ES2203147T3

ES2203147T3 - Injobodpres de la oxido nitrico sintasa.

Info

Publication number: ES2203147T3
Application number: ES99926397T
Authority: ES
Inventors: Paul John Beswick; Savvas Kleanthous; Robert John Young
Original assignee: Glaxo Group Ltd
Current assignee: Glaxo Group Ltd
Priority date: 1998-05-30
Filing date: 1999-05-27
Publication date: 2004-04-01
Anticipated expiration: 2019-05-27
Also published as: ID26790A; US6495606B1; CN1218940C; ATE245142T1; DK1084104T3; CA2333322C; NZ508222A; EP1084104B1; PT1084104E; AP1382A; PL344368A1; KR20010043920A; BR9910849A; EE200000716A; HK1034241A1; HUP0102472A3; ZA200006847B; SK18052000A3; DE69909625D1; EA003026B1

Abstract

Un compuesto de fórmula (I); o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional del mismo; en la que R1 se selecciona entre alquilo C1-4 cicloalquilo C3-4 hidroxialquilo C1-4 y haloalquilo C1-4. El compuesto de fórmula (I) que es S-[(R)-2-(1-iminoetilamino)-propil]-L-cisteína o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional del mismo y farmacéuticamente aceptable para usar en terapia médica.

Description

Inhibidores de la óxido nítrico sintasa.

La presente invención se refiere a nuevos compuestos de amidino, a un procedimiento para su fabricación, a composiciones farmacéuticas que los contienen y a su uso en terapia, en particular su uso como inhibidores selectivos de óxido nítrico sintasa inducible.

El óxido nítrico es el estimulador interno de la enzima guanilato ciclasa soluble y está implicado en un gran número de acciones biológicas. También se cree que la producción en exceso de óxido nítrico está implicada en numerosas afecciones, incluyendo shock séptico y diversas enfermedades inflamatorias. La síntesis bioquímica de óxido nítrico a partir de L-arginina se cataliza mediante la enzima NO sintasa. La mayoría de inhibidores de la NO sintasa se han descrito y propuesto para uso terapéutico.

Más recientemente, ha sido un objeto en este campo proporcionar inhibidores de la NO sintasa describiendo selectividad por la NO sintasa inducible (iNOS) sobre la NO sintasa endotelial (eNOS) y/o la NO sintasa neuronal (nNOS).

Por lo tanto, el documento WO 93/13055 describe inhibidores selectivos para la NO sintasa de fórmula

HN=

\uelm{C}{\uelm{\para}{R ^{1} }}

---NH---Q---

\uelm{C}{\uelm{\para}{NH _{2} }}

H---CO_{2}H

y las sales, y ésteres y amidas farmacéuticamente aceptables de los mismos, en la que:

R_{1} es un grupo alquilo de cadena lineal o ramificada C_{1-6}, un grupo alquenilo C_{2-6}, un grupo alquinilo C_{2-6}, un grupo cicloalquilo C_{3-6} o un grupo cicloalquil C_{3-6} alquilo C_{1-6};

Q es un grupo alquileno, alquenileno o alquinileno que tiene de 3 a 6 átomos de carbono y que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más grupos alquilo C_{1-3};

un grupo de fórmula -(CH_{2})_{p}X(CH_{2})q- en la que p es 2 ó 3, q es 1 ó 2 y X es S(O)_{x}, siendo x 0, 1 ó 2, O o NR^{2} en la que R^{2} es H o alquilo C_{1-6}; o

un grupo de fórmula -(CH_{2})_{r}A(CH_{2})_{s}- en la que r es 0, 1 ó 2, s es 0, 1 ó 2 y A es un anillo carbocíclico o heterocíclico de 3 a 6 miembros que puede estar opcionalmente sustituido por uno o más sustituyentes adecuados como por ejemplo alquilo C_{1-6}, alcoxi C_{1-6}, hidroxi, halo, nitro, ciano, trifluoroalquilo C_{1-6}, amino, alquil C_{1-6} amino o dialquil C_{1-6} amino.

La solicitud internacional de patente en trámite junto con la presente WO 98/30537 describe también ciertos compuestos de amidino que son inhibidores selectivos de la óxido nítrico sintasa inducible.

Hemos encontrado ahora una nueva clase de compuestos que además de ser inhibidores selectivos de la iNOS, presentan ventajas incluyendo que tienen una semivida relativamente larga, son biodisponibles oralmente cuando se administran in vivo y se pueden preparar a partir de materiales de partida relativamente baratos.

Por lo tanto, según la presente invención, se proporciona un compuesto de fórmula (I)

1

o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional del mismo;

en la que R^{1} se selecciona entre alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-4}, hidroxialquilo C_{1-4} y haloalquilo C_{1-4}.

En la fórmula (I), R^{1} es preferiblemente alquilo C_{1-4}, más preferiblemente, metilo.

Los compuestos de fórmula (I) incluyen dos centros quirales, es decir, el carbono que soporta el sustituyente R^{1} y el centro asimétrico en el grupo aminoácido. Se pretende que la fórmula (I) incluya todos los isómeros ópticos, tanto en la forma sustancialmente pura como mezclada en cualquier proporción. En un aspecto preferido, el grupo aminoácido es la configuración natural L. En otro aspecto preferido el carbono que sostiene el grupo R^{1} tiene configuración R. En el aspecto más preferido, el aminoácido tiene la configuración natural L y el carbono que sostiene el grupo R^{1} tiene configuración R. En toda esta memoria descriptiva, cuando se da la estereoquímica de los dos centros quirales en una molécula, la primera configuración se refiere al carbono \alpha del aminoácido, y la segunda se refiere al carbono que sostiene el sustituyente R^{1}, por ejemplo, la estereoquímica denominada (R, S) significa estereoquímica (R)- en el carbono \alpha del aminoácido y estereoquímica (S)- en el carbono que sostiene el sustituyente R^{1}.

Por lo tanto, en otro aspecto, la presente invención proporciona un compuesto seleccionado de:

S[(R)-2-(1-iminoetilamino)propil]-L-cisteína;

S[(S)-2-(1-iminoetilamino)propil]-L-cisteína;

S[(R/S)-2-(1-iminoetilamino)propil]-L-cisteína;

S[(R)-2-(1-iminoetilamino)propil]-D-cisteína;

S[(S)-2-(1-iminoetilamino)propil]-D-cisteína;

S[(R/S)-2-(1-iminoetilamino)propil]-D-cisteína;

S[(R/S)-2-(1-iminoetilamino)butil]-L-cisteína;

S[(R/S)-2-(1-iminoetilamino,2-ciclopropil)etil]-L-cisteína; y

S[(R/S)-2-(1-iminoetilamino,3-hidroxi)propil]-L-cisteína.

y las sales, solvatos y derivados fisiológicamente funcionales del mismo.

En un aspecto preferido, la presente invención proporciona S[(R)-2-(1-iminoetilamino)propil]-L-cisteína o una sal, solvato o un derivado fisiológicamente funcional de la misma. En un aspecto preferido, la presente invención proporciona S[(R)-2-(1-iminoetilamino)propil]-L-cisteína o una sal de la misma.

Debe entenderse que la presente invención cubre todas las combinaciones de grupos particulares y preferidos descritos en la presente memoria descriptiva.

Las sales y solvatos de los compuestos de fórmula (I) que son adecuados para usar en medicina son aquellos en los que el contraión o el disolvente asociado es farmacéuticamente aceptable. Sin embargo, las sales y solvatos que tienen contraiones o disolventes asociados farmacéuticamente aceptables se incluyen en el alcance de la presente invención, por ejemplo, para usar como intermedios en la preparación de otros compuestos de fórmula (I) y sus sales, solvatos y derivados fisiológicamente funcionales farmacéuticamente aceptables.

El término "derivado fisiológicamente funcional" se refiere a un derivado químico de un compuesto de fórmula (I) que tiene la misma función fisiológica que el compuesto de fórmula (I) libre, por ejemplo, pudiendo convertirse al mismo en el cuerpo. Según la presente invención, los ejemplos de derivados fisiológicamente funcionales incluyen ésteres, amidas y carbamatos; preferiblemente ésteres y amidas.

Las sales adecuadas según la invención incluyen las formadas con ácidos o bases orgánicas e inorgánicas. Las sales de adición de ácido farmacéuticamente aceptables incluyen las formadas a partir de ácido clorhídrico, bromhídrico, sulfúrico, cítrico, tartárico, fosfórico, láctico, pirúvico, acético, trifluoroacético, succínico, oxálico, fumárico, maleico, oxaloacético, metanosulfónico, etanosulfónico, p-toluenosulfónico, bencenosulfónico e isetiónico. Las sales de adición de base farmacéuticamente aceptables incluyen sales de amonio, sales de metales alcalinos como por ejemplo las de sodio y potasio, las sales de metales alcalinotérreos como por ejemplo las de calcio y magnesio y las sales con bases orgánicas como por ejemplo diciclohexilamina y N-metil-D-glucamina.

Los ésteres y amidas farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) pueden tener el grupo ácido transformado en alquilo C_{1-6}, arilo, aril C_{1-6} alquilo o aminoácido éster o amida. Las amidas y carbamatos farmacéuticamente aceptables de los compuestos de fórmula (I) pueden tener un grupo amino transformado en alquilo C_{1-6}, arilo, aril C_{1-6} alquilo o aminoácido amida o carbamato.

Tal y como se ha mencionado anteriormente, los compuestos de fórmula (I) se inhibidores de la NO sintasa como se demuestra en los ensayos de inhibición de NOS más adelante.

Por lo tanto, los compuestos de fórmula (I) y sus sales, solvatos y derivados fisiológicamente funcionales farmacéuticamente aceptables se pueden usar en la profilaxis y tratamiento de afecciones clínicas para las que es aconsejable un inhibidor de la NO sintasa, en particular, un inhibidor de iNOS. Dichas afecciones incluyen afecciones inflamatorias, estados de shock, trastornos inmunes y trastornos de la motilidad gastrointestinal. Los compuestos de fórmula (I) y sus sales, solvatos y derivados fisiológicamente funcionales farmacéuticamente aceptables se pueden usar también en la profilaxis y tratamiento de enfermedades del sistema nervioso central, incluyendo migraña.

Estados de shock se refiere a los resultantes de la sobreproducción de NO, como por ejemplo shock séptico, shock hemorrágico, shock traumático o shock causado por una insuficiencia hepática fulminante o mediante terapia con citoquinas, como por ejemplo TNF, IL-1 e IL-2 terapia con agentes inductores de citoquinas, por ejemplo, ácido acético 5,6-dimetilxantenona.

Ejemplos de afecciones inflamatorias y trastornos inmunes incluyen los de las articulaciones, particularmente artritis (por ejemplo, artritis reumatoide, osteoartritis, insuficiencia de articulación protésica) o del tracto gastrointestinal (por ejemplo, colitis ulcerativa, enfermedad de Crohn y otras enfermedades inflamatorias del intestino, gastritis e inflamación de las mucosas como resultado de una infección, la enteropatía provocada por fármacos antiinflamatorios no esteroideos), del pulmón (por ejemplo, síndrome de insuficiencia respiratoria del adulto, asma, fibrosis quística o enfermedad pulmonar obstructiva), del corazón (por ejemplo, miocarditis), del tejido nervioso (por ejemplo, esclerosis múltiple), del páncreas (por ejemplo, diabetes mellitus y sus complicaciones), del riñón (por ejemplo, glomerulonefritis), de la piel (por ejemplo, dermatitis, psoriasis, eccema, urticaria), de los ojos (por ejemplo, glaucoma), así como de los órganos transplantados (por ejemplo, rechazo) y enfermedades en varios órganos (por ejemplo, lupus eritematoso sistémico) y las secuelas inflamatorias de las infecciones víricas y bacterianas. Hay evidencia también de que los inhibidores de iNOS pueden ser útiles en la profilaxis o tratamiento de infecciones bacterianas (por ejemplo, neumonía), en particular, reduciendo la carga bacteriana en un mamífero infectado.

Además, hay evidencia de la sobreproducción de NO mediante iNOS en la aterosclerosis y después de injurias hipóxicas o isquémicas (con o sin reperfusión), por ejemplo, en el cerebro o en la enfermedad cardiaca isquémica.

Los trastornos de la motilidad intestinal incluyen íleo (oclusión intestinal), por ejemplo, el íleo postoperatorio y el íleo durante la sepsis.

Por enfermedades del sistema nervioso central se entiende aquellas en las que está implicada la sobreproducción de NO, por ejemplo, migraña, psicosis, ansiedad, esquizofrenia, trastornos del sueño, isquemia cerebral, traumatismo del SNC, epilepsia, esclerosis múltiple, demencia del SIDA, enfermedad neurodegenerativa crónica (por ejemplo, demencia de Lewy Body, enfermedad de Huntington, enfermedad de Parkinson, enfermedad de Alzheimer) y dolor agudo y crónico y afecciones en las que puede estar implicado el nervio no adrenérgico, no colinérgico como por ejemplo priapismo, obesidad e hiperplagia.

Los ejemplos de dolor agudo incluyen dolor musculoesquelético, dolor postoperatorio y dolor quirúrgico. Los ejemplos de dolor crónico incluyen dolor inflamatorio crónico (por ejemplo, artritis reumatoide y osteoartritis), dolor neuropático (por ejemplo, neuralgia postherpética, neuropatías diabéticas relacionadas con diabetes, neuralgia del trigémino, dolor relacionado con trastornos funcionales del intestino, por ejemplo, síndrome del intestino irritable, dolor no cardiaco en el pecho y dolor mantenido simpáticamente) y el dolor relacionado con cáncer y fibromialgia.

Además, la inhibición de la NO sintasa puede ser provechosa para prevenir la pérdida de linfocitos relacionada con la infección por VIH, aumentando la radiosensibilidad de los tumores durante la radioterapia y para reducir el crecimiento tumoral, la progresión tumoral, la agiogénesis y la metástasis.

Según esto, la presente invención proporciona un procedimiento para la profilaxis o tratamiento de una afección clínica en un mamífero, por ejemplo un ser humano, para el que es aconsejable un inhibidor de la óxido nítrico sintasa, por ejemplo, un inhibidor de iNOS, que comprende administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de fórmula (I), o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional del mismo farmacéuticamente aceptables. En particular, la presente invención proporciona un procedimiento para la profilaxis o el tratamiento de un trastorno inflamatorio y/o inmune, como por ejemplo artritis o asma. En un aspecto preferido la presente invención proporciona un procedimiento para la profilaxis o el tratamiento de una afección clínica seleccionada entre artritis, asma, íleo y migraña. En otro aspecto, la presente invención proporciona un procedimiento para la profilaxis o el tratamiento de una infección bacteriana.

Como alternativa, se proporciona también un compuesto de fórmula (I) o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional farmacéuticamente aceptables del mismo para usar en terapia médica, en particular, para usar en la profilaxis o tratamiento de una afección clínica en un mamífero, como por ejemplo un ser humano, para el que es aconsejable un inhibidor de la óxido nítrico sintasa, por ejemplo un inhibidor de iNOS. En particular, se proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional farmacéuticamente aceptables del mismo para la profilaxis o el tratamiento de un trastorno inflamatorio y/o inmune, como por ejemplo artritis o asma. En un aspecto preferido, se proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional farmacéuticamente aceptables del mismo para la profilaxis o el tratamiento de artritis, asma, íleo y migraña. En otro aspecto, se proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional farmacéuticamente aceptables del mismo para la profilaxis o el tratamiento de una infección bacteriana.

La cantidad de un compuesto de fórmula (I), o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional farmacéuticamente aceptables del mismo requerida para lograr un efecto terapéutico variará, por supuesto, con el compuesto particular, la vía de administración, el sujeto sometido al tratamiento y el trastorno o enfermedad particular tratado. Los compuestos de la invención se pueden administrar oralmente o mediante inyección a una dosis de 0,1 a 1500 mg/kg por día, preferiblemente de 0,1 a 550 mg/kg por día. El intervalo de dosis para humanos adultos es, generalmente, de 5 mg a 35 g/día y, preferiblemente, de 5 mg a 2 g/días. Los comprimidos u otras formas de presentación provistas en unidades discretas pueden contener, convenientemente, una cantidad de un compuesto de la invención que es eficaz a dicha dosificación o como una multiplicidad de la misma, por ejemplo, unidades que contienen de 5 mg a 500 mg, normalmente alrededor de 10 mg a 200 mg.

Mientras sea posible administrar en solitario el compuesto de fórmula (I) o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional farmacéuticamente aceptables del mismo, es preferible presentarlo como una formulación farmacéutica.

Según esto, la presente invención proporciona también una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional farmacéuticamente aceptables del mismo y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable y, opcionalmente, uno o más ingredientes terapéuticos distintos.

La presente invención proporciona también el uso de un compuesto de fórmula (I) o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional farmacéuticamente aceptables del mismo en la fabricación de un medicamento para la profilaxis o tratamiento de una afección clínica para la que es aconsejable un inhibidor de la óxido nítrico sintasa, por ejemplo, un inhibidor de iNOS, por ejemplo, un trastorno inflamatorio y/o inmune, como por ejemplo artritis o asma. En un aspecto preferido, se proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional farmacéuticamente aceptables del mismo en la fabricación de un medicamento para la profilaxis o el tratamiento de una afección clínica seleccionada entre artritis, asma, íleo y migraña. En otro aspecto, se proporciona un compuesto de fórmula (I) o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional farmacéuticamente aceptables del mismo en la fabricación de un medicamento para la profilaxis o el tratamiento de una infección bacteriana.

En lo sucesivo, el término "ingrediente activo" significa que es un compuesto de fórmula (I) o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional farmacéuticamente aceptables del mismo.

Las formulaciones incluyen las que son adecuadas para administración oral, parenteral (incluyendo administración subcutánea, intradérmica, intramuscular, intravenosa e intraarticular), inhalación (incluyendo polvos o nieblas finalmente particulados que se pueden generar mediante diversos tipos de aerosoles, nebulizadores o insufladores presurizados de dosis medida), administración rectal y tópica (incluyendo administración dérmica, bucal, sublingual e intraocular) aunque la vía más adecuada puede depender, por ejemplo, de la afección y el trastorno del receptor. Las formulaciones se pueden presentar, convenientemente, en forma de dosificación unitaria y se pueden preparar por cualquier procedimiento conocido en la técnica farmacéutica. Todos los procedimientos incluyen la etapa de poner en contacto el ingrediente activo con el vehículo que constituye uno o más ingredientes accesorios. En general, las formulaciones se preparan poniendo en contacto uniforme e íntimamente el ingrediente activo con vehículos líquidos o con vehículos sólidos finamente divididos o con ambos y después, si fuera necesario, se da forma al producto en la formulación deseada.

Las formulaciones de la presente invención adecuadas para administración oral se pueden presentar como unidades discretas como por ejemplo cápsulas, cápsulas o comprimidos, conteniendo cada uno una cantidad predeterminada del ingrediente activo; como polvo o gránulos; como disolución o suspensión en un líquido acuoso o en un líquido no acuoso; o como una emulsión líquida de aceite en agua o una emulsión de agua en aceite. El ingrediente activo se puede presentar como un bolo, electuario o pasta.

Se puede preparar un comprimido por compresión o moldeo, opcionalmente con uno o más ingredientes accesorios. Los comprimidos comprimidos se pueden preparar comprimiendo el ingrediente activo en una máquina adecuada en una forma de fluencia libre, como por ejemplo un polvo o gránulos, opcionalmente mezclado con un aglutinante, lubricante, diluyente inerte, lubricante, agente tensioactivo o dispersante. Los comprimidos moldeados se pueden preparar moldeando en una máquina adecuada una mezcla del compuesto en polvo humedecido con un diluyente líquido inerte. Los comprimidos se pueden recubrir o ranurar, opcionalmente, y se pueden formular de manera que proporcionen una liberación lenta o controlada del ingrediente activo que hay en su interior.

Las formulaciones para administración parenteral incluyen disoluciones acuosas y no acuosas para inyección estéril que pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostatos y solutos que hacen que la formulación se a isotónica con la sangre del paciente pretendido; y suspensiones estériles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspensión y agentes espesantes. Las formulaciones se pueden presentar en envases unidosis o multidosis, por ejemplo, ampollas y viales sellados, y se pueden almacenar en condiciones se secado por congelación (liofilización) que sólo requiere añadir un vehículo líquido estéril, por ejemplo, suero fisiológico o agua para inyección, inmediatamente antes de su uso. Las disoluciones y suspensiones para inyección extemporánea se pueden preparar a partir de polvos, gránulos y comprimidos estériles del tipo descrito anteriormente.

Las formulaciones para administración rectal se pueden presentar como un supositorio con los vehículos habituales como por ejemplo manteca de cacao o polietilenglicol.

Las formulaciones para administración tópica por la boca, por ejemplo, bucal o sublingualmente, incluyen píldoras que comprenden el ingrediente activo en una base aromatizada como por ejemplo sacarosa y goma arábiga o tragacanto, y pastillas que comprenden el ingrediente activo en una base como por ejemplo gelatina y glicerina o sacarosa y goma arábiga.

Las unidades de dosificación preferidas para las formulaciones son las que contienen una dosis eficaz, como se ha mencionado anteriormente en la presente memoria descriptiva, o una fracción apropiada de la misma, del ingrediente activo.

Debe entenderse que, además de los ingredientes particularmente mencionados anteriormente, las formulaciones de esta invención pueden incluir otros agentes convencionales en la técnica con respecto al tipo de formulación en cuestión, por ejemplo, los adecuados para administración oral pueden incluir agentes aromatizantes.

Según otro aspecto de la invención, se proporciona un procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula (I) o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional del mismo que comprende:

(i) reacción del compuesto de fórmula (II)

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o un isómero óptico, una sal o un derivado protegido del mismo, en el que R^{1} es tal y como se ha definido anteriormente, con un compuesto de fórmula (III)

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o una sal del mismo, en el que L es un grupo saliente, más adecuadamente un grupo alcoxi C_{1-6}, por ejemplo etoxi o un grupo alquiltio, aralquiltio o ariltio, por ejemplo un grupo benciltio, o 1- ó 2-naftilmetiltio; y a continuación las siguientes etapas, en cualquier orden:

(ii) retirada opcional de cualquier grupo protector;

(iii) separación opcional de un isómero óptico de una mezcla de isómeros ópticos;

(iv) transformación opcional del producto a la correspondiente sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional del mismo.

Cuando L es alcoxi C_{1-6}, la reacción de la etapa (i) anterior se puede llevar a cabo en disolución a pH alcalino, por ejemplo de pH 8 a 11, adecuadamente a pH 10,5 y a una temperatura baja, por ejemplo de -5ºC a 20ºC, adecuadamente de 0 a 5ºC. Cuando L es un grupo alquiltio, aralquiltio o ariltio, la reacción se puede llevar a cabo en un disolvente orgánico, por ejemplo, tetrahidrofurano o un alcohol C_{1-4}, como por ejemplo etanol, a una temperatura moderada, por ejemplo de 10 a 40ºC, adecuadamente a temperatura ambiente.

Los compuestos de fórmula (III) y las sales del mismo están disponibles en el mercado o se pueden preparar por procedimientos de química orgánica conocidos por los expertos en la técnica, por ejemplo, según se describe en Shearer et al en Tetrahedron Letters, 1997, 38, 179-182.

Los compuestos de fórmula (II) y las sales y los derivados protegidos de los mismos se pueden preparar a partir de un compuesto de fórmula (IV):

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o un derivado protegido del mismo, acoplando con un compuesto de fórmula (V)

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o un derivado protegido del mismo, en el que R^{1} es tal y como se ha definido anteriormente y L^{1} es un grupo saliente, por ejemplo halo, como por ejemplo bromo o un éster de alquil, aril o aralquilsulfonato, como por ejemplo toluenosulfonilo.

Los derivados protegidos de un compuesto de fórmula (IV), por ejemplo, éster t-butílico de N-t-butoxicarbonilo se pueden hacer reaccionar con compuestos de fórmula (V) en ciertas condiciones en un disolvente orgánico apropiado (por ejemplo, tolueno) en una reacción mediada por una base como por ejemplo 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno o un agente similar que un experto en la técnica puede reconocer.

Alternativamente, los compuestos de fórmula (II) y las sales y derivados protegidos de los mismos se pueden preparar por reducción (por ejemplo, usando un hidruro metálico complejo) de un compuesto de fórmula (VI)

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o un derivado protegido del mismo, en la que R^{1} es tal y como se ha definido anteriormente.

Los compuestos de fórmula (VI) se pueden preparar mediante procedimientos análogos a los escritos en

\hbox{Yanagisawa}

et al en J. Med. Chem. 30 (11), 1984-91, (1987) y Hassner y Dehaen en J. Org. Chem., 55, 5505-5510, (1990). Por lo tanto, la reacción del compuesto de fórmula (IV) o un derivado protegido del mismo (por ejemplo, cuando el grupo amino está protegido con un grupo acilo como por ejemplo t-butoxicarbonilo y el grupo ácido carboxílico está protegido como éster, como por ejemplo el éster terc-butílico con nitrometano y el aldehído apropiado R^{1}CHO en el que R^{1} es tal y como se ha definido anteriormente, en presencia de piperidina, da un nitrocompuesto de fórmula (VI) o un derivado protegido del mismo.

Los compuestos de fórmula (II) es un derivado protegido de los mismos se puede preparar también por reacción de un compuesto de fórmula (VII)

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o un derivado protegido del mismo en el que R^{1} es tal y como se ha definido anteriormente con una aziridina de fórmula (VIII).

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o un derivado protegido del mismo, por ejemplo, en el que el amino está protegido con un grupo acilo como por ejemplo t-butoxicarbonilo y el ácido está protegido como un éster como por ejemplo el éster de alquilo C_{1-4}. La reacción de los compuestos de fórmulas (VII) y (VIII) se puede llevar a cabo en un disolvente inerte, como por ejemplo cloroformo en presencia de un ácido de Lewis, como por ejemplo BF_{3}(OEt)_{2}.

Los compuestos de fórmulas (IV), (V), (VII) y (VIII) y sus derivados protegidos están disponibles en le mercado o se pueden preparar mediante procedimientos de la química orgánica conocidos por los expertos en la técnica.

Los grupos protectores usados en la preparación de los compuestos de fórmula (I) se pueden usar de manera convencional, por ejemplo, usando los procedimientos descritos en "Protective Groups in Organic Synthesis" de Theodora W Green, 2ª edición (John Wiley and Sons, 1991) que también describe procedimientos para la eliminación de dichos grupos.

En las reacciones anteriores, las aminas primaria se protegen de manera adecuada usando grupos acilo, como por ejemplo grupos t-butoxicarbonilo o benciloxicarbonilo que se pueden eliminar en condiciones ácidas, por ejemplo, por tratamiento con ácido clorhídrico o ácido bromhídrico, o por hidrogenolisis.

Como un experto en la técnica puede entender, el uso de dichos grupos protectores puede incluir la protección ortogonal de los grupos amino en los compuestos de fórmula (II) para facilitar la eliminación selectiva de un grupo en presencia de otro, lo que permite la funcionalización selectiva de una fusión amino sencilla. Por ejemplo, un grupo benciloxicarbonilo se puede eliminar selectivamente por hidrogenolisis. Un experto en la técnica entenderá otras estrategias de protección ortogonal, disponibles por medios convencionales según se describe en Theodora W Green (véase anterior).

Los compuestos enantioméricos de la invención se pueden obtener (a) por separación de los componentes de la mezcla racémica correspondiente, por ejemplo, mediante una columna quiral de cromatografía, procedimientos de resolución enzimática o preparación y separación de los diasteroisómeros adecuados o (b) por síntesis directa a partir de los intermedios quirales apropiados mediante los procedimientos descritos anteriormente.

Se puede llevar a cabo la conversión opcional de un compuesto de fórmula (I) a la correspondiente sal, convenientemente, por reacción con el ácido o base adecuados. Se puede llevar a cabo la conversión opcional de un compuesto de fórmula (I) al correspondiente solvato o derivado fisiológicamente funcional por procedimientos conocidos por un experto en la técnica.

Según otro aspecto, la presente invención proporciona nuevos intermedios para la preparación de compuestos de fórmula (I), por ejemplo los compuestos de fórmula (II) tal y como se han definido anteriormente, o un isómero óptico, una sal o un derivado protegido del mismo; en particular un compuesto seleccionado de:

(R,R)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato;

(R,S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato;

(S,S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato;

(S,R)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato;

(R,R/S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-2,6-diamino-5-etil-4-tiohexanoato;

(R,R/S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-2,6-diamino-5-butoximetil-4-tiohexanoato;

(R,R/S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-2,6-diamino-5-ciclopropil-4-tiohexanoato;

(R,R)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-benciloxicarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato;

(R,S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-benciloxicarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato;

(S,S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-benciloxicarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato;

(S,R)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-benciloxicarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato;

(R,R/S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-benciloxicarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato; y

(R,R/S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-benciloxicarbonil-2,6-diamino-5-butoximetil-4-tiohexanoato.

En un aspecto particular de la invención, el compuesto de fórmula (II) se selecciona de (R,R)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato y (R,R)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-benciloxicarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato.

Ciertos derivados protegidos de los compuestos de fórmula (VI) también son útiles como intermedios para la preparación de compuestos de fórmula (II); en particular, el (R,R/S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-2-amino-5-ciclopropil-6-nitro-4- tiohexanoato;

Ciertos derivados protegidos de los compuestos de fórmula (I) son útiles también como intermedios para la preparación de compuestos de fórmula (I); particularmente un compuesto seleccionado entre:

(R,R)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato;

(R,S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato;

(S,S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato;

(S,R)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato;

(R,R/S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato;

(R,R/S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-butoximetil-4-tiohexanoato; y

(R,R/S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-ciclopropil-4-tiohexanoato;

y las sales y solvatos de los mismos.

En un aspecto particular de la invención, el derivado protegido de fórmula (I) es (R,R)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato o una sal o solvato del mismo.

Para que la invención se entienda mejor, se dan los siguientes Ejemplos como ilustración.

Ejemplos de síntesis Ejemplo 1 Síntesis de diclorhidrato de (R,R)-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato o diclorhidrato de S-[(R)-2-(1-iminoetilamino)propil]-L-cisteína (a) (R,R)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-benciloxicarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato

A una disolución de éster t-butílico de N-t-butoxicarbonilo (7,26 g, 26,2 mmol) (Olsen et al., J. Med. Chem., 1985, 50(22), 4332-4336) en tolueno seco (100 ml) se añadió tosilato de (S)-N-benciloxicarbonil-1-aminopropan-2-ol (9,51 g, 26,2 mmol) y 1,8-diazabiciclo[5.4.0]undec-7-eno (3,90 ml, 26,2 mmol) y la mezcla se agitó vigorosamente durante toda la noche a 60ºC en una atmósfera de nitrógeno. La mezcla se dividió entre 250 ml de acetato de etilo y HCl acuoso 1N. Se combinó otro extracto orgánico más y estos extractos se lavaron con bicarbonato sódico acuoso, agua y salmuera, después se secaron y se evaporaron. La purificación mediante cromatografía en columna dio el compuesto del título como un aceite incoloro que cristalizó dando un sólido blando tras un reposo prolongado.

CL/Espec. Masas por electropulverización, RT 4,93 minutos, M+H 469 (100%), M+NH_{4}+ 486 (70%)

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta_{H}; 1,27 (3H, d, Me), 1,44 y 1,47 (ea 9H, s, Cme_{3}), 2,92 (3H, m, 3-H, 5-H), 3,23 y 3,38 (ea 1H, m, 6-H), 4,39 (1H, am, 2-H), 5,11 (2H, s, CH_{2}Ph), 5,31 y 5,42 (ea 1H, a, NH), 7,34 (5H, m, Ar-H).

Espectro de dicroísmo circular (MeCN)

210 (+0,42) y 233 (-0,11) nm

(b) (R,R)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato

A una disolución de (R,R)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N- benciloxicarbonil-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato (5 g) en 120 ml de etanol, desgasificado y protegida con nitrógeno, se añadieron 2,5 g de hidróxido de paladio sobre carbón vegetal (20%, tipo Degussa E101 EN/W, 1:1 con agua) seguida de formiato amónico (10 g). La disolución se calentó entonces y se sometió a reflujo durante 1 hora, después de lo cual se enfrió y se filtró a través de Hyflo y se lavó bien con etanol acuoso. Éste se evaporó y el residuo se hizo pasar por una pequeña columna de sílice eluida con cloroformo:metanol:amoniaco 880 90:10:0,5, dando un aceite tras la evaporación que se usó directamente en la siguiente etapa.

CL/Espec. Masas por electropulverización, RT 2,40 minutos, M+H 335 (100%), 279 (60%).

(c) Clorhidrato de (R,R)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato

Se añadió de una sola vez clorhidrato de S-(1-naftilmetil)tioacetimida (3, 10 g, 12, 3 mmol) a una disolución de (R,R)-t-butoxi-2N-t-butoxicarbonil-6N-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato 2,75 g en 50 ml de etanol en una atmósfera de nitrógeno y la disolución se agitó durante 14 horas a temperatura ambiente. El disolvente se evaporó y el residuo se dividió entre 50 ml de éter y 50 ml de agua, seguido de dos lavados con éter; los extractos acuosos anteriores se combinaron y se evaporaron dando una pasta amorfa blanca bruta que se usó directamente en la siguiente etapa.

Espectro de Masas por Electropulverización, M+H 376 (100%), 276 (12%)

^{1}H RMN (D_{2}O) \delta_{H}; 1,28 (3H, d, Me), 1,39 y 1,42 (ea 9H, s, Cme_{3}), 2,21 (3H, s, CH_{3}), 3,01 (3H, m, 3-H, 5-H), 3,37 (2H, m, 6-H), 4,18 (1H, t, 2-H).

(d) Diclorhidrato de (R,R)-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato; o diclorhidrato de S-[R]-2-(1-iminoetilamino)propil]-L-cisteína

Se disolvió clorhidrato de (R,R)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato añadiendo 20 ml de cloruro de hidrógeno 4N en dioxano y la suspensión que se formó rápidamente se agitó vigorosamente durante toda la noche en una atmósfera de nitrógeno. Se añadieron 50 ml de éter y el líquido se decantó formando una goma adhesiva. La trituración con éter dio, por último, el compuesto del título como un sólido blanco higroscópico amorfo.

Espectro de Masas por Electropulverización, M+H 220 (100%),

^{1}H RMN (D_{2}O) \delta_{H}; 1,37 (3H, d, Me), 2,25 (3H, s, CH_{3}), 3,23 (3H, m, 3-H, 5-H), 3,47 (2H, m, 6-H), 4,24 (1H, t, 2-H) (nótese que en algunos casos hay un desdoblamiento de las señales debido a las formas rotaméricas).

^{13}C RMN (DMSO-d_{6}) \delta_{C}; 18,90 (q, Me), 19,30 (q, Me), 30,13 (t, 3-C), 38,83 (d, 5-C), 47,43 (t, 6-C), 52,20 (d, 2-C), 165,0 (s, N=C-N), 170,0 (s, CO_{2}H).

Espectro de dicroísmo circular (H_{2}O)

199 (+1,38) y 223 (-0,77) nm

Ejemplo 2 Síntesis de diclorhidrato de (R,S)-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato o diclorhidrato de S[(S)-2-(1-iminoetilamino)propil]-L-cisteína

Los procedimientos fueron idénticos a los usados en el Ejemplo 1, excepto que en la etapa de alquilación, se hizo reaccionar L-cisteína protegida con tosilato de (R)-N-benciloxicarbonil-1-aminopropan-2-ol en lugar del enantiómero S de dicho ejemplo.

Espectro de Masas por Electropulverización, M+H 220 (100%),

^{1}H RMN (D_{2}O) \delta_{H}; 1,40 (3H, d, Me), 2,25 (3H, s, CH_{3}), 3,30 (3H, m, 3-H, 5-H), 3,45 (2H, m, 6-H), 4,25 (1H, t, 2-H) (nota importante, en algunos casos hay un desdoblamiento de las señales debido a las formas rotaméricas).

Ejemplo 3 Síntesis de diclorhidrato de (S,S)-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato o diclorhidrato de S[(S)-2-(1-iminoetilamino)propil]-D-cisteína

Los procedimientos fueron idénticos a los usados en el Ejemplo 1, excepto que en la etapa de alquilación, se hizo reaccionar D-cisteína protegida con tosilato de (R)-N-benciloxicarbonil-1-aminopropan-2-ol.

Los espectros del producto son idénticos a los del compuesto del Ejemplo 1, excepto:

Espectro de dicroísmo circular (H_{2}O)

199 (-1,05) y 224 (+0,66) nm

Ejemplo 4 Síntesis de diclorhidrato de (S,R)-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-metil-4-tiohexanoato o diclorhidrato de S[(R)-2-(1-iminoetilamino)propil]-D-cisteína

Los procedimientos fueron idénticos a los usados en el Ejemplo 1, excepto que en la etapa de alquilación, se hizo reaccionar D-cisteína protegida con tosilato de (S)-N-benciloxicarbonil-1-aminopropan-2-ol.

Espectro de Masas por Electropulverización, M+H 220 (100%),

^{1}H RMN (D_{2}O) \delta_{H}; 1,40 (3H, d, Me), 2,25 (3H, s, CH_{3}), 3,30 (3H, m, 3-H, 5-H), 3,45 (2H, m, 6-H), 4,25 (1H, t, 2-H).

Ejemplo 5 Síntesis de diclorhidrato de (R,R/S)-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-etil-4-tiohexanoato o diclorhidrato de S[(R/S)-2-(1-iminoetilamino)butil]-L-cisteína

Los procedimientos fueron idénticos a los usados en el Ejemplo 1, excepto que en la etapa de alquilación, se hizo reaccionar L-cisteína protegida con tosilato de (R/S)-N-benciloxicarbonil-1-aminobutan-2-ol, en lugar del derivado 1- aminopropan-2-ol de dicho ejemplo, dando un producto que era, sustancialmente, una mezcla epimérica del compuesto del título.

Espectro de Masas por Electropulverización, M+H 234 (100%),

Ejemplo 6 Síntesis de diclorhidrato de (R,R/S)-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-hidroximetil-4-tiohexanoato o diclorhidrato de S[(R/S)-2-(1-iminoetilamino-3-hidroxi)propil]-L-cisteína

Los procedimientos fueron idénticos a los usados en el Ejemplo 1, excepto que en la etapa de alquilación, se hizo reaccionar L-cisteína protegida con tosilato de (R/S)-N-benciloxicarbonil-3-t-butoxi-1-aminopropan-2-ol, en lugar del derivado 1-aminopropan-2-ol de dicho ejemplo, dando un producto que era, sustancialmente, una mezcla epimérica del compuesto del título, con pérdida conjunta del éter terc-butílico en la etapa de desprotección.

Espectro de Masas por Electropulverización, M+H 236 (100%),

Ejemplo 7 Síntesis de diclorhidrato de (R,R/S)-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-etil-4-tiohexanoato o diclorhidrato de S[(R/S)-2-(1-iminoetilamino)butil]-L-cisteína a) (R,R/S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-2-amino-5-ciclopropil-6-nitro-4-tiohexanoato

Se hizo reaccionar L-cisteína con nitrometano, piperidina y ciclopropanocarboxaldehído usando las condiciones descritas por Hassner y Dehaen en J. Org. Chem., 55, 5505-5510, (1990), dando el compuesto del título como un aceite incoloro.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta_{H}; 0,40 y 0,68 (ea 2H, m, ciclopropil-H), 0,89 (1H, m, ciclopropil-H), 1,46 y 1,48 (ea 9H, s, Cme_{3}), 2,81, 3,00 y 3,10 (ea 1H, m, 3-H, 5-H), 4,41 (1H, am 2-H), 4,58 (2H, m, 6H), 5,34 (1H, a, NH).

b) Tiohexanoato de (R,R/S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-2,6-diamino-5-ciclopropil-4-tiohexanoato

Los grupos nitro del intermedio de la etapa a) se redujeron usando una mezcla de cloruro de níquel/borohidruro sódico en metanol según el procedimiento descrito por Nagarajan y Ganem, J. Org. Chem., 51, 4856-4861, (1990). Se recuperó un aceite después de la extracción en fase sólida con gel de sílice, que se usó directamente en la siguiente etapa.

c) Síntesis de (R,R/S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-ciclopropil-4-tiohexanoato

El producto de la etapa de reducción b) (47 mg, 0,13 mmol) anterior se hizo reaccionar con clorhidrato de S-(1-naftilmetil)tioacetimidato (72 mg) según se describe en la etapa c) del Ejemplo 1 dando una espuma blanca bruta.

^{1}H RMN (CDCl_{3}) \delta_{H}; 0,05 y 0,34 (ea 2H, m, ciclopropil-H), 0,59 (1H, m, ciclopropil-H), 1,09 y 1,12 (ea 9H, s, Cme_{3}), 1,92 (3H, s Me), 2,05 (1H, m, 5-H), 2,70 (2H, m, 3-H), 3,25 (2H, m, 6-H), 3,89 (1H, m 2-H).

Espectro de Masas por Electropulverización, M+H 402 (50%),

d) Síntesis de diclorhidrato de S-[(R,S)-2-(1-iminoetilamino-2-ciclopropil)etil]-L-cisteína o diclorhidrato de S-[(R/S)-2-(1-iminoetilamino-2-ciclopropil)etil]-L-cisteína

La desprotección del (R,R/S)-t-butil-2N-t-butoxicarbonil-6N-(1-iminoetil)-2,6-diamino-5-ciclopropil-4-tiohexanoato se llevó a cabo usando HCl 4 N en dioxano. El producto, una mezcla de epímeros en C-5, se aisló como un sólido vítreo higroscópico después de una extracción de C-18 en fase sólida eluida con agua.

^{1}H RMN (D_{2}O) \delta_{H}; 0,29 y 0,58 (ea 2H, m, ciclopropil-H), 0,82 (1H, m, ciclopropil-H), 2,14 (3H, s Me), 2,34 (1H, m, 5-H), 3,12 (2H, m, 3-H), 3,48 (2H, m, 6-H), 3,98 (1H, m 2-H).

Espectro de Masas por Electropulverización, M+H 246 (100%),

Actividad biológica 1. Inhibición de iNOS humana aislada

La inhibición de iNOS humana purificada se puede determinar usando una preparación de iNOS humana según se describe en el capítulo "Expresión if Human Nitric Oxide Synthasa Isozymes" de Charles et al en Methods in Enzymology, 1996, volumen 268, 449-460. La actividad se puede controlar usando los cambios cuantitativos de absorción de hemoglobina según describen R.G. Knowles y J. Dawson en "A Microtitreplate Assay of Human NOS Isoforms" en Methods in Molecular Biology, 1998, volumen 100, 237-242, Nitric Oxide Protocols, Ed. M.A. Titheradge, Humana Press, Totowa NJ.

\newpage

Compuesto	CI_{50} (\muM)
Ejemplo 1	2,0
Ejemplo 2	39,0
Ejemplo 3	6,6
Ejemplo 4	48,0
Ejemplo 7	6,2

2. Inhibición de eNOS e iNOS en anillos aórticos de rata

La inhibición de eNOS e iNOS in situ en anillos aórticos de rata se determinó midiendo el aumento de la tensión en el anillo provocado por la inhibición de la NO sintasa. Para estudios del tono basal (reflejando eNOS), los anillos de la aorta torácica con endotelio intacto se prepararon según se ha descrito anteriormente (Rees et al. (1989) Br. J. Pharmol. 96, 418-424) y las curvas de concentración acumulativa obtenidas para los inhibidores en presencia de una concentración umbral de fenilefrina (ED_{10} \sim 10 nM). Para estudios del tono del músculo liso inducido (reflejando iNOS), se expusieron anillos despojados de endotelio a LPS (0,1 \mug/ml de S.typhosa) en presencia de fenilefrina a aproximadamente ED_{90} durante 6 horas según se ha descrito previamente (Rees et al. (1990) Biochem. Biophys. Res. Commun. 173, 541-547). Durante ese tiempo ocurrió una pérdida de tono progresiva debido a la inducción de iNOS. Entonces se obtuvieron las curvas de concentración acumulativa para los inhibidores.

Los resultados se dan en la siguiente tabla:

	iNOS	eNOS	Selectividad
	CI_{50} (\muM)	CI_{50} (\muM)	iNOS vs eNOS
Ejemplo 1	0,26	> 20	> 75

3. Inhibición de nNOS es rodajas corticales de rata

El efecto de los compuestos sobre nNOS en rodajas de cerebro de rata se determinó según se describe en Furfine et al (1994) J. Biol. Chem. 269, 26677-26683 y Lizasoain et al (1995) J. Neurochem. 64, 636-642.

La síntesis de NO estimulada por KCl (54 mM) se midió mediante la conversión de arginina-^{14}C en citrulina-^{14}C durante un periodo de 2 horas a 37ºC en rodajas de cortex cerebral de rata troceadas - Mcllwain (0,2 mm x 0,2 mm), siguiendo a un periodo de preincubación de 1 hora en ausencia del compuesto o KCl de alta concentración.

Se determinó que el compuesto del Ejemplo 1 tenía una CI_{50} mayor de 80 \muM, lo que sugiere que es aproximadamente 300 veces más selectiva para iNOS que para nNOS.

4. Procedimiento para determinar la biodisponibilidad oral de los compuestos inhibidores de iNOS Trabajo con animales

Se administró una dosis intravenosa (10 mg/kg) y oral (50 mg/kg) a ratas (3 animales cada vez) del compuesto de ensayo en disolución acuosa. Se tomaron muestras de sangre a intervalos de tiempo después de la administración y se preparó plasma mediante centrifugación. Las muestras se almacenaron a -20ºC hasta su análisis.

Análisis de compuestos en plasma

El plasma (50 \mul)se desproteinó y el compuesto se derivatizó con un reactivo de amonio cuaternario. Después se inyectaron las muestras en un sistema de HPLC y se determinó la concentración del compuesto usando detección por espectrometría de masas.

Análisis farmacocinético

Las concentraciones de plasma obtenidas por el procedimiento mencionado anteriormente se introdujeron en un paquete de software farmacocinético (PKCAL v 1.2s) y los datos se ajustaron usando un procedimiento no compartimental. La biodisponibilidad oral de los compuestos se determinó comparando los valores del área bajo la curva (ABC) mediante el software para el perfil oral con el ABC para el perfil intravenoso. Las semividas se obtuvieron ajustando los puntos de fase terminal del perfil intravenoso.

Se halló que el compuesto del Ejemplo 1 tiene una biodisponibilidad oral mayor del 90% y una semivida de 2-4 horas.

Claims

1. Un compuesto de fórmula (I);

9

o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional del mismo;

en la que R^{1} se selecciona entre alquilo C_{1-4}, cicloalquilo C_{3-4}, hidroxialquilo C_{1-4} y haloalquilo C_{1-4};

2. Un compuesto de fórmula (I) seleccionado de:

S[(R)-2-(1-iminoetilamino)propil]-L-cisteína;

S[(S)-2-(1-iminoetilamino)propil]-L-cisteína;

S[(R/S)-2-(1-iminoetilamino)propil]-L-cisteína;

S[(R)-2-(1-iminoetilamino)propil]-D-cisteína;

S[(S)-2-(1-iminoetilamino)propil]-D-cisteína;

S[(R/S)-2-(1-iminoetilamino)propil]-D-cisteína;

S[(R/S)-2-(1-iminoetilamino)butil]-L-cisteína;

S[(R/S)-2-(1-iminoetilamino,2-ciclopropil)etil]-L-cisteína; y

S[(R/S)-2-(1-iminoetilamino,3-hidroxi)propil]-L-cisteína.

o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional del mismo.

3. El compuesto de fórmula (I) que es S-[(R)-2-(1-iminoetilamino)-propil]-L-cisteína o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional del mismo.

4. Un compuesto de fórmula (I) según se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional del mismo farmacéuticamente aceptable para usar en terapia médica.

5. Una formulación farmacéutica que comprende un compuesto de fórmula (I) según se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional del mismo farmacéuticamente aceptable, y un vehículo o excipiente farmacéuticamente aceptable y, opcionalmente, uno o más ingredientes terapéuticos distintos.

6. Uso de un compuesto de fórmula (I) según se ha definido en cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional del mismo farmacéuticamente aceptable en la fabricación de un medicamento para la profilaxis o el tratamiento de una afección clínica para el que es aconsejable un inhibidor de la óxido nítrico sintasa.

7. Uso según la reivindicación 6 en el que la afección clínica se selecciona entre artritis, asma, íleo y migraña.

8. Un procedimiento de preparación de un compuesto de fórmula (I) o una sal, solvato o derivado fisiológicamente funcional del mismo que comprende:

(i) hacer reaccionar el compuesto de fórmula (II)

10

o un isómero óptico, una sal o un derivado protegido del mismo, en la que R^{1} es como se ha definido anteriormente, con un compuesto de fórmula (III)

11

o una sal del mismo, en el que L es un grupo saliente; seguido de las siguientes etapas, en cualquier orden:

(ii) retirada opcional de cualquier grupo protector;

9. Un compuesto de fórmula (II)

12

o un isómero óptico, una sal, o un derivado protegido del mismo, en el que R^{1} es como se ha definido anteriormente.

10. Un derivado protegido de un compuesto de fórmula (I) según la reivindicación 1 que se selecciona de:

y las sales y solvatos del mismo.