ES2204360T3 - Procedimiento para la inhibicion de la expresion de un gen diana y medicamento para la terapia de una enfermedad tumoral. - Google Patents

Procedimiento para la inhibicion de la expresion de un gen diana y medicamento para la terapia de una enfermedad tumoral. Download PDF

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Abstract

Procedimiento para la inhibición de una expresión de al menos un gen diana, que inhibe o que impide la apoptosis de una célula tumoral, insertándose al menos un ácido ribonucleico (dsRNA) de doble hebra en la célula tumoral, una de cuyas hebras S1 presenta una zona complementaria con el gen diana al menos por tamos, constituida por menos de 25 nucleótidos sucesivos.

Description

Procedimiento para la inhibición de la expresión de un gen diana y medicamento para la terapia de una enfermedad tumoral.
La invención se refiere a un procedimiento para la inhibición de la expresión de, al menos, un gen diana en una célula así como a un medicamento para la terapia de una enfermedad tumoral.
Se conoce por la publicación WO 99/32619 un procedimiento para la inhibición de la expresión de un gen diana por medio de un oligorribonucleótido de doble hebra. El procedimiento conocido tiene como objetivo la inhibición de la expresión de genes en células de invertebrados. Con esta finalidad es necesario que el oligorribonucleótido de doble hebra presente una secuencia idéntica con la del gen diana con una longitud de, al menos, 25 bases.
Se conocen por la publicación WO 00/44895 un procedimiento para llevar a cabo la inhibición de la expresión de un gen diana, en una célula así como un medicamento. En el caso del procedimiento, se introduce en la célula un oligorribonucleótido, que tiene estructura de doble hebra (dsARN). Una hebra del dsARN presenta una región complementaria, al menos por tramos, con respecto al gen diana, cuya región está constituida, como máximo, por 49 pares de nucleótidos sucesivos. El medicamento contiene, al menos, un dsARN para llevar a cabo la inhibición de la expresión de un gen diana fijado de antemano, siendo complementaria una hebra del dsARN con respecto al gen diana, al menos por tramos.
Se conoce por la publicación de los autores Gautschi O. et al. (2001), J Natl Cancer Inst 93, páginas 463 hasta 471, que una expresión acrecentada de las proteínas Bcl-2 y Bcl-xL, que tienen una actividad anti-apoptótica, participa en el desarrollo y en el avance de muchos tumores. Los datos generados in vivo en ratones desnudos demuestran que podía reducirse un crecimiento de tumores entre aproximadamente un 50 y un 60% con un tratamiento combinado con oligonucleótidos no codificadores, de hebra sencilla, que están dirigidos contra la expresión de los genes Bcl-2 y Bcl-xL. Con esta finalidad se requería un tratamiento con 20 mg de oligonucleótidos por kilogramo de peso corporal y por día. Como consecuencia de esta gran cantidad de los oligonucleótidos necesarios, el tratamiento es proporcionalmente caro. Por otra parte, los oligonucleótidos de hebra sencilla, que son empleados, podrían degradarse rápidamente en el suero. Se requiere una elevada cantidad de oligonucleótidos debido a que un oligonucleótido no codificador tiene que ser introducido finalmente en las células diana en una cantidad que es al menos tan grande como la cantidad del mARN del gen diana, presente en las mismas. Con el procedimiento se consiguió simplemente una disminución del crecimiento, pero, sin embargo, no se consiguió una regresión de los tumores.
La tarea de la presente invención consiste en vencer los inconvenientes del estado de la técnica. De manera especial, deben ser proporcionados un procedimiento y un medicamento, con los cuales pueda inhibirse de manera efectiva y económica la multiplicación de las células tumorales.
Esta tarea se resuelve por medio de las características de las reivindicaciones 1 y 13. Se desprenden configuraciones ventajosas de las reivindicaciones 2 hasta 12 y 14 hasta 26.
De conformidad con la invención, se ha previsto un procedimiento para llevar a cabo la inhibición de una expresión de, al menos, un gen diana, cuya expresión inhibe o impide la apoptosis de una célula tumoral, introduciéndose en la célula tumoral, al menos, un ácido ribonucleico de doble hebra (dsARN), una de cuyas hebras S1 presenta una región complementaria, al menos por tramos, con respecto al gen diana, cuya región está constituida por menos de 25 nucleótidos sucesivos. Se entenderá por "gen diana" la hebra de ADN del ADN de doble hebra en la célula tumoral, que es complementaria con respecto a una hebra de ADN, que sirve como matriz con ocasión de la transcripción, con inclusión de todas las regiones transcritas. Por consiguiente, el gen diana está constituido, en general, por la hebra codificadora. La hebra S1 puede ser, por consiguiente, complementaria con respecto a un transcripto de ARN, que se forma con ocasión de la expresión del gen diana, o puede ser complementaria con respecto a su producto de procesamiento, tal como por ejemplo un mARN. Se presenta un dsARN cuando el ácido ribonucleico, que está constituido por una o por dos hebras de ácido ribonucleico, presente una estructura de doble hebra. Todos los nucleótidos del dsARN tienen que presentar apareamientos de bases de tipo Watson-Crick. De manera especial, los pares de bases individuales, no complementarios, apenas perjudican o no perjudican en absoluto al procedimiento. El número máximo posible de pares de bases es el número de los nucleótidos en la hebra más corta contenida en el dsARN. Se entenderá por "ser insertado" la absorción en la célula. La absorción puede llevarse a cabo por parte de la célula propiamente dicha. Sin embargo, la absorción puede ser promovida por medio de productos auxiliares o por medio de agentes auxiliares.
De manera sorprendente, se ha observado que, con este procedimiento, puede inhibirse la multiplicación de las células tumorales con una cantidad considerablemente menor de oligorribonucleótidos, que la de los oligonucleótidos que son necesarios para conseguir un resultado comparable en el caso de la técnica no codificadora tradicional. Por otra parte, con el procedimiento, de conformidad con la invención, es posible iniciar una apoptosis en una población de células tumorales en una magnitud tal, que no solamente se reduce el crecimiento de la población, sino que se reduce el número total de las células tumorales. Cuando se lleva a cabo el procedimiento con células normales, es decir con células no transformadas, el procedimiento no provoca un aumento significativo de la tasa de apoptosis con respecto a un procedimiento llevado a cabo con un dsARN de control. El dsARN de control es un dsARN, que no presenta una hebra complementaria con respecto a un gen existente en las células.
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Se ha revelado como especialmente ventajoso que, al menos, un extremo del dsARN presente una transición de hebra sencilla, constituida por 1 hasta 4, de manera especial constituida por 2 o 3 nucleótidos. Un dsARN de este tipo presenta una mejor actividad con ocasión de la inhibición de la expresión del gen diana con respecto a un dsARN sin transición de hebra sencilla sobre, al menos, un extremo. En este caso, un extremo es una región del dsARN, en la que está presente un extremo 5' y un extremo 3' de la hebra. Un dsARN, que está constituido únicamente por la hebra S1, presenta, por consiguiente, una estructura en bucle y únicamente presenta un extremo. Un dsARN, formado por la hebra S1 y por la hebra S2, presenta dos extremos. En este caso, un extremo está formado respectivamente por un extremo de la hebra situado sobre la hebra S1 y por un extremo de la hebra situado sobre la hebra S2.
De manera preferente, la transición de hebra sencilla se encuentra sobre el extremo 3' de la hebra S1. Esta localización de la transición de hebra sencilla conduce a un aumento adicional de la eficacia del procedimiento. En un ejemplo de realización, el dsARN presenta únicamente en un extremo, especialmente el que está situado sobre el extremo 3' de la hebra S1, una transición de hebra sencilla. El otro extremo es liso en el caso de un dsARN, que presenta dos extremos, es decir que está configurado sin transición. Un dsARN de este tipo se ha revelado como especialmente estable tanto en diversos medios de cultivo celulares así como, también, en suero sanguíneo.
La región complementaria del dsARN puede presentar desde 19 hasta 24, de manera preferente desde 21 hasta 23, de manera especial puede presentar 22 nucleótidos. Un dsARN con esta estructura es especialmente eficaz en cuanto a la inhibición del gen diana. La hebra S1 del dsARN puede presentar menos de 30, de manera preferente menos de 25, de manera especialmente preferente puede presentar desde 21 hasta 24 nucleótidos. El número de estos nucleótidos es, así mismo, el número máximo posible de pares de bases en el dsARN.
Como mínimo puede ser modificado un extremo del dsARN para contrarrestar una degradación en la célula tumoral o una disociación de la estructura de doble hebra. Por otra parte, la cohesión de la estructura de doble hebra, que está provocada por pares de nucleótidos complementarios, puede ser aumentada por medio de, al menos, otro enlace químico, de manera preferente por medio de otros dos enlaces químicos. El enlace químico puede estar formado por medio de una unión covalente o iónica, de una unión por medio de puentes de hidrógeno, por interacciones hidrófugas, preferentemente por interacciones de van-der-Waals o por interacciones de apilamiento, o puede estar formado por coordinación de iones metálicos. El enlace químico puede estar formado también por medio de análogos de la purina que son utilizados en la estructura de doble hebra en lugar de las purinas.
En una configuración preferente del procedimiento, el gen diana es, al menos, un gen de la familia Bcl-2, de manera especial es el Bcl-2, el Bcl-w o el Bcl-xL. Así mismo es posible que varios genes sean genes diana. De este modo pueden ser genes diana tanto el Bcl-2 así como, también, el Bcl-xL. La inhibición de los genes de la familia Bcl-2 es especialmente conveniente puesto que su expresión reforzada está en relación con el desarrollo y con la multiplicación de muchas células tumorales. La inhibición de varios genes diana es ventajosa puesto que existen células tumorales, que expresan varios genes con actividad anti-apoptótica.
De manera preferente, el dsARN está constituido por una hebra S2 con la secuencia SEQ ID NO: 1 y por la hebra S1 con la secuencia SEQ ID NO: 2 o por una hebra S2 con la secuencia SEQ ID NO: 3 y por la hebra S1 con la secuencia SEQ ID NO: 4 de conformidad con el protocolo de secuencias adjunto. Un dsARN de este tipo es especialmente activo en la inhibición de la expresión del gen diana Bcl-2. La célula tumoral puede estar constituida por una célula de carcinoma de páncreas. Para llevar a cabo la introducción del dsARN en la célula tumoral puede emplearse una estructura micelar, que rodee al dsARN, de manera preferente puede emplearse un liposoma, o puede emplearse una cápside, que rodee al dsARN. La cápside puede ser, de manera especial, una cápside viral natural o puede ser
una cápside artificial preparada por vía química o por vía enzimática o puede ser una estructura derivada de la misma.
Por otra parte, la invención se refiere a un medicamento para llevar a cabo la terapia de una enfermedad tumoral, que contiene, al menos, un ácido ribonucleico de doble hebra (dsARN) para llevar a cabo la inhibición de una expresión de, al menos, un gen diana, presentando una hebra S1 del dsARN una región complementaria, al menos por tramos, con respecto al gen diana constituida por menos de 25 nucleótidos sucesivos. En este caso, el gen diana es un gen, cuya expresión inhibe o impide una apoptosis de las células tumorales. El medicamento es dosificado de tal manera que pueda alcanzarse la inhibición de la expresión de, al menos, un gen diana. De manera sorprendente, se ha observado que un medicamento de este tipo puede ser empleado con esta finalidad con una dosificación muy baja. Es suficiente una dosificación de 5 mg de dsARN por kilogramo de peso corporal y por día para alcanzar en las células tumorales una inhibición o una supresión completa de la expresión del gen diana. En el caso de una baja dosificación, de este tipo, quedan excluidos ampliamente los efectos secundarios.
De manera preferente, al menos un extremo del dsARN presenta una transición de hebra sencilla, que está constituida por 1 hasta 4, de manera especial por 2 o por 3 nucleótidos. La transición de hebra sencilla puede encontrarse sobre el extremo 3' de la hebra S1. De manera especialmente preferente, el dsARN presenta únicamente en un extremo, de manera especial en el extremo que está situado en el extremo 3' de la hebra S1, una transición de hebra sencilla. Se ha puesto de manifiesto que un dsARN de este tipo es especialmente estable en el cuerpo. Este dsARN se degrada o bien se segrega en la sangre más lentamente que un dsARN con transiciones de hebra sencilla en ambos extremos. De este modo, es posible una dosificación menor.
La región complementaria puede presentar desde 19 hasta 24, de manera preferente desde 21 hasta 23, de manera especial puede presentar 22 nucleótidos. La hebra S1 puede presentar menos de 30, de manera preferente menos de 25, de manera especialmente preferente puede presentar desde 21 hasta 24 nucleótidos. En una forma de realización está modificado, al menos, un extremo del dsARN para contrarrestar una degradación en la célula tumoral o una disociación. La cohesión de la estructura de doble hebra, provocada por medio de pares de nucleótidos complementarios, puede aumentarse por medio de, al menos, otro enlace químico, de manera preferente por medio de otros dos enlaces químicos.
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El gen diana es, de manera preferente, al menos un gen de la familia Bcl-2, de manera especialmente preferente es el Bcl-2, el Bcl-w o el Bcl-xL. Es especialmente eficaz un medicamento que presente un dsARN específico tanto para el gen diana Bcl-2 así como, también, para el gen diana Bcl-xL.
El dsARN puede estar constituido por una hebra S2 con la secuencia SEQ ID NO: 1 y por la hebra S1 con la secuencia SEQ ID NO: 2 o puede estar constituido por una hebra S2 con la secuencia SEQ ID NO: 3 y por la hebra S1 con la secuencia SEQ ID NO: 4 de conformidad con el protocolo de secuencias adjunto. La enfermedad tumoral, que debe ser tratada con el medicamento, puede ser un carcinoma de páncreas. Hasta el presente no existe ninguna terapia con un éxito suficiente para el carcinoma de páncreas. La tasa de supervivencia de 5 años se encuentra aproximadamente en el 3% y es la más baja de todos los carcinomas. El dsARN puede presentarse en el medicamento en una solución o rodeado por una estructura micelar, preferentemente por un liposoma o por una cápside. Una estructura micelar o una cápside puede facilitar la absorción del dsARN en las células tumorales. El medicamento puede presentar una preparación, que sea adecuada para la inhalación, para la toma oral o para la inyección, de manera especial para la inyección intravenosa o para la inyección intraperitoneal o para la inyección directa en un tejido tumoral. Una preparación adecuada para la inhalación o para la inyección puede estar constituida, en el caso de más sencillo, por un tampón fisiológicamente compatible, de manera especial por una solución salina tamponada al fosfato, y por el dsARN. Concretamente, se ha puesto de manifiesto, de manera sorprendente, que es absorbido por las células tumorales un dsARN disuelto simplemente en un tampón de este tipo y que se inhibe la expresión del gen diana sin que el dsARN tenga que estar empaquetado con esta finalidad en un vehículo especial.
A continuación se explican ejemplos de la invención por medio de las figuras. Se muestra:
en la figura 1 la tasa de apoptosis en porcentaje de células humanas de carcinoma de páncreas YAP C, al cabo de 120 horas después de la transfección con un dsARN 1, que es complementario con respecto a una primera secuencia procedente del gen humano Bcl-2,
en la figura 2 la tasa de apoptosis en porcentaje de las células YAP C, al cabo de 120 horas desde la transfección con un dsARN 2, que es complementario con respecto a una segunda secuencia procedente del gen humano Bcl-2 y
en la figura 3 la tasa de apoptosis en porcentaje de las células YAP C, al cabo de 120 horas desde la transfección con un dsARN 3, que es complementario con respecto a una secuencia procedente del gen resistente a la neomicina.
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Se cultivaron, bajo condiciones constantes a 37ºC, 5% de CO_{2} en medio RPMI 1640 (firma Biochrom, Berlín) con un 10% de suero de ternera fetal (FKS) y un 1% de penicilina/estreptomicina, células de la línea del carcinoma humano del páncreas YAP C, que pueden ser adquiridas bajo el número ACC 382 de la Colección Alemana de Microorganismos y de Cultivos Celulares -Deutschen Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen-, Braunschweig. Bajo las mismas condiciones se cultivaron fibroblastos cutáneos humanos en MEM de Dulbecco con un 10% de FKS y con un 1% de penicilina/estreptomicina.
Los oligorribonucleótidos de doble hebra, que son empleados para la transfección, presentan las siguientes secuencias, que han sido designadas en el protocolo de secuencias con SEQ ID NO:1 hasta SEQ ID NO:6:
dsARN 1, que es complementario con respecto a una primera secuencia procedente del gen humano Bcl-2:
S2: 5'-cag gac cuc gcc gcu gca gac c-3' (SEQ ID NO: 1)
S1: 3'-cg guc cug gag cgg cga cgu cug g-5' (SEQ ID NO: 2)
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dsARN 2, que es complementario con respecto a una segunda secuencia procedente del gen humano Bcl-2:
S2: 5'-g ccu uug ugg aac ugu acg gcc-3' (SEQ ID NO: 3)
S1: 3'-uac gga aac acc uug aca ugc cgg-5' (SEQ ID NO: 4)
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dsARN 3, que es complementario con respecto a una secuencia procedente del gen resistente a la neomicina:
S2: 5'-c aag gau gag gau cgu uuc gca-3' (SEQ ID NO: 5)
S1: 3'-ucu guc cua cuc cua gca aag cg-5' (SEQ ID NO: 6)
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La transfección se llevó a cabo en una placa de 6 pocillos con Oligofectamine (firma Invitrogen, Karlsruhe). Se dispusieron 250.000 células por pocillo. La transfección del oligorribonucleótido de doble hebra se llevó a cabo de conformidad con el protocolo recomendado por Invitrogen para Oligofectamine (los datos se refieren a 1 pocillo de una placa de 6 pocillos):
Se diluyeron 10 \mul del oligorribonucleótido de doble hebra (0,1-10 \muM) con 175 \mul de medio de cultivo celular sin aditivos. Se diluyeron 3 \mul de Oligofectamine con 12 \mul de medio de cultivo celular sin aditivos y se incubaron durante 10 minutos a la temperatura ambiente. La Oligofectamine, diluida de este modo, se aportó a los oligorribonucleótidos de doble hebra ya diluidos, se mezclaron y se incubaron durante 20 minutos a la temperatura ambiente. Al cabo de este tiempo las células a ser transfectadas se lavaron una vez con medio de cultivo celular sin aditivos y se aportaron 800 \mul de medio de cultivo celular fresco. A continuación se aportaron por pocillo 200 \mul de la mezcla descrita de Oligofectamine-dsARN, de tal manera, que el volumen final para la transfección fue de 1.000 \mul. De este modo se obtiene una concentración final del oligorribonucleótido de doble hebra de 1-100 \muM. La carga de la transfección se cultivó durante cuatro horas a 37ºC. Seguidamente se aportaron por pocillo 500 \mul de medio de cultivo celular con 30% de FKS de tal manera, que la concentración final en FKS fue del 10%. Esta carga se incubó durante 120 horas a 37ºC.
Después de la incubación se recolectaron los sobrenadantes, las células se lavaron con solución salina tamponada con fosfato (PBS), se desprendieron por medio de tripsina y se centrifugaron durante 10 minutos a 100 g. El sobrenadante se eliminó y el pellets se incubó con solución hipotónica de yoduro de propidio durante 30 minutos a 4ºC en la obscuridad. El análisis se llevó a cabo por citometría de flujo continuo en el clasificador celular basado en la fluorescencia FACSCalibur (firma BD GmbH, Heidelberg).
Los oligorribonucleótidos de doble hebra dsARN 1 y dsARN 2 reducen la inhibición de la apoptosis, inducida por el Bcl-2, en las células humanas de carcinoma de páncreas investigadas. Para provocar o bien para iniciar la apoptosis no se requiere ningún tipo de estimulación adicional de la apoptosis. La tasa de la apoptosis aumenta en función del tiempo de incubación. La figura 1 muestra el resultado alcanzado con el dsARN 1 y la figura 2 muestra el resultado alcanzado con el dsARN 2. Mientras que las células de control YAP C no tratadas y las células con las que se ha llevado a cabo el procedimiento descrito para la transfección sin oligorribonucleótido de doble hebra (células transfectadas en falso) presentaban únicamente un 3,8% y un 7,1% de apoptosis al cabo de una incubación durante 120 horas, pudo aumentarse la tasa de la apoptosis, por medio de la transfección con 100 nM de dsARN, hasta el 37,2% al cabo de 120 horas en el caso de la transfección con el dsARN 1 y hasta el 28,9% en el caso de la transfección con el dsARN 2. La transfección de control con el dsARN 3 condujo a una tasa máxima de la apoptosis del 13,5%. Esto no representa ningún aumento significativo frente a las células transfectadas en falso y demuestra la especificidad de la secuencia del efecto de los dsARN 1 y 2.
Para fines de control se transfectaron con los dsARN 1 y 2 también fibroblastos epiteliales a título de células no transformadas. Estas células no mostraron ningún aumento significativo de la tasa de la apoptosis al cabo de 120 horas.
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<110> Ribipharma AG
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<120> Medicamento tumoral
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<130> 412012GA
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<140>
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<141>
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<160> 6
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<170> PatentIn Ver. 2.1
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<210> 1
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<211> 22
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<212> ARN
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<213> Secuencia artificial
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<220>
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<223> Descripción de la secuencia artificial: hebra codificadora de un dsARN complementario de una secuencia del gen Bcl-2 humano
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<400> 1
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caggaccucg ccgcugcaga cc 
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22 
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<210> 2
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<212> ARN
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<213> Secuencia artificial
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<223> Descripción de la secuencia artificial: hebra no codificadora de un dsARN complementario de una secuencia del gen Bcl-2 humano
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ggucugcagc ggcgaggucc uggc 
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<212> ARN
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<223> Descripción de la secuencia artificial: hebra codificadora de un dsARN complementario de una secuencia del gen Bcl-2 humano
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gccuuugugg aacuguacgg cc 
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<223> Descripción de la secuencia artificial: hebra no codificadora de un dsARN complementario de una secuencia del gen Bcl-2 humano
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ggccguacag uuccacaaag gcau 
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<223> Descripción de la secuencia artificial: hebra codificadora de un dsARN complementario de una secuencia del gen de resistencia a la neomicina
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caaggaugag gaucguuucg ca 
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<223> Descripción de la secuencia artificial: hebra no codificadora de un dsARN complementario de una secuencia de un gen de resistencia a la neomicina
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<400> 6
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gcgaaacgau ccucauccug ucu 
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Claims (22)

1. Procedimiento in vitro para la inhibición de una expresión de, al menos, un gen diana, que inhibe o que impide la apoptosis de una célula tumoral, insertándose, al menos, un ácido ribonucleico de doble hebra (dsARN) en la célula tumoral, una de cuyas hebras S1 presenta una región complementaria con respecto al el gen diana, al menos por tramos, cuya región está constituida por menos de 25 nucleótidos sucesivos, presentando únicamente el extremo del dsARN, que está situado en el extremo 3' de la hebra S1, una transición de hebra sencilla, que está constituida por 1 hasta 4 nucleótidos, sobre el extremo 3' de la hebra S1.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que la transición de hebra sencilla está constituida por 2 o por 3 nucleótidos.
3. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, en el que la región complementaria del dsARN presenta desde 19 hasta 24, preferentemente desde 21 hasta 23, de manera especial presenta 22 nucleótidos.
4. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, en el que la hebra S1 presenta menos de 30, preferentemente menos de 25, de forma especialmente preferente presenta desde 21 hasta 24 nucleótidos.
5. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, en el que se modifica, al menos, un extremo del dsARN, con objeto de contrarrestar una degradación en la célula tumoral o una disociación.
6. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, en el que se aumenta la cohesión del dsARN, provocada por medio de pares de nucleótidos complementarios, por medio de, al menos, otro enlace químico, de manera preferente por medio de otros dos enlaces químicos.
7. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, en el que el gen diana es, al menos, un gen de la familia Bcl-2, de manera especial es el Bcl-2, el Bcl-w o el Bcl-xL o son tanto el Bcl-2 así como, también, el Bcl-
xL.
8. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, en el que el dsARN está constituido por una hebra S2 con la secuencia SEQ ID NO: 1 y por la hebra S1 con la secuencia SEQ ID NO: 2 o está constituido por una hebra S2 con la secuencia SEQ ID NO: 3 y por la hebra S1 con la secuencia SEQ ID NO: 4, de conformidad con el protocolo de secuencias adjunto.
9. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, en el que la célula tumoral es una célula de carcinoma del páncreas.
10. Procedimiento según una de las reivindicaciones precedentes, en el que el dsARN se inserta en la célula tumoral por medio de una estructura micelar, que rodea al dsARN, de manera preferente por medio de un liposoma, o una cápside, que rodea al dsARN.
11. Medicamento para ser empleado en la terapia de una enfermedad tumoral, que contiene, al menos, un ácido ribonucleico de doble hebra (dsARN) para la inhibición de una expresión de, al menos, un gen diana, que inhibe o que impide la apoptosis de las células tumorales, presentando una hebra S1 del dsARN una región complementaria, al menos por tramos, con respecto al gen diana cuya región está constituida por menos de 25 nucleótidos sucesivos, presentando únicamente el extremo del dsARN, que está situado en el extremo 3' de la hebra S1, una transición de hebra sencilla, que está constituida por 1 hasta 4 nucleótidos, sobre el extremo 3' de la hebra S1.
12. Medicamento según la reivindicación 11, en el que la transición de hebra sencilla está constituida por 2 o 3 nucleótidos.
13. Medicamento según la reivindicación 11 o 12, en el que la región complementaria presenta desde 19 hasta 24, de manera preferente desde 21 hasta 23, de manera especial presenta 22 nucleótidos.
14. Medicamento según una de las reivindicaciones 11 a 13, en el que la hebra S1 presenta menos de 30, de manera preferente menos de 25, de manera especialmente preferente presenta desde 21 hasta 24 nucleótidos.
15. Medicamento según una de las reivindicaciones 11 a 14, en el que está modificado, al menos, un extremo del dsARN, para contrarrestar una degradación en la célula tumoral o una disociación.
16. Medicamento según una de las reivindicaciones 11 a 15, en el que está aumentada la cohesión del dsARN, provocada por medio de pares de nucleótidos complementarios, por medio de, al menos otro enlace químico, de manera preferente por medio de otros dos enlaces químicos.
17. Medicamento según una de las reivindicaciones 11 a 16, en el que el gen diana es, al menos, un gen de la familia Bcl-2, de manera especial es el Bcl-2, el Bcl-w o el Bcl-xL o son tanto Bcl-2 así como, también, el Bcl-xL.
18. Medicamento según una de las reivindicaciones 11 a 17, en el que el dsARN está constituido por una hebra S2 con la secuencia SEQ ID NO: 1 y por la hebra S1 con la secuencia SEQ ID NO: 2 o está constituido por una hebra S2 con la secuencia SEQ ID NO: 3 y por la hebra S1 con la secuencia SEQ ID NO: 4, de conformidad con el protocolo de secuencias adjunto.
19. Medicamento según una de las reivindicaciones 11 a 18, en el que la enfermedad tumoral es un carcinoma del páncreas.
20. Medicamento según una de las reivindicaciones 11 a 19, en el que el dsARN se presenta en el medicamento en una solución o rodeado por una estructura micelar, de manera preferente rodeado por un liposoma, o por una cápside.
21. Medicamento según una de las reivindicaciones 11 a 20, en el que el medicamento presenta una preparación, que es adecuada para la inhalación, para la ingestión oral o por inyección, de manera especial es adecuada para la inyección intravenosa o intraperitoneal o es adecuada para la inyección directa en un tejido tumoral.
22. Medicamento según la reivindicación 21, en el que la preparación está constituida por un tampón fisiológicamente compatible, de manera especial está constituido por una solución salina tamponada al fosfato, y por el dsARN.
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