1-(2-O-乙酰基-3，5-二-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖基)尿嘧啶10[Gosselin，G.；Bergogne，M.-C.和Imbach，J.-L.“五种天然核酸碱基的β-L-呋喃木糖基核苷的合成和生物评价”， Journal of Heterocyclic Chemistry，1993，30，1229-1233](4.79g，9.68mmol)在吡啶(60mL)和乙酸(15mL)内的溶液中。将该溶液在室温搅拌过夜。加入丙酮(35mL)，并将该混合物搅拌30分钟。将该反应混合物减压蒸发。通过硅胶柱色谱纯化残余物[洗脱剂：用甲醇(0-4％)在二氯甲烷中的混合物进行梯度洗脱]，获得了11(3.0g，68％)，将其从环己烷/二氯甲烷中结晶：

mp＝111-114℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ11.35(br s，1H，NH)，7.9-7.4(m，11H，2 C₆H₅CO，H-6)，6.38(d，1H，OH-2’，J_OH-2’＝4.2Hz)，5.77(d，1H，H-1’，J_1’，2’＝1.9Hz)，5.55(d，1H，H-5，J_5-6＝8Hz)，5.54(dd，1H，H-3’，J_{3’- 2’}＝3.9Hz和J_3’-4’＝1.8Hz)，4.8(m，1H，H-4’)，4.7(m，2H，H-5’和H-5”)，4.3(m，1H，H-2’)；MS：FAB＞0(基质GT)m/z 453(M+H)⁺，105(C₆H₅CO)⁺；FAB＜0(基质GT)m/z451(M-H)^-，121(C₆H₅CO₂)^-，111(B)^-；元素分析C₂₃H₂₀N₂O₈·H₂O计算值：C，58.09；H，4.76；N，5.96.实测值：C，57.71；H，4.42；N，5.70.实施例15 1-(3，5-二-O-苯甲酰基-β-L-呋喃阿拉伯糖基)尿嘧啶(12)

向1-(3，5-二-O-苯甲酰基-β-L-呋喃木糖基)尿嘧啶11(8g，17.7mL)在无水苯-DMSO混合物(265mL，6∶4，v/v)内的溶液中加入无水吡啶(1.4mL)、二环己基碳二亚胺(10.9g，53mmol)和二氯乙酸(0.75mL)。将所得混合物在室温搅拌4小时，然后用乙酸乙酯(400mL)稀释，加入草酸(4.8g，53mmol)在甲醇(14mL)中的溶液。搅拌1小时后，将该溶液过滤。将滤液用饱和氯化钠溶液(2×500mL)、3％碳酸氢钠溶液(2×500mL)和水(2×500mL)洗涤。用硫酸钠将有机相干燥，然后减压蒸发。之后将所得残余物溶解在无水EtOH/苯混合物(140mL，2∶1，v/v)中。在0℃向该溶液中加入NaBH₄(0.96g，26.5mmol)。搅拌1小时后，用乙酸乙酯(400mL)将该溶液稀释，然后过滤。将滤液用饱和氯化钠溶液(400mL)和水(400mL)洗涤。用硫酸钠将有机相干燥，然后减压蒸发。通过硅胶柱色谱纯化所得粗产物[洗脱剂：用甲醇(0-3％)在二氯甲烷中的混合物进行梯度洗脱]，获得了12(5.3g，66％)，将其从乙腈中结晶：

mp＝182-183℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ11.35(br s，1H，NH)，8.0-7.5(m，11H，2 C₆H₅CO，H-6)，6.23(br s，1H，OH-2’)，6.15(d，1H，H-1’，J_1’-2’＝4Hz)，5.54(d，1H，H-5，J_5-6＝8.1Hz)，5.37(t，1H，H-3’，J_3’-2’＝J_3’-4’＝2.6Hz)，4.7-4.6(m，2H，H-5’和H-5”)，4.5(m，1H，H-4’)，4.4(m，1H，H-2’)；MS：FAB＞0(基质GT)m/z 453(M+H)⁺，341(S)⁺，113(BH₂)⁺，105(C₆H₅CO)⁺；FAB＜0(基质GT)m/z 451(M-H)^-，121(C₆H₅CO₂)^-，111(B)^-；元素分析C₂₃H₂₀N₂O₈计算值：C，61.06；H，4.46；N，6.19.实测值：C，60.83；H，4.34；N，6.25.实施例16 1-(3，5-二-O-苯甲酰基-2-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖基)尿嘧啶(13)

向1-(3，5-二-O-苯甲酰基-β-L-呋喃阿拉伯糖基)尿嘧啶12(5.2g，11.4mmoL)在无水1，2-二氯乙烷(120mL)内的溶液中加入苯氧基硫代甲酰氯(4.7mL，34.3mL)和4-(二甲基氨基)吡啶(DMAP，12.5g，102.6mmoL)。将所得溶液在氩气氛下于室温搅拌1小时，然后减压蒸发。将残余物溶解在二氯甲烷(300mL)中，并将该有机溶液依次用冰冷的0.2N盐酸(3×200mL)和水(2×200mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并减压蒸发。将粗产物与无水二氧杂环己烷共蒸发几次，并溶解在该溶剂(110mL)中。在氩气氛下向所得溶液中加入三-(三甲基甲硅烷基)硅烷氢化物(4.2mL，13.7mmol)和α，α’-偶氮异丁腈(AIBN，0.6g，3.76mmol)。将该反应混合物加热，并在氩气氛下于100℃搅拌1小时，然后冷却至室温，并减压蒸发。通过硅胶柱色谱纯化残余物[洗脱剂：用甲醇(0-5％)进行梯度洗脱]，获得了13(2.78g，56％)，将其从EtOH中结晶：mp＝223-225℃；H-NMR(DMSO-d₆)：δ11.4(br s，1H，NH)，8.0-7.5(m，11H，2 C₆H₅CO，H-6)，6.28(t，1H，H-1’，J＝7Hz)，5.5(m，2H，H-1’和H-5)，4.6-4.4(m，3H，H-4’，H-5’和H-5”)，2.6(m，2H，H-2’和H-2”)；MS：FAB＞0(基质GT)m/z 437(M+H)⁺，3325(S)⁺；FAB＜0(基质GT)m/z 435(M-H)^-，111(B)^-；元素分析C₂₃H₂₀N₂O₇计算值：C，63.30；H，4.62；N，6.42.实测值：C，62.98；H，4.79；N，6.40.实施例17 2’-脱氧-β-L-胞苷(β-L-dC)

在氩气氛下将Lawesson氏试剂(1.72g，4.26mmol)加到1-(3，5-二-O-苯甲酰基-2-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖基)尿嘧啶13(2.66g，6.1mmol)在无水1，2-二氯乙烷(120mL)内的溶液中，并将该反应混合物搅拌回流2小时。然后将溶剂减压蒸发，并通过硅胶柱色谱纯化残余物[洗脱剂：使用乙酸乙酯(0-8％)在二氯甲烷中的混合物进行梯度洗脱]，获得了4-硫代中间体，为黄色泡沫状物。将该硫代中间体(1.5g，3.31mmol)在氨的甲醇溶液(在-10℃预饱和的，并紧紧地塞住)(50mL)中的溶液在不锈钢瓶中于100℃加热3小时，然后冷却至0℃。将溶剂减压蒸发。通过硅胶柱色谱纯化所得粗产物[洗脱剂：用甲醇(0-20％)在二氯甲烷中的混合物进行梯度洗脱]。最后，合并合适的级分，并经由装置Millex HV-4(0.45μm，Millipore)过滤，减压蒸发，获得了所需的2’-脱氧-β-L-胞苷(β-L-dC)，为泡沫状物(0.6g，80％)，将其从无水EtOH中结晶：

mp＝198-199℃；¹H-NMR(DMSO-d₆)：δ7.77(d，1H，H-6，J_6-5＝7.4Hz)，7.10(br d，2H，NH-₂)，6.13(t，1H，H-1’，J＝6.7Hz)，5.69(d，1H，H-5，J_5-6＝7.4Hz)，5.19(d，1H，OH-3’，J_OH-3’＝4.1Hz)，4.96(t，1H，OH-5’，J_OH-5’＝J_OH-5”＝5.2Hz)，4.1(m，1H，H-3’)，3.75(m，1H，H-4’)，3.5(m，2H，H-5’和H-5”)，2.0(m，1H，H-2’)，1.9(m，1H，H-2”)；MS：FAB＞0(基质GT)m/z 228(M+H)⁺，112(BH₂)⁺；FAB＜0(基质GT)m/z 226(M-H)-；[α]²⁰ _D＝-69(c 0.52，DMSO)[[α]²⁰ _D＝+76(c 0.55，DMSO)市售D-对映体的盐酸盐].元素分析C₉H₁₃N₃O₄计算值：C，47.57；H，5.77；N，18.49.实测值：C，47.35；H，5.68；N，18.29.实施例18 2-氨基-β-L-呋喃阿拉伯糖[1’，2’：4，5]噁唑啉(151)

将L-阿拉伯糖(170g，1.13mol；Fluka，＞99.5％，ref10839)、氨腈(100g，2.38mol；Fluka，＞98％，ref 28330)、甲醇(300mL)、和6M-NH₄OH(50mL)的混合物在室温搅拌3天，然后在-10℃保持过夜。通过抽滤收集产物，依次用甲醇和乙醚洗涤，并真空干燥。获得了130g(66.0％)分析纯的化合物151，

m.p.170-172℃；¹HNMR(DMSO-d₆)δppm 6.35(br s，2H，NH₂)，5.15(d，1H，H-1，J＝5.6Hz)，5.45(br s，1H，OH-3)，4.70(br s，1H，OH-5)，4.55(d，1H，H-2，J＝5.6Hz)，4.00(br s，1H，H-3)，3.65(m，1H，H-4)，3.25(m，2H，H-5，H-5’).实施例19 O^2，2’-脱水-β-L-尿苷(152)

将化合物151(98.8g，0.57mol)和丙酸甲酯(98mL；Fluka，＞97％，ref 81863)在50％乙醇水溶液(740mL)中的溶液回流5小时，然后冷却，并减压浓缩至初始体积的一半。用丙酮(600mL)沉淀后，通过抽滤收集产物，用乙醇和乙醚洗涤，并干燥。将母液部分浓缩，用丙酮(1000mL)沉淀浓缩物，通过抽滤收集固体，用丙酮和乙醚洗涤，获得了另一批产物。总共获得了80g(62％)化合物152，

m.p.236-240℃；¹H NMR(DMSO-d₆)δppm 7.87(d，1H，H-6，J＝7.4Hz)，6.35(d，1H，H-1’，J＝5.7Hz)，5.95(d，1H，H-5，J＝7.4Hz)，5.90(d，1H，OH-3’)，5.20(d，1H，H-2’，J＝5.7Hz)，5.00(m，1H，OH-3’)，4.44(br s，1H，H-3’)，4.05(m，1H，H-4’)，3.25(m，2H，H-5，H-5’).实施例20 3’，5’-二-O-苯甲酰基-O2，2’-脱水-β-L-尿苷(153)

在氩气下、0℃，向化合物152(71.1g，0.31mol)在无水吡啶(1200mL)内的溶液中加入苯甲酰氯(80.4mL；Fluka，p.a.，ref12930)。在除去周围环境水分的条件下将该反应混合物在室温搅拌5小时，并加入乙醇来终止反应。将溶剂减压蒸发，将所得残余物与甲苯和无水乙醇共蒸发。用乙醇将粗的混合物稀释，通过抽滤收集沉淀，依次用乙醇和乙醚洗涤，并干燥，获得了129g(95.8％)化合物153，

m.p.254℃；¹H NMR(DMSO-d₆)δppm 8.1-7.4(m，11H，C₆H₅CO，H-6)，6.50(d，1H，H-1’，J＝5.7Hz)，5.90(d，1H，H-5，J＝7.5Hz)，5.80(d，1H，H-2’，J＝5.8Hz)，5.70(d，1H，H-3’)4.90(m，1H，H-4’)，4.35(m，2H，H-5，H-5’).实施例21 3’，5’-二-O-苯甲酰基-2’-氯-2’-脱氧-β，L-尿苷(154)

在0℃，向化合物153(60.3g，0.139mol)在二甲基甲酰胺(460mL)内的溶液中加入3.2 N-HCl/DMF溶液(208mL，通过在0℃将47.2mL乙酰氯(Fluka，p.a.，ref00990)加到27.3mL甲醇与133.5mL二甲基甲酰胺的溶液中而制得的)。在除去周围环境水分的条件下将该反应混合物在100℃搅拌1小时，冷却，并倒入水(4000mL)中。通过抽滤收集化合物154的沉淀，用水洗涤，并从乙醇中重结晶。收集晶体，用冷的乙醇和乙醚洗涤，并减压干燥。获得了60.6g(92.6％)化合物154，

m.p.164-165℃；¹H NMR(DMSO-d₆)δppm 8.7(br s，1H，NH)，8.1-7.3(m，11H，C₆H₅CO，H-6)，6.15(d，1H，H-1’，J＝4.8Hz)，5.5(m，2H，H-5，H-2’)，4.65(m，4H，H-3’，H-4’，H-5’，H-5”).实施例22 3’，5’-二-O-苯甲酰基-2’-脱氧-β，L-尿苷(155)

将化合物154(60.28g，0.128mol)、三正丁基氢化锡(95mL；Fluka，＞98％，ref 90915)和偶氮二异丁腈(0.568g；Fluka，＞98％，ref 11630)在无水甲苯(720mL)中的混合物搅拌回流5小时，并冷却。通过抽滤收集固体，并用冷的甲苯和石油醚洗涤。将滤液减压浓缩，用石油醚稀释以沉淀出另一批化合物155。获得了54.28g(97.2％)化合物155；

m.p.220-221℃；¹H NMR(CDCl₃)δppm 8.91(br s，1H，NH)，8.1-7.5(m，11H，C₆H₅CO和H-6)，6.43(q，1H，H-1’，J_1’，2’＝5.7Hz和J_1’，2”＝8.3Hz)，5.7-5.6(m，2H，H-3’和H-5)，4.8-4.6(m，3H，H-5’，H-5”和H-4’)，2.8-2.7(m，1H，H-2’)，2.4-2.3(m，1H，H-2”).实施例23 3’，5’-二-O-苯甲酰基-2’-脱氧-β-L-4-硫代-尿苷(156)

将化合物155(69g，0.158mol)和Lawesson氏试剂(74g；Fluka，＞98％，ref 61750)在无水二氯甲烷(3900mL)中的溶液在氩气氛下回流过夜。将溶剂蒸发后，通过硅胶柱色谱纯化残余物[洗脱剂：用甲醇(0-2％)在二氯甲烷中的混合物进行梯度洗脱]，以定量产率获得了纯的化合物156(73g)；

¹H NMR(CDCl₃)δppm 9.5(br s，1H，NH)，8.1-7.4(m，10H，C₆H₅CO)，7.32(d，1H，H-6，J＝7.7Hz)，6.30(dd，1H，H-1’，J＝5.6Hz and J＝8.2Hz)，6.22(d，1H，H-5，J＝7.7Hz)，5.6(m，1H，H-3’)，4.7(m，2H，H-5’，H-5”)，4.5(m，1H，H-4’)，2.8(m，1H，H-2’)，2.3(m，1H，H-2”).实施例24 2’-脱氧-β-L-胞嘧啶

将化合物156(7.3g，0.016mol)在用氨饱和的甲醇(73mL)中的溶液在不锈钢圆筒中于100℃加热3小时。小心地冷却后，将溶剂减压蒸发。将残余物的水溶液用乙酸乙酯洗涤，并蒸发至干。用其它9份化合物156样本(各7.3g)进行该方法(获得了2’-脱氧-β-L-胞嘧啶：73g)。合并10份残余物，用无水乙醇稀释，冷却，获得了2’-脱氧-β-L-胞嘧啶，为晶体。通过固相-液相萃取方法(在乙酸乙酯中回流1小时)来将微量苯甲酰胺从2’-脱氧-β-L-胞嘧啶中除去。获得了28.75g(78.6％)化合物2’-脱氧-β-L-胞嘧啶；m.p.141-145℃；

¹H NMR(DMSO)δppm 8.22和8.00(2 br s，2H，NH₂)，7.98(d，1H，H-6，J＝7.59Hz)，6.12(t，1H， H-1’，J＝6.5Hz和J＝7.6Hz)，5.89(d，1H，H-5，J＝7.59Hz)，5.3(br s，1H，OH-3’)，5.1(br s，1H，OH-5’)，4.2(m，1H，H-3’)，3.80(q，1H，H-4’，J＝3.6Hz和J＝6.9Hz)，3.6-3.5(m，2H，H-5’，H-5”)，2.2-2.0(m，2H，H-2’，H-2”)；FAB＜0，(GT)m/e 226(M-H)^-，110(B)^-；FAB＞0(GT)228(M+H)⁺，112(B+2H)⁺；[α]_D ²⁰-56.48(c＝1.08 in DMSO)；UV(pH 7)λ_max＝270nm(∈＝10000).实施例25 3’，5’-二-O-苯甲酰基-2’-脱氧-5-碘-β-L-尿苷(157)

将化合物155(105.8g，0.242mol)、碘(76.8g；Fluka，99.8％，ref 57650)、CAN(66.4g；硝酸铈铵，Aldrich，＞98.5％，ref21，547-3)和乙腈(2550mL)的混合物在80℃搅拌3小时，然后将该反应混合物在室温冷却，导致结晶出化合物157(86.6g，63.5％)；

m.p.192-194℃；¹H NMR(DMSO)δppm：8.34(s，1H，NH)，8.2-7.2(m，11H，2 C₆H₅CO，H-6)，6.31(q，1H，H-1’，J＝5.5Hz和J＝8.7Hz)，5.5(m，1H，H-3’)，4.7(m，2H，H-5’，H-5”)，4.5(m，1H，H-4’)，2.7(m，1H，H-2’)，2.3(m，1H，H-2”)；FAB＜0，(GT)m/e 561(M-H)^-，237(B)^-；FAB＞0(GT)563(M+H)⁺；[α]_D ²⁰+39.05(c＝1.05 in DMSO)；UV(EtOH 95)υ_max＝281nm(∈＝9000)，υ_min＝254nm(∈＝4000)，υ_max＝229nm(∈＝31000)；元素分析C₂₃H₁₉IN₂O₇计算值：C，49.13 H，3.41 N，4.98 I，22.57.实测值C，49.31 H，3.53 N，5.05 I，22.36.实施例26 3’，5’-二-O-苯甲酰基-2’-脱氧-3-N-甲苯甲酰基-β-L-胸苷(159)

在0℃向化合物157(86.6g，0.154mol)在含有N-乙基二异丙基胺(53.6mL；Aldrich，＞99.5％，ref 38，764-9)的无水吡啶(1530mL)内的溶液中分批添加对甲苯甲酰氯(40.6mL，Aldrich，98％，ref10，663-1)。将该反应混合物在室温搅拌2小时，然后加入水以终止反应，并用二氯甲烷萃取该反应混合物。将有机相用水洗涤，用硫酸钠干燥，并蒸发至干，获得了3’，5’-二-O-苯甲酰基-2’-脱氧-3-N-甲苯甲酰基-5-碘-β-L-尿苷(158)，其可不用进一步纯化直接用于下一步骤。

将粗的混合物158、乙酸钯(3.44g；Aldrich，＞99.98％，ref37，987-5)、三苯基膦(8.0g；Fluka，＞97％，ref 93092)在N-甲基吡咯烷酮(1375mL；Aldrich，＞99％，ref 44，377-8)中的溶液与三乙胺(4.3mL)在室温搅拌45分钟。然后在氩气氛下、0℃滴加四甲基锡(42.4mL；Aldrich，＞99％，ref 14，647-1)。在100-110℃搅拌过夜后，将该反应混合物倒入水中，并用乙醚萃取。用硫酸钠将该有机溶液干燥，并减压浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残余物[洗脱剂：用乙酸乙酯(0-10％)在甲苯中的混合物进行梯度洗脱]，获得了化合物159，为泡沫状物(42.3g，2步的产率为48.3％)。

¹HNMR(DMSO)δppm.8.3-7.2(m，15H，2 C₆H₅CO，1 CH₃C₆H₄CO，H-6)，6.29(t，1H，H-1’，J＝7.0Hz)，5.7(m，1H，H-3’)，4.7-4.5(m，3H，H-5’，H-5”，H-4’)，2.7-2.6(m，2H，H-2’，H-2”)；FAB＜0，(GT)m/e 567(M-H)^-，449(M-CH₃C₆H₄CO)^-，243(B)^-，121(C₆H₅COO)^-；FAB＞0(GT)1137(2M+H)⁺，569(M+H)⁺，325(M-B)^-，245(B+2H)⁺，119(CH₃C₆H₅CO)⁺.实施例27 2’-脱氧-β-L-胸苷

将化合物159(42.3g，0.074mol)在用氨饱和的甲醇(1850mL)中的溶液在室温搅拌2天。将溶剂蒸发后，用水将残余物稀释，并用乙酸乙酯洗涤数次。分离出水层，减压蒸发，通过硅胶柱色谱纯化残余物[洗脱剂：用甲醇(0-10％)在二氯甲烷中的混合物进行梯度洗脱]，获得了纯的2’-脱氧-β-L-胸苷(11.62g，64.8％)，将其从乙醇中结晶；

m.p.185-188℃；¹H NMR(DMSO)δppm 11.3(s，1H，NH)，7.70(s，1H，H-6)，6.2(pt，1H，H-1’)，5.24(d，1H，OH-3’，J＝4.2Hz)，5.08(t，1H，OH-5’，J＝5.1Hz)，4.2(m，1H，H-3’)，3.7(m，1H，H-4’，3.5-3.6(m，2H，H-5’，H-5”)，2.1-2.0(m，2H，H-2’，H-2”)；FAB＜0，(GT)m/e 483(2M-H)^-，349(M+T-H)^-，241(M-H)^-，125(B)^-；FAB＞0(GT)243(M+H)⁺，127(B+2H)⁺；)⁺；[α]_D ²⁰-13.0(c＝1.0 in DMSO)；UV(pH 1)υ_max＝267nm(∈＝9700)，υ_min＝234nm(∈＝2000).实施例28 立体选择性地合成2’-脱氧-β-L-肌苷(a-L-dI)

β-L-dI是通过按照现有技术在9-D-吡喃葡萄糖基系列中描述的方法(参见I.Iwai，T.Nishimura和B.Shimizu“核酸化学中的合成方法”，W.W.Aorbach和R.S.Tipson，eds.，John Wiley & Sons，Inc.New York，1968，1，135-138)将2’-脱氧-β-L-腺苷(β-L-dA)脱氨基来合成的。

反应方案6

因此，将β-L-dA(200mg)在乙酸(0.61mL)与水(19mL)的混合物中的溶液与亚硝酸钠(495mg)一起加热并将该混合物在室温搅拌过夜。然后将该溶液减压蒸发至干。将残余物的水溶液施加到IR-120(H⁺)离子交换树脂柱上，并用水洗脱该柱。收集合适的级分并蒸发至干，获得了纯的β-L-dI，将其从甲醇中结晶(106mg，产率为53％，未优化)：

m.p.＝209°-211℃；UV(H₂O)，λ_max＝247nm；¹H-NMR(DMSO-d₆)＝8.32和8.07(2s，各1H，H-2和H-8)，6.32(pt，1H，H-1；J＝6.7Hz)，4.4(m，1H，H-3’)，3.9(m，1H，H-4’)，3.7-3.4(m，2H被HOD部分隐藏，H-5’，5”)，2.6and 2.3(2m，各1H，H-2’和H-2”)；质谱(mature，甘油-硫代甘油，1∶1，v/v)，FAB＞0：253(M+H)⁺，137(碱+2H)⁺；FAB＜0：251(m-H)^-，135(碱)^-；[α]_D ²⁰＝+19.3(-c 0.88，H₂O).实施例29 化合物的毒性

进行毒性分析以评价是否所观察到的抗病毒作用是由于对细胞生存力的一般影响所致。所用方法是在人骨髓clorogenic测定中，测定与拉米夫定相比，β-L-dA、β-L-dC和β-L-dT对细胞生长的影响。结果如表1所示。

表1

化合物	CFU-GM(μM)	BFU-E(μM)
化合物	CFU-GM(μM)	BFU-E(μM)	β-L-dA	＞10	＞10
β-L-dC	＞10	＞10	β-L-dA	＞10	＞10
β-L-dC	＞10	＞10	β-L-dT	＞10	＞10
β-L-dU	＞10	＞10	β-L-dT	＞10	＞10
β-L-dU	＞10	＞10	拉米夫定	＞10	＞10

实施例30 磷酰化化合物的生物活性

测试β-L-dA、β-L-dC、β-L-dU、β-L-2’-dG、β-L-dI和β-L-dT的三磷酸酯衍生物抑制乙肝的能力。表2描述比较了β-L-dT三磷酸酯(β-L-dT-TP)、β-L-dC三磷酸酯(β-L-dC-TP)、β-L-dU三磷酸酯(β-L-dU-TP)和β-L-dA三磷酸酯(β-L-dA-TP)对土拨鼠肝炎病毒(WHV)DNA聚合酶、人DNA聚合酶α、β、和γ的抑制活性。

表2

抑制剂	WHV DNApol IC₅₀	DNApolαK_i ^b(μM)	DNApolβK_i ^b(μM)	DNApolγK_i ^b(μm)
抑制剂	WHV DNApol IC₅₀	DNApolαK_i ^b(μM)	DNApolβK_i ^b(μM)	DNApolγK_i ^b(μm)	β-L-dT-TP	0.34	＞100	＞100	＞100
β-L-dA-TP	2.3	＞100	＞100	＞100	β-L-dT-TP	0.34	＞100	＞100	＞100
β-L-dA-TP	2.3	＞100	＞100	＞100	β-L-dC-TP	2.0	＞100	＞100	＞100
β-L-dU-TP	8	＞100	＞100	＞100	β-L-dC-TP	2.0	＞100	＞100	＞100

^aIC₅₀：50％抑制浓度^bK_i值是这样测定的：使用小牛胸腺激活的DNA作为模板-引物，使用dATP作为底物。通过Dixon绘图分析测定抑制剂。在这些条件下，对于dATP，计算的人DNA聚合酶α的平均K_m为约2.6μM。对于dATP，人DNA聚合酶β表现出3.33μM的稳态K_m。人DNA聚合酶γ表现出5.2μM的稳态K_m。实施例31 化合物的抗病毒活性

在转染的Hep G-2(2.2.15)细胞中测定β-L-dA、β-L-dC、β-L-dU、β-L-2’-dG和β-LdT的抗乙肝病毒活性。表3显示了在转染的HepG-2(2.2.15)细胞中β-L-dA、β-L-dC、β-L-dU、β-L-dT抗乙肝病毒复制的作用。

表3

化合物	HBV病毒体^aEC₅₀(μM)	HBV Ri^bEC₅₀(μM)	细胞毒性IC₅₀(μM)	选择性指数IC₅₀/EC₅₀
化合物	HBV病毒体^aEC₅₀(μM)	HBV Ri^bEC₅₀(μM)	细胞毒性IC₅₀(μM)	选择性指数IC₅₀/EC₅₀	β-L-dT	0.05	0.05	＞200	＞4000
β-L-dC	0.05	0.05	＞200	＞4000	β-L-dT	0.05	0.05	＞200	＞4000
β-L-dC	0.05	0.05	＞200	＞4000	β-L-dA	0.10	0.10	＞200	＞2000
β-L-dI	1.0	1.0	＞200	＞200	β-L-dA	0.10	0.10	＞200	＞2000
β-L-dI	1.0	1.0	＞200	＞200	β-L-dU	5.0	5.0	＞200	＞40

^a细胞外DNA^b复制中间体(细胞内DNA)实施例32化合物的联合治疗

在2.2.15细胞中测定联合使用的β-L-dA、β-L-dC与β-L-dT对乙肝病毒生长的作用。结果如表4所示。

表4

联合	比例	EC₅₀
联合	比例	EC₅₀	L-dC+L-dT	1∶3	.023
L-dC+L-dT	1∶1	.053	L-dC+L-dT	1∶3	.023
L-dC+L-dT	1∶1	.053	L-dC+I-dT	3∶1	.039
L-dC+L-dA	1∶30	.022	L-dC+I-dT	3∶1	.039
L-dC+L-dA	1∶30	.022	L-dC+L-dA	1∶10	.041
L-dC+L-dA	1∶3	.075	L-dC+L-dA	1∶10	.041
L-dC+L-dA	1∶3	.075	L-dT+L-dA	1∶30	.054
L-dT+L-dA	1∶10	.077	L-dT+L-dA	1∶30	.054
L-dT+L-dA	1∶10	.077	L-dT+L-dA	1∶3	.035

每一联合都产生了协同的抗HBV活性。此外，在该模型中，L-dA+L-dC+L-dT联合也产生了协同作用。

实施例33

测定单独或联合使用的β-L-dA和β-L-dC抑制2.2.15细胞中的乙肝病毒复制。结果如表5所示。

表5

^aβ-L-2’-脱氧-腺苷(μM)	^bβ-L-2’-脱氧-胞苷(μM)	％抑制	^cC.I.
^aβ-L-2’-脱氧-腺苷(μM)	^bβ-L-2’-脱氧-胞苷(μM)	％抑制	^cC.I.	0.5		90
0.05		24		0.5		90
0.05		24		0.005		1
	0.5	95		0.005		1
	0.5	95			0.05	40
	0.005	10			0.05	40
	0.005	10		0.05	0.05	80	0.34
0.05	0.005	56	0.20	0.05	0.05	80	0.34
0.05	0.005	56	0.20	0.05	0.0005	50	0.56
0.005	0.05	72	0.35	0.05	0.0005	50	0.56
0.005	0.05	72	0.35	0.005	0.005	54	0.35
0.005	0.0005	30	0.16	0.005	0.005	54	0.35
0.005	0.0005	30	0.16	0.0005	0.05	50	0.83
0.0005	0.005	15	0.28	0.0005	0.05	50	0.83
0.0005	0.005	15	0.28	0.0005	0.0005	0	N.A.

^aβ-L-2’-脱氧-腺苷：IC₅₀＝0.09μM^bβ-L-2’-脱氧-胞苷：IC₅₀＝0.06μM^c联合指数值指出协同作用(＜1)、叠加作用(＝1)、和拮抗作用(＞1)实施例35 化合物的效力

测定L-dA、L-dT和L-dC在慢性感染土拨鼠肝炎病毒(WHV)的土拨鼠(Marmota monax)中抗肝炎病毒感染的效力。该HBV感染动物模型是广泛接受的，并已证实可用于评价抗病毒剂抗HBV的效力。

每个药物组有3只动物，每个对照组有4只动物。在组1中，动物接受载体对照；组2接受拉米夫定(3TC)(10mg/kg/天)；组3-6接受L-dA(分别是0.01、0.1、1.0、10mg/kg/天)；组7-10接受L-dT(分别是0.01、0.1、1.0、10mg/kg/天)；组11-14接受L-dC(分别是0.01、0.1、1.0、10mg/kg/天)。

通过管饲法每天口服给药1次，在第0、1、3、7、14、21、28和治疗后第+1、+3、+7、+14、+28和+56天采集血样。根据血清中WHV DNA的减少来评价活性和毒性：圆点，定量PCR。

结果如附图5和表6所示。

表6：LdA、LdT、LdC在土拨鼠模型中的抗病毒活性

对照 LdA LdT LdC天 ng WHV-DNA每ml血清^1，20 381 436 423 4261 398 369 45 1233 412 140 14 627 446 102 6 4614 392 74 1 20¹LdA、LdT、LdC是以10mg/kg的剂量每天口服给药一次²检测限为1ng/ml WHV-DNA每ml血清

数据表明L-dA、L-dT和L-dC在该体外模型中具有高度活性。首先，病毒负荷降至检测不到(L-dT)或几乎检测不到(L-dA、L-dC)的水平。第二，结果表明L-dA、L-dT和L-dC在该模型中的活性强于3TC(拉米夫定)。第三，不使用L-dT后至少2周，没有检测到病毒反跳。第四，剂量反应曲线表明，随着L-dA和L-dC的剂量增加，将表现出类似于L-dT的抗病毒活性。第五，接受药物的所有动物都有体重增加，并且没有检测到任何与药物有关的毒性。实施例34 制备药物组合物

感染丁型肝炎的人或其它宿主可通过在可药用载体或稀释剂存在下施用有效量的β-2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷例如β-L-2’-脱氧腺苷、β-L-2’-脱氧胞苷、β-L-2’-脱氧尿苷、β-L-2’-脱氧鸟苷或β-L-2’-脱氧胸苷或其可药用前药或盐来治疗。活性物质可通过任意合适的途径例如口服、非胃肠道、静脉内、真皮内、皮下、或局部给药途径以液体或固体形式给药。

活性化合物以足以给患者递送治疗有效量的化合物来在体内抑制病毒复制，同时不在所治疗的患者中引起严重毒性的量包含在可药用载体或稀释剂中。“抑制量”是指活性组分足以产生通过例如本文所述的测定法测定的抑制作用的活性组分的量。

对于所有上述病症，化合物的优选剂量为约1-50mg/kg、优选1-20mg/kg体重/天，更通常为0.1-约100mg/千克接受者的体重/天。可药用前药的有效剂量可基于要递送的母核苷的重量来计算。如果前药自身表现出活性，可如上所述使用前药的重量或通过本领域技术人员已知的其它手段来评价有效剂量。

方便起见，化合物宜在任意合适的单位剂型中，包括但不限于含有7-3000mg、优选70-1400mg活性组分/个单位剂型的单位剂型中给药。50-1000mg的口服剂量通常是合适的。

理想地，应当将活性组分给药，以使活性化合物的峰值血浆浓度为约0.2-70μM，优选为约1.0-10μM。这可通过例如静脉内注射0.1-5％活性组分的溶液、任选在盐水中的溶液，或者将活性组分快速浓注(as a bolus)来实现。

活性化合物在药物组合物中的浓度取决于药物的吸收、失活和排泄速度以及本领域技术人员已知的其它因素。应当注意，剂量将随着所治疗的病症的严重程度而变。还应当理解，对于任何特定个体，应当依据个体需要和施用或监控施用组合物的人的职业判断来随着时间的延长调节具体给药方案，并且本文所述的浓度范围只是举例性的，并不是为了限制本发明组合物的范围和实施。活性化合物可一次给药，或者可分成多份较小的剂量以在不同的时间间隔给药。

活性化合物的优选给药方式是口服给药。口服组合物一般包含惰性稀释剂或可食用的载体。它们可包封在明胶胶囊中或压制成片。为了口服给药，可将活性化合物与赋形剂混合，并以片剂、锭剂或胶囊的形式使用。可包含可药用粘合剂、和/或辅助剂以作为组合物一部分。

片剂、丸剂、胶囊、锭剂等可含有任何下述组分或类似性质的化合物：粘合剂例如微晶纤维素、西黄蓍胶或明胶；赋形剂例如淀粉或乳糖，崩解剂例如藻酸、Primogel、或玉米淀粉；润滑剂例如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂例如胶态二氧化硅；甜味剂例如蔗糖或糖精；或矫味剂例如薄荷、水杨酸甲酯、或橙子香味剂(orange flavoring)。当单位剂型是胶囊时，除了上述类型物质以外，其还可以含有液体载体例如脂肪油。此外，剂量单位形式可含有改变剂量单位物理形式的多种其它物质，例如糖、虫胶或其它肠溶剂包衣。

本发明化合物可作为酏剂、悬浮液、糖浆剂、糯米纸囊剂(wafer)、口香糖等的组分给药。除了活性化合物以外，糖浆剂还含有蔗糖作为甜味剂和一些防腐剂、染料和着色剂以及矫味剂。

还可将本发明化合物或其可药用衍生物或盐与不影响所需作用的其它活性物质或补充所需作用的物质例如抗生素、抗真菌剂、抗炎剂、酶抑制剂或其它核苷或非核苷抗病毒剂混合。用于非胃肠道、真皮内、皮下或局部给药的溶液或悬浮液可含有下列组分：无菌稀释剂例如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇或其它合成溶剂；抗菌剂例如苄醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂例如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂例如乙二胺四乙酸；缓冲剂例如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐，以及调节张力的物质例如氯化钠或葡萄糖。非胃肠道给药用制剂可包封在安瓿、一次性注射器或用玻璃或塑料制成的多剂量瓶中。

如果静脉内给药的话，优选的载体是生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。

在优选的实施方案中，可用保护化合物不迅速从体内消除的载体配制活性化合物，例如控释制剂，包括植入物和微包封的给药系统。可使用生物可降解、生物相容的聚合物例如乙烯基乙酸乙烯酯、聚酐类物质、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯、和聚乙酸。制备这样的制剂的方法对于本领域技术人员来说是显而易见的。这些材料也可从A1zaCorporation商购获得。

脂质体悬浮液(包括靶向到用病毒抗原的单克隆抗体感染的细胞的脂质体)也优选作为可药用载体。它们可依据本领域技术人员已知的方法，例如在U.S.专利4,522,811中描述的方法制得。例如，脂质体制剂可这样制得：将合适的脂质(例如硬脂酰基磷脂酰基乙醇胺、硬脂酰基磷脂酰基胆碱、花生酰基磷脂酰基胆碱、和胆固醇)溶解在无机溶剂中，然后蒸发，在容器的表面上留下一薄层干燥的脂质膜。然后向容器中加入活性化合物或其一磷酸酯、二磷酸酯和/或三磷酸酯衍生物的水溶液。之后用手旋转容器，以将游离脂质物质从容器的侧壁上释放下来并分散脂质聚集体，由此形成脂质体悬浮液。

已经用其优选的实施方案描述了本发明。通过阅读上述本发明的详细描述，本发明的变化和改变形式对于本领域技术人员来说将是显而易见的。所有这些变化和改变形式都在本发明范围内。

Claims

1.治疗感染丁型肝炎病毒的宿主的方法，包括施用有效量的下式所示2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷：或其可药用盐，其中R¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物；且BASE是可任选被取代的嘌呤或嘧啶碱基。

2.权利要求1的方法，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧嘌呤：或其可药用盐，其中R¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物；Y是OR³、NR³R⁴或SR³；且X¹和X²独立地选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、卤素、OR⁵、NR⁵NR⁶或SR⁵；且R³、R⁴、R⁵和R⁶独立地为H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物。

3.权利要求2的方法，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧腺苷：或其可药用盐，其中R¹是H、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、酰基、烷基、或稳定的磷酸酯衍生物。

4.权利要求3的方法，其中R¹是氢。

5.权利要求3的方法，其中R¹是酰基。

6.权利要求5的方法，其中所述酰基衍生自氨基酸。

7.权利要求6的方法，其中所述氨基酸是缬氨酸。

8.权利要求2的方法，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧鸟苷：

或其可药用盐，其中R¹是H、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、酰基、烷基、或稳定的磷酸酯衍生物。

9.权利要求2的方法，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧肌苷：

10.权利要求1的方法，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧嘧啶：或其可药用盐或前药，其中R¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物；Y是OR³、NR³R⁴或SR³；且X¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、卤素、OR⁵、NR⁵NR⁶或SR⁵；且R³、R⁴、R⁵和R⁶独立地为H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物。

11.权利要求10的方法，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧胞苷：

12.权利要求11的方法，其中R¹是氢。

13.权利要求11的方法，其中R¹是酰基。

14.权利要求13的方法，其中所述酰基衍生自氨基酸。

15.权利要求14的方法，其中所述氨基酸是缬氨酸。

16.权利要求10的方法，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧尿苷：或其可药用盐，其中R¹是H、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、酰基、烷基、或稳定的磷酸酯衍生物。

17.权利要求10的方法，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-胸苷：或其可药用盐，其中R¹是H、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、酰基、烷基、或稳定的磷酸酯衍生物。

18.权利要求17的方法，其中R¹是氢。

19.权利要求17的方法，其中R¹是酰基。

20.权利要求19的方法，其中所述酰基衍生自氨基酸。

21.权利要求20的方法，其中所述氨基酸是缬氨酸。

22.治疗感染丁型肝炎病毒的宿主的方法，包括联合或交替施用丁型肝炎治疗有效量的至少两种2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷，其中每种2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷独立地由下式代表或其可药用盐，其中R¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物；且BASE是可任选被取代的嘌呤或嘧啶碱基。

23.治疗感染丁型肝炎病毒的宿主的方法，包括联合或交替施用丁型肝炎治疗有效量的生物活性2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷或其可药用盐与抗乙肝剂，其中所述抗乙肝剂选自FTC、L-FMAU、DAPD、泛西洛维、喷西洛维、BMS-200475、bis pom PMEA(adefovir、dipivoxil)、lobucavir、更昔洛维、或利巴韦林。

24.下式所示2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷或其可药用盐在治疗或预防感染丁型肝炎病毒的宿主中的应用：其中R¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物；且BASE是可任选被取代的嘌呤或嘧啶碱基。

25.权利要求24的应用，其中所示2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧嘌呤：

或其可药用盐，其中R¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物；Y是OR³、NR³R⁴或SR³；且X¹和X²独立地选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、卤素、OR⁵、NR⁵NR⁶或SR⁵；且R³、R⁴、R⁵和R⁶独立地为H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物。

26.权利要求25的应用，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧腺苷：

27.权利要求26的应用，其中R¹是氢。

28.权利要求26的应用，其中R¹是酰基。

29.权利要求28的应用，其中所述酰基衍生自氨基酸。

30.权利要求29的应用，其中所述氨基酸是缬氨酸。

31.权利要求25的应用，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧鸟苷：

32.权利要求25的应用，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧肌苷：

33.权利要求24的应用，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧嘧啶：或其可药用盐，其中R¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物；Y是OR³、NR³R⁴或SR³；且X¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、卤素、OR⁵、NR⁵NR⁶或SR⁵；且R³、R⁴、R⁵和R⁶独立地为H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物。

34.权利要求33的应用，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧胞苷：

35.权利要求34的应用，其中R¹是氢。

36.权利要求34的应用，其中R¹是酰基。

37.权利要求36的应用，其中所述酰基衍生自氨基酸。

38.权利要求37的应用，其中所述氨基酸是缬氨酸。

39.权利要求33的应用，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧尿苷：

40.权利要求33的应用，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-胸苷：

41.权利要求40的应用，其中R¹是氢。

42.权利要求40的应用，其中R¹是酰基。

43.权利要求42的应用，其中所述酰基衍生自氨基酸。

44.权利要求43的应用，其中所述氨基酸是缬氨酸。

45.下式所示2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷或其可药用盐在制备用于治疗或预防感染丁型肝炎病毒的宿主的药物中的应用：

46.权利要求45的应用，其中所示2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧嘌呤：

47.权利要求46的应用，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧腺苷：

48.权利要求47的应用，其中R¹是氢。

49.权利要求47的应用，其中R¹是酰基。

50.权利要求49的应用，其中所述酰基衍生自氨基酸。

51.权利要求50的应用，其中所述氨基酸是缬氨酸。

52.权利要求46的应用，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧鸟苷：

53.权利要求46的应用，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧肌苷：

54.权利要求45的应用，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧嘧啶：

或其可药用盐或前药，其中R¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物；Y是OR³、NR³R⁴或SR³；且X¹选自H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、卤素、OR⁵、NR⁵NR⁶或SR⁵；且R³、R⁴、R⁵和R⁶独立地为H、直链、支链或环状烷基、CO-烷基、CO-芳基、CO-烷氧基烷基、CO-芳氧基烷基、CO-取代的芳基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、芳烷基磺酰基、氨基酸残基、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、或磷酸酯衍生物。

55.权利要求54的应用，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧胞苷：或其可药用盐，其中R¹是H、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、酰基、烷基、或稳定的磷酸酯衍生物。

56.权利要求55的应用，其中R¹是氢。

57.权利要求55的应用，其中R¹是酰基。

58.权利要求57的应用，其中所述酰基衍生自氨基酸。

59.权利要求58的应用，其中所述氨基酸是缬氨酸。

60.权利要求54的应用，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-2’-脱氧尿苷：

61.权利要求54的应用，其中所述2’-脱氧-β-L-赤-呋喃戊糖核苷是下式所示β-L-胸苷：或其可药用盐，其中R¹是H、一磷酸酯、二磷酸酯、三磷酸酯、酰基、烷基、或稳定的磷酸酯衍生物。

62.权利要求61的应用，其中R¹是氢。

63.权利要求61的应用，其中R¹是酰基。

64.权利要求63的应用，其中所述酰基衍生自氨基酸。

65.权利要求64的应用，其中所述氨基酸是缬氨酸。