CN111116694B - P1，p4二(尿苷5’-)四磷酸盐的制备方法 - Google Patents

P1，p4二(尿苷5’-)四磷酸盐的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN111116694B
CN111116694B CN202010001399.0A CN202010001399A CN111116694B CN 111116694 B CN111116694 B CN 111116694B CN 202010001399 A CN202010001399 A CN 202010001399A CN 111116694 B CN111116694 B CN 111116694B
Authority
CN
China
Prior art keywords
uridine
tetraphosphate
pyrophosphate
bis
triethylamine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202010001399.0A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111116694A (zh
Inventor
俞雄
戴德明
袁西伦
张袁伟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Front Health Pharmaceutical Technology Co ltd
Original Assignee
Shanghai Front Health Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Front Health Pharmaceutical Technology Co ltd filed Critical Shanghai Front Health Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority to CN202010001399.0A priority Critical patent/CN111116694B/zh
Publication of CN111116694A publication Critical patent/CN111116694A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111116694B publication Critical patent/CN111116694B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06—Separation; Purification

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)

Abstract

本发明涉及P1，P4二(尿苷5’‑)四磷酸盐的制备方法，该方法包括以下步骤：式I所示的焦磷酸咪唑三乙胺盐与式II所示的尿苷单磷酸三乙胺盐，在金属盐催化剂的作用下，在N,N‑二甲基甲酰胺中进行反应，得到式III所示的P1，P4二(尿苷5’‑)四磷酸盐

Description

P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐的制备方法
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐的制备方法。
背景技术
地夸磷索四钠(Diquafosol Tetrasodium),化学名称为P1,P4-二(尿苷 -5’-)四磷酸钠，已经由参天制药公司和inspire制药公司联合开发成3％的滴眼液，用于治疗干眼病，2010年在日本上市，商品名为Diquas，结构式如下：
Figure BDA0002353635470000011
现有技术公开了P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐的制备方法，但是这些制备方法大都要用到剧毒的三丁胺，从而对环境的污染较大。公开的制备方法有：
1)尿苷二磷酸三丁胺盐在活化剂存在下自身缩合得到P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐。
2)尿苷单磷酸三丁胺盐与活化剂反应后，与尿苷三磷酸三丁胺盐反应得到P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐。
3)尿苷三磷酸三丁胺盐先与活化剂反应,再与尿苷酸三乙胺盐或尿苷酸三丁胺盐反应得到P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐。
4)尿苷单磷酸三丁胺盐先与活化剂反应，再与焦磷酸三丁胺盐或焦磷酸三乙胺盐反应得到P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐。
国际专利申请WO2008024169A1公开P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐的制备方法，焦磷酸三丁胺盐先与CDI反应，得到焦磷酸咪唑三丁胺盐，然后再与尿苷酸辛胺盐反应48小时，得到P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐。
以上现有技术都需要使用毒性试剂三丁胺，而且仅仅追求提高反应效率和产品收率的目标，对于产物纯度没有要求，尤其是没有提及对杂质P1，P5二(尿苷5’-)五磷酸和杂质P1，P6二(尿苷5’-)六磷酸的控制及含量。
中国专利CN1151166C提供了一种P1，P4二(尿苷5，-)四磷酸盐纯化方法，依次采用阴离子交换色谱和活性炭色谱纯化得到P1，P4二(尿苷 5’-)四磷酸四钠盐，纯度至少为95％，其中仅杂质UDP、UTP的占比就约为1％，难以达到成品中总杂小于1％的药用标准。
同时，P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸钠盐作为滴眼剂制剂，其催化剂的金属离子的残留应该控制在极低的水平，尽管药典未对锰、锌金属离子做出限度要求，但按照滴眼剂对重金属离子残留的要求，需把锰、锌的残留控制在20ppm以下，现有技术均未对金属离子的残留进行研究。
因此，出于上述原因，亟需一种在环境友好的反应条件下，可制备高收率、高纯度、低金属离子残留的P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐的工艺。
发明内容
为了能获得符合药用要求的P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐，本发明人对其合成的工艺进行了深入研究，发现成品中较难除去的杂质有UDP、 UTP、U2P2、U2P3、U2P5、U2P6，尤其是U2P5和U2P6。发明人通过深入研究，意外发现，其中杂质UDP、UTP、U2P2和U2P3的含量通过氯型阴离子树脂纯化可明显降低，进一步通过重结晶可几乎完全除掉。但U2P5和 U2P6通过氯型阴离子树脂纯化较难除去，且若粗产品中U2P5和U2P6两者含量超过1％时，通过氯型阴离子树脂纯化时产品收率明显下降。所以制备P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐的反应液中杂质U2P5和U2P6的含量控制尤为关键，而反应液中杂质U2P5和U2P6的含量控制需要通过制备工艺的改进得到。
P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸钠盐作为滴眼剂制剂，其催化剂的金属离子的残留应该控制在极低的水平，尽管药典未对锰、锌金属离子做出限度要求，但按照滴眼剂对重金属离子残留的要求，需能把锰、锌的残留控制在20ppm以下，最好在10ppm以下。
发明人经充分考察本技术方案的关键参数发现，其中所用胺盐、金属催化剂的选择及用量是工艺改进的关键控制因素，两者共同决定制备P1， P4二(尿苷5’-)四磷酸钠盐的反应液中U2P5和U2P6的含量；进一步地，通过对反应液进行后处理纯化得到符合要求的成品，其中纯化条件中所用碱的种类及用量也进一步影响产品的收率、纯度和金属离子的残留。
发明人对制备焦磷酸咪唑和尿苷磷酸盐用到的有机碱包括三丁胺、三丙胺、二异丙基乙基胺、三乙胺等进行研究发现，本工艺中选择三乙胺替代现有技术所用的剧毒品三丁胺不是简单的有机碱替换，利用现有技术中的参数收率和纯度会非常低。需要重新进行工艺研究，控制工艺中的其它关键点(如催化剂的选择及用量、胺盐的选择)才能达到理想效果。然后，发明人对金属催化剂的种类(包括氯化锰，氯化镉、氯化锌，氯化亚铁等) 及用量进行大量深入研究，意外的发现当氯化锰或氯化锌的用量与焦磷酸咪唑三乙胺盐的摩尔比为5～10：1时，收率可达到至少75％，最高可达 85.8％；而氯化锰或氯化锌的用量与焦磷酸咪唑三乙胺盐的摩尔比超过5～ 10：1时，收率均较低，低于70％。同时发明人对后处理纯化方式也进行了详细的考查，结果发现，纯化过程中碱种类的选择及用量对产品收率及金属离子残留影响均较大，当选择碳酸氢钠与碳酸钠的组合时，且同时满足碳酸氢钠与金属盐催化剂之间的摩尔比为0.5-2:1、碳酸氢钠与碳酸钠之间的摩尔比为1-3:1时，产品的收率、纯度、金属例子含量可达到理想效果；反之，产品收率较低约为50％，金属离子残留较高，可达16ppm，不符合产品要求；同时如果使用单一碱甚至其它碱组合处理，均会导致过滤速度变慢甚至滤不动、堵塞的现象发生。故最终确定制备工艺中采用三乙胺盐、单金属催化剂(氯化锰或氯化锌)；纯化过程中采用碳酸氢钠和碳酸钠的组合并严格控制其用量，才能最终得到高收率、高纯度、低金属离子残留(10ppm以下)的符合药用要求的成品。
表1 P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐反应液中相关杂质的结构式
Figure BDA0002353635470000031
Figure BDA0002353635470000041
本发明的目的在于提供一种对环境有效无害能够批量生产高纯度、高收率、低金属离子残留的P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐的方法。
为此，本发明提供一种P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐的制备方法，该方法包括以下步骤：
式I所示的焦磷酸咪唑三乙胺盐与式II所示的尿苷单磷酸三乙胺盐，在金属盐催化剂的作用下，在N,N-二甲基甲酰胺中进行反应，得到式III 所示P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸酯盐
Figure BDA0002353635470000042
Figure BDA0002353635470000051
优选地，所述金属盐催化剂为氯化锰或氯化锌，优选为氯化锰；
优选地，所述金属盐催化剂与所述焦磷酸咪唑三乙胺盐之间的摩尔比为5～10：1，优选为10：1。
优选地，所述反应的反应温度为25～35℃。
优选地，所述反应的反应时间为2～4h。
优选地，所述方法还包括：对得到的式III所示的P1，P4二(尿苷5’ -)四磷酸酯盐进一步分离纯化的步骤。
优选地，所述分离纯化包括如下步骤：
将得到的式III所示的P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐溶于水中，以碳酸氢钠和碳酸钠的组合除去金属离子；过滤，滤液用水稀释，通过氯型阴离子交换树脂纯化；洗脱液以钠滤浓缩得浓缩液，后通过加入乙醇重结晶，即得。
优选地，碳酸氢钠与所述金属盐催化剂之间的摩尔比为0.5-2:1，优选 1:1；
优选地，所述碳酸氢钠与所述碳酸钠之间的摩尔比为1-3:1，优选2:1；
优选地，所述氯型阴离子交换树脂为IRA67RF树脂；
优选地，所述浓缩液重结晶前先通过螯合型离子交换树脂除去残余的金属离子；
优选地，所述螯合型离子交换树脂为IRC-748或TP207，优选为 IRC-748。
优选地，将得到的式III所示的P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸酯盐先进行如下预处理，再进一步分离纯化：
向得到的式III所示的P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐中加入乙酸乙酯，沉淀P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐，除去反应液中的N,N-二甲基甲酰胺，得到经处理的P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐。
优选地，所述焦磷酸咪唑三乙胺盐通过如下方法来制备：
使焦磷酸双三乙胺盐在N’N-二甲基甲酰胺中与N’N-羰基二咪唑在三乙胺催化剂的作用下，在25～30℃下进行反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，即得；
优选地，所述尿苷单磷酸三乙胺盐通过如下方法来制备：
使尿苷酸二钠通过氢型阳离子交换树脂得到尿苷酸水溶液，加入三乙胺进行中和，在40-55℃下进行减压浓缩，即得；
优选地，所述焦磷酸双三乙胺盐是由焦磷酸二钠通过氢型阳离子交换树脂得到焦磷酸水溶液，加入三乙胺进行中和，在45-50℃下减压浓缩得到的；
优选地，所述氢型阳离子交换树脂为PK216氢型阳离子树脂。
在一个具体的实施方案中，焦磷酸咪唑三乙胺盐与尿苷单磷酸三乙胺盐反应完毕后，反应液加入适量的乙酸乙酯沉淀P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐，除去反应液中的N,N-二甲基甲酰胺(DMF)，得到P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐(锰盐或锌盐)；将得到的P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸酯盐(锰盐或锌盐)溶于水中，用金属催化剂1倍摩尔当量的碳酸氢钠和金属催化剂一半摩尔当量的碳酸钠除去金属离子；过滤，滤液用水稀释，通过氯型阴离子交换树脂纯化；洗脱液钠滤浓缩；浓缩液通过螯合型离子交换树脂除去少量残余的金属离子，最后通过加入适量乙醇重结晶得到合格样品。
上述使用的焦磷酸咪唑三乙胺盐是由焦磷酸双三乙胺盐在N’N-二甲基甲酰胺中与4.4当量的N’N-羰基二咪唑反应在1.06当量的三乙胺催化下，25～30℃下反应，反应完毕后，加入4当量的水淬灭反应，得到的焦磷酸咪唑三乙胺盐的N’N-二甲基甲酰胺溶液，该反应几乎是定量的。
上述使用的尿苷单磷酸三乙胺盐是由市售的尿苷酸二钠通过氢型阳离子交换树脂得到尿苷酸水溶液，加入1当量三乙胺中和，在40-55℃下减压浓缩得到。
上述使用的焦磷酸双三乙胺盐是由市售的焦磷酸二钠通过氢型阳离子交换树脂得到焦磷酸水溶液，加入2.1当量的三乙胺中和，在45-50℃减压浓缩得到的。
本发明相比于现有技术，其有益之处在于：
通过合适的胺盐、金属盐催化剂及制备工艺参数的选择，提供一种在环境友好的反应条件下，可制备高收率、高纯度、低金属离子残留的P1， P4二(尿苷5’-)四磷酸盐，适用于工业化大规模生产。
附图说明
图1实施例1反应液的HPLC图；
图2实施例1分离纯化后的HPLC图。
具体实施方式
以下通过具体的实例结合附图来说明本发明。本领域技术人员能够理解，这些实例仅用于说明本发明，其不以任何方式限制本发明的范围。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为常规商购得到。
实施例1
a)焦磷酸双三乙胺盐的制备
将预处理好的氢型阳离子交换树脂PK216(2.4L)装入到层析柱中，将焦磷酸二钠(75.2g,282.81mmol)加入1.8L水搅拌溶解，水溶液加到氢型阳离子交换树脂PK216中，浸泡1小时后，用纯化水洗脱至pH5.5～6.5，合并洗脱液，滴定法测定含焦磷酸(43.2g,242.24mmol)加入三乙胺(50.7g, 513.26mmol)，搅拌30min，45-50℃下减压浓缩，至白色半固体，残余物加入适量N,N’-二甲基甲酰胺(500mL)进行共沸脱水，浓缩完毕，残余物加入N,N’-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后得到焦磷酸双三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺混悬物。
b)尿苷酸三乙胺盐的制备
将预处理好的氢型阳离子交换树脂PK216(2.4L)装入到层析柱中，将 UMP-二钠盐300.11g(含水量约20％)加入600mL水搅拌溶解，水溶液加到氢型阳离子交换树脂PK216中，浸泡1小时后，用纯化水洗脱至无UMP 流出，合并洗脱液，液相检测含尿苷酸(206.9g,638.22mmol),加入三乙胺 (64.58g，638.22mmol)，搅拌30分钟，55℃下减压浓缩，至粘稠状物，残余物加入适量N,N’-二甲基甲酰胺进行共沸脱水，浓缩完毕，残余物加入 600mL N,N’-二甲基甲酰胺,搅拌均匀后得到尿苷酸三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液。
c)焦磷酸咪唑三乙胺盐的制备
25-30℃下，向上述a)步骤制备的焦磷酸双三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺混悬液先加入三乙胺(26.0g,256.94mmol)，搅拌30分钟，然后分批加入 N,N'-羰基二咪唑(175.4g,1.08mol)，控制内温不高于30℃。加完后，于25-30℃下搅拌反应1.5h。将反应液冷却至内温0-15℃，慢慢滴加25mL水，控制反应液内温低于15℃。维持搅拌时间1h，得到焦磷酸咪唑三乙胺盐的N,N’- 二甲基甲酰胺溶液。
d)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的制备
混合b)步骤得到的尿苷酸三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液和c)步骤得到的焦磷酸咪唑三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液，搅拌均匀，分批加入无水氯化锰(306.2g，2.43mol)，控制反应温度在25-35℃之间。加料完毕后，在25-35℃条件下保温搅拌反应4小时。HPLC检测结果见图1。
e)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的纯化
反应完毕后，反应液加入1.8L乙酸乙酯搅拌，过滤，固体溶于1000mL, 加入固体碳酸氢钠(204.12g，2.43mol)和碳酸钠(128.78g，1215mmol)，搅拌2小时，过滤，滤液加浓盐酸调pH值至7-8，滤液浓缩至约600mL，加入乙醇(1200mL)，搅拌30分钟，过滤，弃去母液。滤饼加水(600mL), 该水溶液通过氯型阴离子交换柱IRA67RF树脂，依次用水，0.18N盐酸洗脱除去副产物，然后用0.35N氯化钠和0.005N盐酸洗脱下目标产物，洗脱液钠滤至约原体积的1/20，浓缩液通过鳌合树脂IRC748除去少量残余的金属离子，收集的洗脱液经水/乙醇重结晶得P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸纯品， HPLC检测结果见图2。
实施例2
a)、b)、c)步骤同实施例1。
d)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的制备
混合b)步骤得到的尿苷酸三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液和c) 步骤得到的焦磷酸咪唑三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液，搅拌均匀，分批加入无水氯化锰(306.2g，2.43mol)，控制反应温度在25-35℃之间。加料完毕后，在25-35℃条件下保温搅拌反应2小时。HPLC检测。
e)步骤同实施例1。
实施例3
a)、b)、c)步骤同实施例1。
d)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的制备
混合b)步骤得到的尿苷酸三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液和c) 步骤得到的焦磷酸咪唑三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液，搅拌均匀，分批加入无水氯化锰(153.5g，1.22mol)，控制反应温度在25-35℃之间。加料完毕后，在25-35℃条件下保温搅拌反应4小时。HPLC检测。
e)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的纯化
反应完毕后，反应液加入1.8L乙酸乙酯搅拌，过滤，固体溶于1000mL, 加入固体碳酸氢钠(102.5g，1.22mol)和碳酸钠(64.65g，610mmol)，搅拌 2小时，过滤，滤液加浓盐酸调pH值至7-8，滤液浓缩至约600mL，加入乙醇(1200mL),搅拌30分钟，过滤，弃去母液。滤饼加水(600mL),该水溶液通过氯型阴离子交换柱IRA67RF树脂，依次用水，0.18N盐酸洗脱除去副产物，然后用0.35N氯化钠和0.005N盐酸洗脱下目标产物，洗脱液钠滤至约原体积的1/20，浓缩液通过鳌合树脂IRC748洗脱，除去少量残余的金属离子，收集的洗脱液经水/乙醇重结晶得P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸纯品。
实施例4
a)、b)、c)步骤同实施例1。
d)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的制备
混合b)步骤得到的尿苷酸三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液和c) 步骤得到的焦磷酸咪唑三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液，搅拌均匀，分批加入无水氯化锰(245.6g，1.95mol)，控制反应温度在25-35℃之间。加料完毕后，在25-35℃条件下保温搅拌反应4小时。HPLC检测。
e)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的纯化
反应完毕后，反应液加入1.8L乙酸乙酯搅拌，过滤，固体溶于1000mL, 加入固体碳酸氢钠(163.8g，1.95mmol)和碳酸钠(103.34g，975mmol)，搅拌2小时，过滤，滤液加浓盐酸调PH值至7-8，滤液浓缩至约600mL，加入乙醇(1200mL)，搅拌30分钟，过滤，弃去母液。滤饼加水(600mL), 该水溶液通过氯型阴离子交换柱IRA67RF树脂，依次用水，0.18N盐酸洗脱除去副产物，然后用0.35N氯化钠和0.005N盐酸洗脱下目标产物，洗脱液钠滤至约原体积的1/20,浓缩液通过鳌合树脂IRC748洗脱，除去少量残余的金属离子，收集的洗脱液经水/乙醇重结晶得P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸纯品。
实施例5
a)、b)、c)、d)步骤同实施例1。
e)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的纯化
反应完毕后，反应液加入1.8L乙酸乙酯搅拌，过滤，固体溶于1000mL, 加入固体碳酸氢钠(408.24g，4860mmol)和碳酸钠(171.71g，1620mmol)，搅拌2小时，过滤，滤液加浓盐酸调pH值至7-8，滤液浓缩至约600mL，加入乙醇(1200mL)，搅拌30分钟，过滤，弃去母液。滤饼加水(600mL), 该水溶液通过氯型阴离子交换柱，依次用水，0.18N盐酸洗脱除去副产物，然后用0.35N氯化钠和0.005N盐酸洗脱下目标产物，洗脱液钠滤至约原体积的1/20，浓缩液通过鳌合树脂IRC748除去少量残余的金属离子并转为钠盐，收集的洗脱液经水/乙醇重结晶得P1，P4二(尿苷5，-)四磷酸纯品。
实施例6
a)、b)、c)、d)步骤同实施例1。
e)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的纯化
反应完毕后，反应液加入1.8L乙酸乙酯搅拌，过滤，固体溶于1000mL, 加入固体碳酸氢钠(102.06g，1215mmol)和碳酸钠(128.78g，1215mmol)，搅拌2小时，过滤，滤液加浓盐酸调pH值至7-8，滤液浓缩至约600mL，加入乙醇(1200mL)，搅拌30分钟，过滤，弃去母液。滤饼加水(600mL), 该水溶液通过氯型阴离子交换柱，依次用水，0.18N盐酸洗脱除去副产物，然后用0.35N氯化钠和0.005N盐酸洗脱下目标产物，洗脱液钠滤至约原体积的1/20，浓缩液通过鳌合树脂IRC748除去少量残余的金属离子并转为钠盐，收集的洗脱液经水/乙醇重结晶得P1，P4二(尿苷5，-)四磷酸纯品。
实施例7
a)、b)、c)步骤同实施例1。
d)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的制备
混合b)步骤得到的尿苷酸三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液和c) 步骤得到的焦磷酸咪唑三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液，搅拌均匀，分批加入无水氯化锌(331.0g，2.43mol)，控制反应温度在25-35℃之间。加料完毕后，在25-35℃条件下保温搅拌反应4小时。HPLC检测。
e)步骤同实施例1。
实施例8
a)，b)，c)，d)步骤同实施例1。
e)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的纯化
反应完毕后，反应液加入1.8L乙酸乙酯搅拌，过滤，固体溶于1000mL, 加入固体碳酸氢钠(204.12g，2430mmol)和碳酸钠(128.78g，1215mmol)，搅拌2小时，过滤，滤液加浓盐酸调pH值至7-8，滤液浓缩至约600mL,加入乙醇(1200mL)，搅拌30分钟，过滤，弃去母液。滤饼加水(600mL)，该水溶液通过氯型阴离子交换柱IRA67RF树脂，依次用水，0.18N盐酸洗脱除去副产物，然后用0.35N氯化钠和0.005N盐酸洗脱下目标产物，洗脱液钠滤至约原体积的1/20，收集的浓缩液经水/乙醇重结晶得P1，P4二(尿苷5’ -)四磷酸纯品。
实施例9
a)，b)步骤同实施例1。
c)焦磷酸咪唑三乙胺盐的制备
25-30℃下，向上述c)步骤制备的焦磷酸三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺中分批加入N,N'-羰基二咪唑(175.4g,1.08mol)，控制内温不高于30℃。加完后，于25-30℃下搅拌反应1.5h。将反应液冷却至内温0-15℃，慢慢滴加 25mL水，控制反应液内温低于15℃。维持搅拌时间1h，得到焦磷酸咪唑三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液。
d)，e)步骤同实施例1。
实施例10
a)，b)，c)步骤同实施例1。
d)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的制备
混合b)步骤得到的尿苷酸三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液和c) 步骤得到的焦磷酸咪唑三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液，搅拌均匀，分批加入无水氯化锌(166.3g，1.22mol)和无水氯化锰(氯化锰(153.5g， 1.22mol))，控制反应温度在25-35℃之间。加料完毕后，在25-35℃条件下保温搅拌反应4小时。HPLC检测。
e)步骤同实施例1。
实施例11
a)，b)，c)步骤同实施例1。
d)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的制备
冰浴下混合b)步骤得到的尿苷酸三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液 (450mL)和c)步骤得到的焦磷酸咪唑三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液 (450mL)，搅拌均匀，然后在25-35℃条件下保温搅拌反应48小时。HPLC 检测。
e)步骤同对比例1。
实施例12
a)、b)、c)步骤同实施例1。
d)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的制备
混合b)步骤得到的尿苷酸三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液和c) 步骤得到的焦磷酸咪唑三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液，搅拌均匀，分批加入无水氯化锰(91.9g，0.73mol)，控制反应温度在25-35℃之间。加料完毕后，在25-35℃条件下保温搅拌反应4小时。HPLC检测。
e)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的纯化
反应完毕后，反应液加入1.8L乙酸乙酯搅拌，过滤，固体溶于1000mL, 加入固体碳酸氢钠(61.3g，0.73mol)和碳酸钠(38.7g，365mmol)，搅拌2 小时，过滤，滤液加浓盐酸调PH值至7-8，滤液浓缩至约600mL，加入乙醇(1200mL)，搅拌30分钟，过滤，弃去母液。滤饼加水(600mL),该水溶液通过氯型阴离子交换柱IRA67RF树脂，依次用水，0.18N盐酸洗脱除去副产物，然后用0.35N氯化钠和0.005N盐酸洗脱下目标产物，洗脱液钠滤至约原体积的1/20，浓缩液通过鳌合树脂IRC748洗脱，除去少量残余的金属离子，收集的洗脱液经水/乙醇重结晶得P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸纯品。
实施例13
a)、b)、c)步骤同实施例1。
d)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的制备
混合b)步骤得到的尿苷酸三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液和c) 步骤得到的焦磷酸咪唑三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液，搅拌均匀，分批加入无水氯化锰(368.7g，2.93mol)，控制反应温度在25-35℃之间。加料完毕后，在25-35℃条件下保温搅拌反应4小时。HPLC检测。
e)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的纯化
反应完毕后，反应液加入1.8L乙酸乙酯搅拌，过滤，固体溶于1000mL, 加入固体碳酸氢钠(246.1g，2.93mol)和碳酸钠(155.8g，1.47mol)，搅拌 2小时，过滤，滤液加浓盐酸调PH值至7-8，滤液浓缩至约600mL，加入乙醇(1200mL)，搅拌30分钟，过滤，弃去母液。滤饼加水(600mL),该水溶液通过氯型阴离子交换柱IRA67RF树脂，依次用水，0.18N盐酸洗脱除去副产物，然后用0.35N氯化钠和0.005N盐酸洗脱下目标产物，洗脱液钠滤至约原体积的1/20，浓缩液通过鳌合树脂IRC748洗脱，除去少量残余的金属离子，收集的洗脱液经水/乙醇重结晶得P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸纯品。
实施例14
a)，b)，c)，d)步骤同实施例1。
e)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的纯化
反应完毕后，反应液加入1.8L乙酸乙酯搅拌，过滤，固体溶于1000mL, 加入固体碳酸氢钠(612.36g，7290mmol)和碳酸钠(193.17g，1822.5mmol)，搅拌2小时，过滤，滤液加浓盐酸调pH值至7-8，滤液浓缩至约600mL，加入乙醇(1200mL)，搅拌30分钟，过滤，弃去母液。滤饼加水(600mL), 该水溶液通过氯型阴离子交换柱IRA67RF树脂，依次用水，0.18N盐酸洗脱除去副产物，然后用0.35N氯化钠和0.005N盐酸洗脱下目标产物，洗脱液钠滤至约原体积的1/20，浓缩液通过鳌合树脂IRC748洗脱，除去少量残余的金属离子，收集的浓缩液经水/乙醇重结晶得P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸纯品。
实施例15
a)，b)，c)，步骤同实施例1。
d)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的制备
混合b)步骤得到的尿苷酸乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液和c)步骤得到的焦磷酸咪唑三乙胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液，搅拌均匀，分批加入无水氯化锰(306.2g，2.43mol)，控制反应温度在25-35℃之间。加料完毕后，在25-35℃条件下保温搅拌反应6小时。HPLC检测。
e)步骤同实施例1。
实施例16
a)焦磷酸三丁胺盐的制备
将焦磷酸二钠75.2g(282.81mmol)加入1.8L水搅拌溶解，水溶液加到氢型阳离子交换树脂(pk216氢型)中，浸泡1小时后，用纯化水洗脱，合并洗脱液，滴加入三丁胺(104.8g，565.62mol),搅拌30分钟，45-50℃下减压浓缩成油状物，该油状物经二氧六环(300mL)带水，重复带水三次，得到油状物焦磷酸三丁胺盐。
b)尿苷酸三丁胺盐的制备
将UMP-二钠盐300.11g(含水量约20％)加入600mL水搅拌溶解，水溶液加到阳离子交换树脂(pk216氢型)中，浸泡1小时后，用纯化水洗脱至无UMP流出，合并洗脱液，加入三丁胺(241.75g，1304.29mmol)，搅拌 30分钟，40-55℃下减压浓缩，至粘稠状物，残余物加入600mL二氧六环带水,重复带水三次，得到油状物尿苷酸三丁胺盐。。
c)焦磷酸咪唑三丁胺盐的制备
25-30℃下，向上述a)步骤制备的焦磷酸三丁胺盐加入450mlN,N’-二甲基甲酰胺,搅拌30分钟，然后分批加入137.57g(848.43mmol)的N,N'-羰基二咪唑，控制内温不高于30℃。加完后，于25-30℃下搅拌反应2h。然后慢慢滴加甲醇(9.06g，282.81mmol)维持搅拌时间30min，得到焦磷酸咪唑三丁胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液。
d)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的制备
冰浴下混合b)步骤得到的尿苷酸三丁胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液 (450mL)和c)步骤得到的焦磷酸咪唑三丁胺盐的N,N’-二甲基甲酰胺溶液 (450mL)，搅拌均匀，分批加入无水氯化锰(35.58g，282.81mol)，控制反应温度在25-35℃之间。加料完毕后，在25-35℃条件下保温搅拌反应4小时。 HPLC检测。
e)P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸的纯化
反应完毕后，反应液加入1.8L乙酸乙酯搅拌，过滤，固体溶于1000mL, 加入固体碳酸氢钠(28.76g，282.81mmol)和碳酸钠(18.73g，141.40mmol)，搅拌2小时，过滤，滤液加浓盐酸调pH值至7-8，滤液浓缩至约600mL，加入乙醇(1200mL)，搅拌30分钟，过滤，弃去母液。滤饼加水(600mL), 该水溶液通过氯型阴离子交换柱IRA67RF树脂，依次用水，0.18N盐酸洗脱除去副产物，然后用0.35N氯化钠和0.005N盐酸洗脱下目标产物，洗脱液钠滤至约原体积的1/20,浓缩液通过鳌合树脂IRC748洗脱，除去少量残余的金属离子，收集的洗脱液经水/乙醇重结晶得P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸纯品。
将上述实施例的反应液进行HPLC检测(反应液中尿苷单磷酸、U2P5、 U2P6、目标产物的各自含量占比)、后对目标产物进行纯化，同时对纯化后产品的分离收率、分离纯度、金属离子残留进行测定，结果如表2所示：
表2各实施例的实验结果比对
Figure BDA0002353635470000151
Figure BDA0002353635470000161
综上所述，本发明提供了一种P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸酯的制备方法，其特征在于焦磷酸咪唑三乙胺盐与尿苷一磷酸三乙胺盐，在金属盐催化剂的作用下，在N,N-二甲基甲酰胺中进行反应，得到P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐。该制备工艺能得到纯度收率较高，金属离子极低的P1， P4二(尿苷5’-)四磷酸钠盐，产品符合药用制剂对原料药的要求。

Claims (16)

1.一种P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
式I所示的焦磷酸咪唑三乙胺盐与式II所示的尿苷单磷酸三乙胺盐，在金属盐催化剂的作用下，在N,N-二甲基甲酰胺中进行反应，得到式III所示的P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐
Figure FDA0003179837040000011
其中，所述金属盐催化剂为氯化锰或氯化锌；所述金属盐催化剂与所述焦磷酸咪唑三乙胺盐之间的摩尔比为5～10：1；
所述方法还包括：对得到的式III所示的P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸酯盐进一步分离纯化的步骤，所述分离纯化包括如下步骤：
将得到的式III所示的P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐溶于水中，以碳酸氢钠和碳酸钠的组合除去金属离子；过滤，滤液用水稀释，通过氯型阴离子交换树脂纯化；洗脱液以钠滤浓缩得浓缩液，后通过加入乙醇重结晶，即得；其中，所述碳酸氢钠与所述金属盐催化剂之间的摩尔比为0.5-2:1；所述碳酸氢钠与所述碳酸钠之间的摩尔比为1-3:1。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述金属盐催化剂为氯化锰。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述金属盐催化剂与所述焦磷酸咪唑三乙胺盐之间的摩尔比为10：1。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述反应的反应温度为25～35℃。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述反应的反应时间为2～4h。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述碳酸氢钠与所述金属盐催化剂之间的摩尔比为1:1。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述碳酸氢钠与所述碳酸钠之间的摩尔比为2:1。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述氯型阴离子交换树脂为IRA67RF树脂。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述浓缩液重结晶前先通过螯合型离子交换树脂除去残余的金属离子。
10.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述螯合型离子交换树脂为IRC-748或TP207。
11.根据权利要求9所述的制备方法，其特征在于，所述螯合型离子交换树脂为IRC-748。
12.根据权利要求1至11中任一项所述的制备方法，其特征在于，将得到的式III所示的P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸酯盐先进行如下预处理，再进一步分离纯化：
向得到的式III所示的P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐中加入乙酸乙酯，沉淀P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐，除去反应液中的N,N-二甲基甲酰胺，得到经处理的P1，P4二(尿苷5’-)四磷酸盐。
13.根据权利要求1至11中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述焦磷酸咪唑三乙胺盐通过如下方法来制备：
使焦磷酸双三乙胺盐在N’N-二甲基甲酰胺中与N’N-羰基二咪唑在25～30℃下进行反应，反应完毕后，加入水淬灭反应，即得。
14.根据权利要求1至11中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述尿苷单磷酸三乙胺盐通过如下方法来制备：
使尿苷酸二钠通过氢型阳离子交换树脂得到尿苷酸水溶液，加入三乙胺进行中和，在温度为40-55℃下进行减压浓缩，即得。
15.根据权利要求1至11中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述焦磷酸双三乙胺盐是由焦磷酸二钠通过氢型阳离子交换树脂得到焦磷酸水溶液，加入三乙胺进行中和，在温度为45-50℃下减压浓缩得到的。
16.根据权利要求15所述的制备方法，其特征在于，所述氢型阳离子交换树脂为PK216氢型阳离子树脂。
CN202010001399.0A 2020-01-02 2020-01-02 P1，p4二(尿苷5’-)四磷酸盐的制备方法 Active CN111116694B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010001399.0A CN111116694B (zh) 2020-01-02 2020-01-02 P1，p4二(尿苷5’-)四磷酸盐的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010001399.0A CN111116694B (zh) 2020-01-02 2020-01-02 P1，p4二(尿苷5’-)四磷酸盐的制备方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111116694A CN111116694A (zh) 2020-05-08
CN111116694B true CN111116694B (zh) 2021-10-08

Family

ID=70507376

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010001399.0A Active CN111116694B (zh) 2020-01-02 2020-01-02 P1，p4二(尿苷5’-)四磷酸盐的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111116694B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113651864A (zh) * 2021-09-22 2021-11-16 江苏天和制药有限公司 一种地夸磷索四钠的制备方法

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101495497A (zh) * 2006-07-26 2009-07-29 Yamasa酱油株式会社 二(嘧啶核苷5’-)多磷酸的制备方法
CN106928269A (zh) * 2017-03-30 2017-07-07 长春普华制药股份有限公司 一种磷酸酯的制备方法
CN110540555A (zh) * 2018-05-28 2019-12-06 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种游离核苷磷酸的方法
CN110590887A (zh) * 2019-09-04 2019-12-20 南京帝昌医药科技有限公司 一种磷酸酯的制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101495497A (zh) * 2006-07-26 2009-07-29 Yamasa酱油株式会社 二(嘧啶核苷5’-)多磷酸的制备方法
CN106928269A (zh) * 2017-03-30 2017-07-07 长春普华制药股份有限公司 一种磷酸酯的制备方法
CN110540555A (zh) * 2018-05-28 2019-12-06 江苏恒瑞医药股份有限公司 一种游离核苷磷酸的方法
CN110590887A (zh) * 2019-09-04 2019-12-20 南京帝昌医药科技有限公司 一种磷酸酯的制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
From UTP to AR-C118925, the discovery of a potent non nucleotide antagonist of the P2Y2 receptor;Nicholas Kindon et al.;《Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters》;20170921;第27卷;第4849-4853页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN111116694A (zh) 2020-05-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111116694B (zh) P1，p4二(尿苷5’-)四磷酸盐的制备方法
CN112225757B (zh) 一种洛铂三水合物的制备方法
US6780988B2 (en) Processes for producing P1,P4-diuridine-5′-tetraphosphate
US3852266A (en) Process for producing 5-iodo-deoxy-uridine
EP1362862A1 (en) Dinucleotide crystals
CN114369129A (zh) 一种氯化烟酰胺核糖的合成方法
US4112221A (en) Process for preparing 8,2'-O-anhydropurine nucleosides
CN111499675B (zh) 一种磷酸氟达拉滨的合成方法
US3755296A (en) Process for preparing 1-{62 -d-arabinofuranosyl-cytosine and 2,2{40 -cyclocytidine
CN112961197A (zh) 一种nmn的化学合成方法
CN111454312A (zh) 一种p2y2受体激动剂地夸磷索四钠的制备方法
WO2018079503A1 (ja) Ｐ１，ｐ４－ジ（ウリジン５'－）テトラホスフェートの精製方法
EP0078853B1 (en) Process for preparing beta-chloroalanine
ZA200102683B (en) Crystal of diuridine tetraphosphate or salt thereof and method for preparing the same, and method for producing said compound.
JP7416016B2 (ja) 製造方法、使用方法及び反応システム
CN113292620B (zh) 氯法拉滨中间体3’,5’-二-o-苯甲酰基-2-氯腺苷制备的改善工艺
JPS6337635B2 (zh)
JPH04330092A (ja) ヌクレオチドまたはヌクレオシド誘導体の製造方法
JPH0375560B2 (zh)
EP0393611A2 (en) Novel process for producing oxetanocin G
SU1089093A1 (ru) Способ получени аденина
CN116239638A (zh) 一种克林霉素磷酸酯的分离方法及其产物
CN118084912A (zh) 一种2,6-二氨基嘌呤的制备方法
JPS58194895A (ja) ＤＢｃ−ＡＭＰ・Ｎａ塩の改良製造法
CN114478668A (zh) 一种β-烟酰胺单核苷酸的工业化制备工艺

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant