JP5193040B2

JP5193040B2 - ジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの製造法

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Publication number: JP5193040B2
Application number: JP2008526680A
Authority: JP
Inventors: 悟向後; 浩平山田; 優子岩井; 和臣大沢; 弘之早川
Original assignee: Yamasa Corp
Current assignee: Yamasa Corp
Priority date: 2006-07-26
Filing date: 2007-07-25
Publication date: 2013-05-08
Anticipated expiration: 2027-07-25
Also published as: WO2008012949A1; CN101495497B; EP2045257A4; CA2659595C; US8193338B2; KR101406102B1; KR20090032077A; EP2045257B1; CN101495497A; CA2659595A1; JPWO2008012949A1; EP2045257A1; US20100016567A1

Description

本発明は、ジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの効率的な製造法に関する。

下記式（Ｉ）で表されるジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの中で、例えば、Ｐ^１，Ｐ^４−ジ（ウリジン５’−）テトラホスフェート（Ｕｐ４Ｕ）又はその塩は、痰排出誘導作用を有するため、去痰剤あるいは肺炎治療薬として開発が期待されている化合物であり、Ｐ^１−（２’−デオキシシチジン５’−）Ｐ^４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート（ｄＣｐ４Ｕ）又はその塩は、Ｐ２Ｙ２及び／又はＰ２Ｙ４プリン受容体の選択的アゴニストであるため、慢性気管支炎、副鼻腔炎などの治療薬としての開発が期待されている化合物である。

（式中、Ｒ^１とＲ^２は水素原子又は水酸基を示し、Ｂ^１とＢ^２はピリミジン塩基を示し、それぞれ同一であって異なっていても良い。また、ｎは１〜４の整数を示す。）

このようなジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの合成法としては、例えばＵｐ４Ｕの場合、ウリジン５’−モノリン酸（ＵＭＰ）を出発原料とし、ジフェニルホスホロクロリデート（ＤＰＣ）等の活性化剤とピロホスフェート（ＰＰｉ）等のリン酸化剤を用いて合成されていたが、目的化合物の合成収率は約１０％弱と極めて低く、到底実用的な方法とはなり得なかった（特許文献１）。

そこで、これらの方法を改善する試みとして、ヌクレオシド５’−環状トリリン酸を経由する方法が検討されている。具体的には、ウリジン５’−環状トリリン酸とＵＭＰとを反応させてＵｐ４Ｕを調製する方法（非特許文献１）、アデノシン５’−環状トリリン酸とアデノシン５’−モノリン酸と反応させてＰ^１，Ｐ^４−ジ（アデノシン５’−）テトラホスフェートを調製する方法が報告されている（非特許文献２）。
ＷＯ９９／５１５５Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆ＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙＬｅｔｔｅｒｓ，１１（２００１），１５７−１６０ＯｒｇａｎｉｃＬｅｔｔｅｒｓ，Ｖｏｌ．８，Ｎｏ．１０，２０７５−２０７７（２００６）

ウリジン５’−環状トリリン酸とＵＭＰとを反応させてＵｐ４Ｕを調製する方法は、３２％の収率でＵｐ４Ｕを合成できると報告されている（非特許文献１）。しかしながら、この反応条件では４０℃と高い反応温度が要求され、この加温条件下では、目的物以外の副生成物が多く生成するため、精製が非常に困難となる問題があった。特にｄＣｐ４Ｕのような非対称型のジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの合成を加温下で行った場合、同時に目的物と構造が酷似した対照型のＵｐ４Ｕも副生し、種々精製条件においても分離はほとんど不可能であった。このことから、ヌクレオシド５’−環状トリリン酸とヌクレオシド５’−モノリン酸の反応においては、副生成物を増加させないよう室温程度の温度で反応を実施することが重要であることがわかった。しかしながら、この反応を室温程度で実施した場合には、後述実施例に詳述したように、その収率を再現することはできず、得られるＵｐ４Ｕの合成収率は１０％以下と極めて低いものであった。

一方、アデノシン５’−環状トリリン酸とアデノシン５’−モノリン酸と反応させてＰ^１，Ｐ^４−ジ（アデノシン５’−）テトラホスフェートを得る方法を報告した文献においては、当該方法は種々のジ（ヌクレオシド５’−）ポリホスフェートに適用できる旨が示唆されているが、ジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの合成に適用したときの具体的なデータが全く示されていない。また、当該方法は、水酸基とアミノ基を保護したヌクレオチドを原料化合物として用いており、このため目的化合物の合成後、当該保護基を脱保護する必要があり、結果として手間がかかると共に、収率低下の原因の１つとなっていた。また、反応に用いる試薬類を大過剰に用いなければならず、コスト的にも不利である。更に重要なことは、この方法をジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの合成に応用した我々の追試では、後述に示すように、目的化合物の合成収率は低く、決して満足できるものではない、という問題点があった。

本発明者らは、上記問題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、ピリミジンヌクレオシド５’−環状トリリン酸とピリミジンヌクレオチドとを、特定の金属塩、特にマグネシウム塩の存在下に反応させることで、室温下でも目的とするジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの合成収率を公知の方法と比較して格段に向上させることができることを見いだし、本発明を完成した。したがって、本発明は以下の通りである。

〔１〕縮合剤を用いてピリミジンヌクレオシド５’−トリリン酸をピリミジンヌクレオシド５’−環状トリリン酸へ変換し、続けてマグネシウム、マンガン及び鉄から選択された金属塩の存在下、得られたピリミジンヌクレオシド５’−環状トリリン酸とピリミジンヌクレオチドとを反応させることを特徴とするジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの製造法。

〔２〕ジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートが下記式（Ｉ）で表される化合物である、上記〔１〕記載の製造法。

（式中、Ｒ^１とＲ^２は水素原子又は水酸基を示し、Ｂ^１とＢ^２はピリミジン塩基を示し、Ｒ^１とＲ^２及びＢ^１とＢ^２はそれぞれ同一であって異なっていても良い。また、ｎは１〜４の整数を示す。）

〔３〕縮合剤がカルボジイミド類である、上記〔１〕記載の製造法。
〔４〕金属塩がマグネシウム塩である、上記〔１〕記載の製造法。
〔５〕１５〜３０℃の温度条件で反応させる、上記〔１〕記載の製造法。

〔６〕ウリジン５’−トリリン酸（ＵＴＰ）とウリジン５’−モノリン酸（ＵＭＰ）を用い、Ｐ^１，Ｐ^４−ジ（ウリジン５’−）テトラホスフェート（Ｕｐ４Ｕ）を製造する、上記〔１〕記載の製造法。

〔７〕ウリジン５’−トリリン酸（ＵＴＰ）とウリジン５’−ジリン酸（ＵＤＰ）を用い、Ｐ^１，Ｐ^５−ジ（ウリジン５’−）ペンタホスフェート（Ｕｐ５Ｕ）を製造する、上記〔１〕記載の製造法。

〔８〕ウリジン５’−トリリン酸（ＵＴＰ）と２’−デオキシシチジン５’−モノリン酸（ｄＣＭＰ）を用い、Ｐ^１−（２’−デオキシシチジン５’−）Ｐ^４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート（ｄＣｐ４Ｕ）を製造する、上記〔１〕記載の製造法。

〔９〕２’−デオキシシチジン５’−トリリン酸（ｄＣＴＰ）とウリジン５’−モノリン酸（ＵＭＰ）とを用い、Ｐ^１−（２’−デオキシシチジン５’−）Ｐ^４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート（ｄＣｐ４Ｕ）を製造する、上記〔１〕記載の製造法。

本発明の合成法は、ピリミジンヌクレオシド５’−トリリン酸をピリミジンヌクレオシド５’−環状トリリン酸へ変換後、得られたピリミジンヌクレオシド５’−環状トリリン酸とピリミジンヌクレオチドを反応させる際、マグネシウム、マンガン及び鉄から選択された金属塩、特にマグネシウム塩の存在下で反応させることを最大の特長としている。

すなわち、従来法によれば、ピリミジンヌクレオシド５’−環状トリリン酸とピリミジンヌクレオチドとの反応において、金属塩を全く存在させないか（非特許文献１）、亜鉛塩の存在下反応させる方法（非特許文献２）が採られていた。

しかしながら、本発明者らの検討において明らかなように、ヌクレオシド５’−環状トリリン酸を経由するジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの合成においては、金属塩を存在させない非特許文献１の方法では、ジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの合成収率は極めて低く、かつ反応温度が４０℃と比較的高いこともあり、目的外の副生成物が数多く生成することから、精製が極めて困難になるという問題もあった。

また、亜鉛塩の存在下反応させる非特許文献２の方法は、Ｐ^１，Ｐ^４−ジ（アデノシン５’−）テトラホスフェートの合成には適した方法であるが、本発明者らの検討において明らかなように、ジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの方法には不適な方法で、その合成収率は必ずしも高くない。

この様な状況下、非特許文献２において、亜鉛塩より効果的でないと指摘されていたマグネシウム塩が、全く意外にも、ジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの合成に極めて有効であることを本発明者らは初めて明らかにした。すなわち、本発明の方法によれば、無保護のヌクレオチド類を出発原料とし、保護・脱保護の工程を必要としない簡便な操作法で、従来法を遙かに凌ぐ高い合成収率（５０．５〜９４．３％）で目的化合物を合成することができ、かつ反応温度が室温程度とマイルドな反応条件であるため、副生成物も少なく精製が容易という特長を有しており、ジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの工業的な大量合成に好適な方法である。

本発明方法は、上述のように、縮合剤を用いてピリミジンヌクレオシド５’−トリリン酸をピリミジンヌクレオシド５’−環状トリリン酸へ変換し、続けてマグネシウム、マンガン及び鉄から選択された金属塩の存在下、得られたピリミジンヌクレオシド５’−環状トリリン酸とピリミジンヌクレオチドとを反応させてジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートを合成する方法である。

ピリミジンヌクレオシド５’−トリリン酸をピリミジンヌクレオシド５’−環状トリリン酸へ変換するための縮合剤としては、ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、水溶性カルボジイミド（ＷＳＣ）、ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣ）といったカルボジイミド類、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）、ジフェニルホスホロクロリデート（ＤＰＣ）等のリン酸ハロゲン化物、塩化トルエンスルホニル等のスルホン酸ハロゲン化物等の公知の縮合剤を使用することができ、特にカルボジイミド類が好適である。

反応は、使用する縮合剤により異なるが、例えば、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）、ホルムアミド（ＦＡ）、ピリジン、ジオキサン、ジメチルスルホキシド等の単独又は混合溶媒中、ピリミジンヌクレオシド５’−トリリン酸（ＮＴＰ）１モルに対して縮合剤を１〜５モル使用し、０℃〜５０℃、好ましくは１５〜３０℃で１〜１０時間程度反応させることにより実施できる。

より具体的には、縮合剤としてＤＩＰＣを使用する場合、ＤＭＦ中、ＮＴＰ１モルに対して、ＤＩＰＣを１〜５モル、好ましくは１．２〜１．４モルを用い、０℃〜５０℃、好ましくは２０〜３０℃で３〜５時間程度反応させることにより実施できる。

このようにして得られたピリミジンヌクレオシド５’−環状トリリン酸は、単離することなく、続けてマグネシウム、マンガン及び鉄から選択された金属塩の存在下、ピリミジンヌクレオチドと反応させてジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートを合成する。

反応に共存させる金属塩としては、マグネシウム、マンガン及び鉄から選択された金属塩であれば、特に制限されない。具体的には、フッ化マグネシウム、塩化マグネシウム、臭化マグネシウム、ヨウ化マグネシウム、塩化マンガン、塩化第二鉄等の金属ハロゲン化物、マグネシウム、マンガン、鉄の硫酸、硝酸、リン酸、過塩素酸、テトラフルオロホウ酸塩等といった金属無機酸塩、マグネシウム、マンガン、鉄のトリフルオロメタンスルホン酸、メタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、ステアリン酸、クエン酸塩等の金属有機酸塩等を例示することができる。

そのような金属塩の中でも、合成収率及び取扱い易さの点でマグネシウム塩が好ましく、特に塩化マグネシウムを好適なものとして例示できる。なお、用いる金属塩は、無水物であっても水和物であってもかまわない。

反応は、ピリミジンヌクレオシド５’−環状トリリン酸１モルに対し、ピリミジンヌクレオチドを１〜５モル、好ましくは１．０〜１．３モル及び金属塩１〜５モル、好ましくは１．０〜１．３モルをそれぞれ添加し、０〜１００℃、好ましくは１５〜３０℃で、１〜２４時間程度反応させることにより実施できる。

反応後、合成目的のジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートは、一般のヌクレオチドの単離精製に使用されている方法（例えば、再結晶法、イオン交換カラムクロマトグラフィー、吸着カラムクロマトグラフィー、活性炭カラムクロマトグラフィーなど）を適宜組み合せて分離精製することができ、必要に応じて塩型とすることもできる。

例えば、イオン交換カラムクロマトグラフィーで使用するイオン交換樹脂としては、塩基性陰イオン交換樹脂（例えば、アンバーライトＩＲＡ４０２〔ローム＆ハース社製〕、ダイアイオンＰＡ−３１２、ダイアイオンＳＡ−１１Ａ〔三菱化学社製〕）、弱塩基性陰イオン交換樹脂（例えば、アンバーライトＩＲＡ６７〔ローム＆ハース社製〕、ダイアイオンＷＡ−３０〔三菱化学社製〕）、強酸性陽イオン交換樹脂（例えば、ダイアイオンＰＫ−２１６〔三菱化学社製〕）又は弱酸性陽イオン交換樹脂（例えば、ダイアイオンＷＫ−３０〔三菱化学社製〕）等を使用することができる。

活性炭としては、破砕状或いは粒状に成形されたクロマト用活性炭を使用すればよく、例えば和光純薬工業社、二村化学工業社製等の市販品を使用できる。

また、再結晶法は、得られた精製したジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェート又はその塩に親水性有機溶媒を加えて結晶を析出させることにより行われる。使用する親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール等炭素数６以下のアルコール類、アセトン等のケトン類、ジオキサン等のエーテル類、アセトニトリル等のニトリル類、ジメチルホルムアミド等のアミド類等を例示することができ、特にアルコール類、好ましくはエタノールが挙げられる。

このような本発明方法は、ジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェート、具体的には、例えば前記式（Ｉ）で表されるジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの製造に適用可能であり、特定の化合物の製造に限定されない。例えば、（１）ウリジン５’−トリリン酸（ＵＴＰ）とウリジン５’−モノリン酸（ＵＭＰ）を用いるＰ^１，Ｐ^４−ジ（ウリジン５’−）テトラホスフェート（Ｕｐ４Ｕ）の合成、（２）ウリジン５’−トリリン酸（ＵＴＰ）とウリジン５’−ジリン酸（ＵＤＰ）を用いるＰ^１，Ｐ^５−ジ（ウリジン５’−）ペンタホスフェート（Ｕｐ５Ｕ）の合成、（３）ウリジン５’−トリリン酸（ＵＴＰ）と２’−デオキシシチジン５’−モノリン酸（ｄＣＭＰ）を用いるＰ^１−（２’−デオキシシチジン５’−）Ｐ^４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート（ｄＣｐ４Ｕ）の合成、（４）２’−デオキシシチジン５’−トリリン酸（ｄＣＴＰ）とウリジン５’−モノリン酸（ＵＭＰ）とを用いるＰ^１−（２’−デオキシシチジン５’−）Ｐ^４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート（ｄＣｐ４Ｕ）の合成などに適用可能である。

以下、本発明を実施例をあげて具体的に説明するが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。

実施例１：Ｐ^１，Ｐ^４−ジ（ウリジン５’−）テトラホスフェート（Ｕｐ４Ｕ）の合成収率に対する金属塩の効果

（１）ウリジン５’−環状トリリン酸（ｃＵＴＰ）ジメチルホルムアミド溶液の調製
ウリジン５’−トリリン酸（ＵＴＰ）３ナトリウム５．００ｇ（９．１０ｍｍｏｌ）を脱イオン水に溶解して５０ｍＬとし、強カチオン交換カラム（ｐＫ２１６−プロトン型、２７ｃｃ）に通過させ、洗浄液とあわせてトリブチルアミン８．７ｍＬ（３７ｍｍｏｌ）で中和した。この溶液を減圧下濃縮後、残渣をジオキサン２０ｍＬで４回共沸した。残渣をジメチルホルムアミド５０ｍＬに溶解し、０．１５ＭＵＴＰトリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液とした。この溶液にジイソプロピルカルボジイミド１５３５μＬ（１０．０ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌して０．１５ＭｃＵＴＰトリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液とした。

（２）ウリジン５’−モノリン酸（ＵＭＰ）トリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液の調製
２．０５ＭＵＭＰ水溶液４．４ｍＬ（９．０ｍｍｏｌ）にトリブチルアミン４．４ｍＬ（１９ｍｍｏｌ）を加え濃縮した。残渣をジオキサン２０ｍＬで６回共沸した後、ジメチルホルムアミド５０ｍＬに溶解し、０．１８ＭＵＭＰトリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液とした。

（３）ｃＵＴＰとＵＭＰの反応における金属塩の効果の検討
上記（１）の０．１５ＭｃＵＴＰトリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液５００μＬ（７５．０μｍｏｌ）に、上記（２）の０．１８ＭＵＭＰトリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液５００μＬ（９０．０μｍｏｌ）、及び表１に示される各種金属塩の０．４５Ｍジメチルホルムアミド溶液２００μＬ（９０．０μｍｏｌ）を加え、室温（２５℃）で１時間反応させた。反応液をＨＰＬＣ（２６２ｎｍ）により分析し、目的とするＵｐ４Ｕの合成収率を求めた。その結果を表１に示す。

表１の結果から、ｃＵＴＰとＵＭＰからＵｐ４Ｕの合成において、金属塩を共存させない場合の合成収率は３．８％（非特許文献１の方法：エントリー８）、亜鉛塩を共存させた場合の合成収率は１９．１〜２４．７％（非特許文献２の方法：エントリー６〜７）であるのに対し、鉄、マンガン及びマグネシウムから選択した金属塩を共存させた場合の合成収率は６０％以上と格段に向上し、特にマグネシウム塩の場合には、８０％以上の合成収率を達成できることが明らかとなった（エントリー１〜５）。

実施例２：Ｕｐ４Ｕ・ナトリウム塩の合成

（１）ＵＴＰトリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液
ＵＴＰ３ナトリウム塩１．００ｇ（１．８２ｍｍｏｌ）を脱イオン水１３ｍＬに溶解し、強カチオン交換カラム（ｐＫ２１６−プロトン型、１０ｃｃ）に通過させ、洗浄液とあわせてトリブチルアミン１．７５ｍＬ（７．３５ｍｍｏｌ）で中和した。この溶液を減圧下濃縮後、残渣をジオキサン１０ｍＬで４回共沸した。残渣をジメチルホルムアミド１０ｍＬに溶解し、０．１３３ＭＵＴＰトリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液とした。

（２）ＵＭＰトリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液
２．０５ＭＵＭＰ水溶液１．０６ｍＬ（２．１８ｍｍｏｌ）にトリブチルアミン１．０６ｍＬ（４．４６ｍｍｏｌ）を加え濃縮した。残渣をジオキサン１０ｍＬで４回共沸した後、ジメチルホルムアミド１０ｍＬに溶解し、０．１８４ＭＵＭＰトリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液とした。

（３）Ｕｐ４Ｕの合成
上記（１）のＵＴＰトリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液にジイソプロピルカルボジイミド３６４μＬ（２．３７ｍｍｏｌ）を加え、室温で３時間撹拌した。ここに上記（２）の０．１８ＭＵＭＰトリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液及び無水塩化マグネシウム２０７．５ｍｇ（２．１７９ｍｍｏｌ）をジメチルホルムアミド４．９ｍＬに溶解した溶液を加え、室温で２５５分間撹拌した。得られた液をＨＰＬＣ（２６２ｎｍ）で分析した結果、ＵＴＰから合成収率８４．２％で目的とするＵｐ４Ｕが生成していることが明らかとなった。

（４）Ｕｐ４Ｕの精製、単離
上記（３）の反応溶液に脱イオン水６．５ｍＬを加え、減圧下濃縮した。残渣に脱イオン水２５ｍＬを加えて生じた沈殿を濾去後、濾液、洗液をあわせて強カチオン交換カラム（ｐＫ２１６−プロトン型、２０ｃｃ）に通過させた。通過液、洗液をあわせてトリエチルアミンでｐＨ７．５とした。この溶液をアニオン交換カラム（ＩＲＡ６７−塩化物イオン型、４０ｃｃ）に吸着させ、０．１５Ｎ塩酸、脱イオン水で順次洗浄後、目的物を０．３−０．４Ｍ炭酸水素アンモニウム水溶液で溶出した。目的物を含むフラクションを減圧下濃縮後、残渣を脱イオン水で共沸、凍結乾燥した。得られた残渣を脱イオン水に溶解後、強カチオン交換カラム（ｐＫ２１６−ナトリウム型、４０ｃｃ）に通過させ、溶出液、洗浄液を合わせて減圧下濃縮した。残渣を脱イオン水に溶解後、エタノールを加え冷却した。析出した結晶を濾取し、Ｕｐ４Ｕ・ナトリウム塩を得た（１．０８ｇ、１．２３ｍｍｏｌ、６７．７％）

実施例３：Ｐ^１，Ｐ^５−ジ（ウリジン５’−）ペンタホスフェート（Ｕｐ５Ｕ）の合成
０．１５ＭｃＵＴＰトリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液５００μＬ（７５．０μｍｏｌ）、０．１５４Ｍウリジン５’−ジリン酸（ＵＤＰ）トリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液５８４μＬ（９０．０μｍｏｌ）、０．４５Ｍ無水塩化マグネシウムジメチルホルムアミド溶液２００μＬ（９０．０μｍｏｌ）を加え、室温で７２時間撹拌した。得られた液をＨＰＬＣ（２６２ｎｍ）で分析した結果、ＵＴＰから合成収率５０．５％で目的とするＵｐ５Ｕが生成していることが明らかとなった。

実施例４：２’−デオキシシチジン５’−トリリン酸（ｄＣＴＰ）を出発原料とするＰ^１−（２’−デオキシシチジン５’−）Ｐ^４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート（ｄＣｐ４Ｕ）の合成

０．１４４ＭｄＣＴＰトリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液１６６μＬ（１６．７μｍｏｌ）にジイソプロピルカルボジイミド３．４μＬを加え、室温で３時間撹拌した。０．１８ＭＵＭＰトリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液、０．４５Ｍ無水塩化マグネシウム又は塩化亜鉛ジメチルホルムアミド溶液を表２に示す当量数になるように加え、室温で１時間撹拌した。得られた反応液をＨＰＬＣ（２７２ｎｍ）により分析し、目的とするｄＣｐ４Ｕの合成収率を求めた。その結果を表２に示す。

表２に示すように、ｄＣＴＰ１当量に対して１．２〜２．４当量のＵＭＰを１．２〜２．４当量の塩化マグネシウム存在下、１時間反応させることにより、ｄＣＴＰから６６．０〜７７．２％という高い合成収率でｄＣｐ４Ｕが生成することがわかった。一方、塩化亜鉛では、１０％以下の低い収率でしか目的化合物を合成できず、塩化亜鉛の当量数を増加させてもさほどの収率向上はみられなかった。

実施例５：ウリジン５’−トリリン酸（ＵＴＰ）を出発原料とするＰ^１−（２’−デオキシシチジン５’−）Ｐ^４−（ウリジン５’−）テトラホスフェート（ｄＣｐ４Ｕ）の合成

０．１５ＭｃＵＴＰトリブチルアミン塩ジメチルホルムアミド溶液、０．１５Ｍ２’−デオキシシチジン５’−モノリン酸（ｄＣＭＰ）トリブチルアミン塩ホルムアミド溶液、０．４５Ｍ塩化マグネシウム６水和物ジメチルホルムアミド溶液を表３に示される量比で混合し、その総量が１ｍＬになるようジメチルホルムアミドで調整した。室温で１時間撹拌後、得られた液をＨＰＬＣ（２７２ｎｍ）により分析し、目的とするｄＣｐ４Ｕの合成収率を求めた。

表３に示されるように、ｄＣＭＰとｃＵＴＰを塩化マグネシウム存在下１時間反応させることにより、ｄＣＭＰから定量的にｄＣｐ４Ｕが生成することが明らかとなった。また、塩化マグネシウムを共存させないと、極端に収率が低下することも確認された。

Claims

縮合剤を用いてピリミジンヌクレオシド５’−トリリン酸をピリミジンヌクレオシド５’−環状トリリン酸へ変換し、続けてマグネシウム、マンガン及び鉄から選択された金属塩の存在下、得られたピリミジンヌクレオシド５’−環状トリリン酸とピリミジンヌクレオチドとを反応させることを特徴とするジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートの製造法。
ジ（ピリミジンヌクレオシド５’−）ポリホスフェートが下記式（Ｉ）で表される化合物である、請求項１記載の製造法。

（式中、Ｒ^１とＲ^２は水素原子又は水酸基を示し、Ｂ^１とＢ^２はピリミジン塩基を示し、Ｒ^１とＲ^２及びＢ^１とＢ^２はそれぞれ同一であって異なっていても良い。また、ｎは２〜４の整数を示す。）
縮合剤がカルボジイミド類である、請求項１記載の製造法。
金属塩がマグネシウム塩である、請求項１記載の製造法。
１５〜３０℃の温度条件で反応させる、請求項１記載の製造法。
ウリジン５’−トリリン酸とウリジン５’−モノリン酸を用い、Ｐ^１，Ｐ^４−ジ（ウリジン５’−）テトラホスフェートを製造する、請求項１記載の製造法。
ウリジン５’−トリリン酸とウリジン５’−ジリン酸を用い、Ｐ^１，Ｐ^５−ジ（ウリジン５’−）ペンタホスフェートを製造する、請求項１記載の製造法。
ウリジン５’−トリリン酸と２’−デオキシシチジン５’−モノリン酸を用い、Ｐ^１−（２’−デオキシシチジン５’−）Ｐ^４−（ウリジン５’−）テトラホスフェートを製造する、請求項１記載の製造法。
２’−デオキシシチジン５’−トリリン酸とウリジン５’−モノリン酸とを用い、Ｐ^１−（２’−デオキシシチジン５’−）Ｐ^４−（ウリジン５’−）テトラホスフェートを製造する、請求項１記載の製造法。