ES2202613T3 - Procedimiento de esterilizacion final de productos biologicos. - Google Patents

Procedimiento de esterilizacion final de productos biologicos.

Info

Publication number
ES2202613T3
ES2202613T3 ES97921969T ES97921969T ES2202613T3 ES 2202613 T3 ES2202613 T3 ES 2202613T3 ES 97921969 T ES97921969 T ES 97921969T ES 97921969 T ES97921969 T ES 97921969T ES 2202613 T3 ES2202613 T3 ES 2202613T3
Authority
ES
Spain
Prior art keywords
products
product
biologically active
parvovirus
temperature
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
ES97921969T
Other languages
English (en)
Inventor
Jaap Kampinga
Robert Alcock
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Quadrant Drug Delivery Ltd
Original Assignee
Elan Drug Delivery Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Elan Drug Delivery Ltd filed Critical Elan Drug Delivery Ltd
Application granted granted Critical
Publication of ES2202613T3 publication Critical patent/ES2202613T3/es
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
    • A61L2/0005—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts
    • A61L2/0011—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor for pharmaceuticals, biologicals or living parts using physical methods
    • A61L2/0023—Heat
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L2/00—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor
    • A61L2/02—Methods or apparatus for disinfecting or sterilising materials or objects other than foodstuffs or contact lenses; Accessories therefor using physical phenomena
    • A61L2/04—Heat
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
    • C12N7/04—Inactivation or attenuation; Producing viral sub-units

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Meat, Egg Or Seafood Products (AREA)
  • Apparatus For Disinfection Or Sterilisation (AREA)
  • Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

LA INVENCION SE REFIERE A PROCEDIMIENTOS PARA ESTERILIZAR PRODUCTOS BIOLOGICAMENTE ACTIVOS, PARTICULARMENTE PRODUCTOS TERAPEUTICOS O PROFILACTICOS, Y A LAS COMPOSICIONES OBTENIDAS POR ELLOS. LOS PROCEDIMIENTOS INCLUYEN LA OBTENCION DE UNA MUESTRA SECA QUE CONTENGA UNA CANTIDAD DE TREHALOSA SUFICIENTE PARA DAR TERMOESTABILIDAD AL PRODUCTO, Y EXPONER LA MUESTRA SECA A CONDICIONES DE CALENTAMIENTO A UNA TEMPERATURA Y DURANTE UN PERIODO SUFICIENTES PARA INACTIVAR SUSTANCIALMENTE LOS VIRUS, ESPECIALMENTE LOS VIRUS ENCAPSULADOS NO LIPIDICOS. LOS PROCEDIMIENTOS DE SECADO INCLUYEN TANTO CONDICIONES DE SECADO AL AIRE AMBIENTE COMO LA LIOFILIZACION. LAS CONDICIONES DE CALENTAMIENTO INCLUYEN CUALQUIER PROCEDIMIENTO CONOCIDO EN LA TECNICA, Y CUBREN UN AMPLIO ABANICO DE TEMPERATURAS Y TIEMPOS DE CALENTAMIENTO. LAS COMPOSICIONES OBTENIDAS CONTIENEN PRODUCTOS ESTABLES Y NO CONTIENEN VIRUS INFECCIOSOS MENSURABLES, PARTICULARMENTE PARVOVIRUS.

Description

Procedimiento de esterilización final de productos biológicos.
Campo técnico
La presente invención se refiere al campo de la esterilización de productos derivados de la sangre y de otras fuentes biológicas. La invención consiste en calentar productos biológicamente activos en presencia de trehalosa durante un periodo de tiempo y en condiciones suficientes para destruir virus, particularmente el parvovirus.
Antecedentes de la técnica
La eliminación completa de virus y de otros contaminantes a partir de productos biológicamente activos es esencial para la producción y la utilización de una amplia diversidad de productos terapéuticos y profilácticos. En la actualidad se están utilizando varios procedimientos. Principalmente, éstos consisten en tratamiento térmico, cromatografía, tratamiento con solvente-detergente (SD) y pasteurización. Todos dichos procedimientos adolecen de inconvenientes y ninguno ha sido satisfactorio para eliminar todos los virus conocidos. Puede haber asimismo virus que no han sido caracterizados todavía que no son inactivados mediante dichos procedimientos. Para una revisión, véanse Cuthbertson et al. (1991) Blood Separation and Plasma Fractionation, Wiley-Liss, Inc. páginas 385-435; Mozen (1993) J. Clin. Apheresis 8: 126-130: Ingerslev (1994) Haemostasis 24: 311-323; Dorner et al. (1993) Virological Safety Aspects of Plasma Derivatives, Brown, ed., Dev. Biol. Stand., Basel, Karger, volumen 81, páginas 137-143; Mannucci (1993) Vox Sang. 64: 197-203; y Hamman et al. (1994) Vox Sang. 67: 72-77.
Una amplia diversidad de productos con utilidad terapéutica se derivan de fuentes biológicas tales como plasma y líneas celulares. La mayor parte del plasma utilizado para fraccionamiento en los Estados Unidos se obtiene mediante plasmaféresis en centros de recogida distribuidos por todo el país. Los centros proporcionan plasma a fraccionadores comerciales en los Estados Unidos y en Europa. Se recogen aproximadamente 9 millones de litros de plasma por año procedentes de aproximadamente 13 millones de donaciones. La Cruz Roja añade aproximadamente 800.000 litros a este número.
Los productos procedentes de plasma humano se pueden clasificar en varios grupos: los productos de albúmina; las inmunoglobulinas; las globulinas insolubles en frío; los productos de coagulación; y los inhibidores de proteinasa. Los productos de albúmina, denominados asimismo productos de la fracción V, se utilizan principalmente para restablecer la presión osmótica coloidal en condiciones de choque tales como quemadura, o choque hemorrágico en el que la pérdida de fluidos constituye un problema principal.
Las inmunoglobulinas, o "gammaglobulinas", se aíslan a partir de la fracción II y contienen una mezcla de anticuerpos representativos de la fuente de plasma agrupado. Algunas de las hiperinmunoglobilinas utilizadas para una inmunización pasiva se aislan a partir del plasma de donantes con altos niveles de anticuerpo protector. Las globulinas insolubles en frío incluyen fibrinógeno y el factor de von Willebrand.
Los productos de coagulación incluyen el factor VIII antihemofílico y el complejo de factor IX utilizado para una terapia de sustitución en las hemofilias A y B, respectivamente. Se prepara una forma activada de complejo de factor IX denominado complejo coagulante antiinhibidor y se utiliza para el tratamiento de pacientes con un inhibidor de factor VIII. Los inhibidores de proteinasa incluyen el inhibidor de proteinasa \alpha1, conocido asimismo como antitripsina \alpha1 que se utiliza para tratar una deficiencia congénita. La antitrombina III es un inhibidor que es asimismo congénitamente deficiente que conduce a complicaciones trombóticas.
Otros fluidos corporales constituyen la fuente de productos terapéuticos. Por ejemplo, la eritropoyetina se purificaba anteriormente a partir de sangre o de orina de pacientes anémicos aplásticos, patente U.S. nº 4.677.195. Se ha obtenido asimismo albúmina de alta pureza a partir de placentas humanas. Grandgeorge y Véron (1993) Virological Safety Aspects of Plasma Derivatives, Brown, ed. Dev. Biol. Stand. Basel, Karger, volumen 81, páginas 237-244. La producción de proteínas recombinantes en la leche de animales transgénicos es ahora una realidad comercial.
Se obtienen en la actualidad numerosos productos terapéuticos a partir de cultivos de células que expresan proteínas recombinantes. Los cultivos de células se hacen crecer rutinariamente en suero animal o humano. Los productos se obtienen a partir de las células o a partir del material sobrenadante de cultivos de células y por tanto pueden contener virus, ya sea procedentes del medio o de las propias células. Dichos productos obtenidos incluyen, pero sin limitarse a ellos, factores estimuladores de colonias, anticuerpos monoclonales y derivados de los mismos, factores de crecimiento tales como eritropoyetinas e interleuquinas. Los factores de crecimiento solos representan una industria de muchos millones de dólares. Para una revisión, véase Erickson (1991) Sci. Am. febrero 1991 páginas 126-127.
Aunque el riesgo de una contaminación vírica de proteínas derivadas de un cultivo de células es muy inferior al asociado con productos de plasma, existe siempre el riesgo de contaminación vírica cuando se trata de células. Por este motivo, productos tales como anticuerpos monoclonales se someten a un tratamiento térmico con el fin de inactivar los virus. Además, la adición de albúmina de suero humano (HSA) para estabilizar formulaciones de proteínas recombinantes es una práctica normal.
Los principales virus llevados por la sangre de preocupación clínica incluyen los virus de las hepatitis B y C y los retrovirus VIH y HTLV. Con respecto a derivados de la sangre, se ha encontrado que los HTLVI y II y el citomegalovirus (CMB) están asociados con células y por tanto no presentan ningún riesgo en productos exentos de células.
A medida que se descubren nuevos virus, se cambian los protocolos de inactivación para acomodarse a los mismos. Por ejemplo, el descubrimiento de que el virus de la inmunodeficiencia humana (VIH) sobrevivía al tratamiento estándar del factor VIII necesitó un cambio de protocolo que requería la adición de HSA para estabilizar el producto en las nuevas condiciones más severas. Mozen (1993).
Son conocidos procedimientos para inactivar el VIH y los virus de la hepatitis en fracciones de plasma. Como se ha descrito anteriormente, el calentamiento a una temperatura de 60ºC durante 10 horas en presencia de HSA inactiva el VIH. Se encontró que las hepatitis no A y no B (NANBH) eran inactivadas en preparaciones de factores VIII y IX mediante calentamiento a una temperatura de 80ºC durante 72 horas en estado liofilizado. Grupo de estudios del UK Haemophilia Centre, Directors on Surveillance of Virus Transmission by Concentrates (1988) Lancet 8 de octubre, páginas 814-816.
En años recientes, se han identificado unas cuantas enfermedades que se pueden transmitir por transfusión que, aunque no son comunes desde la perspectiva de salud pública, presentan repercusiones tanto reales como potenciales sobre transfusiones en la utilización de plasma y derivados de plasma, así como de productos celulares. Estas repercusiones incluyen la transmisión de parvovirus (B19). Se ha encontrado que este agente etiológico es resistente a los procedimientos actuales utilizados para una inactivación vírica. Sherwood (1993) Brown, ed. Virological Safety Aspects of Plasma Derivatives, Dev. Biol. Stand. Basel, Karger volumen 81, páginas 25-33.
Los procedimientos de inactivación de virus actualmente en uso pueden causar asimismo cambios en la actividad biológica de los productos biológicos obtenidos. La inmunogenicidad de los productos es de una especial preocupación cuando el tratamiento de esterilización puede inducir el desdoblamiento y/o la agregación de proteínas. Por ejemplo, se ha encontrado que los concentrados de factor VIII presentan evidencia de activación de FVIII, con potencias monofásicas superiores a las bifásicas, una generación de FXa más rápida, y un aumento de polipéptidos de peso molecular inferior. Los procedimientos de inactivación vírica pueden inducir asimismo cambios en los componentes no FVIII y éstos pueden ser parcialmente responsables de la actividad inmunosupresora de algunos de estos concentrados. Barrowcliffe (1993) Virological Safety Aspects of Plasma Derivatives Brown, ed. Dev. Biol. Stand. Basel, Karger, volumen 81, páginas 125-135.
Se han encontrado notables cambios en las funciones del sistema inmunitario, tanto in vitro como ex vivo en pacientes expuestos frecuentemente a productos de procedencia biológica. En pacientes con VIH negativo, los cambios incluyen una reducción de números y funciones de células competentes inmunológicas tal como se determina por su respuesta a estímulos en términos de marcadores de su renovación celular. Es probable que estos cambios tengan lugar cuando está presente una enfermedad vírica crónica. Además, las impurezas de proteínas alogénicas desnaturalizadas de concentrados de factores y otros contaminantes pueden ser asimismo responsables de una inmunosupresión. Véase, Ingerslev (1994) para una revisión.
El parvovirus humano es un agente recientemente descubierto al que se le asignó la denominación codificada B19. Cossart et al. (1975) Lancet 1:72-73. Es un virus con ADN monocatenario muy pequeño (24 nm) con un revestimiento proteínico muy simple, pero sin ninguna envoltura exterior lipídica. Éste causa una viremia transitoria de 1 a 2; semanas, pero puede alcanzar títulos de virus en circulación extraordinariamente elevados de por lo menos 10^{12} partículas de virus por ml. Aunque el parvovirus causa normalmente una enfermedad relativamente leve que no es con frecuencia clínicamente evidente, que produce una erupción ligera semejante a la rubéola conocida como quinta enfermedad o eritema infeccioso, puede causar asimismo reacciones más graves. El parvovirus infecta las células madre de médula ósea y esto puede causar una afección grave, con peligro para la vida en pacientes con una anemia subyacente preexistente. Puede tener lugar una crisis aplástica como resultado de una interrupción aguda de la hematopoyesis en pacientes con anemias hemolíticas congénitas y estados de inmunodeficiencia. El parvovirus causa asimismo hidropesía fetal en mujeres embarazadas. Por tanto el parvovirus representa un peligro de infección para los pacientes que reciben agentes terapéuticos derivados de plasma, particularmente en los pacientes con trastornos hemostáticos. Es preocupante que este virus sea transmitido por algunos concentrados a pesar de la utilización de procedimientos virucidas enérgicos y una eliminación cromatográfica, no solamente por el riesgo de transmisión del parvovirus, sino debido a que pueden existir otros virus patógenos con los mismos rasgos distintivos.
Un estudio en niños con trastornos hemolíticos encontró que el parvovirus es rápidamente infeccioso en derivados de plasma que no han sido tratados térmicamente. En un estudio, un pequeño grupo de niños (N=9) tratados con concentrado de factor VIII tratado térmicamente no fueron infectados por parvovirus. Williams et al. (1990) Vox Sang. 58: 177-181. Sin embargo, otros estudios han encontrado que productos tratados térmicamente transmiten una infección por parvovirus. Corsi et al. (1958) J. Med. Virol. 25: 151-153. A diferencia de la hepatitis y del VIH, el parvovirus no se ensaya para donaciones de plasma individuales y por tanto está presente en plasma agrupado.
Como se ha mencionado anteriormente, se han propuesto diversos tratamientos o están en uso para la inactivación de virus en productos terapéuticos de procedencia biológica. Para una revisión, véase Soumela (1993) Trans. Med. Rev. VII: 42-57. El producto final se ha obtenido mediante una combinación de etapas de separación y etapas de inactivación, las cuales sirven para reducir la carga vírica.
Existen varios tratamientos térmicos actualmente en uso. Se utiliza normalmente un calentamiento en solución para productos de albúmina. Esto es conocido de otro modo como pasteurización. Los virus son inactivados calentando las muestras líquidas durante por lo menos 10 horas a una temperatura de 60ºC en presencia de una pequeña cantidad de estabilizador tal como caprilato o triptofanato. Dicho procedimiento es inadecuado para otros productos, sin embargo, ya que la mayoría de las proteínas se desnaturalizan en dichas condiciones. Se ha mostrado que la pasteurización inactiva un amplio espectro de virus que incluyen VIH, HBV, HCV, HAV, HSV, poliovirus CMV, virus de la parotiditis, virus del sarampión y virus de la rubéola. Nowak et al. (1993) Virological Safety Aspects of Plasma Derivatives, Brown, ed., Dev. Biol. Stand. Basel, Karger, volumen 81, páginas 169-176; y Soumela (1993). En dichos estudios, no se ensayó el parvovirus. Además, la utilización de factores de coagulación pasteurizados ha sido asociada con la formación de neoantígenos. Ingerslev (1994).
El calentamiento de productos secos se realiza cuando las proteínas lábiles, liofilizadas, toleran temperaturas de hasta 68ºC. Los procedimientos antiguos que incluían el calentamiento a una temperatura de 60ºC se utilizaron para inactivar los virus de la hepatitis. Véase, p.ej. la patente U.S. nº 4.456.590. Sin embargo, dichas condiciones fueron insuficientes para inactivar el VIH tal como se evidenció por la transmisión del virus a través de factores de coagulación purificados. Se encontró asimismo que los productos tratados a una temperatura de 68ºC durante 72 horas eran inseguros. Soumela (1993). Más recientemente, se han utilizado temperaturas superiores y tiempos de calentamiento más prolongados, tales como temperaturas de 80ºC durante 72 horas para asegurar la inactivación de los virus de la hepatitis y el VIH. Véase, p.ej., Knevelman et al. (1994) Vox Sang. 66: 89-95. Sin embargo, la mayoría de los agentes activos biológicos lábiles, especialmente productos biofarmacéuticos, no sobreviven a una exposición en condiciones de temperatura/tiempo tan rigurosas. Otro inconveniente de dicho procedimiento consiste en el resultado con frecuencia impredecible con respecto a la inactivación del parvovirus. Santagostino et al. (1994) Lancet 343: 798; y Yee et al. (1995) Lancet 345: 794.
La inactivación con solvente/detergente (SD) de virus se basa en la desintegración de las membranas de los virus que presentan envolturas lipídicas. Los virus se convierten en no infecciosos, ya sea por una desintegración estructural o por destrucción del sitio de reconocimiento de receptores celulares. Aunque la mayoría de los virus patógenos humanos presentan una envoltura lipídica, el parvovirus y el HAV no la presentan y no son inactivados mediante dicho procedimiento. Para una revisión, véase Wieding et al. (1993) Ann. Hematol. 67: 259-266. El procedimiento SD está en uso en numerosos países. Horowitz et al. (1993) Virological Safety Aspects of Plasma Derivatives; Brown, ed. Dev. Biol. Stand. Basel, Karger, volumen 81, páginas 147-161. En un procedimiento relacionado, se han utilizado lípidos para inactivar virus con envolturas lipídicas. Isaacs et al. (1994) Ann. NY Acad. Sci. 724: 457-464.
Se han desarrollado otros varios procedimientos o están en desarrollo. Por ejemplo, la esterilización en frío de plasma se realiza exponiendo plasma a una combinación de \beta-propiolactona y luz UV. Sin embargo, dicho procedimiento reduce la actividad de las proteínas lábiles. Se han propuesto diversos tratamientos químicos que incluyen la utilización de psoralenos y UVA, BPD-MA y luz, aunque éstos pueden estar limitados a la inactivación de virus con envolturas lipídicas. Se ha encontrado asimismo que el caprilato y el clorito de sodio son virucidas. Se han ensayado diversos procedimientos de separación física que incluyen cromatografía de afinidad; fraccionamiento con etanol frío, membranas de poros finos y emulsiones de perfluorocarbonos. Lawrence (1993) Virological Safety Aspects of Plasma Derivatives, Brown, ed., Dev. Biol. Stand. Basel, Karger, vol. 81, páginas 191-197; Burnouf (1993) id., páginas 199-209; Teh (1993) Vox Sang. 65: 251-257; Lebing et al. (1994) Vox Sang. 67: 117-124; DiScipio (1994) Prot. Exp. Purif. 5: 178-186; Morgenthaler y Omar (1993) Virological Safety Aspects of Plasma Derivatives, Brown, ed., volumen 81, páginas 185-190; Erickson (1992) Sci. Am. Septiembre páginas 163-164; y McCreath et al. (1993) J. Chromatog. 629: 201-213.
La determinación de una inactivación de virus satisfactoria durante la preparación de una proteína de plasma requiere que se cumplan tres requisitos previos. En primer lugar, el procedimiento de preparación se debe reducir a escala tan exactamente como sea posible. En segundo lugar, se deben seleccionar virus de ensayo relevantes para los experimentos de impurificación. En tercer lugar, las muestras resultantes deben ensayarse apropiadamente para determinar un virus infeccioso. El procedimiento de dichos ensayos se describe con detalle, por ejemplo, por Hilfenhaus et al. (1993) Brown, ed. Virological Safety Aspects of Plasma Derivatives, Dev. Biol. Stand. Basel, Karger volumen 81, páginas 117-123. Estas guías se han seguido en la presente memoria.
La trehalosa, (\alpha-D-glucopiranosil-\alpha-D-glucopiranósido), es un disacárido no reductor de origen natural que se encontró inicialmente que estaba asociado con la prevención del daño por desecación en ciertas plantas y animales que pueden secarse sin daño y pueden revivir cuando se hidratan. La trehalosa está disponible comercialmente en la forma de dihidrato. Se ha mostrado que la trehalosa es útil en la prevención de desnaturalización de proteínas, virus y sustancias alimenticias durante la desecación. Véanse las patentes U.S. nº 4.891.319; nº 5.149.653; nº 5,026,566; Blakeley et al. (1990) Lancet 336: 854-855; Roser (julio de 1995) Trends in Food Sci. and Tech. 166-169; Colaço et al. (1992) Biotechnol. Internat. 345-350; Roser (1991) BioPharm 4: 47-53; Colaço et al. (1992) Bio/Tech. 10: 1007-1011; y Roser et al. (mayo de 1993) New Scientist, páginas 25-28. El dihidrato de trehalosa está disponible en formulaciones cristalinas de calidad de buenos procedimientos de preparación (GMP). En la publicación de patente EP nº 600.730 se describe un procedimiento para la preparación de una forma anhidra, desecante, de trehalosa. Dicho procedimiento consiste en calentar un jarabe de trehalosa en presencia de semillas de cristales y recuperar la trehalosa anhidra.
La trehalosa se encuentra extensamente en diversas especies de animales y plantas tales como bacterias, levaduras, hongos, insectos e invertebrados. En muchos insectos, constituye el azúcar principal de la sangre. La única fuente principal para el hombre se encuentra en dietas de alimentos tales como setas y productos de levaduras. Madsarovova-Nohejlova (1973) Gastroenterol. 65: 130-133.
En la patente U.S. nº 4.879.280 se describe trehalosa para su utilización en un sistema de diálisis peritoneal en la que se menciona como uno de varios disacáridos como sustitución del sistema de la técnica anterior que utilizaba glucosa. Se menciona la trehalosa para su utilización en el sistema de diálisis como un disacárido que no se escindirá fácilmente para formar glucosa y por tanto se evita la elevación del nivel de glucosa en sangre. Se ha descrito asimismo la trehalosa como adecuada para su utilización en formulaciones parenterales principalmente debido a que se puede esterilizar en autoclave sin el oscurecimiento asociado con formulaciones parenterales convencionales. Patente japonesa nº 6-70718.
La trehalosa es un componente normal de la dieta humana y existe información disponible sobre su metabolismo. Después de una ingestión oral, la trehalosa no es absorbida intacta a través del tracto gastrointestinal, ya que únicamente los monosacáridos pueden pasar a través de todo el epitelio intestinal. Ravich y Bayless (1983) Clin. Gast. 12:335-356. La trehalosa es metabolizada por la enzima trehalasa para formar dos moléculas de glucosa. Sacktor (1968) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 60:1007-1014. La trehalasa es un constituyente normal de la mayoría de los cuerpos de mamíferos, incluyendo seres humanos, y ha sido identificada en suero humano, en linfocitos y en el hígado, pero está localizada principalmente en el borde en cepillo del tracto intestinal y en los túbulos proximales renales. Belfiore et al. (1973) Clin. Chem. 19: 447-452; Eze (1989) Biochem. Genet. 27: 487-495; Yoshida et al (1993) Clin. Chim. Acta 215:123-124; y Kramers y Catovsky (1978) Brit. J. Haematol. 38: 4453-461. La trehalasa es una proteína unida a membranas del tracto intestinal de seres humanos y animales. Bergoz et al. (1981) Digestion 22: 108-112; Riby y Galand (1985) Comp. Biochem. Physiol. 82B: 821-827; y Chen et al. (1987) Biochem. J. 247: 715-724.
Todas las referencias citadas en la presente memoria se incorporan a la misma como referencia.
Exposición de la invención
La invención se refiere a un procedimiento para la esterilización de productos, particularmente productos terapéuticos, derivados de fuentes biológicas. El procedimiento incluye secar el producto en presencia de una cantidad de trehalosa suficiente para conferir una estabilidad térmica al producto y exponer la muestra seca a condiciones de calentamiento a una temperatura y disolvente un periodo de tiempo suficientes para inactivar sustancialmente el parvovirus. Los procedimientos de secado son cualesquiera de los conocidos en la técnica e incluyen tanto condiciones de secado ambientales, incluyendo secado por aspersión y a vacío, y liofilización. Las condiciones de calentamiento cubren una amplia gama de combinaciones de temperaturas y tiempos de calentamiento.
Mejor modo de llevar a cabo la invención
Tal como se describe con detalle en la presente memoria, existen numerosos procedimientos para una esterilización final de productos biológicos derivados de la sangre. Dichos procedimientos son bien conocidos en la técnica, tal como se ejemplifica mediante las referencias citadas en la presente memoria, y no necesitan ser descritos con detalle. Aunque procedimientos de purificación rigurosos, tales como cromatografía de afinidad de anticuerpos, pueden dar como resultado productos biológicos exentos de virus, se ha encontrado que ninguno de los procedimientos comercialmente factibles hacen, de una manera regular, que los productos queden exentos de virus infecciosos, particularmente los virus no encapsulados con lípidos. Además, un aumento de la severidad de las condiciones de esterilización con el fin de hacer que un producto queden exento de virus infecciosos, presenta el inconveniente de disminuir la actividad y/o de aumentar la inmunogenicidad del producto.
Además de productos derivados de la sangre, existen numerosos productos biológicamente activos que se pueden beneficiar de los procedimientos de esterilización que se proporcionan en la presente invención. Entre éstos se incluyen, pero sin limitarse a ellos, proteínas producidas de modo recombinante, proteínas aisladas nativas, anticuerpos, enzimas, citoquinas y factores de crecimiento, así como moléculas farmacéuticamente activas tales como analgésicos, anestésicos, anti-eméticos, antibióticos, agentes quimioterapéuticos, hormonas, vitaminas y esteroides.
Es asimismo adecuada para su utilización en los procedimientos reivindicados, cualquier sustancia que ha de ser introducida asépticamente en un individuo. Entre éstas se incluyen, pero sin limitarse a ellas, fármacos, antibióticos, agentes de formación de imágenes médicas y reactivos para diagnósticos. De manera importante, en el caso en el que el producto que se ha de administrar es lábil, tal como cefalosporinas, anticuerpos terapéuticos y eritropoyetina, la invención proporciona composiciones estériles secas estables que se pueden rehidratar inmediatamente antes de su utilización. La trehalosa es bien adecuada para agentes inyectables, infusibles, etc. en el sentido de que se desintegra para formar dos moléculas de glucosa al quedar expuesta la trehalosa en la corriente sanguínea. La glucosa puede causar un pequeño aumento transitorio de los niveles de azúcar en sangre, pero esto supone poca preocupación clínica.
\newpage
La presente invención comprende procedimientos de esterilización final de productos que necesitan ser administrados asépticamente a un individuo. Las etapas del procedimiento incluyen obtener una muestra seca que contiene el producto y una cantidad de \alpha-D-glucopiranosil-\alpha-D-glucopiranósido (trehalosa) suficiente para conferir una sustancial estabilidad térmica al producto; y calentar la muestra seca a una temperatura y durante un periodo de tiempo suficientes para inactivar sustancialmente el parvovirus. La muestra seca puede contener además adecuados agentes reguladores del pH, adyuvantes, etc. preferentemente, en una cantidad que proporcione una concentración adecuada al efectuar la rehidratación.
El producto puede derivarse de una variedad de fuentes. Preferentemente, los productos se derivan de cualquier fuente biológica conocida, que incluye, pero sin limitarse a ellas, sangre, plasma, suero, placenta, leche, orina, cultivos de células y material sobrenadante de cultivos de células. Adicionalmente, el producto puede derivarse sintéticamente, ya sea mediante síntesis química o enzimática, o mediante la utilización de técnicas de ADN recombinante. Los procedimientos de preparación de dichas fuentes y los procedimientos de aislamiento de los productos son bien conocidos en la técnica.
Típicamente, los productos aislados o derivados de sangre, plasma y suero incluyen, pero sin limitarse a ellos, productos de albúmina, inmunoglobulinas, productos de coagulación e inhibidores de proteinasa. Los productos de albúmina incluyen, pero sin limitarse a ellos, HSA, globulinas insolubles en frío y fibrinógeno. Las inmunoglobulinas incluyen pero sin limitarse a ellos, anticuerpos contra el tétanos, tosferina, hepatitis B, Rho (D), varicela zóster y rabia. Los productos de coagulación incluyen, pero sin limitarse a ellos, factor VIII antihemofílico, complejo de factor IX y complejo de factor IX activado. Los inhibidores de proteinasa incluyen, pero sin limitarse a ellos, inhibidor de proteinasa \alpha-1, antitripsina \alpha-1 y antitrombina III. Hay disponibles otras fuentes de estos productos, por ejemplo, se puede obtener albúmina a partir de fuentes placentarias.
Cuando la fuente biológica es un cultivo de células o material sobrenadante de cultivo de células, los productos incluyen, pero sin limitarse a ellos, factores estimuladores de colonias, anticuerpos monoclonales y derivados de los mismos, y factores de crecimiento. Los factores de crecimiento típicos incluyen, pero sin limitarse a ellos, eritropoyetina, citoquinas e interleuquinas tanto derivados de origen natural como recombinantes.
Cuando el producto es un agente que necesita ser administrado asépticamente, los productos incluyen, pero sin limitarse a ellos, analgésicos, anestésicos, agentes quimioterapéuticos, hormona y vacunas. Los analgésicos incluyen, pero sin limitarse a ellos, morfina, benzocaína, petidina y demerol, los anestésicos incluyen, pero sin limitarse a ellos, bupivicaína, atracurio y vecuronio.
Los agentes quimioterapéuticos incluyen, pero sin limitarse a ellos, radioisótopos, alcaloides vinca tales como los sulfatos de vinblastina, vincristina y vindesina, adriamicina, sulfato de bleomicina, carboplatina, cisplatina, ciclofosfamida, citarabina, dacarbazina, dactinomicina, hidrocloruro de duanorrubicina, hidrocloruro de doxorrubicina, etópsido, fluorouracilo, hidrocloruro de meclororetamina, melfalán, mercaptopurina, metotrexato, mitomicina, mitotano, pentostatina, pibropomano, hidrocloruro de procarbazo, estreptozotocina, taxol, tioguanina y mostaza de uracilo.
Las hormonas adecuadas incluyen, pero sin limitarse a ellas, estrógeno, testosterona, progesterona y análogos sintéticos de los mismos. Las vacunas típicas incluyen, vacunas subunitarias antigénicas tanto simples como múltiples, así como preparaciones bacterianas y víricas inactivadas y antígenos de cánceres. Los antibióticos típicos incluyen, pero sin limitarse a ellos, cefalosporinas y aminoglicósidos.
Los procedimientos incluyen una primera etapa de obtención de una muestra seca. Se puede utilizar una diversidad de procedimientos para secar la muestra. Entre estos se incluyen, pero sin limitarse a ellos, secado con aire, secado a vacío, secado por aspersión y liofilización. Dichos procedimientos se ilustran con detalle en los ejemplos presentados en la presente memoria y son bien conocidos en la técnica. Véanse, p.ej., las patentes U.S. nº 4.891.319; nº 5.026.566; y nº 5.149.653.
Las muestras se preparan típicamente en solución o suspensión e incluyen el producto, una cantidad suficiente de trehalosa para conferir estabilidad térmica al producto, y cualquier otro aditivo típico tal como adecuados agentes reguladores del pH, adyuvantes, etc. Típicamente, la trehalosa está presente en una cantidad del 1 al 50% en peso de la solución. Si la solución está más diluida, los tiempos de secado pueden ser prohibitivos y, si está más concentrada, la solución puede llegar a ser viscosa. Las concentraciones iniciales exactas de producto, trehalosa y cualquier aditivo necesitarán ser determinadas empíricamente, pero esto se encuentra bien entre los conocimientos de un experto en la materia, dados los ejemplos que se proporcionan en la presente memoria. Preferentemente, la concentración de producto y de trehalosa es tal, que después del secado tiene lugar una pérdida de actividad del producto inferior a aproximadamente el 30%. Más preferentemente, se produce una pérdida de actividad inferior al 15% y muy preferentemente, se produce una pérdida inferior al 10%.
Una vez que se ha obtenido la muestra seca, se somete la misma a condiciones de calentamiento a una temperatura y una duración suficientes para inactivar los virus. Típicamente, la muestra seca se somete a un calentamiento a 80ºC durante 72 horas para inactivar los virus encapsulados con lípidos y a 90ºC durante 72 horas para inactivar además los virus no encapsulados con lípidos. La combinación óptima de calor y duración del calentamiento se determinará empíricamente. Dicha determinación se encuentra dentro de los conocimientos de un experto en la materia, dados los ejemplos proporcionados en la presente memoria. Típicamente, las condiciones óptimas se determinan impurificando una muestra de ensayo, ya sea con el virus que se ha de inactivar o con un virus que presente características físicas similares. Típicamente, una pérdida de cuatro log_{10} del título del virus añadido se considera que es una "inactivación", ya que una caída de 4 log_{10} del título de pérdida es el requisito de la autoridad reguladora para un procedimiento de inactivación/eliminación vírica.
El procedimiento da como resultado una sustancial estabilidad térmica del producto. Preferentemente, el procedimiento da como resultado una pérdida de actividad del producto inferior a aproximadamente el 30%. Más preferentemente, el procedimiento da como resultado una pérdida de actividad del producto inferior a aproximadamente el 15%. Muy preferentemente, el procedimiento da como resultado una pérdida de actividad del producto inferior a aproximadamente el 10%.
El procedimiento proporciona muestras secas de alta estabilidad y susceptibles de ser almacenadas durante periodos de tiempo prolongados. Dicha estabilidad en almacenamiento está relacionada con la humedad residual del producto esterilizado. Preferentemente, el procedimiento produce una muestra seca que presenta un contenido de humedad residual inferior a aproximadamente el 4%. Más preferentemente, el contenido de humedad residual es inferior a aproximadamente el 2%. Muy preferentemente, el contenido de humedad residual es aproximadamente del 0,8 al 1,0%. La humedad residual se puede medir mediante una diversidad de procedimientos, que incluyen, pero sin limitarse a ellos, análisis térmico diferencial, procedimientos termogravimétricos o valoración culombimétrica de Karl Fisher.
El intervalo de temperaturas y tiempos de calentamiento varía ampliamente, y el tiempo óptimo para una muestra particular se puede determinar empíricamente dados los conocimientos en este campo y los ejemplos proporcionados en la presente memoria. Los resultados presentados en la presente memoria indican que un calentamiento a aproximadamente 80ºC durante aproximadamente 72 horas resulta eficaz, así como un calentamiento a 90ºC durante aproximadamente 20 horas. Se pueden utilizar periodos de tiempo más prolongados y/o temperaturas superiores con una pérdida potencial simultánea de actividad del producto.
Preferentemente, el procedimiento da como resultado una reducción de 4 veces el log_{10} de la infectividad de los virus contaminantes. Se conocen varios procedimientos para llevar a cabo dicha determinación. Muchos de éstos se han citado anteriormente y varios otros son conocidos en la técnica. Como los virus encapsulados con lípidos son menos resistentes a un tratamiento térmico que los virus no encapsulados con lípidos, una determinación de la pérdida de infectividad de un virus no encapsulado con lípidos indica que todos los virus encapsulados con lípidos también han sido inactivados. Los virus no encapsulados con lípidos incluyen, pero sin limitarse a ellos, el virus de la hepatitis A y los parvovirus. El virus no encapsulado con lípidos al que se hace referencia en la presente invención es el parvovirus.
Los siguientes ejemplos se proporcionan para ilustrar, pero no para limitar la invención reivindicada.
Ejemplo 1 Comparación del efecto de diferentes azúcares sobre la infectividad de parvovirus y sobre la actividad de fosfatasa alcalina
Una solución madre de 1 mg/ml de fosfatasa alcalina en una solución de trehalosa al 50% preparada en una solución tampón de HEPES 25 mM que contenía bicarbonato de amonio 50 mM y HSA al 2% se impurificó con 10^{6,5} TCID 50/ml de parvovirus canino. Partes alícuotas de 250 \mul de la formulación impurificada se secaron a vacío o se liofilizaron en viales farmacéuticos de vidrio Wheaton con una capacidad de 3 ml utilizando un secador FTS o un lioflilizador Labconco.
Para el secado a vacío, la temperatura de la estantería se ajustó inicialmente a 30ºC mientras que el vacío se reducía de un modo escalonado a 30 mTorr, momento en el que la temperatura de la estantería se aumentó a 60ºC y el secado se llevó a cabo durante 12 a 16 horas adicionales. Para la liofilización, las muestras se congelaron reduciendo la temperatura de la estantería a -40ºC a un régimen de 5ºC por minuto y se dejó que los viales se congelaran completamente durante 1 hora antes de que el vacío se redujera a 10 mTorr y las muestras se secaron a una temperatura de -40ºC durante 40 horas. A continuación, la temperatura de la estantería se elevó a +20ºC a un régimen de 0,05ºC por minuto y las muestras se secaron a +20ºC durante 3 horas y finalmente la temperatura de la estantería se elevó a +40ºC a un régimen de 0,05ºC por minuto y las muestras se secaron a +40ºC durante 2 horas adicionales. Los viales se taparon a vacío y las muestras se mantuvieron a una temperatura de 4ºC como testigos secos. Para la esterilización final, los viales se trataron a una temperatura de 80ºC durante 72 horas o a 90ºC durante 20 horas en una estufa de secado Heraeus. Se evaluaron la reducción del log_{10} de la actividad del parvovirus y el % de reducción de la actividad de fosfatasa alcalina.
El parvovirus se ensayó por titulación en un cultivo de células y el punto final se determinó por aglutinación de células sanguíneas rojas porcinas. Dicho en pocas palabras, las muestras secas se reconstituyeron a su volumen original utilizando agua destilada estéril y se preparó una serie de diluciones de diez veces en medio de cultivo Eagles Minimum Essential Maintenance (EMEM). Se preparó una suspensión de células A72 en EMEM que contenía suero bovino fetal al 5%, mediante tripsinación de un matraz confluente de células, y 1 ml de la suspensión de células que contenía de 2 a 5 x 10^{3} células/ml se añadió en partes alícuotas a los pocillos de una placa de cultivo de 24 pocillos. Se inocularon 100 \mul de cada dilución de muestra vírica en cuatro pocillos replicados de la placa de cultivo de células y las placas se incubaron durante 14 días a una temperatura de 37ºC en una atmósfera con el 5% de CO_{2}.
Después de 14 días, el medio de cultivo de células de cada pocillo se ensayó para determinar la actividad de hemaglutinina utilizando células sanguíneas rojas porcinas al 1%. Se calculó el título vírico expresado como log_{10} TCID 50/ml utilizando la fórmula de Karber para la cuantificación del punto final en los ensayos de infectividad del virus, a saber la fórmula Karber = -log de intervalo de dilución - (suma de ensayos positivos) - 0,5.
La fosfatasa alcalina se ensayó por colorimetría, utilizando el reactivo comercial, Sigma fast^{TM} para ensayo de sustratos de fosfatasa alcalina. Dicho en pocas palabras, se preparó una serie de doble dilución para las muestras y se añadieron una preparación de fosfatasa alcalina estándar (1 mg/ml) y 100 Tl de sustrato a 100 Tl de muestra en una placa EIA y se incubaron en la oscuridad durante 30 minutos. El desarrollo de color se leyó a 405 nm utilizando un Titertek Multiscan conectado por medio de una interfase a un conjunto de lector de placas blandas delta y se calculó la actividad de las muestras a partir de los valores de absorbancia correspondientes a la sección lineal de la curva patrón. A los testigos secos se les asignó una actividad del 100% y se calculó el % de reducción de actividad de las muestras tratadas a partir de estos valores.
Para todos los ensayos de virus, la reducción del log_{10} del título de las muestras tratadas se calculó restando el log_{10} TCID 50/ml de virus recuperado de los valores de log_{10} TCID 50/ml de los testigos secos. Los resultados se indican en la Tabla 1. En la Tabla 1, \geq significa que el virus se encontraba por debajo del nivel de detección del ensayo, RIT significa "reducción del título", HSA representa albúmina de suero humano, * significa log_{10} TCID 50/ml de parvovirus en el testigo seco = 6,5, ** significa actividad de fosfatasa alcalina en el testigo seco = 100%, GPS representa glucopiranosil-sorbitol, y n.d. representa no determinado. Las abreviaturas son las mismas a lo largo de toda la sección de ejemplos y en las tablas.
TABLA 1
Muestra Reducción del log_{10} del título de parvovirus/% de reducción de la actividad de fosfatasa
alcalina después de la esterilización final a una temperatura de 90ºC durante 20 horas
liofilizado secado a vacío
Log_{10} RIT de % de reducción de Log_{10} RIT de % de reducción de
parvovirus * 'fos' alc.** parvovirus * 'fos' alc.**
trehalosa% \geq 4,4 7,0 \geq 4,0 0
trehalosa + HSA \geq 4,4 9,5 \geq 4,0 0
sacarosa \geq 4,4 65 \geq 4,0 48
sacarosa + HSA \geq 4,4 68 \geq 4,0 56
lactitol + HSA \geq 5,6 \geq 99 n.d. n.d.
lactosa + HSA \geq 5,0 44 n.d. n.d.
sorbitol \geq 4,0 \geq 99 n.d. n.d.
sorbitol + HSA \geq 4,0 \geq 99 n.d. n.d.
GPS \geq 4,0 \geq 99 n.d. n.d.
GPS + HSA \geq 4,0 \geq 99 n.d. n.d.
Ejemplo 2 Esterilización final para eliminar la infectividad del parvovirus sin pérdida de actividad biológica mediante secado a vacío en trehalosa: efecto de la temperatura y el tiempo
Una solución madre de 1 mg/ml de fosfatasa alcalina en una solución de trehalosa al 50% preparada en una solución tampón de HEPES 25 mM que contenía bicarbonato de amonio 50 mM y HSA al 2% se impurificó con 10^{6,5} TCID 50/ml de parvovirus canino y se secó a vacío en un secador FTS. Se secaron 250 \mul de formulación en viales con una capacidad de 3 ml en el secador FTS utilizando un programa manual que alcanzó unos parámetros de operación finales de un vacío de 30 mTorr y una temperatura de estantería de 60ºC. Los viales se taparon a vacío y las muestras se mantuvieron a una temperatura de 4ºC como testigos secos.
Para la esterilización final, los viales se trataron a una temperatura de 80ºC durante 72 horas o a 90ºC durante hasta 144 horas en una estufa de secado Heraeus. Se evaluaron la reducción del log_{10} de la actividad del parvovirus y el % de reducción de la actividad de fosfatasa alcalina. El parvovirus se ensayó mediante titulación en un cultivo de células seguido de la aglutinación de células sanguíneas rojas porcinas, tal como se describe en el Ejemplo 1. Se calculó el título vírico expresado como log_{10} TCID 50/ml utilizando la fórmula de Karber tal como se describe en el Ejemplo 1. La fosfatasa alcalina se ensayó por colorimetría, utilizando el reactivo comercial, Sigma fast^{TM} para ensayo de sustratos de fosfatasa alcalina como en el Ejemplo 1.
En la Tabla 2 se muestra un resumen de los resultados obtenidos que representa la reducción del log_{10} del título de parvovirus y el % de reducción de la actividad de fosfatasa alcalina después de la esterilización final a una temperatura de 80ºC durante 72 horas o a 90ºC durante 144 horas. En la Tabla 2, * representa el log_{10} TCID 50/ml de parvovirus en el testigo seco = 6,5, ** representa la actividad de la fosfatasa alcalina en el testigo seco = 100%, y \geq representa por debajo del límite de detección del ensayo.
TABLA 2
Tratamiento Reducción del log_{10} del % de reducción de la
título de parvovirus * actividad de fosfatasa alcalina **
80ºC/72 horas 3,0 0
90ºC/20 horas 3,0 0
90ºC/24 horas 4,4 0
90ºC/48 horas \geq 5,0 0,8
90ºC/72 horas \geq 5,0 0
90ºC/96 horas \geq 5,0 3,3
90ºC/120 horas \geq 5,0 0
90ºC/144 horas \geq 5,0 3,4
Ejemplo 3 Esterilización final para eliminar la infectividad de virus recubiertos y no recubiertos sin pérdida de la actividad biológica, mediante secado a vacío en trehalosa
En este experimento, las mismas formulaciones que en el Ejemplo 1 se impurificaron con tres preparaciones de virus diferentes: poliovirus; parvovirus (virus que contenían ARN y ADN no recubiertos, respectivamente); y virus del sarampión (virus ARN recubiertos). Se evaluaron la reducción del log_{10} del título del virus y el % de reducción de la actividad de fosfatasa alcalina, tal como se ha descrito anteriormente o como se describe a continuación. El poliovirus se ensayó utilizando un ensayo citopático de células. Dicho en pocas palabras, se reconstituyeron muestra secas a su volumen original utilizando agua esterilizada y se preparó una serie de diluciones de diez veces en EMEM, y 100 \mul de las diluciones se inocularon en cinco pozos replicados de una placa de cultivo de células de 96 pocillos que contenía una monocapa confluente de células Vero. Las placas se incubaron durante 7 días y se evaluó el efecto citopático inducido por virus mediante la inspección de los pocillos utilizando un microscopio óptico. Se calculó de nuevo el título vírico, expresado como log_{10} TCID 50/ml de virus, utilizando la fórmula de Karber para la cuantificación del punto final en los ensayos de infectividad de los virus. Para todos los ensayos de virus, se calculó la reducción del log_{10} del título de las muestras tratadas restando el log_{10} TCID 50/ml de virus recuperado de los valores de log_{10} TCID 50/ml de los testigos secos.
La infectividad del virus del sarampión se determinó utilizando un ensayo de placas. Dicho en pocas palabras, se reconstituyeron muestras secas a su volumen original utilizando agua destilada estéril y se preparó una serie de diluciones de diez veces en EMEM. Se inocularon 200 \mul de cada dilución en pocillos duplicados de una placa de 6 pocillos que contenía una monocapa confluente de células Vero. Después de la adsorción de virus por las células durante 1 hora a una temperatura de 37ºC, se añadieron a cada pocillo 2 ml de medio de superposición (EMEM que contenía carboximetilcelulosa al 1% y suero bovino fetal al 5%). Las placas se incubaron a continuación durante 7 días a una temperatura de 37ºC en una atmósfera con el 5% de CO_{2}. Se visualizó la formación de placas inducida por virus en monocapas celulares mediante tinción violeta Crystal.
Se contaron las placas y el virus recuperado se cuantificó mediante calculo de unidades formadoras de placa por ml, a saber PFU/ml = número de placas x factor de dilución x 5. Para todos los ensayos de virus, la reducción del log_{10} del título de las muestras tratadas se calculó restando el log_{10} PFU/ml de virus recuperado de los valores de log_{10} PFU/ml de los testigos secos. Los resultados obtenidos se presentan en la Tabla 3 que muestra la reducción del log_{10} del título de poliovirus, virus del sarampión y parvovirus y el % de reducción de la actividad de fosfatasa alcalina después de la esterilización final a una temperatura de 80ºC durante 72 horas o a 90ºC durante 20 horas. En la Tabla 3, * representa el log_{10} TCID 50/ml de poliovirus en el testigo seco = 4,5; ** representa el log_{10} PFU/ml de virus del sarampión en el testigo seco = 5,10; *** representa el log_{10} TCID/ml de parvovirus en el testigo seco = 6,5; **** representa la actividad de fosfatasa alcalina en el testigo seco = 100%; y \geq representa por debajo del límite de detección del ensayo.
TABLA 3
Tratamiento Reducción del log_{10} del título del virus Reducción
de la actividad de
fos. alc. (%) ****
Poliovirus * Virus del sarampión ** Parvovirus ***
80ºC/72 horas \geq 3,0 \geq 4,1 \geq 4,0 0 - 3
90ºC/20 horas \geq 3,0 \geq 4,1 \geq 4,0 0 - 5
Ejemplo 4 Esterilización final para eliminar parvovirus de un producto derivado de sangre sin pérdida de actividad biológica, mediante secado con trehalosa
Se disolvió fibrinógeno (Fracción 1, Tipo 1-S, compañía Sigma Chemical) en soluciones al 10% y al 25% de trehalosa o de sacarosa que contenían citrato de sodio al 10% y cloruro de sodio al 15% y las soluciones se centrifugaron para eliminar cualquier material insoluble y las concentraciones de proteína se ajustaron a una concentración de fibrinógeno final de 5 mg/ml. Las soluciones madre de fibrinógeno se impurificaron con 10^{6,5} TCID 50/ml de parvovirus canino, y partes alícuotas de 12 ml de la solución de fibrinógeno se distribuyeron en viales de vidrio farmacéuticos Wheaton y las muestras se secaron a vacío en un secador FTS o se liofilizaron en un liofilizador Labconco. Para el secado a vacío, las estanterías se enfriaron previamente a una temperatura de 10ºC y el vacío se redujo a 30.000 mTorr. La temperatura de las estanterías se elevó a continuación a 40ºC y el vacío se redujo a 30.000 mTorr durante 2 minutos, a 20.000 mTorr durante 2 minutos y a 10.000 mTorr durante 20 minutos. El vacío se elevó a continuación a 30.000 mTorr durante 5 minutos y a continuación se redujo a 30 mTorr y las muestras se secaron durante una noche a una temperatura de las estanterías de 60ºC. Para la liofilización, las muestras se congelaron a un régimen de 5ºC/min a una temperatura de -40ºC, se mantuvieron a -40ºC durante 16 horas y a continuación la temperatura de las estanterías se elevó a -35ºC y las muestras se secaron a un vacío de 10 mTorr durante 80 horas. La temperatura de las estanterías se elevó a 25ºC y las muestras se secaron a un vacío de 10 mTorr durante 5 horas adicionales. Todos los viales se sellaron a vacío y las muestras que se habían de esterilizar finalmente se esterilizaron por calor calentándolas en una estufa Heraeus a una temperatura de 90ºC durante 20 a 48 horas.
Los viales se reconstituyeron y se determinaron la proteína soluble y la proteína coagulable. El ensayo de coagulación para fibrinógeno consistió en una modificación del ensayo de coagulación por trombina del National Institute of Biological Standards. Dicho en pocas palabras, muestras de fibrinógeno y patrones se coagularon mediante la adición de trombina a la solución de fibrinógeno y se midieron la concentración de proteína y el coágulo mediante solubilización del coágulo en urea 7 M y cuantificando la absorbancia a 280 nm.
Al efectuar la adición de 3 ml de agua, todas las preparaciones se reconstituyeron fácilmente excepto las preparaciones de fibrinógeno/sacarosa que se habían expuesto a una temperatura de 90ºC/20 horas. Las preparaciones de fibrinógeno/sacarosa liofilizadas que se habían expuesto a una temperatura de 90ºC/20 horas mostraron una coloración marrón diferenciada. Los ensayos de proteína mostraron que la mayor parte de la proteína se había disuelto al efectuar la reconstitución (\sim 90%), excepto en el caso de los viales de fibrinógeno/sacarosa a 90ºC/20 horas que mostraron una proteína muy poco soluble. Los ensayos de coagulación mostraron que de la proteína soluble, \sim 95% se coagulaba al efectuar la adición de trombina. Un resumen de los resultados obtenidos se muestra en la Tabla 4, que presenta el fibrinógeno coagulable y la reducción del log_{10} del título de parvovirus.
TABLA 4
80ºC/72 horas 90ºC/20 horas
% coagulable pérdida log. % coagulable pérdida log.
Trehalosa
Liofilizada 87 \geq 4 83 4,0
Secada a vacío 94 \geq 3,75 89 3,75
Sacarosa
Liofilizada 0 5 44 \geq 5,0
Secada a vacío 68 \geq 4,75 43 \geq 4,75
Aunque la invención anteriormente expuesta se ha descrito con algún detalle a modo de ilustración y ejemplo para propósitos de claridad y comprensión, resultará evidente para los expertos en la materia que se pueden practicar ciertos cambios y modificaciones. Por tanto, la descripción y los ejemplos no deberán considerarse como limitativos del alcance de la invención, tal como se define mediante las reivindicaciones adjuntas.

Claims (16)

1. Procedimiento para la esterilización final de un producto biológicamente activo adecuado para una administración estéril a un individuo, que comprende, calentar una muestra seca que comprende el producto y una cantidad de \alpha-D- glucopiranosil-\alpha-D-glucopiranósido (trehalosa) suficiente para conferir una sustancial estabilidad térmica al producto, a una temperatura y durante un periodo de tiempo suficientes para inactivar sustancialmente el parvovirus.
2. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el producto biológicamente activo se obtiene a partir de una fuente biológica seleccionada de entre el grupo que consiste en sangre, plasma, suero, placenta, leche, orina, cultivos de células y material sobrenadante de cultivos de células.
3. Procedimiento según la reivindicación 1 ó 2, en el que el producto se selecciona de entre el grupo que consiste en productos de albúmina, inmunoglobulinas, productos de coagulación, fibrinógeno e inhibidores de proteinasa.
4. Procedimiento según la reivindicación 2 ó 3, en el que los productos de albúmina se seleccionan de entre el grupo que consiste en HSA y globulina soluble en frío.
5. Procedimiento según la reivindicación 2, en el que las inmunoglobulinas se seleccionan de entre el grupo que consiste en anticuerpos contra el tétanos, tosferina, hepatitis, herpes, varicela zóster, lentivirus y rabia.
6. Procedimiento según la reivindicación 2 ó 3, en el que los productos de coagulación se seleccionan de entre el grupo que consiste en factor VIII antihemofílico y complejo de factor IX.
7. Procedimiento según la reivindicación 2 ó 3, en el que los inhibidores de proteinasa se seleccionan de entre el grupo que consiste en inhibidor de proteinasa \alpha-1 y antitrombina III.
8. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el producto biológicamente activo es un analgésico.
9. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el producto biológicamente activo es un anestésico.
10. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el producto biológicamente activo es un agente quimioterapéutico.
11. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el producto biológicamente activo es una hormona.
12. Procedimiento según la reivindicación 1, en el que el producto biológicamente activo es una vacuna.
13. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la sustancial estabilidad térmica da como resultado una pérdida de actividad del producto inferior al 30%.
14. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la muestra seca presenta un contenido de humedad residual inferior al 4%.
15. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la temperatura de calentamiento es por lo menos de 80ºC y la duración del calentamiento es por lo menos de 72 horas.
16. Procedimiento según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en el que la temperatura y la duración del calentamiento son suficientes para dar como resultado una reducción de la infectividad del parvovirus de por lo menos 10^{4} veces.
ES97921969T 1996-05-14 1997-05-14 Procedimiento de esterilizacion final de productos biologicos. Expired - Lifetime ES2202613T3 (es)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US647515 1996-05-14
US08/647,515 US6632648B1 (en) 1996-05-14 1996-05-14 Methods of terminal sterilization of fibrinogen

Publications (1)

Publication Number Publication Date
ES2202613T3 true ES2202613T3 (es) 2004-04-01

Family

ID=24597275

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
ES97921969T Expired - Lifetime ES2202613T3 (es) 1996-05-14 1997-05-14 Procedimiento de esterilizacion final de productos biologicos.

Country Status (14)

Country Link
US (3) US6632648B1 (es)
EP (1) EP0914166B1 (es)
JP (1) JP4841018B2 (es)
AT (1) ATE245455T1 (es)
AU (1) AU730931B2 (es)
BR (1) BR9709082A (es)
CA (1) CA2254914C (es)
DE (1) DE69723703T2 (es)
DK (1) DK0914166T3 (es)
ES (1) ES2202613T3 (es)
NZ (1) NZ333212A (es)
PT (1) PT914166E (es)
WO (1) WO1997042980A1 (es)
ZA (1) ZA974179B (es)

Families Citing this family (37)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6632648B1 (en) * 1996-05-14 2003-10-14 Elan Drug Delivery Limited Methods of terminal sterilization of fibrinogen
US6383810B2 (en) 1997-02-14 2002-05-07 Invitrogen Corporation Dry powder cells and cell culture reagents and methods of production thereof
US6627426B2 (en) 1997-02-14 2003-09-30 Invitrogen Corporation Methods for reducing adventitious agents and toxins and cell culture reagents produced thereby
WO2000000225A1 (en) * 1998-06-30 2000-01-06 Invitrogen Corporation Methods for reducing adventitious agents and toxins and cell culture reagents produced thereby
BR9905867A (pt) * 1998-11-06 2001-01-23 Bio Sidus S A Linhagem celular produtora de eritropoietina humana recombinante e a eritropoietina humana recombinante produzida por esta célula
CN101810854A (zh) 1999-02-22 2010-08-25 巴克斯特国际公司 新的无白蛋白的因子viii制剂
JP4493769B2 (ja) * 1999-12-21 2010-06-30 旭化成ケミカルズ株式会社 球形顆粒
AU2002229823B2 (en) * 2001-04-04 2007-02-15 Delsitech Oy Biodegradable carrier and method for preparation thereof
ES2404682T3 (es) 2003-12-11 2013-05-28 Isto Technologies Inc. Sistema de cartílago particulado
JP5502276B2 (ja) 2004-05-27 2014-05-28 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド ホルマリンおよびｕｖ光での処理によるサンプル中の病原体の不活化
CA2584698C (en) * 2004-10-20 2014-02-25 Ethicon, Inc. A reinforced absorbable multilayered hemostatic wound dressing and method of making
BRPI0614914A2 (pt) * 2005-07-29 2011-04-19 Solvay Pharm Gmbh processos para a fabricação de pó de pancreatina esterilizada
US9198871B2 (en) 2005-08-15 2015-12-01 Abbott Products Gmbh Delayed release pancreatin compositions
US11266607B2 (en) 2005-08-15 2022-03-08 AbbVie Pharmaceuticals GmbH Process for the manufacture and use of pancreatin micropellet cores
EP1916964A4 (en) 2005-08-26 2015-11-04 Zimmer Inc IMPLANTS AND METHODS FOR THE REPAIR, REPLACEMENT AND TREATMENT OF JOINT DISEASES
CA2623940C (en) 2005-09-27 2017-01-10 Tissuetech, Inc. Amniotic membrane preparations and purified compositions and methods of use
US8187639B2 (en) 2005-09-27 2012-05-29 Tissue Tech, Inc. Amniotic membrane preparations and purified compositions and anti-angiogenesis treatment
US10072256B2 (en) 2006-05-22 2018-09-11 Abbott Products Gmbh Process for separating and determining the viral load in a pancreatin sample
JP5101604B2 (ja) * 2006-05-22 2012-12-19 アボット プロダクツ ゲゼルシャフト ミット ベシュレンクテル ハフツング パンクレアチン試料中のウィルス負荷の分離及び決定するための方法
US8163549B2 (en) 2006-12-20 2012-04-24 Zimmer Orthobiologics, Inc. Method of obtaining viable small tissue particles and use for tissue repair
US20090012629A1 (en) 2007-04-12 2009-01-08 Isto Technologies, Inc. Compositions and methods for tissue repair
US20120177610A1 (en) * 2007-09-19 2012-07-12 Kieu Hoang Manufacturing and Purification Processes of Complex Protein found in Fraction IV to make a separated Apo, Transferrin , and Alpha 1 Anti strepsin (A1AT) or A combined Transferrin / Apo/Human Albumin/A1AT and all new found proteins
JP5779780B2 (ja) 2008-11-07 2015-09-16 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ 第ｖｉｉｉ因子製剤
US9827205B2 (en) * 2008-12-12 2017-11-28 Mallinckrodt Pharma Ip Trading D.A.C. Dry powder fibrin sealant
EP2236617A1 (en) 2009-03-31 2010-10-06 Leukocare Ag Methods of terminal sterilization of biofunctional compositions
CA2804865A1 (en) * 2010-07-13 2012-01-19 Cephalon, Inc. Improved methods for the sterilization of bendamustine
CA2837878A1 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Tissuetech, Inc. Methods of processing fetal support tissues, fetal support tissue powder products, and uses thereof
CA3133869A1 (en) 2011-08-26 2013-03-07 Tissuetech, Inc. Methods of sterilizing fetal support tissues
WO2013063284A1 (en) 2011-10-25 2013-05-02 Onclave Therapeutics Antibody formulations and methods
AU2013240916B2 (en) * 2012-03-31 2016-10-27 Waseda University Method for treating biological tissue and biological tissue
CN114652816A (zh) 2012-07-11 2022-06-24 组织技术公司 含有hc-ha/ptx3复合物的组合物及其使用方法
US20140178343A1 (en) 2012-12-21 2014-06-26 Jian Q. Yao Supports and methods for promoting integration of cartilage tissue explants
TW201603818A (zh) 2014-06-03 2016-02-01 組織科技股份有限公司 組成物及方法
US20160243288A1 (en) 2015-02-23 2016-08-25 Tissuetech, Inc. Apparatuses and methods for treating ophthalmic diseases and disorders
US10342831B2 (en) 2015-05-20 2019-07-09 Tissuetech, Inc. Composition and methods for preventing the proliferation and epithelial-mesenchymal transition of epithelial cells
TW201733600A (zh) 2016-01-29 2017-10-01 帝聖工業公司 胎兒扶持組織物及使用方法
EP4384143A1 (en) 2021-08-13 2024-06-19 Biotest AG Fibrinogen compositions and methods of preparation

Family Cites Families (76)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3557717A (en) 1968-05-17 1971-01-26 Gen Mills Inc Process for making candy floss
US3619294A (en) 1968-07-15 1971-11-09 Penick & Ford Ltd Method of combining crystalline sugar with impregnating agents and products produced thereby
US3632357A (en) 1969-07-29 1972-01-04 Standard Brands Inc Method of producing hard candy
US3655442A (en) 1969-08-27 1972-04-11 California & Hawaiian Sugar Method of making sugar and sugar products
DE2246013A1 (de) 1972-09-20 1974-03-28 Boehringer Mannheim Gmbh Verfahren zur herstellung von poroesen tabletten
US4127502A (en) 1977-06-10 1978-11-28 Eastman Kodak Company Stabilizers for reconstituted, lyophilized samples
LU78955A1 (de) 1978-01-27 1979-09-06 Chimicasa Gmbh Verfahren zur inaktivierung von viren
US4158544A (en) 1978-07-17 1979-06-19 Beckman Instruments, Inc. Process for preparing a biological composition for use as a reference control in diagnostic analysis
US4588744A (en) 1978-09-19 1986-05-13 Mchugh John E Method of forming an aqueous solution of 3-3-Bis(p-hydroxyphenyl)-phthalide
FR2442554A1 (fr) 1978-11-24 1980-06-20 Thomson Brandt Commutateur electronique a commande tactile, et selecteur de canaux comportant un tel commutateur
EP0035204B2 (en) * 1980-03-05 1991-05-22 Miles Inc. Pasteurized therapeutically active protein compositions
US4440679A (en) * 1980-03-05 1984-04-03 Cutter Laboratories, Inc. Pasteurized therapeutically active protein compositions
US4294826A (en) 1980-05-07 1981-10-13 Armour Pharmaceutical Company Process for the preparation of highly purified antihemophilic factor
US4327076A (en) 1980-11-17 1982-04-27 Life Savers, Inc. Compressed chewable antacid tablet and method for forming same
JPS57140724A (en) 1981-02-25 1982-08-31 Green Cross Corp:The Heat-treatment of aqueous solution containing cold insoluble globulin
US4327077A (en) 1981-05-29 1982-04-27 Life Savers, Inc. Compressed chewable antacid tablet and method for forming same
US4879280A (en) 1981-09-24 1989-11-07 Fresenius Ag Dialysis solution for use in intraperitoneal dialysis
US4994438A (en) 1981-11-02 1991-02-19 Cedars Sinai Medical Center Heat treatment of lyophilized plasma fractions
US4456590B2 (en) 1981-11-02 1989-05-30 Heat treatment of lyphilized blood clotting factor viii concentrate
JPS58216695A (ja) 1982-06-07 1983-12-16 Otsuka Shokuhin Kogyo Kk トレハロ−スの製造方法
US4457916A (en) * 1982-08-31 1984-07-03 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Method for stabilizing Tumor Necrosis Factor and a stable aqueous solution or powder containing the same
US4883762A (en) 1983-06-06 1989-11-28 Ciba Corning Diagnostics Corp. Stabilized isoenzyme control products
US4865871A (en) 1983-08-23 1989-09-12 Board Of Regents The University Of Texas System Method for cryopreparing biological tissue
US4490361A (en) 1983-12-02 1984-12-25 Alpha Therapeutic Corporation Virus inactivating heat treatment of plasma fractions
AT389815B (de) 1984-03-09 1990-02-12 Immuno Ag Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten
JPS60258195A (ja) 1984-06-05 1985-12-20 Ss Pharmaceut Co Ltd α．α―トレハロース脂肪酸ジエステル誘導体
DE3434472A1 (de) 1984-09-20 1986-03-27 Lentia GmbH Chem. u. pharm. Erzeugnisse - Industriebedarf, 8000 München Verfahren zur pasteurisation von plasmaproteinen bzw. von plasmaproteinfraktionen
DE3445010A1 (de) 1984-12-10 1986-06-19 Boehringer Mannheim Gmbh Kontroll- bzw. eichserum fuer die lipid-diagnostik
US4677195A (en) 1985-01-11 1987-06-30 Genetics Institute, Inc. Method for the purification of erythropoietin and erythropoietin compositions
GB8505882D0 (en) 1985-03-07 1985-04-11 Central Blood Lab Authority Purification of blood coagulation factor viii
GB8508173D0 (en) 1985-03-28 1985-05-01 Standard Telephones Cables Ltd Controlled delivery device
EP0229810B1 (en) 1985-07-09 1991-10-16 Quadrant Bioresources Limited Protection of proteins and the like
US4758657A (en) 1985-07-11 1988-07-19 Armour Pharmaceutical Company Method of purifying Factor VIII:C
ATE52922T1 (de) 1985-08-05 1990-06-15 Immuno Ag Verfahren zur herstellung von praeparationen auf basis von blutgerinnungsfaktoren.
CA1276563C (en) 1985-09-30 1990-11-20 Stanley E. Charm High temperature, short time heating system and method of sterilizing heat-sensitive biological fluids
EP0225581A3 (en) * 1985-11-30 1989-05-24 Green Cross Corporation Method for the heat-treatment of immunoglobulins and immunoglobulin product
JPS62174094A (ja) 1985-12-16 1987-07-30 Ss Pharmaceut Co Ltd α．α―トレハロース誘導体
GB8604983D0 (en) 1986-02-28 1986-04-09 Biocompatibles Ltd Protein preservation
JPH0662436B2 (ja) 1986-05-19 1994-08-17 株式会社ミドリ十字 静注用免疫グロブリン製剤の製造方法
US4762857A (en) 1986-05-30 1988-08-09 E. I. Du Pont De Nemours And Company Trehalose as stabilizer and tableting excipient
US4749783A (en) 1986-07-11 1988-06-07 Miles Laboratories, Inc. Viral inactivation and purification of active proteins
FR2604157B1 (fr) 1986-09-18 1989-09-01 Air Liquide Structure isotherme
NL8700484A (nl) 1987-02-26 1988-09-16 Victor George Ryhiner Vriesdroogkamer volgens een modulerende directe expansie principe.
US5097018A (en) 1988-05-12 1992-03-17 University Of Southern California Sequential heat treatment of blood-clotting factor products
US5118795A (en) * 1987-05-15 1992-06-02 University Of Southern California Sequential heat treatment of blood-clotting factor products
US5099002A (en) 1987-05-15 1992-03-24 University Of Southern California Sequential improved method for treatment of human blood-clotting factor products
JP2545231B2 (ja) 1987-06-18 1996-10-16 日本ケミカルリサ−チ株式会社 ウロキナ−ゼの加熱による低分子化抑制法
GB8715238D0 (en) 1987-06-29 1987-08-05 Quadrant Bioresources Ltd Food process
US4909940A (en) 1987-12-30 1990-03-20 New York Blood Center, Inc. Extraction of process chemicals from labile biological mixtures with organic alcohols or with halogenated hydrocarbons
GB8801338D0 (en) 1988-01-21 1988-02-17 Quadrant Bioresources Ltd Preservation of viruses
US5045446A (en) 1988-08-26 1991-09-03 Cryopharm Corporation Lyophilization of cells
WO1990011756A1 (en) 1989-04-12 1990-10-18 Aberdeen University Slow release vitreous systems
DE69002033T2 (de) 1989-05-24 1993-09-30 Miles Inc Gelfiltration von wärmebehandeltem Faktor VIII.
GB8917470D0 (en) 1989-07-31 1989-09-13 Quadrant Bioresources Ltd Composition and method
US5418130A (en) 1990-04-16 1995-05-23 Cryopharm Corporation Method of inactivation of viral and bacterial blood contaminants
IT1246350B (it) 1990-07-11 1994-11-17 Eurand Int Metodo per ottenere una rapida sospensione in acqua di farmaci insolubili
WO1992002133A1 (en) 1990-08-10 1992-02-20 Analytical Control Systems, Inc. Improved diagnostic and therapeutic compositions
US5200399A (en) 1990-09-14 1993-04-06 Boyce Thompson Institute For Plant Research, Inc. Method of protecting biological materials from destructive reactions in the dry state
JP3138870B2 (ja) 1991-07-31 2001-02-26 ファロス ブラター アーゲー 特に製紙機械用ロールの円柱状または球状の面を研磨するためのグラインダー
GB9125695D0 (en) 1991-12-03 1992-01-29 Mastavac Limited Medical preparations
EP0615438B1 (en) 1991-12-05 1996-07-24 Mallinckrodt Veterinary, Inc. A carbohydrate glass matrix for the sustained release of a therapeutic agent
US5192743A (en) 1992-01-16 1993-03-09 Genentech, Inc. Reconstitutable lyophilized protein formulation
IT1254359B (it) * 1992-05-11 1995-09-14 Serono Cesare Ist Ricerca Composizioni farmaceutiche contenenti il-6
JP3182564B2 (ja) 1992-08-24 2001-07-03 味の素ファルマ株式会社 栄養組成物
US5422384A (en) 1992-11-25 1995-06-06 Battelle Memorial Institute Glass/polymer composites and methods of making
JP3168550B2 (ja) 1992-12-02 2001-05-21 株式会社林原生物化学研究所 脱水剤およびそれを用いる含水物の脱水方法並びにその方法で得られる脱水物品
JP3698721B2 (ja) 1993-02-23 2005-09-21 ジェネンテク・インコーポレイテッド 有機溶媒を用いて処理したポリペプチドの賦形剤安定化
AU4953393A (en) 1993-08-24 1995-03-21 Mogen International N.V. Production of trehalose in plants
DE69530196T2 (de) 1994-06-02 2003-11-20 Elan Drug Delivery Ltd Methode zum verhindern der aggregation von proteinen/peptiden bei rehydratation oder auftauen
CA2157219C (en) 1994-08-31 2010-10-05 Munehiro Noda Process for purifying recombinant human serum albumin
US5512547A (en) 1994-10-13 1996-04-30 Wisconsin Alumni Research Foundation Pharmaceutical composition of botulinum neurotoxin and method of preparation
JPH08157491A (ja) 1994-11-30 1996-06-18 Hayashibara Biochem Lab Inc トレハロース誘導体の製造方法
GB9501040D0 (en) * 1995-01-19 1995-03-08 Quadrant Holdings Cambridge Dried composition
US6267958B1 (en) * 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
DE19528221C2 (de) * 1995-08-01 1998-10-22 Blutspendedienst Der Drk Lande Verfahren zur Herstellung eines virussicheren, therapeutischen Präparates aus Humanplasma
US6632648B1 (en) * 1996-05-14 2003-10-14 Elan Drug Delivery Limited Methods of terminal sterilization of fibrinogen

Also Published As

Publication number Publication date
US6632648B1 (en) 2003-10-14
BR9709082A (pt) 2001-11-27
AU730931B2 (en) 2001-03-22
CA2254914A1 (en) 1997-11-20
DE69723703T2 (de) 2004-01-29
CA2254914C (en) 2008-07-29
DK0914166T3 (da) 2003-11-10
EP0914166B1 (en) 2003-07-23
ZA974179B (en) 1997-12-10
DE69723703D1 (de) 2003-08-28
US20070249033A1 (en) 2007-10-25
PT914166E (pt) 2003-12-31
NZ333212A (en) 2000-05-26
JP2000511519A (ja) 2000-09-05
JP4841018B2 (ja) 2011-12-21
ATE245455T1 (de) 2003-08-15
EP0914166A1 (en) 1999-05-12
WO1997042980A1 (en) 1997-11-20
US20030211592A1 (en) 2003-11-13
AU2784597A (en) 1997-12-05

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2202613T3 (es) Procedimiento de esterilizacion final de productos biologicos.
AU622133B2 (en) Plasma and recombinant protein formulations in high ionic strength media
ES2055120T5 (es) Procedimiento de estabilizacion de soluciones de albumina humana y solucion obtenida.
ES2767132T3 (es) Extracto de plaquetas inactivado viral, uso y preparación del mismo
EP0315968B2 (en) Plasma and recombinant protein formulations in low ionic strength media
JP4278861B2 (ja) ウイルス汚染に対する安全性の高いフィブリンのり形成用成分をヒト血漿プールから製造する方法
Horowitz et al. Inactivation of viruses in labile blood derivatives. II. Physical methods
JP5719266B2 (ja) ウイルス不活性化熱処理へ供するための血漿タンパク質の寒冷沈降物を安定化する方法
DK156698B (da) Fremgangsmaade til pasteurisering af et materiale indeholdende et termisk foelsomt, terapeutisk aktivtprotein valgt blandt alfa-l-antitrypsin, antithrombin-iii, praekallikrein, antihaemofil faktor (faktorviii) og fibronectin
JPS61275228A (ja) 治療用タンパク組成物中のビ−ルスの光動的不活性化
SK8293A3 (en) Composition for stabilizing bloodplasma during pasteurization and pasteurized plasma solution for therapeutic use
FI95778B (fi) Menetelmä taudinaiheuttajien inaktivoimiseksi biologisessa tai farmaseuttisessa aineessa
IE842180L (en) Pasteurization of human plasma
JPS6281327A (ja) 人トロンビン製剤の加熱処理方法
US20040131497A1 (en) Process for sterilization of biological compositions containg protein
CN101757616B (zh) 一种安全的冻干哺乳动物源凝血酶制剂及其制备方法
CN101757651A (zh) 一种动物纤维蛋白原病毒灭活方法
JP3024073B2 (ja) タンパク質中のウイルスを不活性化する方法
ES2232345T3 (es) Procedimiento para la inactivacion de virus.
Stephan Inactivation of hepatitis viruses and HIV in plasma and plasma derivatives by treatment with b-propiolactone/UV irradiation
Highsmith et al. Iodine-mediated inactivation of lipid-and nonlipid-enveloped viruses in human antithrombin III concentrate
MXPA98009535A (es) Metodos para la esterilizacion terminal de productos biologicos
US20110251127A1 (en) Inactivation of infectious agents in plasma proteins by extreme pressure
CN1225020A (zh) 生物制品的终末灭菌
Hooper et al. Production and properties of intravenous immunoglobulins