CN1262556C - 特定的二核苷酸和它们作为粘膜纤毛清除和纤毛颤动频率调节剂的应用 - Google Patents

特定的二核苷酸和它们作为粘膜纤毛清除和纤毛颤动频率调节剂的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN1262556C
CN1262556C CNB988032597A CN98803259A CN1262556C CN 1262556 C CN1262556 C CN 1262556C CN B988032597 A CNB988032597 A CN B988032597A CN 98803259 A CN98803259 A CN 98803259A CN 1262556 C CN1262556 C CN 1262556C
Authority
CN
China
Prior art keywords
uridine
tetraphosphate
compound
pharmaceutical composition
application
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CNB988032597A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1292795A (zh
Inventor
W·彭德格斯特
B·R·耶扎
J·L·赖德奥特
S·M·西迪基
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Merck Sharp and Dohme Corp
Original Assignee
Inspire Pharmaceuticals Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from US08/797,472 external-priority patent/US5900407A/en
Priority claimed from US08/798,508 external-priority patent/US5837861A/en
Application filed by Inspire Pharmaceuticals Inc filed Critical Inspire Pharmaceuticals Inc
Publication of CN1292795A publication Critical patent/CN1292795A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1262556C publication Critical patent/CN1262556C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7084—Compounds having two nucleosides or nucleotides, e.g. nicotinamide-adenine dinucleotide, flavine-adenine dinucleotide
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0048—Eye, e.g. artificial tears
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/02—Nasal agents, e.g. decongestants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/10—Expectorants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/16—Otologicals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Otolaryngology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

本发明涉及特定新颖的二核苷酸及其制剂，它们是对P2Y2和/或P2Y4嘌呤受体具有极高的选择性的激动剂，可用于治疗慢性阻塞性肺病，如慢性支气管炎，PCD，囊性纤维变性，和预防由卧床不动引起的肺炎。此外，由于它们能清除残留的粘液分泌物并刺激纤毛颤动频率，本发明化合物也可用来治疗鼻窦炎、中耳炎和鼻泪管堵塞。它们也可用来治疗干眼病和视网膜脱落。

Description

特定的二核苷酸和它们作为粘膜纤毛清除和 纤毛颤动频率调节剂的应用
该申请是1997年2月10日提交的美国专利申请08/798,508的部分续展申请。
                             前言
技术背景
本发明涉及增加残留的粘液分泌物水化、刺激粘蛋白的产生和增加纤毛颤动频率以促进对剩余分泌物的清除的特定的二核苷酸。
发明背景
慢性阻塞性肺病(COPD)在美国有一千五百万病人，是死亡的第六大原因。其特征在于粘液分泌物在肺部的残留。许多被诊断患有COPD的病人也有称为慢性支气管炎(CB)的疾病，每年600,000病人由于慢性支气管炎的急性发作而住院。囊性纤维变性和原发性纤毛运动障碍(PCD)是临床特点类似于COPD的肺病的例子。纤毛运动障碍不论是原发的或继发的，都会导致只能通过咳嗽清除的分泌物残留。
另一类特征在于残留粘液分泌物积聚的疾病是窦炎，它是一种典型地与上呼吸道感染有关的鼻旁窦炎症。窦炎是美国最常见的影响着估计为3千1百万人的保健方面的疾病。(A.Moss和V.Parsons，National Center for Health Statistics，1986：66-7.DHHS Publication No.(PHS)86-1588(1985))。
中耳炎(OM)主要是3岁以下的孩子中耳的病毒或细菌感染，上呼吸道感染常促使其发生，通过鼻咽和咽鼓管扩散到中耳。每年约有25,000,000-50,000,000次就诊来诊断和治疗中耳炎。到三岁时，约75％孩子至少发过一次急性中耳炎(J.Klein，Clin Infect Dis 19，823-33(1994))。用抗生素治疗后，中耳里积聚的液体还在，导致听力障碍并会延误潜在的语言和认知的发育。增加中耳分泌物的清除能力会降低或减少中耳炎的明显后遗症。
另外由残留分泌物导致的疾病是肺炎。由于各种原因而卧床的病人形成肺炎的危险性很大。尽管对其高度警戒并进行大量的介入治疗，每年仍有400,000以上的病人发生肺炎，具有明显的发病率和死亡率。
也有因治疗上的需要而增加泪腺系统排泪的情况。当泪腺排泪系统不能正常运行时，结果是过量流泪(泪溢)、脓性粘液排出和复发性泪囊炎。目前对鼻泪管阻塞的治疗最广泛的是进行侵入性的手术，研究者业已在找寻非侵入性的药物治疗方法。
通过类似于水化气道上皮机制的P2Y2和/或P2Y4嘌呤受体调节机制，可经泪腺附属组织来刺激泪液分泌。干眼病是由于角膜前泪膜异常产生的指症，其特征在于产生的泪液减少或泪膜蒸发增加，并有其导致的眼表面疾病。目前，干眼病的药物治疗主要局限于给予人工泪液(生理盐水)以使眼睛暂时再水化。但是，减轻是暂时的，需要经常给药。
通常情况下，粘液分泌物通过粘膜纤毛清除(MCC)系统除去。MCC依赖于三个步骤的整体行动：1)杯状细胞和粘膜下层腺体的粘液分泌；2)上皮细胞上纤毛的运动，它驱使粘液穿过管腔表面；和3)离子经管腔上皮细胞输入和输出，它们共同控制水流入粘液。
现已知诸如尿苷5’-三磷酸盐(UTP)的核苷酸磷酸盐调节MCC系统的所有步骤。首先，UTP已显示能增加体外的杯状细胞分泌粘蛋白的速率和总量(M.Lethem等，Am J Respir Cell Mol Biol 9，315-22(1993))。第二，UTP已显示能在体外增加人气道上皮细胞纤毛颤动频率(D.Drutz等，Drug Dev.Res.37(3)，185(1996))。第三，UTP已显示在体外能增加Cl-的分泌，因此增加了来自气道上皮细胞的水分泌(S.Mason等，Br.J.Pharmacol.103，1649-56(1991))。另外，II型肺泡细胞能对UTP反应而释放表面活性剂(Gobran，Am.J.Physiol.267，L625-L633(1994))使肺部功能保持最佳，并有助于MCC最大化(M.Knowles等，N.Engl.J.Med.325，533-38(1991))。由于通过P2Y2受体对磷脂酶C的刺激，UTP已显示能增加细胞内的Ca++(H.Brown等，Mol.Pharmocol.40，648-55(1991))。
UTP对粘膜纤毛提升系统的所有步骤的调节导致正常志愿者的肺部粘膜纤毛清除率增加2.5倍，同时没有任何明显的副作用(K.Olivier等，Am J.Respir.Crit.Care Med.154，217-23(1996))。此外，UTP能明显增强PCD患者的咳嗽清除(经咳嗽清除残留的分泌物)(P.Noone等，Am.J.Respir.Crit.Care Med.153，A530(1996))。
应当注意到，1996，12，19公开的PCT申请WO96/40059揭示了二核苷化合物用来治疗气道疾病。
由于UTP能增加剩余粘液分泌物清除能力，申请人研究是否其它核苷磷酸盐能有相同的治疗作用(若不是更高的话)。本发明基于该研究基础。
前述的二核苷酸及其相应的参考文献列于表I。
                                      表I
                               文献里的二核苷酸
                         (括号里的数字相应于下面的参考文献)
  Np2N   Np2N’   Np2N   Np2N’ Np4N   Np4N’
  Ap2A(4，1)Gp2G(5，1)m7Gp2m7G(5)   Ap2NAD(6)Ap2TAD(6)Ap2C-NAD(6)Ap2C-PAD(6)Ap2BAD(6)m7Gp2G(5)Up2U(43)   Up3U(1)Ap3A(1，4，29)Xp3X(1)m7Gp3m7G(5)Gp3G(1)   Ap3T(20)m7Gp3G(5)m22，7Gp3G(5)m2，7Gp3G(5) Up4U(2，3)Ap4A(1，4，29)Cp4C(3)Gp4G(1，5)Xp4X(1)Dp4D(15)eAp4eA(7)m7Gp4m7G(5)   Ap4U(3)Ap4C(3)Ap4G(3)Gp4U(3)Gp4C(3)Up4C(3)Ap4T(20)m7Gp4G(5)m2，7Gp4G(5)m22，7Gp4G(5)
  Np4N   Np4N’   Np4N   Np4N’   Np4N
  Ap4A(4)   Ap4T(20)   Ap4A(4)   Ap4T(20)   Ap4A(4)
  AppZppA   DppZppD   ApZppZpA   ApSpZpSpA
  Z   Z   Z   Z
  CH2(8)CH2CH2(8)CHF(8)CF2(8)CHCl(8)CCl2(8)   CH2(15)CH2CH2(15)CHF(15)CF2(15)CHCl(15)CCl2(15)   CH2(8)CH2CH2(8)CHF(8)CF2(8)CHCl(8)CCl2(8)   CHF(8)CF2(8)O(8)
A＝腺嘌呤核苷                      eA＝亚乙烯基腺嘌呤核苷
U＝尿嘌呤核苷                      m7G＝7-甲基鸟嘌呤核苷
G＝鸟嘌呤核苷                      m2，7G＝2，7-二甲基鸟嘌呤核苷
T＝胸腺嘧啶脱氧核苷                m2，2，7G＝2，2，7-三甲基鸟嘌呤核苷
X＝黄嘌呤核苷                      NAD＝烟酰胺核苷
TAD＝Tiazofurin                    C-NAD＝C-烟酰胺核苷
BAD＝苯甲酰胺核苷                  C-PAD＝C-吡啶酰胺核苷
D＝2，6-二氨基嘌呤                 N＝核苷
(1)M.A.G.Sillero等，Eur.J.Biochem.，76，331(1977)
(2)C.G.Vallejo等，Biochim.Biophys.Acta，483，304(1976)
(3)H.Coste等，J.Biol.Chem.，262，12096(1987)
(4)K.E.Ng等，Nucleic Acid Res.，15，3573(1987)
(5)J.Stepinski等，Nucleosides & Nucleotides，14，717(1995)
(6)A.Zatorski等，J.Med.Chem.，39，2422(1996)
(7)P.Rotilan等，FEBS，280，371(1991)
(8)P.C.Zamecnik等，Proc.Natl.Acad.Sci.，89，2370(1992)
(9)J.Walker等，Biochemistry，32，14009(1993)
(10)R.H.Hiderman等，J.Biol.Chem.，266，6915(1991)
(11)J.Luthje等，Eur.J.Biochem.，173，241(1988)
(12)R.H.Silverman等，Microbiological Rev.，43，27(1979)
(13)C.D.Lobaton等，Eur.J.Biochem.，50，495(1975)
(14)G.Lowe等，Nucleosides&Nucleotides，10，181(1991)
(15)G.M.Blackburn等，Nucleosides&Nucleotides，10，549(1991)
(16)J.C.Baker等，Mutation Res.，208，87(1988)
(17)G.Klein等，Biochemistry，27，1897(1988)
(18)E.Castro等，Br.J.Pharmacol..100，360(1990)
(19)D.R.Elmaleh等，Proc.Natl.Acad.Sci.，81，918(1894)
(20)R.Bone等，J.Biol.Chem.，261，16410(1986)
(21)Fed.Amer.Soc.Exper.Bio.，Abstr.第I部分，1878号(1991)
(22)M.T.Miras-Portugal等，Ann.NY Acad Sci.，603，523(1990)
(23)A.Guranowski等，Biochemistry，27，2959(1988)
(24)F.Grummt等，Plant Mol.Bio.，2，41(1983)
(25)A.G.McLennan等，Nucleic Acid Res.，12，1609(1984)
(26)P.Zamecnik等，Analytical Biochem.，134，1(1983)
(27)E.Rapaport等，Proc.Natl.Acad.Sci.，78，838(1981)
(28)T.Kimura等，Biol.Pharm.Bull.，18，1556(1995)
(29)E.Schulze-Lohoff等，Hypertension，26，899(1995)
(30)B.K.Kim等，Proc.Natl.Acad.Sci.，89，11056(1992)
(31)P.C.Zamecnik等，Proc.Natl.Acad.Sci.，89，2370(1992)
(32)H.Morii等，Eur.J.Biochem.，205，979(1992)
(33)E.Castro等，Pflugers Arch.，426，524(1994)
(34)H.Schluter等，Nature，367，186(1994)
(35)E.Castro等，Br.J.Pharmacol.，206，833(1992)
(36)T.Casillas等，Biochemistry，32，14203(1993)
(37)J.Pintor等，J.Neurochem.，64，670(1995)
(38)E.Castro等，J.Biol.Chem.，270，5098(1995)
(39)V.A.Panchenko等，Neuroscience，70，353(1996)
(40)E.Castro等，Br.J.Pharmacol.，100，360(1990)
(41)J.Pintor等，Gen.Pharmac.，26，229(1995)
(42)J.Pintor等，Br.J.Phamacol.，115，895(1995)
(43)A.Kanavarioti等，Tett.Lett.，32，6065(1991)
发明综述
本发明提供了新颖的式I化合物及其药物组合物。本发明也提供了在清除剩余粘膜分泌物和增加纤毛颤动频率方面有用的化合物。因此，本发明的较宽的技术方案涉及通式I化合物或其药学上可接受的醇或盐：
                           式I
Figure C9880325900071
其中：
X是氧、亚甲基、二氟亚甲基、酰亚氨基；
n＝0，1或2；
m＝0，1或2；
n+m＝0，1，2，3或4；和
B和B’各自独立地代表各自通过9-或1-位连接的嘌呤残基或嘧啶残基；
Z＝OH或N3；
Z’＝OH或N3；
Y＝H或OH；
Y’＝H或OH；
条件是当Z是N3时，Y是H，或当Z’是N3时，Y’是H；进一步的条件是表I化合物排除在外。
本发明的化合物是对P2Y2和/或P2Y4嘌呤受体选择性很高的激动剂，这样，它们可用来治疗慢性阻塞性肺病，如慢性支气管炎，PCD和囊性纤维变性，也可用于治疗具有患肺炎危险的卧床病人。此外，由于本发明的化合物能清除剩余粘膜分泌物并刺激纤毛颤动频率，所以它们也可用于治疗窦炎、中耳炎和鼻泪管阻塞。它们也可用来治疗干眼病、视网膜脱落和伤口愈合。另外，由于这些化合物的药理作用，它们被用于引痰过程。另外，人们推定，本发明化合物通过增加来自肺粘膜的分泌物的清除能增加运动员的成绩。
发明详述
本发明提供了新颖的式I化合物及其药物组合物。本发明也提供了用于清除剩余粘膜分泌物并增加纤毛颤动频率的化合物。因此，本发明较宽的技术方案涉及通式I的新颖化合物，及其药学上可接受的酯或盐：
                               式I
其中：
X是氧、亚甲基、二氟亚甲基、酰亚氨基；
n＝0，1或2；
m＝0，1或2；
n+m＝0，1，2，3或4；和
B和B’各自独立地代表各自通过9-或1-位连接的嘌呤残基或嘧啶残基；
Z＝OH或N3；
Z’＝OH或N3；
Y＝H或OH；
Y’＝H或OH；
条件是当Z是N3时，Y是H，或当Z’是N3时，Y’是H；进一步的条件是表I化合物排除在外。
呋喃糖优选地为β-构型。
呋喃糖最好为β-D-构型。
式I优选的化合物是式IA化合物或药学上可接受的盐：
                      式IA
其中：
X＝O；
n+m＝1或2；
Z，Z′，Y和Y′＝OH；
B和B’是尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤、黄嘌呤、次黄嘌呤或如式II和式III中所定义的那样；
X＝O；
n+m＝3或4；
Z、Z’、Y和Y’＝OH；
B＝尿嘧啶；
B’是尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤、黄嘌呤、次黄嘌呤或如式II和式III中所定义的那样；或
X＝O；
n+m＝1或2；
Z、Y和Z’＝OH；
Y’＝H；
B＝尿嘧啶；
B’是尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤、黄嘌呤、次黄嘌呤或如式II和式III中所定义的那样；或
X＝O；
n+m＝0，1或2；
Z和Y＝OH；
Z’＝N3；
Y’＝H；
B＝尿嘧啶；
B’＝胸腺嘧啶；或
X＝O；
n+m＝0，1或2；
Z和Z’＝N3；
Y和Y’＝H；
B和B’是胸腺嘧啶；或
X＝CH2、CF2或NH；
n和m＝1；
Z、Z’、Y和Y’＝OH；
B和B’是尿嘧啶、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鸟嘌呤、腺嘌呤、黄嘌呤、次黄嘌呤或如式II和式III中所示的那样；
条件是表I化合物排除在外。
另一组优选的式I化合物是式IB化合物或其药学上可接受的盐：
                            式IB
其中：
X是氧、亚甲基、二氟亚甲基或酰亚氨基；
n＝0或1；
m＝0或1；
n+m＝0，1或2；和
B和B’各自独立地是如式II所示的嘌呤残基，或如式III所示的嘧啶残基，各自通过9-或1-位连接。当B和B’是尿嘧啶，在N-1位连接到核糖基部分时，则m+n可等于3或4，此时X为氧(参见实施例5)。核糖基部分如图所示为D-构型，但也可为L-，或D-和L-。D-构型是优选的。
                                 式II
Figure C9880325900111
其中R1是氢，如下所定义的烷基或芳基部分，或是ω-A(C1-6烷基)CONH(C1-6烷基)-，其中A是氨基、巯基、羟基或羧基；
R2是O(腺嘌呤1-氧化物衍生物)，或没有(腺嘌呤衍生物)；或
R1和R2连接在一起形成5-元稠合的咪唑环(1，N6-亚乙烯基腺嘌呤衍生物)，任选地在亚乙烯基部分的4-或5-位被如下定义的烷基、芳基或芳烷基部分所取代；
R3是如下所定义的烷基、芳基或芳烷基、烷氨基、芳氨基或芳烷基氨基(NHR’)；烷氧基、芳氧基或芳烷基氧基(OR’)；烷硫基、芳硫基或芳烷硫基(SR’)；或ω-A(C1-6烷基)CONH(C1-6烷基)B-，其中A和B独立地是氨基、巯基、羟基或羧基；或它们的药学上可接受的酯、酰胺或盐。
这样，取代的腺嘌呤衍生物包括腺嘌呤1-氧化物；1，N6-(4-或5-取代的亚乙烯基)腺嘌呤；6-取代的腺嘌呤；或8-取代的氨基腺嘌呤，其中6-或8-HNR’基团里的R’选自：芳烷基(C1-6)，芳基部分如下所述被任意地官能化；烷基；和带有下列官能团的烷基，如：([6-氨基己基]氨甲酰基甲基)-，和ω-酰基化的氨基(羟基、硫羟基和羧基)烷基(C2-10)和它们的ω-酰基化的氨基(羟基、硫羟基和羧基)，衍生物，其中酰基选自，但不限于，乙酰基、三氟乙酰基、苯甲酰基、取代的-苯甲酰基等，或羧酸部分以其酯或酰胺衍生物形式存在，如乙基酯或甲基酯或其甲基、乙基或苯甲酰胺基衍生物。ω-氨基(羟基，硫羟基)部分可用C1-4烷基烷基化。
同样，B或B’，或两者可为通式III的嘧啶，它们通过1-位连接，或其药学上可接受的酯、酰胺或盐：
                            式III
Figure C9880325900121
其中：
R4是氢、羟基、巯基、氨基、氰基、芳烷氧基、C1-6烷硫基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基或二烷基氨基，烷基可任意地连接以形成杂环；
R5是氢、酰基(如乙酰基或苯甲酰基)、C1-6烷基、芳酰基、随意地如下官能团化、C1-5链烷酰基、苯甲酰基或磺酸酯；
R6是羟基、巯基、烷氧基、芳烷氧基、C1-6烷硫基、氨基、C1-5二取代氨基、三唑基、烷氨基或二烷氨基，其中烷基可任意地连接以形成杂环，或连接到N3上以形成随意取代的环；或
R5和R6连接在一起，在亚乙烯基部分的4-位或5-位上任意被如下定义的烷基、芳基或芳烷基部分所取代的嘧啶环(3，N4-亚乙烯基胞嘧啶衍生物)的位置3和4位之间形成5-元稠合咪唑环。
R7是氢，羟基，氰基，硝基，烯基(其烯基部分任意与氧连接以形成环，所述的环在与氧相邻的碳上被烷基或芳基任意取代)取代炔基，卤素，取代烷基，全卤代甲基(如，CF3)，C2-6烷基，C2-3链烯基或取代乙烯基(如，烯丙基氨基、溴乙烯基和丙烯酸乙酯或丙烯酸)，C2-3炔基或取代炔基；或R6-R7通过在R6处的N或O一起形成5或6-元饱和或不饱和环，这类环可含本身含有官能团的取代基；条件是当R8是氨基或取代氨基时，R7是氢；和
R8是氢，氨基或取代氨基，烷氧基，芳基烷氧基，烷硫基，芳基烷硫基，甲酰氨基甲基，羧甲基，甲氧基，甲硫基，苯氧基或苯硫基。
在上述II和III的通式里，酰基有利地包括链烷酰基或芳酰基。可为直链或支链的烷基有利地含有1-8个碳原子，特别是1-4个碳原子，它们可任意地被一个或多个合适的下述取代基所取代。芳基包括诸如芳氧基的芳基部分，优选的是被一个或多个如下所述的合适取代基所任意取代的苯基。上述链烯基和炔基有利地含2-8个碳原子，特别是2-6个碳原子，如乙烯基或乙炔基，它们可任意地被下述的一个或多个适当取代基所取代。
上述烷基、链烯基、炔基和芳基的合适取代基选自卤素、羟基、C1-4烷氧基、C1-4烷基、C6-10芳基、C7-12芳烷基、C7-12芳基烷氧基、羧基、氰基、硝基、磺酰氨基、磺酸酯、磷酸酯、磺酸、氨基和取代氨基，其中氨基被C1-4烷基单或双取代，当双取代时，烷基被随意地连接以形成杂环。
本发明化合物包括它们的药学上可接受的酯，如，但不限于乙酰基和苯甲酰基酯。可这样制备酯类：使所需的羟基化合物与合适的酸反应，用羰基二咪唑、二环己基碳化二亚胺或其它合适的缩合剂活化，或与酸酐或酰氯在有或没有碱性催化剂，如叔胺、季铵盐或无机碱时进行反应。
本发明化合物也包括它们非毒性药学上可接受的盐，如，但不限于碱金属盐，如钠或钾盐；碱土金属盐，如锰、镁或钙盐；或铵盐或四烷基铵盐，即NX4 +(其中X是C1-4)。药学上可接受的盐是保留了母体化合物所需的生物活性并没有不良毒性作用的盐。本发明也包括本文揭示化合物的酰化的前体药物(如酯类)。本技术领域人员会了解用来制备式I、IA和IB包含的化合物的非毒性的药学上可接受的盐和其酰化前体药物的各种合成方法。
本发明化合物是高选择性的P2Y2和/或P2Y4嘌呤受体的激动剂；这样它们可用来治疗哺乳动物，包括人体的慢性阻塞性肺病，如慢性支气管炎，PCD，囊性纤维变性以及预防由于卧床而发生的肺炎。此外，由于它们能清除剩余的粘膜分泌物并刺激纤毛颤动频率，本发明化合物也可用于治疗哺乳动物，包括人体的窦炎、中耳炎和鼻泪管阻塞。另外本发明化合物治疗哺乳动物，包括人体的干眼病和视网膜脱落也是有用的。
虽然本发明化合物主要涉及治疗人体对象，但它们也可用于治疗兽医的其它哺乳动物对象，如狗和猫。
P2Y2和其它P2Y受体活性的肌醇磷酸盐试验显示了本发明化合物在药物上的用途。该广泛应用的试验如E.Lazarowski等在Brit.J.Pharm.116，1619-27(1995)所述，依赖于测量肌醇磷酸盐的形成作为化合物活化通过G-蛋白与磷脂酶C连接的受体的活性的量度。
通式I、IA或IB化合物可口服，局部外用给药，非胃肠道给药，通过吸入或喷雾给药，手术时给药，直肠给药或阴道给药，可使用含常规非毒性的药学上可接受的载体、辅剂和赋形剂的剂型。本文使用的术语局部外用剂型包括膏药剂、凝胶剂、霜剂、软膏剂或滴鼻剂、滴耳剂或滴眼剂。本文术语非胃肠道给药包括皮下注射、静脉注射、肌内注射、胸骨内注射或输液技术。另外，本文也提供了包括通式I、IA或IB的化合物和药学上可接受载体的药剂。通式I、IA或IB的一种或多种化合物可与一种或多种非毒性的药学上可接受的载体或稀释剂或辅剂，和必需的其它活性组分共同存在。一种载体为糖类，其中化合物可通过玻璃化密切地掺入基质，或只是简单地与载体(如，乳糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇)或其它肺部或气道给药可接受的赋形剂混合。
通式I、IA或IB的一个或多个化合物可分开给药，或一起给药，或与诸如DNAse或乙酰半胱氨酸的粘液溶解药分开或一起给药。
含通式I、IA或IB化合物的药物组合物可为适合口服使用的剂型，如片剂、锭剂、水性或油性悬浮液、可分散粉末或颗粒剂、乳剂、硬胶囊或软胶囊、或糖浆剂或酏剂。根据制备药物组合物的技术领域的任何公知方法来制备口服组合物，这类组合物可含有一种或多种选自甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂的物质，以得到优质可口的药剂。片剂含有活性组分及与之混合的非毒性的、药学上可接受的、适合用于制备片剂的赋形剂。这些赋形剂可为，如，惰性稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂和崩解剂，如，玉米淀粉或藻酸；粘合剂，如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂可不包衣，或用已知技术进行包衣以延缓其在胃肠道里的崩解和吸收，从而在较长的时间里提供缓释作用。例如，可使用诸如诸如甘油基单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯的时间延缓材料。
口服制剂也可为硬明胶胶囊，其中活性组分与惰性固体稀释剂，例如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或可为软明胶胶囊，其中活性组分与水或油介质，如花生油、液体石蜡或橄榄油混合。
水性悬浮液含有活性材料和与之混合的适合制备水性悬浮液的赋形剂。这类赋形剂是悬浮剂，如：羧甲基纤维素钠、甲基纤维素和藻酸钠。分散剂或湿润剂可为天然磷脂或丙炔化氧与脂肪酸的缩合产物，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的部分酯的缩合产物，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的部分酯的缩合产物。本技术领域人员知道许多特定的本说明书提及的赋形剂和湿润剂。水性悬浮液也可含有一种或多种防腐剂，如对-羟基苯甲酸乙酯或正丙酯，一种或多种着色剂，一种或多种调味剂和一种或多种甜味剂，如蔗糖或糖精。
适合通过加入水制备水性悬浮液的可分散粉末和颗粒剂包括活性组分和与之混合的分散剂或湿润剂，悬浮剂和一种或多种防腐剂。合适的分散剂或湿润剂和悬浮剂已在上面进行了例举。也可存在另外的赋形剂，如，甜味剂、调味剂和着色剂。
通式I、IA或IB可用无菌介质经非胃肠道给药。根据所用的赋形剂和浓度，药物可悬浮于或溶于赋形剂。有利的是，诸如局部麻醉药、防腐剂和缓冲剂的辅剂可溶于赋形剂。无菌可注射的制剂可以是在非毒性非胃肠道可接受的稀释剂或溶剂里的无菌可注射的溶液或悬浮液。在这些可接受的赋形剂和溶剂中可被使用的是灭菌水、盐水溶液或Ringer溶液。
通式I、IA或IB化合物也可以栓剂形式对耳、直肠或阴道给药。可通过使药物与合适的非刺激性赋形剂混合来制备，所述的赋形剂在常温下是固体，但在体温下是液体，并因此熔融而释放药物。这类材料是可可脂和聚乙二醇。
通式I、IA或IB化合物溶液可通过手术时置入进行给药。
约10-7M到约10-1M，优选的是10-5到10-1M级别的剂量水平用来治疗上述疾病。可与载体材料混合得到单位制剂的活性组分用量根据治疗对象和特定的给药方式而定。但是，应当明白，针对特定病人的特定剂量水平应当根据各种因素，包括使用的特定化合物的活性，年龄，体重，一般健康状况，性别，饮食、给药时间，给药途径和分泌速率，合并给药情况和进行治疗的特定疾病的严重程度而定。
可这样制备本发明包含的化合物：用缩合剂，如，但不限于，羰基二咪唑或二环己基碳化二亚胺使核苷单-、双-或三磷酸盐活化，并与第二分子的相同或不同的单-、双-或三磷酸盐反应以形成所需的二核苷酸多磷酸盐；或如上活化的核苷磷酸盐接着与非-核苷单-、双-或多磷酸盐部分，如，但不限于单磷酸盐或焦磷酸盐阴离子进行缩合反应，得到所需的二核苷酸多磷酸盐，该情况下的未分离的中间体为单核苷酸多磷酸盐；或如上所活化的单-、双-或多磷酸盐部分，或为酰卤或有亲核取代反应性的其它衍生物的形式，可接着与核苷磷酸盐或多磷酸盐进行缩合，得到所需的二核苷酸多磷酸盐；或者可通过在嘌呤、嘧啶或糖环上的一个部分或多个部分进行取代或衍生化来修饰预先形成的二核苷酸多磷酸盐形成所需的二核苷酸多磷酸盐。用作起始材料的核苷磷酸盐可是市售的，或可通过本技术领域公知的方法从相应的核苷制得。同样，若核苷购买不到，它们可通过对其它易得的核苷进行修饰来制备，或通过本技术领域周知的方法从杂环和糖前体合成得到。
下列注册商品名出现在下列实施例中：
DEAE纤维素TM
PEI柱TM(Aldrich)
AG-MP50强阳离子交换TM(BioRad)
Dowex50(H+)树脂TM
DEAE SephadexTM
PRPX-100柱TM(Hamilton)
Sephadex DEAE A25柱TM
本技术领域人员可以知道，如下列实施例所示，可以改变起始物质并使用另外的步骤以产生本发明化合物。在一些情况下可能必须保护特定的反应性官能团以达到上述转变。总之，对这类保护基团的需要及连接和除去这类基团的条件对有机合成技术领域人员是显而易见的。
本发明通过下列实施例作进一步阐述，下列实施例并非用来限定本发明的范围或精神。
实施例1
制备P1，P4-二(尿苷5’-)P2，P3-亚甲基四磷酸盐
加入三丁胺(24微升，0.1毫摩尔)使亚甲基二膦酸(Aldrich，0.0088克，0.05毫摩尔)溶于无水DMF(0.5ml)。用无水DMF(2×1毫升)蒸发溶液至干两次，干燥的残留物溶于无水DMF(0.5毫升)，加入类似干燥的尿苷5’-单磷酰吗啉(monophosphomorpholidate)4-吗啉-N，N’-二环己基甲脒盐(Sigma，0.137克，0.2毫摩尔)在无水DMF(0.5毫升)中的溶液。使反应混合物在80-90℃下加热7小时；然后通过减压蒸发除去溶剂。残留物溶于水(2毫升)，加于碳酸氢盐形式的DEAE纤维素柱(2.5×50cm床体积)上。柱用水洗脱，然后用碳酸氢铵(0-0.33M，900毫升)梯度洗脱。然后监测洗脱进程，测定洗脱液在254纳米处的吸收；收集0.23和0.26M之间的洗脱组分，蒸发至干，通过用去离子水重复蒸发来脱盐。每50微升一份的残留物溶于水(300微升)并通过半制备HPLC纯化(Alltech PEI 5μ，10×250mm，梯度0-0.66M碳酸氢铵，5.0ml/分钟，20分钟)；每次洗脱在8.7-9.0分钟内的流出峰合并后，冻干得到标题化合物(0.007毫摩尔，14％得率，通过将其在λ最大263处的吸收度与尿苷单磷酸盐的标准溶液比较进行定量)。在AlltechPEI柱上的色谱纯度为96.5％，梯度为0-0.66M的碳酸氢铵，1.0ml/分钟，20分钟保留时间13.03分钟。1H NMR在D2O中(δppm，内标为四甲基甲硅烷)：2.39(t，J＝21.5Hz，2H)；4.12(m，6H)；4.243(m，4H)；5.841(d，J＝7.9Hz，2H)；5.847(d，J＝4.5Hz，2H)；7.77(d，J＝8.1Hz，2H)。31P NMR在D2O中(δppm，内标H3PO4)：-10.2到-10.7(复杂的m，2P)；7.8到8.4(复杂的m，2P)。
实施例2
P1，P4-二(尿苷-5’-P2，P3-二氟亚甲基四磷酸盐)
使二氟亚甲基二磷酸的三丁基铵盐(如C.McKenna等，J.Org.Chem.46，4574-76(1981)和D.Burton等，J.Fluorine Chem.15，263-66(1980所述)(0.014克，0.025毫摩尔)。如亚甲基磷酸所述转化生成，溶于尿苷5’-单磷酰吗啉4-吗啉-N，N’-二环己基甲脒盐(Sigma，0.034克，0.05毫摩尔)在无水二甲亚砜(0.7毫升)里的溶液，并在50℃下加热9天。冷却的反应混合物用水稀释并加于碳酸氢盐形式的DEAE纤维素柱(2.5×50cm床体积)上。柱用水洗脱，然后用碳酸氢铵(0-0.33M，总体积900毫升)梯度洗脱。然后监测流出进程，测定洗脱液在254纳米处的吸收；收集0.29和0.30M之间的洗脱组分，蒸发至干，通过用去离子水重复蒸发来脱盐，以得到标题化合物(0.0011毫摩尔，4.4％得率，通过将其在λ最大263处的吸收度与尿苷单磷酸盐的标准溶液比较进行定量)。在Alltech PEI柱上的色谱纯度为88.5％(梯度为0-0.66M碳酸氢铵，1.0ml/分钟，20分钟)，保留时间12.03分钟。1H NMR在D2O中(δppm，内标四甲基甲硅烷)：4.05-4.085(m，6H)；4.18-4.20(m，4H)；5.80(d，J＝8.0Hz，2H)；5.81(d，J＝4.5Hz，2H)；7.77(d，J＝7.9Hz，2H)。31P NMR在D2O中(δppm内标H3PO4)-10.63(dd，J＝18.3，11.3Hz，2P)；-5.83(tdd，J＝75，18.3，11.3Hz，2P)。19F NMR在D2O中：73.406(t，J＝75.5Hz)。
实施例3
制备P1，P4-二(尿苷5’-P2，P3-酰亚氨基四磷酸盐)
将酰亚氨基二磷酸四钠(Sigma，0.05毫摩尔)溶于水(0.5ml)并加于三丁胺形式的Biorad AG-MP50强阳离子交换树脂(2毫升床体积，3meq)柱上。柱用水(～10毫升)洗脱，洗脱液通过与无水DMF蒸发冻干。在室温下用酰亚氨adfg磷酸四丁基qpv(0.05毫摩尔)在无水DMF(1.0毫升)中的溶液处理尿苷5’-单磷酰吗啉4-吗啉-N，N’-二环己基甲脒盐(Sigma，0.068克，0.1毫摩尔)达20天，进行基本如上所述的分离得到标题化合物的铵盐(1.6％)。1H NMR在D2O中(δppm，内标四甲基甲硅烷)：4.07-4.09(m，6H)；4.17-4.22(m，4H)；5.79(d，J＝8.1Hz，2H)；5.80(d，J＝4.8Hz，2H)；7.78(d，J＝8.2Hz，2H)。31P NMR在D2O中(δppm，内标H3PO4)：-10.82(m，4p)；类似于在相同的条件下得到的P1，P4-二(腺苷5’-四磷酸盐)(Sigma)的P-P偶合类型。
实施例4
制备P1，P4-二(4-硫代尿苷5’-四磷酸盐)
将4-硫代尿苷单磷酸钠(Sigma，25毫克，0.057毫摩尔)溶于水(0.5毫升)，加到三丁胺形式的Biorad AG-MP50强阳离子交换树脂柱上(2毫升床体积，3meq)，柱用水洗脱(～10毫升)，冻干洗脱液。将三丁铵盐溶于无水DMF(0.5毫升)，加入羰基二咪唑(4.86毫克，0.03毫摩尔)。在氮气下于室温使反应混合物放置12天。在真空、室温下使反应混合物蒸发至干，残留物溶于水(2毫升)，加于碳酸氢盐形式的DEAE纤维素柱(2.5×50cm床体积)上。柱用水(～250毫升)洗脱，然后用碳酸氢铵(0-0.33M，总体积900毫升)梯度洗脱，然后用400毫升以上的0.33到0.5M碳酸氢铵梯度洗脱。跟踪流出进程，可监测洗脱液在280纳米处的吸收；收集0.336和0.339M之间的洗脱组分，蒸发至干，通过用去离子水重复蒸发来脱盐得到标题化合物(0.0045毫摩尔，18％得率，通过将其在λ最大332nm处的吸收与4-硫代尿苷二磷酸盐的标准溶液比较进行定量)。1H NMR在D2O中(δppm，内标四甲基甲硅烷)：4.09-4.11(m，6H)；4.18-4.24(m，4H)；5.76(d，J＝4.5Hz，2H)；6.47(d，J＝7.7Hz，2H)；7.67(d，J＝8.2Hz，2H)。31P NMR在D2O中(δppm，内标H3PO4)：-22.57到-22.73(m，2p)；-10.76到-10.91(m，2P)；类似于在相同的条件下得到的P1，P4-二(腺苷5’-四磷酸盐)(Sigma)的P-P偶合类型。
实施例5
制备P1，P5-二(尿苷5’-五磷酸盐)
向100毫升圆底烧瓶中加入尿苷5’-二磷酸三丁基铵盐(1.81毫摩尔，10毫升)和羰基二咪唑(469毫克，2.90毫摩尔)的DMF溶液，使溶液在N2下搅拌2小时。向内加入尿苷5’-三磷酸三丁基铵盐(1.81毫摩尔，10毫升)的DMF溶液，让溶液在60℃下搅拌24小时。真空蒸发溶液，通过柱色谱纯化两次(DEAE Sephadex；H2O＞0.5M NH4HCO3梯度洗脱)。在35℃下真空浓缩纯净流，加入H2O，再蒸发共0次得到白色固体(200毫克)。1H NMR在D2O中(δppm，内标四甲基硅烷)：4.0(m，br，6H)，4.1(m，4H)，5.7(m，4H)，7.7(d，J＝8.1Hz，2H)；31P NMR在D2O中(δppm，内标H3PO4)：-22.3(m，3P)，-10.6(d，J＝42.9Hz，2P)。
实施例6
制备P1，P4-二(3，N4-亚乙烯基胞苷5’-)四磷酸盐
向P1，P4-二(胞苷5’-)四磷酸盐(参照物3，表I；铵盐，6微摩尔，在0.66毫升水中)加入碳酸氢钠(0.005克，60微摩尔)，冻干溶液以除去氨。残留物溶于水(0.2毫升)和氯乙醛溶液(50％在水中，0.30毫升)的混合物，使反应混合物在室温下放置6天。冻干反应混合物，胶状残留物在氧化氘(0.7毫升)和二氯甲烷(1.5毫升)之间分配。水溶液的1H NMR谱表明乙烯基化进行了约50％，而31P谱表明四磷酸盐链是完整的。将另外的氯乙醛溶液(0.25ml)加到NMR溶液里，让混合物再放置10天。冻干溶液，再用氧化氘冻干残留物以除去可交换的质子。如前所述，残留物在氧化氘和二氯甲烷之间分配，由NMR谱证明已完全转化为乙烯基衍生物。将氧化氘溶液加到碳酸氢盐形式的DEAE纤维素柱(2.5×50cm床体积)上。柱用水(～250毫升)洗脱，然后用1000毫升以上的0到0.5M的碳酸氢铵梯度洗脱。跟踪流出进程，监测洗脱液在280纳米处的吸收；收集0.29和0.32M之间的洗脱流分，蒸发至干，通过用去离子水重复蒸发来脱盐得到标题化合物(1.584微摩尔，26.4％得率，通过将其在λ最大273处的吸收度与3，N4-亚乙烯基胞苷5’-单磷酸盐的标准溶液比较进行定量)。1H NMR在D2O中(δppm，内标四甲基甲硅烷)：4.123(m，6H)；4.258(m，4H)；5.986(s，2H)；6.92(d，J＝8.1Hz，2H)；7.461(s，2H)；7.772(s，2H)；8.00(d，J＝7.6Hz，2H)。31P NMR在D2O中(δppm，内标H3PO4)：-22.474(m，2P)；-10.650(m，2P)；极为类似于在相同的条件下得到的P1，P4-二(腺苷5’-四磷酸盐)(Sigma)的P-P偶合类型。
实施例6(a)
P1，P4-二(咪唑并[1，2-c]嘧啶-5(6H)-酮-2-(3-硝基)-苯基-6-β-D-核呋喃糖核苷5’-)四磷酸盐，四铵盐
将P1，P4-二(胞苷5’-)四磷酸四铵盐(100毫克，0.117毫摩尔)(参照物3，表I)溶于水(10毫升)，经Dowex 50H+树脂柱(3克，用甲醇和水预洗)冲洗，并用50毫升水洗涤。加入三丁胺(1毫升)和二甲基甲酰胺(DMF)(5毫升)，蒸发溶液得到油。将油溶于无水DMF(10毫升)，蒸发周期重复两次。最终的油溶于无水DMF(10毫升)和三丁胺(1.5毫升)中，再加入α-溴-3’-硝基-乙酰苯(86毫克，0.351毫摩尔)。在氮气下使反应混合物在70℃下加热20小时，此时再加入α-溴-3’-硝基-乙酰苯(50毫克，0.205毫摩尔)。再加热18小时后，真空蒸去溶剂，残留物经快速色谱纯化(DEAE Sephadex，0＞1.0M NH4HCO3)得到黄色固体(13.5mg)：1HNMR(D2O，TMS)δ4.0-4.2(m，br，10H)，6.0(d，J＝5.7Hz，2H)，6.4(d，J＝8.1Hz，2H)，7.35(t，J＝7.8Hz，2H)，7.5(d，J＝8.1Hz，2H)，7.80(m，3H)，8.03(s，2H)；31P NMR(D2O，H3PO4std)δ-10.67(m，2P)，-22.26(m，2P)。
实施例7
P1-(胸苷-5’-)P4-(尿苷-5’-)四磷酸盐(UP4T)
使尿苷5’-三磷酸(UTP)三钠盐(PtoBioSint，5.86克，0.01摩尔)在水(5毫升)里的溶液经过三丁胺形式的BioRad AG-MP 50强阳离子交换树脂柱(50毫升床体积)，用蒸馏水(约300毫升)洗脱。向该溶液中加入三丁胺(5毫升)，振摇悬浮液，直至水溶部分的pH升到8。分离各层，将水性溶液蒸发到较少的体积，然后冻干过夜。将残留物溶于无水二甲基甲酰胺(DMF，20毫升)，在0.1mmHg下蒸发溶剂。用无水丙酮溶解干燥的三丁胺盐，使成100毫升，得到储备溶液(0.1MUTP)。将二环己基碳化二亚胺(DCC)(Baker，0.1克，0.5毫摩尔)加到前述的UTP溶液的一份中(1.0ml，0.1毫摩尔)，使溶液在室温下搅拌30分钟。通过过滤除去沉淀下来的二环己基脲，用醚(10毫升)萃取反应混合物，将残留物溶于无水氘化的二甲亚砜(DMSO-d6，0.3毫升)。将这一尿苷5’-环偏磷酸盐(UcTP)溶液加到胸苷5’-单磷酸盐(TMP，0.064克，0.2毫摩尔)和三丁胺(0.2ml)在DMSO-d6(0.3毫升)中的溶液，在50℃下放置24小时。高真空下使反应混合物蒸发过夜，残留物溶于水(1.0毫升)，过滤以除去残留的二环己基脲，通过半制备性离子交换色谱分离(Hamilton PRP X-100柱，用等浓度的1.0M碳酸氢铵洗脱，5毫升/分钟，30分钟，多次注射100微升)。二核苷四磷酸盐在21到23分钟之间洗脱出来；通过将其在λ最大263nm处的紫外吸收与UMP和TMP标准品比较对产物定量(11.1％得率，以UTP为基)。1H NMR(D2O，内标四甲基甲硅烷，δppm)：1.78(s，3H)；2.19-2.22(m，2H)；4.04-4.13(m，6H)，4.22-4.27(m，2H)；4.52(m，被D2O部分掩盖)；4.74(m，被D2O部分掩盖)；5.83(d，J＝8.1Hz，1H)；5.84(d，J＝5.0Hz，1H)；6.195(t，J＝6.9Hz，1H)；7.61(s，1H)；7.82(d，J＝8.1Hz，1H)。31P NMR(D2O，内标H3PO4，δppm)-22.71(m，2P)；-10.97(m，2P)。
实施例8
P1-(肌苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4I)
除了在蒸去溶剂前将反应混合物在25℃下放置5周外，其它基本按照如上所述尿苷5’-环三偏磷酸盐(UcTP)和肌苷5’-单磷酸盐的缩合。将残留物溶于水(1.0毫升)，过滤，通过在Hamilton PRP X-100柱的离子交换色谱，用等浓度的1.0M碳酸氢铵洗脱，5毫升/分钟，持续30分钟，以每分150微升的一系列等分进样。蒸发6-9分钟之间洗脱的流分，冻干过夜以除去缓冲剂。通过将其在260nm处的紫外吸收与UMP和TMP品比较对二核苷四磷酸盐定量(8％得率，HPLC(AUC)测得96％纯度)。1H NMR(D2O，内标四甲基甲硅烷，δppm)：4.13(m，6H)；4.24-4.27(m，2H)；4.47(m，被D2O部分掩盖)；5.78(d，J＝7.9Hz，1H)；5.83(d，J＝4.7Hz，1H)；6.003(d，J＝5.7Hz，1H)；7.79(d，J＝7.9Hz，1H)；8.10(s，1H)；8.37(s，1H)。31P NMR(D2O，内标H3PO4，δppm)-22.43(m，2P)；-10.72(m，2P)。
实施例9
P1-(4-硫代尿苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4(4-SH-U))
将4-硫代尿苷单磷酸钠(25毫克，0.057毫摩尔)溶于水(0.5毫升)，加在三丁胺形式的Biorad AG-MP50强阳离子交换树脂(2毫升床体积，3毫当量)柱上，用水(～10毫升)洗脱柱，冻干洗脱液。将所得的4-硫代-UMP的三丁胺盐与尿苷5’-环三偏磷酸盐(0.1毫摩尔)缩合，基本上如实施例7所述，用二环己基碳化二亚胺(206毫克)活化UTP来制备所述的尿苷5’-环三偏磷酸盐(72小时反应时间)。从反应混合物蒸去DMSO后，将残留物溶于水(～1毫升)，在Hamilton PRP X-100柱上通过离子交换色谱，用等浓度的1.0M碳酸氢铵洗脱，5毫升/分钟，每份分离200μl。在328纳米处监测。冻干在15-25分钟流出的流分，得到标题化合物(9.7％得率，HPLC(AUC)测得为99.7％纯度)，通过将其在332nm处的紫外吸收与4-硫代-UMP在相同波长下的吸收比较对其定量。1H NMR(D2O，内标四甲基甲硅烷，δppm)：4.04(m，被HOD部分掩盖重叠)；4.14(m，被HOD部分重叠)；5.72(m，3H)；6.42(d，J＝7.4Hz)；7.55(d，J＝7.6Hz)；7.70(d，J＝8.1Hz)。31P NMR(D2O，内标H3PO4，δppm)：-20.88(m，2P)；-9.27(m，2P)。
除了用己烷代替醚从反应混合物里萃取过量DCC外，实施例10-12基本按照实施例7所述从尿苷5’-环三偏磷酸盐(0.1毫摩尔)和相关的核苷5’-单磷酸盐(0.2毫摩尔)制备。
实施例10
P1-(胞嘧啶β-D-阿拉伯呋喃糖苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐，(UP4araC)(20毫克)；1H NMR(D2O)，δ4.30-3.95(m，10H)，5.99(d，J＝6.7Hz，1H)，6.08(d，J＝5.2Hz，1H)，7.82-7.77(m，2H)；31P NMR(D2O)δ-10.79(m，2P)，-22.52(m，2P)。
实施例11
P1-(尿苷5’-)-P4-(黄苷5’-)四磷酸盐(UP4X)(27.7毫克)；1H NMR(D2O)，δ4.50-4.40(m，10H)，5.80-5.70(m，3H)，7.70(d，J＝8.0Hz，1H)，7.88(s，1H)；31PNMR(D2O)δ-10.73(m，2P)，-22.41(m，2P)。
实施例12
P1-(2’-脱氧尿苷5’-)-P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4dU)(40.6毫克)；1H NMR(D2O)，δ2.20-2.15(m，2H)，4.45-3.95(m，9H)，5.80-5.74(m，3H)，6.12(t，J＝6.7Hz，1H)，7.80-7.74(m，2H)；31P NMR(D2O)δ2.9(m，2P)，-8.9(m，2P)。
实施例13
P1-(3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷5’-)-P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4(AZT))和
实施例14，P1，P4-二(3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷5’-)四磷酸盐，(AZT)2P4
将3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷5’-单磷酸(AZTMP)钠盐(50毫克，0.135毫摩尔)溶于水(1毫升)，加在三丁胺形式的Biorad AG-MP50强阳离子交换树脂柱上。柱用水(～10毫升)洗脱，冻干洗脱液。所得的三丁胺盐与尿苷5’-环三偏磷酸盐(0.1毫摩尔)缩合，基本如实施例7所述通过用二环己基碳化二亚胺(206毫克)活化UTP可制备所述的尿苷5’-环三偏磷酸盐。蒸发反应混合物后的残留物溶于水(1.0毫升)，通过0.45μ的注射过滤器以除去少量固体，滤液经Hamilton PRP X-100柱的制备性HPLC，用1.0M碳酸氢铵(75％)和甲醇(25％)(4毫升/分钟)的等浓度混合液洗脱。冻干在5-8分钟之间洗脱的流分以得到UP4(AZT)(7.9％)，通过将其在264纳米处的紫外吸收与UMP和TMP在相同波长处的吸收比较进行定量。1H NMR(D2O，内标四甲基甲硅烷，δppm)：1.78(s，3H)；2.30-2.34(m，2H)；4.07-4.14(m，6H)；4.22-4.29(m，2H)；4.52(m，1H)；5.82(d，J＝4.4Hz，1H)；5.84(d，J＝8.1Hz，1H)；6.12(t，J＝7Hz，1H)；7.62(s，1H)；7.81(d，J＝8.1Hz，1H)。31P NMR(D2O，δppm，内标H3PO4)-22.51(m，2P)，-11.06(m，1P)；-10.81(m，1P)。
收集和冻干同一反应混合物在25-40分钟之间洗脱出的流组分，得到P1，P4-二(3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷5’-)四磷酸盐(3％)，通过将其在266纳米处的紫外吸收与TMP在相同波长处的吸收比较进行定量。1H NMR(D2O，内标四甲基甲硅烷，δppm)：1.80(s，6H)；2.31-2.35(m，4H)；4.09-4.11(m，6H)；4.46-4.47(m，2H)；6.12(t，J＝7Hz，2H)；7.63(s，2H)。31P NMR(D2O，δppm，内标H3PO4)-22.47(m，2P)，-11.35(m，2P)。
实施例14
P1，P6-二(尿苷-5’-)六磷酸盐(U2P6)
在相似的条件下使尿苷环三偏磷酸盐与尿苷5’-三磷酸盐反应形成二核苷六磷酸盐(6.97％)。1H NMR(D2O，内标四甲基甲硅烷，δppm)：4.06-4.19(m，6H)；4.21-4.26(m，4H)；5.78(d，J＝8.2Hz，2H)；5.81(d，J＝5.4Hz，2H)；7.78(d，J＝8.1Hz，1H)。31PNMR(D2O，δppm，内标H3PO4)-22.41(m，4P)；-10.89(m，2P)。
实施例15和16
2’(3’)-苯甲酰基-P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐(实施例15)和P1，P4-二(2’(3’)-苯甲酰基尿苷5’-)四磷酸盐(实施例16)
在无水DMF(1毫升)里合并苯甲酸(61.7毫克，0.505毫摩尔)和1，1-羰基二咪唑(81.8毫克，0.505毫摩尔)，在室温下搅拌1小时。加入在无水DMF(2毫升)里的P1，P4-二(尿苷5’-)四磷酸盐(97毫克，0.102毫摩尔)，使混合物在室温下搅拌4小时。将温度升高到35℃，继续搅拌6天。将反应混合物蒸发至干，溶于水，加到Sephadex DEAE A25柱(2.5×20厘米)，用碳酸氢铵(0-0.3M，400毫升总体积)梯度洗脱，然后用等浓度的碳酸氢铵(0.5M，500毫升)洗脱。收集两个流分，蒸发至干，然后重复用水共同蒸发以除去铵盐。较早洗脱出的物质被鉴定为单苯甲酰基酯：1H NMR(D2O)δ：4.0-4.23(m，9H)，5.35-5.45(m，1H)，5.65-5.85(m，3H)，5.98-6.02(m，1H)，7.32-7.95(m，7H)；31PNMR(D2O)δ：-10.70(m，2P)，-22.28(m，2P)：较晚洗脱的物质被鉴定为二苯甲酰基酯：1H NMR(D2O)δ：4.05-4.40(m，8H)，5.30-6.05(m，6H)，7.2-7.95(m，12H)；31P NMR(D2O)δ-10.70(m，2P)，-22.45(m，2P)。
实施例17，18，19和20
P1-(2’-脱氧鸟苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4dG)(实施例17)
P1-(2’-脱氧腺苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4dA)(实施例18)
P1-(2’-脱氧肌苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4dI)(实施例19)
P1-(2’-脱氧胞苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4dC)(实施例20)
使在水(18毫升)中的尿苷5’-三磷酸盐(5.0克)通过Dowex 50H+柱，将三丁胺(3.0g)加到洗脱液里。浓缩混合物得到油，加无水DMF蒸发干燥，再溶于无水DMF(18毫升)。加入二环己基碳化二亚胺(DCC，3.5克)，使溶液在室温下搅拌30分钟，通过过滤除去沉淀。滤液中加入己烷(70毫升)，分离下层，再用己烷(70毫升)洗涤以彻底除去DCC。该尿苷5’-环偏亚磷酸盐(UcTP)溶液用于下列实验：
实施例17
P1-(2’-脱氧鸟苷5’-)-P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4dG)
将2’-脱氧鸟苷5’-单磷酸盐(d-GMP，Sigma，500毫克)溶于DMF(4.5m1)，加入三丁胺(1.0ml)，真空浓缩溶液至油状。加入尿苷5’-环偏磷酸盐(UcTP，如上述)溶液的三分之一，使溶液在40℃下加热24小时。溶液蒸发到油状，溶于水(10毫升)，加到以0.25M碳酸氢铵预平衡的碳酸氢盐形式的Sephadex DEAE(350ml，4.5×22cm)柱上。柱依次用0.25，0.30，0.35，0.40和0.50M碳酸铵盐洗脱。洗脱液用HPLC监测(SynchroPak AX-300，75％0.5MKH2PO4，25％MeCN 1.0ml/分钟，UV254nm)，浓缩含UP4dG的流分得固体，然后与水共蒸发6-7次，得到二核苷酸铵盐的橙黄色固体(140毫克，用HPLC(AUC)估计纯度为94％)。
实施例18
P1-(2’-脱氧腺苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4dA)
基本如上所述，使2’-脱氧腺苷5’-单磷酸盐(d-AMP，Sigma，500mg)与尿苷5’-环偏磷酸盐反应，得到UP4dA的白色固体铵盐(140毫克，如上的HPLC纯度，99％)。
实施例19
P1-(2’-脱氧肌苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4dI)
如以上对UTP所述用Dowex 50(H+)树脂将2′-脱氧肌苷5′-单磷酸盐(d-IMP，Sigma，钠盐1.0克)转化为其游离酸形式。用三丁胺(2.0m.)将洗脱液中和，将混合物真空浓缩到油状。所得的三丁胺盐通过与MF蒸发进行干燥，将残留物溶于DMF(4.5ml)，基本所述，用尿苷5’-环三偏酸盐处理得到P1-(2’-脱氧肌苷’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐。
实施例20
P1-(2’-脱氧胞苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4dC)
基本处理2’-脱氧胞苷5’-单磷酸盐(d-CMP，Sigma，500mg)得到P1-(2’-脱氧胞苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐的白色固体(130毫克)，HPLC的估计纯度为82％。
实施例21
通过肌醇磷酸盐试验药理活性
用E.Lazarowski等，Brit.J.Pharm.116，1619-27(1995)所述的肌醇磷酸盐试验对实施例1-20化合物试验它们激活Y1、P2Y2、P2Y4和P2Y6受体活性的能力。结果如下表II所示。
                                 表II
                           二核苷酸性总结
                             EC50(微摩尔)
  实施例   P2Y1   P2Y2   P2Y4   P2Y6
  1234566a78910111213141516   IAIA3.67IA31.2(55％)弱ndIAIA＞100IAIAIAndndIAIA   弱5.710.630.023.8(80％)0.460.30.110.110.370.190.130.10.210.70.640.79   11.1(60％)1.0(80％)1.19n/a2.8719.8(75％)0.060.20.154.160.32(65％)0.38(75％)0.390.1314.73.720.73   IA弱2.560.05(20％)92.64IA0.870.880.81.791.33.390.920.543.59.715.33
IA         反应＜2-倍基础值
弱         EC50＞100微摩尔
(XX％)     同一研究中阳性对照的反应百分数
nd         没有测定
现已以完整、清楚和确切地使本技术领域的人员能实施的方式揭示本发明、其制备方法和使用方法。应当明白，前面描述了本发明优选的技术方案，其可修改而并不脱离所附的权利要求书所述的本发明的精神或范围，为了特别指出本发明的权利要求，以下列权利要求书来结束本说明书。

Claims (10)

1.一种化合物，它选自：
P1-(胸苷5’-)P4-(尿苷-5’-)四磷酸盐(UP4T)，
P1-(肌苷5’-)P4-(尿苷-5’-)四磷酸盐(UP4I)，
P1-(4-硫代尿苷5’-)P4-(尿苷-5’-)四磷酸盐(UP4(4-SH-U))，
P1-(胞嘧啶β-D-阿拉伯呋喃糖苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4araC)，
P1-(尿苷5’-)-P4-(黄苷5’-)四磷酸盐(UP4X)，
P1-(2’-脱氧尿苷5’-)-P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4dU)，
P1-(3’-叠氮基-3’-脱氧胸苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4(AZT))，
P1-(2’-脱氧鸟苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4dG)，
P1-(2’-脱氧肌苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4dI)，和
P1-(2’-脱氧胞苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐(UP4dC)。
2.一种药物组合物，包括如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体。
3.如权利要求1所述的化合物或权利要求2所述的药物组合物在制备治疗哺乳动物慢性阻塞性肺病药物中的应用。
4.如权利要求1所述的化合物或权利要求2所述的药物组合物在制备治疗哺乳动物窦炎、中耳炎或鼻泪管阻塞的药物中的应用。
5.如权利要求1所述的化合物或权利要求2所述的药物组合物在制备治疗哺乳动物干眼病的药物中的应用。
6.如权利要求1所述的化合物或权利要求2所述的药物组合物在制备治疗哺乳动物视网膜脱落的药物中的应用。
7.如权利要求1所述的化合物或权利要求2所述的药物组合物在制备哺乳动物引痰的药物中的应用。
8.如权利要求1所述的化合物或权利要求2所述的药物组合物在制备使哺乳动物易于咳出痰的药物中的应用。
9.如权利要求1所述的化合物或权利要求2所述的药物组合物在制备治疗囊性纤维变性的药物中的应用。
10.如权利要求6或9所述的应用，其中所述的化合物是P1-(2’-脱氧胞苷5’-)P4-(尿苷5’-)四磷酸盐。
CNB988032597A 1997-02-06 1998-02-06 特定的二核苷酸和它们作为粘膜纤毛清除和纤毛颤动频率调节剂的应用 Expired - Fee Related CN1262556C (zh)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US08/797,472 1997-02-06
US08/797,472 US5900407A (en) 1997-02-06 1997-02-06 Method of treating dry eye disease with uridine triphosphates and related compounds
US08/798,508 1997-02-10
US08/798,508 US5837861A (en) 1997-02-10 1997-02-10 Dinucleotides and their use as modulators of mucociliary clearance and ciliary beat frequency

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1292795A CN1292795A (zh) 2001-04-25
CN1262556C true CN1262556C (zh) 2006-07-05

Family

ID=27121880

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB988032597A Expired - Fee Related CN1262556C (zh) 1997-02-06 1998-02-06 特定的二核苷酸和它们作为粘膜纤毛清除和纤毛颤动频率调节剂的应用

Country Status (16)

Country Link
US (2) US6348589B1 (zh)
EP (1) EP0981534B1 (zh)
JP (1) JP4531867B2 (zh)
KR (1) KR100606131B1 (zh)
CN (1) CN1262556C (zh)
AT (1) ATE325129T1 (zh)
AU (1) AU738907C (zh)
BR (1) BR9807169A (zh)
CA (1) CA2279963C (zh)
DE (1) DE69834392T2 (zh)
DK (1) DK0981534T3 (zh)
ES (1) ES2264197T3 (zh)
NO (1) NO326718B1 (zh)
NZ (1) NZ337225A (zh)
PT (1) PT981534E (zh)
WO (1) WO1998034942A2 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106729718A (zh) * 2010-09-10 2017-05-31 参天制药株式会社 以组合p2y2受体激动剂和透明质酸或其盐为特征的干眼症治疗剂

Families Citing this family (65)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6673779B2 (en) * 1996-03-27 2004-01-06 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Method of treating ciliary dyskinesia with dinucleoside polyphosphate compounds or UTP analogues
US6319908B1 (en) 1996-07-03 2001-11-20 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Method for large-scale production of di(uridine 5′-tetraphosphate) and salts thereof
US5763447C1 (en) 1996-07-23 2002-05-07 Inspire Pharmaceuticals Method of preventing or treating pneumonia in immobilized patients with uridine triphosphates and related compounds
ATE325129T1 (de) 1997-02-06 2006-06-15 Inspire Pharmaceuticals Inc Dinukleotide und ihre verwendungen
US6596725B2 (en) * 1997-02-10 2003-07-22 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Use of certain dinucleotides to stimulate removal of fluid in retinal detachment and retinal edema
US6818629B2 (en) * 1997-02-10 2004-11-16 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical formulation comprising P1-(2'-deoxycytidine 5'-)P4-(uridine 5'-) tetraphosphate
US7078391B2 (en) 1997-02-10 2006-07-18 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Method of treating edematous retinal disorders
US7223744B2 (en) 1997-02-10 2007-05-29 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Pharmaceutical formulation comprising dinucleoside polyphosphates and salts thereof
US6462028B2 (en) 1997-07-25 2002-10-08 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Method of promoting cervical and vaginal secretions
US6872710B2 (en) 1997-07-25 2005-03-29 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Di(uridine 5′)-tetraphosphate and salts thereof
ATE261982T1 (de) * 1997-07-25 2004-04-15 Inspire Pharmaceuticals Inc Salze von di(uridine 5'-tetraphosphate), verfahren zur herstellung und verwendungen davon
TW593331B (en) 1997-07-25 2004-06-21 Inspire Pharmaceuticals Inc Method for large-scale production of di(uridine 5')-tetraphosphate and salts thereof
US6548658B2 (en) * 1997-07-25 2003-04-15 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Di-(uridine 5′)-tetraphosphate and salts thereof
ATE288273T1 (de) * 1997-08-29 2005-02-15 Univ North Carolina Verwendung von uridin-5'-diphosphat und analoge zur behandlung von lungenerkrankungen
CA2332540A1 (en) 1998-05-22 1999-12-02 Benjamin R. Yerxa Therapeutic dinucleotide and derivatives
JP2002533110A (ja) * 1998-12-23 2002-10-08 ザ・ユニヴァーシティ・オヴ・ノース・キャロライナ・アト・チャペル・ヒル Ｇタンパク質共役レセプターを使用した目的とする遺伝子の導入
US6331529B1 (en) 1999-02-26 2001-12-18 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Method of promoting mucosal hydration with certain uridine, adenine and cytidine diphosphates and analogs thereof
HU229225B1 (en) * 1999-06-30 2013-09-30 Inspire Pharmaceuticals Inc Raleigh Dinucleotide crystals
WO2001012644A1 (en) * 1999-08-17 2001-02-22 Adani, Alexander Dinucleoside 5',5'-tetraphosphates as inhibitors of viral reverse transcriptases and viruses
EP1261323A2 (en) * 1999-12-22 2002-12-04 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Method of treating gastrointestinal tract disease with purinergic receptor agonists
US6864243B1 (en) * 2000-05-12 2005-03-08 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Method for treating retinal degeneration with purinergic receptor agonists
BR0111297A (pt) 2000-05-30 2004-01-06 Santen Pharmaceutical Co Ltd Promotor de migração epitelial corneana
US6867199B2 (en) 2000-08-21 2005-03-15 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Dinucleoside polyphosphate compositions and their therapeutic use
US6555675B2 (en) * 2000-08-21 2003-04-29 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Dinucleoside polyphosphate compositions and their therapuetic use as purinergic receptor agonists
US7018985B1 (en) 2000-08-21 2006-03-28 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Composition and method for inhibiting platelet aggregation
US7115585B2 (en) * 2000-08-21 2006-10-03 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Compositions for treating epithelial and retinal tissue diseases
US7452870B2 (en) 2000-08-21 2008-11-18 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Drug-eluting stents coated with P2Y12 receptor antagonist compound
US7132408B2 (en) * 2000-08-21 2006-11-07 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Composition and method for inhibiting platelet aggregation
CA2429352A1 (en) * 2000-12-15 2002-06-20 Lieven Stuyver Antiviral agents for treatment of flaviviridae infections
EP1368366A1 (en) * 2001-02-07 2003-12-10 Celltech R & D Limited Non-natural nucleotides and dinucleotides
AR034635A1 (es) 2001-06-25 2004-03-03 Inspire Pharmaceuticals Inc Lubricacion de las articulaciones con agonistas del receptor purinergico p2y
WO2003011885A1 (en) * 2001-07-25 2003-02-13 Celltech R & D Limited Non-natural carbon-linked nucleotides and dinucleotides
US20030109488A1 (en) * 2001-10-11 2003-06-12 Alcon, Inc. Methods for treating dry eye
MXPA04004215A (es) 2001-11-06 2004-07-08 Inspire Pharmaceuticals Inc Metodo para el tratamiento o la prevencion de enfermedades inflamatorias.
US7084128B2 (en) 2002-01-18 2006-08-01 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Method for reducing intraocular pressure
CN1700894A (zh) * 2002-10-18 2005-11-23 莫利化学医药公司 使用羊毛硫抗生素治疗干眼病的方法
US6984628B2 (en) * 2003-07-15 2006-01-10 Allergan, Inc. Ophthalmic compositions comprising trefoil factor family peptides
US7326683B2 (en) * 2004-05-06 2008-02-05 Molichem Medicines, Inc. Treatment of membrane-associated diseases and disorders using lantibiotic containing compositions
CA2565545A1 (en) * 2004-05-06 2005-12-08 Molichem Medicines, Inc. Treatment of ocular diseases and disorders using lantibiotic compositions
GB0417886D0 (en) * 2004-08-11 2004-09-15 Univ Cardiff Method and means for enhanced pulmonary delivery
GB0502250D0 (en) * 2005-02-03 2005-03-09 Ic Vec Ltd Use
US7368439B2 (en) * 2005-06-15 2008-05-06 Bar - Ilan University Dinucleoside poly(borano)phosphate derivatives and uses thereof
US7851456B2 (en) * 2005-06-29 2010-12-14 Inspire Pharmaceuticals, Inc. P2Y6 receptor agonists for treating lung diseases
EP1959968A2 (en) 2005-12-06 2008-08-27 P2-Science APS Modulation of the p2y2 receptor pathway
US20070249556A1 (en) * 2006-04-21 2007-10-25 Brubaker Kurt E Method of treating inflammation
JP5193040B2 (ja) * 2006-07-26 2013-05-08 ヤマサ醤油株式会社 ジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの製造法
EP2049665A2 (en) * 2006-07-28 2009-04-22 Applera Corporation Dinucleotide mrna cap analogs
EP2211956A4 (en) 2007-10-10 2014-07-09 Parion Sciences Inc DISPOSAL OF OSMOLYTES WITH A NOSE CANNULA
US8168597B2 (en) * 2008-10-22 2012-05-01 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Method for treating cystic fibrosis
WO2010071587A1 (en) * 2008-12-18 2010-06-24 Avaris Ab A complex and method for enhancing nuclear delivery
US9011909B2 (en) 2010-09-03 2015-04-21 Wisconsin Pharmacal Company, Llc Prebiotic suppositories
US8945605B2 (en) 2011-06-07 2015-02-03 Parion Sciences, Inc. Aerosol delivery systems, compositions and methods
AU2012267938B2 (en) 2011-06-07 2017-05-04 Parion Sciences, Inc. Methods of treatment
AR086745A1 (es) 2011-06-27 2014-01-22 Parion Sciences Inc 3,5-diamino-6-cloro-n-(n-(4-(4-(2-(hexil(2,3,4,5,6-pentahidroxihexil)amino)etoxi)fenil)butil)carbamimidoil)pirazina-2-carboxamida
JP5625081B2 (ja) 2012-03-26 2014-11-12 参天製薬株式会社 ジクアホソル含有点眼液
TR201809148T4 (tr) 2012-05-29 2018-07-23 Parion Sciences Inc Göz kuruluğu ve diğer mukozal hastalıkların tedavisi için sodyum kanal blokör etkinliğine sahip dendrimer benzeri amino asitler.
ES2674665T3 (es) 2012-12-17 2018-07-03 Parion Sciences, Inc. Compuestos de 3,5-diamino-6-cloro-N-(N-(4-fenilbutilo)carbamimidoilo)-pirazina-2-carboxamida
AU2013363218B2 (en) 2012-12-17 2018-03-15 Parion Sciences, Inc. Chloro-pyrazine carboxamide derivatives useful for the treatment of diseases favoured by insufficient mucosal hydration
KR20150095870A (ko) 2012-12-17 2015-08-21 패리온 사이언스 인코퍼레이티드 3,5-디아미노-6-클로로-n-(n-(4-페닐부틸)카르밤이미도일)피라진-2-카르복스아미드 화합물
US10323058B2 (en) 2014-07-24 2019-06-18 W. R. Grace & Co.-Conn. Crystalline form of nicotinamide riboside
WO2016144660A1 (en) 2015-03-09 2016-09-15 W.R. Grace & Co.-Conn. Crystalline form of nicotinamide riboside
WO2016185026A1 (en) * 2015-05-20 2016-11-24 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods and pharmaceutical composition for modulation polarization and activation of macrophages
WO2019126482A1 (en) 2017-12-22 2019-06-27 Elysium Health, Inc. Crystalline forms of nicotinamide riboside chloride
EP3919062A1 (en) 2020-06-02 2021-12-08 Institut Gustave-Roussy Modulators of purinergic receptors and related immune checkpoint for treating acute respiratory distress syndrom
US20230302031A1 (en) 2020-06-02 2023-09-28 Institut Gustave-Roussy Modulators Of Purinergic Receptors and Related Immune Checkpoint For Treating Acute Respiratory Distress Syndrome

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4855304A (en) 1985-01-10 1989-08-08 Repligen Corporation Dinucleoside pyrophosphates and pyrophosphate homologs as plant antivirals
US5049550A (en) * 1987-11-05 1991-09-17 Worcester Foundation For Experimental Biology Diadenosine 5', 5'"-p1, p4,-tetraphosphate analogs as antithrombotic agents
US5292498A (en) * 1991-06-19 1994-03-08 The University Of North Carolina At Chapel Hill Method of treating lung disease with uridine triphosphates
EP0773951B1 (en) 1994-07-15 1999-03-10 Biosearch Italia S.p.A. Dinucleoside-5',5'-pyrophosphates
US5635160A (en) * 1995-06-07 1997-06-03 The University Of North Carolina At Chapel Hill Dinucleotides useful for the treatment of cystic fibrosis and for hydrating mucus secretions
US5837861A (en) * 1997-02-10 1998-11-17 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Dinucleotides and their use as modulators of mucociliary clearance and ciliary beat frequency
US5681823A (en) * 1996-05-02 1997-10-28 Prp Inc. P1, P4 -dithio-P2 -P3 -monochloromethylene 5', 5'"-diadenosine P1, P4 -tetraphosphate as antithrombotic agent
US5789391A (en) * 1996-07-03 1998-08-04 Inspire Pharmaceuticals, Inc. Method of treating sinusitis with uridine triphosphates and related compounds
US5763447C1 (en) * 1996-07-23 2002-05-07 Inspire Pharmaceuticals Method of preventing or treating pneumonia in immobilized patients with uridine triphosphates and related compounds
CA2268434C (en) * 1996-10-09 2007-05-01 Krzysztof W. Pankiewicz Mycophenolic bisphosphonate derivatives and their preparation from tetraphosphonate bicyclic trisanhydrides
ATE325129T1 (de) 1997-02-06 2006-06-15 Inspire Pharmaceuticals Inc Dinukleotide und ihre verwendungen

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106729718A (zh) * 2010-09-10 2017-05-31 参天制药株式会社 以组合p2y2受体激动剂和透明质酸或其盐为特征的干眼症治疗剂

Also Published As

Publication number Publication date
KR20000070807A (ko) 2000-11-25
EP0981534A2 (en) 2000-03-01
CN1292795A (zh) 2001-04-25
US20020082417A1 (en) 2002-06-27
NO993776D0 (no) 1999-08-04
NO993776L (no) 1999-10-06
JP4531867B2 (ja) 2010-08-25
JP2001526635A (ja) 2001-12-18
WO1998034942A3 (en) 2000-01-06
BR9807169A (pt) 2000-06-06
NO326718B1 (no) 2009-02-02
AU6324298A (en) 1998-08-26
ES2264197T3 (es) 2006-12-16
US6977246B2 (en) 2005-12-20
ATE325129T1 (de) 2006-06-15
CA2279963C (en) 2008-04-22
AU738907B2 (en) 2001-09-27
DK0981534T3 (da) 2006-09-04
US6348589B1 (en) 2002-02-19
WO1998034942A2 (en) 1998-08-13
DE69834392D1 (de) 2006-06-08
KR100606131B1 (ko) 2006-07-31
CA2279963A1 (en) 1998-08-13
NZ337225A (en) 2002-03-28
AU738907C (en) 2002-05-16
EP0981534B1 (en) 2006-05-03
DE69834392T2 (de) 2007-02-08
PT981534E (pt) 2006-09-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1262556C (zh) 特定的二核苷酸和它们作为粘膜纤毛清除和纤毛颤动频率调节剂的应用
CN101321775B (zh) 用于治疗疟疾的odcase抑制剂
US5837861A (en) Dinucleotides and their use as modulators of mucociliary clearance and ciliary beat frequency
KR101806314B1 (ko) 바이러스 감염증을 치료하기 위한 조성물 및 방법
DK167377B1 (da) 3'-azidopyrimidinnucleosider eller farmaceutisk acceptable salte eller estere deraf til anvendelse ved behandling af eller profylakse for en human retrovirusinfektion
CN1168735C (zh) 核苷单磷酸酯脂类酯及其做为免疫抑制药物的应用
CA2623522C (en) Modified 4'-nucleosides as antiviral agents
EP0707481B1 (en) L-2',3'-dideoxy nucleoside analogs as anti-hepatitis b (hbv) and anti-hiv agents
US20050250950A1 (en) 1,3-oxathiolane nucleoside analogues
CN1505636A (zh) 药学活性尿苷酯
JPH10147586A (ja) ２−ヒドロキシメチル−５−（５−フルオロシトシン−１ −イル）−１，３−オキサチオランの抗ウィルス活性およ び分割
US20230382943A1 (en) Oligonucleotide for 5'-capped rna synthesis
HUT70030A (en) 1,3-oxathiolane nucleoside analogues and pharmaceutical compositions containing them, and process for their preparation
Murakami et al. Escherichia coli mediated biosynthesis and in vitro anti-HIV activity of lipophilic 6-halo-2', 3'-dideoxypurine nucleosides
CN1671398A (zh) 治疗上皮和视网膜组织疾病的组合物和方法
JP3693357B2 (ja) 逆転写酵素阻害剤
WO2004043402A2 (en) Modified nucleosides as antiviral agents
CN1077199A (zh) 治疗用核苷
US20120245029A1 (en) Novel phosph(on)ate- and sulf(on)ate-based phosphate modified nucleosides useful as substrates for polymerases and as antiviral agents
CN1646544A (zh) 制备纯化的磷酸二阿米迪特的方法
KR20230123318A (ko) 5'-캡핑된 rna 합성용 올리고뉴클레오티드
KR20230083197A (ko) 5'-캡핑된 rna 합성용 올리고뉴클레오티드
KR20240010238A (ko) 캡 유사체 및 이의 용도
AU644412C (en) 6-halo- and 2-amino-6-halo-purine 2',3'-dideoxy nucleosides and their use as antiviral agents
AU644412B2 (en) 6-halo- and 2-amino-6-halo-purine 2',3'-dideoxy nucleosides and their use as antiviral agents

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1079100

Country of ref document: HK

REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: WD

Ref document number: 1033464

Country of ref document: HK

ASS Succession or assignment of patent right

Owner name: MSD CORP.

Free format text: FORMER OWNER: INSPIRE PHARMACEUTICALS, INC.

Effective date: 20150727

C41 Transfer of patent application or patent right or utility model
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20150727

Address after: new jersey

Patentee after: Schering Corporation

Address before: North Carolina

Patentee before: Inspire Pharmaceuticals, INC.

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee

Granted publication date: 20060705

Termination date: 20170206

CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee