EP0738274A1 - Neue nukleosid-lipid-addukte, ihre herstellung und ihre pharmazeutische verwendung - Google Patents

Neue nukleosid-lipid-addukte, ihre herstellung und ihre pharmazeutische verwendung

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EP0738274A1
EP0738274A1 EP95905541A EP95905541A EP0738274A1 EP 0738274 A1 EP0738274 A1 EP 0738274A1 EP 95905541 A EP95905541 A EP 95905541A EP 95905541 A EP95905541 A EP 95905541A EP 0738274 A1 EP0738274 A1 EP 0738274A1
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EP
European Patent Office
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formula
cytidine
residue
thymidine
adenosine
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Ceased
Application number
EP95905541A
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English (en)
French (fr)
Inventor
Hans Brachwitz
Peter Langen
Iduna Fichtner
Wolfgang E. Berdel
Matthias Baeseler
Uwe Lachmann
Karin Dressler
Yvonne Thomas
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Max Delbrueck Centrum fuer Molekulare in der Helmholtz Gemeinschaft
Original Assignee
Max Delbrueck Centrum fuer Molekulare in der Helmholtz Gemeinschaft
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Filing date
Publication date
Application filed by Max Delbrueck Centrum fuer Molekulare in der Helmholtz Gemeinschaft filed Critical Max Delbrueck Centrum fuer Molekulare in der Helmholtz Gemeinschaft
Publication of EP0738274A1 publication Critical patent/EP0738274A1/de
Ceased legal-status Critical Current

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/06—Pyrimidine radicals
    • C07H19/10—Pyrimidine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C07H19/20—Purine radicals with the saccharide radical esterified by phosphoric or polyphosphoric acids

Definitions

  • New nucleoside-lipid adducts their production and their pharmaceutical use
  • the invention relates to new nucleoside-lipid adducts of the general formula I including all enantiomeric forms and all pharmaceutically usable salts of these compounds.
  • the invention further relates to processes for the preparation of the compounds I and their pharmaceutical use.
  • the field of application of the invention is thus the chemical and pharmaceutical industries.
  • CDP-DAG cytidine phosphate diacylglycerols
  • the aim of the invention was now to synthesize new cytostatically active nucleoside-lipid adducts which are introduced into the cell in analogy to the naturally occurring CDP-DAG and which, owing to their structure, have a high level of biostability and therefore a longer residence time in the organism and / or inhibit the proliferation of tumor cells by blocking natural pathways of degradation or synthesis of metabolically modified cleavage product and which are therefore suitable for pharmaceutical use.
  • the invention relates to new nucleoside-lipid adducts of the general formula I
  • R is a straight-chain or branched, saturated or a mono- or polyunsaturated, unsubstituted or mono- or polysubstituted by halogen, hydroxy, alkoxy or cyano-substituted hydrocarbon radical with 1-22 carbon atoms means or
  • A is saturated or mono- or polyunsaturated, unsubstituted or mono- or polysubstituted by halogen, hydroxy, alkoxy or cyano (C5-C30) alkoxy or alkenoxy,
  • B has one of the meanings given for A or denotes hydrogen, hydroxyl, halogen, cyano, acyloxy (C2-C22) or a group of the general formula 0- (CH2) ⁇ -CF3, where x is 0-3.
  • Nk is a nucleoside, preferably cytidine, 2'-deoxycytidine, thymidine, adenosine and ara-cytidine residue, d) n is 0 or 1 and m is 1 or 2.
  • Another variant of the method consists in the implementation of an activated lipid phosphate or phosphonate component, e.g. B. in the form of an amidate with the corresponding nucleoside monophosphate.
  • nucleoside diphosphate with an alkylphosphoamidate or alkylphosphonoamidate
  • nucleoside monophosphate with an alkyldiphosphoamidate or alkylphosphonophosphoamidate.
  • the compounds of general formula I and their salts are biologically active and have a pronounced antitumor activity, which u. a. on human immoralized breast epithelial cells H 184 A 1 and on human breast tumor cells (Matu) in vitro.
  • the selectivity of the antiproliferative effect is shown by a significantly lower inhibition of growth of bone marrow cells in vitro by the compounds according to the invention.
  • Tab. 1 shows the inhibition of cell growth of human breast epithelial cells H 184 1 and human breast tumor cells of selected compounds of the general formula I: Tab. 1 IC 50 - selected (50% inhibition of cell growth in ⁇ M) selected substances of formula I.
  • Cyt cytidine residue
  • Thy thymidine residue
  • Ad adenosine residue
  • ara-cyt ara-cytidine residue
  • the compounds of general formula I and their salts can be used as cytostatic agents, preferably in a 3-5% mixture with pharmaceutically customary carriers and additives. ⁇
  • the further purification was carried out on a CM-52 cellulose column (50 g). It was washed with CHCI3 / CH3OH 8: 2 until no phosphate was detectable in the 1 50 ml fractions, which were concentrated to about 4 ml. Then the CH3OH content was increased to 50% and the clean substance was eluted. The eluate was evaporated to dryness and crystallized with acetone. 513 mg of clean substance were obtained in the form of the disodium salt.
  • octadecylphosphonate 500 mg (1.5 mmol) of octadecylphosphonate were mixed with 1.2 g (1.72 mmol) of cytidine-5'-monophosphomorpholidate (as 4-morpholine-N, N'-dicyclohexylcarboxamidine salt) in 40 ml of dry pyridine at 38 ° C Stirring implemented in 4 days.
  • the mixture was worked up and purified on a CM-52 cellulose column (25 g) in accordance with Example 1. 200 mg of pure substance were obtained in the form of the disodium salt.
  • Example 1 799.2 mg (1, 15 mmol) of cytidine-5'-monophosphomorpholidate (as 4-morpholine-N, N'-dicyclohexylcarboxamidine salt) with 364 mg (1 mmol) of 3-hexadecyloxypropylphosphonic acid at 35 ° C implemented.
  • the batch was worked up as described in Example 1. 1 87.5 mg of pure substance were obtained in the form of the disodium salt (dihydrate).
  • Example 1 793.2 mg (1, 15 mmol) of cytidine-5-monophosphomorpholidate (as 4-morpholine-N, N'-dicyclohexylcarboxamidine salt) with 400 mg (1 mmol)
  • Example 8 from cytidine-5'-diphosphomorpholidate (as 4-morpholine-N, N'-dicyclohexylcarboxamidine salt with 1.5 mol water) and hexadecylphosphoric acid at 35-50 ° C.
  • the substance is obtained as a disodium salt (dihydrate).
  • CM-52 cellulose column used. 131 mg of product were obtained in the form of the disodium salt.
  • Example 10 322.4 mg (1.0 mmol) of hexadecyl phosphate with 770.3 mg (1.5 mmol) of 2'-deoxycytidine-5'-monophosphomorpholidate (as 4-morpholine-N, N'- dicyclohexylcarboxamidinsalz with 1, 5 mol water) implemented.
  • Example 1 According to the instructions in Example 1, 200 mg (0.65 mmol) of hexadecylphosphonate with 514 mg (0.75 mmol) of thymidine-5'-monophosphomorpholidate (as 4-morpholine-N, N'-dicyclohexylcarboxamidine salt with 1.5 mol of water) ) implemented.
  • the substance was purified as described in Example 14. With 60 mg of substance applied, 14 mg of pure substance were obtained in the form of the disodium salt.
  • Thymidine 5 (2-chloro-3-hexadecyloxypropyl-1-phosphono) phosphate
  • Example 1 According to Example 1, 288.4 mg (0.7 mmol) of 2-chloro-3-hexadecyloxypropyl-1-phosphate with 548 mg (0.8 mmol) of thymidine-5'-monophosphomorpholidate (as 4-
  • Nk adenosine residue
  • the pyridine was distilled off and the product was taken up in 1.5 ml of water, 30 ml of CH3OH and 25 ml of CHCl3 and adjusted to pH 4 with 1 N formic acid.
  • the upper phase was extracted twice with chloroform.
  • the organic phases were combined, dried, brought to pH 9 with methanolic NH3 and evaporated to dryness. 178 mg were obtained.
  • the substance obtained was purified by means of HPLC on an RP1 8 column; it is obtained as the free acid with 2.5 mol of water.
  • Nk adenosine residue
  • Example 20 300 mg (0.98 mmol) of hexadecylphosphonate with 798.7 mg (1.13 mmol) of adenosine-5'-monophosphomorpholidate (as 4-morpholine-N, N'-dicyclo- hexylcarboxamidine salt reacted with 1.5 mol water). 340 mg of crude product were obtained. The substance was isolated and purified as described in Example 20.
  • Example 1 200 mg (0.5 mmol) of 2-chloro-3-hexadecyloxypropyl-1-phosphonic acid 409.2 mg (0.58 mmol) of adenosine-5'-monophosphomorpholidate (as 4-morpholine-N, N'- dicyclohexylcarboxamidinsalz with 1, 5 mol water) implemented. The mixture was worked up and the end product was purified as indicated in Example 1. 94 mg of pure substance were obtained in the form of the disodium salt.
  • adenosine-5'-monophosphomorpholidate as 4-morpholine-N, N'- dicyclohexylcarboxamidinsalz with 1, 5 mol water
  • Example 20 300 mg (1.3 mol) of dodecyl phosphate with 91 9.57 mg (1.3 mmol) of adenosine 5'-monophosphomorpholidate (as 4-morpholine-N, N'-dicyclohexylcarboxamidine salt with 1.5 mol Water) implemented. 290 mg of crude product were obtained. The reaction mixture was worked up and the substance was purified as indicated in Example 20.
  • Example 20 300 mg (0.92 mmol) of hexadecyl phosphate were reacted with 750 mg (1.07 mmol) of adenosine-5'-monophosphomorpholidate (as 4-morpholine-N, N'-dicyclohexylcarboxamidine salt with 1.5 mol of water) . There were 1 60 mg of crude product receive. The reaction mixture was worked up and the substance was purified as described in Example 20.
  • adenosine-5'-monophosphomorpholidate as 4-morpholine-N, N'-dicyclohexylcarboxamidine salt with 1.5 mol of water
  • Example 1 223 mg (0.54 mmol) of 2-chloro-3-hexadecyloxypropyl-1-phosphate with 438.8 mg (0.62 mmol) of adenosine 5'-monophosphomorpholidate (as 4-morpholine-N, N ' -dicyclohexylcarboxamidinsalz with 1, 5 mol water) implemented.
  • the mixture was worked up and the end product was purified on a CM-52 cellulose column as shown in Example 1.
  • 123 mg of pure substance were obtained in the form of the disodium salt.
  • Nk ara-cytidine residue
  • Nk ara-cytidine residue
  • Example 26 310 mg (0.97 mmol) of hexadecyl phosphate were reacted with 758 mg (1.1 mmol) of ara-cytidine monophosphomorpholidate at room temperature. The reaction mixture was worked up and the product was isolated as shown in Example 26 using a CM-52 column. 100 mg of pure substance were obtained in the form of the disodium salt.

Abstract

Die Erfindung betrifft neue Nukleosid-Lipid-Addukte der allgemeinen Formel (I) einschliesslich aller enantiomeren Formen sowie sämtlicher pharmazeutisch einsetzbarer Salze dieser Verbindungen. Anwendungsgebiet ist die chemische und die pharmazeutische Industrie. Die Herstellung der Verbindungen (I) mit einer Diphosphat- oder einer Phosphonophosphat-Gruppierung erfolgt durch Kondensation von Nukleosid-5'-monophosphoamidaten mit den entsprechenden Lipidphosphaten bzw. -phosphonaten oder durch Kondensation der Lipidphosphoamidate bzw. Lipidphosphonoamidate mit den entsprechenden 5'-Nukleosidmonophosphaten. Die Verbindungen (I), die eine Triphosphat- bzw. eine Phosphonodiphosphat-Gruppierung enthalten, werden durch Kondensation eines Nucleosiddiphosphoamidates mit einem Alkylphosphat bzw. Alkylphosphonat oder durch Reaktion eines Lipidphosphoamidates bzw. Lipidphosphonoamidates mit einem 5'-Nukleosiddiphosphat oder durch Kondensation eines Lipiddiphosphates bzw. Lipidphosphonophosphates mit einem 5'-Nucleosidmonophosphoamidat oder durch Reaktion eines Lipiddiphosphoamidates bzw. eines Lipidphosphonophosphoamidates mit einem 5'-Nukleosidmonophosphat erhalten. Die Verbindungen der Formel (I) sind cytostatisch wirksam.

Description

Neue Nukleosid-Lipid-Addukte, ihre Herstellung und ihre pharmazeutische Verwendung
Die Erfindung betrifft neue Nukleosid-Lipid-Addukte der allgemeinen Formel I einschließlich aller enantiomeren Formen sowie sämtlicher pharmazeutisch einsetzbaren Salze dieser Verbindungen. Gegenstand der Erfindung sind ferner Verfahren zur Herstellung der Verbindungen I und ihre pharmazeutische Verwendung. Anwendungsgebiet der Erfindung ist somit die chemische und die pharmazeutische Industrie.
Die natürlich vorkommenden Cytidinphosphat-diacylglycerole (CDP-DAG), die eine wichtige Zwischenstufe der zellulären Phosphatidylinositol-Synthese darstellen, weisen keine cytostatische Aktivität auf. Es ist aber bekannt, daß strukturmodifizierte CDP- DAG-Analoge das Wachstum von Tumorzellen hemmen, das Wachstum der homopoetischen Stammzellen jedoch wenig beeinflussen (Brachwitz et al., J. Cancer Res. (1 990) 1 1 6 (Suppl.ll), 993 ; Langen et al., Anticancer Res. J_2 (1 992) 2109). Ziel der Erfindung war es nun, neue cytostatisch wirksame Nukleosid-Lipid-Addukte zu synthetisieren, die in Analogie zu den natürlich vorkommenden CDP-DAG in die Zelle eingeschleust werden und auf Grund ihrer Struktur eine hohe Biostabilität und damit längere Verweilzeit im Organismus besitzen und/oder durch Blockierung natürlicher Abbauwege bzw. Synthese metabolisch veränderter Spaltprodukt die Proliferation von Tumorzellen hemmen und die damit für eine pharmazeutische Verwendung in Frage kommen.
Die Zielstellung wird gemäß den Ansprüchen gelöst.
Gegenstand der Erfindung sind neue Nukleosid-Lipid-Addukte der allgemeinen Formel I
worin
a) R einen geradkettigen oder verzweigten, gesättigten oder einen ein- oder mehrfach ungesättigten, unsubstituierten oder ein- oder mehrfach durch Halogen, Hydroxy, Alkoxy oder Cyano substituierten Kohlenwasserstoffrest mit 1 -22 C-Atomen bedeutet, oder
b) R CH - A CE A 1 1
CH - B CH t 1
CH2 — CH2 B
ist, worin
A gesättigtes oder ein- oder mehrfach ungesättigtes, unsubstituiertes oder ein- oder mehrfach durch Halogen, Hydroxy, Alkoxy oder Cyano substituiertes( C5-C30 )- Alkoxy bzw. -Alkenoxy bedeutet ,
B eine der für A gegebenen Bedeutungen hat oder Wasserstoff, Hydroxy, Halogen, Cyano, Acyloxy ( C2-C22 ) oder eine Gruppe der allgemeinen Formel 0-(CH2)χ-CF3 , wobei x für 0-3 steht, bedeutet. c) Nk einen Nukleosid-, vorzugsweise Cytidin-, 2'-Desoxycytidin-, Thymidin-, Adenosin- und ara-Cytidin-Rest bedeutet, d) n für 0 oder 1 und m für 1 oder 2 steht.
Bevorzugte Verbindungen sind:
Cytidin-5'-octylphosphonophosphat (Formel I: R = CgH ^ , n = 0, m = 1 , Nk = Cytidin-
Rest),
Cytidin-5'-dodecylphosphonophosphat (Formel I: = -- 2^2Jö' n = ^' m = 1 ι Nk = Cytidin-
Rest),
Cytidin-5'-tetradecylphosphonophosphat (Formel I: R n = 0, m = 1 ,
Nk = Cytidin-Rest),
Cytidin-5'-hexadecylphosphonophosphat (Formel I: R = C-| gH33, n = 0, m = 1 ,
Nk = Cytidin-Rest),
Cytidin-5'-octadecylphosphonophosphat (Formel I: R = C.| gH37, n = 0, m = 1 ,
Nk = Cytidin-Rest
Cytidin-5'-(3-hexadecyloxypropyl-1 -phosphono)phosphat (Formel I: R = C-] gH3 -0-
(CH2>3, n = 0, m = 1 , Nk =Cytidin-Rest),
Cytidin-5'-(2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1 -phosphono)phosphat (Formel I: R = C-j gH33-
0-CH2-CHCI-CH2, n = 0, m = 1 , Nk = Cytidin-Rest)i Cytidin-5'-hexadecylphosphonodiphosphat (Formel I, n = 0, m = 2, Nk = Cytidin-Rest)x
Cytidin-5'-hexadecyltriphosphat (Formel I, R = C| H33, n = 0, m = 2, Nk = Cytidin-Rest), 2'-Desoxycytidin-5'-dodecylphosphonophosphat (Formel I: = C-|2H25. n = 0, m = 1, Nk = 2'-Desoxycytidin-Rest),
2'-Desoxycytidin-5'-hexadecylphosphonophosphat (Formel I: n = 0, m = 1, Nk = 2-Desoxycytidin-Rest),
2'-Desoxycytidin-5'-dodecyldiphosphat (Formel I: R = C-j2H25 n = 1, m = 1, Nk = 2'- Desoxycytidin-Rest),
2'-Desoxycytidin-5'-hexadecyldiphosphat (Formel I: ^ = ^-\Q^23' n = 1, m = 1, Nk = 2'- Desoxycytidin-Rest),
Thymidin-5'-dodecylphosphonophosphat (Formel l:R = C|2H25. n = 0, m=1, Nk = Thymidin-Rest),
Thymidin-5'-hexadecylphosphonophosphat (Formel I: = C-ι H33, n = 0, m = 1, Nk = Thymidin-Rest),
Thymidin-5'-(2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1 -phosphono)phosphat (Formel I; R = C16H33-0-CH2-CHCI-CH2-, n = 0, m = 1, Nk = Thymidin-Rest), Thymidin-5'-dodecyldiphosphat (Formel I: R = Ci2H25' n=1, m = 1, Nk = Thymidin), Thymidin-5'-hexadecyldiphosphat (Formel I: n=1, m = 1, Nk = Thymidin- Rest),
Thymidin-5'-(2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1)diphosphat (Formel I,: R = C1 H33-0-CH2_ CHCI-CH2, n=1, m = 1, NK = Thymidin-Rest),
Adenosin-5'-dodecylphosphonophosphat (Formel I: R = Ci2H25' n = 0, m = 1, Nk = Adenosin-Rest),
Adenosin-5'-hexadecylphosphonophosphat (Formel I: R = C1 H3 , n = 0, m = 1, Nk = Adenosin-Rest),
Adenosin-5'-(2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1 -phosphono)phosphat (Formel I: R = C16H33-0-CH2-CHCI-CH2, n = 0, m = 1, Nk-Adenosin-Rest), Adenosin-5'-dodecyldiphosphat (Formel I: R = C^ 2*^25' n = ^' m = 1. Nk = Adenosin- Rest),
Adenosin-5'-hexadecyldiphosphat (Formel I: R = C|gH 3, n=1, m = 1, Nk = Adenosin- Rest),
Adenosin-5'-(2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1 )diphosphat (Formel I: R-=C16H33-0-CH2-CHCI-CH2, n = 1, m = 1, Nk-Adenosin-Rest), Ara-Cytidin-5-hexadecylphosphonophosphat (Formel I: = C-|gH33, n = 0, m = 1, Nk = ara-Cytidin-Rest),
Ara-Cytidin-5'-octadecylphosphonophosphat (Formel I: R n = 0, m = 1, Nk = ara-Cytidin-Rest), Ara-Cytidin-5'-hexadecyldiphosphat (Formel I: R = Cj gH3*-7, n = 1 , m = 1 , Nk = ara- Cytidin-Rest),
Ara-Cytidin-5'-octadecyldiphosphat (Formel I: R = C^ gH3 , n = 1 , m = 1 , Nk = ara- Cytidin-Rest),
Die Nukleosid-Lipid-Addukte der allgemeinen Formel I, in denen eine Diphosphat- (n = 1 , m = 1 ) oder eine Phosphonophosphatgruppe (n = 0, m = 1 ) vorhanden ist, werden entweder durch Kondensation der Nukleosidmonophosphoamidate mit den entsprechenden Alkylphosphaten bzw. Alkylphosphonaten erhalten. Eine andere Variante des Verfahrens besteht in der Umsetzung einer aktivierten Lipidphosphat- bzw. -phosphonatkomponente, z. B. in Form eines Amidates, mit dem entsprechenden Nukleosidmonophosphat. Die Nukleosid-Lipid-Addukte der Formel I, die eine Triphosphat- (n = 1 , m = 2) oder eine Phosphonodiphosphat-Gruppierung (n = 0, m = 2) aufweisen, lassen sich entsprechend durch Reaktion von Nukleosidmonophosphoamidaten mit Alkyldiphosphaten bzw. Alkylphosphonaten erhalten. Diese Verbindungen sind auch durch Kondensation der Nukleosiddiphosphoamidate mit den entsprechenden Alkylphosphaten bzw. Alkylphosphonaten synthetisierbar.
Weitere Synthesevarianten bestehen in der Umsetzung eines Nukleosiddiphosphates mit einem Alkylphosphoamidat bzw. Alkylphosphonoamidat und in der Umsetzung eines Nukleosidmonophosphates mit einem Alkyldiphosphoamidat bzw. Alkylphosphono- phosphoamidat. Diese Reaktionen erfolgen im allgemeinen in einem polaren wasser¬ freien Lösungsmittel, vorzugsweise Pyridin, bei 20-50 °C. Die Produkte werden isoliert und, wenn erforderlich, durch Chromatographie gereinigt.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel I und deren Salze sind biologisch aktiv und besitzen eine ausgeprägte Antitumorwirksamkeit, welche u. a. an humanen immoralisierten Mammaepithelzellen H 184 A 1 und an menschlichen Mammatumor- zellen (Matu) in vitro belegt wird. Die Selektivität der antiproliferativen Wirkung wird durch eine deutlich geringere Wachstumshemmung von Knochenmarkzellen in vitro durch die erfindungsgemäßen Verbindungen gezeigt.
In Tab. 1 ist die Hemmung des Zellwachstums von menschlichen Mammaepithelzellen H 184 1 und menschlichen Mammatumorzellen von ausgewählten Verbindungen der allgemeinen Formel I aufgeführt : Tab. 1 IC50- erte (50%ige Hemmung des Zellwachstums in μM) ausgewählter Substanzen der Formel I
Substanz (Formel I, R, n, m, Nk =) H 184 A 1 a' Matu b)
C14H29, 0, 1, Cyt 30 55
C16H33' °< -1- cyt 15 31 C18H37, 0, 1, Cyt 23 31 C16H33θ(CH2)3, 0, 1, Cyt 50 40 C16H330CH2CHC1CH2, 0, 1, Cyt 60 58 C16H33' **-< 2, Cyt 20 21 C16H33' °< -*-. τhy 52 22 C16H330CH2CHC1CH2, 0, 1, Thy 57 53 C16H33, 1, 1, Thy 44 58 C16H330CH2CHC1CH2, 1, 1, Thy 43 45
C16H33< °< L Ad 18 21
C16H33< !' 1> Ad 42 33
C16H33' °' x> ara-Cyt 2,1 0,65
C16H33* -*-' ' ara-Cyt 2,3 0,65
a' Immortalisierte humane Mammaepithelzellen b' Humane Mammatumorzellen
Cyt=Cytidin-Rest, Thy=Thymidin-Rest, Ad=Adeno sin -Rest, ara-Cyt=ara-Cytidin- Rest
Bei den erfindungsgemäßen Verbindungen lassen sich ferner Hinweise für eine selektive Antitumorwirkung in vitro finden, d. h. das Wachstum von Normalzellen wird im vergleichbaren Konzentrationsbereich weit weniger gehemmt als das von Tumorzellen, so daß eine verteilhafte Verwendung in der Humanmedizin zur Behandlung und Prophylaxe von Tumorerkrankungen möglich ist.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel I und deren Salze können als Cytostatikum bevorzugt in 3-5 %iger Mischung mit pharmazeutisch üblichen Träger- und Zusatz¬ stoffen Verwendung finden. ■
Die Erfindung soll nachfolgend durch Ausführungsbeispiele näher erläutert werden.
Ausführunqsbeispiele
Beispiel 1
Cytidin-5'-octylphosphonophosphat (Formel I: R = CoH^ , n = 0, m = 1 , Nk = Cytidin-
Rest)
305 mg (1 ,57 mmol) Octylphosphonsäure wurden mit 1 ,5 g (2,1 mmol) Cytidin5'-mono- phosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexγlcarboxamidinsalz) in 40 ml trockenem Pyridin bei 38 °C 72 Stunden gerührt. Anschließend wurde der Ansatz im Vakuum bis zur Trockne einrotiert, dreimal mit trockenem Toluol kodestilliert und der Rückstand im Vakuum getrocknet, anschließend in CHC /Methanol 1 : 1 aufgenommen und die Lösung durch tropfenweise Zugabe von 0,5 M HCI auf pH 3 eingestellt. Die Phasen wurden getrennt und die wäßrige Phase zweimal mit CHCI3 extrahiert. Nachdem die vereinigten CHCIg-Phasen noch einmal mit wenig Wasser gewaschen wurden, erfolgte die Trocknung über Na2SC-4. Die Lösung wurde eingeengt, der Rückstand in ca. 15 ml CHCI3 gelöst. Nach Zugabe von 30 ml Methanol/H O 2:1 wurde die Lösung mit methanolischem Ammoniak auf pH 9 eingestellt. Nach der Phasentrennung wurde die CHCIg-Phase dreimal mit je 20 ml Methanol/H2θ 2:1 nachextrahiert. Die vereinigten wäßrigen Phasen wurden im Vakuum bis zur Trockne einrotiert und dreimal mit Toluol kodestilliert. Durch Zugabe von kaltem Aceton wurde das Rohprodukt auskristallisiert. Das entstandene Rohprodukt enthält geringe Mengen unumgesetztes Phosphonat. Die weitere Reinigung erfolgte über eine CM-52-Cellulose-Säule (50 g). Sie wurde solange mit CHCI3/CH3OH 8:2 gewaschen, bis in den 1 50 ml-Fraktionen, die auf ca. 4 ml eingeengt wurden, im DC kein Phosphat nachweisbar war. Dann wurde der CH3OH- Anteil auf 50 % erhöht und die saubere Substanz eluiert. Das Eluat wurde bis zur Trockne eingengt und mit Aceton auskristallisiert. Es wurden 513 mg saubere Substanz in Form des Dinatriumsalzes erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, CHCI3/CH3OH/H2O/CH3COOH = 50:30:8:4) Rf = 0,37 . Beispiel 2
Cytidin-5'-dodecylphosphonophosphat (Formel I: R = C-] 2*^25' n = 0, m = 1 , Nk = Cytidin-
Rest)
360 mg (1 ,45 mmol) Dodecylphosphonat wurden mit 1 ,32 g (1 ,9 mmol) Cytidin-5'- monophosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz) in 30 ml trockenem Pyridin unter Rühren bei 35°C in 72 Stunden umgesetzt. Die Aufarbeitung des Ansatzes un die Reinigung des Rohproduktes erfolgte entsprechend Beispiel 1 über eine CM-52-Cellulose-Säule (25 g). Es wurden 90 mg reines Produkt in Form des Dinatriumsalzes erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, CHCl3/CH3OH/H20/CH3COOH 50:30:8:4) Rf = 0,29.
Beispiel 3
Cytidin-5'-tetradecylphosphonophosphat (Formel I: R = C-] 4H25, n = 0, m = 1 ,
Nk = Cytidin-Rest)
500 mg (1 ,8 mmol) Tetradecylphonat wurden mit 900 mg (1 ,3 mmol) Cytidin-5'-mono- phosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz) in 40 ml trockenem Pyridin bei 35 °C unter Rühren in 5 Tagen umgesetzt. Die Aufarbeitung des Ansatzes und die Reinigung der Rohsubstanz erfolgte über eine CM-52-Cellulose-Säule (25 g) wie im Beispiel 1 beschrieben. Es wurden 273 mg saubere Substanz in Form des Dinatriumsalzes erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, CHCl3/CH3OH/H20/CH3COOH 50:30:8:4) Rf = 0,3.
Beispiel 4
Cytidin-5'-hexadecylphosphonophosphat (Formel I: f^ C-j ßH , n = 0, m = 1 ,
Nk = Cytidin-Rest)
326 mg (1 ,06 mmol) Hexadecylphosphonat wurden mit 700 mg (1 ,01 mmol) Cytidin-5'- monophosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz) in 30 ml trockenem Pyridin bei 30°C unter Rühren in 70 Stunden umgesetzt. Die Aufarbeitung des Ansatzes und die Reinigung des Rohproduktes erfolgte über eine CM-52-Cellulose- Säule (25 g) wie im Beispiel 1 beschrieben. Es wurden 185 mg saubere Substanz in Form des Dinatriumsalzes erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, CHCI3/CH3OH/H2O/CH3COOH 50:30:8:4) Rf = 0,3. Beispiel 5
Cytidin-5'-octadecylphosphonophosphat (Formel I: R -= Ci 8'"*37' n = 0, m = 1 ,
Nk = Cytidin-Rest)
500 mg (1 ,5 mmol) Octadecylphosphonat wurden mit 1 ,2 g (1 ,72 mmol) Cytidin-5'- monophosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz) in 40 ml trockenem Pyridin bei 38°C unter Rühren in 4 Tagen umgesetzt. Die Aufarbeitung des Ansatzes und die Reinigung über eine CM-52-Cellulose-Säule (25 g) erfolgte entsprechend Beispiel 1 . Es wurden 200 mg reine Substanz in Form des Dinatriumsalzes erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, CHCI3/CH3OH/H2O/CH3COOH = 50:30:8:4) Rf = 0,37.
Beispiel 6
Cytidin-5'-(3-hexadecyloxypropyl-1 -phosphono)phosphat (Formel I: R - C-j ßH33-0-
(CH2)3, n = 0, m = 1 , Nk = Cytidin-Rest)
Entsprechend Beispiel 1 wurden 799,2 mg (1 , 1 5 mmol) Cytidin-5'-monophospho- morpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz) mit 364 mg (1 mmol) 3-Hexadecyloxy-propylphosphonsäure bei 35 °C umgesetzt . Der Ansatz wurde wie in Beispiel 1 beschrieben aufgearbeitet. Es wurden 1 87,5 mg reine Substanz in Form des Dinatriumsalz (Dihydrat) erhalten.
DC (Kieselgel 60 , Merck-Fertigplatten, CH3CI/CH3θH/H20/CH3COOH = 50:30:8:4) Rf = 0,45.
Beispiel 7
Cytidin-5'-(2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1 -phosphono)phosphat (Formel I: R = Ci ßH3 -
0-CH2-CHCI-CH2. n = 0, m = 1 , Nk = Cytidin-Rest)
Entsprechend Beispiel 1 werden 793,2 mg (1 , 1 5 mmol) Cytidin-5-monophospho- morpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz) mit 400 mg (1 mmol)
2-Chlor-3-hexadecyloxypropyl-1 -phosphonsäure bei 35 °C umgesetzt. Der Ansatz wurde wie in Beispiel 1 beschrieben aufgearbeitet. Es wurden 266 mg reine Substanz in Form des Dinatriumsalzen (Dihydrat) erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, CH3CI/CH3OH/H2O/CH3COOH 50:30:8:4) Rf =
0,31 . Beispiel 8
Cytidin-5'-hexadecylphosphonodiphosphat (Formel I, R = C-] gH33, n = 0, m = 2,
Nk = Cytidin-Rest)
909,2 mg (1 ,15 mmol) Cytidin-5'-diphosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclo- hexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) wurden dreimal mit je 30 ml trockenem Toluol an einem Rotationsverdampfer zur Trockne gebracht und anschließend mit 25 ml trockenem DMSO aufgenommen. Nach Zugabe von 306 mg (1 mmol) Hexadecyl,- phosphonsäure wurde der Ansatz bei 25 °C unter Feuchtigkeitsausschluß 60 Stunden gerührt. Der Umsatz wurde dünnschichtchromatographisch verfolgt (Kieselgel 60 , Merck-Fertigplatten, n-Propanol/Wasser/konz. NH3 60:20:10).
Zur Isolierung des Produktgemisches aus der DMSO-Lösung wurde die fünffache molare Menge Nal in Aceton gelöst (25ml) und diese Lösung unter Rühren zur DMSO- Reaktionslösung gegeben. Der erhaltene Niederschlag wurde in 20%igem Methanol gelöst, auf eine mit RP 18-Material gefüllte Säule gebracht und mit dem gleichen Lösungsmittel zur Entfernung von Nebenprodukten eluiert. Die Desorption des Cytidin- hexadecylphosphonophosphates erfolgte durch stufenweises Erhöhen des Methanol¬ gehaltes des Laufmittels. Es wurden 50 mg reine Substanz in Form des Trinatriumsalzes (Dihydrat) erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, n-Propanol/Wasser/konz. NH3 60:20: 10) Rf = 0,4.
Beispiel 9
Cytidin-5'-hexadecyltriphosphat (Formel I, R = C^ gH3 , n = 0, m = 2, Nk = Cytidin-Rest)
Entsprechend Beispiel 8 aus Cytidin-5'-diphosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'- dicyclohexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) und Hexadecylphosphorsäure bei 35- 50°C. Die Substanz fällt als Dinatriumsalz (Dihydrat) an.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, n-Propanol/konz. NHg/Wasser 60: 10:20) Rf = 0,4.
Beispiel 10
2'-Desoxycytidin-5'-dodecylphosphonophosphat (Formel I: R = C-| 2H25 n = 0, m = 1 ,
Nk = 2'-Desoxycytidin-Rest)
Eine Mischung von 250 mg (1 mmol) Dodecylphosphonat und 770,3 mg (1 ,1 5 mmol) 2'-Desoxycytidin-5'-monophosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexyl- carboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) wurde zweimal mit absolutem Toluol im Vakuum einrotiert, der über P2O5 getrocknete Rückstand wurde in 40-50 ml absol. Pyridin gelöst und die Lösung 70 h bei Raumtemperatur gerührt. Die Aufarbeitung erfolgte wie in
Beispiel 1 beschrieben. Zur chromatographischen Reinigung der Substanz wurde eine
CM-52-Cellulose-Säule benutzt. Es wurden 131 mg Produkt in Form des Dinatriumsalzes erhalten.
DC ( Kieselgel 60 , Merck-Fertigplatten, n-Propanol/konz. NHg/Wasser 60: 10:20)
Rf = 0,53.
Beispiel 1 1
2'-Desoxycytidin-5'-hexadecylphosphonophosphat (Formel I: R = Cj gH33, n = 0, m = 1 ,
Nk = 2-Desoxycytidin-Rest)
306,4 mg (1 mmol) Hexadecylphosphonat wurden, wie vorstehend beschrieben, mit 770,3 mg (1 , 1 5 mmol) 2'-Desoxycytidin-5'-monophosphomorpholidat (als 4-Morpholin- N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) umgesetzt. Der Ansatz wurde entsprechend Beispiel 1 aufgearbeitet. Es wurden 140 mg Produkt in Form des Dinatriumsalzes erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, n-Propanol/konz. NHg/Wasser 66:10:20) Rf = 0,54.
Beispiel 12
2'-Desoxycytidin-5'-dodecyldiphosphat (Formel I: R = C^ 2H25- n = 1 , m = 1 , Nk = 2'-
Desoxycytidin-Rest)
287,6 mg (1 ,08 mmol Dodecylphosphat wurden mit 832,7 mg (1 ,24 mmol) 2'-Desoxy- cytdin-5'-monophosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) entsprechend Beispiel 1 umgesetzt. Der Ansatz wurde wie dort beschrieben aufgearbeitet. Es wurden 207 mg in Form des dinatriumsalzes (Dihydrat) erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, n-Propanol/konz. NHg/Wasser 66: 10:20)
Rf = 0,53.
Beispiel 13
2'-Desoxycytidin-5'-hexadecyldiphosphat (Formel I: R = Cι gH33, n = 1 , m = 1 , Nk = 2'-
Desoxycytidin-Rest)
Entsprechend Beispiel 10 wurden 322,4 mg (1 ,0 mmol) Hexadecylphosphat mit 770,3 mg (1 ,1 5 mmol) 2'-Desoxycytidin-5'-monophosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'- dicyclohexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) umgesetzt. Die Aufarbeitung und
Reinigung erfolgte nach Beispiel 1 . Es wurden 210 mg reines Produkt in Form des
Dinatriumsalzes erhalten.
DC (Kieselgel 60 Merck-Fertigplatten, n-Propanol/konz. NH3/Wasser 66: 10:20), Rf =
0,54.
Beispiel 14
Thymidin-5'-dodecylphosphonophosphat (Formel l:R = C^ 2H25' n = 0, m = 1 ,
Nk = Thymidin-Rest)
225,7 mg (0,90 mmol) Dodecylphosphonat und 710, 1 mg (1 ,04 mmol) Thymidin-5'- monophosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) wurden entsprechend Beispiel 1 umgesetzt. Die Reinigung des Roh¬ produktes erfolgte über eine präparative DC-Platte (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, F254). 80 mg der Substanz wurden in 1 -2 ml CHCI3/CH3OH 1 : 1 auf die Startlinie aufgetragen. Nach zweimaliger Entwicklung in CHCI3/CH3OH/H2O/CH3COOH 50:30:8:4 wurde die UV-sichtbare Bande mit ca. 30 ml CHCI3/CH3OH 2: 1 extrahiert. Der nach Eingedampfen erhaltene Rückstand wurde durch Behandlung mit Aceton kristallisiert. Es wurden 1 8 mg reine Substanz in Form des Dinatriumsalzes von einer DC-Platte erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, (n-Propanol /konz. NHg/Wasser 66: 10:20) Rf = 0,54.
Beispiel 1 5
Thymidin-5'-hexadecylphosphonophosphat (Formel I: = C-| gH 3, n = 0, m = 1 ,
Nk = Thymidin-Rest)
Entsprechend der Vorschrift Beispiel 1 wurden 200 mg (0,65 mmol) Hexadecyl- phosphonat mit 514 mg (0,75 mmol) Thymidin-5'-monophosphomorpholidat (als 4- Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) umgesetzt. Die Reinigung der Substanz erfolgte wie in Beispiel 14 beschrieben. Bei 60 mg aufgetragener Substanz wurden 14 mg reine Substanz in Form des Dinatriumsalzes erhalten.
DC (Kieselgel 60 Merck-Fertigplatten, n-Propanol/konz. NH3/Wasser 66: 10:20), Rf = 0,55. Beispiel 16
Thymidin-5'-(2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1 -phosphono)phosphat (Formel I,
R = C1 6H33-0-CH2-CHCI-CH2-, n = 0, m = 1 , Nk = Thymidin-Rest)
Entsprechend Beispiel 1 wurden 200 mg (0,5 mmol) 2-Chlor-3-Hexadecyloxypropyl-1 - phosphonsäure mit 400 mg (0,48 mmol) Thymidin-5'-monophosphomorpholidat (als 4- Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) umgesetzt. Die Isolierung und Reinigung der Substanz erfolgte wie in Beispiel 1 angegeben. Es konnten 56 mg reine Substanz in Form des Dinatriumsalzes (Dihydrat) erhalten werden. DC (Kieselgel 60 Merck-Fertigplatten, Propanol/konz. NHg/Wasser 66: 10:20) Rf = 0,56.
Beispiel 17
Thymidin-5'-dodecyldiphosphat (Formel I: R = C.| 2^-25' n = 1 , m = 1 , Nk = Thymidin)
234 mg (0,88 mmol) Dodecylphosphat wurden mit 692 mg (1 ,01 mmol) Thymidin-5'- monophosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) umgesetzt. Der Ansatz wurde entsprechend Beispiel 1 aufgearbeitet. Die Isolierung und Reinigung der Substanz erfolgte wie in Beispiel 14 beschrieben. Bei 70 mg aufgetragener Substanz konnten 22 mg reine Substanz in Form des Dinatriumsalzes (Monohydrat) erhalten werden.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, n-Propanol /konz. NH3/Wasser 66:10:20) Rf = 0,54.
Beispiel 1 8
Thymidin-δ'-hexadecyldiphosphat (Formel I: R -=C| gH33, n = 1 , m = 1 , Nk = Thymidin-
Rest)
244 mg (0,508 mmol) Hexadecylphosphat wurden mit 400 mg (0,58 mmol) Thymidin- 5-monophosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) in ca. 35 ml abs. Pyridin nach Vorschrift Beispiel 1 umgesetzt. Die Isolierung und Reinigung der Substanz erfolgte mittels präparativer DC entsprechend Beispiel 14. Bei 70 mg aufgetragener Substanz konnten 18 mg reine Substanz in Form des Dinatriumsalzes (Dihydrat) erhalten werden.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, n-Propanol/konz. NH3/Wasser 66: 10:20) Rf = 0,55. Beispiel 1 9
Thymidin-5'-(2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1 )diphosphat (Formel I,: R = C-| gH33-0-CH2_
CHCI-CH2, n = 1 , m = 1 , NK = Thymidin-Rest)
Entsprechend Beispiel 1 wurden 288,4 mg (0,7 mmol) 2-Chlor-3-hexadecyloxypropyl-1 - phosphat mit 548 mg (0,8 mmol) Thymidin-5'-monophosphomorpholidat (als 4-
Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) umgesetzt und aufgearbeitet. Die entstandene Substanz wird, wie in Beispiel 1 beschrieben, gereinigt.
Es konnten 1 23 mg reine Substanz in Form des Dinatriumsalzes (Dihydrat) erhalten werden.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, Propanol/konz. NH3/Wasser 66: 10:20) Rf = 0,56.
Beispiel 20
Adenosin-5'-dodecylphosphonophosphat (Formel I: ^ = ^-\ 2^2 ' n = 0' nr. = 1 ,
Nk = Adenosin-Rest)
Eine Mischung von 250 mg ( 1 mmol) Dodecylphosphonat und 81 6,3 mg ( 1 , 1 5 mmol) Adenosin-δ'-monophosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidin- salz mit 1 ,5 Mol Wasser) wurde zweimal mit abs. Toluol einrotiert. Das erhaltene Gemisch wurde im Vakuum über P2O5 getrocknet, in 40-50 ml absol. Pyridin gelöst und bei Raumtemperatur gerührt. Die Umsetzung wurde mittels DC (CHCI3/CH3OH/H2O/- CH3COOH 50:30:8:4) verfolgt. Nach 70 h wurde das Pyridin abdestilliert und das Produkt in 1 5 ml Wasser, 30 ml CH3OH und 25 ml CHCI3 aufgenommen und mit 1 N Ameisensäure auf pH 4 eingestellt. Die obere Phase wurde nach dem Abtrennen zweimal mit Chloroform extrahiert. Die organischen Phasen wurden vereinigt, getrocknet, mit methanolischem NH3 bis auf pH 9 gebracht und bis zur Trockne eingeengt. Es wurden 178 mg erhalten.
Die erhaltenen Substanz wurde mittels HPLC über eine RP1 8-Säule gereinigt, sie fällt als freie Säure mit 2,5 mol Wasser an.
DC (Kieselgel 60 Merck-Fertigplatten, n-Propanol/konz. NH3/Wasser 66: 10:20) Rf = 0,52.
Beispiel 21
Adenosin-5'-hexadecylphosphonophosphat (Formel I: R = C^ gH33, n = 0, m = 1 ,
Nk = Adenosin-Rest)
Entsprechend Beispiel 20 wurden 300 mg (0,98 mmol) Hexadecylphosphonat mit 798,7 mg (1 , 13 mmol) Adenosin-5'-monophosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclo- hexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) umgesetzt. Es wurden 340 mg Rohprodukt erhalten. Die Isolierung und Reinigung der Substanz erfolgte wie unter Beispiel 20 beschrieben.
DC (Kieselgel 60 Merck-Fertigplatten, n-Propanol/konz. NHg/Wasser 66: 1 0:20)
Rf = 0,51 .
Beispiel 22
Adenosin-5'-(2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1 -phosphono)phosphat (Formel I:
R = C1 6H33"°"CH2"CHCI"CH2' n = 0' m = 1 ' Nk-Adenosin-Rest)
Entsprechend Beispiel 1 wurden 200 mg (0,5 mmol) 2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1 - phosphonsäure 409,2 mg (0,58 mmol) Adenosin-5'-monophosphomorpholidat (als 4- Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) umgesetzt. Die Aufarbeitung des Ansatzes und die Reinigung des Endproduktes erfolgte wie unter Beispiel 1 angegeben. Es wurden 94 mg reine Substanz in Form des Dinatriumsalzes erhalten.
DC ( Kieselgel 60 Merck-Fertigplatten, CH3CI/CH3OH/H20/CH3COOH 50:30:8:4) Rf = 0,38.
Beispiel 23
Adenosin-5'-dodecyldiphosphat (Formel I: R = Cj 2H2g, n = 1 , m = 1 , Nk = Adenosin-Rest)
Ensprechend dem Beispiel 20 wurden 300 mg (1 , 1 3 mol) Dodecylphosphat mit 91 9,57 mg ( 1 ,3 mmol) Adenosin-5'-monophosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'- dicyclohexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) umgesetzt. Es wurden 290 mg Rohprodukt erhalten. Die Aufarbeitung des Reaktionsgemisches und die Reinigung der Substanz erfolgte wie in Beispiel 20 angegeben.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, n-Propanol/konz. NHg/Wasser 66: 10:20) Rf = 0,52.
Beispiel 24
Adenosin-5'-hexadecyldiphosphat (Formel I: R = C-| gH 3, n = 1 , m = 1 , Nk = Adenosin- Rest)
Beispiel 20 entsprechend wurden 300 mg (0,92 mmol) Hexadecylphosphat mit 750 mg (1 ,07 mmol) Adenosin-5'-monophosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexyl- carboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) umgesetzt. Es wurden 1 60 mg Rohprodukt erhalten. Die Aufarbeitung des Reaktionsgemisches und die Reinigung der Substanz erfolgte wie unter Beispiel 20 angegeben.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten,n-Propanol/koπz. NH3/Wasser 66:10:20) Rf = 0,51 .
Beispiel 25
Adenosin-5'-(2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1 )diphosphat
(Formel I: R = C1 6H33-0-CH2-CHCI-CH2, n = 1 , m = 1 , Nk-Adenosin-Rest)
Entsprechend Beispiel 1 wurden 223 mg (0,54 mmol) 2-Chlor-3-hexadecyloxypropyl-1 - phosphat mit 438,8 mg (0,62 mmol) Adenosin-5'-monophosphomorpholidat (als 4- Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) umgesetzt. Die Aufarbeitung des Ansatzes und die Reinigung des Endproduktes erfolgte über eine CM- 52-Cellulose-Säule wie in Beispiel 1 dargestellt. Es wurden 123 mg reine Substanz in Form des Dinatriumsalzes erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, CH3CI/CH3θH/H20/CH3COOH 50:30:8:4) Rf = 0,38.
Beispiel 26
Ara-Cytidin-5-hexadecylphosphonophosphat (Formel I: •P- = ^-\ Q^33' n = 0, m = 1 ,
Nk = ara-Cytidin-Rest)
Eine Mischung von 310 mg (0,97 mmol) Hexadecylphosphonat und 758 mg 1 .09 mmol) ara-Cytidinmonophosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexylcarboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) wurde mehrmals mit trockenem Toluol einrotiert, über P2Og im Exsikkator nachgetrocknet, in 40 ml absolutem Pyridin gelöst und 16 Tage bei Raum¬ temperatur gerührt. Nach beendeter Reaktion wurde der Ansatz im Vakuum einrotiert und zweimal mit Toluol nachdestilliert. Der erhaltene Rückstand wurde in 60 ml CHCI3/- CH3OH/H2O 2:3:1 gelöst und nach Zugabe von 6 ml Ameisensäure 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Danach wurde die wäßrige Phase zweimal mit CHCI3 ausgeschüttelt. Die vereinigten CHC^-Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet und zur Trockne einrotiert. Das erhaltene Rohprodukt wurde säulenchromatographisch an 25 g CM-52-Cellulose gereinigt. Die Elution erfolgte zur Entfernung von Neben¬ produkten zunächst mit CHCI3, CHC^/Methanol-Gemischen 9:1 , 8:2. Dann wurde der Vlethanol-Anteil stufenweise bis zu einem Verhältnis von 1 :1 gesteigert. Die aus diesen Fraktionen erhaltene reine Substanz wird durch Behandlung mit Aceton kristallisiert. Es wurden 130 mg reine Substanz in Form des Dinatriumsalzes erhalten. DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, CH3CI/CH3OH/H20/CH3COOH 50:30:8:4) Rf = 0,46.
Beispiel 27
Ara-Cytidin-5'-octadecylphosphonophosphat (Formel I: R = Cι gH37, n = 0, m = 1 ,
Nk = ara-Cytidin-Rest)
Entsprechend Beispiel 26 wurden 300 mg (0,95mmol) Octadecylphosphonat und 750 mg (1 ,05mmol) ara-Cytidinmonophosphomorpholidat (als 4-Morpholin-N,N'-dicyclohexyl- carboxamidinsalz mit 1 ,5 Mol Wasser) bei 35°C umgesetzt. Die Aufarbeitung des Reaktionsgemisches sowie die Isolierung des Produktes erfolgte wie in Beispiel 26 dargestellt über eine CM-52-SÄule. Es wurden 130 mg reine Substanz in Form des Dinatriumsalzes erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, CH3CI/CH3OH/H20/CH3COOH 50:30:8:4) Rf = 0,45.
Beispiel 28
Ara-Cytidin-5'-hexadecyldiphosphat (Formel I: R -= C-| gH3**7, n = 1 , m = 1 , Nk = ara- Cytidin-Rest)
Entsprechend Beispiel 26 wurden 310 mg (0,97 mmol) Hexadecylphosphat mit 758 mg (1 , 1 mmol) ara-Cytidinmonophosphomorpholidat bei Raumtemperatur umgestzt. Die Aufarbeitung des Reaktionsgemisches sowie die Isolierung des Produktes erfolgte wie in Beispiel 26 dargestellt über eine CM-52-SÄule. Es wurden 100 mg reine Sbstanz in Form des Dinatriumsalzes erhalten.
DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, CH3CI/CH3OH/H20/CH3COOH 50:30:8:4) Rf = 0,46.
Beispiel 29
Ara-Cytidin-5'-octadecyldiphosphat (Formel I: = C-| gH37, n = 1 , m = 1 , Nk = ara- Cytidin-Rest)
Entsprechend Beispiel 26 aus 278 mg (0,97 mmol) Octadecylphosphat und 750 mg (1 ,05 mmol) ara-Cytidinmonophosphomorpholidat bei Raumtemperatur umgesetzt. Die Aufarbeitung des Reaktionsgemisches sowie die Isolierung des Produktes erfolgte wie in Beispiel 26 dargestellt über eine CM-52-SÄule. Es wurden 178 mg reine Sbstanz in Form des Dinatriumsalzes erhalten. DC (Kieselgel 60, Merck-Fertigplatten, CH3CI/CH3OH/H20/CH3COOH 50:30:8:4) Rf = 0,46.

Claims

Patentansprüche
1 . Neue Nukleosid-Lipid-Addukte der allgemeinen Formel I einschließlich aller enantiomeren Formen sowie sämtlicher pharmazeutisch einsetzbarer Salze dieser Verbindungen,
worin
a) R einen geradkettigen oder verzweigten, gesättigten oder einen ein- oder mehrfach ungesättigten, unsubstituierten oder ein- oder mehrfach durch Halogen, Hydroxy, Alkoxy oder Cyano substituierten Kohlenwasserstoffrest mit 1 -22 C-Atomen bedeutet, oder
b ) R CH - A CH - A
I I
CH - B oder CH -
I l
ist, worin
A gesättigtes oder ein- oder mehrfach ungesättigtes, unsubstituiertes oder ein- oder mehrfach durch Halogen, Hydroxy, Alkoxy oder Cyano substituiertest C5-C3Q )- Alkoxy bzw. -Alkenoxy
bedeutet ,
B eine der für A gegebenen Bedeutungen hat oder Wasserstoff, Hydroxy, Halogen, Cyano, Acyloxy ( C2-C22 ) oder eine Gruppe der allgemeinen Formel 0-(CH2)χCF3 , wobei x für 0-3 steht, bedeutet,
c) Nk einen Nukleosid-, vorzugsweise Cytidin-, 2'-Desoxycytidin-, Thymidin-, Adenosin- und ara-Cytidin-Rest bedeutet,
d) n für 0 oder 1 und m für 1 oder 2 steht.
2. Cytidin-5'-alkylphosphonophosphate der Formel I, in der R die bereits genannten Bedeutungen besitzt, n = 0, m = 1 ist und Nk einen Cytidin-Rest bedeutet, und deren Salze.
3. Cytidin-5'-alkylphosphonodiphosphate der Formel I, in der R die bereits genannten Bedeutungen besitzt, n = 0, m = 2 ist und Nk einen Cytidin-Rest bedeutet, und deren Salze.
4. Cytidin-5'-alkyltriphosphate der Formel I, in der R die bereits genannten Bedeutungen besitzt, n = 1 , m = 2 ist und Nk einen Cytidin-Rest bedeutet, und deren Salze
5. 2'-Desoxycytidin-5'-alkylphosphonophosphate der Formel I, in der R die bereits genannten Bedeutungen besitzt, n = 0, m = 1 ist und Nk einen 2'-Desoxycytidin-Rest bedeutet, und deren Salze.
6. 2'-Desoxycytidin-5'-alkyldiphosphate der Formel I, in der R die bereits genannten Bedeutungen besitzt, n = 1 , m = 1 und Nk einen 2'-Desoxycytidin-Rest bedeutet, und deren Salze.
7 .Thymidin-5'-alkylphosphonophosphate der Formel I, in der R die bereits genannten Bedeutungen besitzt, n = 0, m = 1 ist und Nk einen Thymidin-Rest bedeutet, und deren Salze.
8. Thymidin-5'-alkyldiphosphate der Formel I, in der R die genannten Bedeutungen besitzt, n = 1 , m = 1 ist und Nk einen Thymidin-Rest bedeutet, und deren Salze.
9. Adenosin-5'-alkylphosphonophosphate der Formel I, in der R die bereits genannten Bedeutungen besitzt, n = 0, m = 1 ist und Nk einen Adenosin-Rest bedeutet, und deren Salze.
10. Adenosin-5'-alkyldiphosphate der Formel I, in der R die genannten Bedeutungen besitzt, n = 1 , m = 1 ist und Nk einen Adenosin-Rest bedeutet, und deren Salze.
1 1 . Ara-Cytidin-5'-alkylphosphonophosphate der Formel I, in der R die bereits genannten Bedeutungen besitzt, n = 0, m = 1 ist und Nk einen ara-Cytidin-Rest bedeutet, und deren Salze.
12. Ara-Cytidin-5'-alkyldiphosphate der Formel I, in der R die bereits genannten Bedeutungen besitzt, n = 1 , m = 1 ist und Nk einen ara-Cytidin-Rest bedeutet, und deren Salze.
13. Ara-Cytidin-δ'-alkylphosphonodiphosphate, der Formel I, in der R die bereits genannten Bedeutungen besitzt, n = 0, m = 2 ist und Nk einen ara-Cytidin-Rest bedeutet, und deren Salze.
14. Ara-Cytidin-5'-alkyltriphosphate der Formel I, in der R die bereits genannten Bedeutungen besitzt, n = 1 , m = 2 ist und Nk einen ara-Cytidin-Rest bedeutet, und deren Salze.
15. Cytidin-5'-octylphosphonophosphat (Formel I: R = CgH-j , n = 0, m = 1 , Nk = Cytidin- Rest)
16. Cytidin-5'-dodecylphosphonophosphat (Formel I: R = Cj 2H25' n = 0, m = 1 , Nk = Cytidin-Rest)
17. Cytidin-5'-tetradecylphosphonophosphat (Formel I: R = C^ 4H25< n = 0, m = 1 , Nk = Cytidin-Rest)
18. Cytidin-5'-hexadecylphosphonophosphat (Formel I: R -*= C| gH33, n = 0, m = 1 , Nk = Cytidin-Rest)
19. Cytidin-5'-octadecylphosphonophosphat (Formel I: R -= C- gH3*7, n = 0, m = 1 , Nk = Cytidin-Rest)
20. Cytidin-5'-(3-hexadecyloxypropyl-1 -phosphono)phosphat (Formel I: = C-| gH33-0- (CH2)3, n = 0, m = 1 , Nk = Cytidin-Rest)
21. Cytidin-5'-(2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1-phosphono)phosphat (Formel I: R = C16H33"°"CH2"CHCI"CH2' n = 0' m = 1' Nk = Cytidin-Rest)
22. Cytidin-5'-hexadecylphosphonodiphosphat (Formel I, = C| H33, n = 0, m = 2, Nk = Cytidin-Rest)
23. Cytidin-5'-hexadecyltriphosphat (Formel I, R = n = 0, m = 2, Nk = Cytidin- Rest)
24.2'-Desoxycytidin-5'-dodecylphosphonophosphat (Formel I: = C.|2H25. n = 0, m = 1, Nk = 2'-Desoxycytidin-Rest)
25.2'-Desoxycytidin-5'-hexadecylphosphonophosphat (Formel I: n = 0, m = 1 , Nk = 2-Desoxycytidin-Rest)
26.2'-Desoxycytidin-5'-dodecyldiphosphat (Formel I: n = 1, m = 1, Nk = 2'- Desoxycytidin-Rest)
27.2'-Desoxycytidin-5'-hexadecyldiphosphat (Formel I: R = C-|gH33, n = 1, m = 1, Nk = 2'-Desoxycytidin-Rest)
28. Thymidin-5'-dodecylphosphonophosphat (Formel l:R = n = 0, m = 1, Nk = Thymidin-Rest)
29. Thymidin-5'-hexadecylphosphonophosphat (Formel I: = n = 0, m = 1, Nk = Thymidin-Rest)
30. Thymidin-5'-(2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1-phosphono)phosphat (Formel I, R = C16H33-0-CH2-CHCI-CH2-, n = 0, m = 1, Nk = Thymidin-Rest)
31. Thymidin-5'-dodecyldiphosphat (Formel I: R = C|2H25' n = 1, m = 1, Nk = Thymidin)
32. Thymidin-5'-hexadecyldiphosphat (Formel I: R = C-ιgH 3, n = 1, m = 1, Nk = Thymidin-Rest)
33. Thymidin-5'-(2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1)diphosphat (Formel I,: R CH2.CHCI-CH2, n=1, m = 1, NK = Thymidin-Rest)
34. Adenosin-5'-dodecylphosphonophosphat (Formel I: = Ci2l~-25' n = 0/ m = 1, Nk = Adenosin-Rest)
35. Adenosin-5'-hexadecylphosphonophosphat (Formel I: R = CιgH33, n = 0, m = 1, Nk = Adenosin-Rest)
36. Adenosin-5'-(2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1-phosphono)phosphat (Formel I: R = C16H33-0-CH2-CHCI-CH2, n = 0, m = 1, Nk-Adenosin-Rest)
37. Adenosin-5'-dodecyldiphosphat (Formel I: R = C-*2H25- n=1, m = 1, Nk = Adenosin- Rest)
38. Adenosin-5'-hexadecyldiphosphat (Formel I: R = Ci6*"-33' n=1, m = 1, Nk = Adenosin-Rest)
39. Adenosin-5'-(2-chlor-3-hexadecyloxypropyl-1)diphosphat (Formel I: CH2-CHCI-CH2, n = 1, m = 1, Nk-Adenosin-Rest)
40. Ara-Cytidin-5-hexadecylphosphonophosphat (Formel I: R = C|gH33, n = 0, m = 1, Nk = ara-Cytidin-Rest)
41. Ara-Cytidin-5'-octadecylphosphonophosphat (Formel I: n = 0, m = 1, Nk = ara-Cytidin-Rest)
42. Ara-Cytidin-5'-hexadecyldiphosphat (Formel I: R = C1gH3 , n=1, m = 1, Nk = ara- Cytidin-Rest)
43. Ara-Cytidin-5'-octadecyldiphosphat (Formel I: = C1gH3*7, n=1, m = 1, Nk = ara- Cytidin-Rest)
44. Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel I, dadurch gekennzeichnet, daß eine Verbindung der allgemeinen Formel II,
0 I)
(O) n P - OH II
OH in der R und n die für die Verbindung I genannte Bedeutung hat, mit einem Nucleosid-5'- phosphoamidat, vorzugsweise Nukleosid-5'-monophosphomorpholidat kondensiert wird oder ein sich von dem Phosphat bzw. Phosphonat II ableitendes Amidat mit einem Nukleosid-5'-monophosphat kondensiert wird.
45. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel I, in der m = 2 ist und R, n und Nk die bereits genannten Bedeutungen besitzen, dadurch gekennzeichnet, daß man eine Verbindung der allgemeinen Formel II, in der R und n die für Formel I genanten Bedeutungen besitzt, mit einem Nuleosid-5'-diphosphoamidat umsetzt oder ein sich von dem Phosphat bzw. Phosphonat der allgemeinen Formel II sich ableitendes Amidat mit einem Nukleosid-5'-diphosphat umsetzt oder eine Verbindung der allgemeinen Formel III,
0 0 II II
R - (0) n - P - O - P - OH III
1 I
OH OH
in der R und n die bereits genannten Bedeutungen besitzen, mit einem Nukleosid-5'- monophospoamidat umsetzt oder ein sich von dem Diphosphat bzw. Phophonophosphat der allgemeinen Formel III sich ableitendes Amidat mit einem Nukleosid-5'- monophosphat umsetzt.
46. Cytostatikum, das als Wirkstoff eine oder mehrere Verbindungen der allgemeinen Formel I enthält.
47. Cytostatikum, das 3-5 % Wirkstoff der Formel I neben den pharmazeutisch üblichen Träger- und Zusatzstoffen enthält.
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