EA035372B1 - Флагеллиновые композиции и их применение - Google Patents

Флагеллиновые композиции и их применение Download PDF

Info

Publication number
EA035372B1
EA035372B1 EA201790273A EA201790273A EA035372B1 EA 035372 B1 EA035372 B1 EA 035372B1 EA 201790273 A EA201790273 A EA 201790273A EA 201790273 A EA201790273 A EA 201790273A EA 035372 B1 EA035372 B1 EA 035372B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
mutant
artificial sequence
flagellin
radiation
polypeptide
Prior art date
Application number
EA201790273A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201790273A1 (ru
Inventor
Вадим Метт
Original Assignee
Джиноум Протекшн, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Джиноум Протекшн, Инк. filed Critical Джиноум Протекшн, Инк.
Publication of EA201790273A1 publication Critical patent/EA201790273A1/ru
Publication of EA035372B1 publication Critical patent/EA035372B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/164—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0013—Therapeutic immunisation against small organic molecules, e.g. cocaine, nicotine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55516—Proteins; Peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55583—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
    • A61K2039/55594—Adjuvants of undefined constitution from bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
    • C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится к композициям, содержащим улучшенные конструкции, относящиеся к флагеллину, и способам их применения при лечении различных заболеваний.

Description

Область техники, к которой относится изобретение
Настоящее изобретение относится к способам и композициям, которые можно применять для лечения, профилактики и/или диагностики различных заболеваний, включая рак и радиационноассоциированные заболевания.
Описание текстового файла, представленного в электронном виде
Содержание текстового файла, представленного в электронном виде вместе с данной заявкой, полностью включено в настоящее описание посредством ссылки: Копия перечня последовательностей в машиночитаемом формате (название файла:CLE-016РС-SequenceListing.txt; дата записи: 28 июля 2015 г.; размер файла:245 кБ).
Уровень техники
Toll-подобные рецепторы (TLR) представляют собой мембранные гликопротеины I типа, которые являются ключевыми рецепторами врожденного иммунитета. Известные у человека 10 TLR распознают различные микробиологические антигены и при активации связыванием с лигандом опосредуют быструю выработку цитокинов и хемокинов. Дополнительно к их роли в осуществлении иммунной защиты организма хозяина TLR играют роль в прогрессировании и развитии рака и защите клеток.
TLR5 связывает флагеллин, глобулярный белок, который сворачивается в полый цилиндр с образованием филамента в бактериальных жгутиках. Связывание флагеллина с TLR5 инициирует каскад провоспалительных молекул, в особенности фактора NF-кВ и его мишеней. Агонисты TLR5, полученные из флагеллина, разрабатывают в качестве лекарственных средств для различных заболеваний. Однако данные молекулы могут страдать от специфических ограничений, включая, например, неудовлетворительные связывание и активацию сигнализации. Дополнительно, многие возможные организмы хозяева уже вырабатывают анти-флагеллиновые антитела, которые также направленно воздействуют на производные агонистов TLR5, таким образом, выводя из организма лекарственные средства и ограничивая их эффективность. Кроме того, по своей природе иммуногенные бактериальные белки - производные флагеллина могут обладать неблагоприятной антигенностью и иммуногенностью и, таким образом, требовать улучшения.
Сущность изобретения
Соответственно, согласно настоящему изобретению предложены композиции, относящиеся к флагеллину, и способы, которые преодолевают ограничения, наблюдаемые среди данной группы биологических лекарственных препаратов. Настоящее изобретение основано, в частности, на открытии, что минимизированные конструкции композиций, относящихся к флагеллину, могут демонстрировать сниженную иммуногенность и улучшенную фармакокинетику, вместе с тем все еще сохраняя способность активировать сигнальный путь TLR5. В одном из аспектов согласно настоящему изобретению предложена композиция, относящаяся к флагеллину, которая сохраняет способность активировать сигнальный путь TLR5. В дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит мутации, которые снижают антигенность и иммуногенность конструкции. В дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, не распознается антителами, нейтрализующими флагеллин (FliC). В еще одном дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, активирует сигнальный путь TLR5 на том же или похожем уровне, как композиция, относящаяся к полноразмерному флагеллину. В дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, демонстрирует улучшенную фармакокинетику по сравнению с композицией, относящейся к полноразмерному флагеллину. В еще одном дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, демонстрирует увеличенное время задержки в организме. В некоторых вариантах реализации композиция, относящаяся к флагеллину, получена из CBLB502 (SEQ ID NO: 2). В дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит укороченный один или более доменов. В дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит делецию в N-концевом домене. В еще одном дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит делецию в домене ND0. В еще одном дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит делецию всего домена ND0. В дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит делецию в С-концевом домене. В еще одном дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит делецию в домене CD0. В еще одном дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, сохраняет аминокислоты в положениях 470-485 домена CD0. В еще одном дополнительном варианте реализации, композиция, относящаяся к флагеллину, представляет собой CBLB502-S33 (SEQ ID NO: 17).
В некоторых вариантах реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит мутации в эпитопах, распознаваемых нейтрализующими анти-CBLB502 антителами. В некоторых вариантах реали- 1 035372 зации композиция, относящаяся к флагеллину, включает одну или более мутаций в эпитопах, распознаваемых нейтрализующими анmи-CBLB502 антителами, которые ингибируют способность антител нейтрализовывать композицию. В еще одном дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, включает усеченный вариант одного или более эпитопов и мутацию в одном или более эпитопах, распознаваемых нейтрализующими анти-CBLB502 антителами. В дополнительном варианте реализации мутации содержат замену остатков эпитопа аланином. В дополнительном варианте реализации мутации выбирают из одной или более мутаций D42A, A45G, N68A, N100A, Т102А, S104A, S106A, D107A, S110A, D113A, Q117A, Е120А, R124A, N127A, Q128A, F131A, N132A, G133A, Q142A, К144А, D151A, G152A, Е153А, Т154А, Q439A, N440A, R441A, D443A, S444A, T447A, N448A, N451A, N455A, N457A, R460A, Y468A, A469G, Т470А, S473A и N474Q. В дополнительном варианте реализации мутировавшие эпитопы содержат один или более следующих остатков: E153, S444, T154, N440, Q142, F131, D443, N68, Т447, S110, Q117, R124, D113, E120, N127 и Q128. В дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, представляет собой CBLB502-S33MX/CBLB543 (SEQ ID NO: 150). В еще одном дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, представляет собой CBLB502-485CT/BCLB533 (SEQ ID NO: 71).
В некоторых вариантах реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит метку. В еще одном дополнительном варианте реализации метка прикреплена к N-концу композиции, относящейся к флагеллину. В еще одном дополнительном варианте реализации метка прикреплена к С-концу композиции, относящейся к флагеллину. В некоторых вариантах реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит гибкий линкер. В дополнительном варианте реализации гибкий линкер содержит последовательность SEQ ID NO: 16. В еще одном дополнительном варианте реализации гибкий линкер содержит последовательность SEQ ID NO: 242. В некоторых вариантах реализации композиция, относящаяся к флагеллину, кодируется любой из нуклеотидных последовательностей, перечисленных в табл. 1. В дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит любой из полипептидов, перечисленных в табл. 1.
В некоторых вариантах реализации композиция, относящаяся к флагеллину, активирует путь сигнализации TLR5. В дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, индуцирует экспрессию NF-кВ. В еще одном дополнительном варианте реализации минимизированная композиция, относящаяся к флагеллину, индуцирует экспрессию одного или более цитокинов. В еще одном дополнительном варианте реализации цитокины выбирают из интерлейкина-6 (ИЛ-6), интерлейкина-12 (ИЛ-12), хемоаттрактанта кератиноцитов (KC), интерлейкина-10 (ИЛ-10), гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ), моноцитарного хемоаттрактантного белка 1 (МСР-1), фактора некроза опухолей альфа (ФНО-α; TNF-α), моноцитокина, индуцируемого интерфероном гамма (MIG) и макрофагального белка воспаления 2 (MIP-2).
В одном из аспектов согласно настоящему изобретению предложена фармацевтическая композиция, содержащая композицию, относящуюся к флагеллину, согласно настоящему изобретению с фармацевтически приемлемым носителем. В одном из аспектов согласно настоящему изобретению предложен способ стимулирования сигнального пути TLR5, включающий введение композиции, относящейся к флагеллину, согласно настоящему изобретению субъекту, который нуждается в этом. В некоторых вариантах реализации субъект страдает раком. В дополнительном варианте реализации опухоль экспрессирует TLR5. В дополнительном варианте реализации опухоль не экспрессирует TLR5. В еще одном дополнительном варианте реализации рак выбирают из рака молочной железы, рака легких, рака толстой кишки, рака почки, рака печени, рака яичников, рака предстательной железы, рака яичка, рака мочеполового тракта, рака лимфатической системы, рака прямой кишки, рака поджелудочной железы, рака пищевода, рака желудка, рака шейки матки, рака щитовидной железы, рака кожи, лейкоза, острого лимфобластного лейкоза, острого лимфобластного лейкоза, В-клеточной лимфомы, Т-клеточной лимфомы, лимфомы Ходжкина, неходжкинской лимфомы, волосатоклеточной лимфомы, гистиоцитарной лимфомы, а также лимфомы Бёркитта, острых и хронических миелогенных лейкозов, миелодиспластического синдрома, миелоидного лейкоза, промиелоцитарного лейкоза, астроцитомы, нейробластомы, глиомы, неврином, фибросаркомы, рабдомиосаркомы, остеосаркомы, ксеродермы пигментной, кератоакантомы, семиномы, фолликулярного рака щитовидной железы, тератокарциномы и раковых заболеваний желудочнокишечного тракта или брюшной полости и таза.
В некоторых вариантах реализации субъект страдает от радиационно-индуцированного повреждения. В дополнительном варианте реализации субъект подвергался летальной дозе радиации. В еще одном дополнительном варианте реализации субъект проходит лечение радиацией. В другом варианте реализации композицию, относящуюся к флагеллину, вводят перед воздействием радиации. В еще одном варианте реализации композицию, относящуюся к флагеллину, вводят во время воздействия радиации. В еще одном варианте реализации композицию, относящуюся к флагеллину, вводят после воздействия радиации.
В некоторых вариантах реализации субъект страдает от реперфузионного повреждения. В дополнительном варианте реализации реперфузия вызвана повреждением. В дополнительном варианте реализа- 2 035372 ции повреждение представляет собой ишемию или гипоксию. В дополнительном варианте реализации композицию, относящуюся к флагеллину, вводят перед притоком кислорода. В дополнительном варианте реализации композицию, относящуюся к флагеллину, вводят во время притока кислорода. В дополнительном варианте реализации композицию, относящуюся к флагеллину, вводят после притока кислорода.
В различных вариантах реализации композицию, относящуюся к флагеллину, вводят в сочетании с другими лекарственными средствами и/или способами лечения. В дополнительном варианте реализации композицию, относящуюся к флагеллину, вводят в сочетании с химиотерапией. В дополнительном варианте реализации композицию, относящуюся к флагеллину, вводят с лучевой терапией. В дополнительном варианте реализации композицию, относящуюся к флагеллину, вводят в сочетании с антиоксидантом. В дополнительном варианте реализации композицию, относящуюся к флагеллину, вводят в сочетании с амифостином и/или витамином E. В некоторых вариантах реализации композицию, относящуюся к флагеллину, вводят перед применением других лекарственных средств и/или способов лечения. В дополнительных вариантах реализации композицию, относящуюся к флагеллину, вводят одновременно с другими лекарственными средствами и/или способами лечения. В еще одних дополнительных вариантах реализации композицию, относящуюся к флагеллину, вводят после других лекарственных средств и/или способов лечения.
В одном из аспектов согласно настоящему изобретению предложен способ лечения рака, включающий введение композиции, относящейся к флагеллину, согласно настоящему изобретению субъекту, который в этом нуждается.
В одном из аспектов согласно настоящему изобретению предложен способ лечения радиационноиндуцированного повреждения, включающий введение композиции, относящейся к флагеллину, согласно настоящему изобретению субъекту, который в этом нуждается.
В одном из аспектов согласно настоящему изобретению предложен способ лечения реперфузионного повреждения, включающий введение композиции, относящейся к флагеллину, согласно настоящему изобретению субъекту, который в этом нуждается.
Детали изобретения изложены в прилагаемом описании ниже. Хотя способы и материалы, подобные или эквивалентные тем, которые описаны в данном документе, можно использовать при практическом выполнении или тестировании настоящего изобретение, сейчас будут описаны иллюстративные способы и материалы. Другие признаки, цели и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из описания и из формулы изобретения. В описании и прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают также формы множественного числа, если из контекста явно не следует иное. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в настоящем описании, имеют такое же значение, которое обычно понимается средним специалистом в данной области техники, к которой относится настоящее изобретение.
Краткое описание чертежей
На фиг. 1А и 1В показаны 13 консервативных аминокислот флагеллина, которые могут быть важными для активности TLR5. На фиг. 1А и 1В показан сравнительный анализ аминокислотных последовательностей консервативных аминоконцов (фиг. 1А) и карбоксиконцов (фиг. 1В) из 21 вида бактерий. 13 консервативных аминокислот, важных для активности TLR5, затемнены. Аминокислотные последовательности идентифицированы по их номерам доступа в базе TrEMBL (первая буква = Q) или Swiss-Prot (первая буква = P).
На фиг. 2 показаны ранние данные анализа соотношения структура-активность (SAR), отражающего вклад отдельных сегментов и целых доменов CBLB502 в эффективность связывания и активации сигнализации. Относительные значения аффинности связывания и активации сигнализации получали с использованием, соответственно, биохимического анализа флуоресцентный поляризацией (ФП) и анализа на клетках репортерного гена и проводили нормализацию по CBLB502. Анализы осуществляли для серии мутаций в пределах прогнозируемых первичной и вторичной пограничных поверхностей димеризации (А), а также для делеции более крупных сегментов или целых доменов D0 или D1 (В), как показано в виде схем вверху графика. На фиг. 3 показаны структурные области, участвующие во взаимодействии между эктодоменом TLR5 и доменом D1 белка CBLB502 (FliC). Обратите внимание на вклад петлей LRR 7 и 9 (характерных для семейства TLR5) в высокоаффинные первичные взаимодействия.
На фиг. 4 в областях А-Е показана эффективность активации сигнализации у мутантов CBLB502 у мышей с репортерным геном люциферазы под контролем NF-kB. Графики показывают активность люциферазы под контролем NF-kB у репортерных мышей после подкожного введения конструкций (A) CBLB502, (В) DIM2, (С) DIM1, (D) PIM и (Е) SY3. Активность измеряли в печени, селезенке, толстой кишечнике и мочевом пузыре мышей.
На фиг. 5 показана итеративная минимизация композиции, относящейся к флагеллину, CBLB502. Конструкции S33 и 33ML сохраняют практически полную сигнальную активность in vitro. На схематические изображения показывают доменную организацию, включая спейсер и метку.
На фиг. 6 в областях А и В показано, что минимизированный вариант CBLB502-S33 демонстрирует, по существу, более высокую сигнальную активность in vivo по сравнению с CBLB502. Репортерным
- 3 035372 мышам с люциферазным геном под контролем NF-κΒ вводили подкожно (п/к) 0,1 мкг CBLB502 (А) или
S33 (В) и получали изображение спустя 3 ч. Результаты измерений в отдельных органах показаны на фиг. 4.
На фиг. 7 в областях А-Н показано, что минимизированный вариант CBLB502-S33 демонстрирует, по существу, более высокую сигнальную активность in in vivo по сравнению с CBLB502, и эффект был особенно выражен в мочевом пузыре и толстой кишке. Устанавливали эффективность активации сигнализации белками CBLB502 и CBLB502-S33 у репортерных мышей с геном люциферазы под контролем NF-kB (п/к инъекция указанных доз и сбор органов спустя 3 ч) путем анализа люциферазной активности в собранных органах.
На фиг. 8 в областях А и В показано, что минимизированный вариант CBLB502-S33 демонстрирует большую активность в отношении защиты против облучения летальными дозами у мышей по сравнению с CBLB502. Область А. На графике Каплана-Мейера показана динамика выживаемости у мышей линии C57/BL6, которым провели инъекцию CBLB502 или CBLB502-S33 за 30 мин перед тотальным облучением тела дозой 9,5 Гр (по сравнению с контролем плацебо). Область В. Дозозависимость при 30-дневной выживаемости (%).
На фиг. 9 показано, что более высокая сигнальная активность и радиопротекторная активность CBLB502-S33 коррелирует с более интенсивной выработкой цитокинов (анализ фармакодинамики (ФД)) у мышей по сравнению с CBLB502, включая существенные для механизма биомаркеры Г-КСФ и ИЛ-6. Мышам вводили 1 или 2 мкг/кг белка CBLB502 или S33.
На фиг. 10 показано, что минимизированный вариант CBLB502-S33 демонстрирует лучшую фармакокинетику (ФК) (более высокие уровни в плазме) у мышей по сравнению с CBLB502.
На фиг. 11 показана супрессия люциферазной активности в лизатах печени мыши как средство измерения нейтрализации in vivo CBLB502 путем инъекции антисывороток и антител (нейтрализующих или не нейтрализующих) репортерным мышам (3 мыши/группа). Вводили внутривенно мышам фосфатный буферный раствор (ФБР), не нейтрализующую сыворотку человека, нейтрализующую сыворотку (D15), не нейтрализующее моноклональное антитело (MAT) 7C или нейтрализующее моноклональное антитело (MAT) 11D. Спустя час вводили подкожно конструкцию CBLB502. Величину люциферазной активности измеряли спустя три часа после введения CBLB502. Образцы сыворотки мышей собирали перед введением CBLB502. Сыворотки крови человека разбавляли в 10 раз ФБР для инъекций. Оба моноклональных антитела, 7С и 11D, вводили в концентрации 2 мг/мл в ФБР.
На фиг. 12 в областях А и В показаны схематические диаграммы конструкций (А) 445 (SEQ ID NO: 54) и (В) 467 (SEQ ID NO: 62).
На фиг. 13 в областях А-С показаны примеры прогнозируемых без ограничения теорией структурных эпитопов, использованных для разработки производных CBLB502.
На фиг. 14 показано, что конструкция CBLB502-33MX демонстрирует существенную элиминацию нейтрализующей антигенности. На графике показан профиль CBLB502-33MX по сравнению с CBLB502 и его укороченным вариантом CBLB502-ML на панели сывороток крови человека с измеряемым титром нейтрализующих CBLB502 антител.
На фиг. 15 показан количественный анализ CBLB502 и CBLB502-33MX в образцах плазмы мыши. НПКО - ниже предела количественного определения. В области А показаны исходные данные, тогда как в области В показано графическое представление данных в области A. CBLB502-33MX имеет очень похожие ФК свойства, как и родительский белок CBLB502, т.е. он выводится из кровотока приблизительно с той же скоростью.
На фиг. 16 показаны профили цитокинов для анализа ФД свойств CBLB502-33MX по сравнению с CBLB502. CBLB502-33MX имеет очень схожий ФД профиль с родительским белком CBLB502.
На фиг. 17 показана люциферазная активность в органах мыши после лечения CBLB502, CBLB502S33 и CBLB502-33MX.
На фиг. 18 показана шкала оценки повреждений для диапазона доз 33MX по сравнению с дозой CBLB502.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение основано, в частности, на открытии определенных мутаций флагеллина, которые улучшают фармакологически значимые свойства данных биологических и родственных средств. Подобные мутации дают разнообразные композиции, относящиеся к флагеллину, которые в качестве неограничивающего примера имеют измененную антигенность и иммуногенность относительно композиций без мутаций. Композиции, относящиеся к флагеллину, сохраняют способность активировать сигнальный путь TLR5 на том же или похожем уровне, как композиция, относящаяся к полноразмерному флагеллину.
Композиции, относящиеся к флагеллину.
Настоящее изобретение основано, в частности, на открытии, что минимизированные конструкции композиций, относящихся к флагеллину, могут демонстрировать сниженную иммуногенность, вместе с тем все еще сохраняя способность активировать сигнальный путь TLR5 на том же или похожем уровне,
- 4 035372 как композиция, относящаяся к полноразмерному флагеллину. Сниженная иммуногенность позволяет конструкции оставаться в организме хозяина дольше, чем композиции, относящиеся к полноразмерному флагеллину. Вполне возможно удалить по меньшей мере половину эндогенного сегмента C_D0, оставляя только его N-концевую половину (470-485), кэппированную С-концевой His-меткой, и все еще сохранить большую часть способности молекулы активировать путь сигнализации TLR5. Наличие кэпа может быть существенным для осуществления активности, так как вариант 33-485 теряет приблизительно 90% сигнальной активности. Эти наблюдения в совокупности предполагают, что домен D_0 вносит только незначительный (если вообще какой-либо) вклад в прямые взаимодействия с TLR5, и его роль может быть ограничена поддержанием структурной целостности домена D1. Напротив, оставшийся сегмент C_D0 (470-485) не может быть удален или заменен С-концевой половиной C_D0 (485-504) или другими последовательностями.
В различных вариантах реализации согласно настоящему изобретению предложены композиции, относящиеся к флагеллину. В некоторых вариантах реализации согласно настоящему изобретению предложены композиции, относящиеся к флагеллину, которые имеют (1) улучшенные фармакологические свойства, включая сниженную антигенность и иммуногенность, что, например, позволяет применять их при широком спектре различных болезненных состояний и типов пациентов, и/или (2) улучшенные функциональные свойства, что, например, обеспечивает улучшенное медицинское воздействие.
Композиции, относящиеся к флагеллину, могут представлять собой полипептид, относящийся к флагеллину. Композиции, относящиеся к флагеллину, могут быть из разных источников, включая разнообразные грамположительные и грамотрицательные бактериальные виды. В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, могут иметь аминокислотную последовательность, которая получена из любого флагеллина, полученного от бактериальных видов, описанных на фиг. 7 в публикации патента США № 2003/0044429, содержание которой, таким образом, включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме. Композиции, относящиеся к флагеллину, могут представлять собой полипептиды, относящиеся к флагеллину, перечисленные на фиг. 7 в публикации панента США № 2003/0044429, которые находятся в открытом доступе в источниках, включая базу данных Genbank NCBI. Композиции, относящиеся к флагеллину, могут представлять собой основной компонент бактериального жгутика. Композиции, относящиеся к флагеллину, могут состоять из одного, или двух, или трех, или четырех, или пяти, или шести доменов или их фрагментов (см., например, фиг. 10 в патенте США № 8324163, полное содержание которого включено в настоящий документ посредством ссылки). Домены могут быть выбраны из доменов ND0, ND1, ND2, D3, CD2, CD1 и CD0. Домены 0 (D0), 1 (D1) и 2 (D2) могут быть прерывистыми и могут образовываться при расположении остатков N-конца или С-конца бок о бок друг с другом с образованием шпилечной структуры. N- и С-конец, содержащие домены D1 и D2, могут являться наиболее консервативными, тогда как средний гипервариабельный домен (D3) может быть высоковариабельным. Неконсервативный домен D3 может находиться на поверхности жгутикового филамента и может содержать основные антигенные эпитопы. Мощная провоспалительная активность флагеллина может располагаться в высококонсервативных областях ND1, ND2, CD1 и CD2.
Композиции, относящиеся к флагеллину, могут быть получены из вида Salmonella, типичными примерами которого являются S. typhimurium и S. dublin (кодируемые последовательностью с учетным номером GenBank M84972). Полипептид, относящийся к флагеллину, может представлять собой фрагмент, вариант, аналог, гомолог или производное флагеллина дикого типа (SEQ ID NO: 1) или их комбинацию. Фрагмент, вариант, аналог, гомолог или производное флагеллина можно получить путем рационального дизайна на основе доменной структуры флагеллина и консервативной структуры, распознаваемой TLR5.
Композиции, относящиеся к флагеллину, могут относиться к полипептиду флагеллина из любого грамположительного или грамотрицательного бактериального вида, включая полипептиды флагеллина, описанные в публикации патента США № 2003/000044429, содержание которого включено в данный документ, и пептиды флагеллина, соответствующие учетным номерам, перечисленным в результатах BLAST, показанных на фиг. 7 (области A-F) в публикации патента США № 2003/000044429, или их варианты, но не ограничиваясь только ими.
Без ограничения теорией, флагеллин и описанные ранее варианты страдают по большей части от высокой антигенности и иммуногенности, потому что они по природе являются имуногенными бактериальными белками (например, флагеллин или FliC). Практическое ограничения в ранее существующих конструкциях флагеллина состоит в том, что многие субъекты имеют высокие титры предсуществующих антител, способных нейтрализовать стимулирующую TLR5 активность этих конструкций. Эти индивидуумы будут десенсибилизированы (или полностью устойчивы) к лечению средствами, полученными из флагеллина, иногда даже в случае однократных инъекций и, без ограничения теорией, более вероятно при повторном лечении. Кроме того, титр подобных предсуществующих антител, даже если первоначально существовал на низких уровнях, может быть быстро простимулирован однократной инъекцией средства, полученного из флагеллина, таким образом дискредитируя еще большую группу индивидуумов для цели применения режима с многоразовыми дозами, как заложено в проекте для медицинского применения. Широко распространенные предсуществующие анти-FliC антитела (включая нейтрализующие
- 5 035372 антитела) в популяции, вероятно, отражают воздействие в течение всей жизни на человечество многочисленных видов жгутиковых энтеробактерий (например, Salmonella spp., E. coli), колонизирующих (или инфицирующих) человеческое тело. В некоторых вариантах реализации описываемые в настоящем изобретении композиции, относящиеся к флагеллину, содержат изменения эпитопов для различных антител, нейтрализующих активность флагеллина.
В некоторых вариантах реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит мутации в эпитопах, распознаваемых нейтрализующими αнти-CBLB502 антителами. Композиции, относящиеся к флагеллину, могут содержать одну или более мутаций в эпитопах, распознаваемых нейтрализующими анти-CBLB502 антителами, которые ингибируют или аннулируют способность антител нейтрализовывать композицию. В еще одном дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит укороченный один или несколько эпитопов и мутации в одном или более эпитопах. В дополнительном варианте реализации мутации содержат замену остатков эпитопа аланином. В дополнительном варианте реализации мутировавшие эпитопы содержат один или более следующих остатков: E153, S444, T154, N440, Q142, F131, D443, N68, Т447, S110, Q117, R124, D113, Е120, N127 и Q128. Композиции, относящиеся к флагеллину, могут содержать вставки, делеции, вставки транспозонов и изменения в любом из доменов D0, D1, D2 и вариабельного домена D3. Домен D3 может быть заменен частично или полностью шарнирным участком или линкерным полипептидом, что позволяет доменам D1 и D2 сворачиваться подходящим образом, так что вариант белка стимулирует активность TLR5. В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к разработке минимального функционирующего ядра флагеллина, например удаляя остатки, относящиеся к уже укороченной молекуле CBLB502. В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к разработке композиции, относящейся к флагеллину, которая имеет измененную аминокислотную идентичность по сравнению с диким типом, включая делеции, вставки и замены, которые обеспечивают улучшенную активность. В некоторых вариантах реализации композиция, относящаяся к флагеллину, получена из CBLB502 (SEQ ID NO: 2). В некоторых вариантах реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит укороченный один или более домены. В дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит делецию в N-концевом домене. В еще одном дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит делецию в домене ND0. В еще одном дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит делецию всего домена ND0. В дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит делецию в С-концевом домене. В еще одном дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит делецию в домене CD0. В еще одном дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, сохраняет аминокислоты в положениях 470-485 домена CD0. В еще одном дополнительном варианте реализации минимизированная композиция, относящаяся к флагеллину, представляет собой CBLB502-S33 (SEQ ID NO: 17). Композиции, относящиеся к флагеллину, могут содержать по меньшей мере 10, 11, 12 или 13 аминокислот из 13 консервативных аминокислот, показанных на фиг. 1А и 1В (положения 89, 90, 91, 95, 98, 101, 115, 422, 423, 426, 431, 436 и 452). Композиции, относящиеся к флагеллину, могут быть по меньшей мере на 30-99% идентичны аминокислотам в положениях 1-174 и 418-505 последовательности SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, имеют улучшенные функциональные и фармакологические свойства, которые, например, обеспечивают улучшенное медицинское воздействие. В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, имеют улучшенную активацию NF-kB и радиопротективную активность по сравнению с CBLB502. В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, имеют улучшенную фармакокинетику, что приводит к пропорционально более сильному фармакодинамическому ответу (как определено, например, с помощью анализов цитокинов).
В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, имеют улучшенные фармакологические свойства, включая сниженную антигенность и иммуногенность, что, например, позволяет применять их при широком спектре разнообразных болезненных состояний и типов пациентов. Сниженная антигенность и иммуногенность расширяет применения с медицинскими целями, для которых могут быть использованы композиции, относящиеся к флагеллину, согласно настоящему изобретению, включая, например, применения с медицинскими целями, требующие повторяющихся введений лекарственного препарата. В некоторых вариантах реализации сниженная антигенность преобразовывается в улучшенную устойчивость по отношению к нейтрализующему действию предсуществующих антител (например, анти-флагеллин антител), а также антител, индуцируемых в ответ на инъекцию CBLB502. В дополнительных вариантах реализации композиции, имеющие отношение к флагеллину, имеют увеличенные значения времени задержки in vivo. Увеличенное время задержки в организме позволяет композиции быть эффективной при меньшем количестве доз или при более длительных перерывах между введениями доз.
В некоторых вариантах реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит метку. В еще одном дополнительном варианте реализации метка прикреплена к N-концу композиции, относящейся к флагеллину. В еще одном дополнительном варианте реализации метка прикреплена к С-концу композиции, относящейся к флагеллину. В некоторых вариантах реализации композиция, относящаяся к флагел
- 6 035372 лину, содержит гибкий линкер. В дополнительном варианте реализации гибкий линкер содержит последовательность SEQ ID NO: 16. В еще одном дополнительном варианте реализации гибкий линкер содержит последовательность SEQ ID NO: 242. В некоторых вариантах реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит или состоит из любого из полипептидов или нуклеиновых кислот, кодируемых указанными полипептидами, перечисленными в табл. 1. В некоторых вариантах реализации композиция, относящаяся к флагеллину, кодируется нуклеотидными последовательностями, перечисленными в табл. 1. В дополнительном варианте реализации композиция, относящаяся к флагеллину, содержит полипептиды, перечисленные в табл. 1. В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, содержат или состоят из полипептидов, кодируемых последовательностью SEQ ID NO: 69 или последовательностью SEQ ID NO: 70. В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, содержат или состоят из полипептидов с последовательностью SEQ ID NO: 71, CBLB543. В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, содержат или состоят из полипептидов, кодируемых последовательностью SEQ ID NO: 149 или последовательностью SEQ OD NO: 151. В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, содержат или состоят из полипептидов с последовательностью SEQ ID NO: 150, CBLB533. В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, могут быть по меньшей мере на 30-99% идентичны последовательностям, перечисленным в табл. 1, например приблизительно на 50%, или приблизительно на 60%, или приблизительно на 70%, или приблизительно на 80%, или приблизительно на 90%, или приблизительно на 95%, или приблизительно на 97%, или приблизительно на 98%, или приблизительно на 99% или приблизительно на 100% идентичны последовательностям, перечисленным в табл. 1.
Таблица 1
Иллюстративные флагеллиновые композиции
SEQ ID Название конструкции ДНК/ PRT Вид Последовательность
0001 Дикий тип PRT Salmonella dublin MAQVINTNSLSLLTQNNLNKSQSSLSSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLT QASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEID RVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNGPKEATVG DLKSSFKNVTGYDTYAAGADKYRVDINSGAVVTDAAAPDKVYVNAANGQLTTDDAENNTA VDLFKTTKSTAGTAEAKAIAGAIKGGKEGDTFDYKGVTFTIDTKTGDDGNGKVSTTINGEKV TLTVADIATGAADVNAATLQSSKNVYTSVVNGQFTFDDKTKNESAKLSDLEANNAVKGES KITVNGAEYTANATGDKITLAGKTMFIDKTASGVSTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKV DAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVL AQANQVPQNVLSLLR
0002 CBLB502 PRT Искусственная последовательность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDDDDKDPMAQVINTNSLSLLTQNNLNKSQSSL SSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNN LQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQV GANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPL ASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQI LQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLR
0003 Промотор Т7 (прямой) ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGG
0004 FliC АА74-80 (прямой) ДНК Искусственная последовательность ATTGCGCAGACCACTGAAGG
0005 Сайт расщепления тромбина PRT Искусственная последовательность LVPRGS
0006 Сайт расщепления энтерокиназы Искусственная последовательность DDDDK
0007 NS (N-концевая PRT Искусственная SSGLRINSAKDDA
- 7 035372
область спицы; Ser32 - Ala44) последовательность
0008 CS (С-концевая область спицы;от Glu464 по А1а469) PRT Искусственная последовательность EDADYA
0009 линкер PRT Искусственная последовательность AASAGAGQGGGGSG
0010 линкер PRT Искусственная последовательность EGKSSGSGSESKST
0011 линкер PRT Искусственная последовательность GGGRTSSSAASAGAGQGGGGSG
0012 линкер PRT Искусственная последовательность GPSG
0013 линкер PRT Искусственная последовательность GSAGSAAGSGEF
0014 линкер PRT Искусственная последовательность GSPG
0015 линкер PRT Искусственная последовательность KESGSVSSEQLAQFRSLD
0016 линкер PRT Искусственная последовательность SPGISGGGGGILDSMG
0017 Мутант 33-485 Мутант S33 PRT Искусственная последовательность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPSGLRINSAKDDAAGQAIANRF TSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEI QQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNS PGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAIT NLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLR
0018 Мутант 33-485 ДНК Искусственная GCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTTGATAATCTGGCGCAGGCTAACCAGG
0019 0020 0021 Прямой праймер CBLB485 Мутант 33-485 матричная последовательность 502 Мутант 33-485 Обратный праймер CBLB485 Мутант 33-485 ДНК- последовательность мутанта 485 (от промотора Т7 до стоп-кодона) ДНК ДНК ДНК последовательность Искусственная последовательность Искусственная последовательность Искусственная последовательность TCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAG GTT CCTGGTTAGCCTGCGCCAGATTATCAACCAGCCTGCTGCAGAATCTGC TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATG GTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTC CGCGCGGTAGCGCGAAGGATCCGTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGAT GCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAG GCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTG AATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACG GGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGA AGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGG ACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCT GCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGA ATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACG CTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTC AAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCC ATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAG ATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGC TGGTTGATAA
0022 Мутант 33-485 PRT Искусственная MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPSGLRINSAKDDAAGQAIANRF
- 8 035372
Экспрессируемый последовательность мутант 33-485 0023 Мутант 45СТ PRT Искусственная Мутант 506Т последовательность 0024 Мутант 45CT ДНК Искусственная Мутант 506Т последовательность TSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEI QQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNS PGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAIT NLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAG MAQVINTNSLSLLTQNNLNKSQSSLSSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLT QASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEID RVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGG GGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVT NLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHH GMASMTGGQQMGRDLYDDDDKDP ATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCAGAATAACCTGAACA AATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGAGCGTCTGTCCTCTGGTCTGCGTATCAA CAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATAT CAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACC ACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCT GTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAA TTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTT AAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAA CCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAAT GTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGGGTACAT TAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAAT TGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAAC CGTTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGC GTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCA GATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAA CGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTA GCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACGATGACGATAAGGATC
CGTAAGTCGACAAGCTTGCG
0025 Мутант 45CT Прямой F45CT ДНК Искусственная последовательность CGAAAGACCATATGGCAGGCCAGGCGATTGC
0026 Мутант 45CT Обратный R45CT ДНК Искусственная последовательность CGCAAGCTTGTCGACTTACGGATCCTTATCGTC
0027 Мутант 45CT Последовательност ь конструкции 45СТ ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAAATAATT TTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTT CACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCT ATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTG CGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTA TCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCT AACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCC TTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGA CTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAAC CCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGG GGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAA TCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAAT ATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAAC CAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATC ATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACG ATGACGATAAGGATCCGTAAGTCGAC
0028 Мутант 45СТ Экспрессируемый мутант 45СТ PRT Искусственная последовательность MAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNS DSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKS LGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLG AIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQ NVLSLLVPRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDDDDKDP
- 9 035372
0029 Мутант 33GPS Экспрессируемый мутант 33ML ДНК Искусственная последовательность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCT GAAATCTATCGGACCATCAGGTCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGAT CGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGAT GAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATT GATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTA ACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTG GGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCA ATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAA TATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAAC CAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATC ATCATGGTTAA
0030 Мутант 33GPS Экспрессируемый мутант 33ML PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIGPSGQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGA NDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAI TNLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPR GSHHHHHHG
0031 Мутант 33GPS Прямой праймер FSY3CT ДНК Искусственная последовательность GATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAG
0032 Мутант 33GPS Обратный праймер RMIMxN ДНК Искусственная последовательность AGATCTCCCGGGGAATTAACATTGAACCC
0033 Мутант 33GPS ДНК- последовательность мутанта 33GPS ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TGGACCATCAGGTGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAG ACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTG GTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTT GGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAA TTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAA CCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCG CGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGC AGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAA ACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTC GAC
0034 Мутант 33GPS Экспрессируемый мутант 33GPS PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATGPSGEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDV KSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSA RSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0035 Мутант 33ML Мутант ЗЗСТ (исправленный А) PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSAL SKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGT SVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0036 Мутант 33ML Мутант ЗЗСТ (исправленный А) ДНК Искусственная последовательность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCT GAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAAT
- 10 035372
CAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGG TTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAG CCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGA ATTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTA CCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTC TTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACG GTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAA GTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGC AGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCA TCATCATCATCATGGTTAA
0037 Мутант 33ML Прямой праймер F502ML ДНК Искусственная последовательность TCTAGACCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTG
0038 Мутант 33ML Обратный праймер R33CT ДНК Искусственная последовательность CCAGTCATGTCGACTTAACCATGATGATGATGATGATGAG
0039 Мутант 33ML матричная последовательность 502 ДНК Искусственная последовательность CTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGACAAGCTTGCGGCCGCAGAGCTCGC
0040 Мутант 33ML Конструкция 33ML ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC
TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTT CTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0041 Мутант 33ML Экспрессируемый мутант 33ML ДНК Искусственная последовательность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCT GAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAAT CAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGG TTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAG CCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCT TCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCA AAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCC GCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAG CGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGC AAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0042 Мутант 33ML Мутант 33ML PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0043 Мутант 37СТ ДНК Искусственная ATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCAGAATAACCTGAACA
- 11 035372
Мутант с дельта ND0 на основе CBLB506T последовательность AATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGAGCGTCTGTCCTCTGGTCTGCGTATCAA CGGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATAT CAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACC ACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCT GTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAA TTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTT AAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAA CCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAAT GTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGGGTACAT TAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAAT TGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAAC CGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGC GTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCA GATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAA CGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTA GCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACGATGACGATAAGGATC CGTAAGTCGACAAGCTTGCG
0044 Мутант 37СТ Мутант с дельта ND0 на основе CBLB506T PRT Искусственная последовательность MAQVINTNSLSLLTQNNLNKSQSSLSSAIERLSSGLRINGAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLT QASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEID RVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGG GGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVT NLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHH GMASMTGGQQMGRDLYDDDDKDP
0045 Мутант 37СТ Прямой F37CT ДНК Искусственная последовательность CTCTGGTCATATGATCAACAGCGCGAAAGACGATGC
0046 Мутант 37СТ Обратный R37CT ДНК Искусственная последовательность TCTAGAGTCGACTATTAAGCCATACCATGATGATGATGATGATGAG
0047 Мутант 37СТ Конструкция 37СТ ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAAATAATT TTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGC AGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCC CGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAA TCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAA CTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATC GATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCA GATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAA ATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCG GTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGC AGCCAAGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTG GACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCA ACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGA CTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACT TCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGC GGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTTAATAGTCGAC
0048 Мутант 37СТ Мутант 37СТ PRT Искусственная последовательность MINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQ ATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITID LQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVD AVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLA QANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHGMA
0049 Мутант 445 502-SY1 PRT Искусственная последовательность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPMAQVINTNSLSLLTQNNLNKS QSSLSSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALN EINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQ MKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKS TANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNM SKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLR
- 12 035372
0050 Мутант 445 ДНК Искусственная 502-SY1 последовательность 0051 Мутант 445 ДНК Искусственная Прямой праймер последовательность CBLB445 0052 Мутант 445 ДНК Искусственная Обратный праймер последовательность CBLB445 0053 Мутант 445 ДНК Искусственная мутант 445 последовательность ATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGC AAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTCCGCGCGGTAGCGCGAAGGATCCGATG GCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCAGAATAACCTGAACAAAT CTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGAGCGTCTGTCCTCTGGTCTGCGTATCAACAG CGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAA AGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACT GAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTC AGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCA GCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAA GTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCA TTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTT AATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGGGTACATTAA TCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGA TTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGT TTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTA GCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGAT TCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGT CCTCTCTTTACTGCGTTAA GGCAATTCAAAACCGTTTTGATTAAGCCATTACCAACCTTGG CCAAGGTTGGTAATGGCTTAATCAAAACGGTTTTGAATTGCC TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATG GTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTC
CGCGCGGTAGCGCGAAGGATCCGATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGC TGTTGACCCAGAATAACCTGAACAAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGAGCG TCTGTCCTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGAT TGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAAC GACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACC TGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGA TCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAA AGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTG GAATTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAG TACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGT TCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTAA
0054 Мутант 445 мутант 445 PRT Искусственная последовательность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPMAQVINTNSLSLLTQNNLNKS QSSLSSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALN EINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQ MKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKS TANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFD
0055 Мутант 461 Прямой праймер CBLB461 ДНК Искусственная последовательность CAATCTGAACTCCGCGCGTTGACGTATCTAAGATGCTGACTATGC
0056 Мутант 461 Обратный праймер CBLB461 ДНК Искусственная последовательность GCATAGTCAGCATCTTAGATACGTCAACGCGCGGAGTTCAGATTG
0057 Мутант 461 Мутант 461 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATG GTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTC
- 13 035372
CGCGCGGTAGCGCGAAGGATCCGATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGC TGTTGACCCAGAATAACCTGAACAAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGAGCG TCTGTCCTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGAT TGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAAC GACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACC TGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGA TCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAA AGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTG GAATTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAG TACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGT TCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATAC GGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTTGACGTATCTAA
0058 Мутант 461 Мутант 461 PRT Искусственная последовательность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPMAQVINTNSLSLLTQNNLNKS QSSLSSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALN EINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQ MKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKS TANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSAR
0059 Мутант 467 Прямой праймер CBLB467 ДНК Искусственная последовательность CGTAGCCGTATCGAAGATGCTTAATAGGCAACGGAAGTTTCTAATATG
0060 Мутант 467 Обратный праймер CBLB467 ДНК Искусственная последовательность CATATTAGAAACTTCCGTTGCCTATTAAGCATCTTCGATACGGCTACG
0061 Мутант 467 Мутант 467 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATG
GTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTC CGCGCGGTAGCGCGAAGGATCCGATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGC TGTTGACCCAGAATAACCTGAACAAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGAGCG TCTGTCCTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGAT TGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAAC GACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACC TGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGA TCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAA AGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTG GAATTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAG TACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGT TCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATAC GGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTTAATAG
0062 Мутант 467 Мутант 467 PRT Искусственная последовательность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPMAQVINTNSLSLLTQNNLNKS QSSLSSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALN EINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQ MKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKS TANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDA
0063 Мутант 470СТ CBLB502 ДНК Искусственная последовательность ATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGC AAATGGGTCGGGATCTGTACGACGATGACGATAAGGATCCGATGGCACAAGTCATTAA TACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCAGAATAACCTGAACAAATCTCAGTCCTCACTG AGTTCCGCTATTGAGCGTCTGTCCTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATG CGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAAT GAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGG
- 14 035372
ACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGA AATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACA ACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCA AAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTT CCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGC CGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAA GTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTA CCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATG CTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGG TACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGCGT ТАА
0064 Мутант 470СТ Прямой праймер F470CT ДНК Искусственная последовательность CGATAAGGATCATATGGCACAAGTCATTAATAC
0065 Мутант 470СТ Обратный праймер R470CT ДНК Искусственная последовательность AGATCTGTCGACTTAACCATGATGATGATGATGATGAGAACCCCGCGGAACCAGTGCA TAGTCAGCATCTTCGATACG
0066 Мутант 470СТ Мутант 470СТ ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGT CGCTGTTGACCCAGAATAACCTGAACAAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGA GCGTCTGTCCTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGG CGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGC TAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAAC AACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATT CCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGT TTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAA TCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGT
0067 0068 0069 Мутант 470СТ Мутант 470СТ Мутант 485СТ Обратный праймер R485MC Мутант 485СТ ДНК- последовательность 485СТ PRT ДНК ДНК Искусственная последовательность Искусственная последовательность Искусственная последовательность GAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGT GGTGGAATTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGA AAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGT TCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCA ATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACT GGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC MAQVINTNSLSLLTQNNLNKSQSSLSSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLT QASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEID RVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGG GGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVT NLNSARSRIEDADYALVPRGSHHHHHHG AGATCTCCGCGGAACCAGACCAGCCTGCTGCAGAATCTGC TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTCTGGTTCCG
- 15 035372
CGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0070 Мутант 485СТ Мутант 485СТ ДНК Искусственная последовательность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCT GAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAAT CAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGG TTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAG CCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCT TCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCA AAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCC GCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAG CGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTCTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCA TGGTTAA
0071 Мутант 485СТ Мутант 485СТ PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGLVPRGSHHHHHHG
0072 Мутант 485D ДНК-матрица для делеционных мутаций, полученная от варианта мутанта 485СТ ДНК Искусственная последовательность AACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCT GGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACCGCCCTTGGCAATACGGTAACC ААТ
0073 Мутант 485D PRT- PRT Искусственная последовательность NPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITALGNTVTN
0074 0075 0076 последовательность для делеционных мутаций, полученная от варианта мутанта 485СТ Мутант 485D Прямой праймер F485D Мутант 485D Обратный праймер R485D Мутант 485D ДНК- последовательность конструкции 485CT_Delta ДНК ДНК ДНК Искусственная последовательность Искусственная последовательность Искусственная последовательность GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTGATTCAGCCATTACCGCCCTTG CAAGGGCGGTAATGGCTGAATCAATTGCCCCCAGAGAAGAACGAAC TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTGATTCAGCCATTACCGCCCTTGGCAATACGGTAA CCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTC TAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTCTGGTTCCGCGGGGTTCTCAT CATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0077 Мутант 485D PRT Искусственная MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE
- 16 035372
Мутант 485D (CT_Delta 439-442) последовательность LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIDSAITALGNTVT NLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGLVPRGSHHHHHHG
0078 Мутант CGD1 Мутант SY3CT ДНК Искусственная последовательность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCT GAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAAT CAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGG TTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAG CCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCT TCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCA AAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCC GCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCAT CATCATCATCATGGTTAA
0079 Мутант CGD1 Мутант SY3CT PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYALVPRGSHHHHHHG
0080 Мутант CGD1 GFPuv4 ДНК Искусственная последовательность ATGAGTAAAGGAGAAGAACTTTTCACTGGAGTTGTCCCAATTCTTGTTGAATTAGATGG TGATGTTAATGGGCACAAATTTTCTGTCAGTGGAGAGGGTGAAGGTGATGCAACATAC GGAAAACTTACCCTTAAATTTATTTGCACTACTGGAAAACTACCTGTTCCATGGCCAAC ACTTGTCACTACTCTGACGTATGGTGTTCAATGCTTTTCCCGTTATCCGGATCATATGA AACGGCATGACTTTTTCAAGAGTGCCATGCCCGAAGGTTATGTACAGGAACGCACTAT ATCTTTCAAAGATGACGGGAACTACAAGACGCGTGCTGAAGTCAAGTTTGAAGGTGAT ACCCTTGTTAATCGTATCGAGTTAAAAGGTATTGATTTTAAAGAAGATGGAAACATTCT CGGACACAAACTCGAGTACAACTATAACTCACACAATGTATACATCACGGCAGACAAA
CAAAAGAATGGAATCAAAGCTAACTTCAAAATTCGCCACAACATTGAAGATGGATCCGT TCAACTAGCAGACCATTATCAACAAAATACTCCAATTGGCGATGGCCCTGTCCTTTTAC CAGACAACCATTACCTGTCGACACAATCTGCCCTTTTGAAAGATCCCAACGAAAAGCG TGACCACATGGTCCTTCTTGAGTTTGTAACTGCTGCTGGGATTACACATGGCATGGAT GAACTATACAAA
0081 Мутант CGD1 GFPuv4 PRT Искусственная последовательность MSKGEELFTGWPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLV TTLTYGVQCFSRYPDHMKRHDFFKSAMPEGYVQERTISFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLV NRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYITADKQKNGIKANFKIRHNIEDGSVQLADHY QQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALLKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITHGMDELYK
0082 Мутант CGD1 Мутация GFPuv4 сайта Ndel дикого типа (wt) ДНК Искусственная последовательность ATGAGTAAAGGAGAAGAACTTTTCACTGGAGTTGTCCCAATTCTTGTTGAATTAGATGG TGATGTTAATGGGCACAAATTTTCTGTCAGTGGAGAGGGTGAAGGTGATGCAACATAC GGAAAACTTACCCTTAAATTTATTTGCACTACTGGAAAACTACCTGTTCCATGGCCAAC ACTTGTCACTACTCTGACGTATGGTGTTCAATGCTTTTCCCGTTATCCGGATCACATGA AACGGCATGACTTTTTCAAGAGTGCCATGCCCGAAGGTTATGTACAGGAACGCACTAT ATCTTTCAAAGATGACGGGAACTACAAGACGCGTGCTGAAGTCAAGTTTGAAGGTGAT ACCCTTGTTAATCGTATCGAGTTAAAAGGTATTGATTTTAAAGAAGATGGAAACATTCT CGGACACAAACTCGAGTACAACTATAACTCACACAATGTATACATCACGGCAGACAAA CAAAAGAATGGAATCAAAGCTAACTTCAAAATTCGCCACAACATTGAAGATGGATCCGT TCAACTAGCAGACCATTATCAACAAAATACTCCAATTGGCGATGGCCCTGTCCTTTTAC CAGACAACCATTACCTGTCGACACAATCTGCCCTTTTGAAAGATCCCAACGAAAAGCG TGACCACATGGTCCTTCTTGAGTTTGTAACTGCTGCTGGGATTACACATGGCATGGAT GAACTATACAAATAA
0083 Мутант CGD1 Прямой праймер FCGFP ДНК Искусственная последовательность TCTAGACGGCCGATCTCAGGTAAGAATGGAATCAAAGCTAACTTCAAAATTCGC
0084 Мутант CGD1 Измененная PRT- PRT Искусственная последовательность NVYIPISGKNGIKANFKIRH
- 17 035372
последовательность GFPuv4
0085 Мутант CGD1 Обратный RCGFP ДНК Искусственная последовательность AGATCTCCGCGGTTTGTATAGTTCATCCATGCCATGTGTAATCCC
0086 Мутант CGD1 ДНК- последовательность конструкции CGD1 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC ACTGGTTCCGCCGATCTCAGGTAAGAATGGAATCAAAGCTAACTTCAAAATTCGCCAC AACATTGAAGATGGATCCGTTCAACTAGCAGACCATTATCAACAAAATACTCCAATTGG CGATGGCCCTGTCCTTTTACCAGACAACCATTACCTGTCGACACAATCTGCCCTTTTG AAAGATCCCAACGAAAAGCGTGACCACATGGTCCTTCTTGAGTTTGTAACTGCTGCTG GGATTACACATGGCATGGATGAACTATACAAACCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCA TCATGGTTAAGTCGAC
0087 Мутант CGD1 Экспрессируемый мутант CGD1 ДНК Искусственная последовательность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCT GAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAAT
CAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGG TTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAG CCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCT TCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCA AAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCC GCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACTGGTTCCGCCGATCTCAGGTAAG AATGGAATCAAAGCTAACTTCAAAATTCGCCACAACATTGAAGATGGATCCGTTCAACT AGCAGACCATTATCAACAAAATACTCCAATTGGCGATGGCCCTGTCCTTTTACCAGAC AACCATTACCTGTCGACACAATCTGCCCTTTTGAAAGATCCCAACGAAAAGCGTGACC ACATGGTCCTTCTTGAGTTTGTAACTGCTGCTGGGATTACACATGGCATGGATGAACT ATACAAACCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0088 Мутант CGD1 Экспрессируемый мутант CGD1 PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYALVPPISGKNGIKANFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPV LLPDNHYLSTQSALLKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITHGMDELYKPRGSHHHHHHG
0089 Мутант СРМ194 Мутант СРМ194 ДНК Искусственная последовательность ATGAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAG TTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGC AATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAT CCCCGGGAAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCG ATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAA CGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAAC CTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCC GATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTT CTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATC CAGGTTGGTGCTAACGATGGTCTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATG GTTAA
- 18 035372
0090 Мутант CPM194 Мутант СРМ194 PRT Искусственная последовательность MSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYASPGS GLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELS VQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGLVP RGSHHHHHHG
0091 Мутант СРМ194 Мутант СРМ194 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTG ATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCG CTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGT AGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCATCCCCGGGAAGCGGGTTACGGATCAACAGC GCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAA GGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTG AAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCA GGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAG CAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGT CCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTCTGGTTCCG CGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0092 Мутант СРМ194 Прямой праймер FCD1 ДНК Искусственная последовательность TCTAGACATATGAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTG
0093 Мутант СРМ194 Обратный праймер RCD1J ДНК Искусственная последовательность GCTTCCCGGGGATGCATAGTCAGCATCTTCGATACGGC
0094 Мутант СРМ194 Прямой праймер FND1J ДНК Искусственная последовательность GCATCCCCGGGAAGCGGGTTACGGATCAACAGCG
0095 Мутант СРМ194 Обратный праймер ДНК Искусственная последовательность AGATCTCCGCGGAACCAGACCATCGTTAGCACCAACCTGGATTTTCATCT
RND1
0096 Мутант СРМ217 Мутант СРМ217 ДНК Искусственная последовательность ATGAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAG TTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGC AATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAT CCCCGGGAAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCG ATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAA CGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAAC CTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCC GATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTT CTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATC CAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGA AAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATCTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCA TCATCATCATGGTTAA
0097 Мутант СРМ217 Мутант СРМ217 PRT Искусственная последовательность MSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYASPGS GLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELS VQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETIT IDLQKIDVKSLGLDGFNVNLVPRGSHHHHHHG
0098 Мутант СРМ217 Мутант СРМ217 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTG ATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCG CTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGT AGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCATCCCCGGGAAGCGGGTTACGGATCAACAGC GCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAA GGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTG AAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCA GGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAG CAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGT
- 19 035372
CCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATT ACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAA TCTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0099 Мутант CPM217 Обратный праймер RCPM217 ДНК Искусственная последовательность AGATCTCCGCGGAACCAGATTAACATTGAACCCATCAAGGCCAAG
0100 Мутант GD1G Прямой праймер FGFP77 ДНК Искусственная последовательность CCCGTTATCCGGATCACATGAAACGGCATGACTTTTTC
0101 Мутант GD1G Обратный праймер RGFP77 ДНК Искусственная последовательность GAAAAAGTCATGCCGTTTCATGTGATCCGGATAACGGG
0102 Мутант GD1G FGFP54 ДНК Искусственная последовательность CTGTTCCATGGCCAACACTTG
0103 Мутант GD1G Прямой праймер FNGFP ДНК Искусственная последовательность TCTAGACATATGAGTAAAGGAGAAGAACTTTTCACTGGAGTTGTCC
0104 Мутант GD1G Измененная ДНКпоследовательность GFP ДНК Искусственная последовательность GGCCTATGCGGCCGCAGTAAAGGAGAAGAACTTTTCACTGGAGTTGTCCCAATTCTTG TTGAA
0105 Мутант GD1G Обратный RNGFP ДНК Искусственная последовательность AGATCTATTAATGCGGCCTGATAGGCCTTGTTTGTCTGCCGTGATGTATACATTGTG
0106 Мутант GD1G Измененная PRT- последовательность GFP PRT Искусственная последовательность SHNVYITADKQGLSGRNM
0107 Мутант GD1G DNA- последовательность конструкции GD1G ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGTAAAGGAGAAGAACTTTTCACTGGAG TTGTCCCAATTCTTGTTGAATTAGATGGTGATGTTAATGGGCACAAATTTTCTGTCAGT GGAGAGGGTGAAGGTGATGCAACATACGGAAAACTTACCCTTAAATTTATTTGCACTA CTGGAAAACTACCTGTTCCATGGCCAACACTTGTCACTACTCTGACGTATGGTGTTCA ATGCTTTTCCCGTTATCCGGATCACATGAAACGGCATGACTTTTTCAAGAGTGCCATG CCCGAAGGTTATGTACAGGAACGCACTATATCTTTCAAAGATGACGGGAACTACAAGA CGCGTGCTGAAGTCAAGTTTGAAGGTGATACCCTTGTTAATCGTATCGAGTTAAAAGG TATTGATTTTAAAGAAGATGGAAACATTCTCGGACACAAACTCGAGTACAACTATAACT CACACAATGTATACATCACGGCAGACAAACAAGGCCTATCAGGCCGCATTATGAGCG GGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGC TTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTC TATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGT GCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCT ATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTC AATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGC TAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGC CTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTG ATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCG CTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGT AGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACTGGTTCCGCCGATCTCAGGTAAGAATGGAA TCAAAGCTAACTTCAAAATTCGCCACAACATTGAAGATGGATCCGTTCAACTAGCAGAC CATTATCAACAAAATACTCCAATTGGCGATGGCCCTGTCCTTTTACCAGACAACCATTA CCTGTCGACACAATCTGCCCTTTTGAAAGATCCCAACGAAAAGCGTGACCACATGGTC CTTCTTGAGTTTGTAACTGCTGCTGGGATTACACATGGCATGGATGAACTATACAAACC GCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0108 Мутант GD1G ДНК Искусственная ATGAGTAAAGGAGAAGAACTTTTCACTGGAGTTGTCCCAATTCTTGTTGAATTAGATGG
- 20 035372
Экспрессируемый мутант GD1G последовательность TGATGTTAATGGGCACAAATTTTCTGTCAGTGGAGAGGGTGAAGGTGATGCAACATAC GGAAAACTTACCCTTAAATTTATTTGCACTACTGGAAAACTACCTGTTCCATGGCCAAC ACTTGTCACTACTCTGACGTATGGTGTTCAATGCTTTTCCCGTTATCCGGATCACATGA AACGGCATGACTTTTTCAAGAGTGCCATGCCCGAAGGTTATGTACAGGAACGCACTAT ATCTTTCAAAGATGACGGGAACTACAAGACGCGTGCTGAAGTCAAGTTTGAAGGTGAT ACCCTTGTTAATCGTATCGAGTTAAAAGGTATTGATTTTAAAGAAGATGGAAACATTCT CGGACACAAACTCGAGTACAACTATAACTCACACAATGTATACATCACGGCAGACAAA CAAGGCCTATCAGGCCGCATTATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGAT GCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAG GCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTG AATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACG GGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGA AGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGG ACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCT GCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGA AGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTC GTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAAT ACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACTG GTTCCGCCGATCTCAGGTAAGAATGGAATCAAAGCTAACTTCAAAATTCGCCACAACA TTGAAGATGGATCCGTTCAACTAGCAGACCATTATCAACAAAATACTCCAATTGGCGAT GGCCCTGTCCTTTTACCAGACAACCATTACCTGTCGACACAATCTGCCCTTTTGAAAG ATCCCAACGAAAAGCGTGACCACATGGTCCTTCTTGAGTTTGTAACTGCTGCTGGGAT TACACATGGCATGGATGAACTATACAAACCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCAT GGTTAA
0109 Мутант GD1G Экспрессируемый мутант GD1G PRT Искусственная последовательность MSKGEELFTGWPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLV TTLTYGVQCFSRYPDHMKRHDFFKSAMPEGYVQERTISFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLV NRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYITADKQGLSGRIMSGLRINSAKDDAAGQAIA
NRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQ DEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFN VNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYA LVPPISGKNGIKANFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALLKDPN EKRDHMVLLEFVTAAGITHGMDELYKPRGSHHHHHHG
0110 Мутант MF227C матрица мутанта 470СТ ДНК Искусственная последовательность CTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAA TTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGC TTCAATTG
0111 Мутант MF227C матрица мутанта 470СТ PRT Искусственная последовательность LGLDGFNVNSPGISGGGGGITLINEDAAAAKKSTANPLASI
0112 Мутант MF227C Обратный праймер R2YY ДНК Искусственная последовательность AGATCTCCGCGGAACCAGTAAAGAGAGGACGTTTTGCGGAACCTGGTTTGCATAGTC AGCATCTTCGATACG
0113 Мутант MF227C ДНК- последовательность мутанта MF227C ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGG CAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCA AACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATC
- 21 035372
ATCATCATGGTTAAGTCGAC
0114 Мутант MF227C Мутант MF227C ДНК Искусственная последовательность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCT GAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAAT CAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGG TTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAG CCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCT TCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCA AAACCGTTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCG CGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTC TTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0115 Мутант MF227C Мутант MF227C PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0116 Мутант MF227N Обратный праймер RMF227N ДНК Искусственная последовательность AGATCTCCCGGGGAACCATCGTTAGCACCAACCTGGATTTTC
0117 Мутант MF227N ДНК- последовательность мутанта MF227N ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC
0118 0119 Мутант MF227N mutant MF227N Мутант MF227N mutant MF227N ДНК PRT Искусственная последовательность Искусственная последовательность TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTTCCCCGGGAAGTAC CGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTT CTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGT AACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTT TCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGG CTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCA TCATCATCATGGTTAAGTCGAC ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCT GAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAAT CAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGG TTGGTGCTAACGATGGTTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTC TGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTT GATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCC GTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCT GCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCT CTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGS PGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEV SNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0120 Мутант MF233 Обратный праймер RMF233 ДНК Искусственная последовательность AGATCTCCGCGGAACCAGCAGGTTATTCTGGGTCAACAGCGACAGGCTGTTTGTATTA ATGACTTGTGCATAGTCAGCATCTTCGATACG
0121 Мутант MF233 ДНК Искусственная TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT
- 22 035372
ДНКпоследовательность конструкции MF233 последовательность TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC ACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCAGAATAACCTGCTGGTTCCG CGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0122 Мутант MF233 MF233 ДНК Искусственная последовательность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCT GAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAAT CAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGG TTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAG CCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCT TCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCA AAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCC GCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGT CGCTGTTGACCCAGAATAACCTGCTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCA TGGTTAA
0123 Мутант MF233 PRT Искусственная MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE
MF233 последовательность LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYAQVINTNSLSLLTQNNLLVPRGSHHHHHHG
0124 Мутант MF471 Прямой праймер F471-77 ДНК Искусственная последовательность GCTGACTATGCAACGGCAGTTTCTGCTATGTCTGCAGCGCAGATTCTGC
0125 Мутант MF471 Обратный праймер R471-77 ДНК Искусственная последовательность GCAGAATCTGCGCTGCAGACATAGCAGAAACTGCCGTTGCATAGTCAGC
0126 Мутант MF471 ДНК- последовательность конструкции MF471 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGCAGTTTCTGCTATGTCTGCAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTCTGGTTCC GCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0127 Мутант MF471 MF471 ДНК Искусственная последовательность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCT
- 23 035372
GAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAAT CAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGG TTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAG CCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCT TCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCA AAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCC GCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGCAGTTTCTGCTATGTCTGCA GCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTCTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCAT CATGGTTAA
0128 Мутант MF471 MF471 PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATAVSAMSAAQILQQAGLVPRGSHHHHHHG
0129 Мутант MF479 Прямой праймер F479-83 ДНК Искусственная последовательность GTTTCTAATATGTCTAAAGCGGCGATTCTGGGAGCGGCTGGTCTGGTTCCGCGG
0130 Мутант MF479 Обратный праймер R479-83 ДНК Искусственная последовательность CCGCGGAACCAGACCAGCCGCTCCCAGAATCGCCGCTTTAGACATATTAGAAAC
0131 Мутант MF479 ДНК- последовательность конструкции MF479 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC
GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGGCGATTCTGGGAGCGGCTGGTCTGGTTCC GCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0132 Мутант MF479 Мутант MF479 ДНК Искусственная последовательность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCT GAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAAT CAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGG TTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAG CCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCT TCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCA AAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCC GCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAG CGGCGATTCTGGGAGCGGCTGGTCTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATC ATGGTTAA
0133 Мутант MF479 Мутант MF479 PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAAILGAAGLVPRGSHHHHHHG
0134 Мутант N45 Прямой праймер N45_F ДНК Искусственная последовательность TCTAGAGGATCCGGCAGGCCAGGCG
0135 Мутант N45 ДНК Искусственная CGCAAGCTTGTCGACTTAACGC
- 24 035372
Обратный R502D0 последовательность
0136 Мутант N45 ДНК- последовательность мутанта N45 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATG GTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTC CGCGCGGTAGCGCGAAGGATCCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTA ATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCA GACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTT GTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGAT GAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACG GTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGG TGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGG TTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGG GTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGC TTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTC AAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCC GCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAG CGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGC AAAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAAGTCGACAAGCTTGCGG
0137 Мутант N45 Мутант N45 PRT Искусственная последовательность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPAGQAIANRFTSNIKGLTQASR NANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSN QTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILD SMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSA RSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLR
0138 Мутант NGD1 ДНК- последовательность конструкции NGD1 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGTAAAGGAGAAGAACTTTTCACTGGAG TTGTCCCAATTCTTGTTGAATTAGATGGTGATGTTAATGGGCACAAATTTTCTGTCAGT GGAGAGGGTGAAGGTGATGCAACATACGGAAAACTTACCCTTAAATTTATTTGCACTA
CTGGAAAACTACCTGTTCCATGGCCAACACTTGTCACTACTCTGACGTATGGTGTTCA ATGCTTTTCCCGTTATCCGGATCACATGAAACGGCATGACTTTTTCAAGAGTGCCATG CCCGAAGGTTATGTACAGGAACGCACTATATCTTTCAAAGATGACGGGAACTACAAGA CGCGTGCTGAAGTCAAGTTTGAAGGTGATACCCTTGTTAATCGTATCGAGTTAAAAGG TATTGATTTTAAAGAAGATGGAAACATTCTCGGACACAAACTCGAGTACAACTATAACT CACACAATGTATACATCACGGCAGACAAACAAGGCCTATCAGGCCGCATTATGAGCG GGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGC TTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTC TATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGT GCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCT ATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTC AATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGC TAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGC CTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTG ATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCG CTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGT AGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATC ATCATGGTTAAGTCGAC
0139 Мутант NGD1 Экспрессируемый мутант SY3-GFP ДНК Искусственная последовательность ATGAGTAAAGGAGAAGAACTTTTCACTGGAGTTGTCCCAATTCTTGTTGAATTAGATGG TGATGTTAATGGGCACAAATTTTCTGTCAGTGGAGAGGGTGAAGGTGATGCAACATAC GGAAAACTTACCCTTAAATTTATTTGCACTACTGGAAAACTACCTGTTCCATGGCCAAC ACTTGTCACTACTCTGACGTATGGTGTTCAATGCTTTTCCCGTTATCCGGATCACATGA AACGGCATGACTTTTTCAAGAGTGCCATGCCCGAAGGTTATGTACAGGAACGCACTAT ATCTTTCAAAGATGACGGGAACTACAAGACGCGTGCTGAAGTCAAGTTTGAAGGTGAT ACCCTTGTTAATCGTATCGAGTTAAAAGGTATTGATTTTAAAGAAGATGGAAACATTCT CGGACACAAACTCGAGTACAACTATAACTCACACAATGTATACATCACGGCAGACAAA CAAGGCCTATCAGGCCGCATTATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGAT
- 25 035372
GCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAG GCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTG AATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACG GGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGA AGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGG ACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCT GCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGA AGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTC GTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAAT ACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACTG GTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0140 Мутант NGD1 Экспрессируемый мутант SY3GFP/мутант NGD1 PRT Искусственная последовательность MSKGEELFTGWPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTTGKLPVPWPTLV TTLTYGVQCFSRYPDHMKRHDFFKSAMPEGYVQERTISFKDDGNYKTRAEVKFEGDTLV NRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSHNVYITADKQGLSGRIMSGLRINSAKDDAAGQAIA NRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQ DEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFN VNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYA LVPRGSHHHHHHG
0141 Мутант S33 Прямой F502_S33 ДНК Искусственная последовательность TCTAGAGGATCCGTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGC
0142 Мутант S33 ДНК- последовательность мутанта S33 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATG GTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTC CGCGCGGTAGCGCGAAGGATCCGTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGAT GCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAG GCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTG AATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACG
GGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGA AGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGG ACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCT GCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGA ATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACG CTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTC AAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCC ATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAG ATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGC TGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTG CGTTAAGTCGAC
0143 Мутант S33 Мутант S33 ДНК Искусственная последовательность ATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGC AAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTCCGCGCGGTAGCGCGAAGGATCCGTCTG GTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCT TCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCT ATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTG CGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTA TCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCT AACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCC TTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGA CTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAAC CCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGG GGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAAT CTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATA TGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACC AGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAA
- 26 035372
0144 Мутант S33 Мутант S33 PRT Искусственная последовательность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPSGLRINSAKDDAAGQAIANRF TSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEI QQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNS PGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAIT NLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLR
0145 Мутант SY3CT Обратный праймер RSY3CT ДНК Искусственная последовательность AGATCTCCGCGGAACCAGTGCATAGTCAGCATCTTCGATACGGC
0146 Мутант SY3CT ДНК- последовательность конструкции SY3CT ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC ACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0147 Мутант SY3CT Экспрессируемый мутант SY3CT ДНК Искусственная последовательность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCT GAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAAT CAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGG
TTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAG CCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCT TCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCA AAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCC GCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCAT CATCATCATCATGGTTAA
0148 Мутант SY3CT Экспрессируемый мутант SY3CT PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYALVPRGSHHHHHHG
0149 Мутант ЗЗМХ Мутант ЗЗМХ ДНК Искусственная последовательность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTGCAGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTGCCGGGGCTAACGCTGATGCCGCTC TGAAAGCTATCCAGGCTGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTCA GCAGACTCAAGCTGCCGCTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACGCAATGGCAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGCCGCTATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAA AGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGG CTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATT CAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTC CGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTCAAATGTCTAAA GCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCG CAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTA А
0150 Мутант ЗЗМХ Мутант ЗЗМХ PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNAADGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATAGANADAALKAIQAEIQQRLEEIDRVSQQTQAAAVKVLSQDNAMAIQVGANDGA AITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG
- 27 035372
NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSQMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0151 Мутант ЗЗМХ ДНК- последовательность ЗЗМХ ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTGCAGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TGCCGGGGCTAACGCTGATGCCGCTCTGAAAGCTATCCAGGCTGAAATTCAGCAACG TCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTCAGCAGACTCAAGCTGCCGCTGTTAAAGTCCTG TCTCAGGACAACGCAATGGCAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGCCGCTATTACCA TCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCC CCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACG CAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTT GGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTAT GCAACGGAAGTTTCTCAAATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCG TTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGG GTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0152 Мутант 485МХ ДНК- последовательность конструкции 485МХ ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTGCAGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TGCCGGGGCTAACGCTGATGCCGCTCTGAAAGCTATCCAGGCTGAAATTCAGCAACG TCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTCAGCAGACTCAAGCTGCCGCTGTTAAAGTCCTG TCTCAGGACAACGCAATGGCAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGCCGCTATTACCA TCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCC CCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACG
CAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTT GGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTAT GCAACGGAAGTTTCTCAAATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTCTGGTTC CGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0153 Мутант 485МХ Конструкция 485МХ ДНК Искусственная последовательность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTGCAGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTGCCGGGGCTAACGCTGATGCCGCTC TGAAAGCTATCCAGGCTGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTCA GCAGACTCAAGCTGCCGCTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACGCAATGGCAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGCCGCTATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAA AGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGG CTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATT CAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTC CGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTCAAATGTCTAAA GCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTCTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCAT CATGGTTAA
0154 Мутант 485МХ Конструкция 485МХ PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNAADGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATAGANADAALKAIQAEIQQRLEEIDRVSQQTQAAAVKVLSQDNAMAIQVGANDGA AITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSQMSKAQILQQAGLVPRGSHHHHHHG
0155 Мутант MIM4 Вариант CBLB502 ДНК Искусственная последовательность ATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGC AAATGGGTCGGGATCTGTACGACGATGACGATAAGGATCCGATGGCACAAGTCATTAA TACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCAGAATAACCTGCAGAAATCTCAGTCCTCACTG AGTTCCGCTATTGAGCGTCTGTCCTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATG CGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAAT
- 28 035372
GAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTCAAGGG ACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGA AATCGATCGCGTTTCTCAGCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGAC AACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGC AAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATT TCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTG CCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAA AGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATT ACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATG CTGACTATGCAACGGAAGTTTCTCAAATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGG TACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGCGT ТАА
0156 Мутант MIM4 Дизайн праймеров (для делеции аминокислот Gln439; Asn440; Arg441; Phe442): ДНК Искусственная последовательность AACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCT GGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACCGCCCTTGGCGCTACGGTAACC GCTCTGGCCTCCGCGCGTAGCGCTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCT CAAATG
0157 Мутант MIM4 Дизайн праймеров (для делеции аминокислот Gln439; Asn440; Arg441; Phe442): PRT Искусственная последовательность NPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITALGATVTALASARSAIEDADYATEVSNM
0158 Мутант MIM4 Прямой праймер MIM4 ДНК Искусственная последовательность GCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTGATTCAGCCATTACCGCCCTTGG
0159 Мутант MIM4 Обратный праймер MIM4 ДНК Искусственная последовательность CCAAGGGCGGTAATGGCTGAATCAATTGCCCCCAGAGAAGAACGAACTGC
0160 Мутант MIM4 MIM4 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAAATAATT TTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCAT GGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACGATGAC GATAAGGATCCGATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCAGA ATAACCTGAACAAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGAGCGTCTGTCCTCTGG TCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTT CACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCT ATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTG CGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTA TCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCT AACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCC TTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGA CTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAAC CCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGG GGGCAATTGATTCAGCCATTACCGCCCTTGGCGCTACGGTAACCGCTCTGGCCTCCG CGGCTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGC GCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCA AAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAA
0161 Мутант MIM4 MIM4 PRT Искусственная последовательность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDDDDKDPMAQVINTNSLSLLTQNNLNKSQSSL SSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNN LQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQV GANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPL ASIDSALSKVDAVRSSLGAIDSAITALGATVTALASAASRIEDADYATEVSNMSKAQILQQA
- 29 035372
GTSVLAQANQVPQNVLSLLR
0162 Мутант MIM5 Дизайн праймеров (мутации Gln439Ala; Asn440Lys; Arg441Ala): ДНК Искусственная последовательность AACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCT GGGGGCAATTGCAAAGGCTTTTGATTCAGCCATTACCGCCCTTGGCGCTACGGTAAC CGCTCTGGCCTCCGCGCGTAGCGCTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTC TCAAATG
0163 Мутант MIM5 Дизайн праймеров (мутации Gln439Ala; Asn440Lys; Arg441Ala): PRT Искусственная последовательность NPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIAKAFDSAITALGATVTALASARSAIEDADYATEVSNM
0164 Мутант MIM5 Прямой праймер MIM5 ДНК Искусственная последовательность CGTTCTTCTCTGGGGGCAATTGCAAAGGCTTTTGATTCAGCCATTACCGC
0165 Мутант MIM5 Обратный праймер MIM5 ДНК Искусственная последовательность GCGGTAATGGCTGAATCAAAAGCCTTTGCAATTGCCCCCAGAGAAGAACG
0166 Мутант MIM5 MIM5 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAAATAATT TTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCAT GGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACGATGAC GATAAGGATCCGATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCAGA ATAACCTGAACAAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGAGCGTCTGTCCTCTGG TCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTT CACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCT ATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTG
CGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTA TCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCT AACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCC TTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGA CTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAAC CCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGG GGGCAATTGCAAAGGCTTTTGATTCAGCCATTACCGCCCTTGGCGCTACGGTAACCG CTCTGGCCTCCGCGGCTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAA TATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAAC CAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAA
0167 Мутант MIM5 MIM5 PRT Искусственная последовательность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDDDDKDPMAQVINTNSLSLLTQNNLNKSQSSL SSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNN LQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQV GANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPL ASIDSALSKVDAVRSSLGAIAKAFDSAITALGATVTALASAASRIEDADYATEVSNMSKAQIL QQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLR
0168 Мутант Ml MX Мутант 33MIMX ДНК Искусственная последовательность ATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGC AAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTCCGCGCGGTAGCGCGAAGGATCCGTCTG GTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCT TCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTGCAGACGGCATTTC TATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGT GCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCT ATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTC AAGCTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACGCAATGAAAATCCAGGTTGGTGC TAACGATGGTGCCGCTATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGC CTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAG
- 30 035372
ACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAA CCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTG GGGGCAATTCAAGCTCGTTTTGCCGCGGCCATTGCTAACCTTGGCAATACGGTAACCA ATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAA TATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAAC CAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAA
0169 Мутант ΜI MX MIMx PRT Искусственная последовательность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPSGLRINSAKDDAAGQAIANRF TSNIKGLTQASRNAADGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEI QQRLEEIDRVSNQTQANGVKVLSQDNAMKIQVGANDGAAITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNS PGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQARFAAAIA NLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLR
0170 Мутант MIMX ДНК- последовательность 33MIMx ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATG GTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTC CGCGCGGTAGCGCGAAGGATCCGTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGAT GCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAG GCTTCCCGTAACGCTGCAGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTG AATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACG GGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGA AGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAAGCTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAG GACAACGCAATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGCCGCTATTACCATCGATC TGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGAC GCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGT CAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAGCTCGTTTTGCCGCGG CCATTGCTAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGA AGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAG
GCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTAC TGCGTTAAGTCGAC
0171 Мутант MIXC Обратный праймер RMIXC ДНК Искусственная последовательность AGATCTGTCGACTTAACCATGATGATGATGATGATGAGAACCCCGCGGAACCAGTAAA GAGAGGACGTTTTGCGGAACC
0172 Мутант MIXC ДНК- последовательность MIXC ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAGCTCGTTTTGCCGCGGCCATTGCTAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTT CTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0173 Мутант MIXC MIXC PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQARFAAAIANLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0174 Мутант MIXN Прямой праймер ДНК Искусственная последовательность AGATCTCATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGC
FMIMxN
0175 Мутант MIXN ДНК- последовательность ΜΙΧ.Ν ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTGCAGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAAGCTAACGGTGTTAAAGTCCTGT CTCAGGACAACGCAATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGCCGCTATTACCAT CGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCC CGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGC AGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTT CTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0176 Мутант MIXN Экспрессируемый мутант ΜΙΧ.Ν PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNAADGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQANGVKVLSQDNAMKIQVGANDGA AITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0177 Мутанты ΜΙΜ1; ΜΙΜ2 и ΜΙΜ3 Мутанты 502 ΜΙΜ1; ΜΙΜ2 и ΜΙΜ3 С-концевой части CBLB502 ДНК Искусственная последовательность AACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCT GGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACC AATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTC AAATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAA CCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAA
0178 Мутанты ΜΙΜ1; ΜΙΜ2 и ΜΙΜ3 Дизайн праймеров (мутант ΜΙΜ1) ДНК Искусственная последовательность ATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAG АТ
0179 Мутанты ΜΙΜ1; ΜΙΜ2 и ΜΙΜ3 Дизайн праймеров (мутант ΜΙΜ1) PRT Искусственная последовательность ITNLGNTVTNLNSARSRIED
0180 Мутанты ΜΙΜ1; ΜΙΜ2 и ΜΙΜ3 Прямой праймер 455-57 ДНК Искусственная последовательность CCTTGGCAATACGGTAACCGCTCTGGCCTCCGCGCGTAGCCGTATC
0181 Мутанты ΜΙΜ1; ΜΙΜ2 и ΜΙΜ3 Обратный праймер 455-57 ДНК Искусственная последовательность GATACGGCTACGCGCGGAGGCCAGAGCGGTTACCGTATTGCCAAGG
0182 Мутанты ΜΙΜ1; ΜΙΜ2 и ΜΙΜ3 Дизайн праймеров (мутант М1М2_М1М1 плюс R460A) ДНК Искусственная последовательность ACGGTAACCGCTCTGGCCTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACG GAA
0183 Мутанты ΜΙΜ1; ΜΙΜ2 и ΜΙΜ3 Дизайн праймеров (мутант М1М2_М1М1 плюс R460A) PRT Искусственная последовательность TVTALASARSRIEDADYATE
0184 Мутанты ΜΙΜ1; ДНК Искусственная GCTCTGGCCTCCGCGGCTAGCCGTATCGAAGATG
- 32 035372
MIM2 и MIM3 Прямой праймер 460 последовательность
0185 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 Обратный праймер 460 ДНК Искусственная последовательность CATCTTCGATACGGCTAGCCGCGGAGGCCAGAGC
0186 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 Дизайн праймеров (мутант MIM3_MIM2 плюс N448A; N451A) ДНК Искусственная последовательность CAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCGCTCTGGCCT ОС
0187 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 Дизайн праймеров (мутант MIM3_MIM2 плюс N448A; N451A) PRT Искусственная последовательность QNRFDSAITNLGNTVTALAS
0188 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 Прямой праймер 448-51 ДНК Искусственная последовательность GTTTTGATTCAGCCATTACCGCCCTTGGCGCTACGGTAACCGCTCTGG
0189 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 Обратный праймер 448-51 ДНК Искусственная последовательность CCAGAGCGGTTACCGTAGCGCCAAGGGCGGTAATGGCTGAATCAAAAC
0190 Мутант МЕ42Прямой ДНК Искусственная последовательность CAACAGCGCGAAAGCCGATGCGGGAGGCCAGGCGATTGC
праймер МЕ42
0191 Мутант МЕ42Обратный праймер МЕ42 ДНК Искусственная последовательность GCAATCGCCTGGCCTCCCGCATCGGCTTTCGCGCTGTTG
0192 Мутант МЕ42Последовател ьность конструкции МЕ42 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GCCGATGCGGGAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTG ACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTT CTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0193 Мутант МЕ42Мутант МЕ42 PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKADAGGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0194 Мутант МЕ110 Прямой праймер МЕ100 ДНК Искусственная последовательность GTCTGTTCAGGCCACTGCCGGGGCTAACTCTGATTCCGATCTG
- 33 035372
0195 Мутант ME110 Обратный праймер МЕ100 ДНК Искусственная последовательность CAGATCGGAATCAGAGTTAGCCCCGGCAGTGGCCTGAACAGAC
0196 Мутант МЕ110 Последовательност ь конструкции МЕ100 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TGCCGGGGCTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTT CTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0197 Мутант МЕ110 Мутант МЕ110 PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATAGANSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0198 Мутант МЕ100/110 Прямой праймер МЕ110 ДНК Искусственная последовательность CTGATTCCGATCTGAAAGCTATCCAGGCTGAAATTCAGCAACGTC
0199 Мутант МЕ100/110 ДНК Искусственная GACGTTGCTGAATTTCAGCCTGGATAGCTTTCAGATCGGAATCAG
Обратный праймер МЕ110 последовательность
0200 Мутант МЕ100/110 Последовательност ь конструкции МЕ100/110 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TGCCGGGGCTAACTCTGATTCCGATCTGAAAGCTATCCAGGCTGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTT CTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0201 Мутант ME104N Промежуточный мутант МЕ100/110 ДНК Искусственная последовательность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTGCCGGGGCTAACTCTGATTCCGATC TGAAAGCTATCCAGGCTGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAA TCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAG GTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAA GCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGC TTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTC AAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCC
- 34 035372
GCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAG CGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGC AAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0202 Мутант ME100/110 Мутант МЕ110/110 PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATAGANSDSDLKAIQAEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0203 Мутант МЕ104 Прямой праймер МЕ104 ДНК Искусственная последовательность GCCACTAACGGGACTAACGCTGATGCCGCTCTGAAATCTATCCAG
0204 Мутант МЕ104 Обратный праймер МЕ104 ДНК Искусственная последовательность CTGGATAGATTTCAGAGCGGCATCAGCGTTAGTCCCGTTAGTGGC
0205 Мутант МЕ104 Последовательност ь конструкции МЕ104 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACGCTGATGCCGCTCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTT
CTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0206 Мутант МЕ104 Мутант МЕ104 PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNADAALKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0207 Мутант ME104N Праймер FME104New ДНК Искусственная последовательность GCCACTGCCGGGGCTAACGCTGATGCCGCTCTGAAAGCTATCCAG
0208 Мутант ME104N Праймер RME104New ДНК Искусственная последовательность CTGGATAGCTTTCAGAGCGGCATCAGCGTTAGCCCCGGCAGTGGC
0209 Мутант ME104N Последовательност ь конструкции ME104New ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TGCCGGGGCTAACGCTGATGCCGCTCTGAAAGCTATCCAGGCTGAAATTCAGCAACG TCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGT CTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCAT CGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCC CGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGC AGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTT CTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGT
- 35 035372
TCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0210 Мутант ME104N Мутант ME104N PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATAGANADAALKAIQAEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0211 Мутант МЕ110 Последовательност ь конструкции МЕ110 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAAGCTATCCAGGCTGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTT CTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0212 Мутант МЕ110 Мутант МЕ110 PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKAIQAEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0213 Мутант МЕ117 ДНК Искусственная CTATCCAGGATGAAATTCAGGCACGTCTGGCAGAAATCGATCGCG
Прямой праймер МЕ117 последовательность
0214 Мутант МЕ117 Обратный праймер МЕ117 ДНК Искусственная последовательность CGCGATCGATTTCTGCCAGACGTGCCTGAATTTCATCCTGGATAG
0215 Мутант МЕ117 Последовательност ь конструкции 33ML (возможно имелось в виду МЕ117?) ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGGCACGT CTGGCAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTT CTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0216 Мутант МЕ117 Мутант МЕ117 PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQARLAEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0217 Мутант МЕ124 Прямой праймер ДНК Искусственная последовательность GGAAGAAATCGATGCCGTTTCTGCTGCGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCT С
- 36 035372
ME104
0218 Мутант ME124 Обратный праймер МЕ104 ДНК Искусственная последовательность GAGACAGGACTTTAACACCGTTAAATTGAGTCGCAGCAGAAACGGCATCGATTTCTTC С
0219 Мутант МЕ124 Последовательност ь конструкции МЕ124 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATGCCGTTTCTGCTGCGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGT CTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCAT CGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCC CGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGC AGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTT CTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0220 Мутант МЕ124 Мутант МЕ124 PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDAVSAATQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0221 Мутант МЕ124Р Прямой праймер МЕ124Р ДНК Искусственная последовательность CAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATGCCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGG
0222 Мутант МЕ124Р Обратный праймер МЕ124Р ДНК Искусственная последовательность CCGTTAAATTGAGTCTGATTAGAAACGGCATCGATTTCTTCCAGACGTTGCTG
0223 Мутант МЕ124 Экспрессируемый мутант МЕ124Р ДНК Искусственная последовательность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGAC GGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGC AGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCT GAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATGCCGTTTCTAAT CAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGG TTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAG CCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCT TCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCA AAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCC GCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAG CGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGC AAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0224 Мутант МЕ124Р МЕ124Р ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATGCCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG
- 37 035372
GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTT CTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0225 Мутант ME124P МЕ124Р PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDAVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0226 Мутант МЕ132 Прямой праймер МЕ132 ДНК Искусственная последовательность CGTTTCTAATCAGACTCAATTTGCCGCTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACC
0227 Мутант МЕ132 Обратный праймер МЕ132 ДНК Искусственная последовательность GGTTGTCCTGAGACAGGACTTTAACAGCGGCAAATTGAGTCTGATTAGAAACG
0228 Мутант МЕ132 Последовательност ь конструкции МЕ132 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTGCCGCTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC
AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTT CTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0229 Мутант МЕ132 Мутант МЕ117 (ME 132?) PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFAAVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0230 Мутант МЕ142 Прямой праймер МЕ142 ДНК Искусственная последовательность GTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACGCGATGGCAATCCAGGTTGGTGCTAACG
0231 Мутант МЕ142 Обратный праймер МЕ142 ДНК Искусственная последовательность CGTTAGCACCAACCTGGATTGCCATCGCGTTGTCCTGAGACAGGACTTTAAC
0232 Мутант МЕ142 Последовательност ь конструкции МЕ142 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACGCGATGGCAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTT
- 38 035372
CTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0233 Мутант МЕ142 Мутант МЕ142 PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNAMAIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0234 Мутант МЕ150 Прямой праймер МЕ150 ДНК Искусственная последовательность GATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAGCGCTGCTGAAACCATTACCATCGATCTGC
0235 Мутант МЕ150 Обратный праймер МЕ150 ДНК Искусственная последовательность GCAGATCGATGGTAATGGTTTCAGCAGCGCTAGCACCAACCTGGATTTTCATC
0236 Мутант МЕ150 Последовательност ь конструкции МЕ150 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAGCGCTGCTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTT CTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGT
TCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0237 Мутант МЕ150 Мутант МЕ150 PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGASAAE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0238 Мутант МЕ468 Прямой праймер МЕ468 ДНК Искусственная последовательность GCCGTATCGAAGATGCTGACGCTGGAGCGGAAGTTGCTAATATGTCTAAAGCGCAG
0239 Мутант МЕ468 Обратный праймер МЕ468 ДНК Искусственная последовательность CTGCGCTTTAGACATATTAGCAACTTCCGCTCCAGCGTCAGCATCTTCGATACGGC
0240 Мутант МЕ468 Последовательност ь конструкции МЕ468 ДНК Искусственная последовательность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTCTAGAATAATTT TGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAA GACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGA CTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTG CGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCAC TAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGT CTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCC GGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTG GCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACGCTG GAGCGGAAGTTGCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGT TCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGG TTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0241 Мутант МЕ468 Мутант МЕ468 PRT Искусственная последовательность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGE TITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLG NTVTNLNSARSRIEDADAGAEVANMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHG
0242 Линкер PRT Искусственная последовательность SPG
Применение композиций, относящихся к флагеллину.
В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, могут стимулировать активность Toll-подобных рецепторов (например, TLR1, и/или TLR2, и/или TLR3, и/или TLR4, и/или TLR5, и/или TLR6, и/или TLR7, и/или TLR8, И/или TLR9, и/или TLR10, и/или TLR11, и/или TLR12, и/или TLR13). Семейство TLR состоит по меньшей мере из 10 членов и является существенно необходимым для врожденной иммунной защиты против патогенов. Врожденная иммунная система распознает
- 39 035372 консервативные патоген-ассоциированные молекулярные паттерны (PAMP). TLR может распознавать консервативную структуру, характерную для бактериального флагеллина, которая может состоять из большой группы остатков, которые допускают до некоторой степени вариативность в составе аминокислот. В статье Smith et al., Nat. Immunol. 4:1247-53 (2003) идентифицировали 13 консервативных аминокислот во флагеллине, которые являются частью консервативной структуры, распознаваемой TLR5. 13 консервативных аминокислот флагеллина, которые могут быть важны для активности TLR5, показаны на фиг. 1А и 1В.
В некоторых вариантах реализации композиция, относящаяся к флагеллину, активирует путь сигнализации TLR5. В некоторых вариантах реализации композиция, относящаяся к флагеллину, активирует TLR5 на тех же уровнях или уровнях, близких к активации CBLB502. Активация TLR5 индуцирует экспрессию ядерного фактора NF-kB, который, в свою очередь, активирует многочисленные цитокины, имеющие отношение к воспалению. В дополнительных вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, индуцируют экспрессию провоспалительных цитокинов. В дополнительных вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, индуцируют экспрессию противовоспалительных молекул. В другом варианте реализации композиции, относящиеся к флагеллину, индуцируют экспрессию противоапоптозных молекул. В еще одном дополнительном варианте реализации композиции, относящиеся к флагеллину, индуцируют экспрессию антибактериальных молекул. Мишени NF-kB включают ИЛ-β, ФНО-α, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-18, ГКСФ, TNFSF13B, хемоаттрактант кератиноцитов (KC), BLIMP1/PRDM1, CCL5, CCL15, CCL17, CCL19, CCL20, CCL22, CCL23, CXCL1, CCL28, CXCL11, CXCL10, CXCL3, CXCL1, GRO-бета, GRO-гамма, CXCL1, ICOS, интерферон гамма (ИФН-G), ИЛ-1А, ИЛ-1В, IL1RN, ИЛ-2, ИЛ-9, ИЛ-10, ИЛ-11, ИЛ-12, ИЛ-12В, ИЛ-12А, ИЛ-13, ИЛ-15, ИЛ-17, ИЛ-23А, ИЛ-27, индуцируемый вирусом Эпштейна-Барра белок 3 (EBI3), ИФН-В1, CXCL5, KC, NGp1, CXCL5, CXCL6, лимфотоксин-альфа (LTA), лимфотоксин-бета (LTB), CCL2, CXCL9, MCP-1/JE, CCL3, CCL4, CXCL3, CCL20, CXCL10, CXCL5, CCL5, CCL1, ФНО-β, TNFSF10, фактор трилистника 3 (TFF3), TNFSF15, CD86, компонент 8а комплемента, CCL27, дефензин-в3, MIG, MIP-2 и/или NOD2/CARD15, но не ограничиваются ими.
В некоторых вариантах реализации активация пути сигнализации TLR5 может регулировать иммунную функцию CD4+ Т-клеток путем повышения выработки регуляторных Т-клеток (Трег), снижения индуцируемой липополисахаридами (ЛПС) активации регулируемой внеклеточными сигналами киназы 1/2 (ERK1/2) и/или активации Т-клеток, являющихся натуральными киллерами (NK-клеток).
Болезни и способы лечения/профилактики.
В различных вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) и способы, описанные в настоящем документе, можно применять при разнообразных болезненных состояниях. В одном из аспектов согласно настоящему изобретению предложен способ стимулирования сигнального пути TLR5, включающий введение композиции, относящейся к флагеллину, согласно настоящему изобретению субъекту, который нуждается в этом. Активирование сигнального пути TLR5 может иметь широкое терапевтическое применение, включая лечение рака, защиту от повреждения, индуцируемого радиацией или реперфузией, действие в качестве адъюванта в вакцинах или защиту клеток от цитотоксических соединений, но не ограничивается только этим.
В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, согласно настоящему изобретению или их фрагменты могут быть представлены в качестве адъювантов в вирусных вакцинах. В одном из вариантов реализации композиции, относящиеся к флагеллину, или их фрагменты можно вводить одновременно с вакциной против гриппа или антигеном для возбуждения более сильного иммунного ответа организма на антигены вируса гриппа. В еще одном дополнительном варианте реализации композиции, относящиеся к флагеллину, согласно настоящему изобретению или их фрагменты могут быть представлены в качестве адъювантов в вакцинах против паразитов. Таким образом, в одном из вариантов реализации композиции, относящиеся к флагеллину, или их фрагменты можно вводить одновременно с вакциной против Plasmodium или антигеном для возбуждения более сильного иммунного ответа организма на антиген Plasmodium.
В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, согласно настоящему изобретению можно вводить для защиты клеток от токсических условий. В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, могут защищать клетки печени от Fas-опосредованного повреждения. Композиции, относящиеся к флагеллину, согласно настоящему изобретению могут вызывать снижение уровня ферментов печени в периферической крови и активацию каспаз.
Раковые заболевания.
В различных вариантах реализации настоящее изобретение относится к раковым заболеваниям и/или опухолям; например лечению или профилактике раковых заболеваний и/или опухолей. Используемый в настоящем описании термин рак или опухоль относится к нерегулируемому росту клеток, и/или аномальной выживаемости клеток, и/или ингибированию апоптоза, которое мешает нормальному функционированию органов и систем организма. В термин включены доброкачественные и злокачественные раковые заболевания, полипы, гиперплазия, а также латентные опухоли и микрометастазы. Так- 40 035372 же включены клетки, имеющие аномальную пролиферацию, которая не сдерживается иммунной системой (например, инфицированные вирусом клетки). Субъект, у которого есть рак или опухоль, представляет собой субъект, в организме которого присутствуют объективно определяемые раковые клетки. Раковые заболевания, которые перемещаются из изначальной локации и поражают жизненно важные органы, могут в конечном итоге привести к смерти субъекта посредством функционального нарушения пораженных органов. Гемопоэтические раковые заболевания, такие как лейкемия, могут вытеснять нормальные гемопоэтические компартменты у субъекта, тем самым приводя к недостаточности кроветворения (в форме анемии, тромбоцитопении и нейтропении), в конечном итоге приводящей к смерти.
Рак может представлять собой первичный рак или метастатический рак. Первичный рак может представлять собой область раковых клеток в месте возникновения, которая становится клинически выявляемой, и может представлять собой первичную опухоль. В противоположность этому, метастатический рак может представлять собой распространение заболевания из одного органа или части в другой несмежный орган или часть. Причиной метастатического рака может быть раковая клетка, которая приобретает способность проникать и инфильтровывать окружающие нормальные ткани в локальной области, образуя новую опухоль, которая может представлять собой локальный метастаз.
Причиной рака также может быть раковая клетка, которая приобретает способность проникать через стенки лимфатических и/или кровеносных сосудов, после чего раковая клетка способна циркулировать по кровотоку (таким образом, становясь циркулирующей опухолевой клеткой) к другим участкам и тканям в организме. Рак может быть обусловлен процессом, таким как лимфогенное или гематогенное распространение. Причиной рака также может быть опухолевая клетка, которая остановилась в другом участке, повторно проникла через сосуд или стенки, продолжила размножаться и в конечном итоге сформировала другую клинически выявляемую опухоль. Рак может представлять собой эту новую опухоль, которая может быть метастатической (или вторичной) опухолью.
Причиной рака могут быть метастазировавшие опухолевые клетки, которые являются вторичной или метастатической опухолью. Клетки этой опухоли могут быть подобны клеткам исходной опухоли. В качестве примера, если рак молочной железы или рак толстой кишки метастазирует в печень, вторичная опухоль, хотя находится в печени, состоит из атипичных клеток молочной железы или толстой кишки, а не из атипичных клеток печени. Таким образом, опухоль в печени может быть метастатическим раком молочной железы или метастатическим раком толстой кишки, а не раком печени. Рак может происходить из любой ткани. Рак может происходить, например, из меланомы, толстой кишки, молочной железы или предстательной железы и, таким образом, может состоять из клеток, которые изначально были клетками соответственно кожи, толстой кишки, молочной железы или предстательной железы. Рак также может представлять собой гематологическую злокачественную опухоль, которая может быть лимфомой. Рак может поражать ткань, такую как ткань печени, легкого, мочевого пузыря или кишечника. Пораженная ткань может экспрессировать TLR, тогда как рак может экспрессировать или может не экспрессировать TLR.
В настоящем изобретении также предложен способ снижения вероятности рецидива рака, включающий введение нуждающемуся в этом млекопитающему композиции, относящейся к флагеллину, согласно настоящему изобретению. Рак может присутствовать или присутствовал в ткани, которая экспрессирует или не экспрессирует TLR, такой как TLR5. Способ также может предотвращать рецидив рака. Рак может представлять собой онкологическое заболевание. Рак может представлять собой латентную опухоль, которая может быть следствием метастазирования рака. Латентная опухоль может быть остаточной опухолью после хирургического удаления опухоли. Рецидив рака может представлять собой повторный рост опухоли, метастазирование легких или метастазирование печени.
Типичные раковые заболевания и/или опухоли согласно настоящему изобретению могут экспрессировать или могут не экспрессировать TLR5 и могут включать базально-клеточную карциному, рак желчевыводящих путей; рак мочевого пузыря; рак костей; рак головного мозга и центральной нервной системы; рак молочной железы; рак брюшины; рак шейки матки; хориокарциному; рак толстой и прямой кишки; рак соединительной ткани; рак пищеварительной системы; рак эндометрия; рак пищевода; рак глаза; рак головы и шеи; рак желудка (в том числе рак желудочно-кишечного тракта); глиобластому; гепатокарционому; гепатому; внутриэпителиальное новообразование; рак почек; рак гортани; лейкоз; рак печени; рак легких (например, мелкоклеточный рак легких, немелкоклеточный рак легких, аденокарциному легкого и плоскоклеточную карциному легких); меланому; миелому; нейробластому; рак ротовой полости (губы, языка, рта и глотки); рак яичников; рак поджелудочной железы; рак предстательной железы; ретинобластому; рабдомиосаркому; рак прямой кишки; рак дыхательной системы; карциному слюнной железы; саркому; рак кожи; плоскоклеточный рак; рак желудка; рак яичка; рак щитовидной железы; рак матки или эндометрия; рак мочевыделительной системы; рак вульвы; лимфому, включая лимфому Ходжкина и неходжкинскую лимфому, а также В-клеточную лимфому (включая высокодифференцированную/фолликулярную неходжкинскую лимфому (НХЛ); мелкоклеточную лимфоцитарную (SL) НХЛ; промежуточно дифференцированную/фолликулярную НХЛ; промежуточно дифференцированную диффузную НХЛ; низкодифференцированную иммунобластную НХЛ; никзодифференцированную лимфобластную НХЛ; низкодифференцированную мелкоклеточную НХЛ с нерассечёнными ядра
- 41 035372 ми; НХЛ с генерализованной лимфаденопатией; мантийноклеточную лимфому; лимфому, связанную со СПИДом; и макроглобулинемию Вальденстрема; хронический лимфоцитарный лейкоз (ХЛЛ); острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ); волосатоклеточный лейкоз; хронический миелобластный лейкоз; а также другие карциномы и саркомы; и посттрансплантационное лимфопролиферативное расстройство (PTLD), а также аномальную пролиферацию сосудов, ассоциированную с факоматозами, отеками (например, связанными с опухолями головного мозга) и синдромом Мейгса, но не ограничиваются ими.
Композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) и способы, описанные в настоящем документе, можно применять к метастазирующим заболеваниям, включая раковые заболевания и/или опухоли. Термин метастазирование относится к распространению рака из первичного участка в другие места организма. Раковые клетки могут отрываться от первичной опухоли, проникать в лимфатические и кровеносные сосуды, циркулировать по кровотоку и расти в отдаленных очагах (метастазировать) в нормальных тканях в другом месте организма. Метастазирование может быть локальным или отдаленным. Метастазирование представляет собой последовательный процесс, возможный при условии отрыва опухолевых клеток от первичной опухоли, перемещения через кровоток и остановки на отдаленном участке. На новом участке клетки налаживают кровоснабжение и могут расти с образованием массы, несущей угрозу для жизни. Как стимуляторные, так и ингибиторные молекулярные пути в раковой клетке регулируют это поведение и также имеют значение взаимодействия между опухолевой клеткой и клетками организма хозяина на отдаленном участке.
Метастазы можно определять при помощи отдельного или комбинированного применения магнитно-резонансной томографии (МРТ), компьютерной томографии (КТ), подсчета клеток крови и тромбоцитов, исследования функции печени, рентгеноскопии грудной клетки и остеосцинтиграфии в дополнение к отслеживанию специфических симптомов.
В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к способу лечения млекопитающего, страдающего от рака с конститутивно активным NF-кВ, включающему введение млекопитающему композиции, содержащей терапевтически эффективное количество средства, которое индуцирует активность NF-кВ, включая композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанные в настоящем документе. Средства, которые индуцируют активность NF-кВ, можно вводить в комбинации с противоопухолевым лечением.
В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение включает способы лечения побочных эффектов, вызванных лечением рака, включающие введение композиции, относящейся к флагеллину, (и/или дополнительных средств), описанных в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации побочные эффекты от лечения рака включают алопецию, миелосупрессию, нефротоксичность, потерю массы тела, боль, тошноту, рвоту, диарею, запор, анемию, дистрофию, потеря волос, онемение, изменение вкусов, потеря аппетита, истончившиеся или ломкие волосы, язвы во рту, потерю памяти, геморрагии, кардиотоксичность, гепатотоксичность, ототоксичность и последующее после химиотерапии когнитивное нарушение.
В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к способу лечения млекопитающего, страдающего от повреждения нормальной ткани, которое вызвано лечением рака, включая рак с конститутивно активным NF-кВ, но не ограничиваясь им, способу, включающему введение млекопитающему композиции, содержащей терапевтически эффективное количество композиции, относящейся к флагеллину, (и/или дополнительных средств), описанной в настоящем документе.
Старение и стресс.
В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение включает способы модулирования старения клеток, включающие введение композиции, относящейся к флагеллину, (и/или дополнительных средств), описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение включает способы лечения стресса, включающие введение композиции, относящейся к флагеллину, (и/или дополнительных средств), описанной в настоящем документе. Настоящее изобретение также относится к способу лечения субъекта, страдающего от повреждения нормальной ткани, которое вызвано стрессом, включающему введение млекопитающему композиции, содержащей терапевтически эффективное количество композиции, относящейся к флагеллину, (и/или дополнительных средств). Стресс может быт вызван любым источником, включая радиацию, ранение, отравление, инфекцию и температурный шок, но не ограничиваясь ими.
В некоторых вариантах реализации композицию, относящуюся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) можно вводить в любой момент времени перед воздействием стресса, включая приблизительно 48 ч, приблизительно 46 ч, приблизительно 44 ч, приблизительно 42 ч, приблизительно 40 ч, приблизительно 38 ч, приблизительно 36 ч, приблизительно 34 ч, приблизительно 32 ч, приблизительно 30 ч, приблизительно 28 ч, приблизительно 26 ч, приблизительно 24 ч, приблизительно 22 ч, приблизительно 20 ч, приблизительно 18 ч, приблизительно 16 ч, приблизительно 14 ч, приблизительно 12 ч, приблизительно 10 ч, приблизительно 8 ч, приблизительно 6 ч, приблизительно 4 ч, приблизительно 3 ч, приблизительно 2 ч или приблизительно 1 ч перед воздействием, но не ограничиваясь этими рамками. В некоторых вариантах реализации композицию, относящуюся к флагеллину, можно вводить в любой момент
- 42 035372 времени после воздействия стресса, включая приблизительно 1 ч, приблизительно 2 ч, приблизительно 3 ч, приблизительно 4 ч, приблизительно 6 ч, приблизительно 8 ч, приблизительно 10 ч, приблизительно 12 ч, приблизительно 14 ч, приблизительно 16 ч, приблизительно 18 ч, приблизительно 20 ч, приблизительно 22 ч, приблизительно 24 ч, приблизительно 26 ч, приблизительно 28 ч, приблизительно 30 ч, приблизительно 32 ч, приблизительно 34 ч, приблизительно 36 ч, приблизительно 38 ч, приблизительно 40 ч, приблизительно 42 ч, приблизительно 44 ч, приблизительно 46 ч или приблизительно 48 ч после воздействия, но не ограничиваясь этими рамками.
Смягчение последствий и профилактика радиационного поражения.
В еще одних других вариантах реализации настоящее изобретение относится к лечению радиационно-ассоциированных заболеваний или повреждений. В конкретных вариантах реализации настоящее изобретение относится к смягчению или профилактике и/или защите от радиационно-ассоциированных заболеваний.
В одном из вариантов реализации изобретение относится к защите клеток от эффектов воздействия радиации. В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к способу защиты субъекты от радиации, включающему введение композиции, относящейся к флагеллину (и/или дополнительных средств), описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации радиация представляет собой ионизирующее излучение. В некоторых вариантах реализации ионизирующее излучение является достаточной причиной для желудочно-кишечного синдрома или гематопоэтического синдрома. В некоторых вариантах реализации композицию, относящуюся к флагеллину (и/или дополнительные средства), описанная в настоящем изобретении, вводят в комбинации с радиопротектантом, например антиоксидантом (например, амифостин и витамин Е), цитокином (например, фактор стволовых клеток) и т.д. В некоторых вариантах реализации композицию, относящуюся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанную в настоящем документе, вводят до, вместе с или после воздействия радиации. В некоторых вариантах реализации композицию, относящуюся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанную в настоящем документе, вводят в комбинации с фактором роста (например, фактором роста кератиноцитов), стероидом (например, 5-андростендиол), трихлор(диоксиэтиленО,О')теллуратом аммония, средствами защиты щитовидной железы (например, йодидом калия (KI)), средствами против тошноты, средствами против диареи, анальгетиками, анксиолитиками, седативными средствами, цитокиновыми лекарственными средствами, антибиотиками, противогрибковыми средствами и/или противовирусными средствами. В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к способу лечения и/или смягчения последствий опосредованного апоптозом повреждения тканей у субъекта, включающему введение нуждающемуся в этом субъекту композиции, относящейся к флагеллину (и/или дополнительных средств), описанной в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации апоптоз связан с клеточным стрессом. В некоторых вариантах реализации композицию, относящуюся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанную в настоящем документе, вводят до, во время или после поражения тканей. В некоторых вариантах реализации клеточный стресс представляет собой радиацию. В некоторых вариантах реализации композицию, относящуюся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), вводят в комбинации с радиопротектантом (например, антиоксидантом (например, амифостин и витамин Е), цитокином (например, фактор стволовых клеток) и т.д.
Повреждение и смерть нормальных клеток от ионизирующего излучения представляют собой комбинацию прямого радиационно-индуцируемого повреждения подвергшихся воздействию клеток и активной генетически запрограммированной реакции клетки на радиационно-индуцируемый стресс, приводящий в результате к самоубийству или апоптозу клетки. Апоптоз играет ключевую роль в массивной потере клеток, происходящей в более радиочувствительных органах (например, система кроветворения и иммунная система, эпителий желудочно-кишечного тракта и т. д.), недостаточность которых определяет общую радиочувствительность организма. В некоторых вариантах реализации введение композиций, относящихся к флагеллину, согласно настоящему изобретению нуждающемуся в этом субъекту подавляет апоптоз в клетках. В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, согласно настоящему изобретению вводят субъекту, проходящему противоопухолевое введение радиотерапией, для защиты здоровых клеток от повреждающего воздействия лучевой терапии. Воздействие ионизирующего излучения (ИИ) может быть кратковременным или долговременным, и/или оно может применяться в виде однократных или многократных доз, и/или оно может применяться ко всему телу или локально. Настоящее изобретение в некоторых вариантах реализации относится к ядерным авариям или военным атакам, которые могут включать воздействие единичной высокой дозы тотального облучения организма (иногда с последующим долговременным отравлением радиоактивными изотопами). Это же справедливо (со строгим контролем применяемой дозы), например, в отношении предварительного лечения пациентов, которым предстоит трансплантация костного мозга, когда необходимо подготовить органы кроветворения к костному мозгу донора путем очистки их от предшественников клеток крови хозяина-реципиента. Лечение рака может включать многократные дозы локального облучения, которые во много раз превышают летальные дозы, если бы они применялись в качестве тотального облучения организма. Отравление или лечение радиоактивными изотопами приводит к долговременному локальному воздействию радиации на органы-мишени (например, щитовидную железу в случае ингаляции 125I).
- 43 035372
Дополнительно, существует много физических форм ионизирующего излучения, сильно различающихся по степени тяжести биологических эффектов.
На молекулярном и клеточном уровне радиационные частицы способны вызывать разрыв и поперечную сшивку в ДНК, белках, клеточных мембранах и других макромолекулярных структурах. Ионизирующее излучение также индуцирует вторичное повреждение клеточных компонентов, приводя к возникновению свободных радикалов и активных форм кислорода (АФК). Многочисленные системы репарации противодействуют повреждению, такие как несколько путей репарации ДНК, которые восстанавливают целостность и верность передачи информации ДНК, и антиоксидантные химические соединения и ферменты, которые поглощают свободные радикалы и АФК и восстанавливают окисленные белки и липиды. Клеточные системы контрольных точек определяют дефекты ДНК и задерживают развитие клеточного цикла, пока не будет устранено повреждение или не будет принято решение приговорить клетку к остановке роста или программируемой клеточной смерти (апоптозу). Радиация может вызывать повреждение организмов млекопитающего, варьирующееся в диапазоне от умеренных мутагенных и канцерогенных эффектов низких доз до практически мгновенной смерти от высоких доз. В целом радиочувствительность организма определяется патологическими изменениями, развивающимися в более чувствительных тканях, которые включают систему кроветворения, репродуктивную систему и различные эпителии с высокой скоростью обновления.
Острый патологический результат гамма облучения, приводящий к смерти, является различным для разных доз и может определяться недостаточностью определенных органов, которые определяют порог чувствительности организма к каждой конкретной дозе. Таким образом, летальность более низких доз происходит, например, в результате аплазии костного мозга, тогда как умеренные дозы убивают быстрее, например, путем индуцирования желудочно-кишечного (ж/к) синдрома. Очень высокие дозы радиации могут вызывать почти мгновенную смерть, вызывая нейрональную дегенерацию.
Организмы, которые пережили период острой токсичности радиации, могут страдать от долговременных отдаленных последствий, которые включают радиационно-индуцированные канцерогенез и фиброз, развивающиеся в подвергшихся воздействию органах (например, почке, печени или легких) в течение месяцев и лет после облучения. Клеточная ДНК является основной мишенью ИИ, которое вызывает разнообразные виды повреждения ДНК (генотоксический стресс) путем прямых и непрямых (например, на основе свободных радикалов) механизмов. Все организмы поддерживают систему репарации ДНК, способную эффективно восстанавливать поврежденную радиацией ДНК; ошибки в процессе репарации ДНК могут приводить к мутациям.
В некоторых вариантах реализации воздействие радиации, которому подвергся субъект, является последствием противоопухолевого лечения радиотерапией. Опухоли в целом более чувствительны к гамма радиации и могут быть подвергнуты воздействию многократных локальных доз облучения, которые вызывают относительно низкое повреждение нормальной ткани. Тем не менее в некоторых примерах повреждение нормальных тканей является лимитирующим фактором при применении гаммарадиации для лечения рака. Применение гамма-излучения в ходе противоопухолевой терапии с помощью традиционной трехмерной конформальной или даже более сфокусированной доставки с использованием технологии BeamCath также имеет дозолимитирующие токсические эффекты, вызываемые кумулятивным эффектом излучения и вызывающие повреждение стволовых клеток или быстро обновляющихся нормальных тканей, таких как костный мозг и желудочно-кишечный (ж/к) тракт. Введение композиций, относящихся к флагеллину, согласно настоящему изобретению может защитить здоровые клетки пациента от радиационного повреждения, не затрагивая радиочувствительность опухолевых клеток.
В некоторых вариантах реализации субъект подвергался воздействию летальных доз радиации. При высоких дозах радиационно-индуцируемая летальность связана с так называемыми гематопоэтическим и желудочно-кишечным синдромами лучевой болезни. Гемопоэтический синдром характеризуется потерей гемопоэтических клеток и их предшественников, делая невозможным осуществление регенерации крови и лимфоидной системы. Смерть, как правило, наступает как следствие инфекции (в результате иммуносупрессии), кровоизлияния и/или анемии. Причиной ж/к синдрома является массовая гибель клеток в эпителии кишечника, преимущественно в тонком кишечнике с последующей дезинтеграцией стенки кишечника и смертью от бактериемии и сепсиса. Гемопоэтический синдром, как правило, преобладает при низких дозах радиации и приводит к более длительной отсрочке наступления смерти, чем ж/к синдром. В прошлом средства защиты от радиации представляли собой, как правило, антиоксиданты, как синтетические, так и природные. Совсем недавно цитокины и факторы роста были добавлены к списку радиопротектантов; считается, что механизм их радиозащиты является результатом облегчения последствий воздействия на регенерацию чувствительных тканей. Не существует четкого разделения между двумя группами радиопротектантов, однако некоторые цитокины индуцируют экспрессию клеточных антиоксидантных белков, таких как марганец-супероксиддизмутаза (Mn-СОД) и металлотионеина.
Степень защиты конкретного средства может быть выражена в виде фактора изменения дозы или фактора уменьшения дозы (ФИД или ФУД). ФИД определяется путем облучения субъекта, прошедшего лечение радиопротектором, и не проходившего лечения контрольных субъектов диапазоном радиационных доз и затем сравнения выживаемости или некоторых других конечных точек. ФИД обычно рассчи- 44 035372 тывают для 30-дневной выживаемости (50% летальная доза при 30-дневной выживаемости (LD50/30) в группе, получавшей лекарственное средство, поделенная на LD50/30 в группе, получавшей плацебо) и дает количественную оценку защиты системы кроветворения. С цель оценки защиты желудочнокишечной системы LD50 и ФИД рассчитывают для 6- или 7-дневной выживаемости.
Композиции, относящиеся к флагеллину, описанные в настоящем документе, обладают сильной способствующей выживанию активностью на клеточном уровне и на уровне организма в целом. В ответ на суперлетальные дозы радиации композиции, относящиеся к флагеллину, описанные в настоящем документе, могут ингибировать как желудочно-кишечный, так и гемопоэтический синдромы, которые являются основными причинами смерти от острого радиационного воздействия. Как следствие данных свойств композиции, относящиеся к флагеллину, описанные в настоящем документе, можно применять для лечения последствий воздействия естественных радиационных событий и ядерных аварий. Кроме того, композиции, относящиеся к флагеллину, описанные в настоящем документе, можно применять в комбинации с другими радиопротектантами, таким образом значительно повышая масштаб защиты от ионизирующего излучения. В отличие от традиционных средств защиты от радиации (например, поглотителей свободных радикалов) противоапопотозные средства могут не снижать первичное опосредованное радиацией повреждение, но могут действовать против вторичных явлений, включающих активные клеточные реакции на первичное повреждение, таким образом дополняя существующие линии защиты. Пифитрин-альфа, лекарственный ингибитор p53 (ключевого медиатора ответа на воздействие радиации в клетках млекопитающих), представляет собой пример этого нового класса радиопротектантов. Однако активность ингибиторов p53 ограничена осуществлением защитного действия в отношении системы кроветворения и не обладает защитным эффектом в отношении пищеварительного тракта (желудочнокишечный синдром), таким образом снижая терапевтическую ценность этих соединений.
Композиции, относящиеся к флагеллину, описанные в настоящем документе, можно применять в качестве средств защиты от радиации для увеличения диапазона переносимых радиационных доз путем повышения радиационной устойчивости у человека выше уровней, достигаемых с помощью существующих средств (экранирование и применение существующих биозащитных средств), и значительно увеличить шансы на выживание экипажа в случае ядерной аварии или крупномасштабного всплеска солнечных космических лучей, например.
Композиции, относящиеся к флагеллину, описанные в настоящем документе, также полезны для лечения невосполнимой потери клеток, вызванной излучением низкой дозы, например, в центральной нервной системе и репродуктивных органах. Композиции, относящиеся к флагеллину, описанные в настоящем документе, можно также применять в ходе противоопухолевой химиотерапии для лечения побочных эффектов, связанных с химиотерапией, включая алопецию, миелосупрессию, нефротоксичность, потерю массы тела, боль, тошноту, рвоту, диарею, запор, анемию, дистрофию, потерю волос, онемение, изменение вкусов, потерю аппетита, истончившиеся или ломкие волосы, язвы во рту, потерю памяти, геморрагии, кардиотоксичность, гепатотоксичность, ототоксичность и последующее после химиотерапии когнитивное нарушение.
В одном из вариантов реализации млекопитающее лечат по причине воздействия радиации, включающих введение млекопитающему композиции, содержащей терапевтически эффективное количество композиции, относящейся к флагеллину. Композицию, относящуюся к флагеллину, можно вводить в комбинации с одним или более радиопротектантом. Один или более радиопротектантов могут представлять собой любое средство, которое лечит эффекты от воздействия радиации, включая антиоксиданты, поглотители свободных радикалов и цитокины, но не ограничиваясь ими.
Композиции, относящиеся к флагеллину, описанные в настоящем документе, могут ингибировать радиационно-индуцированную запрограммированную клеточную смерть в ответ на повреждение в ДНК и других клеточных структурах. В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, описанные в настоящем изобретении, могут не бороться с повреждением на клеточном уровне и могут не предотвращать появление мутаций. Свободные радикалы и активные формы кислорода (АФК) являются главной причиной мутаций и другого внутриклеточного повреждения. Антиоксиданты и поглотители свободных радикалов являются эффективными в отношении предотвращения повреждения свободными радикалами. Комбинация композиции, относящейся к флагеллину, и антиоксиданта или поглотителя свободных радикалов может привести в результате к менее обширному повреждению, более высокой выживаемости и улучшенному здоровью для млекопитающих, подвергшихся воздействию радиации. Антиоксиданты и поглотители свободных радикалов, которые можно применять при практическом применении настоящего изобретения, включают тиолы, такие как цистеин, цистеамин, глутатион и билирубин; амифостин (WR-2721); витамин А; витамин С; витамин Е; и флавоноиды, такие как индийский базилик священный (Ocimum sanctum), ориентин и висенин, но не ограничиваются ими.
Композиции, относящиеся к флагеллину, описанные в настоящем изобретении, также можно вводить в комбинации с целым рядом цитокинов и факторов роста, которые обеспечивают защиту от радиации путем восполнения и/или защиты радиочувствительных популяций стволовых клеток. Защиту от радиации с минимальными побочными эффектами можно достигнуть путем применения фактора стволовых клеток (ФСК, лиганда c-kit), лиганда Flt-3 и фрагмента интерлейкина-1 IL-1 b-rd. Защита может
- 45 035372 быть достигнута посредством индукции пролиферации стволовых клеток (все упомянутые цитокины) и предотвращения апоптоза (ФСК). Лечение делает возможным накопление лейкоцитов и их предшественников перед облучением, таким образом позволяя быстрее восстановить иммунную систему после облучения. ФСК эффективно спасают смертельно облученных мышей с ФИД в диапазоне 1,3-1,35 и также эффективны против желудочно-кишечного синдрома. Лиганд Flt-3 также обеспечивает мощную защиту у мышей и кроликов.
Несколько факторов, которые не являются цитокинами по природе, стимулируют пролиферацию иммуноцитов, и их можно применять в комбинации с композициями, относящиеся к флагеллину, описанными в настоящем документе. Например, 5-AED (5-андростендиол) представляет собой стероид, который стимулирует экспрессию цитокинов и повышает сопротивляемость к бактериальным и вирусным инфекциям. Синтетические соединения, такие как трихлор(диоксиэтилен-О,О'-)теллурат аммония (AS-101), можно также применять для индуцирования секреции многочисленных цитокинов и для комбинации с композициями, относящимися к флагеллину, описанными в настоящем документе.
Факторы роста и цитокины также можно применять для обеспечения защиты против желудочнокишечного синдрома. Фактор роста кератиноцитов (ФРК) стимулирует пролиферацию и дифференциацию в слизистой оболочке кишечника и повышает выживаемость клеток после облучения в кишечных криптах. Гемопоэтический цитокин и радиопротектант ФСК также могут увеличивать выживаемость стволовых клеток кишечника и связанную с этим краткосрочную выживаемость организма. Композиции, относящиеся к флагеллину, описанные в настоящем документе, могут защищать как от желудочнокишечного (ж/к) синдрома, так и гематопоэтического синдрома. Подобные композиции можно применять в комбинации с одним или более ингибиторами ж/к синдрома (включая, цитокины, такие как ФСК и ФРК, но не ограничиваясь ими).
Композицию, относящуюся к флагеллину, можно вводить в любой момент времени перед воздействием радиации, включая приблизительно 48 ч, приблизительно 46 ч, приблизительно 44 ч, приблизительно 42 ч, приблизительно 40 ч, приблизительно 38 ч, приблизительно 36 ч, приблизительно 34 ч, приблизительно 32 ч, приблизительно 30 ч, приблизительно 28 ч, приблизительно 26 ч, приблизительно 24 ч, приблизительно 22 ч, приблизительно 20 ч, приблизительно 18 ч, приблизительно 16 ч, приблизительно 14 ч, приблизительно 12 ч, приблизительно 10 ч, приблизительно 8 ч, приблизительно 6 ч, приблизительно 4 ч, приблизительно 3 ч, приблизительно 2 ч или приблизительно 1 ч перед воздействием, но не ограничиваясь этими рамками. Композицию, относящуюся к флагеллину, можно вводить в любой момент времени после воздействия радиации, включая приблизительно 1 ч, приблизительно 2 ч, приблизительно 3 ч, приблизительно 4 ч, приблизительно 6 ч, приблизительно 8 ч, приблизительно 10 ч, приблизительно 12 ч, приблизительно 14 ч, приблизительно 16 ч, приблизительно 18 ч, приблизительно 20 ч, приблизительно 22 ч, приблизительно 24 ч, приблизительно 26 ч, приблизительно 28 ч, приблизительно 30 ч, приблизительно 32 ч, приблизительно 34 ч, приблизительно 36 ч, приблизительно 38 ч, приблизительно 40 ч, приблизительно 42 ч, приблизительно 44 ч, приблизительно 46 ч или приблизительно 48 ч после воздействия радиации, но не ограничиваясь этими рамками.
В различных вариантах реализации способы и композиция согласно настоящему изобретению обеспечивают лечение или профилактику связанных с радиацией нарушений, таких как острая лучевая болезнь (ОЛБ). В различных вариантах реализации лекарственные средства, описанные в настоящем документе, снижают заболеваемость или смертность популяции пациентов, подвергшихся воздействию, или ускоряют восстановление после симптомов ОЛБ. ОЛБ часто представляют как последовательность поэтапных синдромов, которые могут варьироваться в зависимости от индивидуальной радиочувствительности, типа радиации и поглощенной радиационной дозы. В целом, без ограничения теорией, степень распространения симптомов будет увеличиваться и длительность каждой фазы будет сокращаться с повышением радиационной дозы. ОЛБ может быть поделена на три стадии: продромальная стадия (так называемая стадия тошноты, рвоты, диареи (стадия N-V-D)), латентный период и разгар болезни. В различных вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанные в настоящем документе, можно вводить человеку на любой из этих трех стадий (т.е. композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) можно вводить человеку в ходе продромальной стадии, композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) можно вводить человеку в ходе латентного периода или композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) можно вводить человеку в ходе разгара болезни). В ходе продромальной стадии часто существует относительно быстрое наступление тошноты, рвоты и чувства общего недомогания. Применение противорвотных средств (например, оральных профилактических противорвотных средств), таких как гранисетрон (Китрил), ондансетрон (Зофран) и блокаторы 5-HT3-рецепторов с дексаметозоном или без него, может быть показано в ситуациях, когда воздействие высоких доз радиации произошло, вероятно произойдет или неизбежно. Соответственно, в различных вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) можно вводить человеку, получающему противорвотное средство, или CBLB502 можно вводить человеку в комбинации с противорвотным средством. Например, композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) можно также добавлять к следующим схемам приема противорвотных средств: Ондансетрон: перво- 46 035372 начально 0,15 мг/кг внутривенно (в/в); вариант непрерывной в/в дозы состоит из дозы в 8 мг с последующим введением 1 мг/ч в течение следующих 24 ч. Пероральная доза представляет собой 8 мг каждые ч по мере необходимости, или гранисетрон (лекарственная форма для перорального приема): доза, как правило, составляет первоначально 1 мг, затем повторяется через 12 ч после первой дозы. Альтернативно, можно принять 2 мг как одну дозу. В/в доза зависит от массы тела; как правило, 10 мкг/кг массы тела.
Латентный период у пациента может протекать относительно бессимптомно. Продолжительность этой стадии зависит от дозы. Латентная стадия является самой долгой перед депрессией костного мозга и гемопоэтическим синдромом и может варьироваться от 2 до 6 недель. Латентный период несколько короче перед желудочно-кишечным синдромом, длительностью от более дней до недели. Самым коротким из всех является период перед нейроваскулярным синдромом, длительностью только в несколько часов. Данные промежутки времени варьируются и могут быть изменены при наличии другого заболевания или повреждения. Разгар болезни проявляется клиническими симптомами, связанными с поврежденной системой жизненно важных органов (костного мозга, кишечника, нейроваскулярной системы). В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к уменьшению последствий или защите клеток от эффектов воздействия радиации. В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к способу уменьшению последствий и/или защиты пациента от радиации, включающему введение композиций, относящихся к флагеллину, (и/или дополнительных средств). В некоторых вариантах реализации радиация представляет собой ионизирующее излучение. В некоторых вариантах реализации ионизирующее излучение является достаточной причиной для желудочно-кишечного синдрома или гематопоэтического синдрома. В некоторых вариантах реализации острая лучевая болезнь (ОЛБ) включает один или более желудочно-кишечный синдром; гематопоэтический синдром; нейроваскулярный синдром, опосредованное апоптозом повреждение тканей, при котором апоптоз необязательно связан с клеточным стрессом; и повреждение тканей в результате индуцированного ионизирующим излучением апоптоза.
Гемопоэтический синдром (также называемый костномозговым синдромом) характеризуется потерей гемопоэтических клеток и их предшественников, делая невозможным осуществление регенерации крови и лимфоидной систему. Этот синдром часто характеризуется резким сокращением числа клеток крови, т.е., апластической анемией. Это может привести к инфекциям (например, оппортунистическим инфекциям) по причине низкого количества лейкоцитов, кровотечению по причине недостатка тромбоцитов и анемии по причине небольшого количества эритроцитов в циркулирующей крови. Эти изменения можно обнаружить с помощью анализов крови после получения острой дозы облучения всего тела. Обычные травмы и ожоги в результате взрывной волны осложнены плохим заживлением ран, вызванным гемопоэтическим синдромом, что увеличивает смертность. Смерть может наступить как следствие инфекции (в результате иммуносупрессии), кровоизлияния и/или анемии. Гемопоэтический синдром, как правило, преобладает при низких дозах радиации и приводит к более длительной отсрочке наступления смерти, чем ж/к синдром.
Причиной желудочно-кишечного синдрома является массовая гибель клеток в эпителии кишечника, преимущественно в тонком кишечнике с последующей дезинтеграцией стенки кишечника и смертью от бактериемии и сепсиса. Симптомы этой формы радиационного повреждения включают тошноту, рвоту, потерю аппетита, потерю абсорбирующей способности, кровоизлияние в обнаженных областях и абдоминальную боль. Иллюстративные примеры системных эффектов желудочно-кишечного синдрома включают нарушение питание, дегидратацию, почечную недостаточность, анемию, сепсис и т.д. Без лечения (включая, например, трансплантацию костного мозга) смерть является обычным результатом (например, от инфекции, вызванной кишечными бактериями). В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) можно применять в комбинации с трансплантатом костного мозга. В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) можно применять в комбинации с одним или более ингибиторами ж/к синдрома и/или любым из дополнительных средств, описанных в настоящем документе.
Нейроваскулярный синдром проявляется нейрологическими симптомами, такими как головокружение, головная боль или сниженный уровень сознания, наблюдающийся в пределах от минут до более часов, и отсутствием тошноты. Дополнительные симптомы включают крайнюю нервозность и спутанность сознания; сильную тошноту, рвоту и водянистую диарею; потерю сознания и чувство жжения кожи. Нейроваскулярный синдром, как правило, смертелен.
В некоторых вариантах реализации согласно настоящему изобретению предложен способ снижения риска смерти после воздействия облучения, включающий введение эффективного количества композиций, относящихся к флагеллину, (и/или дополнительных средств). В некоторых вариантах реализации радиация является потенциально смертельной и в некоторых случаях появляется как результат радиационной катастрофы. В различных вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) вводят в течение приблизительно 25 ч после воздействия радиации. В некоторых вариантах реализации согласно настоящему изобретению предложен способ снижения риска смерти после воздействия потенциально смертельного облучения, появляющегося в результате радиационной катастрофы, включающий введение композиций, относящихся к флагеллину, (и/или дополнительных средств) в течение приблизительно 25 ч после воздействия радиации.
- 47 035372
В различных вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) вводят пациенту, который подвергся воздействию высокой дозы радиации, а именно дозе облучения всего тела. В различных вариантах реализации высокая доза радиации может не быть равномерной. В различных вариантах реализации ОЛБ является результатом высокой дозы радиации. В различных вариантах реализации высокая доза радиации составляет приблизительно 2,0 Гр, или приблизительно 2,5 Гр, или приблизительно 3,0 Гр, или приблизительно 3,5 Гр, или приблизительно 4,0 Гр, или приблизительно 4,5 Гр, или приблизительно 5 Гр, или приблизительно 10 Гр, или приблизительно 15 Гр, или приблизительно 20 Гр, или приблизительно 25 Гр, или приблизительно 30 Гр. В различных вариантах реализации высокая доза радиации составляет от приблизительно 5 до приблизительно 30 Гр, или приблизительно 10 до 25 Гр, или приблизительно 15 до 20 Гр. В некоторых вариантах реализации высокую дозу радиации оценивают одним или более способами физической дозиметрии и/или биологической дозиметрии (например, мультипараметрическая оценка дозы облучения), цитогенетическими способами (например, хромосомным анализом, например, образцов крови (включая в качестве неограничивающего примера анализ дицентрических хромосом)). В различных вариантах реализации дозы тотального облучения тела можно подразделить на сублетальные (<2 Гр), потенциально летальные (2-10 Гр) и сверхлетальные (>10 Гр).
Реперфузионные повреждения.
В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к способу лечения эффектов от реперфузии на ткани субъекта, включающему введение композиций, относящихся к флагеллину, (и/или дополнительных средств), описанных в настоящем документе. Композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанные в настоящем документе, можно вводить в комбинации с антиоксидантом, таким как, например, амифостин или витамин Е.
Причиной реперфузии может быть повреждение, которое может представлять собой ишемию или гипоксию. Ишемия может быть результатом такого состояния, как, например, тахикардия, инфаркт, гипотензия, эмболия, тромбоэмболия (сгусток крови), серповидно-клеточная анемия, локализованное давления на конечности тела и опухолей. Гипоксию можно выбрать из гипоксической гипоксии (отравление угарным газом, апноэ во время сна, хроническая обструктивная болезнь легких, остановка дыхания, шунты), анемической гипоксии (низкое содержание O2), гипоксической гипоксии и гистотоксической гипоксии. Локализованное давление может быть обусловлено жгутом.
Композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанные в настоящем документе, можно вводить до, совместно или после притока кислорода. Ткань может представлять собой, например, ж/к тракт, легкое, почку, печень, сердечно-сосудистую систему, эндотелий кровеносных сосудов, центральную нервную систему, периферическую нервную систему, мышцу, кость и волосяной фолликул.
Реперфузия может повредить части тела при восстановлении кровоснабжения в части тела после повреждения. Эффекты от реперфузии могут намного сильнее повреждать часть тела, чем сама травма (повреждение). Существует несколько механизмов и медиаторов реперфузии, включая, например, свободные кислородные радикалы, внутриклеточное перенасыщение кальцием и эндотелиальную дисфункцию. Избыточные количества активных форм кислорода при введении в ранее пораженную часть тела подвергаются последовательному восстановлению, приводящему к образованию свободных кислородных радикалов. Активные окисляющие радикалы, такие как супероксид-анион, гидроксильный радикал и пероксинитрит, могут быть выработаны в течение первых более минут после восстановления потока к части тела и могут играть ключевую роль в развитии реперфузионного повреждения. Свободные кислородные радикалы также могут быть получены из других источников, кроме как в результате восстановления молекулярного кислорода. Эти источники включают ферменты, такие как ксантиноксидаза, цитохромоксидаза и циклооксигеназа, и окисление катехоламинов.
Реперфузия также является активным стимулом для активации и аккумуляции нейтрофилов, которые, в свою очередь, служат активными стимулами для выработки активных форм кислорода. Конкретно, основными продуктами респираторного взрыва нейтрофилов являются сильные окислители, включая пероксид водорода, свободные кислородные радикалы и гипохлорит. Нейтрофилы представляют собой наиболее многочисленный тип фагоцитов, в норме представляющих 50-60% от общего количества циркулирующих лейкоцитов, и, как правило, являются первыми клетками, прибывающими на место поврежденной части тела. Свободные кислородные радикалы наносят повреждения, вступая в реакцию с полиненасыщенными жирными кислотами, что приводит к образованию липидных пероксидов и гидропероксидов, которые повреждают часть тела и нарушают функцию мембраносвязанных ферментативных систем. Свободные радикалы стимулируют эндотелиальное высвобождение фактора активации тромбоцитов и хемокинов, таких как фактор активации нейтрофилов, лиганд 1 хемокина (мотив C-X-C) и лиганд 1 хемокина (мотив C-X-C), который привлекает еще больше нейтрофилов и усиливает выработку окисляющих радикалов и степень реперфузионного повреждения. Активные формы кислорода также поглощают оксид азота, увеличивая повреждение эндотелия и дисфункцию клеток ткани. В дополнение к повышенной выработке существует также относительная недостаточность в эндогенных поглощающих окислители ферментах, что далее увеличивает опосредованную свободными радикалами сердечную дис
- 48 035372 функцию.
Реперфузия может дополнительно привести к выраженной дисфункции эндотелиальных клеток. Эндотелиальная дисфункция облегчает выражение протромботического фенотипа, характеризующегося активацией тромбоцитов и нейтрофилов, важными медиаторами реперфузии. При контакте нейтрофилов с дисфункциональным эндотелием они активируются, и сквозь серию хорошо определенных этапов (роллинг, плотное прилипание и трансмиграция) они мигрируют в области тканевого повреждения через соединения эндотелиальных клеток в качестве части врожденного иммунного ответа.
Изменения в гомеостазе внутриклеточного кальция играют важную роль в развитии реперфузии. Реперфузия может быть связана с повышением в уровне внутриклеточного кальция; этот эффект может быть связан с повышенным сарколеммным поступлением кальция через кальциевые каналы L-типа или может быть вторичным по отношению к изменениям в циркуляции кальция в саркоплазматическом ретикулуме. В дополнение к внутриклеточной перегрузке кальцием изменения в чувствительности миофиламентов к кальцию подозревают в причастности к реперфузии. Активация кальций-зависимой протеазы (кальпаин I) с протеолизом миофибрил в результате подчеркивает реперфузионное повреждение, как это делает протеолиз тропонина.
Реперфузия клеток ткани, подвергшихся повреждению, имеет измененный клеточный метаболизм, который, в свою очередь, вносит вклад в замедление восстановления функции. Например, повреждение может индуцировать анаэробный метаболизм в клетке с общей выработкой лактата. Выработка лактата продолжается в ходе реперфузии, предполагая задержку в восстановлении нормального аэробного метаболизма. Аналогично активность митохондриальной пируватдегидрогеназы (ПДГ) может быть ингибирована до 40% после повреждения и может оставаться подавленной в течение до 30 мин после реперфузии.
Каждое из этих событий в ходе реперфузии может приводить к стрессу у клеток ткани и к запрограммированной клеточной смерти (апоптозу) и некрозу клеток ткани. Апоптоз в норме функционирует, чтобы очистить ткани от травмированных и генетически поврежденных клеток, тогда как цитокины служат для мобилизации защитной системы организма против патогена. Однако в условиях тяжелого повреждения оба механизма ответа на стресс могут сами по себе действовать как причины смерти. В различных вариантах реализации эффекты реперфузии могут быть вызваны повреждением тела. Причиной повреждения может быть ишемия, гипоксия, инфаркт или эмболия. Лечение повреждения может привести к реперфузии и дополнительному повреждению части тела.
Ишемия может представлять собой абсолютный или относительный недостаток кровоснабжения части тела. Относительный недостаток может представлять собой несоответствием, каким бы малым оно не было, количества крови, поступающей (доставка кислорода) в часть тела, по сравнению с количеством крови, необходимым части тела для адекватной оксигенации. Ишемия может также представлять собой неадекватный поток крови в часть тела, обусловленный сужением или блокадой кровяных сосудов, снабжающих эту часть тела, и может повлиять на любую часть тела. Недостаточное кровоснабжение делает часть тела гипоксической или, если кислород совсем не поступает, аноксической. Это может вызвать некроз. Механизмы ишемии могут сильно варьироваться. Например, причиной ишемии любого компонента тела может быть тахикардия (аномально быстрое биение сердца), атеросклероз (нагруженная липидами бляшка блокирует просвет артерий), гипотония (пониженное кровяное давление при септическом шоке, сердечная недостаточность), тромбоэмболии (сгустки крови), наружное сжатие кровеносных сосудов (опухоль), эмболии (инородные тела в кровотоке, например эмболия амниотической жидкостью), серповидно-клеточная анемия (гемоглобин аномальной формы), инфаркты, перегрузки, которые ограничивают поток крови и заставляют кровь течь в конечности тела, локализованное воздействие экстремального холода по причине обморожения, льда, неправильной компрессионной терапии холодом и любая другая сила, которая ограничивает поток крови к конечностям, такая как жгут. Может потребоваться сила для ограничения потока крови в конечности из-за тяжелых рваных ран, резаных ран, колотой раны, такой как ножевое ранение, размозжений из-за травмы от удара тупым предметом и пулевого ранения по причине огнестрельного выстрела или осколочные ранения. Ишемия может быть признаком сердечно-сосудистых заболеваний, ишемического колита, транзиторных ишемических атак, острых нарушений мозгового кровообращения, острого повреждения почек, разорванного артериовенозного врожденного порока развития и окклюзионного заболевания периферических артерий.
Гипоксия может представлять собой недостаточность адекватного снабжения кислородом. Гипоксия может представлять собой патологическое состояние, при котором тело в целом (генерализованная гипоксия) или область тела (тканевая гипоксия) испытывают недостаток в адекватном снабжении кислородом. Колебание в уровнях артериального кислорода может быть обусловлено несоответствием между снабжением и потребностью в кислороде у частей тела. Абсолютный недостаток снабжения кислорода называется аноксией. Гипоксия может представлять собой гипоксическую гипоксию, анемическую гипоксию, гипоксическую гипоксию, гистотоксическую гипоксию и ишемическую гипоксию.
Гипоксическая гипоксия может представлять собой неадекватное снабжение кислородом тела как целого, вызванное низким парциальным давлением кислорода в артериальной крови. Гипоксическая гипоксия может быть обусловлена низким парциальным давлением атмосферного кислорода, таким как на
- 49 035372 большой высоте, заменой кислорода в дыхательной смеси модифицированной атмосферы, такой как канализация, намеренной заменой кислорода как при использовании в рекреационных целях закиси азота, снижением кислородного насыщения крови из-за апноэ во время сна, или гипопноэ, неадекватной легочной вентиляции, такой как хроническая обструктивная болезнь легких или остановка дыхания, анатомическими или механическими шунтами в малом легочном круге кровообращения или шунтом справа налево в сердце и легком. Шунты могут вызывать коллапс альвеол, которые все еще перфузированы, или блок в вентиляции области легкого. Шунты могут мешать вентиляции крови, предназначавшейся для легочной системы, и предотвращать газовый обмен, потому что кровяные сосуды опустошаются в левый желудочек и бронхиальную циркуляцию, которая снабжает бронхи кислородом.
Анемическая гипоксия может представлять собой случай, когда общее содержание кислорода понижено, но артериальное давление кислорода находится в норме. Гипоксическая гипоксия представляет собой случай, когда крови не удается доставить кислород к частям телам-мишеням. Причиной гипоксической гипоксии может быть отравление угарным газом, который ингибирует способность гемоглобина высвобождать связанный с ним кислород, метгемоглобинемия, аномальный гемоглобин, который накапливается в крови. Гистотоксическая гипоксия может быть обусловлена неспособностью эффективно использовать кислород из-за неработающих окислительно фосфорилирующих ферментов.
Инфаркт представляет собой тип патологического состояния, которое может вызвать ишемию. Инфаркт может представлять собой макроскопическую область некротической ткани, образование которой вызвано потерей адекватного снабжения кровью из-за окклюзии. Инфаркт может быть белым инфарктом, состоящим из тромбоцитов, и вызывать некроз в тканях органов, таких как сердце, селезенка и почки. Инфаркт может быть красным инфарктом, состоящим из эритроцитов и нитей фибрина в тканях органов, таких как легкое. Болезни, связанные с инфарктом, могут включать инфаркт миокарда, легочную эмболию, острое нарушение мозгового кровообращения (инсульт), острую почечную недостаточность, окклюзионную болезнь периферических артерий (примером является гангрена), антифосфолипидный синдром, сепсис, гигантоклеточный артрит, грыжу и заворот кишечника.
Эмболия представляет собой тип патологического состояния, которое может вызвать ишемию. Эмболия может представлять собой объект, который передвигается из одной части тела и вызывает появление окклюзии или закупорки кровеносного сосуда в другой части тела. Эмболия может представлять собой тромбоэмболию, жировую эмболию, воздушную эмболию, септическую эмболию, тканевую эмболию, эмболию инородным телом, эмболию амниотической жидкостью. Тромбоэмболия может представлять собой кровяной сгусток, который полностью или частично отошел от места тромбоза. Жировая эмболия может представлять собой эндогенные жировые ткани, которые просочились в кровоток. Перелом костей представляет собой один из примеров просачивания жировой ткани в разорванные сосуды и артерии. Воздушная эмболия может представлять собой разрыв альвеол и вдыхаемый воздух, который просачивается в кровяные сосуды. Прокол подключичной вены или внутривенная терапия являются примерами просачивания воздуха в кровяные сосуды. Газовая эмболия может представлять собой газы, такие как азот и гелий, потому что являются нерастворимыми и образующими мелкие пузырьки в крови.
Фармацевтически приемлемые соли и вспомогательные вещества.
Композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанные в данном документе, могут обладать функциональной группой с достаточными основными свойствами, которая может реагировать с неорганической или органической кислотой, или карбоксильной группой, которая может реагировать с неорганическим или органическим основанием, с образованием фармацевтически приемлемой соли. Фармацевтически приемлемая соль присоединения кислоты образуется из фармацевтически приемлемой кислоты, как это хорошо известно в данной области техники. Подобные соли включают фармацевтически приемлемые соли, перечисленные, например, в Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2-19 (1977) и The Handbook of Pharmaceutical Salts; Properties, Selection, and Use. P.H. Stahl and C.G. Wermuth (eds.), Verlag, Zurich (Switzerland) 2002, которые полностью включены в данное описание посредством ссылки.
В качестве неограничивающего примера фармацевтически приемлемые соли включают сульфат, цитрат, ацетат, оксалат, хлорид, бромид, иодид, нитрат, бисульфат, фосфат, кислый фосфат, изоникотинат, лактат, салицилат, кислый цитрат, тартрат, олеат, таннат, пантотенат, битартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкуронат, сахарат, формиат, бензоат, глутамат, метансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, п-толуолсульфонат, камфорсульфонат, памоат, фенилацетат, трифторацетат, акрилат, хлорбензоат, динитробензоат, гидроксибензоат, метоксибензоат, метилбензоат, о-ацетоксибензоат, нафтален-2-бензоат, изобутират, фенилбутират, α-гидроксибутират, бутин-1,4дикарбоксилат, гексин-1,4-дикарбоксилат, капрат, каприлат, циннамат, гликолат, гептаноат, гиппурат, малат, гидроксималеат, малонат, манделат, мезилат, никотинат, фталат, терафталат, пропиолат, пропионат, фенилпропионат, себацинат, суберат, п-бромбензолсульфонат, хлорбензолсульфонат, этилсульфонат, 2-гидроксиэтилсульфонат, метилсульфонат, нафталин-1-сульфонат, нафталин-2-сульфонат, нафталин-1,5-сульфонат, ксиленсульфонат и тартарат.
- 50 035372
Термин фармацевтически приемлемая соль также относится к соли композиций согласно настоящему изобретению, имеющей кислую функциональную группу, такую как карбоксильная функциональная группа, и основание. Подходящие основания включают (но не ограничиваются ими) гидроксиды щелочных металлов, таких как натрий, калий и литий; гидроксиды щелочноземельных металлов, таких как кальций и магний; гидроксиды других металлов, таких как алюминий и цинк; аммиак и органические амины, такие как незамещенные или гидрокси-замещенные моно-, ди- или триалкиламины, дициклогексиламин; трибутиламин; пиридин; N-метил, N-этиламин; диэтиламин; триэтиламин; моно-, бис- или трис-(2-ОН-низшие алкиламины), такие как моно-, бис- или трис-(2-гидроксиэтил)амин, 2-гидрокситрет-бутиламин или трис-(гидроксиметил)метиламин, Ν,Ν-ди-низший алкил-Н-(гидроксил-низший алкил)амины, такие как Н,Н-диметил-Н-(2-гидроксиэтил)амин или три(2-гидроксиэтил)амин; Н-метил-Оглюкамин и аминокислоты, такие как аргинин, лизин и тому подобное. В некоторых вариантах реализации композиции, описанные в данном документе, находятся в форме фармацевтически приемлемой соли.
Дополнительно любые композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанные в данном документе, можно вводить субъекту в виде компонента композиции, которая содержит фармацевтически приемлемый носитель или наполнитель. Подобные композиции могут необязательно содержать подходящее количество фармацевтически приемлемого вспомогательного вещества, так чтобы обеспечить получение лекарственной формы для надлежащего введения. Фармацевтические вспомогательные вещества могут представлять собой жидкости, такие как вода и масла, включая нефтяные масла, масла животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и тому подобное. Фармацевтические вспомогательные вещества могут представлять собой, например, солевой раствор, аравийскую камедь, желатин, крахмальную пасту, тальк, кератин, коллоидный диоксид кремния, мочевину и т.п. Кроме того, можно применять вспомогательные стабилизаторы, загустители, смазывающие агенты и красители. В одном варианте реализации фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества являются стерильными при введении субъекту. Вода является удобным вспомогательным веществом при внутривенном введении средства, описанного в настоящем документе. Растворы хлорида натрия, и водные растворы декстрозы и растворы глицерина также можно использовать в качестве жидких вспомогательных веществ, в частности, для инъекционных растворов. Подходящие фармацевтические вспомогательные вещества также включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат магния, моностеарат глицерина, тальк, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко, глицерин, пропиленгликоль, воду, этанол и т.п. Любое средство, описанное в настоящем документе, при желании, может также содержать незначительные количества увлажнителей или эмульгаторов или pH-буферных агентов.
Состав композиций, введение, дозы и схемы лечения.
Настоящее изобретение включает описанные композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) в различных составах. Любая композиция, относящаяся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанная в настоящем документе, может принимать форму растворов, суспензий, эмульсий, капель, таблеток, пилюль, драже, капсул, капсул с жидкостью, порошков, составов с замедленным высвобождением, суппозиториев, эмульсий, аэрозолей, спреев, суспензий или любую другую форму, пригодную для применения. В одном из вариантов реализации композиция представлена в форме капсулы (см., например, патент США № 5698155). Другие примеры подходящих фармацевтических вспомогательных веществ описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences, 1447-1676 (Alfonso R. Gennaro eds., 19th ed. 1995), включенной в настоящий документ посредством ссылки.
При необходимости, композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) могут также содержать солюбилизирующий агент. Кроме того, средства можно доставлять с помощью подходящего носителя или устройства для доставки, известного в данной области техники. Средства для комбинированной терапии, описанные в настоящем документе, можно совместно доставлять в одном носителе или устройстве для доставки. Композиции для введения могут необязательно включать местный анестетик, такой как, например, лидокаин, для уменьшения боли в месте введения инъекции.
Составы, содержащие композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) согласно настоящему изобретению могут быть удобно представлены в виде единичных дозированных лекарственных форм и их можно получать любым из способов, хорошо известных в области фармации. Подобные способы обычно включают этап смешивания терапевтических средств с носителем, который состоит из одного или более вспомогательных ингредиентов. Как правило, препараты готовят путем равномерного и тщательного смешивания терапевтического средства с жидким носителем, тонкодисперсным твердым носителем или ими обоими, а затем, при необходимости, формования продукта в дозированные лекарственные формы требуемого состава (например, влажные или сухие гранулированные порошки, порошковые смеси и т.д. с последующим таблетированием с помощью традиционных способов, известных в данной области техники).
В одном из вариантов реализации состав на основе композиции, относящейся к флагеллину, (и/или дополнительных средств), описанной в настоящем документе, получают в соответствии с обычными процедурами, поскольку композиция адаптирована для способа введения, описанного в настоящем документе.
- 51 035372
Пути введения включают, например, внутрикожный, внутримышечный, внутрибрюшинный, внутривенный, подкожный, интраназальный, эпидуральный, пероральный, сублингвальный, интраназальный, интрацеребральный, интравагинальный, трансдермальный, ректальный, посредством ингаляции или местный, в частности в уши, нос, глаза или на кожу. В некоторых вариантах реализации введение осуществляют перорально или путем парентеральной инъекции. Способ введения может быть оставлен на усмотрение практикующего врача, и он частично зависит от места проявления медицинского состояния. В большинстве случаев введение приводит к высвобождению любого средства, описанного в настоящем документе, в кровоток.
Любую композицию, относящуюся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанную в настоящем документе, можно вводить перорально. Подобные композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные агенты) также можно вводить любым другим удобным способом, например путем внутривенной инфузии или болюсной инъекции, путем поглощения через эпителиальные или кожнослизистые оболочки (например, слизистую оболочки рта, слизистую прямой кишки и кишечника и т.д.), и можно вводить совместно с другим биологически активным средством. Введение может быть системным или местным. Известны различные системы доставки, например инкапсулирование в липосомы, микрочастицы, микрокапсулы, капсулы и т.д., которые можно использовать для введения.
В конкретных вариантах реализации может потребоваться местное введение в область, нуждающуюся в лечении.
В одном из вариантов реализации состав на основе композиции, относящейся к флагеллину, (и/или дополнительных агентов), описанной в настоящем документе, получают в соответствии с обычными процедурами, поскольку композиция адаптирована для перорального введения людям. Композиции для перорального введения могут быть, например, в форме таблеток, леденцов, водных или масляных суспензий, гранул, порошков, эмульсий, капсул, сиропов или эликсиров. Композиции для перорального введения могут содержать один или более агентов, например подсластители, такие как фруктоза, аспартам или сахарин; ароматизаторы, такие как мята, масло грушанки или вишня; красители; а также консерванты для получения фармацевтически приемлемого препарата. Кроме того, в форме таблетки или пилюли композиции могут быть покрыты оболочкой с целью задержки распада и абсорбции в желудочнокишечном тракте и, таким образом, обеспечения пролонгированного действия в течение более длительного периода времени. Для композиций для перорального введения также можно применять избирательно проницаемые мембраны, окружающие осмотически активное соединение, вытесняющее композицию, относящуюся к флагеллину (и/или дополнительные агенты), описанную в настоящем документе. В этих платформах жидкость из среды, окружающей капсулу, всасывается вытесняющим соединением, которое набухает, вытесняя средство или композицию, содержащую средство, через отверстие. Данные платформы доставки могут обеспечивать профиль доставки практически нулевого порядка в отличие от зубчатых профилей составов с немедленным высвобождением. Можно также применять материал с отсроченным высвобождением, например моностеарат глицерина или стеарат глицерина. Пероральные композиции могут включать стандартные вспомогательные вещества, например маннитол, лактозу, крахмал, стеарат магния, сахарин натрия, целлюлозу и карбонат магния. В одном из вариантов реализации вспомогательные вещества имеют фармацевтическую степень чистоты. Суспензии, в дополнение к активным соединениям, могут содержать суспендирующие агенты, например этоксилированные изостеариловые спирты, полиоксиэтиленсорбитан и сложные эфиры сорбитана, микрокристаллическую целлюлозу, метагидроксид алюминия, бентонит, агар-агар, трагакантовую камедь и т.п. и их смеси.
Дозированные лекарственные формы, подходящие для парентерального введения (например, внутривенной, внутримышечной, внутрибрюшинной, подкожной и внутрисуставной инъекции и инфузии), включают, например, растворы, суспензии, дисперсии, эмульсии и т.п. Их также можно производить в виде стерильных твердых композиций (например, лиофилизированной композиции), которые можно растворять или суспендировать в стерильной среде для инъекций непосредственно перед применением. Они могут содержать, например, суспендирующие или диспергирующие агенты, известные в данной области техники.
Дозировка любой композиции, относящейся к флагеллину, (и/или дополнительных средств), описанной в настоящем документе, а также схема приема может зависеть от различных параметров, включая заболевание, которое лечат, общее состояние здоровья субъекта и усмотрение лечащего врача, но не ограничиваясь ими. Любое средство, описанное в настоящем документе, можно вводить до (например, за приблизительно 5 мин, приблизительно 15 мин, приблизительно 30 мин, приблизительно 45 мин, приблизительно 1 ч, приблизительно 2 ч, приблизительно 4 ч, приблизительно 6 ч, приблизительно 12 ч, приблизительно 24 ч, приблизительно 48 ч, приблизительно 72 ч, приблизительно 96 ч, приблизительно 1 неделю, приблизительно 2 недели, приблизительно 3 недели, приблизительно 4 недели, приблизительно 5 недель, приблизительно 6 недель, приблизительно 8 недель или приблизительно 12 недель), одновременно с или после (например, после приблизительно 5 мин, приблизительно 15 мин, приблизительно 30 мин, приблизительно 45 мин, приблизительно 1 ч, приблизительно 2 ч, приблизительно 4 ч, приблизительно 6 ч, приблизительно 12 ч, приблизительно 24 ч, приблизительно 48 ч, приблизительно 72 ч, приблизительно 96 ч, приблизительно 1 неделю, приблизительно 2 недели, приблизительно 3 недели, при
- 52 035372 близительно 4 недели, приблизительно 5 недель, приблизительно 6 недель, приблизительно 8 недель или приблизительно 12 недель) введения дополнительного терапевтического средства субъекту, нуждающемуся в этом. В различных вариантах реализации любое средство, описанное в настоящем документе, вводят с интервалом приблизительно 1 мин, с интервалом приблизительно 10 мин, с интервалом приблизительно 30 мин, с интервалом менее приблизительно 1 ч, с интервалом приблизительно 1 ч, с интервалом от приблизительно 1 до приблизительно 2 ч, с интервалом от приблизительно 2 до приблизительно 3 ч, с интервалом от приблизительно 3 до приблизительно 4 ч, с интервалом от приблизительно 4 до приблизительно 5 ч, с интервалом от приблизительно 5 до приблизительно 6 ч, с интервалом от приблизительно 6 до приблизительно 7 ч, с интервалом от приблизительно 7 до приблизительно 8 ч, с интервалом от приблизительно 8 до приблизительно 9 ч, с интервалом от приблизительно 9 до приблизительно 10 ч, с интервалом от приблизительно 10 до приблизительно 11 ч, с интервалом от приблизительно 11 до приблизительно 12 ч, с интервалом не более приблизительно 24 ч или с интервалом не более 48 ч.
Количество композиции, относящейся к флагеллину, (и/или дополнительных средств), описанной в настоящем документе, которое смешивают с материалом носителя для получения однократной дозировки, может сильно меняться в зависимости от субъекта, проходящего лечение, и конкретного способа введения. Для выявления оптимальных диапазонов доз можно использовать анализы in vitro или in vivo.
В целом, дозы, которые можно использовать, известны специалистам в данной области техники. Например, дозы можно определить в соответствии со справочником Physicians' Desk Reference, 66th Edition, PDR Network; 2012 Edition (December 27, 2011), содержание которого полностью включено в настоящее описание посредством ссылки. Дозировка любой композиции, относящейся к флагеллину, (и/или дополнительных средств), описанной в настоящем документе, может зависеть от факторов, включая тяжесть состояния, необходимость лечения или профилактики состояния и возраст, масса тела и состояние здоровья субъекта, подвергаемого лечению. Дополнительно, фармакогеномная информация (влияние генотипа на фармакокинетический, фармакодинамический профиль или профиль эффективности терапевтического средства) о конкретном субъекте может влиять на используемую дозировку. Кроме того, точные отдельные дозировки можно в некоторой степени корректировать в зависимости от целого ряда факторов, включая специфическую комбинацию вводимых средств, время введения, способ введения, природу состава, скорость выведения, конкретное заболевание, которое лечат, тяжесть нарушения и анатомическое расположение нарушения. Можно ожидать наличие некоторых вариаций в дозировке.
В общем случае при пероральном введении млекопитающему дозировка любой композиции, относящейся к флагеллину, (и/или дополнительных средств), описанной в настоящем документе, может составлять от приблизительно 0,001 до приблизительно 100 мг/кг/день, от приблизительно 0,01 до приблизительно 50 мг/кг/день или от приблизительно 0,1 до приблизительно 10 мг/кг/день. При пероральном введении человеку дозировка любого средства, описанного в настоящем документе, обычно составляет от приблизительно 0,001 до приблизительно 1000 мг/день, от приблизительно 1 до приблизительно 600 мг/день или от приблизительно 5 до приблизительно 30 мг/день.
При введении любой композиции, относящейся к флагеллину, (и/или дополнительных средств), описанной в настоящем документе, посредством парентеральной инъекции дозировка обычно составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 250 мг/день, от приблизительно 1 до приблизительно 20 мг/день или от приблизительно 3 до приблизительно 5 мг/день. Инъекции можно делать до четырех раз в день. В общем случае при пероральном или парентеральном введении дозировка любого средства, описанного в настоящем документе, обычно составляет от приблизительно 0,1 до приблизительно 1500 мг/день, или от приблизительно 0,5 до приблизительно 10 мг/день, или от приблизительно 0,5 до приблизительно 5 мг/день. Можно вводить дозировку до приблизительно 3000 мг/день.
В другом варианте реализации изобретения доставку можно осуществлять в везикуле, в частности в липосоме (см. Langer, 1990, Science, 249:1527-1533; Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, p. 353-365 (1989).
Любую композицию, относящуюся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанную в настоящем документе, можно вводить с помощью средств контролируемого высвобождения или замедленного высвобождения или с помощью устройств для доставки, хорошо известных средним специалистам в данной области техники. Примеры включают, но не ограничиваются ими, средства и устройства, описанные в патентах США № 3845770; 3916899; 3536809; 3598123; 4008719; 5674533; 5059595; 5591767; 5120548; 5073543; 5639476; 5354556 и 5733556, каждый из которых полностью включен в настоящее описание посредством ссылки. Такие лекарственные формы могут быть пригодны для применения для обеспечения контролируемого или замедленного высвобождения одного или более активных ингредиентов с использованием, например, гидроксипропилметилцеллюлозы, других полимерных матриц, гелей, проницаемых мембран, осмотических систем, многослойных покрытий, микрочастиц, липосом, микросфер или их комбинации с целью обеспечения требуемого профиля высвобождения в различных пропорциях. Подходящие составы с контролируемым или замедленным высвобождением, известные специалистам в данной области техники, включая описанные в настоящем документе, можно легко выбрать для применения с активными ингредиентами средств, описанных в настоящем документе. Таким образом, согласно настоящему изобретению предложены единичные дозированные лекарственные фор
- 53 035372 мы, подходящие для перорального применения, такие как таблетки, капсулы, гелевые капсулы и капсуловидные таблетки, но не ограничиваясь только ими, приспособленные для контролируемого или замедленного высвобождения. Контролируемое или замедленное высвобождение активного ингредиента можно стимулировать с помощью различных условий, включая изменения pH, изменения температуры, стимуляцию светом соответствующей длины волны, концентрацией или наличием ферментов, концентрацией или наличием воды или другими физиологическими условиями или соединениями, но не ограничиваясь только ими.
В другом варианте реализации можно применять полимерные материалы (см. Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.). Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61, см. также Levy et al., 1985, Science, 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105). В другом варианте реализации систему с контролируемым высвобождением можно поместить вблизи областимишени, подвергаемой лечению, следовательно, требуется ввести только часть системной дозы (см., например, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, ранее, vol. 2, p. 115-138 (1984)). Можно применять другие системы с контролируемым высвобождением, обсуждаемые в обзоре Langer, 1990, Science, 249:1527-1533).
Любую композицию, относящуюся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанную в настоящем документе, можно независимо вводить один-четыре раза в день, или один-четыре раза в месяц, или один-шесть раз в год, или раз в два, три, четыре или пять лет. Продолжительность введения может составлять приблизительно один день или приблизительно один месяц, приблизительно два месяца, приблизительно три месяца, приблизительно шесть месяцев, приблизительно один год, приблизительно два года, приблизительно три года и даже может составлять весь срок жизни субъекта. Во многих случаях показано хроническое долгосрочное введение. Дозировку можно вводить в виде однократной дозы или делить на многократные дозы. В целом, требуемую дозировку следует вводить в установленные интервалы в течение длительного периода времени, обычно по меньшей мере в течение более недель или месяцев, хотя могут потребоваться более длительные периоды введения продолжительностью несколько месяцев или лет или более.
Схему приема с использованием любой композиции, относящейся к флагеллину, (и/или дополнительных средств), описанной в настоящем документе, можно выбрать в соответствии с различными факторами, включая тип, вид, возраст, массу тела, половую принадлежность и медицинское состояние субъекта; тяжесть состояния, подлежащего лечению; способ введения; функцию почек или печени субъекта; набор фармакогеномных характеристик индивидуума и конкретное используемое соединение согласно настоящему изобретению. Любую композицию, относящуюся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанную в настоящем документе, можно вводить в виде однократной ежедневной дозы или можно вводить общую суточную дозу в виде разделенных доз два, три или четыре раза в день. Кроме того, любую композицию, относящуюся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанную в настоящем документе, можно вводить непрерывно, а не периодически, в ходе схемы приема средства.
Комбинированная терапия и конъюгация.
В некоторых вариантах реализации согласно настоящему изобретению предложены композиции, относящиеся к флагеллину, и способы, которые дополнительно включают введение дополнительного средства субъекту. В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к совместному введению и/или включению в один состав. Любая из композиций, описанных в настоящем документе, может входить в совместный состав и/или вводиться совместно.
В некоторых вариантах реализации любая композиция, относящаяся к флагеллину, описанная в настоящем документе, действует синергетически при совместном введении с другим средством и вводится в дозах, которые ниже, чем обычно используемые дозы, когда указанные средства применяются в качестве монотерапии. В различных вариантах реализации любое средство, упомянутое в настоящем описании, можно применять в комбинации с любой из композиций, относящихся к флагеллину, описанных в настоящем документе.
В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к химиотерапевтическим средствам в качестве дополнительных средств. Примеры химиотерапевтических средств включают алкилирующие средства, такие как тиотепа и Цитоксан (циклофосфамид); алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилолмеламин; ацетогенины (например, буллатацин и буллатацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекан); бриостатин; каллистатин; СС-1065 (включая его синтетические аналоги адоцелезин, карцелезин и бицелезин); криптофицины (например, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги KW-2189 и СВ1-ТМ1); элеутеробин; панкратистатин; саркодиктиин; спонгистатин; производные азотистого иприта, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамид, эстрамустин, ифосфамид, мехлоретамин, мехлоретаминоксидгидрохлорид, мелфалан, новембицин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин;
- 54 035372 производные нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорзотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимнустин; антибиотики, такие как энедииновые антибиотики (например, калихеамицин, особенно калихеамицин-гамма-П и калихеамицин-омега-II (см., например, Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl., 33:183-186 (1994)); динемицин, включая динемицин А; бисфосфонаты, такие как клодронат; эсперамицин; а также неокарциностатин-хромофор и родственные хромопротеиновые энедииновые антибиотики-хромофоры), аклациномизины, актиномицин, антрамицин, азасерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, карминомицин, карцинофилин, хромомицины, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-Ьнорлейцин, Адриамицин (доксорубицин, включая морфолиндоксорубицин, цианморфолиндоксорубицин, 2-пирролиндоксорубицин и деоксидоксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идарубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофеноловую кислоту, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, порфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, тиберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицин; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-ФУ); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; аналоги пурина, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; аналоги пиримидина, например, анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, дидеоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолона пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; антиадреналовые агенты, такие как аминоглютетимид, митотан, трилостан; компенсатор фолиевой кислоты, такой как фолиниевая кислота; ацеглатон; альдофосфамидглюкозид; аминолевулиновую кислоту; энилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бисантрен; эдатрексат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; элформитин; эллиптиния ацетат; эпотилон; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевину; лентинан; лонидамин; майтанзиноиды, такие как майтанзин и анзамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопиданмол; нитракрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; подофиллиновую кислоту; 2-этилгидразид; прокарбазин; полисахаридный комплекс PSK (JHS Natural Products, Юджин, Орегон); разоксан; ризоксин; сизофуран; спирогерманий; тенуазониевую кислоту; триазиквон; 2,2',2-трихлортриэтиламин; трихотецены (например, токсин Т-2, веррацирин А, роридин А и ангуидин); уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид (Ara-С); циклофосфамид; тиотепу; таксоиды, например, Таксол (паклитаксел) (Bristol-Myers Squibb Oncology, Принстон, Нью-Джерси), Абраксан без кремофора, состав на основе альбуминсодержащих наночастиц паклитаксела (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, 111), и Таксотер (доцетаксел) (Rhone-Poulenc Rorer, Атони, Франция); хлорамбуцил; Гемзар (гемцитабин); 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин, оксалиплатин и карбоплатин; винбластин; платину; этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин; Навелбин (винорелбин); новантрон; тенипозид; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; кселоду; ибандронат; иринотекан (Камптозар, СРТ-11) (включая схемы лечения на основе иринотекана с 5-ФУ и лейковорином); ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (ДФМО); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; капецитабин; комбретастатин; лейковорин (LV); оксалиплатин, включая схему лечения на основе оксалиплатина (режим FOLFOX); лапатиниб (Тайкерб); ингибиторы протеинкиназы альфа (PKC-α), Raf, H-Ras, рецептора эпидермального фактора роста (EGFR) (например, эрлотиниб (Тарцева)) и фактора роста эндотелия сосудов A (VEGF-A), снижающие пролиферацию клеток, и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из упомянутых выше средств, но не ограничиваются ими. Кроме того, способы лечения могут дополнительно включать применение облучения. Кроме того, способы лечения могут дополнительно включать применение фотодинамической терапии.
В некоторых вариантах реализации композиции, имеющие отношение к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанные в настоящем документе, включают производные, которые модифицированы, т.е. посредством ковалентного присоединения молекулы любого типа к композиции, так что указанное ковалентное присоединение не препятствует активности композиции. В качестве неограничивающего примера производные включают композицию, которая была модифицирована, помимо прочего, путем гликозилирования, липидизации, ацетилирования, пэгилирования, фосфорилирования, амидирования, присоединения известных защитных/блокирующих групп, протеолитического расщепления, связывания с клеточным лигандом или другим белком и т.д. Любую из многочисленных химических модификаций можно выполнить с помощью известных методик, включая специфическое химическое расщепление, ацетилирование, формилирование, метаболический синтез туникамицина и т.д., но не ограничиваясь ими. Кроме того, производное может содержать одну или более неклассических аминокислот.
В еще одних вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанные в настоящем документе, дополнительно содержат цитотоксическое средство, содержащее в приводимых в качестве примера вариантах реализации, токсин, химиотерапевтическое средство, радиоизотоп и средство, которое вызывает апоптоз или клеточную смерть. Такие средства могут быть конъюгированы с композицией, описанной в настоящем документе.
Таким образом, композиции, относящиеся к флагеллину (и/или дополнительные средства), описанные в настоящем документе, могут быть модифицированы посттрансляционно для добавления эффекторных групп, например химических линкеров, обнаруживаемых молекул, например флуоресцентных красителей, ферментов, субстратов, биолюминесцентных материалов, радиоактивных материалов и хе- 55 035372 милюминесцентных групп или функциональных групп, таких как, например, стрептавидин, авидин, биотин, цитотоксин, цитотоксический агент и радиоактивные материалы.
Приводимые в качестве примера цитотоксические средства включают метотрексат, аминоптерин, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, цитарабин, 5-фторурацил, декарбазин), алкилирующие средства, такие как мехлорэтамин, тиотепа, хлорамбуцил, мелфалан, кармустин (BSNU), митомицин С, ломустин (CCNU), 1-метилнитрозомочевину, циклофосфамид, мехлорэтамин, бусульфан, дибромманнитол, стрептозотоцин, митомицин С, цис-дихлордиаминплатина (II) (DDP), цисплатин и карбоплатин (параплатин), антрациклины, включая даунорубицин (ранее называемый дауномицином), и доксорубицин (адриамицин), деторубицин, карминомицин, идарубицин, эпирубицин, митоксантрон и бизантрен; антибиотики, включая дактиномицин (актиномицин D), блеомицин, калихемицин, митрамицин и антрамицин (АМС); и антимитотические средства, такие как алкалоиды барвинка, винкристин и винбластин, но не ограничиваются ими. Другие цитотоксические средства включают паклитаксел (таксол), рицин, экзотоксин синегнойной палочки, гемцитабин, цитохалазин В, грамицидин D, этидия бромид, эметин, этопозид, тенопозид, колхицин, дигидроксиантрацендион, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаин, лидокаин, пропранолол, пуромицин, прокарбазин, гидроксимочевину, аспарагиназу, кортикостероиды, митотан (O,P'-(DDD)), интерфероны и смеси этих цитостатических средств.
Дополнительные цитотоксические средства включают химиотерапевтические средства, такие как карбоплатин, цисплатин, паклитаксел, гемцитабин, калихеамицин, доксорубицин, 5-фторурацил, митомицин С, актиномицин D, циклофосфамид, винкристин, блеомицин, антагонисты VEGF, антагонисты EGFR, препараты платины, таксолы, иринотекан, 5-фторурацил, гемцитабин, лейковорин, стероиды, циклофосфамид, мелфалан, алкалоиды барвинка (например, винбластин, винкристин, виндезин и винорелбин), соединения азотистого иприта, ингибиторы тирозинкиназы, лучевую терапию, антагонисты половых гормонов, селективные модуляторы андрогенных рецепторов, селективные модуляторы рецепторов эстрогена, антагонисты тромбоцитарного фактора роста (ТФР, PDGF), антагонисты фактора некроза опухоли (ФНО), антагонисты ИЛ-1, интерлейкины (например, ИЛ-12 или ИЛ-2), антагонисты ИЛ-12К моноклональные антитела, конъюгированные с токсином, специфичные к опухолевому антигену моноклональные антитела, Эрбитукс, Авастин, Пертузумаб, анти-CD20 антитела, Ритуксан, окрелизумаб, офатумумаб, DXL625, Герцептин® или любую их комбинацию, но не ограничиваются ими. Токсические ферменты из растений и бактерий, такие как рицин, дифтерийный токсин и токсин синегнойной палочки, могут быть сконъюгированы с лекарственными средствами (например, антителами) для создания специфических к типу клеток убивающих реактивов (Youle, et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA, 77:5483 (1980); Gilliland, et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA, 77:4539 (1980); Krolick, et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA, 77:5419 (1980)).
Другие цитотоксические средства, включая цитотоксические рибонуклеазы, описаны Голденбергом в публикациях патента США № 6653104. Варианты реализации настоящего изобретения также относятся к радиоиммуноконъюгатам, в случае которых радионуклид, который испускает альфа или бета-частицы, стабильно соединен с антителом или его связывающими фрагментами с использованием комплексообразующего средства или без него. Подобные радионуклиды включают бета-излучатели, такие как фосфор32, скандий-47, медь-67, галлий-67, иттрий-88, иттрий-90, йод-125, йод-131, самарий-153, лютеций-177, рений-186 или рений-188, и альфа-излучатели, такие как астат-211, свинец-212, висмут-212, висмут-213 или актиний-225. Примеры обнаруживаемых молекул дополнительно включают пероксидазу хрена, ацетилхолинэстеразу, щелочную фосфатазу, бета-галактозидазу и люциферазу, но не ограничиваются ими. Дополнительные приводимые в качестве примера флуоресцентные материалы включают родамин, флуоресцеин, флуоресцеин изотиоцианат, умбеллиферон, дихлортриазиниламин, фикоэритрин и дансилхлорид, но не ограничиваются ими. Дополнительные приводимые в качестве примера хемилюминесцентные молекулы включают люминол, но не ограничиваются им. Дополнительные приводимые в качестве примера биолюминесцентные материалы включают люциферин и экворин, но не ограничиваются ими. Дополнительные приводимые в качестве примера радиоактивные материалы включают йод-125, углерод14, серу-35, тритий и фосфор-32, но не ограничиваются ими.
В различных вариантах реализации дополнительные средства согласно настоящему изобретению включают один или более препаратов из крови, колониестимулирующих факторов, цитокинов и/или факторов роста, антибиотиков, разбавляющие и/или блокирующие средства, мобилизирующие или хелатирующие средства, трансплантаты стволовых клеток, антитоксиданты или свободные радикалы и радиопротекторы.
В некоторых вариантах реализации препараты крови представляют собой один или более из гемопоэтических факторов роста, таких как филграстим (например, Нейпоген), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор (Г-КСФ), который может быть необязательно пэгилирован (например, Неуласта); сарграмостим (Лейкин) и гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор роста (ГМ-КСФ) и специфичный для кератиноцитов фактор (KSF).
В некоторых вариантах реализации дополнительные средства представляют собой один или более цитокинов и/или факторов роста, которые могут обеспечивать защиту от радиации путем восполнения и/или защиты радиочувствительных популяций стволовых клеток. Защиту от радиации с минимальными
- 56 035372 побочными эффектами можно достигнуть путем применения фактора стволовых клеток (ФСК, лиганда c-kit), лиганда Flt-3 и фрагмента интерлейкина-1 IL-1b-rd. Защита может быть достигнута посредством индукции пролиферации стволовых клеток (например, через упомянутые цитокины) и предотвращения их апоптоза (например, через ФСК). Лечение делает возможным накопление лейкоцитов и их предшественников перед облучением, таким образом позволяя быстрее восстановить иммунную систему после облучения. ФСК эффективно спасает смертельно облученных мышей с фактором изменения дозы (ФИД) в диапазоне 1,3-1,35 и также эффективен против желудочно-кишечного синдрома. Лиганд Flt-3 также обеспечивает мощную защиту у мышей и кроликов.
Несколько факторов, которые не являются цитокинами по природе, стимулируют пролиферацию иммуноцитов, и их можно применять в комбинации с композициями, относящимися к флагеллину, при дозах и схемах лечения, описанных в настоящем документе. Например, 5-AED (5-андростендиол) представляет собой стероид, который стимулирует экспрессию цитокинов и повышает сопротивляемость к бактериальным и вирусным инфекциям. Синтетические соединения, такие как трихлор(диоксиэтиленО,О')теллурат аммония (AS-101), также можно применять для индуцирования секреции многочисленных цитокинов и для комбинации с композициями, относящимися к флагеллину. Факторы роста и цитокины также можно применять для обеспечения защиты против желудочно-кишечного синдрома. Фактор роста кератиноцитов (ФРК) стимулирует пролиферацию и дифференциацию в слизистой оболочке кишечника и повышает выживаемость клеток после облучения в кишечных криптах. Гемопоэтический цитокин и радиопротектант ФСК также может увеличивать выживаемость стволовых клеток кишечника и связанную с этим краткосрочную выживаемость организма. В определенных вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, можно добавлять в схему лечения цитокинами (например, для филграстима (Г-КСФ) 2,5-5 мкг/кг/день один раз в день подкожно (п/к) (100-200 мкг/м2/день); для сарграмостима (ГМ-КСФ) 5-10 мкг/кг/день один раз в день п/к (200-400 мкг/м2/день) и/или для пэгфилграстима (ПЭГ-К-КСФ) 6 мг один раз п/к).
В некоторых вариантах реализации антибиотик представляет собой одно или более из антибактериальных (антиграмположительных и антиграмотрицательных средств), и/или противогрибковых, и/или противовирусных средств. В качестве неограничивающего примера в некоторых вариантах реализации антибиотик может представлять собой хинолон, например ципрофлоксацин, левофлоксацин, третье или четвертое поколение цефалоспорина со спектром действия, охватывающим псевдомонады, например цефепим, цефтазидим, или аминогликозид, например гентамицин, амикацин, пинациллин или амоксицилин, ацикловир, ванкомицин. В различных вариантах реализации цель антибиотика представляет собой Pseudomonas aeruginosa.
В некоторых вариантах реализации изобретения дополнительное средство представляет собой разбавляющее и/или блокирующее средство. Например, могут быть использованы стабильные соединения йодида (например, жидкий (препарат ThyroShield) и в таблетках (препарат Iosat) KI (препарат NUKEPILLS), препараты Rad Block, I.A.A.A.M., No-Rad, Life Extension (LEF), KI4U, NukeProtect, ProKI)). Ежедневную дозу калия йодида (KI) в 130 мг перорально можно применять совместно с композициями, относящимися к флагеллину.
В некоторых вариантах реализации дополнительное средство представляет собой мобилизирующее или хелатирующее средство. Иллюстративные примеры мобилизирующих средств включают пропилтиоурацил и метимазол, с которыми можно снизить задержку радиоактивных соединений щитовидной железой. Дополнительно композиции, относящиеся к флагеллину, можно применять одновременно с увеличивающимися количествами жидкостями ротовой полости у пациента для стимулирования экскреции. Иллюстративные примеры хелатирующих средств являются растворимыми в воде и выводятся с мочой. Иллюстративные примеры хелатирующих средств включают диэтилентриаминпентауксусную кислоту (ДТПА) и этилендиаминтетрауксусную кислоту (ЭДТА). Димеркапрол образует стабильные хелаты с ртутью, свинцом, мышьяком, золотом, висмутом, хромом и никелем и, таким образом, может рассматриваться как средство для лечения внутреннего заражения радиоизотопами этих элементов. Пеницилламин хелатиет медь, железо, ртуть, свинец, золото и возможно другие тяжелые металлы.
В некоторых вариантах реализации дополнительное средство представляет собой трансплантат стволовых клеток (например, трансплантат костного мозга, трансплантат стволовых клеток периферической крови (PBSCT), трансплантат мезенхимальных стволовых клеток (MSCT)). В некоторых вариантах реализации трансплантат стволовых клеток представляет собой препарат Remestemcel-L (Osiris) или препарат CLT 008 (Cellerant).
В некоторых вариантах реализации дополнительное средство представляет собой антиоксидант или свободный радикал. Антиоксиданты и поглотители свободных радикалов, которые можно применять при практическом применении настоящего изобретения, включают тиолы, такие как цистеин, цистеамин, глутатион и билирубин; амифостин (WR-2721); витамин А; витамин С; витамин Е; и флавоноиды, такие как индийский базилик священный (Ocimum sanctum), ориентин и висенин, но не ограничиваются ими.
В некоторых вариантах реализации дополнительное средство может представлять собой радиопротектант, например, антиоксидант, (например амифостин и витамин Е, гамма-токотриенол (фрагмент витамина Е) и генистеина (побочный продукт сои), цитокин (например, фактор стволовых клеток), фактор
- 57 035372 роста (например, фактор роста кератиноцитов), стероид (например, 5-андростендиол), трихлор(диоксиэтилен-О,О')теллурат аммония, средства длы защиты щитовидной железы (например, йодид калия (KI) или йодат калия (KIO3) (например, жидкий (препарат ThyroShield) и в таблетках (препарат Iosat) KI (препарат NUKEPILLS), препараты Rad Block, I.A.A.A.M., No-Rad, Life Extension (LEF), KI4U, NukeProtect, ProKI)), средства против тошноты, средства против диареи, противорвотные средства ((например, оральные профилактические противорвотные средства), такие как гранисетрон (Китрил), ондансетрон (Зофран) и блокаторы 5-ΗΤ3^^πτοροβ с дексаметозоном или без него), анальгетики, анксиолитики, седативные средства, цитокиновые лекарственные средства и антибиотики. Промывание желудка и рвотные средства, которые можно применять в качестве дополнительных средств, можно применять для быстрого и полного опустошения желудка после проглатывания ядовитых материалов. Слабительные средства, послабляющие средства и клизмы, которые также можно применять в качестве дополнительных средств, могут снижать время удержания радиоактивных материалов в толстой кишке. Дополнительно, дополнительные средства включают ионнообменные смолы, которые могут ограничивать поглощение в желудочно-кишечном тракте, ферроцианид двухвалентного железа (берлинская лазурь) и альгинаты, которые применялись у человека для ускорения экскреции с фекалиями цезия-137. В еще одних вариантах реализации дополнительно средство может представлять собой средство, применяемое для лечения радиационно-ассоциированных нарушений, такое как, например, препарат 5-AED (Humanetics), Ex-RAD (Onconova), беклометазона дипропионат (Soligenix), нейтрализованный эндотоксин, ЕА-230 (Exponential Biotherapies), ON-01210.Na (Onconova), сотромбомодулин альфа (PAION), Remestemcel-L (Osiris), BIO-100, BIO-200, BIO-300, BIO-400, BIO-500 (Humanetics), CLT-008 (Cellerant), EDL-2000 (RxBio), Homspera (ImmuneRegen), MnDTElP (Aeolus Pharmaceuticals), RLIP-76 (Terapio) и RX-100 и RX101 (RxBio).
Дополнительно, в некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) можно использовать в комбинации с экранированием; снижением времени воздействия радиации и применением средств для снижения облучения тела (например, применение перчаток, лицевой маски, капюшона, защитной одежды (например, костюмы для защиты от заражения, такие как TYVEK ANTI-С SUITS или MOPP-4)).
Вирусные векторы, кодирующие лекарственные средства, и клетки, экспрессирующие лекарственные средства.
В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) согласно настоящему изобретению экспрессируются вирусными векторами и трансформированными клетками. Например, вирусные векторы и трансформированные клетки человека, описанные в настоящем документе, могут экспрессировать композиции согласно настоящему изобретению. В одном варианте изобретения вирусный вектор или клетки человека, экспрессирующие лекарственное средство, способны экспрессировать средство вблизи опухоли. Клетки могут быть модифицированы in vivo или альтернативно клетки, модифицированные ex vivo, можно ввести пациенту различными способами, такими как инъекция.
В одном варианте реализации клетка представляет собой опухолевую клетку. Для ex vivo трансформации указанные опухолевые клетки могут быть облучены для устранения способности клеток реплицироваться, как известно в данной области техники, вместе с тем поддерживая транзиентную экспрессию лекарственных средств после введения. Для in vivo трансформации могут быть предпочтительны неинтегративные векторы.
В определенных вариантах реализации опухолевая клетка является аутогенной или эндогенной. В первом случае опухолевую клетку берут у пациента, трансфецируют или трансдуцируют конструкцией, кодирующей лекарственное средство, и заново вводят пациенту, например, после облучения. Во втором случае опухолевую клетку трансформируют in vivo путем локального введения конструкции, как описано в настоящем документе.
В альтернативном варианте реализации модифицированная опухолевая клетка является аллогенной. Таким образом, аллогенную опухолевую клетку можно поддерживать в клеточной линии. В этом случае опухолевую клетку можно выбрать из клеточной линии, облучить и ввести пациенту.
Модифицированные клетки человека, способные вырабатывать композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), можно получить путем трансфецирования или трансдукции клеток экспрессионными векторами, кодирующими лекарственное средство. Экспрессионные векторы для экспрессии композиций, относящихся к флагеллину, (и/или дополнительных средств), или комбинации лекарственных средств можно получить способами, хорошо известными в данной области техники.
В различных вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) можно вводить пациенту в форме одной или более конструкций нуклеиновой кислоты.
В одном из вариантов реализации конструкция содержит ретровирусный вектор. Ретровирусные векторы способны перманентно интегрироваться в ДНК, кодирующую композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) в геном клетки. Таким образом, в случае ex vivo манипуляций с аллогенными клетками можно получить стабильные клеточные линии, которые конститутивно вырабатывают композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства). В одном варианте
- 58 035372 реализации клетки облучают перед введением пациенту. Облученные клетки вырабатывают композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) в течение ограниченного периода времени.
В одном из вариантов реализации экспрессионная конструкция содержит вектор SFV, который демонстрирует высокие уровни транзиентной экспрессии в клетках млекопитающих. Вектор SFV описан, например, в публикации Lundstrom, Expert Opin. Biol. Ther. 3:771-777 (2003), полностью включенной в настоящее описание посредством ссылки. Таким образом, в случае in vivo манипуляции с эндогенными клетками пациента можно достичь транзиентной экспрессии высоких уровней композиций, относящихся к флагеллину, (и/или дополнительных средств).
Системы, способные экспрессировать рекомбинантный белок in vivo, хорошо известны в данной области техники. В качестве примера система может применять опосредованную 2А пептидом систему экспрессии антител, описанную в Fang et al., Nature Biotech. 23(5):584-590 (2005) и публикации патента США № 2005/0003506, содержание которых явным образом полностью включено в настоящее описание посредством ссылки. Другие системы, известные в данной области техники, предполагаются и также могут быть адаптированы для получения композиций, относящихся к флагеллину, (и/или дополнительных средств) in vivo, как описано в настоящем документе.
В различных вариантах реализации введение клеток, экспрессирующих композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанные в настоящем документе, или средств согласно настоящему изобретению, описанных в настоящем документе, может быть совмещено с введением цитокинов, которые стимулируют антигенпрезентирующие клетки, таких как гранулоцитарномакрофагальный колониестимулирующий фактор роста (ГМ-КСФ), макрофагальный колониестимулирующий фактор роста (М-КСФ), гранулоцитарный колониестимулирующий фактор роста (Г-КСФ), интерлейкин 2 (ИЛ-3), интерлейкин 12 (ИЛ-12), итерферон и т.д., или клеточных вакцин, способных экспрессировать подобные цитокины. В некоторых вариантах реализации клетки, экспрессирующие композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), дополнительно модифицированы для экспрессии подобных цитокинов. Дополнительные белки и/или цитокины, которые известно, что усиливают пролиферацию и секрецию Т-клеток, такие как ИЛ-1, ИЛ-2, В7, анти-CD3 и анти-CD28, можно использовать одновременно или последовательно с композициями, относящимися к флагеллину, (и/или дополнительными средствами) согласно настоящему изобретению для усиления иммунного ответа, и/или стимуляции костимуляторных путей, и/или индукции активации/пролиферации эффекторных Т-клеток.
Векторы и способы трансформации.
Экспрессионные векторы, кодирующие композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства) могут быть вирусными и не вирусными. Вирусные векторы являются предпочтительными для применения in vivo.Экспрессионные векторы согласно настоящему изобретению содержат нуклеиновую кислоту, кодирующую композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), или ее комплементарную цепь, функционально связанную с областью контроля экспрессии, или ее комплементарную цепь, являющуюся функциональной в клетке млекопитающего. Область контроля экспрессии способна запускать экспрессию функционально связанной нуклеиновой кислоты, кодирующей блокирующее и/или стимулирующее средство, так что блокирующее и/или стимулирующее средство вырабатывается в клетке человека, трансформированной экспрессионным вектором. Области контроля экспрессии представляют собой регуляторные полинуклеотиды (иногда называемые в настоящем описании элементами), такие как промоторы и энхансеры, которые влияют на экспрессию функционально связанной нуклеиновой кислоты.
Область контроля экспрессии экспрессионного вектора согласно настоящему изобретению способна экспрессировать функционально связанную кодирующую нуклеиновую кислоту в клетке человека. В одном варианте реализации клетка представляет собой опухолевую клетку. В другом варианте реализации клетка представляет собой неопухолевую клетку.
В одном варианте реализации область контроля экспрессии обеспечивает регулируемую экспрессию функционально связанной нуклеиновой кислоте. Сигнал (иногда обозначаемый как стимул) может повышать или понижать экспрессию нуклеиновой кислоты, функционально связанной с подобной областью контроля экспрессии. Подобные области контроля экспрессии, которые повышают экспрессию в ответ на сигнал, часто обозначаются как индуцибельные. Подобные области контроля экспрессии, которые снижают экспрессию в ответ на сигнал, часто обозначаются как репрессируемые. Как правило, уровень повышения или понижения, обеспечиваемого подобными элементами, пропорционален уровню присутствующего сигнала; чем выше уровень сигнала, тем больше повышение или понижение экспрессии. В одном варианте реализации настоящее изобретение подразумевает применение индуцибельных промоторов, способных осуществлять транзиентную экспрессию на высоком уровне в ответ на сигнал. В случае нахождения вблизи опухолевой клетки клетка, трансформированная экспрессионным вектором для выработки композиций, относящихся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), включающая подобную последовательность, контролирующую экспрессию, индуцируется воздействием на трансформированную клетку соответствующего сигнала транзиентно вырабатывать высокий уровень средства. Приводимые в качестве примера области контроля экспрессии включают области, содержащие индуци- 59 035372 бельный промотор, который стимулируется сигналом, таким как малая молекула химического соединения. Конкретные примеры могут быть найдены, например, в публикациях патента США № 5989910,
5935934, 6015709 и 6004941, каждый из которых полностью включен в настоящее описание посредством ссылки.
Области контроля экспрессии включают полноразмерные промоторные последовательности, такие как нативный промотор и энхансерные элементы, а также подпоследовательности или полинуклеотидные варианты, которые сохраняют всю или часть функции полноразмерной или не являющейся вариантом последовательности. Используемый в настоящем описании термин функциональный и его грамматические варианты, когда используется по отношению к последовательности нуклеиновой кислоты, подпоследовательности или фрагменту, означает, что последовательность имеет одну или более функций нативной последовательности нуклеиновой кислоты (например, не являющейся вариантом или немодифицированной последовательности). Используемый в настоящем описании термин функционально связанный относится к физическому смежному положению компонентов таким образом, что позволяет им функционировать их надлежащим образом. В конкретном примере элемента контроля экспрессии, который функционально связан с нуклеиновой кислотой, взаимоотношения являются такими, что элемент контроля модулирует экспрессию нуклеиновой кислоты. Как правило, область контроля экспрессии, которая модулирует транскрипцию, расположена вблизи 5'-конца транскрибируемой нуклеиновой кислоты (т.е. в обратном направлении хода транскрипции, upstream). Области контроля экспрессии также могут располагаться на 3'-конце транскрибируемой последовательности (т.е. по ходу транскрипции, downstream) или внутри транскрипта (например, в интроне). Элементы контроля экспрессии могут располагаться на расстоянии от транскрибируемой последовательности (например, за 100-500, 500-1000, 2000-5000 или более нуклеотидов от нуклеиновой кислоты). Конкретный пример элемента контроля экспрессии представляет собой промотор, который, как правило, расположен в 5'-направлении от транскрибируемой последовательности. Другой пример элемента контроля экспрессии представляет собой энхансер, который может быть расположен в 5'- или 3'-направлении от транскрибируемой последовательности или внутри транскрибируемой последовательности.
Системы экспрессии, функционирующие в клетках человека, хорошо известны в данной области техники и включают вирусные системы. В общем случае промотор, функционирующий в клетке человека, представляет собой любую ДНК-последовательность, способную связываться с РНК-полимеразой млекопитающих и инициировать в прямом направлении (3') транскрипцию в мРНК последовательности, кодирующей лиганд В7-Н4. Промотор имеет участок инициации транскрипции, который обычно располагается ближе к 5'-концу кодирующей последовательности, и, как правило, ТАТА-бокс, расположенный на 25-30 пар оснований левее сайта инициации транскрипции. Полагают, что ТАТА-бокс направляет РНК-полимеразу II начинать синтез РНК с правильного сайта. Промотор также, как правило, содержит в направлении против хода транскрипции промоторный элемент (энхансерный элемент), как правило, расположенный в пределах 100-200 пар оснований левее ТАТА-бокса. Элемент промотора, расположенный против хода транскрипции, определяет скорость, при которой транскрипция инициируется, и может действовать в любой ориентации. В качестве промоторов находят особое применение промоторы из вирусных генов млекопитающих, так как вирусные гены часто экспрессируются на высоком уровне и имеют широкий диапазон организмов-хозяев. Примеры включают ранний промотор SV40, промотор вируса LTR рака молочной железы мышей, главный поздний промотор аденовируса, промотор вируса простого герпеса и промотор CMV.
Как правило, последовательности терминация транскрипции и полиаденилирования, распознаваемые клетками млекопитающих, являются регуляторными участками, расположенными в 3'-направлении к стоп-кодону трансляции и, таким образом, вместе с промоторными элементами, фланкирующими кодирующую последовательность. 3'-конец зрелой мРНК образуется в ходе сайт-специфического посттрансляционного расщепления и полиаденилирования. Примеры сигналов терминации транскрипции и полиаденилирования включают сигналы, получаемые из вируса SV40. Интроны также могут быть включены в экспрессионные конструкции. Существуют различные доступные способы введения нуклеиновых кислот в жизнеспособные клетки. Методики, пригодные для переноса нуклеиновой кислоты в клетки млекопитающих in vitro, включают применение липосом, электропорацию, микроинъекцию, слияние клеток, системы на основе полимеров, обработку диэтиламиноэтилдекстраном (ДЭАЭ-декстраном), вирусную трансдукцию, способ осаждения с фосфатом кальция и т.д. Для переноса генов in vivo можно также использовать ряд методик и реагентов, включая липосомы; устройства для доставки на основе природных полимеров, таких как хитозан и желатин; вирусные векторы также предпочтительны для трансдукции in vivo. В некоторых ситуациях требуется обеспечить средство, обладающее направленным действием, такое как антитело или лиганд-специфичное средство для мембранного белка поверхности опухолевой клетки. В случаях, когда используют липосомы, можно использовать для направленного действия и/или для облегчения поглощения белки, которые связываются с мембранным белком клеточной поверхности, ассоциированным с эндоцитозом, например капсидные белки или их фрагменты, тропные по отношению к клеткам конкретного типа, антитела для белков, которые проходят интернализацию в клеточном цикле, белки, целью которых является локализация внутри клетки и которые увеличивают
- 60 035372 внутриклеточный период полужизни. Методика рецептор-опосредованного эндоцитоза описана, например, в публикациях Wu et al., J. Biol. Chem. 262, 4429-4432 (1987) и Wagner et al., Proc. Natl. Acad. Sci.
USA, 87, 3410-3414 (1990).
При необходимости можно использовать средства доставки генов, такие как, например, интеграционные последовательности. Многочисленные интеграционные последовательности известны в данной области техники (см., например, Nunes-Duby et al., Nucleic Acids Res. 26:391-406, 1998; Sadwoski, J. Bacteriol., 165:341-357, 1986; Bestor, Cell, 122(3):322-325, 2005; Plasterk et al., TIG, 15:326-332, 1999; Kootstra et al., Ann. Rev. Pham. Toxicol., 43:413-439, 2003). К ним относятся рекомбиназы и транспозазы. Примеры включают Cre (Sternberg and Hamilton, J. Mol. Biol., 150:467-486, 1981), лямбда (Nash, Nature, 247, 543-545, 1974), Flp (Broach, et al., Cell, 29:227-234, 1982), R (Matsuzaki, et al., J. Bacteriology, 172:610618, 1990), cpC31 (см., например, Groth et al., J. Mol. Biol. 335:667-678, 2004), транспозон спящая красавица, транспозазы семейства mariner (Plasterk et al., ранее) и компоненты для интегрирующих вирусов, таких как аденоассоциированный вирус (AAV), ретровирусы и антивирусы, имеющие компоненты, обеспечивающие вирусную интеграцию, например LTR-последовательности ретровирусов или лентивируса и ITR-последовательности вируса AAV (Kootstra et al., Ann. Rev. Pharm. Toxicol., 43:413-439, 2003).
Вирусные векторы.
В одном из аспектов согласно настоящему изобретению предложены экспрессионные векторы для экспрессии композиций, относящихся к флагеллину (и/или дополнительных средств), которые представляют собой вирусные векторы. Многие вирусные векторы являются пригодными для генной терапии (см., например, Lundstrom, Trends Biotechnol., 21:117, 122, 2003.
Приводимые в качестве примера вирусные векторы включают векторы, выбранные из антивирусов (LV), ретровирусов (RV), аденовирусов (AV), аденоассоциированных вирусов (AAV) и альфа-вирусов, но и другие вирусные векторы можно также использовать. Для применения in vivo предпочтительны вирусные векторы, которые не интегрируются в геном хозяина, такие как альфа-вирусы и аденовирусы, причем альфа-вирусы особенно предпочтительны. Приводимые в качестве примера типы вирусов α включают вирус Синдбис, вирус венесуэльского энцефалита лошадей (VEE) и вирус леса Семлики (SFV), причем вирус SFV особенно предпочтителен. Для применения in vitro предпочтительны вирусные векторы, которые интегрируются в геном хозяина, такие как ретровирусы, AAV и антивирусы.
В одном варианте изобретения вирусный вектор обеспечивает высокий уровень транзиентной экспрессии в трансдуцированной клетке человека.
В одном из вариантов реализации вирусный вектор не обеспечивает интеграцию нуклеиновой кислоты, кодирующей композицию, относящуюся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), в трансдуцированную клетку человека.
В другом варианте реализации вирусный вектор обеспечивает интеграцию нуклеиновой кислоты, кодирующей композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), в трансдуцированную клетку человека.
В одном из вариантов реализации согласно настоящему изобретению предложены способы трансдукции клетки человека in vivo, включающие приведение в контакт солидной опухоли in vivo с вирусным вектором согласно настоящему изобретению.
В другом варианте реализации согласно настоящему изобретению предложены способы трансдукции клетки человека ex vivo, включающие приведение в контакт клетки человека ex vivo с вирусным вектором согласно настоящему изобретению. В одном из вариантов реализации клетка человека представляет собой опухолевую клетку. В одном из вариантов реализации клетка человека является аллогенной. В одном варианте реализации опухолевую клетку получают от пациента. В одном варианте изобретения клетка человека представляет собой неопухолевую клетку, такую как, например, антигенпрезентирующая клетка (АПК) или Т-клетка.
Оболочки вирусных частиц можно модифицировать для изменения специфичности и улучшения направленного воздействия на клетку/ткань, как это хорошо известно в данной области техники. Вирусные векторы также могут быть доставлены в составе других носителей, например липосом. Липосомы также могут иметь части для направленного воздействия на мишень, прикрепленные к их поверхности для улучшения направленного воздействия на клетку/ткань.
В некоторых вариантах реализации согласно настоящему изобретению предложены клетки человека, экспрессирующие лекарственное средство согласно настоящему изобретению. В различных вариантах реализации клетки человека экспрессируют средство вблизи опухолевой клетки, например, пациента.
Способы диагностики и прогнозирования.
В некоторых аспектах согласно настоящему изобретению предложен способ идентификации субъекта, который может отвечать на лечение агонистом TLR5. В некоторых вариантах реализации согласно настоящему изобретению предложен способ определения, экспрессирует ли опухоль пациента TLR5.
Экспрессия TLR5 может представлять прогностический маркер для определения степени и/или прогрессирования опухоли или дисплазии пациента. В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанные в настоящем изобретении, можно применять для определения степени злокачественности опухоли и/или стадии конкретного рака.
- 61 035372
Степень злокачественности опухоли представляет собой систему, используемую для классификации опухолевых клеток по тому, насколько атипичными они выглядят под микроскопом и как быстро опухоль по всей вероятности вырастет и распространится. Учитываются многие факторы при определении степени злокачественности опухоли, включая структуру и характер роста клеток. Конкретные факторы, используемые для определения степени злокачественности опухоли, могут меняться в зависимости от типа рака и известны в данной области техники.
Гистологическая степень злокачественности опухоли, также называемая дифференцировкой, относится к тому, насколько опухолевые клетки напоминают нормальные клетки того же типа ткани. Степень полиморфизма ядер относится к размеру и форме ядра в опухолевых клетках и проценту опухолевых клеток, которые делятся. В зависимости от наблюдаемого вида под микроскопом патологоморфологи обычно описывают степень злокачественности рака по четырем степеням тяжести: степени 1, 2, 3 и 4. Клетки опухолей 1 степени напоминают нормальные клетки и склонны медленно расти и размножаться. Опухоли 1 степени главным образом считаются наименее агрессивными по поведению. В свою очередь, клетки опухолей 3 и 4 степени не выглядят как нормальные клетки того же типа. Опухоли 3 и 4 степени склонны быстро расти и распространяются быстрее, чем опухоли с меньшей степенью злокачественности. Американский объединенный комитет по изучению рака (American Joint Committee on Cancer) рекомендует следующие руководства по стадированию опухолей: GX - нельзя оценить степень (неопределенная степень); G1 - хорошо дифференцированный (низкая степень); G2 - средняя степень дифференциации (средняя степень); G3 - слабо дифференцированный (высокая степень) и G4 - недифференцированный (высокая степень).
Система степеней различная для каждого типа рака. Например, патологоморфологи используют систему Глиссона для описания степени дифференциации клеток рака предстательной железы. В системе Глисона используют баллы в диапазоне от степени 2 до степени 10. Более низкие баллы по Глисону описывают хорошо дифференцированные, менее агрессивные опухоли. Более высокие баллы по Глисону описывают плохо дифференцированные, более агрессивные опухоли. Другие системы градации включают, например, систему Блума-Ричардсона для рака молочной железы и систему Фурмана для рака почки.
Выживаемость после рака или статистика по выживаемости может относиться к проценту людей, которые остались живы после определенного типа рака в течение конкретного периода времени. В статистике по раку обычно используют общую пятилетнюю выживаемость. Например, общая пятилетняя выживаемость для рака мочевого пузыря составляет 80%, т.е. 80 из каждых 100 человек, которым поставили диагноз рак мочевого пузыря, жили в течение 5 лет после постановки диагноза и 20 человек из каждых 100 умирали в течение 5 лет после постановки диагноза рак мочевого пузыря. Можно использовать другие виды выживаемости, например безрицидивная выживаемость (число людей с раком, которые достигли ремиссии), выживаемость без прогрессирования (число людей, у которых еще есть рак, но заболевание не прогрессирует).
В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанные в настоящем изобретении, можно применять для установления степени злокачественности опухоли для целей диагностики или прогнозирования развития конкретного рака, включая прогнозирование выживаемости, безрецидивной выживаемости и/или выживаемости без прогрессирования перед, во время и/или после введения композиций, относящихся к флагеллину, (и/или дополнительных средств), описанных в настоящем документе, и/или перед, во время и/или после применения противоопухолевого средства или терапии.
В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанные в настоящем изобретении, применяют как часть способа оценки степени злокачественности опухоли для облегчения выбора и/или прогнозирования результата лечения. Например, композиции, относящиеся к флагеллину (и/или дополнительные средства), описанные в настоящем документе, можно применять для диагностики и идентификации рака, полученного от пациента, как рака 1 стадии (например, не местнораспространенного), прогнозируя необходимость в менее агрессивном лечении. Альтернативно, лекарственное средство, описанное в настоящем документе, можно применять для диагностики и идентификации рака, полученного от пациента, как рака 2 или 3 стадии (например, рак может быть местнораспространенным), прогнозируя необходимость в более агрессивном лечении. Аналогичным образом, композиции, относящиеся к флагеллину (и/или дополнительные средства), описанные в настоящем документе, можно применять для диагностики и идентификации рака, полученного от пациента, как рака 4 стадии или метастатического, прогнозируя необходимость в очень агрессивном лечении.
В некоторых вариантах реализации рак является неоперабельным. Неоперабельный рак представляет собой злокачественную опухоль, которая не может быть удалена хирургическим путем по причине либо числа метастатических очагов, либо потому что находится в опасной для хирургического вмешательства зоне. В некоторых вариантах реализации лекарственное средство, описанное в настоящем документе, применяют как часть способа лечения опухолей для облегчения выбора характера и/или времени/применения лечения, включая, например, введение противоопухолевых средств, которые уменьшают объем опухоли перед химиотерапевтической и/или лучевой терапией, и/или повышение или понижение
- 62 035372 дозы химиотерапии или облучения, применяемого в отношении пациента.
В некоторых вариантах реализации рак является мультирезистентным. Например, пациент может проходить один или более циклов химиотерапии без существенного ответа. Альтернативно или дополнительно, опухоль имеет один или более маркеров мультирезистентности. Таким образом, используемый в настоящем описании термин мультирезистентный обозначает рак, проявляющий отсутствие реакции по меньшей мере на один цикл комбинированной химиотерапии, или, альтернативно, оцененный (диагностически) как резистентный по меньшей мере к двум средствам (включая сопоставимое средство) из доцетаксела, паклитаксела, доксорубицина, эпирубицина, карбоплатина, цисплатина, винбластина, винкристина, оксалиплатина, кармустина, фторурацила, гемцитабина, циклофосфамида, ифосфамида, топотекана, эрлотиниба, этопозида и митомицина. В некоторых вариантах реализации лекарственные средства, описанные в настоящем документе, можно применять для установления, чувствительна ли опухоль к одному или более химиотерапевтическому средству, лучевой терапии и/или другой противоопухолевой терапии.
В других вариантах реализации рак представляет собой рецидив после традиционной химиотерапии первоначального рака. Часто рецидивный рак приобретает устойчивость к лекарственным средствам и, таким образом, является особенно сложным для лечения и часто сопровождается неблагоприятным прогнозом выживаемости. В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанные в настоящем изобретении, применяют как часть способа оценки опухоли, который заменяет оценку общего состояния пациента. Общее состояние можно количественно оценить с использованием любой системы и способов для оценки общего состояния пациента, которые известны в данной области техники. Данную оценку часто используют для определения, может ли пациент получать химиотерапию, для подбора дозы и/или для определения интенсивности паллиативной помощи. Существуют различные системы оценки, включая шкалу Карновски и шкалу по Зуброду. Параллельные системы оценки включают шкалу общей оценки функционального статуса (GAF), которая включена как пятая ось в диагностическое и статистическое руководство (DSM) психиатрии.
Более высокий уровень общего состояния (например, по меньшей мере приблизительно 80% или по меньшей мере приблизительно 70% с использованием шкалы Карновски) может свидетельствовать о необходимости лечения для профилактики прогрессирования болезненного состояния и улучшает способность пациента переносить химиотерапию и/или лучевую терапию. Например, когда лекарственное средство, описанное в настоящем документе, свидетельствует о более высоком уровне общего состояния, пациент является ходячим и способен позаботиться о себе. В других вариантах реализации, когда лекарственное средство, описанное в настоящем документе, свидетельствует о низком уровне общего состояния (например, менее приблизительно 50%, менее приблизительно 30% или менее приблизительно 20% с использованием шкалы Карновски), пациент по большей части прикован к кровати или креслу и неспособен даже позаботиться о себе.
Шкала Карновски имеет диапазон от 100 до 0, где 100 - это идеальное здоровье и 0 - это смерть. Шкалу можно использовать с делениями по 10, где приблизительно 100% - нормальное состояние, без жалоб, без признаков заболевания; приблизительно 90% - способен проявлять нормальную активность, отдельные симптомы или признаки заболевания, приблизительно 80% - нормальная активность с некоторыми затруднениями, некоторые симптомы или признаки; приблизительно 70% - способен заботиться о себе, не способен проявлять нормальную активность или работать; приблизительно 60% - требуется некоторая помощь, может позаботиться о большинстве личных потребностей; приблизительно 50% - часто требуется помощь, требуется частая медицинская помощь; приблизительно 40% - потеря трудоспособности, требуется особый уход и помощь; приблизительно 30% - серьезная потеря трудоспособности, свидетельствует о необходимости госпитализации, но нет риска смерти; приблизительно 20% - очень больной, требуется срочная госпитализация, требуется поддерживающие меры или лечение; и приблизительно 10% - агонирующий, быстро прогрессирующие процессы смертельного заболевания.
Шкала по Зуброду для оценки общего состояния включает: 0 - полностью активен, способен выполнять весь объем работы до заболевания без ограничений; 1 - ограничен в выполнении чрезмерной физической нагрузки, но ходячий и способен выполнять работу легкого или малоподвижного характера, например легкую работу по дому, офисную работу; 2 - ходячий и способен позаботиться о себе, но не способен выполнять любую другую работу, на ногах более приблизительно 50% часов бодрствования; 3 - способен только ограниченно позаботиться о себе, прикован к кровати или креслу более 50% часов бодрствования; 4 - полностью нетрудоспособен, не может заботиться о себе, полностью прикован к кровати или креслу; 5 - мертв. В некоторых вариантах реализации гистологические образцы опухолей стадируются с использованием лекарственного средства, описанного в настоящем документе, согласно публикации Elston & Ellis, Histopathology, 1991, 19:403-10, которая настоящим полностью включена посредством ссылки. В некоторых вариантах реализации лекарственное средство, описанное в настоящем документе, применимо для установления степени злокачественности рака для целей диагностики или прогнозирования развития конкретного рака.
В некоторых вариантах реализации композиции, относящиеся к флагеллину, (и/или дополнительные средства), описанные в настоящем изобретении, можно применять для оценки субъекта и/или образ
- 63 035372 ца, полученного от пациента (например, ракового пациента). В некоторых вариантах реализации оценка представляет собой одно или более из следующего: диагностики, прогнозирования и/или ответа на лечение. Диагностика относится к процессу попытки установления или идентификации возможного заболевания или нарушения, такого как, например, рак. Прогнозирование относится к предсказанию вероятного результата заболевания или нарушения, такого как, например, рак. Полный прогноз часто включает ожидаемую длительность, функцию и описание течения заболевания, такого как прогрессирующее ухудшение, периодический кризис или внезапный, непредсказуемый кризис. Ответ на лечение представляет собой предсказание медицинской эффективности у пациента, получающего лечение. Ответы на лечение могут представлять собой в качестве неограничивающих примеров полный патологический ответ, выживаемость или вероятность рецидива.
В различных вариантах реализации способы диагностики и прогнозирования, описанные в настоящем документе, включают оценку наличия, отсутствия или уровня белка. В другом варианте реализации способы, описанные в настоящем документе, включают оценку наличия, отсутствия или уровня экспрессии нуклеиновой кислоты. Композиции, описанные в настоящем документе, можно применять для этих измерений. Например, в некоторых вариантах реализации способы, описанные в настоящем документе, включают осуществление контакта образца опухоли или клетки, которую культивировали из опухоли, с лекарственным средством, как описано в настоящем документе. В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение включает измерение образца опухоли, включая биопсию образцов хирургических препаратов. В некоторых вариантах биопсия представляет собой биопсию человека. В различных вариантах реализации биопсия представляет собой биопсию любого замороженного образца ткани, культивируемых клеток, циркулирующих опухолевых клеток и зафиксированных в формалине и залитых парафином образцов опухолевой ткани. В некоторых вариантах реализации образец опухоли может представлять собой биопсийный материал, такой как замороженный образец опухолевой ткани (криосрез). Как известно в данной области техники, для получения криосреза можно использовать криостат, который содержит микротом внутри холодильной камеры. Хирургический образец помещают на металлический диск для ткани, который потом фиксируется зажимом, и быстро замораживают до температуры от приблизительно -20 до приблизительно -30°C. Образец заливают гелеобразной средой, состоящей, например, из полиэтиленгликоля и поливинилового спирта. Замороженную ткань нарезают замороженной с помощью микротомной части криостата и срезы при необходимости помещают на препаративное стекло и окрашивают. В некоторых вариантах реализации образец опухоли может представлять собой биопсийный материал, такой как культивируемые клетки. Такие клетки можно обрабатывать с использованием обычных методик культивирования клеток, известных в данной области техники. Такие клетки могут представлять собой циркулирующие опухолевые клетки. В некоторых вариантах реализации образец опухоли может представлять собой биопсийный материал, такой как зафиксированный в формалине и залитый парафином (FFPE) образец опухолевой ткани. Как известно в данной области техники, биопсийный материал можно поместить в контейнер с формалином (смесь воды и формальдегида) или какой-то другой жидкостью для его консервации. Образец ткани можно поместить в форму с горячим парафиновым воском. Воск охлаждается с образованием твердого блока, который защищает ткань. Этот блок из парафинового воска с залитой тканью помещают на микротом, который нарезает очень тонкие срезы ткани. В определенных вариантах реализации образец опухоли содержит менее приблизительно 100 мг ткани или в определенных вариантах реализации содержит приблизительно 50 мг ткани или меньше. Образец ткани (или биопсийный материал) может содержать от приблизительно 20 до приблизительно 50 мг ткани, например приблизительно 35 мг ткани. Ткань можно получить, например, как результат одной или более (например, 1, 2, 3, 4 или 5) биопсий иглой (например, с использованием иглы 14 размера по шкале Г ейдж (2,1 мм) или другого подходящего размера). В некоторых вариантах реализации биопсия представляет собой тонкоигольную аспирационную биопсию, при которой длинную тонкую иглу вводят в подозреваемую область и используют шприц для забора жидкости и клеток для анализа. В других вариантах реализации биопсия представляет собой толстоигольную биопсию, при которой используют большую иглу с режущим кончиком в ходе толстоигольной биопсии для забора колонки ткани из подозрительной области. В некоторых вариантах реализации биопсия представляет собой вакуумную биопсию, при которой аспиратор увеличивает количество жидкости и клеток, которые экстрагируют через иглу. В некоторых вариантах реализации биопсия представляет собой биопсию под визуальным контролем, при которой биопсия иглой сочетается с процедурой визуализации, такой как, например, рентгенография, компьютерная томография (КТ), магнитно-резонансная томография (МРТ) или ультразвук. В других вариантах реализации образец можно получить с помощью устройства, такого как биопсийная система МАМ МОТОМЕ®, которая представляет собой систему вакуумной биопсии под управлением лазера для биопсии молочной железы.
В некоторых вариантах реализации способы диагностики и прогнозирования и/или оценки могут задавать направление лечения (включая лечение лекарственными средствами, описанными в настоящем документе). В одном из вариантов реализации оценка может задавать применение или отказ от применения адъювантной терапии после резекции. Адъювантная терапия, также называемая адъювантной помо- 64 035372 щью, представляет собой лечение, которое предоставляется дополнительно к первичному, основному или исходному лечению. В качестве неограничивающего примера адъювантная терапия представляет собой дополнительное лечение, обычно предоставляемое после хирургической операции, при которой были удалены все обнаруживаемые заболевания, но когда остается статистический риск возврата болезни по причине скрытого заболевания. В некоторых вариантах реализации лекарственные средства, описанные в настоящем документе, применяют в качестве адъювантной терапии при лечении рака. В некоторых вариантах реализации лекарственные средства, описанные в настоящем документе, применяют в качестве единственной адъювантной терапии при лечении рака. В некоторых вариантах реализации лекарственные средства, описанные в настоящем документе, отказываются применять в качестве адъювантной терапии при лечении рака. Например, если у пациента, вероятно, не будет наблюдаться ответа на лекарственное средство, описанное в настоящем документе, или будет наблюдаться минимальный ответ, лечение можно и не применять в интересах качества жизни и чтобы избежать лишнюю токсичность из-за неэффективных химиотерапевтических средств. В подобных случаях можно использовать паллиативную помощь.
В некоторых вариантах реализации лекарственные средства, описанные в настоящем документе, применяют в качестве неоадъювантной терапии перед резекцией. В определенных вариантах реализации неоадъювантная терапия относится к терапии для уменьшения и/или снижения опухоли перед любым хирургическим вмешательством. В некоторых вариантах реализации неоадъювантная терапия означает применение химиотерапии в отношении раковых больных перед хирургическим вмешательством. В некоторых вариантах реализации неоадъювантная терапия означает введение лекарственного средства, описанного в настоящем документе, раковым больным перед хирургическим вмешательством. Типы рака, для которых, как правило, рассматривается неоадъювантная терапия, включают, например, рак молочной железы, колоректальный рак, рак яичников, рак шейки матки, рак мочевого пузыря и рак легкого. В некоторых вариантах реализации лекарственные средства, описанные в настоящем документе, применяют в качестве неоадъювантной терапии при лечении рака. В некоторых вариантах реализации применяют перед резекцией. В некоторых вариантах реализации лекарственные средства, описанные в настоящем документе, отказываются применять в качестве неоадъювантной терапии при лечении рака. Например, если у пациента, вероятно, не будет наблюдаться ответа на лекарственное средство, описанное в настоящем документе, или будет наблюдаться минимальный ответ, лечение можно и не применять в интересах качества жизни и чтобы избежать лишнюю токсичность из-за неэффективных химиотерапевтических средств. В подобных случаях можно использовать паллиативную помощь.
Субъекты и/или животные.
В некоторых вариантах реализации субъект и/или животное представляет собой млекопитающее, например человека, мышь, крысу, морскую свинку, собаку, кошку, лошадь, корову, свинью, кролика, овцу или примата, не являющегося человеком, такого как обезьяна, шимпанзе или павиан. В других вариантах реализации субъект и/или животное не является млекопитающим, таким, например, как данио. В некоторых вариантах реализации субъект и/или животное может содержать флуоресцентно меченые клетки (например, зеленым флуоресцирующим белком (ЗФБ)). В некоторых вариантах реализации субъект и/или животное представляет собой трансгенное животное, содержащее флуоресцентную клетку.
В некоторых вариантах реализации субъект и/или животное представляет собой человека. В некоторых вариантах изобретения человек представляет собой ребенка. В других вариантах реализации человек представляет собой взрослого человека. В других вариантах реализации человек представляет собой пожилого человека. В других вариантах реализации человек может обозначаться как пациент.
В определенных вариантах реализации возраст человека находится в диапазоне от приблизительно 0 до приблизительно 6 месяцев, от приблизительно 6 до приблизительно 12 месяцев, от приблизительно 6 до приблизительно 18 месяцев, от приблизительно 18 до приблизительно 36 месяцев, от приблизительно 10 20 30 40 50 60 70 80 приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно лет, лет, лет, лет, лет, лет, лет, лет, от от от от от от от от приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно до до до до до до до до до приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно лет, лет, лет, лет, лет, лет, лет, лет, лет, от от от от от от от от от приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно до приблизительно 5 лет, от приблизительно 5 до до до до до до до до до приблизительно 95 лет или от приблизительно 95 до приблизительно 100 лет.
В других вариантах реализации субъект представляет собой отличное от человека животное, и, следовательно, изобретение относится к ветеринарному применению. В конкретном варианте реализации отличное от человека животное представляет собой домашнего питомца. В другом конкретном варианте реализации отличное от человека животное представляет собой сельскохозяйственное животное.
- 65 035372
Наборы.
Согласно изобретению предложены наборы, которые могут упростить введение любого описанного в данном документе средства. Приводимый в качестве примера набор согласно настоящему изобретению содержит любую композицию, описанную в данном документе, в виде единичной лекарственной формы. В одном из вариантов реализации изобретения единичная лекарственная форма представляет собой контейнер, такой как предварительно наполненный шприц, который может быть стерильным, содержащим любое средство, описанное в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель, вспомогательное вещество или наполнитель. Набор может дополнительно содержать этикетку или распечатанные инструкции по применению любого средства, описанного в данном документе. Набор также может содержать векорасширитель, местный анестетик и очищающее средство для места введения. Набор также может дополнительно содержать одно или более дополнительное средство, описанное в данном документе. В одном из вариантов реализации набор содержит контейнер, содержащий эффективное количество композиции согласно настоящему изобретению и эффективное количество другой композиции, такой как те, что описаны в данном документе.
Определения.
Следующие определения используются в связи с настоящим изобретением, описанным в данном документе. Если не указано иное, все используемые в данном документе технические и научные термины имеют те же значения, которые обычно подразумеваются специалистом в данной области техники, к которой относится данное изобретение.
Используемая в данном документе форма единственного числа может означать один или более одного объекта.
Кроме того, термин приблизительно, используемый в связи с упоминаемым численным обозначением, означает упоминаемое численное обозначение плюс-минус 10% от данного упоминаемого численного обозначения. Например, выражение приблизительно 50 охватывает диапазон от 45 до 55.
Термин эффективное количество при использовании в связи с применениями в медицинских целях представляет собой количество, эффективно обеспечивающее измеримое лечение, профилактику или снижение скорости патогенеза рассматриваемого заболевания.
Как используется в настоящем описании, что-либо понижается, если считываемые параметры активности и/или приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно эффекта снижаются на на 10%, по меньшей на 30%, по меньшей на 50%, по меньшей на 70%, по меньшей на 90%, по меньшей значительную величину, например по мере приблизительно на 20%, по мере приблизительно на 40%, по мере приблизительно на 60%, по мере приблизительно на 80%, по мере приблизительно на 95%, по меньшей меньшей меньшей меньшей меньшей меньшей мере мере мере мере мере мере приблизительно на 97%, по меньшей мере приблизительно на 98% или более, до и включая по меньшей мере приблизительно 100% в присутствии средства или стимула по сравнению с отсутствием подобной модуляции. Как будет понятно среднему специалисту в данной области техники, в некоторых вариантах реализации активность снижается и некоторые считывания по ходу нее снизятся, но другие могут увеличиться.
В свою очередь, активность повышена если считывание активности и/или эффекта повышается на значительное количество, например по меньшей приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно приблизительно на 20%, по на 40%, по на 60%, по на 80%, по на 95%, по меньшей мере меньшей мере меньшей мере меньшей мере меньшей мере мере приблизительно приблизительно на приблизительно на приблизительно на приблизительно на приблизительно на на 10%, по меньшей мере 30%, по меньшей мере 50%, по меньшей мере 70%, по меньшей мере 90%, по меньшей мере 97%, по меньшей мере приблизительно на 98% или более, до и включая по меньшей мере приблизительно 100% или более, по меньшей мере в 2 раза, по меньшей мере в 3 раза, по меньшей мере в 4 раза, по меньшей мере в 5 раз, по меньшей мере в 6 раз, по меньшей мере в 7 раз, по меньшей мере в 8 раз, по меньшей мере в 9 раз, по меньшей мере в 10 раз, по меньшей мере в 50 раз, по меньшей мере в 100 раз в присутствии средства или стимула по сравнению с отсутствием подобного средства или стимула.
Упоминаемые в настоящем описании все процентные доли в составе композиций представляют собой проценты от общей массы композиции, если не указано иное. Используемое в настоящем документе слово включать и его варианты не предполагает ограничения, поэтому перечисление элементов в списке не предусматривает исключения других подобных элементов, которые также можно использовать в композициях и способах согласно данной технологии. Аналогичным образом, термины может и можно и их варианты не предполагают ограничения, поэтому упоминание того, что вариант реализации может содержать некоторые элементы и признаки, не исключает других вариантов реализации настоящей технологии, которые не содержат этих элементов или признаков.
Хотя открытый термин содержащий в качестве синонима терминов, таких как включающий или имеющий, используется в настоящем документе для описания настоящего изобретения и в формуле настоящего изобретения, настоящее изобретение или варианты его реализации можно альтернативно
- 66 035372 описать с использованием таких альтернативных терминов, как состоящий из или состоящий по существу из. Используемые в настоящем описании слова предпочтительный и предпочтительно относятся к вариантам реализации технологии, которые предоставляют определенные преимущества при определенных обстоятельствах. Однако другие варианты реализации также могут быть предпочтительными при тех же или других условиях. Кроме того, упоминание одного или более предпочтительных вариантов реализации не подразумевает, что другие варианты реализации являются невозможными для применения, и не подразумевает исключения других вариантов реализации из объема настоящей технологии.
Количество композиций, описанных в настоящем документе, необходимое для достижения терапевтического эффекта, можно определить эмпирически в соответствии с традиционными процедурами для конкретной цели. В целом, для введения лекарственных средств (например, композиций, относящихся к флагеллину, (и/или дополнительных средств), описанных в настоящем документе) для терапевтических целей лекарственные средства дают в фармакологически эффективной дозе. Термины фармакологически эффективное количество, фармакологически эффективная доза, терапевтически эффективное количество или эффективное количество относятся к количеству, достаточному для получения требуемого физиологического эффекта, или количеству, с помощью которого можно достичь требуемого результата, в частности, при лечении нарушения или заболевания. Эффективное количество, как используется в настоящем описании, будет включать количество, достаточное, например, для задержки развития симптома нарушения или заболевания, изменения хода развития симптома нарушения или заболевания (например, замедления прогрессирования симптома заболевания), уменьшения или устранения одного или более симптомов или проявлений нарушения или заболевания и регрессии симптома нарушения или заболевания. Например, введение лекарственных средств пациенту, страдающему от рака, обеспечивает благоприятный терапевтический эффект не только при устранении или смягчении первопричинного патологического состояния, но также если пациент сообщает о снижении тяжести или продолжительности симптомов, связанных с заболеванием, например снижении опухолевой нагрузки, снижении количества циркулирующих опухолевых клеток, увеличении выживаемости без прогрессирования. Благоприятный терапевтический эффект также включает остановку или замедление прогрессирования первопричинного заболевания или нарушения независимо от того, наступило ли улучшение. Эффективные количества, токсичность и терапевтическую эффективность можно оценить с помощью стандартных фармацевтических процедур на культурах клеток или экспериментальных животных, например, для определения LD50 (доза, смертельная для приблизительно 50% популяции) и ED50 (доза, терапевтически эффективная у приблизительно 50% популяции). Дозировка может меняться в зависимости от используемой лекарственной формы и применяемого способа введения. Соотношение доз, оказывающих токсическое и терапевтическое действие, представляет собой терапевтический индекс и может быть выражено в виде соотношения LD50/ED50. B некоторых вариантах реализации предпочтительными являются композиции и способы, которые показывают высокие терапевтические индексы. Терапевтически эффективную дозу можно изначально определить с помощью анализов in vitro, включая, например, анализ с использованием клеточных культур. Также дозу можно сформулировать на животных моделях с целью достижения диапазона циркулирующей концентрации в плазме, включающего IC50 (50% ингибирующую концентрацию), как определено для клеточной культуры или на соответствующей животной модели. Уровни описанных композиций в плазме можно измерить, например, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. Действие конкретной дозировки можно отслеживать с помощью подходящего биоанализа. Дозировка может быть определена лечащим врачом и скорректирована при необходимости в соответствии с наблюдаемым действием лечения.
В определенных вариантах реализации действие приведет к количественно определяемому изменению по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 50%, по меньшей мере приблизительно на 70% или по меньшей мере приблизительно на 90%. В некоторых вариантах реализации действие приведет к количественно определяемому изменению приблизительно на 10%, приблизительно на 20%, приблизительно на 30%, приблизительно на 50%, приблизительно на 70% или даже приблизительно на 90% или более. Благоприятный терапевтический эффект также включает остановку или замедление прогрессирования первопричинного заболевания или нарушения независимо от того, наступило ли улучшение.
В определенных вариантах реализации фармакологически эффективное количество, которое будет лечить рак, будет модулировать симптомы, как правило, по меньшей мере приблизительно на 10%, по меньшей мере приблизительно на 20%, по меньшей мере приблизительно на 30%, по меньшей мере приблизительно на 40% или по меньшей мере приблизительно на 50%. В приводимых в качестве примера вариантах реализации подобные модуляции приведут, например, к статистически значимым и количественно определяемым изменениям количества раковых клеток. Данное изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими неограничивающими примерами.
- 67 035372
Примеры
Пример 1. Конструирование композиций, относящихся к флагеллину, с улучшенной эффективностью по сравнению с CBLB502.
(а) Анализ соотношения структура-активность (SAR).
Результаты анализа, которые включали комбинацию сайт-направленного мутагенеза и делеций показаны на фиг. 2. Получившиеся в результате варианты CBLB502 экспрессировали в Е.соН, очищены и охарактеризованы по (i) относительной связывающей аффинности в бесклеточных системах с помощью конкурентного анализа флуоресцентной поляризации (ФП) с рекомбинантным очищенным фрагментом эктодомена TLR5, полученного от рыб, и (ii) относительной эффективности сигнализации с помощью анализа на клетках репортерного гена люциферазы с использованием CBLB502 дикого типа в качестве стандарта (как описано в Yoon et al. (2012)). Этот анализ подтвердил роль аминокислотных сегментов и определенных остатков домена D1 в образовании первичной и вторичной пограничных поверхностей, предсказанных по 3D структуре (фиг. 3). Он также показал важное значение домена D0 для активации сигнализации (но не первичного связывания), хотя действительная роль данного домена остается неизвестной. Данный анализ также показал, что только С-концевой сегмент домена D0 (C_D0) является существенным, тогда как N-концевой сегмент может быть удален без потери сигнальной активности (как, например, у варианта с делецией S33 (SEQ ID NO: 17)).
Анализ in vivo сигнальной активности мутантов по первичной и вторичной внутренней поверхности, а также варианта с делецией дельта-Э0 белка CBLB502, показал корреляцию с данными по активации сигнализации, полученными in vitro. Это было установлено путем инъекции различных доз соответствующих мутантов (рекомбинантных очищенных и лишенных токсичности белков) репортерным мышам с люциферазой под контролем NF-kB и измерения активности в различных органах (см. фиг. 4, области А-Е).
Вкратце, репортерным мышам с люциферазой под контролем NF-kB вводили п/к мутантов CBLB502 (по три мыши на группу), как указано. Использованные относительные количества инъекции основывались на их эффективности сигнализации в анализах на клетках репортерного гена под контролем NF-kB. Органы собирали спустя 3 ч после инъекции и мгновенно замораживали в сухом льде. Гомогенаты тканей готовили путем измельчения органов с последующим лизисом с использованием буфера для радиоиммунопреципитационного анализа (РИПА) с добавкой ингибиторов протеаз. Для люциферазных анализов 20 мкл каждого лизата смешивали с 30 мкл реагента люциферина (система люциферазного анализа Bright-Glo, Promega Inc.) и количественно определяли люциферазную активность с помощью люминометра. Люциферазную активность нормализовали на основе концентрации белка, измеренной с использованием метода Бредфорда. Результаты показали, что в то время как ответ в печени, наблюдаемый для мутанта S33, был умеренно повышен приблизительно в 3 раза, этот мутант показал намного более сильное увеличение ответа (более 10 раз при той же дозе в 0,3 мкг), наблюдаемое в мочевом пузыре и толстом кишечнике.
В ходе дополнительного систематического анализа соотношения структура-активность было получено и охарактеризовано большое количество усеченных вариантов первоначально по сигнальной активности (с использованием анализа на основе люциферазы или стандартного анализа биоактивности CBLB502 с использованием LacZ-репортерной системы). Эти делеции (частично проиллюстрированные диаграммами на фиг. 5) позволяют уточнить границы минимального необходимого ядра и рассмотреть потенциальную значимость длины (от 33 аминокислот до 12 аминокислот) и положения метки (N-концевое против С-концевым), а также проверить возможность минимизировать линкерную область (как у конструкции 33ML (SEQ ID NO: 35)).
Перечень вариантов CBLB502, содержащий подробный анализ соотношения структуры-активность, представлен в табл. 2. Среди наиболее важных наблюдений, без ограничения теорией, является принципиальная возможность удалить по меньшей мере половину природного сегмента C_D0, оставляя только его N-концевую половину (470-485), кэпированную С-концевой His-меткой (наличие кэпа является существенным для проявления активности, так как вариант 33-485 теряет приблизительно 90% сигнальной активности, см. табл. 2). Эти наблюдения в совокупности предполагают, без ограничения теорией, что домен D0 вносит только незначительный (если вообще какой-либо) вклад в прямые взаимодействия с TLR5, и его роль может быть ограничена поддержанием структурной целостности домена D1. С другой стороны, оставшийся сегмент C_D0 (470-485) не может быть удален или заменен С-концевой половиной C_D0 (485-504) или другими последовательностями (например, фрагментом ЗФБ, как в CGD1, или сегментом N-D0, как в новой конструкции MF233 (SEQ ID NO: 123), см. табл. 2). В то же время некоторые полярные остатки можно заменить аланином в данном сегменте без заметной потери активности (см. табл. 2).
- 68 035372
Варианты CBLB502 с делециями/слияниями
Таблица 2
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 ID варианта CBLB 502 Краткое описание Длина (ак) Модульная композиция (дизайн) Цели Выводы Относительная ЕС50 относительно 502
Связывай ие (ФП) Активаци я сигнализа ции (Luc) Активаци я сигнализа ции (LacZ)
502 Начальная точка - исходная конструкция 329 бхН-ЕК-метка (приблизительно 33 ак; «Ν-метка-НЕК») -ND0ND1* (1-175) - линкер16 - CD1CD0* (401504). (* ак 32-44: N-концевая область спицы (NS); ак 464-469: С-концевая область спицы (CS) 1,0 1,о 1,о
SY3 Дельта D0; ранее описана 262 6 хН-тромбин-метка (37 ак; «N-метка-НТ») -ND1 (начало с ак 33) - линкер16 - CD1 (окончание на ак466) 2,9 185 309
445 Дельта D0; усеченный CD 1 272 N-метка-НТ -ND0 ND1 - линкер16 CD1 (окончание на ак 443) Важность С-концевого фрагмента домена DO (CD0) и 26 С-концевых ак фрагмента DI (CD1) в активации сигнализации? Удаление только одного фрагмента CD0 имеет значительный эффект активность приблизительно в 50-100 раз ниже. Дополнительное усечение 26 С-концевых ак фрагмента CD 1 приводит к практически потери активности (по меньшей мере снижению в 700 раз) 0,4 141000 694
461 Дельта CD0; усеченный CD 1 289 N-метка-НТ -ND0 ND1 - линкер16 CD 1 (окончание на ак 460) нет данных 97 105
467 Дельта CD0; 295 N-метка-НТ -ND0 ND1 - линкер16 CD1 (окончание на ак 466) 1,о 71 57
470СТ Дельта CD0; минимальная С- метка 274 ND0 - ND1 - линкер16 - CD1 (окончание на ак 469) - тромбинбхН-метка (13 ак; С-метка) нет данных 44 38
S33 Дельта ND0; Nконцевая метка 300 N-метка-НТ -ND1 (начало с акЗЗ) линкер16 - CD1 - CD0 [Вариант CBLB502-S33 был охарактеризован in vivo] Вклад N-концевого фрагмента домена DO (ND0) и N-концевой области спицы (NS; ак 32-44) в активацию сигнализации? [Вариант S33 показал улучшенную ФК и более высокую активность in vivo по ФД, мышам с геном Luc и защите от радиации] Удаление фрагмента ND0 и усечение NS оказывает незначительное воздействие на активность (снижение в 1,53,5 раза), независимо от положения метки. 0,8 1,4 нет данных
ЗЗСТ Дельта ND0; Сконцевая метка 275 ND1 (начало с ак 33) - линкер16 CD1 - CD0 - С-метка нет данных 2,3 нет данных
37СТ Дельта ND0 273 ND1 (начало с ак 37) - линкер 16 CD1 - CD0 - С-метка нет данных 3,2 нет данных
N45 Дельта ND0 288 N-метка-НТ -ND1 (начало с ак45) линкер16 - CD1 - CD0 нет данных 3,6 нет данных
45 СТ Дельта ND0 285 ND1 (начало с ак 45) - линкер16 CD1 - CD0 - «Длинная» С-метка (34 ак) нет данных 3,5 нет данных
33-485 Дельта ND0; усеченный CD0 281 N-метка-НТ - ND1 (начало с ак 33) линкер16 - CD1 - CD0 (окончание на ак485) Минимальный значимый фрагмент CD0? Усечение 20 С-концевых як домена CD0 приводит к сниженной в 11 раз активности нет данных 11 нет данных
33 ML Дельта ND0; минимизированный линкер; усеченный CD1 250 ND1 (начало с ак 33) - линкерЗ CD1 (начало с ак 413) - CD0 - Сметка Проверить гипотезу, опирающуюся на структуру - минимизировать линкер и начать CD1 с ак 413 (401 в CBLB502). Подтверждено нет данных 1,5 1,3
MF227C На основе 33ML; деления в пределах CD0 227 ND1 (начало с ак 33) - линкерЗ CD1 - CD0 (удаленные аа 470-492) С-метка Продолжение проверки дополнительной минимизации на фоне варианта 33ML N-концевая часть CD0 является значимой (5-кратная потеря) нет данных нет данных 5,5
MF227N 485СТ 485D SY3CT NGD1 CGD1 GD1G СРМ194 СРМ217 На основе 33ML; усеченный ND 1 На основе 33ML; усеченный CD0 На основе 485СТ; деления Q439::F442 Дельта DO; минимальный линкер; Сконцевая метка Слитый белок: N-концевой фрагмент ЗФБ (1-157)-D1 Слитый белок: D1 - С-концевой фрагмент ЗФБ (158-238) Слитый белок: N-ЗФБ (1-157)D1 - С-ЗФБ (158-238) Кольцевой пермутант CD1 (413-469)// ND1 (33-152) Кольцевой пермутант CD1 (413-469)// ND1 (33-175) 227 233 229 217 380 303 466 194 217 ND1 (ак 33-152) - линкерЗ - CD1 CD0 - С-метка ND1- линкерЗ - CD1 - CD0 (окончание на ак 485) - С-метка ND1- линкерЗ - CD1 - CD0 (окончание на ак 485) - С-метка; делеция Q439::F442 ND1- линкерЗ - CD1 - С-метка ЗФБ (ак 1 -157) - линкер? - ND 1 линкерЗ - CD1 - С-метка ND1 - линкерЗ - CD1 - линкер?” ЗФБ (ак 158-238) - С-метка ЗФБ (ак 1 -157) - линкер? - ND 1 линкерЗ - CD1 - линкер?’ - ЗФБ (ак 158-238) - С-метка CD 1 - линкерЗ -ND 1 (окончание на ак 152) - С-метка CD1- линкерЗ -ND1 (окончание на ак 175) - С-метка Г ипотеза: С-концевое кэппирование домена DI Сметкой может давать в результате самый короткий активный вариант. Гипотеза: (1) кэппирование (Nконцевое и С-концевое по отдельности или вместе) одного домена D1 может его стабилизировать и сделать активным. Авторы использовали N-концевые и С-концевые фрагменты ЗФБ для кэппирования. (2) Слияние N- и С-концевых фрагментов ЗФБ с доменом D1 вместо D0 (мутант GD1G) может стабилизировать домен D1 и позволит проводить наблюдения за его стабилизированной конформацией через восстановление флуоресценции ЗФБ* Исследование альтернативных подходов к стабилизации домена D1 с использованием методики кольцевой пермутации С-концевая часть ND1 (ак 153175, линкер) является незаменимой Частичны домен CD0 (ак 470485) + С-концевой «кэп» (тромбин/бхНгэ-метка) сохраняет полную активность по сравнению с 11 -кратной потерей при варианте с 33-485 аа с N-меткой Неблагопрятно (44-кратная потеря) - задает границы Верно только частично: этот вариант приблизительно в 20 раз активнее, чем вариант с Nконцевой меткой (SY3). Все равно хуже, чем 502 в 16 раз. (1) N-концевой ЗФБ-кэп не помогает; С-концевой кэп приводит активность к 1/8 части от активности 502; (2) слитый белок с ЗФБ был флуоресцентным, но не активным Пока безуспешно. Один белок не свернулся. Другой свернулся, но не активен. нет данных нет данных нет данных нет данных нет данных нет данных нет данных нет данных нет данных нет данных нет данных нет данных нет данных нет данных нет данных нет данных нет данных нет данных 159 1,2 44 16 58 8 259 отсутствует 1112
Ghosh, I,,Hamilton, Α,Ρ, & Regan, L, Antiparallel leucine zipper-directed protein reassembly: application to the green fluorescent protein. J. Am, Chem, Soc. 122, 5658-5659 (2000)
Jeong, J., et al. Monitoring of conformational change in maltose binding protein using split green fluorescent protein. Biochem. Biophys. Res. Commun. 339, 647-651. (2006) Latz e, Verma A, Visintin F, Gong M, Sirois CM, et al. (2007) Ligand-induced conformatioanal changes allosterically activate Toll-like receptor 9, Nature. Immunology 8: 772-779,
В итоге, вариант CBLB502-485CT (CBLB533 (SEQ ID NO: 71)) показывает результат максимальной минимизации CBLB502 без потери сигнальной активности (по меньшей мере, in vitro). Этот вариант (длиной в 233 аминокислоты) является на 30% короче, чем CBLB502 (329 аминокислот), (см. фиг. 5).
Характеризацию in vivo выполняли для ключевых промежуточных вариантов при минимизации CBLB502-S33 (SEQ ID NO: 17) с удаленным сегментом N_D0 и оригинальной N-концевой меткой длиной в 33 аминокислоты (фиг. 5). Соответствующие рекомбинантные очищенные белки демонстрировали практически полную сигнальную активность in vitro (табл. 2). Примечательно, что первые результаты тестов in vivo на репортерных мышах с люциферазным геном под контролем NF-kB, которые выполняли параллельно с CBLB502, показали значительно более высокую активность CBLB502-S33 in vivo (фиг. 6) на основе системы визуализации Xenogen. Дополнительные количественные анализы люциферазной ак- 69 035372 тивности в отдельных органах показали, что в то время как ответ в печени был умеренно повышен, приблизительно в 3 раза, намного большее усиление ответа (более 10 раз при той же дозе в 0,3 мкг), наблюдали в мочевом пузыре и толстом кишечнике (фиг. 7).
Важно, что усиленный ответ также наблюдали при уровне активности радиозащиты (фиг. 8).
Без ограничения теорией, эти наблюдения предполагают, что минимизированный вариант CBLB502 может быть эффективно использован при показаниях против острой лучевой болезни (ОЛБ) при более низких дозах. Эта увеличенная активность может быть проявлена режимом ослабления воздействия радиации (введение после облучения). Это предположение подтверждается наблюдаемыми более сильными цитокиновыми ответами (фиг. 9), включая ключевые цитокины (Г-КСФ и ИЛ-6), выбранными в качестве биомаркеров фармакодинамики (ФД) CBLB502, и доказано являющимися существенными для механизма его активности по ослаблению воздействия радиации (Burdelya et al., 2008). Очевидным объяснением для коррелирующего усиления активности in vivo CBLB502-S33 при уровне активации сигнализации NF-kB, радиозащиты и выработки цитокинов (ФД) является, по существу, улучшенная фармакокинетика (ФК) (фиг. 10). Увеличенное сохранение CBLB502-S33 в плазме может отражать более высокую стабильность в отношении протеолиза или, вероятнее, менее эффективный захват в определенных органах/тканях (например, в печени) и более медленное выведение из кровотока, таким образом увеличивая воздействие на другие ткани. Последнее объяснение обеспечивает дополнительные доказательства вклада подобных тканей (например, клеток периферической крови) в механизм действия лекарственного средства. В качестве неограничивающего итога характеризация CBLB502-S33 показала, что анализ соотношения структура-активность и итеративная минимизация предоставляют биологически активные варианты белка с улучшенными фармакологическими свойствами. Данную информацию использовали для разработки, получения генно-инженерным способом и характеризации окончательного дизайна CBLB533.
Результаты анализа соотношения структура-активность предлагают окончательный дизайн CBLB533, основанный на варианте CBLB502-485CT (с дополнительными мутациями или без них). Данный белок можно получить в достаточном количестве и охарактеризовать in vivo подобно анализу, выполненному для промежуточного ведущего кандидата CBLB502-S33, дополнительно расширенному проверкой свойств по ослаблению воздействия радиации. Важно, они обеспечивают оптимальный каркас для разработки деиммунизированного кандидата лекарственного средства следующего поколения (Nextgen) CBLB543.
Пример 2. Конструирование композиций со сниженной антигенностью по сравнению с CBLB502.
Ahtu-CBLB502 антитела (предсуществующие и/или появившиеся в результате лечения CBLB502), демонстрирующие нейтрализующую активность in vitro, также должны нейтрализовывать его сигнальную активность по активации NF-kB (и, следовательно, терапевтическую активность). Это было подтверждено прямым экспериментом на мышах (фиг. 11). Действительно, инъекция нейтрализующих CBLB502 сывороток или моноклональных антител мышам с люциферазным геном под контролем NF-kB полностью уничтожает люциферазную активность в лизатах органов (живых). В этом эксперименте пяти группам репортерных мышей с люциферазным геном под контролем NF-kB (по 3 на группу) вводили с помощью внутривенной инъекции (1) ФБР, (2) не нейтрализующую сыворотку, (3) нейтрализующую сыворотку (кровотечение на 15 день), (4) моноклональное антитело (MAT) 7C, (5) MAT 11D и животным пускали кровь после 45 мин. Моноклональные антитела использовали при дозе 100 мкг на мышь. CBLB502 (1 мкг) вводили подкожно всем мышам спустя 1 ч после первоначальной инъекции антител. Осуществляли визуализацию животных спустя 3 ч после инъекции CBLB502 и собирали печень для получения лизатов. Результаты данного исследования представлены в табл. 3.
Специфическая активность люциферазы измеряли согласно следующему протоколу. С помощью измельчителя Bio-pulverizer дробили образцы печени на сухом льде. Добавляли 750 мкл 1х репортерного лизисного буфера (Promega, кат. № Е397А) + 1х коктейль ингибиторов протеаз (PIC, sigma P8340) и центрифугировали гомогенизированную смесь при 13,000 об/мин при 4°C в течение 30 мин. Собирали супернатант в чистые пробирки эппендорфа и измеряли концентрацию белка в супернатанте. Добавляли 20 мкл супернатанта и 20 мкл люциферазного буфера (Promega Е2620). Нормализовали всё по образцу с самой низкой концентрацией белка и добавляли в соответствии с этим, корректировали объем супернатанта с использованием лизирующего буфера с коктейлем ингибиторов протеаз. Люциферазную активность измеряли на люминесцентном спектрофотометре для чтения планшетов.
- 70 035372
Таблица 3
Результаты анализа aHTu-CBLB502 антител
№ образца ID образца Исследуемая группа Ингибирование нейтрализующими антителами, % Титр антиCBLB502антител
1 #1-1 ФСБ -1,08 0
2 #1-2 ФСБ -4,68 0
3 #1-3 ФСБ 0,51 0
4 #2-1 Не нейтрализующая сыворотка человека 1,77 0
5 #2-2 Не нейтрализующая сыворотка человека -5,38 0
6 #2-3 Не нейтрализующая сыворотка человека 0,15 0
7 #3-1 Нейтрализующая сыворотка человека 77,37 0
8 #3-2 Нейтрализующая сыворотка человека 84,04 19462
9 #3-3 Нейтрализующая сыворотка человека 83,52 20879
10 #4-1 Не нейтрализующие MAT 7С 5,18 17000
И #4-2 Не нейтрализующие MAT 7С 1,21 791
12 #4-3 Не нейтрализующие MAT 7С 2,63 858
13 #5-1 Нейтрализующие МАТ 11D 44,81 114496
14 #5-2 Нейтрализующие МАТ 11D 49,41 87249
15 #5-3 Нейтрализующие МАТ 11D 54,48 109475
* Сыворотки человека были разбавлены в 10 раз с помощью ФБР для инъекций.
* *Оба МАТ, 7С и 11D, имели концентрацию 2 мг/мл в ФБР для инъекций.
* **Образцы сывороток мышей собирали спустя 1 час после инъекции антител.
Краткий обзор представлен ниже и проиллюстрирован в табл. 4 и 5 и на фиг. 12.
- 71 035372
Картирование эпитопов CBLB502 и деиммунизация
Таблица 4
Акти внос ть сигна лиза ции
Нейтрализация антителами (улучшение IC50 по сравнению с502)
Белок Карк ас Мутации Длина (аминокислоты)
ЕС50, норм ализ ован ная по CBLB 502 mAB4D11 mAb11D04 NSP79 NSP85 NSP99 NSP61 NSP103 Р12 Р14 Примечание
MIM1 на осно ве 502 N455A; N457A 329 0,9 Без улучшения нейтрализации с 1 любым из антител
MIM2 на осно ве 502 N455A; N457A; R460A 329 1,2
MIM3 на осно ве 502 N448A; N451A; N455A, N457A; R460A 329 4,6
MIM4 на осно ве 502 делеция Q439::F442; N448A; N451A; N455A, N457A; R460A 329 37
MIM5 на осно ве 502 Q439A; N440K: R441A; N448A; N451A; N455A, N457A; R460A 329 54
33MIMX на осно ве S33 N68A; F131A; Q142A; Е153А; Т154А; N440A; D443A; S444A;T447A 300 1,3 Ί0 X ~3 ~2 2 X X
MIXN на осно ве 33ML N68A; F131A; Q142A; Е153А; Т154А 250 1,5 '10 X ~1 Ох 4- 4- 5Х 5Х 3
MIXC на осно ве 33ML N440A; D443A; S444A;T447A 250 1,5 '10 X ~1 Ох
МЕ42 на осно D42A; A45G 250 1,3 4х 5х 2х Hi
- 72 035372
- 73 035372
осно ве 33ML N100::D113.Заменен линкером “GPSG”
ззмх на осно ве 33ML N68A; F131A; Q142A; Е153; Т154А; S104A; S106A; D107A; S110A; D113A; N132A; G133A; К144А; N127Q; N474Q 250 1,3 >4х >4 X >2 X >2 X 6х 7х 5
Таблица 5
Антигенность вариантов CBLB502 с делециями по определению титра антител (ELISA) с использованием многочисленных антисывороток человека
Титры
Планшет 1 Сыворотка пациента #004 15 день, CBLB502 Планшет 2 Сыворотка пациента #006 15 день, CBLB502 Планшет 3 Сыворотка пациента #009 15 день, CBLB502 Планшет 4 Сыворотка пациента #010 15 день, CBLB502 Планшет 5 Сыворотка пациента #012 15 день, CBLB502 Планшет 6 Сыворотка пациента #008 без CBLB502 Планшет 7 Сыворотка пациента #013 без CBLB502 Планшет 8 МАТ7С Нет эффекта Планшет 9 MAT 11D Нейтрализ ующие Планшет 10 МАТ 12 Нет эффекта Планшет 11 Поликлональны е антитела козы Анализы CBLB502 Планшет 12 Сыворотка пациента #004 15 день, Анализы CBLB502
Делеция SY3 429687 319746 117275 261211 543635 3331 7023 1392 39297 11433 33248 41555
Делеция 467 414991 319843 160498 276131 626631 2413 8462 1619 39722 10233 35372 40853
Делеция S33 429436 322443 199057 264892 649834 9846 9490 1596 42485 11725 38755 39092
Делеция 445 67857 152052 21824 57521 150700 978 914 1470 8609 1577 40988 19077
CBLB502, слайд, образец 519509 357298 296948 337398 761754 12082 23459 1547 52663 15364 59596 46738
Титр в % от титра стнадартного образца CBLB502
Планшет 1 Сыворотка пациента #004 15 день, CBLB502 Планшет 2 Сыворотка пациента #006 15 день, CBLB502 Планшет 3 Сыворотка пациента #009 15 день, CBLB502 Планшет 4 Сыворотка пациента #010 15 день, CBLB502 Планшет 5 Сыворотка пациента #012 15 день, CBLB502 Планшет 6 Сыворотка пациента #008 без CBLB502 Планшет 7 Сыворотка пациента #013 без CBLB502 Планшет 8 МАТ7С Нет эффекта Планшет 9 МАТ 11D Нейтрализ ующие Планшет 10 МАТ 12 Нет эффекта Планшет 11 Поликлональны е антитела козы Анализы CBLB502 Планшет 12 Сыворотка пациента #004 15 день, Анализы CBLB502
Делеция SY3 83 89 39 77 71 28 30 90 75 74 56 89
Делеция 467 80 90 54 82 82 20 36 105 75 67 59 87
Делеция S33 83 90 67 79 85 81 40 103 81 76 65 84
Делеция 445 13 43 17 20 8 4 95 16 10 69 41
CBLB502, станд. образец 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100 100
Первоначальные исследования основывались на компьютерных прогнозах линейных эпитопов, сравнительном анализе антигенности (оцененном с помощью ELISA с серией образцов сыворотки человека) для серии усеченных вариантов и наблюдении, что вариант с делецией 445 (см. табл. 2 в части композиция) в значительной мере потерял антигенность, что указывает на существование основного эпитопа в пределах довольно короткого аминокислотного сегмента (440-470). Однако анализ антигенности у ряда мутантов, полученных на основе данной предпосылки, не подтвердил эти предположения (см. фиг. 12).
На основе этих наблюдений в последующей работе подход был скорректирован для использования предсказанных структурных (потенциально прерывистых) эпитопов (фиг. 13) при проверке промежуточных мутантов на нейтрализующую антигенность, оцениваемую по величине ингибирования нейтрализующими антителами в анализе активации сигнализации. Авторы настоящего изобретения продвинулись от использования полноразмерного каркаса CBLB502 к первому усеченному ведущему варианту CBLB502-S33 (см. табл. 2 в части композиции) и его дополнительной модификации S33MX (SEQ ID NO: 150).
В первых сериях разработанных мутантов существенный прогресс был достигнут в части уменьшения чувствительности к нейтрализующим моноклональным антителам и нейтрализующим антисывороткам, направленным против CBLB502. Улучшение наблюдали на серии нормальных сывороток человека, содержащих измеряемый титр неиндуцированных нейтрализующих антител.
Для решения этой проблемы были разработаны и охарактеризованы дополнительные серии мутанта.
В результате подобных итераций была картирована и устранена без потери сигнальной активности основная часть нейтрализующих эпитопов (см. табл. 4). Для получения генно-инженерным способом полностью активного деиммунизированного ведущего кандидата белка CBLB502 (CBLB543) были предприняты следующие шаги.
Данные по картированию эпитопов, полученные, как описано выше (см. табл. 5), обеспечили основу для окончательного дизайна деиммунизированного ведущего кандидата белка CBLB543 (CBLB502-S33MX (SEQ ID NO: 150)). Данный белок был сконструирован и охарактеризован по сигнальной активности (неизмененная) и нейтрализующей антигенности. Как проиллюстрировано на фиг. 14 (для отдельных данных см. табл. 4), у этого белка нейтрализующая антигенность была значительно снижена по сравнению с CBLB502. Дополнительно сравнение с CBLB502-S33ML (SEQ ID NO: 35) усеченным каркасом, использованным для конструирования ведущего варианта, показывает, что причиной этого эффекта является комбинация мутаций, а не уменьшенный размер.
- 74 035372
Пример 3 Активность и фармакологические свойства деиммунизированных вариантов (CBLB502-33MX и CBLB502-S33).
Были проведены исследования для оценки ФК/ФД свойств выбранных композиций, относящихся к флагеллину. Конкретно, ФК/ФД свойства частично деиммунизированного белка CBLB502-33MX сравнивали с ФК/ФД свойствами CBLB502. Соответственно, в ходе данного исследования установили функциональные и фармакологические характеристики сконструированного нового варианта CBLB502-33MX со значительно сниженной нейтрализующей антигенностью и тем самым, устойчивыми к нейтрализации нейтрализующими антителами человека в анализе активности сигнализации in vitro.
Прижизненная фаза ФК/ФД исследования: 320 мышей линии C57Bl6 использовали для эксперимента в группах по 10 мышей. Вводили внутривенно CBLB502 (1 и 2 мкг/кг) и 33MX (1 и 2 мкг/кг). Животных умерщвляли после 5, 15, 30 мин, 1, 2, 4, 8 и 24 ч после лечения и собирали образцы плазмы.
Измерения ФК: концентрацию CBLB502 и 33MX в образцах плазмы измеряли в соответствии со стандартным протоколом на основе ELISA с использованием калибровочных кривых CBLB502 и 33MX.
Результаты измерений ФК показаны на фиг. 15, на которой области А и В показывают количественный анализ CBLB502 и 33MX в образцах плазмы мышей. (НПКО - ниже предела количественного измерения). Таким образом, CBLB502-33MX имеет очень схожие ФК свойства со свойствами родительского CBLB502, т.е. выводится из кровотока приблизительно с той же скоростью. Соответственно, ФК признаки CBLB502 не нейтрализуются мутациями, которые были сконструированы для деиммунизации конструкции (например, в контексте CBLB502-33MX).
Те же самые 320 образцов плазмы использовали для получения цитокинового профиля для анализа ФД свойств 33MX по сравнению с CBLB502. Данные (фиг. 16) показывают, что CBLB502-33MX имеет очень схожий ФД профиль с родительским белком CBLB502. Соответственно, ФК признаки CBLB502 также не нейтрализуются мутациями, которые были сконструированы для деиммунизации конструкции (например, в контексте CBLB502-33MX).
Активацию сигнализации in vivo у родительского белка CBLB502 сравнивали с промежуточным вариантом CBLB502-S33 (минимизированным до деиммунизации) и CBLB502-33MX, конечным продуктом стадии I деиммунизации. Использовали анализ репортерного люциферазного гена под контролем NF-kB у мышей и вводили мышам один из следующих белков: CBLB502 (в дозах 0,1, 0,3, 1 и 3 мкг); CBLB502-S33 (в дозах 0,1, 0,3, 1 и 3 мкг) и CBLB502-33MX (в дозах 0,1, 0,3, 1 и 3 мкг). Спустя 3 ч после лечения мышей умерщвляли и собирали и замораживали при -80°C следующие органы: печень, мочевой пузырь, тонкий и толстый кишечник, сердце, селезенка, легкие, мозг и почка. Люциферазную активность в лизатах органов измеряли с использованием раствора для люциферазного анализа Bright-Glo Luciferase Assay (Promega) и выражали в виде специфической люциферазной активности (относительные световые единицы (ОСЕ)/мг белка ± стандартное квадратичное отклонение (СКО)). Результаты эксперимента, показанные на фиг. 17, демонстрируют, что способность к активации NF-кВ деиммунизированного кандидата 33MX схожа с S33 и CBLB502 и в некоторых органах (например, толстом кишечнике и легких) даже превышает активность этих белков в некоторых органах.
Таким образом, среди других данный пример показывает, что деиммунизированный вариант CBLB502-33MX полностью сохранил или превысил по некоторым параметрам биологическую активность и фармакологические характеристики исходного белка CBLB502.
Пример 4. Эффективность in vivo 33MX на мышиной модели локального облучения головы и шеи.
Воздействие 33MX in vivo в условиях облучения оценивали при разнообразных дозах в сравнении с CBLB502. Лекарственное средство вводили спустя 1 ч после каждого облучения, предотвращая повреждение и ускоряя восстановление тканей после фракционированного облучения головы и шеи.
Оценивали шесть групп по 8 мышей, и группы перечислены в том порядке, в котором представлены данные на фиг. 18 (в сериях по 8 типов тканей, колонки обозначены слева направо для каждого типа ткани):
группа 1 (плацебо): 6 Грх5 раз с интервалом в 24 ч (общая доза 30 Гр), вводили ФБР-Твин спустя 1 ч после каждого ИИ, группа 6 (33MX, 0,03 мкг): 6 Грх5 раз с интервалом в 24 ч (общая доза 30 Гр), вводили 0,03 мкг 33MX спустя 1 ч после каждого ИИ, группа 5 (33MX, 0,1 мкг): 6 Грх5 раз с интервалом в 24 ч (общая доза 30 Гр), вводили 0,1 мкг 33MX спустя 1 ч после каждого ИИ, группа 4 (33MX, 0,3 мкг): 6 Грх5 раз с интервалом в 24 ч (общая доза 30 Гр), вводили 0,3 мкг 33MX спустя 1 ч после каждого ИИ, группа 3 (33MX, 1 мкг): 6 Грх5 раз с интервалом в 24 ч (общая доза 30 Гр), вводили 1 мкг 33MX спустя 1 ч после каждого ИИ, группа 2 (CBLB502, 0,1 мкг): 6 Грх5 раз с интервалом в 24 ч (общая доза 30 Гр), вводили 0,1 мкг CBLB502 спустя 1 ч после каждого ИИ (было установлено в отдельном исследовании, что эта доза является особенно эффективной).
- 75 035372
Всех мышей подвергали гистопатологическому анализу эпителия, языка, верхней части эзофагуса, слюнных желез и кожи мыши на 10 день после первого ИИ (0 день).
Результаты исследования представлены на фиг. 18. Шкалы оценки повреждения основаны на гистологической оценки тканевых срезов. Шкала оценки повреждения: 0 - для отсутствия повреждения и
- для самого тяжелого повреждения.
Эквиваленты
Поскольку настоящее изобретение было описано в связи с конкретными вариантами его реализации, следует понимать, что возможны его дополнительные модификации, и предполагается, что данное изобретение покрывает любые вариации, применения или адаптации настоящего изобретения, следующие в целом принципам настоящего изобретения и включающие подобные отклонения от настоящего описания, как те, что находятся в пределах известной или общепринятой практики в данной области техники, к которой относится настоящее изобретение, и как те, что можно применить к существенным признакам, указанным выше, и как следует из объема прилагаемой формулы изобретения.
Специалистам в данной области техники очевидны или они способны установить посредством проведения рутинных экспериментов многочисленные эквиваленты конкретных вариантов реализации, описанных в данном документе. Подразумевается, что подобные эквиваленты охватываются объемом нижеследующей формулы изобретения.
Включение посредством ссылки
Все патенты и публикации, на которые в данном описании приведены ссылки, настоящим полностью включены посредством ссылки.
Публикации, обсуждаемые в настоящем документе, приведены исключительно для их описания до даты подачи заявки на данное изобретение. Никакую информацию в настоящем описании не следует толковать как признание того, что настоящее изобретение не имеет права датировать подобную публикацию более ранним числом в силу действия предыдущего изобретения.
Все используемые в настоящем описании заголовки служат только для упорядочения структуры документа и никоим образом не подразумевают ограничения настоящего описания. Содержание любого отдельного раздела может быть одинаково применимо ко всем разделам.
Литература
1. Yoon SI, Kurnasov О, Natarajan V, Hong M, Gudkov AV, Osterman AL, Wilson
IA.,2012.Structural Basis of TLR5-Flagellin Recognition and Signaling.Science 335:859-864 (PMID:22344444)
2. Smith KD, Andersen-Nissen E, Hayashi F, Strobe K, Bergman MA, Barrett SL, Cookson ВТ,
Aderem A.2003.Toll-like receptors recognizes a conserved site on flagellin required for protofilament formation and bacterial motility.Nat lmmunol.4:1247-53 (PMID:14625549)
3. Mizel, S.B.,A.P.West, R.R.Hantgan.2003.Identification of a sequence in human Toll-like receptor 5 required for the binding of Gram-negative flagellin.J.Biol.Chem.278:23624-23629 (PMID:12711596)
4. Murthy, K.G.,Deb, A.,Goonesekera, S.,Szabo, C.& Salzman, A.L.(2004)
J.Biol.Chem.279:5667-5675 (PMID:14634022)
5. Andersen-Nissen E.,Smith K.D.,Strobe K.L.,Barrett S.L.,Cookson B.T.,Logan S.M.,Aderem
A.(2005) Evasion of Toll-like receptor 5 by flagellated bacteria.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.102:9247-9252 (PMID: 15956202)
6. Andersen-Nissen E, Smith KD, Bonneau R, Strong RK, Aderem A.2007.A conserved surface on Toll-like receptor 5 recognizes bacterial flagellin.J Exp Med.204:393-403 (PMID: 17283206)
7. Burdelya LG, Krivokrysenko VI, Tallant TC, Strom E, Gleiberman AS, Gupta D, Kurnasov
OV, Fort FL, Osterman AL, Didonato JA, Feinstein E, Gudkov AV.,2008.An agonist of Tolllike receptor 5 has radioprotective activity in mouse and primate models.Science 320:226230 (PMID: 18403709).
8. Huleatt JW, Nakaar V, Desai P, Huang Y, Hewitt D, Jacobs A, Tang J, McDonald W, Song
L, Evans RK et al.2008.Potent immunogenicity and efficacy of a universal influenza vaccine candidate comprising a recombinant fusion protein linking influenza M2e to the TRL5 ligand

Claims (17)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Полипептид, активирующий сигнальный путь TLR5 и содержащий аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 71 и SEQ ID NO: 150, или последовательность, по меньшей мере на 95% идентичную SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 71 или SEQ ID NO: 150.
  2. 2. Полипептид по п.1, который имеет сниженную антигенность и иммуногенность по сравнению с полипептидом, имеющим последовательность SEQ ID NO: 2.
  3. 3. Полипептид по п.1, который демонстрирует улучшенную фармакокинетику по сравнению с полипептидом, имеющим последовательность SEQ ID NO: 2.
  4. 4. Полипептид по п.1, который демонстрирует увеличенное время задержки in vivo.
  5. 5. Полипептид по п.1, который активирует сигнальный путь TLR5 на том же или сходном уровне, что и полипептид, имеющий последовательность SEQ ID NO: 2.
  6. 6. Полипептид по п.1, дополнительно содержащий N-концевую метку.
  7. 7. Полипептид по п.1, дополнительно содержащий С-концевую метку.
  8. 8. Полипептид по п.1, который индуцирует NF-KB-опосредованную экспрессию одного или более цитокинов, выбираемых из интерлейкина-6 (ИЛ-6), интерлейкина-12 (ИЛ-12), хемоаттрактанта кератиноцитов (KC), интерлейкина-10 (ИЛ-10), гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ), моноцитарного хемоаттрактантного белка 1 (МСР-1), фактора некроза опухолей альфа (ФНО-α; TNF-α), монокина, индуцируемого интерфероном гамма (MIG), и макрофагального белка воспаления 2 (MIP-2).
  9. 9. Фармацевтическая композиция, активирующая сигнальный путь TLR5, содержащая полипептид по любому из пп.1-8 и фармацевтически приемлемый носитель.
  10. 10. Способ стимулирования сигнального пути TLR5, включающий введение полипептида по любому из пп.1-8 субъекту, который нуждается в этом.
  11. 11. Способ по п.10, отличающийся тем, что субъект страдает от радиационно-индуцированного клеточного повреждения.
  12. 12. Способ по п.11, отличающийся тем, что субъект подвергался летальным дозам радиации.
  13. 13. Способ по п.11, отличающийся тем, что субъект проходит лучевую терапию.
  14. 14. Способ по п.11, отличающийся тем, что полипептид вводят перед воздействием радиации.
  15. 15. Способ по п.11, отличающийся тем, что полипептид вводят в ходе воздействия радиации.
  16. 16. Способ по п.11, отличающийся тем, что полипептид вводят после воздействия радиации.
  17. 17. Способ по п.10, в котором полипептид имеет сниженную антигенность и иммуногенность по сравнению с полипептидом, имеющим последовательность SEQ ID NO: 2.
EA201790273A 2014-07-30 2015-07-29 Флагеллиновые композиции и их применение EA035372B1 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462031116P 2014-07-30 2014-07-30
US201562110744P 2015-02-02 2015-02-02
US201562117366P 2015-02-17 2015-02-17
PCT/US2015/042684 WO2016019034A1 (en) 2014-07-30 2015-07-29 Flagellin compositons and uses

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201790273A1 EA201790273A1 (ru) 2017-07-31
EA035372B1 true EA035372B1 (ru) 2020-06-03

Family

ID=55218277

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201790273A EA035372B1 (ru) 2014-07-30 2015-07-29 Флагеллиновые композиции и их применение
EA201790294A EA037407B1 (ru) 2014-07-30 2015-07-30 Композиция на основе флагеллина и способ вакцинации с ее использованием

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201790294A EA037407B1 (ru) 2014-07-30 2015-07-30 Композиция на основе флагеллина и способ вакцинации с ее использованием

Country Status (14)

Country Link
US (9) US10202426B2 (ru)
EP (2) EP3174893B1 (ru)
JP (3) JP6940916B2 (ru)
KR (1) KR20170031251A (ru)
CN (2) CN107087411B (ru)
AU (2) AU2015296555B2 (ru)
BR (1) BR112017001796A2 (ru)
CA (2) CA2994218A1 (ru)
EA (2) EA035372B1 (ru)
ES (1) ES2816630T3 (ru)
IL (2) IL250331B (ru)
MX (2) MX385845B (ru)
WO (2) WO2016019034A1 (ru)
ZA (1) ZA201701286B (ru)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6940916B2 (ja) * 2014-07-30 2021-09-29 ゲノム プロテクション，インコーポレイテッド フラジェリン組成物および使用
WO2016079899A1 (ja) 2014-11-20 2016-05-26 国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所 異なる核酸アジュバントの組み合わせによる、新規Ｔｈ１誘導性アジュバントおよびその用途
CA3069733A1 (en) 2017-07-20 2019-01-24 Spogen Biotech Inc. Bioactive polypeptides for improvements in plant protection, growth and productivity
US12459965B2 (en) 2017-10-09 2025-11-04 Compass Pathfinder Limited Preparation of psilocybin, different polymorphic forms, intermediates, formulations and their use
GB2571696B (en) 2017-10-09 2020-05-27 Compass Pathways Ltd Large scale method for the preparation of Psilocybin and formulations of Psilocybin so produced
WO2019094528A1 (en) * 2017-11-09 2019-05-16 The Scripps Research Institute An improved heroin vaccine
JP7037930B2 (ja) * 2017-12-19 2022-03-17 株式会社小糸製作所 車両の運転支援装置、命令表示装置及び車両用灯具。
CN109879940A (zh) * 2017-12-25 2019-06-14 苏州和锐生物科技有限公司 鞭毛g多肽、抗体捕获器件及试剂盒
AU2019261592A1 (en) * 2018-04-24 2020-11-19 Genome Protection, Inc. Methods for improving frailty and aging
WO2020110154A1 (en) * 2018-11-30 2020-06-04 Bharat Biotech International Limited A chimeric therapeutic vaccine
CA3122067A1 (en) * 2018-12-07 2020-06-11 Genome Protection, Inc. Engineered flagellin-derived compositions and uses
CN111718417B (zh) * 2019-03-19 2022-10-14 宁波鲲鹏生物科技有限公司 含有荧光蛋白片段的融合蛋白及其用途
KR102169663B1 (ko) * 2019-03-28 2020-10-26 가톨릭대학교 산학협력단 플라젤린으로부터 유도된 tlr5 작용제를 유효성분으로 포함하는 이식편대숙주질환의 예방 또는 치료용 조성물
US12377112B2 (en) 2019-04-17 2025-08-05 Compass Pathfinder Limited Methods of treating neurocognitive disorders, chronic pain and reducing inflammation
CN110157655B (zh) * 2019-05-22 2021-06-01 中国兽医药品监察所 一种无毒性气肿疽梭菌基因工程亚单位疫苗用菌种及其应用
US20220288198A1 (en) * 2019-08-30 2022-09-15 Genome Protection, Inc. Methods of increasing vaccine efficacy
JP7766623B2 (ja) 2020-05-19 2025-11-10 サイビン アイアールエル リミテッド 重水素化トリプタミン誘導体および使用方法
US20220389065A1 (en) * 2020-06-04 2022-12-08 The Catholic University Of Korea Industry-Academic Cooperation Foundation Anticancer composition comprising tlr5 agonist derived from flagellin as active ingredient
TWI746188B (zh) * 2020-09-28 2021-11-11 中山醫學大學 篩選治療腦炎藥物之平台及其方法
CA3208643A1 (en) 2021-01-18 2022-07-21 Conserv Bioscience Limited Coronavirus immunogenic compositions, methods and uses thereof
CN118871092A (zh) * 2021-06-30 2024-10-29 Inserm(法国国家健康医学研究院) 用于肺部递送鞭毛蛋白的气雾剂组合物
KR102483177B1 (ko) * 2021-07-09 2022-12-29 전남대학교산학협력단 탈-면역 플라젤린 및 이를 포함하는 백신 조성물
KR102514849B1 (ko) * 2021-10-28 2023-03-28 전남대학교산학협력단 수지상 세포를 표적하는 신규한 펩타이드, 및 이를 포함하는 암 치료용 조성물
AU2023281711A1 (en) * 2022-06-01 2024-11-28 Flag Bio, Inc. Rna adjuvants, methods and uses thereof
WO2024035137A1 (ko) * 2022-08-10 2024-02-15 주식회사 메디스팬 바실러스 서브틸리스 플라젤린 변이체 및 이의 용도
WO2025172452A1 (en) * 2024-02-14 2025-08-21 Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale Combination for treating bacterial infection due to pseudomonas aeruginosa antibiotic-resistant strain

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090246303A1 (en) * 2003-12-02 2009-10-01 Gudkov Andrei V Method for Reducing The Effects of Chemotherapy Using Flagellin Related Polypeptides
US20130004515A1 (en) * 2008-08-01 2013-01-03 Cleveland Clinic Foundation Methods for treating reperfusion injuries

Family Cites Families (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3007812A (en) 1957-02-11 1961-11-07 Allied Chem Water-repellent compositions, method of water-proofing porous surfaces therewith, and resulting water-repellent surfaces
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
US5399494A (en) 1983-03-04 1995-03-21 The University Of Maryland System Vibrio cholerae strain CVD103Hgr, method of making same, and vaccines derived therefrom
US6130082A (en) 1988-05-05 2000-10-10 American Cyanamid Company Recombinant flagellin vaccines
WO1990006696A2 (en) * 1988-12-19 1990-06-28 Praxis Biologics, Inc. Meningococcal class 1 outer-membrane protein vaccine
JPH05502402A (ja) 1990-09-28 1993-04-28 ゲブリユーダー　ズルツアー　アクチエンゲゼルシヤフト 医療用の中空針及びその製造方法
AU3630093A (en) 1992-03-02 1993-10-05 Biocine S.P.A. Helicobacter pylori proteins useful for vaccines and diagnostics
US5693476A (en) 1995-02-24 1997-12-02 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods of screening for compounds capable of modulating vesicular release
US20020009747A1 (en) 1997-08-25 2002-01-24 Freda Diane Miller Methods and reagents for identifying modulators of neuronal apoptosis
US5994409A (en) 1997-12-09 1999-11-30 U.S. Bioscience, Inc. Methods for treatment of neuro--and nephro--disorders and therapeutic toxicities using aminothiol compounds
US6586008B1 (en) * 1999-08-25 2003-07-01 Advanced Inhalation Research, Inc. Use of simple amino acids to form porous particles during spray drying
WO2001040280A2 (en) 1999-11-29 2001-06-07 Inotek Corporation Composition and method for treating a microbial infection
ATE360643T1 (de) 2000-01-31 2007-05-15 Munin Corp Humanes cyr61
US7300749B2 (en) 2000-02-17 2007-11-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Molecules of the pyrin domain protein family and uses thereof
WO2002044363A1 (en) 2000-11-28 2002-06-06 Genesis Research And Development Corporation Limited Methods for modulating apoptotic cell death
US8703146B2 (en) 2001-04-20 2014-04-22 Institute For Systems Biology Toll-like receptor 5 ligands and methods of use
EP1379552B2 (en) 2001-04-20 2014-11-19 The Institute for Systems Biology Toll-like receptor 5 ligands and methods of use
WO2003028659A2 (en) 2001-10-02 2003-04-10 University Of Chicago Methods and compositions for modulating apoptosis
US7078165B2 (en) 2003-03-27 2006-07-18 Institut Pasteur Method for modulating Nod1 activity, use of a MTP related molecule for modulating Nod1 activity, and therapeutic applications thereof
US7638485B2 (en) 2003-12-02 2009-12-29 Cleveland Biolabs, Inc. Modulating apoptosis
WO2005056041A2 (en) 2003-12-02 2005-06-23 Cleveland Clinic Foundation METHODS OF INHIBITING APOPTOSIS USING LATENT TGFβ
WO2005056054A2 (en) 2003-12-02 2005-06-23 Cleveland Clinic Foundation METHODS OF INHIBITING APOPTOSIS USING INDUCERS OF NF-κB
PT1706133E (pt) * 2003-12-02 2010-12-07 Cleveland Clinic Foundation Métodos para protecção contra radiação utilizando flagelina
US20050266391A1 (en) 2004-01-15 2005-12-01 Bennett Brydon L Methods for preserving tissue
US7404963B2 (en) 2004-10-01 2008-07-29 The University Of South Florida Flagellin-based adjuvants and vaccines
US7794731B2 (en) 2004-12-16 2010-09-14 Wake Forest University Health Sciences Use of flagellin in the immunotherapy of Yersinia pestis
WO2006069198A1 (en) 2004-12-22 2006-06-29 Cleveland Clinic Foundation Flagellin related polypeptides and uses thereof
EP1940419A2 (en) 2005-09-09 2008-07-09 Oregon Health and Science University Neuroprotectants
WO2007070623A2 (en) 2005-12-14 2007-06-21 Medistem Laboratories, Inc. Transcatheter tumor immunoembolization
EP1979488A4 (en) 2006-01-09 2009-05-27 Univ California IMMUNOSTIMULATING COMBINATIONS OF TNFRSF, TLR, NLR, RHR, PURINERIC RECEPTOR, AND CYTOKIN RECEPTOR ANTONISTS FOR VACCINES AND TUMOR IMMUNOTHERAPY
WO2008094275A1 (en) 2007-01-30 2008-08-07 New York University Peptides for treatment of conditions associated with nitric oxide
CN101778861A (zh) 2007-06-15 2010-07-14 Immurx公司 Tlr激动剂和/或1型干扰素减轻tnf-r激动剂治疗方案的毒性的用途
WO2009018500A1 (en) 2007-07-31 2009-02-05 The Johns Hopkins University Polypeptide-nucleic acid conjugate for immunoprophylaxis or immunotherapy for neoplastic or infectious disorders
EP2224954B1 (en) 2007-11-07 2014-01-08 Celldex Therapeutics, Inc. Antibodies that bind human dendritic and epithelial cell 205 (dec-205)
WO2010040096A2 (en) 2008-10-03 2010-04-08 Emory University Methods for the treatment of graft-versus-host disease
JP5913093B2 (ja) 2009-05-21 2016-04-27 アストラゼネカ アクチボラグ 新規ピリミジン誘導体と、癌とさらなる疾患の治療におけるそれらの使用
SG178954A1 (en) 2009-09-02 2012-04-27 Novartis Ag Immunogenic compositions including tlr activity modulators
AP2012006253A0 (en) 2009-10-06 2012-06-30 Panacela Labs Inc Use of toll-like receptors and agonist for treating cancer.
US9682133B2 (en) * 2010-03-17 2017-06-20 Cornell University Disrupted adenovirus-based vaccine against drugs of abuse
CN103945863A (zh) * 2011-08-01 2014-07-23 爱默蕾大学 包含配体的vlp及其相关方法
CN102965386A (zh) * 2011-09-02 2013-03-13 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 一种重组细菌鞭毛蛋白衍生多肽的制备和活性鉴定方法
CN102772795B (zh) * 2012-08-06 2015-07-29 中国人民解放军疾病预防控制所 布鲁氏菌鞭毛蛋白bmeii1112在制备布鲁氏菌亚单位疫苗中的应用
JP6940916B2 (ja) * 2014-07-30 2021-09-29 ゲノム プロテクション，インコーポレイテッド フラジェリン組成物および使用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090246303A1 (en) * 2003-12-02 2009-10-01 Gudkov Andrei V Method for Reducing The Effects of Chemotherapy Using Flagellin Related Polypeptides
US20130004515A1 (en) * 2008-08-01 2013-01-03 Cleveland Clinic Foundation Methods for treating reperfusion injuries

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LEIGH D. NICHOLAS et al. A Flagellin-Derived Toll-Like Receptor 5 Agonist Stimulates Cytotoxic Lymphocyte-Mediated Tumor Immunity, PLOS ONE, Jan. 2014, Vol. 9, issue 1, e85587, p. 1-10 *

Also Published As

Publication number Publication date
WO2016019134A1 (en) 2016-02-04
ES2816630T3 (es) 2021-04-05
CA2994218A1 (en) 2016-02-04
US20210269491A1 (en) 2021-09-02
KR20170031251A (ko) 2017-03-20
IL250334A0 (en) 2017-03-30
EP3174893A4 (en) 2018-01-03
US20200392190A1 (en) 2020-12-17
BR112017001796A2 (pt) 2018-02-14
WO2016019034A1 (en) 2016-02-04
US11034733B2 (en) 2021-06-15
MX2017001279A (es) 2017-08-07
CA2994289A1 (en) 2016-02-04
CN107073092A (zh) 2017-08-18
AU2015296298A1 (en) 2017-03-16
US10975127B2 (en) 2021-04-13
AU2015296555B2 (en) 2020-05-21
EA037407B1 (ru) 2021-03-25
EP3174552A4 (en) 2018-02-28
CA2994289C (en) 2023-03-14
EP3174552B1 (en) 2020-09-16
WO2016019134A8 (en) 2016-03-31
CN107087411A (zh) 2017-08-22
EP3174893A1 (en) 2017-06-07
US10202426B2 (en) 2019-02-12
JP2017523184A (ja) 2017-08-17
US10336793B2 (en) 2019-07-02
CN107087411B (zh) 2021-06-29
US20210340190A1 (en) 2021-11-04
AU2015296298A8 (en) 2017-03-23
US20200277339A1 (en) 2020-09-03
MX2017001406A (es) 2017-08-28
JP2021191781A (ja) 2021-12-16
EP3174552A1 (en) 2017-06-07
US20180251498A1 (en) 2018-09-06
IL250331A0 (en) 2017-03-30
US10669316B2 (en) 2020-06-02
IL250331B (en) 2021-06-30
JP6940916B2 (ja) 2021-09-29
ZA201701286B (en) 2018-04-25
US20190315810A1 (en) 2019-10-17
EA201790273A1 (ru) 2017-07-31
EA201790294A1 (ru) 2017-08-31
EP3174893B1 (en) 2020-05-06
US20180354995A1 (en) 2018-12-13
AU2015296555A1 (en) 2017-02-23
JP2017523180A (ja) 2017-08-17
AU2015296298B2 (en) 2020-05-21
IL250334B (en) 2021-09-30
US11542306B2 (en) 2023-01-03
JP6646039B2 (ja) 2020-02-14
US10730915B2 (en) 2020-08-04
US20190233478A1 (en) 2019-08-01
MX385845B (es) 2025-03-18
US20170266278A1 (en) 2017-09-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11034733B2 (en) Flagellin compositions and uses
KR20240056564A (ko) T 세포 림프종을 치료하기 위한 약물을 제조하는 데 있어서 ezh2 억제제의 용도
CN101600728A (zh) 使用铜氧还蛋白和富含CpG的DNA治疗癌症的组合物和方法
MXPA04011871A (es) Quimioterapia en combinacion con clorotoxina.
US20220024991A1 (en) Engineered flagellin-derived compositions and uses
WO2016014899A1 (en) Flagellin derivatives and uses
EP3515479A1 (en) Treatment and/or prevention of sepsis
JP2022527322A (ja) Ｆｍｓ様チロシンキナーゼ３リガンド（ｆｌｔ３ｌ）ベースキメラタンパク質
US20240226306A1 (en) Trem-2/dap-12 inhibitors for treating lung disease and injury and combinations thereof
HK1237803A1 (en) Flagellin compositions and uses
HK1237803B (en) Flagellin compositions and uses
US12060438B2 (en) Cyclic peptide compounds and methods of use thereof
JPWO2006001542A1 (ja) 毒素中和性ペプチドのスクリーニング方法とｓｔｘ２阻害性ペプチド並びにベロ毒素中和剤
US20220323391A1 (en) Combination of a chemotherapeutic agent and alpha-lactoglubulin-oleic acid complex for cancer therapy
TWI676683B (zh) 用於癌症治療之對ａｄｉ－ｐｅｇ２０抗體交叉反應性降低之精胺酸去亞胺酶
JP2019107021A (ja) 融合ポリペプチドおよび使用方法
CN120569400A (zh) 使用硝化抗性ccl2趋化因子的组合物和方法
KR20230144960A (ko) 신규 펩타이드 기반 면역항암제
WO2020232638A1 (zh) 一种抗体偶联物及其药物组合物的应用
JP2020528457A5 (ru)