CN102146111A - 一类新型二核苷酸化合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一类新型二核苷酸化合物及其制备方法，化合物如式I所示：

Description

一类新型二核苷酸化合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一类新型二核苷酸化合物及其制备方法、医药用途，属于医药技术领域。

技术背景

“干眼症”是一种结膜角膜不能湿润的炎症反应。这种疾病可能是泪液中的水分或黏液成分的缺少。睑裂部的角膜炎。这种病的泪膜破裂时间缩短，可致丝状角膜炎、角结膜干燥症，表现为睑缘边缘的泪液的减少。Schirmer氏实验，泪液量减少，这种病常常在老年人中以特发病表现出来，但多数常见于Sjogrens综合征在眼部的部分表现，Sjogrens综合征包括：口干、眼干和关节炎。近年来，由于人口老龄化、生活环境污染日益严重、各种角膜接触镜配戴及各种显示屏使用人数的增加和接触时间的不断延长，干眼发病率不断升高，并且呈现年轻化的趋势。干眼逐渐成为如同“感冒”一般常见的眼部疾病。

干眼病是慢性病症，多需长期治疗。目前本病的治疗主要局限于对眼干燥等局部症状的替代治疗，如人工泪液。最佳的泪液替代成分是自家血清，但其来源受限，易受污染。人工泪液仍是主要药物，对于严重患者，应使用不含防腐剂的人工泪液。口服必嗽平、(溴苄环己胺)、盐酸匹罗卡片、新斯的明等药物，可促进部分患者的泪液分泌，但疗效尚不肯定。

发明内容

本发明提供如式I所示的新型二核苷酸化合物。

其中：

X是Na、NH4或H，条件是所有X不都是H；

R-OH代表肌苷、鸟苷、2′-脱氧尿苷、3′-脱氧尿苷、2′-脱氧鸟苷、3′-脱氧鸟苷、2′-脱氧肌苷、3′-脱氧肌苷。

本发明还提供式I所示的新型二核苷酸化合物的制备方法，通常包括三个步骤：

a、将相应的核苷或核苷酸化合物溶解在极性、质子惰性的有机溶剂和疏水性胺中；

b、用磷酰氯、焦磷酰氯、焦磷酸等磷酸化试剂磷酸化；

c、离子交换层析纯化。

步骤a中的极性、质子惰性的有机溶剂包括但不限于二甲基甲酰胺、二甲基亚砜、二氧六环、N-甲基吡咯烷酮、磷酸三甲酯；步骤a中的疏水性胺包括但不限于三乙胺、三丁基胺、三辛基胺、四丁基铵、三烷胺、四烷胺、杂环胺；步骤c中的离子层析树脂包括但不局限于阴离子和阳离子交换树脂，如DEAE Sephadex、Dowex 50、DEAE纤维素。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的发明并不限于下面的实施例，这些实施例不以任何方式限制本发明的范围。本领域的技术人员在权利要求的范围内所作出的某些改变和调整也应认为属于本发明的范围。

实施例1二(2′-脱氧尿苷)四磷酸四铵盐的制备(治疗药A)

取2′-脱氧尿苷5′-单磷酸2.85g，加入干燥DMF10ml和三丁胺2ml使溶解，加入1.65g羰基二咪唑，50℃加热反应1小时。将在5mlDMF和2ml三丁胺中制成无水三丁胺盐的2′-脱氧尿苷5′-三磷酸(4.76g)加入反应液中，使混合物50℃加热反应72小时。减压浓缩除去溶剂，残余物溶解在8ml水中，用柱层析纯化(300×50mm，Sephadex DEAE-A25，预先在1.0M碳酸氢铵中溶胀，用2倍柱体积的去离子水洗涤(水-0.3M碳酸氢胺梯度))。收集产品纯度较高洗脱液，减压浓缩至干，加入水重新蒸发三次，得到白色固体状二(2′-脱氧尿苷)四磷酸四铵盐1.75g。高分辨ESI-MS分析得到游离酸分子式为C₁₈H₂₆N₄O₂₁P₄。

实施例2二(2′-脱氧尿苷)四磷酸四钠盐的制备(治疗药B)

取2′-脱氧尿苷5′-二磷酸二钠盐100g，加入水1000ml溶解，使溶液通过 Dowex 50W×4氢离子柱，收集合并含有2′-脱氧尿苷5′-二磷酸的溶液，加入50ml三丁胺中和，然后减压浓缩至干。将残余物溶解在500mlDMF中，加入17g羰基二咪唑，50℃加热反应4小时。再次在旋转蒸发仪上减压浓缩至干，残余物溶解在去离子水中至电导率与0.2M碳酸氢铵相等，然后上样至Sephadex DEAE-A25(预先在1.0M碳酸氢铵中溶胀，用2倍柱体积的去离子水洗涤)。依次用下列溶液洗脱：10升0.25M碳酸氢铵，20升0.275M碳酸氢铵，10升0.3M碳酸氢铵，10升0.35M碳酸氢铵。收集足够纯度的二(2′-脱氧尿苷)四磷酸(HPLC测定)溶液，在旋转蒸发仪上减压浓缩至干。所得残余物溶解在去离子水中形成约10％溶液，使溶液通过Dowex 50W×4钠离子柱，用去离子水洗脱，合并含有二(2′-脱氧尿苷)四磷酸钠盐的溶液，浓缩成约10％溶液，冷冻干燥得白色固体状二(2′-脱氧尿苷)四磷酸钠盐22g。高分辨ESI-MS分析得到游离酸分子式为C₁₈H₂₆N₄O₂₁P₄。

实施例3二鸟苷四磷酸四钠盐的制备(治疗药C)

参考实施例2的方法，以120g鸟苷5′-二磷酸二钠盐代替2′-脱氧尿苷5′-二磷酸二钠盐，得到白色固体状二鸟苷四磷酸钠盐25g。高分辨ESI-MS分析得到游离酸分子式为C₂₀H₂₈N₁₀O₂₁P₄。

实施例4二(2′-脱氧鸟苷)四磷酸四钠盐的制备(治疗药D)

参考实施例2的方法，以120g 2′-脱氧鸟苷5′-二磷酸二钠盐代替2′-脱氧尿苷5′-二磷酸二钠盐，得到白色固体状二(2′-脱氧鸟苷)四磷酸钠盐23.5g。高分辨ESI-MS分析得到游离酸分子式为C₂₀H₂₈N₁₀O₁₉P₄。

实施例5二肌苷四磷酸四钠盐的制备(治疗药E)

参考实施例2的方法，以110g肌苷5′-二磷酸二钠盐代替2′-脱氧尿苷5′-二磷酸二钠盐，得到白色固体状二肌苷四磷酸钠盐25g。高分辨ESI-MS分析得到游离酸分子式为C₂₀H₂₆N₈O₂₁P₄。

实施例6二(2′-脱氧肌苷)四磷酸四钠盐的制备(治疗药F)

参考实施例2的方法，以110g 2′-脱氧肌苷5′-二磷酸二钠盐代替2′-脱氧尿苷5′-二磷酸二钠盐，得到白色固体状二(2′-脱氧肌苷)四磷酸钠盐23.5g。高分辨ESI-MS分析得到游离酸分子式为C₂₀H₂₆N₈O₁₉P₄。

实施例7药效验证实验

实验方法：

6周龄雌性小鼠24只，随机分为3组，分别为空白模型组、人工泪液对照组及治疗药A组。各组均下肢皮下注射氢溴酸东莨菪碱，剂量为1mg/0.2ml，每日3次(8am，12am，4pm)，双下肢交替进行。将电风扇置于笼盒上方，中速(约600r/min)每日吹12h，使笼盒内湿度保持在40％以下。在造模同时给予相应治疗药物滴眼，每日3次。实验各组设定在给药第1、5、10、20、30天进行观察，另取正常小鼠8只作为对照组。

检测指标：

泪液分泌测定：用眼科显微镊夹持酚红棉线，将其置于小鼠下结膜囊中外1/3处，停留60S取出。显微镜下使用游标卡尺测量棉线湿润长度，读数精确到0.02cm。

结果：如下表。经东莨菪碱及风扇模拟干燥环境处理后，与对照组相比，小鼠泪液分泌量在造模 1d后即出现明显下，在给予相应治疗药物干预后，小鼠泪液分泌量稳定在一定范围内，其中在实验结束时，治疗药物A组小鼠泪液分泌量接近对照组，说明治疗药A对增加泪液分泌量，缓解眼干症状会起到积极的作用。

各组小鼠泪液分泌情况(n＝8， 

)，(单位：mm)

组别	1d	5d	10d	20d	30d
						对照组	5.67±0.74	5.68±0.84	5.43±0.62	5.51±0.77	5.60±0.54
空白模型组	2.65±0.17	1.42±0.21	2.31±0.22	1.07±0.16	0.85±0.11
						人工泪液组	3.71±0.54	2.87±0.66	3.06±0.26	3.18±0.38	3.34±0.34
治疗药A组	3.68±0.42	3.54±0.62	4.03±0.57	4.26±0.68	5.03±0.44

本发明所述的治疗药B、C、D、E、F其药效验证实验均按上述方法进行，其结果均表明本发明所述的各种二核苷酸化合物在增加泪液分泌、缓解眼干症状方面均起到积极作用，其作用效果优于人工泪液等目前常用治疗药物。

Claims (3)

1.如式I所示的新型二核苷酸化合物：

其中：

X是Na、NH4或H，条件是所有X不都是H；

R-OH代表肌苷、鸟苷、2′-脱氧尿苷、3′-脱氧尿苷、2′-脱氧鸟苷、3′-脱氧鸟苷、2′-脱氧肌苷、3′-脱氧肌苷。

2.权利要求1所述化合物的制备方法。

3.权利要求1所述化合物在制备干眼症药物中的用途。