ES2217569T3 - Sales de di(uridina 5'-tetrafosfato), metodo para su preparacion y usos de las mismas. - Google Patents
Sales de di(uridina 5'-tetrafosfato), metodo para su preparacion y usos de las mismas.Info
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Abstract
Sal tetrasódica del P1, P4-di(uridina-5¿)-tetrafosfato. La presente invención prevé nuevos métodos para la síntesis del dinucleótido terapéutico, P 1 , P 4 -di(uridina-5¿)-tetrafosfato (fórmula I) y demuestra la aplicabilidad para la producción de grandes cantidades. Los métodos de la presente invención reducen sustancialmente el tiempo requerido para sintetizar el tetrafosfato de diuridina, preferiblemente hasta tres días o menos. Las sales de sodio y amonio novedosas de P 1 , P 4 -di(uridina-5¿)-tetrafosfato, preparadas mediante estos métodos, son estables, solubles, no tóxicas y fáciles de manejar durante la fabricación. Se prefiere la sal tetraamónica; la sal tetrasódica es la más preferida.
Description
Sales de
di(uridina-5'-tetrafosfato),
método para su preparación y usos de las mismas.
Esta invención se refiere a métodos para la
producción de dinucleótidos terapéuticos, incluyendo las sales
novedosas de los mismos. Más específicamente, se refiere a métodos
para la síntesis de
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato,
es decir, tetrafosfato de diuridina (U_{2}P_{4}) que tiene
ventajas sobre los métodos de fabricación de la técnica
anterior.
El
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
es un dinucleótido de la siguiente estructura:
Fórmula
I
en la
que:
X es Na, NH_{4} o H, siempre que todos los
grupos X no sean H.
El ácido libre del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato,
en el que X es hidrógeno, se ha descrito previamente como
5'-(pentahidrógenotetrafosfato) de uridina,
P'''\rightarrow5'-éster con uridina (número de registro CAS:
59985-21-6; C. Vallejo et al.,
Biochimica et Biophysica Acta 438, 305 (1976) y H. Coste et
al., J. Biol. Chem. 262, 12096 (1987)).
Se han descrito diferentes métodos para la
síntesis de dinucleótidos de purina, tales como el tetrafosfato de
diadenosina (A_{2}P_{4}) (E. Rappaport et al., Proc. Natl.
Acad. Sci, 78, 838, (1981), A. Guranowski et al.
Biochemistry, 27, 2959, (1988); C. Lobaton et al, Eur. J.
Biochem., 50, 495, 1975; K. Ng y L. Orgel, Nucl. Acid Res.,
15, 3573, (1987)). Sin embargo, esto no ha sido cierto para el
U_{2}P_{4} que es un nucleótido de pirimidina. Aunque los
nucleótidos de purina y los nucleótidos de pirimidina parecen ser
análogos, los métodos utilizados para la síntesis de nucleótidos de
purina no funcionan necesariamente para las pirimidinas tales como
la uridina.
Se ha demostrado que el tetrafosfato de diuridina
tiene propiedades beneficiosas en el tratamiento de diversas
enfermedades, tales como la enfermedad pulmonar obstructiva crónica
(COPD). Por ejemplo, se ha demostrado que facilita el aclaramiento
de las secreciones mucosas de los pulmones de un sujeto, tal como
un mamífero, incluyendo los seres humanos, que necesita el
tratamiento por diversos motivos, incluyendo fibrosis quística,
bronquitis crónica, asma, bronquiectasia, retención de mucosa
posoperatoria, neumonía, discinesia ciliar primaria (M. J. Stutts,
III, et al., patente de los EE.UU. número 5.635.160;
publicación internacional PCT WO 96/40059) y para la prevención y el
tratamiento de neumonía en pacientes inmovilizados (K. M. Jacobus y
H. J. Leighton, patente de los EE.UU. número 5.763.447). Otros usos
terapéuticos incluyen el tratamiento de la fibrosis quística,
bronquitis crónica, asma, bronquiectasia, atelectasia posoperatoria
y síndrome de Kartagener (publicación internacional PCT WO
96/40059), sinusitis (publicación internacional PCT WO 98/03177),
otitis media (publicación internacional PCT WO 97/29756),
xeroftalmía, desprendimiento de retina, obstrucción del conducto
nasolagrimal, el tratamiento de la esterilidad femenina y la
irritación debida a sequedad vaginal mediante el aumento de las
secreciones de mucosidad y la hidratación de la superficie
epitelial, y la mejora del rendimiento de los atletas.
El U_{2}P_{4} también tiene utilidad como
producto veterinario en mamíferos tales como, pero sin limitarse a
ellos, perros, gatos y caballos.
La metodología de la técnica anterior describe
únicamente un protocolo para la producción de tetrafosfato de
diuridina. Este método, que requiere mucho tiempo, dura más de
cinco días y sólo produce pequeñas cantidades de tetrafosfato de
diuridina (C. Vallejo et al, Biochimica et Biophysica Acta
438.305 (1976), Sillero et al., Eur J Biochem 76, 332
(1972)). Según esta técnica, el tetrafosfato de diuridina se
sintetizó mediante una reacción del
5'-monofosfomorfolidato de uridina (0,54 mmoles) con
la sal de trietilamina del ácido pirofosfórico (0,35 mmoles) en un
medio de piridina anhidro (10 ml). Tras 5 días a 30ºC, se eliminó
la piridina de la mezcla de reacción por evaporación y el residuo
se resuspendió en agua destilada en vidrio (8 mL), la suspensión se
aplicó a una columna de DEAE-celulosa
(dietilaminoetil-celulosa) (37,5 \times 2,6 cm) y
se fraccionó con 3,2 L de un gradiente lineal (0,06 - 0,25 M) de
bicarbonato de amonio, pH 8,6. El pico que eluyó entre el
bicarbonato de amonio 0,17 - 0,19 M se caracterizó parcialmente
como U_{2}P_{4} mediante los criterios siguientes:
insensibilidad a la fosfatasa alcalina, razón de fósforo con
respecto a base y análisis de los productos de hidrólisis (UTP +
UMP), tras el tratamiento con fosfodiesterasa I, mediante
electrofororesis en tampón citrato, pH 5,0. No se facilitó el
rendimiento ni los datos espectroscópicos. Por tanto, el
procedimiento de la técnica anterior para la síntesis de
tetrafosfato de diuridina es largo y sólo produjo pequeñas
cantidades de tetrafosfato de diuridina sólo parcialmente
caracterizada. La presente invención se centra en métodos para
producir este compuesto médicamente útil que puede llevarse a cabo
de manera más eficaz y conveniente, y que puede aplicarse a la
producción a gran escala de tetrafosfato de diuridina y sales del
mismo.
La presente invención prevé nuevos métodos para
la síntesis del dinucleótido terapéutico,
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
(fórmula I) y demuestra la aplicabilidad para la producción de
grandes cantidades. Los métodos de la presente invención reducen
sustancialmente el tiempo requerido para sintetizar el tetrafosfato
de diuridina, preferiblemente hasta tres días o menos. Las sales de
sodio y amonio novedosas de
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato,
preparadas mediante estos métodos, son estables, solubles, no
tóxicas y fáciles de manejar durante la fabricación. Se prefiere la
sal tetraamónica; la sal tetrasódica es la más preferida.
Fórmula
I
en la
que:
X es Na, NH_{4} o H, siempre que todos los
grupos X no sean H.
El método para sintetizar los compuestos de
fórmula I, y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos,
se lleva a cabo generalmente mediante las etapas siguientes: 1)
disolver la uridina o los compuestos nucleotídicos de uridina de
las fórmulas IIa-d en un disolvente orgánico, polar
y aprótico y una amina hidrófoba; 2) fosforilar con un agente
fosforilante de las fórmulas IVa-b y/o activar con
un agente activante de las fórmulas IIIa-c; y 3)
purificar mediante cromatografía de intercambio iónico.
Otro aspecto de la presente invención son los
usos de los compuestos de fórmula I para la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de diversos estados de enfermedad,
incluyendo, pero sin limitarse a ellos: enfermedades pulmonares
obstructivas crónicas, sinusitis, otitis media, obstrucción del
conducto nasolagrimal, enfermedad xeroftálmica, desprendimiento de
retina, neumonía y esterilidad femenina o irritación producida por
sequedad vaginal.
Otro aspecto de la presente invención es una
composición farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I,
junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
La presente invención prevé nuevos métodos para
la síntesis del dinucleótido terapéutico,
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato,
y demuestra su aplicabilidad para la producción de grandes
cantidades. Los métodos de la presente invención reducen
sustancialmente el periodo de tiempo requerido para sintetizar el
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato,
preferiblemente hasta tres días o menos. Las sales de amonio y de
sodio del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
(fórmula I) preparadas mediante estos métodos son estables,
solubles, no tóxicas y fáciles de manejar durante la
fabricación.
La presente invención prevé además compuestos de
fórmula I:
\newpage
Fórmula
I
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en la
que:
X es Na, NH_{4} o H, siempre que todos los
grupos X no sean H.
Las sales de sodio y de amonio del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
tienen muchas ventajas. Las sales de sodio y de amonio proporcionan
buenos perfiles de estabilidad a largo plazo, en comparación con
las de cationes divalentes (por ejemplo, Ca^{2+}, Mg^{2+},
Mn^{2}_{+}) que catalizan la hidrólisis de los ésteres de
fosfato. La sal tetrasódica del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
no irrita el pulmón ni los ojos. Otros cationes pueden irritar los
pulmones, los ojos y otros epitelios mucosos o, en cualquier caso,
no son bien tolerados por el cuerpo humano. Estas sales inorgánicas
de sodio y amonio confieren excelente solubilidad en agua, en
comparación con las sales de amina hidrófobas, tales como de tri y
tetrabutilamonio, y sales similares. La alta solubilidad en agua es
una ventaja importante para la flexibilidad en las formulaciones
farmacéuticas de concentración variable. Las sales tetraamónicas y
tetrasódicas del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
también son ventajosas porque se purifican fácilmente mediante
cromatografía iónica acuosa en la que no se usan disolventes
orgánicos. Además, estas sales se manejan fácilmente como sólidos
blancos y esponjosos, en comparación con un aceite o goma como
algunas sales de amina.
Se prefiere la sal tetrasódica.
Los compuestos de fórmula I pueden utilizarse
para facilitar el aclaramiento de las secreciones mucosas de los
pulmones de un sujeto, tal como un mamífero, incluyendo los seres
humanos, que necesita el tratamiento por diversos motivos,
incluyendo fibrosis quística, bronquitis crónica, asma,
bronquiectasia, retención de mucosa posoperatoria, neumonía,
discinesia ciliar primaria (M. J. Stutts, III, et al.,
patente de los EE.UU. número 5.635.160; publicación internacional
PCT WO 96/40059) y para la prevención y el tratamiento de neumonía
en pacientes inmovilizados (K. M. Jacobus y H. J. Leighton, patente
de los EE.UU. número 5.763.447). Otros usos terapéuticos incluyen el
tratamiento de la sinusitis (publicación internacional PCT WO
98/03177), otitis media (publicación internacional PCT WO
97/29756), xeroftalmía, desprendimiento de retina, obstrucción del
conducto nasolagrimal, el tratamiento de la esterilidad femenina y
la irritación debida a sequedad vaginal mediante el aumento de las
secreciones de mucosidad y la hidratación de la superficie
epitelial, y la mejora del rendimiento de los atletas.
Los compuestos de fórmula I pueden administrarse
por vía oral, tópica, parenteral, mediante inhalación o aerosol, por
vía intraoperatoria, rectal o vaginal en formulaciones unitarias de
dosificación que contienen excipientes, adyuvantes y vehículos
convencionales no tóxicos y farmacéuticamente aceptables. La
expresión por vía tópica, tal como se utiliza en el presente
documento, incluye parches, geles, cremas, pomadas, supositorios,
óvulos vaginales o gotas para la nariz, oídos u ojos. El término
parenteral, tal como se usa en el presente documento, incluye
inyecciones subcutáneas, inyección intravenosa, intramuscular o
intraesternal o técnicas de infusión. Además, se prevé una
formulación farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula I
general y un vehículo farmacéuticamente aceptable. Uno o más
compuestos de fórmula I general pueden estar presentes en asociación
con uno o más vehículos o diluyentes o adyuvantes no tóxicos y
farmacéuticamente aceptables y, si se desea, otros principios
activos. Uno de tales vehículos podrían ser azúcares, en los que los
compuestos pueden incorporarse íntimamente en la matriz mediante
vitrificación o simplemente mezclado con el vehículo (por ejemplo,
lactosa, sacarosa, trehalosa, manitol) u otros excipientes
aceptables para la administración en el pulmón o las vías
respiratorias.
Puede administrarse uno o más compuestos de
fórmula I general por separado o juntos, o por separado o junto con:
mucolíticos tales como ADNasa (Pulmozyme®) o acetilcisteína,
antibióticos, incluyendo pero sin limitarse a Tobramycin® inhalado;
antiinflamatorios no esteroideos, antivíricos, vacunas,
descongestionantes y corticosteroides.
Las composiciones farmacéuticas que contienen los
compuestos de fórmula I general pueden estar en una forma adecuada
para el uso oral, por ejemplo, como comprimidos, comprimidos
oblongos, pastillas, suspensiones acuosas o aceitosas, polvos o
gránulos dispersables, emulsión, cápsulas duras o blandas o jarabes
o elixires. Las composiciones destinadas al uso oral pueden
prepararse según cualquier método conocido en la técnica para la
fabricación de composiciones farmacéuticas y tales composiciones
pueden contener uno o más agentes seleccionados del grupo que
consiste en agentes edulcorantes, agentes aromatizantes, agentes
colorantes y agentes conservantes, con el fin de proporcionar
preparaciones farmacéuticamente elegantes y de sabor agradable. Los
comprimidos contienen el principio activo en mezcla con excipientes
no tóxicos farmacéuticamente aceptables que son adecuados para la
fabricación de comprimidos. Estos excipientes pueden ser, por
ejemplo, diluyentes inertes, tales como carbonato de calcio,
carbonato de sodio, lactosa, fosfato de calcio o fosfato de sodio;
agentes de granulación y disgregantes, por ejemplo, almidón de maíz
o ácido algínico; agentes aglutinantes, por ejemplo, almidón,
gelatina o goma arábiga; y agentes lubricantes, por ejemplo,
estearato de magnesio, ácido esteárico o talco. Los comprimidos
pueden estar sin recubrir o pueden recubrirse mediante técnicas
conocidas para retrasar la disgregación y la absorción en el tubo
digestivo y de esta forma proporcionar una acción sostenida durante
un periodo más largo. Por ejemplo, puede emplearse un material de
acción retardada tal como el monoestearato de glicerilo o el
diestearato de glicerilo.
Las formulaciones para el uso oral también pueden
presentarse como cápsulas de gelatina dura en las que el principio
activo se mezcla con un diluyente sólido inerte, por ejemplo,
carbonato de calcio, fosfato de calcio o caolín, o como cápsulas de
gelatina blanda en las que el principio activo se mezcla con agua o
un medio aceitoso, por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite mineral
o aceite de oliva.
Las suspensiones acuosas contienen los principios
activos en mezcla con excipientes adecuados para la fabricación de
suspensiones acuosas. Tales excipientes son agentes de suspensión,
por ejemplo: carboximetilcelulosa de sodio, metilcelulosa y alginato
de sodio. Los agentes dispersantes o humectantes pueden ser un
fosfatidato que se produce naturalmente o productos de condensación
de un óxido de alileno con ácidos grasos, o productos de
condensación del óxido de etileno con alcoholes alifáticos de cadena
larga, o productos de condensación del óxido de etileno con ésteres
parciales de ácidos grasos y un hexitol, o productos de condensación
del óxido de etileno con ésteres parciales derivados de ácidos
grasos y anhídridos de hexitol. Los expertos en la técnica
reconocerán muchos de los excipientes y agentes humectantes
específicos englobados por la descripción general anterior. Las
suspensiones acuosas también pueden contener uno o más conservantes,
por ejemplo, p-hidroxibenzoato de etilo o
n-propilo, uno o más agentes colorantes, uno o más
agentes aromatizantes y uno o más agentes edulcorantes, tales como
sacarosa o
sacarina.
sacarina.
Polvos dispersables y gránulos adecuados para la
preparación de una suspensión acuosa mediante la adición de agua
proporcionan los principios activos en mezcla con un agente
dispersante o humectante, agente de suspensión y uno o más
conservantes. Ejemplos de agentes dispersantes o humectantes y
agentes de suspensión adecuados son los ya mencionados
anteriormente. También pueden estar presentes excipientes
adicionales, por ejemplo, agentes edulcorantes, aromatizantes y
colorantes.
Los compuestos de fórmula I pueden administrarse
por vía parenteral en un medio estéril. El fármaco, dependiendo del
vehículo y la concentración utilizados, puede suspenderse o
disolverse en el vehículo. Ventajosamente, pueden disolverse en el
vehículo adyuvantes tales como anestésicos locales, conservantes y
agentes tamponantes. La preparación inyectable estéril puede ser una
disolución o suspensión inyectable estéril en un diluyente o
disolvente no tóxico aceptable por vía parenteral. Entre los
vehículos y disolventes aceptables que pueden emplearse están el
agua estéril, la solución salina o la solución de Ringer (solución
de cloruro sódico compuesta). Los compuestos de fórmula I general
también pueden administrarse en la forma de supositorios para la
administración vaginal, rectal o en el oído del fármaco. Estas
composiciones pueden prepararse mezclando el fármaco con un
excipiente adecuado no irritante que sea sólido a las temperaturas
habituales pero líquido a la temperatura corporal y que, por tanto,
se fundirá para liberar el fármaco. Tales materiales son manteca de
cacao y polietilenglicoles.
Pueden administrarse disoluciones de los
compuestos de fórmula I mediante la instalación intraoperatoria en
cualquier zona del organismo.
Niveles de dosis única del orden de desde
aproximadamente 1 hasta aproximadamente 400 mg, preferiblemente en
el intervalo de 10 a 300 mg y, más preferiblemente, en el intervalo
de 25 a 250 mg, son útiles en el tratamiento de los estados
respiratorios indicados anteriormente. Niveles de dosis única del
orden de desde aproximadamente 0,0005 hasta aproximadamente 5 mg,
preferiblemente en el intervalo de 0,001 a 3 mg y, más
preferiblemente, en el intervalo de 0,025 a 1 mg, son útiles en el
tratamiento de los estados oftálmicos anteriormente indicados. La
cantidad de principio activo que puede combinarse con los materiales
vehículo para producir una forma de dosis única variará dependiendo
del huésped tratado y del modo particular de administración. Sin
embargo, se entenderá que el nivel de dosis específico para
cualquier paciente particular dependerá de una variedad de factores,
incluyendo la actividad del compuesto específico empleado, la edad,
el peso corporal, la salud general, el sexo, la dieta, el momento de
administración, la vía de administración y la tasa de excreción, la
combinación del fármaco y la gravedad de la enfermedad particular
que se somete a tratamiento.
Los métodos sintéticos descritos a continuación
engloban varias estrategias sintéticas para producir
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato.
En general, todos los métodos utilizan uridina o compuestos
nucleotídicos de uridina de la fórmula IIa-d como
materiales de partida, que se disuelven en un disolvente orgánico,
polar y aprótico (por ejemplo, dimetilformamida, dimetilsulfóxido,
dioxano, N-metilpirrolidona, fosfato de trimetilo) y
una amina hidrófoba (por ejemplo, trietilamina, tributilamina,
trioctilamina, 2,4,6-colidina, tetrabutilamonio, tri
y tetraalquilaminas, aminas heterocíclicas). El producto se obtiene
fosforilando con un agente fosforilante de fórmula IV (por ejemplo,
oxicloruro de fósforo, pirofosfato, cloruro de pirofosforilo) o
activando un grupo fosfato con un agente activante de fórmula III
(por ejemplo, carbonildiimidazol, una alquil o arilcarbodiimida, un
fosfocloridato de alquilo o arilo), respectivamente, con varios
medios de purificación posteriores bien conocidos por los expertos
en la técnica, incluyendo, pero sin limitarse a, cromatografía
iónica (por ejemplo DEAE Sephadex, DEAE-celulosa,
Dowex 50, resinas de intercambio aniónico y catiónico).
Los materiales de partida de
\beta-D-ribofuranosil-pirimidina,
uridina, uridina-5'-monofosfato
(UMP), uridina-5'-difosfato (UDP) y
uridina-5'-trifosfato (UTP) se
muestran como ácidos libres en las fórmulas IIa-d a
continuación, respectivamente. Estos materiales están todos
comercialmente disponibles en una gran cantidad en diversas formas
de sal.
Fórmula IIa:
Uridina
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Fórmula IIb:
UMP
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
y sales de los mismos;
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Fórmula IIc:
UDP
\newpage
y sales de los mismos;
\vskip1.000000\baselineskip
Fórmula IId:
UTP
y sales de los
mismos.
Los agentes activantes carbodiimida, carbonilo
activado y compuestos de fósforo activado se muestran en las
fórmulas IIIa-c generales a continuación,
respectivamente.
Fórmula IIIa:
Carbodiimida
en la que R_{1} y R_{2} son alquilo o
cicloalquilo C_{1}-C_{8}, alquilo o
cicloalquilo C_{1}-C_{8} opcionalmente
sustituidos (por ejemplo, grupos hidroxilo y amino); arilo o arilo
opcionalmente sustituido (por ejemplo, grupos hidroxilo y amino).
Compuestos preferidos de fórmula IIIa son diciclohexilcarbodiimida y
clorhidrato de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida.
Fórmula IIIb: Carbonilo
activado
en la que X es imidazol, tetrazol y/o halógeno.
Compuestos preferidos de fórmula IIIb son carbonildiimidazol y
carbonilditriazol.
Fórmula IIIc: Fósforo
activado
R_{1} ---
\melm{\delm{\para}{R _{2} }}{P}{\uelm{\dpara}{O}} ---
X
en la que R_{1} y R_{2} son alquilo o
cicloalquilo C_{1}-C_{8}, alquilo, alcoxilo o
cicloalquilo C_{1}-C_{8} opcionalmente
sustituidos (por ejemplo, grupos hidroxilo y amino); arilo,
ariloxilo, alcoxilo o arilo, ariloxilo o alcoxilo opcionalmente
sustituidos (por ejemplo, grupos hidroxilo y amino) y/o halógeno; y
X es halógeno. Compuestos preferidos de fórmula IIIc son
fosforocloridato de difenilo, fosforodicloridato de fenilo,
dicloruro fenilfosfónico y cloruro
difenilfosfínico.
Los agentes mono y difosforilantes se muestran a
continuación en las fórmulas IVa-b generales.
Fórmula IVa: Agentes
monofosforilantes
X ---
\melm{\delm{\para}{X}}{P}{\uelm{\dpara}{O}} ---
X
en la que X es halógeno. Un compuesto preferido
de fórmula IVa es el oxicloruro de
fósforo.
Fórmula IVb: Agentes
difosforilantes
X ---
\melm{\delm{\para}{X}}{P}{\uelm{\dpara}{O}} --- O ---
\melm{\delm{\para}{X}}{P}{\uelm{\dpara}{O}} ---
X
en la que X es oxígeno, hidroxilo o halógeno, y
sales de los mismos. Compuestos preferidos de fórmula IVb son el
cloruro de pirofosforilo y el
pirofosfato.
Los expertos en la técnica reconocerán que la
presente invención no se limita a los siguientes ejemplos y que
pueden variarse las etapas de los siguientes ejemplos.
La sal disódica de la
uridina-5'-difosfato (Yamasa,
Choshi, Japón; 600 gramos) se disolvió en agua desionizada (5,4 L).
La disolución se hizo pasar a través de una columna Dowex 50Wx4
H^{+} (Dow Chemical). Las fracciones que contenían
uridina-5'-difosfato se reunieron y
se neutralizaron con tributilamina (Aldrich, St. Louis; 300 mL). Las
fracciones neutralizadas se concentraron hasta obtener un aceite
usando un evaporador giratorio a una temperatura del baño de 55 -
60ºC. El aceite se disolvió en dimetilformamida seca (Aldrich, 3 L)
y luego se secó concentrando hasta obtener un aceite usando un
evaporador giratorio (temperatura del baño a 55 - 60ºC). Esta etapa
se repitió dos veces. El aceite se disolvió de nuevo en
dimetilformamida (3 L) y se añadió
1,1-carbonildiimidazol (Aldrich; 100 g). La
disolución se calentó a 50ºC durante 2 horas y media. Se añadió una
cantidad adicional de agente activante (33 gramos) y se calentó
continuamente durante 2 horas y media adicionales. La disolución se
concentró de nuevo hasta obtener un aceite en un evaporador
giratorio (temperatura del baño a 55 - 60ºC). El aceite resultante
se disolvió en agua desionizada hasta obtener una conductividad
igual a la de NH_{4}HCO_{3} 0,2 M. La disolución se cargó
entonces en una columna de Sephadex DEAE-A25
(Pharmacia, Upsala, Suecia; hinchada previamente en NaHCO_{3} 1,0
M y lavada con 2 volúmenes de columna de H_{2}O desionizada). La
columna se eluyó con las siguientes disoluciones en el siguiente
orden: 60 L de NH_{4}HCO_{3} 0,25 M, 120 L de NH_{4}HCO_{3}
0,275 M, 40 L de NH_{4}HCO_{3} 0,30 M y 40 L de
NH_{4}HCO_{3} 0,35 M. Las fracciones que tenían cantidades
suficientes de tetrafosfato de diuridina puro se reunieron tal como
se determinó por análisis de HPLC y se concentraron en un evaporador
giratorio (temperatura del baño a 55 - 60ºC). El residuo resultante
se disolvió en agua desionizada (1,5 L) y se concentró en un
evaporador giratorio. Esta etapa se repitió 15 veces o hasta que se
eliminó el exceso del tampón bicarbonato. El aceite resultante se
disolvió en una cantidad suficiente de agua desionizada para formar
una disolución al 10% aproximadamente, la disolución se cargó en una
columna Dowex 50Wx4 Na^{+} (Dow) y se eluyó con agua desionizada.
Las fracciones que contenían U_{2}P_{4} se reunieron y se
concentraron hasta obtener una disolución al 10 - 15%
aproximadamente, que se liofilizó hasta dar la sal tetrasódica de
U_{2}P_{4} como un sólido blanco (150 g con un rendimiento del
25% aproximadamente basado en la
uridina-5'-difosfato).
Debido a la falta de datos espectroscópicos
adecuados de los dinucleótidos nonadenilados en la bibliografía, se
realizó una elucidación estructural completa de la sal tetrasódica
del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
empleando técnicas analíticas modernas. Por espectrometría de masas
se determinó que el peso molecular era de 878 [m/z 855,
(M-Na^{+})^{-}], lo que confirmó la
fórmula molecular C_{18}H_{22}N_{4}O_{23}P_{4}\cdot4Na.
La masa exacta medida para
C_{18}H_{22}N_{4}O_{23}P_{4}\cdot3Na
[(M-Na^{+})^{-}; la calculada fue de
854,9318] fue de 854,9268. La masa medida difirió de la masa teórica
en 5,0 unidades de milimasa (5,9 ppm) para un nivel de confianza del
99,7%. El análisis de humedad de Karl Fisher dio un valor del 1,73%
de H_{2}O y se obtuvo la confirmación adicional de la fórmula
molecular a partir del análisis elemental: calculado para Na =
10,70, hallado 10,81%; razón C:P calculada 1,74, hallada 1,80,
basándose en la fórmula molecular:
C_{18}H_{22}N_{4}O_{23}P_{4}\cdot4,2Na\cdot1,1H_{2}O
(FW (peso fórmula) = 902,4 g/mol). El espectro infrarrojo mostró una
señal ancha a 3422 cm^{-1} y una señal a 1702 cm^{-1}, lo que
indica la presencia de grupos funcionales hidroxilo (tensión
O-H) y carbonilo (tensión C=O). Además, se observó
una tensión P=O del fosfato a 1265 cm^{-1}. El espectro UV en agua
mostró una \lambda_{max} de 262 nm con una absortividad molar
(\varepsilon) de 17.004. Se determinó por polarimetría que la
rotación específica a 25ºC (c = 1, H_{2}O) era de -9,56º.
Los espectros de RMN son: ^{1}H RMN (D_{2}O,
TMS) \delta 4,11 (m, 2H), 4,14 (m, 1H), 4,25 (m, 1H), 4,27 (m,
1H), 5,84 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 5,86 (d, J = 5,4 Hz, 1 H), 7,81 (d, J
= 8,1 Hz); ^{13}C RMN (D_{2}O, TMS) \delta 65,1 (d, J = 5,5
Hz), 69,7, 73,5, 83,4 (d, J = 9,4 Hz), 88,1, 102,8, 141,5, 152,9,
167,5; ^{31}P RMN (D_{2}O, H_{3}PO_{4} patrón) \delta
-22,32 (m), -10,75 (m). El espectro de ^{1}H acoplado a ^{31}P
mostró un ensanchamiento del multiplete en \delta -10,75 ppm,
debido a la introducción del acoplamiento de ^{1}H. Por tanto,
este multiplete se confirmó como P_{\alpha}. No hubo efecto del
acoplamiento de ^{1}H en el multiplete a -22,23 ppm, asignándose
éste por defecto como P_{\beta}. Se observó un Efecto Nuclear
Overhauser (NOE) para los protones del azúcar H_{6} con H_{2} y
H_{3}. Dado que no es posible para H_{5} mostrar un NOE con los
protones del azúcar, se confirma H_{6}. Adicionalmente, se
confirma la sustitución en N_{1}, porque no es posible un NOE
pirimidina - azúcar para una estructura sustituida en N_{3}.
Se realizaron experimentos de RMN bidimensional
adicionales para verificar la conectividad. HMQC (heteronuclear
múltiple-quantum correlation, correlación
heteronuclear de cuanto múltiple) muestra conectividad para H_{5}
con C_{5} y H_{6} con C_{6}, lo que confirmó C_{5} y
C_{6}. Se observó conectividad COSY (correlation spectroscopy,
espectroscopía de correlación) y NOE para H_{5} con H_{6}, lo
que verificó H_{5}. Se observó conectividad de tres enlaces HMBC
(heteronuclear múltiple-bond correlation,
correlación heteronuclear de múltiples enlaces) para: H_{6} con
C_{1'}, C_{6} con H_{1'}, H_{1'} con C_{2}, H_{6} con
C_{2}. Estos datos confirman así sustitución en H_{1}, C_{2}
y N_{1}. La conectividad COSY de H_{1'} con H_{2'} confirma
H_{2'} y la conectividad HMQC de H_{1'} con C_{1'} y de
H_{2'} con C_{2'} confirma C_{1'} y C_{2'}. Adicionalmente,
HMBC muestra la conectividad J de dos enlaces de H_{5} con
C_{4}, lo que confirma C_{4}. Un espectro de ^{13}C DEPT
(distortionless enhancement by polarization transfer, aumento de la
transferencia de polarización sin distorsión) con mult = 1,5 muestra
el carbono en \delta 65,1 invertido en relación con el resto de
los carbonos. Esta observación confirma que C_{5'} es un metileno.
El acoplamiento de ^{31}P a los carbonos en \delta 65,1 y 83,4
confirma C_{5'} y C_{4'}, porque C_{4'} es el único metino
acoplado. Además, HMQC muestra conectividad para C_{5'} con
H_{5'} y C_{4'} con H_{4'}, lo que confirma H_{4'} y
H_{5'}. Se observó un NOE para H_{1'} con H_{4'}, H_{6} con
H_{2'} y H_{6} con H_{3'}, lo que confirma la configuración
del azúcar como anómero \beta.
En conclusión, la sal tetrasódica del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
se sintetizó en una escala de 150 g con un rendimiento del 25% a
partir de materiales de partida comercialmente disponibles con un
tiempo de reacción total de 5 horas. El producto bruto se purificó
eficazmente mediante cromatografía de intercambio iónico y la
estructura del producto de reacción se demostró inequívocamente
utilizando espectroscopia de masas, RMN y otras técnicas
analíticas.
La
uridina-5'-monofosfato (Sigma,
Milwaukee, 3,0 g, 9,26 mmoles) se disolvió en DMF (dimetilformamida)
seca (10 mL) y tributilamina (Aldrich, 2 mL). La disolución se
evaporó a vacío a 40ºC hasta obtener un aceite. El residuo se
disolvió en DMF seca (Aldrich, 8 mL) para formar una disolución. Se
añadió carbonildiimidazol (Aldrich, 1,65 g, 10,18 mmoles) a esta
disolución. La reacción se calentó a 50ºC durante una hora. La
uridina-5'-trifosfato (Yamasa, 5,60
g, 10,18 mmoles) preparada como la sal de tributilamonio anhidra en
DMF (5 mL) y tributilamina (2 mL), tal como se describe en el
ejemplo 3 siguiente, se añadieron a la disolución de reacción. Se
permitió que la mezcla se agitara a 50ºC durante tres días cuando la
disolución se evaporó a vacío hasta obtener un aceite, se redisolvió
en agua (5 mL) y se purificó mediante cromatografía en columna (300
\times 50 mm) (Sephadex DEAE-A25, 40 - 120 \mu,
Aldrich, hinchada previamente en NaHCO_{3} 1,0 M y lavada con 2
volúmenes de columna de H_{2}O desionizada (gradiente
H_{2}O \rightarrow NH_{4}HCO_{3} 0,3 M). Las fracciones puras se concentraron a vacío a 35ºC y se añadió H_{2}O y se volvió a evaporar 5 veces hasta obtener la sal tetraamónica del tetrafosfato de diuridina como un sólido blanco (2,37 g, rendimiento del 30%): 92,11% puro por HPLC con el mismo tiempo de retención que el patrón. Además, la sal tetraamónica se analizó por FABMS (fast atom bombardment mass spectroscopy, espectroscopía de masas por bombardeo de átomos rápidos) para dar una masa de [C_{18}H_{25}N_{4}O_{23}P_{4} (M-H^{+})^{-}; calculada de 788,9860] de 788,9857, lo que confirma una fórmula original de C_{18}H_{26}N_{4}O_{23}P_{4} para el ácido libre].
H_{2}O \rightarrow NH_{4}HCO_{3} 0,3 M). Las fracciones puras se concentraron a vacío a 35ºC y se añadió H_{2}O y se volvió a evaporar 5 veces hasta obtener la sal tetraamónica del tetrafosfato de diuridina como un sólido blanco (2,37 g, rendimiento del 30%): 92,11% puro por HPLC con el mismo tiempo de retención que el patrón. Además, la sal tetraamónica se analizó por FABMS (fast atom bombardment mass spectroscopy, espectroscopía de masas por bombardeo de átomos rápidos) para dar una masa de [C_{18}H_{25}N_{4}O_{23}P_{4} (M-H^{+})^{-}; calculada de 788,9860] de 788,9857, lo que confirma una fórmula original de C_{18}H_{26}N_{4}O_{23}P_{4} para el ácido libre].
Una disolución de la sal trisódica de la
uridina-5'-trifosfato (UTP)
(ProBioSint, Varese, Italia; 5,86 g, 0,01 moles) en agua (5 mL) se
hizo pasar a través de una columna de resina de intercambio de
cationes fuerte BioRad AG-MP 50 (Aldrich) en su
forma de tributilamina (volumen de lecho de 50 mL) y se eluyó con
agua destilada (aproximadamente 300 mL). A esta disolución se añadió
tributilamina (Aldrich; 5 mL), y la suspensión se agitó hasta que el
pH de la fracción acuosa se había elevado hasta 8. Las fases se
separaron y la disolución acuosa se evaporó hasta que quedó un
volumen pequeño, después se liofilizó durante la noche. El residuo
se disolvió en dimetilformamida seca (Aldrich; 20 mL) y el
disolvente se evaporó a 0,1 mm Hg. La sal de tributilamina seca se
enrasó hasta 100 mL con acetona anhidra para dar una disolución
madre (0,1 M en UTP). Se añadió diciclohexilcarbodiimida (DCC)
(Baker, Phillipsburg; 0,227 g, 1,2 mmoles) a una alícuota de la
disolución anterior de UTP (10 mL, 1,0 mmoles) y la disolución se
agitó a temperatura ambiente durante 30 minutos. La mezcla se añadió
a la sal de trietilamina de la
uridina-5'-monofosfato (2,0 mmoles,
preparada mediante la adición de trietilamina (0,5 mL) a una
disolución de
uridina-5'-monofosfato (UMP) (Sigma;
0,648 g en DMF) y se evaporó hasta sequedad). Esta suspensión se
evaporó después hasta sequedad, el residuo se enrasó hasta 5,0 mL en
DMF seca y se reservó a 40ºC durante 24 horas. La mezcla de reacción
se separó por cromatografía de intercambio iónico semipreparativa
(columna Hamilton PRP X-100), eluyendo con un
gradiente de bicarbonato de amonio 0 - 1,0 M, 5 mL/min, 30 minutos.
El tetrafosfato de dinucleótido eluyó entre 21 y 23 minutos; el
producto (rendimiento del 76,7% basado en UTP) se cuantificó por
comparación de su absorción ultravioleta a \lambda_{max} de 263
nm con la de la disolución patrón de
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato.
La conversión de UTP en
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
puede intensificarse mediante la activación de la sal de
tributilamina (0,1 mmoles) con un gran exceso de DCC (0,1 g, 5
mmoles); en este caso, la diciclohexilurea depositada se eliminó
mediante filtración, la mezcla de reacción se extrajo con éter (10
mL) y el residuo se disolvió en DMF seca antes del tratamiento con
tributilamina UMP (0,2 mmoles). Con la separación cromatográfica de
la mezcla de reacción y la cuantificación por absorción ultravioleta
como en el ejemplo 3A anterior, el producto de tetrafosfato de
uridina constituyó el 50,7% de las especies de uridilato en la
mezcla, lo que corresponde a una conversión del UTP del 95,9%.
La
uridina-5'-monofosfato (UMP) (0,324
g, 1,0 mmoles) se disolvió en una mezcla de DMF seca (5 mL) y
tributilamina (237 \muL, 1 mmol), la disolución se evaporó hasta
sequedad y después dos veces más con DMF para dar la sal de
tributilamina anhidra. El residuo se disolvió en DMF (5 mL) y se
añadió carbonildiimidazol (CDI) (0,81 g, 5 mmoles). La disolución se
reservó durante 3 horas, después se añadió metanol (324 \muL, 8
mmoles) para destruir el exceso de CDI. La disolución se reservó
durante una hora. Se añadió pirofosfato de tributilamina (Sigma,
0,228 g, 0,5 mmoles) y la suspensión se agitó bajo nitrógeno a
temperatura ambiente. Tras 3 horas, la reacción se extinguió con
agua y la mezcla se sometió a HPLC como en el ejemplo 3A anterior.
El rendimiento de
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
tal como se cuantificó por su absorbancia a 263 nm fue del 9,3%.
La sal de tributilamina anhidra del UMP (1,0
mmol) preparada esencialmente como anteriormente, se disolvió en una
mezcla de dioxano seco (5 mL) y DMF (1 mL). Se añadieron
fosfocloridato de difenilo (0,3 mL) y tributilamina (0,3 mL) y la
disolución se reservó a temperatura ambiente durante 3 horas. El
disolvente se evaporó y el residuo se agitó con éter (\sim 10 mL),
después se reservó a 4ºC durante 30 minutos. El éter se decantó y el
residuo se disolvió en una disolución de pirofosfato de
tributilamina (0,228 g, 0,5 mmoles) en DMF (3 mL). La disolución se
almacenó bajo nitrógeno a temperatura ambiente. Tras 3 horas, la
reacción se extinguió con agua y la mezcla se sometió a HPLC como en
el ejemplo 3A anterior. El rendimiento del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
tal como se cuantificó por su absorbancia a 263 nm fue del 9,6%.
Se disolvió uridina (Aldrich, 0,244 g, 1 mmol) en
fosfato de trimetilo (Aldrich, 5 mL) y se añadió tributilamina (466
\muL, 2 mmoles). La disolución se agitó a 0 grados durante la
adición de oxicloruro de fósforo (0,153 g (93,2 \muL), 1 mmol) y
la suspensión resultante se agitó a 0ºC durante 3 horas. Se añadió
pirofosfato de tributilamina (0,228 g) y la suspensión se agitó a
temperatura ambiente durante 3 horas. La reacción se extinguió con
bicarbonato de trietilamina acuoso 1,0 M y la mezcla se extrajo con
cloruro de metileno para eliminar el fosfato de trimetilo. La
disolución acuosa se sometió a HPLC como en el ejemplo 3A anterior.
La conversión de la uridina en
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato,
tal como se cuantificó por la absorbancia de este último a 263 nm,
fue del 6,83%.
Se disolvió
uridina-5'-monofosfato (UMP) (64,8
mg, 0,2 mmoles) en piridina seca (1 mL) y se agitó en hielo durante
la adición del cloruro de pirofosforilo (13,9 \muL (25 mg), 0,1
mmol). La disolución se volvió turbia casi inmediatamente, después
se formó un abundante precipitado blanco semicristalino que se
convirtió en una masa gomosa en un plazo de 1 - 2 minutos. La mezcla
se almacenó a temperatura ambiente durante la noche, después se
extinguió con agua y se sometió a HPLC como en el ejemplo 3A
anterior. El rendimiento del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato,
tal como se cuantificó por su absorbancia a 263 nm, fue del 15,8%.
Se obtuvo una cantidad sustancial de
P^{1},P^{3}-di(uridina-5')-trifosfato
(25,4%) como el subproducto principal.
Se determinó la solubilidad de la sal tetrasódica
del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
en agua añadiendo porciones de sólido a un volumen conocido de agua
desionizada hasta que la disolución se volvió turbia. De esta forma,
se determinó que la solubilidad máxima en agua era de
aproximadamente 900 mg/mL. Estudios de estabilidad del sólido o de
disoluciones acuosas incubadas a temperaturas bajas (5ºC) y elevadas
(40ºC) demostraron que se produce menos del 1,5% de degradación
durante un periodo de tres meses, tal como se determinó por análisis
de HPLC. De esta forma se determinó que la sal tetrasódica del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
tiene un excelente perfil de solubilidad y estabilidad adecuado
para las aplicaciones farmacéuticas.
El perfil toxicológico no clínico de la sal
tetrasódica del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
se ha evaluado en una batería de ensayos genéticos de toxicología
que incluyen el ensayo de mutación inversa en bacterias, la prueba
citogenética in vitro en mamíferos, la prueba de mutación
genética in vitro en células de mamíferos y el ensayo
citogenético del micronúcleo en ratones. Un estudio en conejos
examinó la tolerancia ocular local y la toxicidad ocular subcrónica
tras múltiples dosis diarias durante un periodo de seis semanas.
Además, la sal tetrasódica del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
también se ha probado en dos estudios de toxicidad tras la
inhalación breve tras una dosis única en la rata y el perro y en un
estudio de toxicidad tras la administración por vía intravenosa con
una dosis única en perros.
Los resultados de estos estudios muestran que la
sal tetrasódica del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
no es genotóxica en una batería de ensayos genéticos de toxicología.
No se observaron hallazgos adversos en los estudios de toxicología
ocular. Se observó un grado bajo de toxicidad aguda en la inhalación
de una dosis única (ratas, perros) y en estudios de toxicidad por
vía intravenosa (perros). Por tanto, se determinó que la sal
tetrasódica del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
tiene un excelente perfil de toxicología con un amplio margen de
seguridad para su dosificación en seres humanos.
Se evaluó la sal tetrasódica del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
en un estudio de seguridad y tolerancia de fase I, doble ciego,
controlado por placebo, de aumento de la dosis, en 75 hombres
voluntarios sanos normales. Se evaluaron 40 no fumadores y 35
fumadores en 5 cohortes de dosificación de 16 voluntarios,
compuestas de 12 que recibieron una dosis única en aerosol de la sal
tetrasódica del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
(20 - 400 mg) y 4 que recibieron placebo (solución salina normal).
No se informó de acontecimientos adversos graves. No hubo cambios
importantes en FEV_{1} (volumen espiratorio máximo en el primer
segundo), FVC (capacidad vital máxima), MMEF (flujo mesoespiratorio
máximo), datos de laboratorio, ECG (electrocardiograma) de 12
derivaciones ni en los resultados del análisis de orina, ni en los
grupo placebo ni en los de principio activo. En los fumadores, la
sal tetrasódica del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
produjo un aumento dependiente de la dosis de 2 veces a 7 veces en
el peso del esputo expectorado en un plazo de 5 minutos desde la
dosificación, y la estimulación de la expectoración del esputo se
mantuvo durante la siguiente hora de recogida de esputos. También se
observó el efecto de la sal tetrasódica del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
de inducir la expectoración del esputo en los no fumadores. En
conclusión, la sal tetrasódica del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
es segura y se tolera bien en hombres normales y es eficaz en la
estimulación de la expectoración del esputo cuando se compara con
placebo.
Claims (19)
1. Sal tetrasódica del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato.
2. Composición que comprende al menos un 92% de
la sal tetraamónica del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato
pura.
3. Procedimiento para la síntesis de compuestos
de fórmula I y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos,
comprendiendo dicho procedimiento:
- a)
- disolver la uridina o un compuesto nucleotídico de uridina de las fórmulas IIa-d en un disolvente orgánico, polar y aprótico y una amina hidrófoba;
- b)
- fosforilar con un agente fosforilante de una de las fórmulas IVa-b para dar un compuesto de fórmula I o activar un grupo fosfato de dicho compuesto nucleotídico de uridina con un agente activante de una de las fórmulas IIIa-c; y hacerlo reaccionar con un compuesto adecuado de fórmula IIb-d para dar un compuesto de fórmula I; y
- c)
- purificar mediante cromatografía de intercambio iónico dicho compuesto de fórmula I, y las sales farmacéuticamente aceptables del mismo;
en el que
Fórmula
I
\vskip1.000000\baselineskip
en la que X se selecciona del grupo que consiste
en: Na, NH_{4} y H, siempre que todos los grupos X no sean
H;
Fórmula IIa:
Uridina
Fórmula IIb:
UMP
y sales de los
mismos;
Fórmula IIc:
UDP
y sales de los
mismos;
Fórmula IId:
UTP
y sales de los
mismos.
Fórmula IIIa:
Carbodiimida
en la que R_{1} y R_{2} se seleccionan
independientemente del grupo que consiste en: alquilo
C_{1}-C_{8}, cicloalquilo y arilo, en la que
dicho alquilo, cicloalquilo o arilo están opcionalmente sustituidos
con grupos hidroxilo o
amino;
Fórmula IIIb: Carbonilo
activado
en la que X se selecciona independientemente del
grupo que consiste en: imidazol, tetrazol y
halógeno;
Fórmula IIIc: Fósforo
activado
R_{1} ---
\melm{\delm{\para}{R _{2} }}{P}{\uelm{\dpara}{O}} ---
Xen la que X es halógeno y R_{1} y R_{2} se
seleccionan cada uno independientemente del grupo que consiste en:
alquilo C_{1}-C_{8}, cicloalquilo, alcoxilo
C_{1}-C_{8}, cicloalcoxilo, arilo, ariloxilo y
halógeno, en la que dicho alquilo, cicloalquilo, alcoxilo,
cicloalcoxilo, arilo o ariloxilo están opcionalmente sustituidos con
grupos hidroxilo, amino o
halógeno;
Fórmula IVa: Agentes
monofosforilantes
X ---
\melm{\delm{\para}{X}}{P}{\uelm{\dpara}{O}} ---
Xen la que X es
halógeno;
Fórmula IVb: Agentes
difosforilantes
X ---
\melm{\delm{\para}{X}}{P}{\uelm{\dpara}{O}} --- O ---
\melm{\delm{\para}{X}}{P}{\uelm{\dpara}{O}} ---
Xen la que X se selecciona del grupo que consiste
en: oxígeno, hidroxilo, halógeno, y sales de los
mismos.
4. Procedimiento según la reivindicación 3, en el
que los compuestos de fórmula IIIa se seleccionan del grupo que
consiste en: diciclohexilcarbodiimida y clorhidrato de
1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida.
5. Procedimiento según la reivindicación 3, en el
que los compuestos de fórmula IIIb se seleccionan del grupo que
consiste en: carbonildiimidazol y carbonilditriazol.
6. Procedimiento según la reivindicación 3, en el
que el compuesto de fórmula IIIc se selecciona del grupo que
consiste en: fosforocloridato de difenilo, fosforodicloridato de
fenilo, dicloruro fenilfosfónico y cloruro difenilfosfínico.
7. Procedimiento según la reivindicación 3, en el
que el compuesto de fórmula IVa es oxicloruro de fósforo.
8. Procedimiento según la reivindicación 3, en el
que el compuesto de fórmula IVb se selecciona del grupo que consiste
en: cloruro de pirofosforilo y pirofosfato.
9. Procedimiento según la reivindicación 3, que
comprende disolver un compuesto de fórmula IIc tal como se describe
en la reivindicación 3, en un disolvente orgánico, polar y aprótico
y una amina hidrófoba, tratar con un agente activante de una de las
fórmulas IIIa-c tal como se describe en la
reivindicación 3, y purificar posteriormente mediante
cromatografía.
10. Procedimiento para la preparación de los
compuestos de fórmula I:
en la
que:
X se selecciona del grupo que consiste en: Na,
NH_{4} y H, siempre que todos los grupos X no sean H;
y sales farmacéuticamente aceptables de los
mismos, comprendiendo dicho procedimiento disolver un compuesto de
fórmula IIb tal como se describe en la reivindicación 3, en un
disolvente orgánico, polar y aprótico y una amina hidrófoba, tratar
con un agente activante de una de las fórmulas
IIIa-c tal como se describe en la reivindicación 3,
seguido por hacerlo reaccionar con un compuesto de fórmula IId, tal
como se describe en la reivindicación 3, y purificar posteriormente
mediante cromatografía.
11. Procedimiento según la reivindicación 3, que
comprende disolver un compuesto de fórmula IId tal como se describe
en la reivindicación 3, en un disolvente orgánico, polar y aprótico
y una amina hidrófoba, tratar con una cantidad equimolar de agente
activante de una de las fórmulas IIIa-c tal como se
describe en la reivindicación 3, seguido por hacerlo reaccionar con
un compuesto de fórmula IIb, tal como se describe en la
reivindicación 3, y purificar posteriormente mediante
cromatografía.
12. Procedimiento según la reivindicación 11, por
el que se usa un exceso de agente activante.
13. Procedimiento según la reivindicación 3, que
comprende disolver un compuesto de fórmula IIb tal como se describe
en la reivindicación 3, en un disolvente orgánico, polar y aprótico
y una amina hidrófoba, tratar dicho compuesto con un agente
activante de una de las fórmulas IIIa-c tal como se
describe en la reivindicación 3, seguido por hacerlo reaccionar con
un compuesto adecuado de fórmula IVb tal como se describe en la
reivindicación 3, y purificar posteriormente mediante
cromatografía.
14. Procedimiento para la preparación de los
compuestos de fórmula I:
en la
que:
X se selecciona del grupo que consiste en: Na,
NH_{4} y H, siempre que todos los grupos X no sean H;
y sales farmacéuticamente aceptables de los
mismos, comprendiendo dicho procedimiento disolver un compuesto de
fórmula IIa tal como se describe en la reivindicación 3, en un
disolvente orgánico, polar y aprótico y una amina hidrófoba, tratar
con agentes fosforilantes de las fórmulas IVa-b tal
como se describe en la reivindicación 3, y purificar posteriormente
mediante cromatografía.
15. Procedimiento según la reivindicación 3, que
comprende disolver un compuesto de fórmula IIb tal como se describe
en la reivindicación 3, en un disolvente orgánico, polar y aprótico
y una amina hidrófoba, tratar con un agente fosforilante de la
fórmula IVb tal como se describe en la reivindicación 3, y purificar
posteriormente mediante cromatografía.
16. Uso de un compuesto para la fabricación de un
medicamento para el tratamiento de un estado seleccionado del grupo
que consiste en enfermedades pulmonares crónicas en un mamífero,
obstrucción del conducto nasolagrimal en un mamífero,
desprendimiento de retina en un mamífero, facilitando la inducción
del esputo en un mamífero, facilitando la expectoración en un
mamífero y la esterilidad femenina o irritación vaginal debido a
sequedad vaginal, en el que dicho compuesto tiene la fórmula I:
en la
que:
X se selecciona del grupo que consiste en: Na,
NH_{4} y H, siempre que todos los grupos X no sean H.
17. Composición farmacéutica que comprende la sal
tetrasódica del
P^{1},P^{4}-di(uridina-5')-tetrafosfato,
junto con un vehículo farmacéuticamente aceptable.
18. Composición farmacéutica según la
reivindicación 17, en la que dicha composición farmacéutica es
estéril.
19. Composición farmacéutica según la
reivindicación 17, en la que la composición farmacéutica está en la
forma de un gel, una suspensión acuosa, un gránulo o polvo.
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| HU228681B1 (en) * | 1998-10-02 | 2013-05-28 | Yamasa Corp | Crystal of diuridine tetraphosphate or salt thereof and method for preparing the same, and method for producing said compound |
| CN100354296C (zh) * | 1998-10-02 | 2007-12-12 | 雅玛山酱油株式会社 | 二尿苷四磷酸或其盐的晶体和其制备方法、以及制备该化合物的方法 |
| DE60006814T2 (de) * | 1999-06-30 | 2004-05-19 | Yamasa Corp., Choshi | Dinucleotid-kristalle |
| WO2001056581A1 (fr) * | 2000-02-04 | 2001-08-09 | Kissei Pharmaceutical Co., Ltd. | Preparation en poudre pour inhalation et inhalateur de poudre contenant cette preparation |
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| KR100870104B1 (ko) * | 2005-11-28 | 2008-11-26 | 주식회사 머젠스 | 안구건조증 치료 및 예방용 조성물 |
| EP2045257B1 (en) | 2006-07-26 | 2016-08-17 | Yamasa Corporation | Process for producing di(pyrimidine nucleoside 5'-)polyphosphate |
| JP5599078B2 (ja) * | 2009-06-23 | 2014-10-01 | ヤマサ醤油株式会社 | アデノシンテトラホスフェート化合物の製造法 |
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| MX2013007502A (es) | 2010-12-28 | 2013-08-01 | Santen Pharmaceutical Co Ltd | Solucion oftalmica que comprende diquafosol, metodo para producir la misma, y metodo para inhibir la formacion de precipitado insoluble. |
| CN102146111A (zh) * | 2011-01-26 | 2011-08-10 | 北京润德康医药技术有限公司 | 一类新型二核苷酸化合物及其制备方法 |
| EP2832359B1 (en) | 2012-03-26 | 2018-11-14 | Santen Pharmaceutical Co., Ltd. | Diquafosol-containing eye drop |
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| CN109305991B (zh) * | 2017-07-27 | 2021-02-26 | 江苏恒瑞医药股份有限公司 | 一种p1,p4-二(尿苷5’-)四磷酸钠的制备方法 |
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| CN109021049B (zh) * | 2018-06-14 | 2020-12-08 | 扬子江药业集团北京海燕药业有限公司 | 一种尿苷5′-二磷酸-苯并咪唑二钠的合成方法 |
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| CN110590887B (zh) * | 2019-09-04 | 2020-12-15 | 江苏金殳医药科技有限公司 | 一种磷酸酯的制备方法 |
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| KR20210110055A (ko) * | 2020-02-28 | 2021-09-07 | 주식회사 종근당바이오 | P1, p4-디(우리딘 5'-)테트라포스페이트 나트륨염 4 수화물 결정형 a의 제조방법 |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3639562A (en) | 1970-04-29 | 1972-02-01 | Smith Kline French Lab | Vaginal suppositories and impregnated tampons |
| US3639561A (en) | 1970-04-29 | 1972-02-01 | Smith Kline French Lab | Vaginal suppositories and impregnated tampons |
| US5292498A (en) | 1991-06-19 | 1994-03-08 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Method of treating lung disease with uridine triphosphates |
| JPH05346549A (ja) | 1992-04-17 | 1993-12-27 | Canon Inc | 走査光学装置 |
| WO1995010538A1 (en) | 1993-10-15 | 1995-04-20 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Dna encoding the human p2u receptor and null cells expressing p2u receptors |
| US5656256A (en) | 1994-12-14 | 1997-08-12 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Methods of treating lung disease by an aerosol containing benzamil or phenamil |
| US5635160A (en) * | 1995-06-07 | 1997-06-03 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Dinucleotides useful for the treatment of cystic fibrosis and for hydrating mucus secretions |
| US5628984A (en) | 1995-07-31 | 1997-05-13 | University Of North Carolina At Chapel Hill | Method of detecting lung disease |
| JP3519199B2 (ja) | 1996-02-06 | 2004-04-12 | 株式会社ソニー・コンピュータエンタテインメント | 画像生成装置 |
| US6423694B1 (en) * | 1996-02-21 | 2002-07-23 | Inspire Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating otitis media with uridine triphosphates and related compounds |
| US5900407A (en) * | 1997-02-06 | 1999-05-04 | Inspire Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating dry eye disease with uridine triphosphates and related compounds |
| CN1229114C (zh) * | 1996-03-27 | 2005-11-30 | 印斯拜尔药品股份有限公司 | 用三磷酸尿苷和相关化合物治疗纤毛运动障碍的方法 |
| US5837861A (en) | 1997-02-10 | 1998-11-17 | Inspire Pharmaceuticals, Inc. | Dinucleotides and their use as modulators of mucociliary clearance and ciliary beat frequency |
| US5968913A (en) | 1996-07-03 | 1999-10-19 | Inspire Pharmaceuticals, Inc. | Pharmaceutical compositions of uridine triphosphate |
| US5962432A (en) | 1996-07-03 | 1999-10-05 | Inspire Pharmaceuticals, Inc. | Sterilized, isotonic and pH-adjusted pharmaceutical formulation of uridine triphosphate |
| US5789391A (en) | 1996-07-03 | 1998-08-04 | Inspire Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating sinusitis with uridine triphosphates and related compounds |
| US5763447C1 (en) | 1996-07-23 | 2002-05-07 | Inspire Pharmaceuticals | Method of preventing or treating pneumonia in immobilized patients with uridine triphosphates and related compounds |
| WO1998015835A1 (en) | 1996-10-08 | 1998-04-16 | Inspire Pharmaceuticals, Inc. | Method of early lung cancer detection via sputum induction and analysis of sputum to detect cancer associated substances |
| US6159952A (en) | 1996-11-07 | 2000-12-12 | Inspire Pharmaceuticals, Inc. | Method of treating bronchitis with uridine triphosphate and related compounds |
| CN1262556C (zh) * | 1997-02-06 | 2006-07-05 | 印斯拜尔药品股份有限公司 | 特定的二核苷酸和它们作为粘膜纤毛清除和纤毛颤动频率调节剂的应用 |
| US6462028B2 (en) | 1997-07-25 | 2002-10-08 | Inspire Pharmaceuticals, Inc. | Method of promoting cervical and vaginal secretions |
| EP1012154B1 (en) | 1997-07-25 | 2004-03-17 | Inspire Pharmaceuticals, Inc. | Salts of di(uridine 5'-tetraphosphate), method for preparation and uses thereof |
| AU9124998A (en) | 1997-08-29 | 1999-03-16 | Inspire Pharmaceuticals | Use of uridine 5'-diphosphate and analogs thereof for the treatment of lung iseases |
| CA2332540A1 (en) | 1998-05-22 | 1999-12-02 | Benjamin R. Yerxa | Therapeutic dinucleotide and derivatives |
| US6294188B1 (en) | 1998-07-09 | 2001-09-25 | Aviana Biopharm Inc. | Methods involving changing the constitutive and stimulated secretions of the local reproductive system of women |
| GB9827477D0 (en) | 1998-12-15 | 1999-02-10 | Kalon Limited | Paint |
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