MXPA04011871A

MXPA04011871A - Quimioterapia en combinacion con clorotoxina.

Info

Publication number: MXPA04011871A
Application number: MXPA04011871A
Authority: MX
Inventors: A Gonda Matthew
Original assignee: Transmolecular Inc
Priority date: 2002-05-31
Filing date: 2003-06-02
Publication date: 2005-07-26
Also published as: CA2494451A1; EP1539207A4; EP2182004A1; WO2003101474A1; AU2003240496B2; EP1553962B1; JP2015214562A; US20060166892A1; EP2431385A2; DE60331458D1; JP5856744B2; AU2003240496A1; EP1553962A4; WO2003101475A1; AU2003237347A1; CA2487425A1; EP2431385A3; EP1539207A1; JP2011153149A; ES2341767T3

Abstract

Esta invencion incluye composiciones y metodos por combinacion de quimioterapia, que involucran particularmente al menos un agente quimioterapeutico usado en combinacion con clorotoxina o un derivado de esta.

Description

QUIMIOTERAPIA EN COMBINACION CON CLOROTOXINA CAMPO DE LA INVENCION La presente invención concierne generalmente a los campos de fisiología celular y oncología. Más específicamente, la presente invención concierne a un nuevo método de tratar trastornos en la proliferación celular, tales como cánceres, con dosis de clorotoxina y/o derivados de los mismos en combinación con agentes quimioterapéuticos.

ANTECEDENTES DE LA INVENCION Los tumores que se originan en el tejido cerebral se conocen como tumores cerebrales primarios en oposición a los tumores cerebrales secundarios que se desarrollan cuando el cáncer metastatiza al cerebro. Los tumores cerebrales primarios se clasifican por el tipo de tejido en el cual comienzan. Los tumores cerebrales más comunes, los cuales comienzan en el tejido glial (de apoyo) . Los astrocitomas son un tipo de glioma que proviene de células de forma de estrella, pequeñas, ¦ llamadas astrocitos. Pueden crecer en cualquier parte en el cerebro o en la médula espinal pero más a menudo se originan en el cerebro en adultos y el tronco cerebral, el cerebro, y el cerebelo en niños. Un astrocitoma de grado III es llamado algunas veces astrocitoma anaplástico mientras que un astrocitoma de grado IV es llamado usualmente glioblastoma multiforme. Los gliomas del tronco cerebral se encuentran en la parte inferior, similar al tronco del cerebro. Los tumores en esta área generalmente no pueden ser removidos . La mayor parte de los gliomas del tronco cerebral son astrocitomas de alto grado. Los ependimomas son un tipo de glioma que usualmente se desarrolla en el revestimiento de los ventrículos y pueden también encontrarse en la médula espinal . Aunque estos tumores pueden desarrollarse a cualquier edad son más comunes en la infancia y en la adolescencia. Los oligodendrogliomas se originan en las células que producen mielina, el recubrimiento graso que protege los nervios. Estos tumores raros usualmente se originan en el cerebro, crecen lentamente, usualmente no se extienden en el tejido cerebral circundante y se encuentran más a menudo en adultos de mediana edad pero se ha encontrado en gentes de todas las edades. Hay otros tipos de tumores cerebrales que no se originan en el tejido glíal. Una vez se pensó que los meduloblastomas se desarrollaban desde las células gírales. Sin embargo las investigaciones recientes sugieren que estos tumores se desarrollan desde células nerviosas primitivas (en desarrollo) que normalmente no permanecen en el cuerpo después del nacimiento. Por esta razón, los méduloblastomas son algunas veces llamados tumores neuroectodérmicos primitivos. La mayoría de los méduloblastomas se originan en el cerebelo, no obstante, pueden encontrarse en otras áreas también. Los meningiomas crecen desde las meninges y usualmente son benignos . Porque estos tumores crecen muy lentamente, el cerebro puede ser capaz de adaptarse a su presencia y por consiguiente estos tumores a manudo crecen muy grandes antes de que causen síntomas. Los schwannomas son tumores benignos que comienzan en células de Schwann, las cuales producen la mielina que protege el nervio acústico . Los neuromas acústicos son un tipo de schwannoma y se encuentra principalmente en adultos . Los cráneofaringiomas se desarrollan en la región de la glándula pituitaria cerca del ipotálamo y son usualmente benignas, no obstante, algunas veces son considerados malignos porque pueden presionar sobre o dañar el hipotálamo y afectar las funciones vitales. Los tumores de células germinales proceden de células sexuales primitivas (en desarrollo) o células germinales . El tipo más frecuente de tumor de células germinales en el cerebro es el germinoma. Los tumores de la región pineal se encuentran en o alrededor de la glándula pineal, un órgano minúsculo cerca ¦ del centro del cerebro. El tumor puede ser de crecimiento lento (pineocitoma) o de crecimiento rápido (pineoblastoma) . La región pineal es muy difícil de alcanzar y estos tumores a menudo no pueden removerse. Los tumores neuroectodérmicos primitivos se encuentran tanto en el sistema nervioso central como en el periférico. Los tumores neuroectodérmicos primitivos que se encuentran solamente en el sistema nervioso periférico son mencionados como tumores neuroectodérmicos primitivos periféricos. Los tumores neuroectodérmicos primitivos se manifiestan preferencialmente en niños y tienen capacidad para desarrollarse en una variedad de líneas neuronales, astrocíticas, ependímicas, musculares y melanóticas . La base conceptual de agrupar juntos estos tumores consiste en que comparten células progenitoras comunes así como también que comparten transformaciones neoplásticas similares que conducen a tumores de aspectos morfológicos y comportamiento biológico similares. Sin embargo, permanece en controversia al colocar todos los tumores neuroectodérmicos primitivos en las mismas categorías. Los tumores neuroectodérmicos primitivos supratentoriales incluyen meduloblastomas cerebrales, neuroblastomas cerebrales, ependimoblastoma y otros tumores neuroectodérmicos primitivos tales como pineoblastomas . Los tumores neuroblásticos cerebrales de la glándula adrenal (médula) y sistema nervioso simpático son los tipos más comunes de tumores de la infancia a excepción del sistema nervioso central. Los sitios primarios para estos tumores neuroectodérmicos primitivos son, en las adrenales, abdominal, torácico, cervical y ganglios simpáticos pélvicos pero incluye otros sitios primarios como la fosa orbitaria, riñon, pulmón, piel, ovario, cordón espermático, y vejiga urinaria. Nombres específicos de estos tumores relacionados son feocromocitomas, paraganglioma, neuroblastomas, ganglioneuronas, ganglioneuroblas omas, neurofibromas, sc wannomas, y tumores malignos del revestimiento nervioso periférico. Todos estos comparten un origen común en la cresta neural. Los meduloblastomas son miembros de los tumores neuroectodérmicos primitivos que se describen como tumores embrionarios muy malignos del sistema nervioso central encontrados en el cerebelo. Actualmente, la cirugía es el tratamiento de selección para tumores del sistema nervioso central. La cirugía proporciona un diagnóstico definido, pone de relieve la densidad másica del tumor y extiende la supervivencia del paciente. El único tratamiento adyuvante post cirugía que es conocido para trabajar efectivamente en tumores del sistema nervioso central es la radiación, y puede prolongar la supervivencia. Sin embargo el tratamiento de radiación, tiene muchos efectos colaterales indeseables. Puede causar daño al tejido normal del paciente, incluyendo el tejido neuronal. La radiación también puede causar efectos colaterales severos (por ejemplo, náuseas, vómitos, pérdida del cabello) . El otro tratamiento para el cáncer, adyuvante, post cirugía común, la quimioterapia ¦ es relativamente inefectiva contra tumores neuroectodérmicos . Por ejemplo, la quimioterapia contra tumores neuroectodérmicos con agentes de nitrosourea no es curativa. Se han estudiado y probado muchos otros agentes que tratan el cáncer, pero generalmente tienen un efecto mínimo sobre la prolongación de la supervivencia porque muchos agentes no atraviesan la barrera cerebro-sangre. En vista de estas opciones de tratamiento limitadas, el pronóstico actual para pacientes diagnosticados con tumores neuroectodérmicos no es favorable. El término supervivencia media para pacientes diagnosticados con astrocitomas malignos que tienen cirugía y ningún tratamiento adyuvante es de aproximadamente catorce semanas. La terapia de radiación después de cirugía extiende la mediana a aproximadamente treinta y seis semanas. El porcentaje de supervivencia de dos años actual para todas las formas de tratamiento es inferior al diez por ciento. Son también difíciles de combatir otros tipos de tumores por medio de tratamientos del cáncer conocidos . El cáncer del pulmón mata a más americanos anualmente que los siguientes cuatro neoplasmas combinados, más frecuentemente diagnosticados (Greenlee y colaboradores (2001) CA Cáncer J. Clin. 51, 15- 36) . Aproximadamente ochenta por ciento de tumores primarios de pulmón son de la variedad de células no pequeñas, que incluyen células escamosas y carcinomas de células grandes, asi como también adenocarcinomas . La terapia en modalidad sola se considera apropiada para la mayoría de los casos de cáncer ce pulmón de células no- pequeñas en etapas precoz y tardía. Los tumores en etapa precoz son potencialmente curables con cirugía, quimioterapia, o radioterapia, y pacientes en etapa tardía usualmente reciben quimioterapia o cuidados de apoyo mejores. El cáncer del pulmón de células no pequeñas avanzada localmente o en etapa intermedia, que comprende veinticinco a treinta y cinco por ciento de todos los casos, es más típicamente tratado con terapia en modalidad múltiple. El cáncer de seno también presenta dificultades de tratamiento usando agentes conocidos. La incidencia de cáncer de seno en los Estados Unidos ha aumentado en un porcentaje de aproximadamente dos por ciento por año, ya que 1980, y la American Cáncer Society estimó que 192,000 casos de cáncer invasor de seno fueron diagnosticados en 2001.

El cáncer de seno es tratado usualmente con cirugía, radioterapia, quimioterapia, terapia hormonal o combinaciones de varios métodos . Una razón importante para la falla de la terapia de quimioterapia en cáncer de seno es el desarrollo de resistencia al fármaco citotóxico. La terapia en combinación usando diferentes mecanismos de acción es un método de tratamiento aceptado que evita el desarrollo de resistencia por el tumor tratado. Los agentes anti-angiogénicos son particularmente útiles en la terapia en combinación porque no es probable que causen el desarrollo de resistencia ya que no actúa sobre el tumor, sino sobre el tejido normal del huésped. Las composiciones (ver Patente US No. 5,905,027) y los métodos (ver Patente U. S. No. 6,028,174) para diagnosticar y tratar tumores neuroectodérmicos (por ejemplo, gliomas y meningiomas ) han sido desarrollados con base en la habilidad de la clorotoxina para enlazar a células tumorales de origen neuroectodérmico (Soroceanu y colaboradores (1998) Cáncer Res. 58, 4871-4879; Ullrich y colaboradores (1996) Neuroreport 7, 1020-1024; Ullrich y colaboradores (1996) Am. J. Physiol. 270, C1511-C1521) . El diagnóstico de tumores neuroectodérmicos se logra por identificación de clorotoxina marcada enlazada a células tumorales mientras que el tratamiento de tumores neuroectodérmicos se logra por medio de agentes citotóxicos unidos a clorotoxina en los tumores objetivo. La clorotoxina es una proteina de treinta y seis aminoácidos derivada de manera natural del veneno de escorpión keiurus quinquestxiatus (DeBin y colaboradores (1993) Am. J. Physiol . 264, C361-369) . La presente invención expande esta área de productos terapéuticos al proporcionar un método para tratar cáncer usando clorotoxina, en combinación con otros agentes convencionales para tratar el cáncer.

SUMARIO DE LA INVENCION La invención incluye métodos para tratar cáncer que comprenden administrar clorotoxina o un derivado de clorotoxina en combinación con al menos un agente quimioterapéutico . En algunas modalidades la clorotoxina o el derivado de clorotoxina es administrado antes de la administración del agente quimioterapéutico, mientras que en otras modalidades es administrada simultáneamente con el agente quimioterapéutico mientras que en aún otras modalidades, es administrada subsecuentemente al agente quimioterapéutico . En otra modalidad de los métodos de la invención, el agente quimioterapéutico es seleccionado del grupo que consiste de agentes alquilantes, antagonistas de purina, antagonistas de pirimidina, alcaloides vegetales, antibióticos intercalantes, inhibidores de aromatasa, anti-metabolitos, inhibidores mitóticos, inhibidores del factor de crecimiento, inhibidores del ciclo celular, enzimas, inhibidores de topoisomerasa,modificadores de la respuesta biológica anti-hormonas y anti-andrógenos . Ejemplos de dichos agentes quimioterapéuticos para ser usados en los métodos de la invención incluyen, pero no se limitan a, BCNU, cisplatina, gemcitabina, hidroxiurea, paclitaxel, temozomida, topotecano, fluorouracilo, vincristina, vinblastina, procarbazina, dacarbacina, altretamina, cisplatina, metotrexato, mercaptopurina, tioguanina, fosfato de fludarabina, cladribina, pentostatina, fluorouracilo, citarabina, azacitidina, vinblastina, vincristina, etoposida, teniposida, irinotecano, docetaxel, doxorubicina, daunorubicina, dactinomicina, idarubicina, plicamicina, mitomicina, bleomicina, tamoxifeno, flutamida, leuprolida, goserelin, aminoglutetimida, anastrozol, amsacrina, asparagina, mitoxantrona, mitotano y amifostina. En aún otra modalidad, los métodos de la invención son útiles para tratar tipos de cáncer seleccionados del grupo que consiste de cáncer del pulmón, cáncer óseo, cáncer de hígado, cáncer pancreático, cáncer de la piel, cáncer de la cabeza o cuello, melanoma infraocular o cutáneo, cáncer uterino, cáncer ovárico, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de seno, cáncer uterino, carcinoma de las trompas de falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cerviz, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, Enfermedad de , Hodgkin, cáncer del esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma del tejido blando, cáncer de la uretra, cáncer del pene, cáncer de la próstata, leucemia aguda y crónica, linfornas linfociticos, cáncer de la vejiga, cáncer del riñon, o uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal, neoplasmas del sistema nervioso central (CNS) , cáncer neuroectodérmico, tumores del eje espinal, glioma, menxngioma y adenoma pituitario. La invención también incluye composiciones para tratar cáncer que comprenden clorotoxina o derivados de clorotoxina y al menos un agente quimioterapéutico . En algunas modalidades, el agente quimioterapéutico es seleccionado del grupo que consiste de agente alquilantes, antagonistas de purina, antagonistas de pirimidina, alcaloides vegetales, antibióticos intercalantes, inhibidores de aromatasa, anti-metabolitos, inhibidores mitóticos, inhibidores del factor de crecimiento, inhibidores del ciclo celular, enzimas, inhibidores de topoisomerasa, modificadores de la respuesta biológica anti- ormonas y anti-andrógenos . Ejemplos de dichos agentes quimioterapéuticos para ser usados en las composiciones de la invención incluyen, pero no se limitan a, BCNU, cisplatina, gemcitabina, hidroxiurea, paclitaxel, temo2omida, topotecano, fluorouracilo, vincristina, vinblastina, procarbazina, dacarbacina, altretamina, cisplatina, metotrexato, mercaptopurina, tioguanina, fosfato de fludarabina, cladribina, pentostatina, fluorouracilo, citarabina, azacitidina, vinblastina, vincristina, etoposida, teniposida, irinotecano, docetaxel, doxorubicina, daunorubicina, dactinomicina, idarubicina, plicamicina, mitomicina, bleomicina, tamoxifeno, flutamida, leuprolida, goserelin, aminoglutetimida, anastrozol, amsacrina, . asparagina, mitoxantrona, mitotano y amifostina. Las composiciones de la invención son útiles para el tratamiento de uno o más tipos de cánceres seleccionados del grupo que consiste de cáncer del pulmón, cáncer óseo, cáncer de hígado, cáncer pancreático, cáncer de la piel, cáncer de la cabeza o cuello, melanoma intraocular o cutáneo, cáncer uterino, cáncer ovárico, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de seno, cáncer uterino, carcinoma de las trompas de falopio, carcinoma del ' endometrio, carcinoma del cérvix, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, Enfermedad de Hodgkin, cáncer del esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma del tejido blando, cáncer de la uretra, cáncer del pene, cáncer de la próstata, leucemia aguda y crónica, linfornas linfociticos, cáncer de la vejiga, cáncer del riñon, o uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal, neoplasmas del sistema nervioso central (CNS) , cáncer neuroectodérmico, tumores del eje espinal, glioma, meningioma y adenoma pituitario . La invención también incluye métodos para detectar la presencia de cáncer en un paciente, que comprende administrar una cantidad detectable de clorotoxina marcada o un derivado de clorotoxina, incluyendo clorotoxina radiomarcada o un derivado de la misma. Radiomarcadores aceptables incluyen pero no se limitan a, 3H, 14C, 18F, 1SF, 31P/ 32p 35S; 131-^ 125^ 64^ 187^ SQ f 9 ^ y 177^ _ Los tipos detectables de cáncer incluyen pero no se limitan a cáncer del pulmón, cáncer óseo, cáncer de hígado, cáncer pancreático, cáncer de la piel, cáncer de la cabeza o cuello, melanoma intraocular o cutáneo, cáncer uterino, cáncer ovárico, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de seno, cáncer uterino, carcinoma de las trompas de falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cérvix, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, Enfermedad de Hodgkin, cáncer del esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma del tejido blando, cáncer de la uretra, cáncer del pene, cáncer de la próstata, leucemia aguda y crónica, linfornas linfociticos, cáncer de la vejiga, cáncer del riñon o uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal, neoplasmas del sistema nervioso central (CNS) , cáncer neuroectodérmico, tumores del eje espinal, glioma, meningioma y adenoma pituitario .

BREVE DESCRIPCION DE LAS FIGURAS La Figura 1, expone el efecto de temodar en composición con clorotoxina in vitro. Células de D54 de glioma se incubaron con solución salina sola (control) , temodar solo, temodar más clorotoxina, o pretratado con clorotoxina veinticuatro horas antes del tratamiento con temodar . La Figura 2, expone el efecto de clorotoxina en la eficiencia de temodar in vivo. Ratones desnudos con tumores establecidos en los lados del glioma U251 fueron tratados con solución salina sola (control) , temodar solo, o temodar con clorotoxina. La Figura 3, expone el efecto del pretratamiento con clorotoxina en la eficiencia de hidroxiurea in vivo. Ratones desnudos con tumores establecidos en los lados del glioma D54 fueron tratados . La Figura 4, expone un ensayo de citotoxicidad en el cual se muestran concentraciones bajas de clorotoxina para inhibir el crecimiento y la proliferación de células de glioblastoma. La Figura 5, expone el efecto de cuatro días de incubación y agotamiento de la habilidad de la clorotoxina para inhibir el crecimiento celular anormal. La Figura 6, expone un ensayo de citotoxicidad en el cual se muestran bajas concentraciones de clorotoxina para inhibir el crecimiento y la proliferación de células de cáncer de próstata. La Figura 7, expone un ensayo in vivo de la habilidad de la clorotoxina para inhibir el crecimiento de células tumorales de glioblastoma en ratones desnudos atimicos. La Figura 8, expone un ensayo in vivo de la habilidad de la clorotoxina para mejorar la supervivencia de ratones desnudos atimicos con tumores de glioblastoma intracraneal. Cese del tratamiento intravenoso indicado por la flecha.

La Figura 9, expone un ensayo in vivo de la habilidad de la clorotoxina para inhibir el crecimiento de tumores de glioblastoma en los flancos de ratones desnudos atimicos . La Figura 10f expone una serie de péptitos de 10-mer sobrepuestos derivados de clorotoxina. Los' residuos cisteina de la SEC ID NO: 1 son reemplazados en los 10-mers con serina para prevenir la reticulación de péptidos. La Figura 11, expone el enlace de clorotoxina y de 1-15 péptidos de 10-mer. La Figura 12, expone el enlace de clorotoxina y de 16-27, 1-5 y 10 péptidos de 10-mer. La Figura 13, expone el enlace del péptido21, el núcleo de 9-mers nativo, y cada péptido de 9-mer substituido por alanina tanto a células U251 como a PC3. La Figura 14, expone el enlace de toxinas de escorpión corto en células de cáncer de próstata humanas PC3. La Figura 15, expone que el efecto del péptido 21 en la proliferación de células D54MG fue estudiado al añadir dosis crecientes del péptido 21 a las células y medir la captación de 3H-timidina.

DESCRIPCION DETALLADA DE LA INVENCION Esta invención concierne a quimioterapia en combinación, que involucra particularmente al menos un agente quimioterapéutico usado en combinación con clorotoxina o un derivado de ésta. En un aspecto, la invención incluye composiciones y métodos para matar a una célula cancerosa primero por administración de clorotoxina a una célula cancerosa en combinación con un agente quimioterapéutico . La presente invención incluye un método de retardar el crecimiento de un tumor al administrar clorotoxina al tumor simultáneamente con el agente quimioterapéutico. En otro aspecto, la invención incluye composiciones y métodos para matar a una célula cancerosa o retardar el crecimiento de un tumor por administración, primero, de clorotoxina (o un derivado de clorotoxina) y subsecuentemente administrar un agente quimioterapéutico. La presente invención incluye un método de matar a una célula cancerosa o de retardar el crecimiento de un tumor al administrar primero, un agente quimioterapéutico y administrar subsecuentemente clorotoxina (o un derivado de clorotoxina) . La administración previa, simultánea o subsecuente de clorotoxina o un derivado de la misma puede también tener el efecto de reducir la cantidad de agente quimioterapéutico necesario para el tratamiento exitoso, reduciendo asi los efectos colaterales severos asociados con agentes quimioterapéuticos . Esta invención incluye una composición farmacéutica para el tratamiento de crecimiento celular anormal en un mamífero, incluyendo un humano, que comprende una cantidad de clorotoxina o de un derivado de clorotoxina, en combinación con un agente quimioterapéutico, que sea efectivo en mejorar los efectos del agente quimioterapéutico al inhibir el crecimiento celular anormal (es decir, actúa como un adyuvante para el agente quimioterapéutico) y un portador aceptable farmacéuticamente. Como se usa en la presente, el término "crecimiento celular anormal" a menos que se indique de otra manera, se refiere a crecimiento celular que es independiente de los mecanismos reguladores normales (por e emplo, pérdida de la inhibición por contacto) . Esto incluye el crecimiento y/o proliferación anormal de células tanto de células benignas como malignas de enfermedades neoplásticas. La inhibición dependiente de quimioterapéuticos del crecimiento celular anormal puede tener lugar por medio de una variedad de mecanismos que incluyen, pero no se limitan a, muerte celular, apoptosis, inhibición de la división celular, transcripción, traslación, transducción, etc. En una modalidad de dicha composición, el crecimiento celular anormal, es cáncer. Como se usa en la presente, el término "cáncer" a menos que se indique de otra manera, se refiere a enfermedades que están caracterizadas por crecimiento y/o proliferación celular anormal, sin control. Los tipos de cáncer donde la composición es útil, incluyen, pero no se limitan a, cáncer del pulmón, cáncer óseo, cáncer de hígado, cáncer pancreático, cáncer de la piel, cáncer de la cabeza o cuello, melanoma intraocular o cutáneo, cáncer uterino, cáncer ovárico, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de seno, cáncer uterino, carcinoma de las trompas de falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cérvix, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, Enfermedad de Hodgkin, cáncer del esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma del tejido blando, cáncer de la uretra, cáncer del pene, cáncer de la próstata, leucemia aguda o crónica, linfornas linfocíticos, cáncer de la vejiga, cáncer del riñon, o uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal, neoplasmas del sistema nervioso central (CNS) , cáncer neuroectodérmico, tumores del eje espinal, gliom'a, meningioma y adenoma pituitario, o una combinación de uno o más de los cánceres anteriormente mencionados. En otra modalidad de la composición farmacéutica, el crecimiento de células anormales es una enfermedad proliferativa benigna, que incluye, pero no se limita a, hiperplasia, hipertrofia o restxnosis prostética benigna. Como se discutió anteriormente, la invención incluye una composición farmacéutica para el tratamiento de crecimiento celular anormal en un mamífero, incluyendo a un humano, la cual comprende una cantidad de clorotoxina, como se definió anteriormente, en combinación con al menos un agente quimioterapéutico y un portador aceptable farmacéuticamente. Como se usa en la presente, el término "agente quimioterapéutico" a menos que se indique de otra manera, se refiere a cualquier agente usado en el tratamiento de cáncer, el cual inhibe, disrupta, previene o interfiere con el crecimiento y/o la proliferación celular anormal. Ejemplos de agentes quimioterapéuticos incluyen, pero no se limitan a, agentes alquilantes, antagonistas de purina, antagonistas de pirimidina, alcaloides vegetales, antibióticos intercalantes, inhibidores de aromatasa, anti-metabolitos, inhibidores mitóticos, inhibidores del factor de crecimiento, inhibidores del ciclo celular, enzimas, inhibidores de topoisomerasa, modificadores de la respuesta biológica, hormonas esferoides y anti-andrógenos . En algunas modalidades, la clorotoxina o un derivado de la misma puede ser combinada con una especie única de agentes quimioterapéuticos mientras que en otras modalidades, la clorotoxina puede ser combinada con especies múltiples de agentes quimioterapéuticos . Ejemplos de agentes alquilantes incluyen, pero no se limitan a, carmustina, lomustina, ciclofosfamida, ifosfamida, mecloretamina y estreptozocina. Ejemplos de antibióticos incluyen, pero no se limitan a, bleomicina, dactinomicina, daunorubicina, doxorubicina, idarubicina y plicamisina. Ejemplos de anti-metabolitos incluyen, pero no se limitan a, citarabina, fludarabina, 5-fluorouracilo, 6- mercaptopurina, metotrexato y 6- tioguanina. Ejemplos de inhibidores mitóticos incluyen, pero no se limitan a, navelbina, paclitaxel, vinblastina y vincristina. Ejemplos de hormonas esteroides y anti-andrógenos incluyen, pero no se limitan a, aminoglutetimidas, estrógenos, flutamida, goserelina, leuprolida, prednxsona y tamoxifeno. En algunos aspectos, la invención incluye una población de moléculas conjugadas, las moléculas conjugadas que comprenden al menos un péptido de clorotoxina o un derivado de éstos y al menos un agente quimioterapéutico, en donde la extensión de la conjugación de clorotoxina y del agente quimioterapéutico es tal que el efecto del agente quimioterapéutico es un mamífero que recibe el conjugado puede ser mejorado en comparación con las mezclas del agente quimioterapéutico con clorotoxina, o el agente quimioterapéutico solo. En otro aspecto, la invención incluye composiciones que comprenden una población de moléculas conjugadas, en donde al menos un péptido de clorotoxina o derivado del mismos está conjugado a al menos un agente quimíoterapéutico y un excipiente aceptable farmacéuticamente. En algunas modalidades, la clorotoxina o un derivado de la misma puede estar conjugada a una sola especie de agentes quimioterapéuticos mientras que en otras modalidades, la clorotoxina puede estar conjugada a especies múltiples de agentes quimioterapéuticos . Como se usa en la presente el término "clorotoxina", a menos que se describa de otra manera, se refiere al polipéptido de treinta y seis aminoácidos, de extensión total derivado naturalmente del veneno de escorpión Leiurus quinquestriatus (DeBin y colaboradores (1993) _¾m. J. Physiol. 264, C361-369) que comprende la secuencia de aminoácidos de la clorotoxina nativa como se expone en la SEC ID NO: 1. El término "clorotoxina" incluye polipéptidos que comprenden la SEC ID NO: 1 la cual ha sido producida sintéticamente o recombinantemente, tal como los descritos en la Patente U.S. 6,319,891, la cual es incorporada integramente a la presente como referencia.

Como se usa en la presente, el término "clorotoxina subunitaria" o "subunidad de clorotoxina" se refiere a un péptido que comprende menos de treinta y seis aminoácidos contiguos de clorotoxina y que es capaz de enlazar específicamente a células de cáncer. Como se usa en la presente el término ""derivado de clorotoxina" se refiere a derivados, análogos, variantes, fragmentos del polipéptido y miméticos de clorotoxina y péptidos relacionados que retienen la misma actividad que la clorotoxina, tal como enlazar específicamente a una célula de cáncer en comparación a una célula normal, pude taiabién usarse para practicar los métodos de la invención. Ejemplos de derivados incluyen, pero no se limitan a, variantes peptídicos de clorotoxina, fragmentos peptídicos de clorotoxina, por ejemplo, fragmentos que comprenden o que consisten de péptidos de 10-mer contiguos de la SEC ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, o 7 o que comprende aproximadamente los residuos 10-18 o 21-30 de la SEC ID NO: 1, secuencias de enlace central y miméticos peptídicos . Clorotoxina y derivados peptídicos de la misma pueden ser preparados usando métodos de síntesis peptídica en fase sólida (o fase en solución) estándares, que se conocen en el arte. Además, ácidos nucleicos que codifican estos péptidos pueden ser sintetizados usando instrumentación para síntesis de oligonucleótidos disponibles comercialmente y pueden ser producidos recombinantemente usando sistemas de producción recombinantes estándares. La producción usando la síntesis peptídica en fase sólida es necesaria si se incluyen aminoácidos no codificados por un gen. El término "derivado de clorotoxina" como se usa en la presente es sinónimo con "variante" también incluye modificaciones a la secuencia de clorotoxina por medio de una o más eliminaciones de hasta 10 (por ejemplo , 1 a 7 o 1 a 5 aminoácidos ; inserciones de un total de hasta 10 (por ejemplo 1 a 5) aminoácidos integramente en la secuencia de aminoácidos de clorotoxina; o de hasta un total de 100 aminoácidos ya sea en el terminus de la secuencia de clorotoxina; o bien substituciones de un total de hasta 15 (por ejemplo, 1 a 5) aminoácidos. Los derivados de clorotoxina incluyen polipéptidos que comprenden una substitución conservadora o no conservadora de al menos un residuo de aminoácidos cuando la secuencia derivada y la secuencia de clorotoxina son máximamente alineadas. La substitución puede ser una que mejore al menos una propiedad o función de la clorotoxina, o es neutra en al menos una propiedad o función de la clorotoxina. Como se usa en la presente, una "propiedad o función" de la clorotoxina incluye, pero no se limita a, al menos una seleccionada del grupo que consiste de la habilidad para detener el crecimiento celular anormal, causa parálisis de un sujeto, enlace especifico a una célula de cáncer benigno o maligno en comparación con una célula no cancerosa (es decir, normal) , y muerte de una célula de cáncer maligna o benigna. En términos de la presente descripción, la célula de cáncer puede estar in vivor ex vivo, in vitro, un aislado primario de un sujeto, un cultivo celular o una linea celular. Los derivados de clorotoxina incluyen adicionalmente polipéptidos que comprenden la secuencia de aminoácidos KGRGKSY (SEC ID NO: 8), correspondientes a los residuos de aminoácidos 23-29 de la SEC ID NO: 1. Los derivados de clorotoxina también incluyen polipéptidos que comprenden la secuencia de aminoácidos TTX^ sMX^sK (SEC ID NO: 13) correspondiente a los residuos de aminoácidos 7 - 15 de la SEC ID NO: 1, en donde i es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de ácido aspártico y ácido glutámico; X2 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de alanina, arginina, asparagina, ácido aspártico, cisteina, glutamina, ácido glutámico, glicina, histidina, isoleucina, leucina, lisina, prolina, metionina, fenilalanina, serina, treonina, triptofano, tirosina, y valina; X3 es un aminoácido seleccionado del grupo que consiste de asparagina y glutamina; X4 es un aminoácido cualquiera pero en una modalidad preferida es seleccionado del grupo que consiste de serina, treonina y alanina; y X5 es un aminoácido básico seleccionado del grupo que consiste de histidina, lisina, y arginina. En una modalidad, ? es ácido aspártico, X2 es histidina o prolina, 3 es glutamina, X4 es alanina y X5' es arginina o lisina. Las variantes peptidicas de clorotoxina incluyen, pero no se limitan a, variantes por eliminación o substitución conservadora de aminoácidos de la SEC ID NO: 1. Como se usa en la presente, una variante conservadora se refiere a alteraciones en la secuencia de aminoácidos que no afecten de manera substancial adversamente las funciones biológicas del péptido. Una substitución, inserción o eliminación es decir, afecta adversamente al péptido cuando la secuencia alterada previene o interrumpe substancialmente una función biológica asociada con el péptido (por ejemplo, enlazar a una célula de cáncer) . Por ejemplo, la carga total, estructura o propiedades hidrofóbicas o hidrofílicas del péptido pueden ser alteradas sin afectar adversamente una actividad biológica. Por consiguiente, la secuencia de aminoácidos puede ser alterada, por ejemplo convertir al péptido más hidrofóbico o hidrofilico, sin afectar adversamente las actividades biológicas del péptido. Los métodos de la invención incluyen las toxinas del polipéptido correspondientes de otras especies de escorpión que presentan actividad relacionada o similar a la clorotoxina para el diagnóstico y el tratamiento de enfermedades asociadas con proliferación celular anormal como se describe en la presente, incluyendo cáncer. Para propósitos de la especificación, "actividad similar o relacionada a clorotoxina" se define como enlace a células que presentan crecimiento celular anormal, incluyendo células benignas que exhiben crecimiento anormal y células cancerosas malignas. Ejemplos de dichas toxinas polipeptidicas incluyen, pero no se limitan a, toxinas que contienen uno o más de las regiones de enlace de la clorotoxina expuesta en la SEC ID NO: 8 o la SEC ID NO: 13, y cualquiera de las secuencias consensus expuestas en la Tabla 1 Tabla 1 . Alineación de Toxina de Escorpión (identificador de secuencia entre paréntesis) Toxina Pequeña (Péptido I) -Mesobuthus t mulus sindicas 1 36 Clorotoxina (SEC ID NO; 1 ) Toxina Pequeña (SEC ID NO: 15 ) Consensus (SEC ID NO: 16 ) C PCFTTD QMA KC DCCGGKGKGKCYGPQCLC Toxina LQH 8/6 Probable — Leiurm qtiinqúestriahis hébrae s 1 38 Clorotoxina (SEC ID NO: 1) MC- CFTJDHCí4¾^GI CCGGKGRG .CY EQeLCR— Toxina LQH (SEC ID NO: 17 ) ROS^CFTTDQQCÍTKKCytiCCGG G GKCYGPOCIOAPY Consensus (SEC ID NO: 18 ) C PCFTTD Q KC DCCGG GKGKCYGPQCIC Escorpión Chino — Mesobut us martensü 1 35 Clorotoxina ( SEC ID NO: 1) CMPCFTTBHQM Chinoiese (SEC ID NO: · .19 ) ME FLYGIVFiaLFiTV FATQTDGCGPCFTTQANM Consensus (SEC ID NO: 20) C PCFTTD NM 36 61 Clorotoxina {SEC ID NO: 1 ) ¾R CDDCCGeKGRGKCyGPOCLC5R~ Chino {SEC ID NO: 19) Í¾aKCBECCGGIG-- CEGPOCLCNRI Consensus {SEC ID NO: 20 ) ARKC DCCGG G KCFGPQCLC 1 35 Clorotoxina (SEC ID NO: 1 ) MCMPGiTTTDHiQi- Chino {SEC ID NO: 21) EÍEíETiyGIVFIALFLT I^ATQ DG GBCrnTDftN Consensus (SEC ID NO: 22) C PCFTTD mí 36 59 Ctorofoxma {SEC ID NO: 1 ) ARKCiíDCCGGKGRGKCYGPQCLCR Chino (SEC ID NO: 21) AR C3®CCGGIG CFGPQCLCNRI Consensus (SEC ID NO i 22) ARKC DCCGG GK C Toxina 15 de lnsecto(EscorpiónAsiático -Mesobuthus evpevs menor) 1 . 37 Clorotoxina (SEC ID NO: 1 ) MCMPCETTDfl^^COTC^SKI^GKCYGPüCI-a -Toxina 15 (SEC ID NO : 23 ) MCMPCETT DPN^NKCI^CCGG-JSKHKC ¡T GPQC&CNR Consensus (SEC ID NO: 24) MCMPCFTTD NMA. KC DCCGG GK KCFGPQCLC 1 36 Clorotoxina (SEC ID NO: 1) CÍ«CFÍÍ^O^Í¾R^DDCC^GRGKCYGPOjeLCR Toxina 15 (SEC ID NO : 25 ) MCIffiCFTTDPNM.^ Consensus (SEC ID NO : 26) MCMPCFTTD NMA KC DCCGG C Insectotoxina 11 (Escorpión Asiático —Mesobuthus eupsus menor) 1 38 Clorotoxina (SEC ID NO: 1) Mf-WPCFTT]®H0 1A^CDDCTOGKGRGKCYGPQCLCR — Toxina 11 (SEC ID NO: 27) CMICTTTRPD ¾QQ ^CC¾--RGKCFGPQCLCX3YD Consensus (SEC ID NO: 28 ) MCMPCFTT ??. C CC G RGKCFGPQCLC 1 36 Clorotoxina (SEC ID NO: 1) MC PCPfTDHOjMARKCDDCCGGKG^GKCYGPQCLCR Toxina 11 (SEC ID NO: 29 ) MCOTCFTrRPDMRQOC-^COlQGRGKCFGPQCLQGYD Consensus . (SEC ID NQ: 30) MCMPCFTT M& C CC GKGK C Insectotoxina 15A (Escorpíór Asiático - Mesobuthus evpew menor) i 37 Clorotoxina (SEC ID NO: 1) MeM CFTTDHQMMCKCDi ^^ Toxina 15A (SEC ID NO: 31) MCMPCF^TDPNMAKKCRDCCGGN!G — KCFGPQCLCNR Consensus ( SEC ID NO: 32 ) MCMPCFTTD NMftKKC DCCGG G KCFGPQCLC 1 36 Clorotoxina ÍSEC ID NO: 1) M(^CFTTDHfiM^KC^j CGGK^ Toxina 15A ( SEO ID NO: 33) MCMPGFTTBPNM¾KKCRSCCGSNGKCFGPQCLCNR-Consensus !SEC ID N0 : 34 > MCMPCFTTD NMAKKC DCCGG GK C Neurotoxina P2 (Escorpión Marroquí) - Androctonvs mauretanicas 1 38 Clorotoxina (SEC ID NO: 1) MCMPCFTT DBQMAKKCDDCCGGKGRGKCYSPOCLCR — Neurotoxina ( SEC ID NO: 35 ) -CGPCFTTDPYTESKCAT.CCG9—-RGKCVGPQCLONRI Consensus ( SEC ID NO: 36) C PCFTTD KC CCGG RGKC GPQCLC 1 36 Clorotoxina (SEC ID NO: 1) MCMpCFTTDHQMaRKCDDCCGGKGKGKCYGPQdLCR Neurotoxina (SEC ID NO: 37 ) -CGPCFTTDPYTESKCaTCCSGRGKCVGPQCLCNRI Consensus (SEC ID NO: 38 ) .. C PCFTTD KC CCGGKGK C Alineación de Clorotoxina con todas las toxinas de escorpión anteriores 1 50 · Clorotoxina Toxina pequeña Toxina LQH — — ROSPCFTTDQQMT KCYDCCGGKGKGK Chino ¦ Toxina 15 Toxina 11 Toxina 15A Neurotoxina CSPCF!TTDPYTES GATGCGGHG— iK Consensus MCMPCFTTDPNNffiKKCRDCCGGKG K 51 61 Clorotoxina ( SEC ID NO : i) CYGPQCLCR — Toxina pequeña (SBC ID NO : 15) CYGPQCLC Toxina LQH <s£c ID NO: 17) CYGPQCIC&PY Chino (SEC ID NO: 19) CFGPQC.LfíNRI Toxina 15 ( SEC ID NO: 25 ) CFGPQCL?ONR- Toxina h ( SEC ID NO: 29) CFGFGCLCG D Toxina 15A (SEC ID NO: 33) CFGEQCIiCNR- Neurotoxina (SEC ID NO: 37 ) . CVGP¾¿KMRI Consensus (SEC ID NO: 39) CFGPQCLCNR — . : : : Alineación de Clorotoxina con toxinas que no requieren espacios para alinear 1 38 Clorotoxina ( SEC ID NO ; ' 1) MCt^'CPTTDHQMM KCIffiCGGSRGRGKCÍGeoCLCR — Toxina pequeña (SEC ID NO: 15) RO PCFTTOPQKSKKCMJCCGGKGKGKGYGPQSLG Toxina LQH ( SEC ID NO: 17) RCSÍCFTTDüQ^ QYPC XSGKG'KjG CYGiQCICñPY Consensus (SEC ID NO: 40) RC PCFTTD QMSKKC DCCGG GKGKCYGPQCLC Alineación de Clorotoxina con toxinas que requieren espacios (espacios removidos) 1 50 Clorotoxina MCtffiCFJTDaOlIRSKnDDSCGfíKGRGK CT-Neurotox MKFLYGIVFIALFLTVMFATQTDGC.GPCFTIBMlKffiRE CRE Toxina 15 MCMPCFÍXDPNMñN CRDCGGGGKKCF Toxina 11 MCMPCFTTRPDMaOOCR¾CCKGEG CF Toxina 15A — MCMFCFTT DPÍJMKKKCRDCCGGNGKC F Neurotoxina CGPCFTTDPYTESKCATCCGGRGKCV Consensus MCMECFTTDPNfeL¾RKCRDCCGGRGKCF 51 Clorotoxina {SEC ID NO: 1) CYGPQCLCR CT-Neurotox {SEC ID NO: 19) GPQCLCNRI Toxina 15 (SEC ID NO: 25) GPQCLCNR- Toxina H (SEC ID NO: 29) GPQCLCGYD Toxina 15A (SEC ID NO: 33) GPQCLCÍTR- Neurotoxina (SEC ID NO: 37) GPQCLCNRI Consensus (SEC ID SO: 41) GPQCLCNR Alineación del Péptido 8 de Clorotoxina con otras toxinas de escorpión .1 Pep8-Ctlx ( SEC ID NO: 42) CGG GRGKCY Pep8-SCX-1_BUTSI (SEC ID NO: 43) CGGKGKGKCY Consensus (SEC ID. NO : 43) CGG GKGKCY Pep8-Ctlx (SEC ID NO: 42) CGGKGRGKCY Pep8-SCX8 LEIQH (SEC ID NO: 43) CGGKGKGKCY Consensus (SEC ID KO: 43) CGGKGKGKCY 1 12 Pap8-Ctlx (SEC ID NO: 42) CGSKGRG CY— Pep8-AF079059_2 (SEC tD NO: 44) CGGIG—KCFGP Consensus (SBC ID NO: 45) CGG GRGKCFGP 1 Pep8-Ctlx (SEC ID NO: 42) CGGKGRGKCY Pep8-AF079059_2 (SEC ID NO: 44) CGGIGKCFGP Consensus (SEC ID NO: 46) CGG GK 1 12 Pep8-Ctlx (SEC ID NO: 42). CGGKGRGKCY— Pep8-JN0361 (SEC ID NO: 47) CGG-GK-KCFGP Consensus (SEC ID NO: 48) CGGKGKGKCFGP 1 Pep8-Ctlx (SEC ID NO 42.) CGGKGKGKCY Pep8-JN0361 {SEC ID NO: 47) CGGGKKCFGP Consensus {SEC ID NO: 49) CGG K 1 12 Pep8-Ctlx (SEC ID NO: 42) CGGKGRGKCY— Pep8-SCXl BUTEU (SEC ID NO: 50) .—CKGRGKCFGP Consensus (SEC ID NO: 51) CG GRGKCFGP Pep8-Ctlx (SEC ID NO: 42) CGGKGRGKCY Pep8-SCX1_BUTEU (SEC ID NO: 50) CKGRGKCFGP Consensus (SEC ID NO: 52) C GKGK 1 12 - ep8-Ctlx (SEC ID NO: 42) CGGiKGRG CY'— Pep'8-SCX5_BDTEÜ {SEC ID NO: 53) CGGKS—KCFGP Consensus (SEC ID NO: 54} CGG GRGKCFGP Pep8-Ctlx (SEC ID NO 42) CGQKGRGKCY -SCX5_BDTEü (SEC ID NO 53) CGGNGKCFGP Consensus (SEC ID NO 55) CGG GK 1 12 PepS-Ctlx (SEC ID NO: 42) CGGKGRGKQY— Pep8-SCXP_ANDMA (SEC ID NO: 56) !CGG—RGK0VGP Consensus (SEC ID NO: ¦ 57) CGGKGRGKC GP . Pep8-Ctlx (SEC ID- NO: 42) . CGGKGKGKCY Fep8-SCXP_ÁNOM& (SEC ID NO: 56) CGGRGKCVGP Consensus (SEC ID NO: 58) CGGKGK Pep8-Ctlx [SEC ID NO 42) QGG GRQCV— Pep8-SCX1_BÜTSI (SEC ID NO '43) .CÍGí3KGK(3 CY—-Pep8-SCX8_LEIQH (SEC ID NO 43) ¡CGGKGKGKCY--Pep8-AF079059_2 (SEC ID NO 44) CGG—IGXCFGP Pep8-JNQ361 (SEC ID NO 47) CGG—GK OFGP Pep8-SCX1_B0TEU (SEC ID NO 50) CKG-HKGKCFGP Pep8-SCX5J3UTEU (SEC ID NO 53) CGS— GKCFGP Pep8-SCXP_ANDM& (SEC ID NO .56) GGS--RS CVGP Consensus (SEC ID NO 59) CGG RGKCFGP Pep8-Ctlx (SEC ID NO 42) CGGKGRGKCY Pep8-SCX1_BUTSI (SEC ID NO 43) CGGKGKGKCY Pep8-SCX8_LEIQH (SEC ID NO 43). CGGKGKGKCY Pep8-AF079059_2 (SEC ID NO 44) ÜGSIGKCFGP Pep8-JN0361 (SEC ID NO 47) CGGGKKCFGP Pep8-SCXl_BÜTEü (SEC ID NO 50) GKGRGKCFGP Pep8-SCX5_B0TEü (SEC ID NO 53) ¡GGGNGKCFGP Pep8-SCXP_ANDMA {SEC ID NO 55) QGSRGKCVGP Consensus (SEC ID NO 60) CGGKGKCFGP Alineación del Péptido 21 de Clorotoxina con otras toxinas de escorpión 1 Pep21-cltx (SEC ID NO: 61) TTDHQM&RKCÍ Pép21-SCXl_BOTSI (SEC ID NO: 62) ??00?8??a Consensúa (SEC ID NO: 63) TTD QMA C 1 Pep21-cltx (SEQ ID NO: 61) TTDHQM&BKC Pep21-SCX8_LEIQH (SEQ ID NO: 64) TTEQQMTKKC; Consensus (SEQ ID NO: 65) TTD QM KKC 1 Pep21-clt.i (SEQ ID NO: 61) ^TDHOmSC Pep21-AFD79059_2 (SEQ ID NO: 66) 3TD&NMARKC Consensus (SEQ ID NO: 67) TTD NMARKC 1 Pep21-cltx (SEQ ID NO: 61) ¾TDRQMffiRKC Fep21-J 0361 (SEQ ID NO: 68) TTDPNMSNiKC Consensus • (SEQ ID NO: 69) TTD NMA KC 1 Pep21-cltH (SEQ ID NO: 61) TTDHO ARKd Pep21-SCXl_BOTEU (SEQ ID NO: 70). TTRPDMAQQO Consensus (SEQ ID NO: 71) TT A C 1 Pep21-cltx ¦ (SEQ ID NO: 61) TTDHQMftRKC Pep21-SCX5_BDTEU .· (SEQ ID NO: 72) TTDPN AKKO Consensus . (SEQ ID NO: 73) TTD NMAKKC • 1 Pep21-cltx (SEQ ID NO: 61) TTD.HQ^-&RKC Pep21-SCXP_AND A (Sí¡Q ID NO: 74) ..TTDPYTESKC! Consensus (SEQ ID NO: 75) TTD KC Pep21-clt-t (SEC ID NO 61) T3?DaOM¾R G Pep21-SCX1_BUTSI (SEC ID NO 62) TT.DPOMSKKC Eep21-SCX8_LEIQH (SEC ID NO 64) TTDQQ TKKG Pep21-AF079059_2 (SEC ID NO 66) T D fMKRKC Pep21-JN0361 (SEC ID KO 68) TTDPNM¾NE-C Pep21-SCX1_B0TE0 {SEC ID NO 70) T^RPD AOOC Pep21-SCX5_BDTEÜ (SEC ID NO 72} ÍTDPNMñKKC Pep21-SCXPJ«SIDMA (SEC ID NO 74) TTDPYTES C Consensus (SEC ID NO 76) TTDPN AKKC Como se usa en la presente, el término "toxina de escorpión relacionada" se refiere a cualquiera de las toxinas o péptidos relacionados, tales como los expuestos en la Tabla 1, que expone la identidad de secuencia de nucleótidos y/o de aminoácidos a clorotoxina. Ejemplos de toxinas de escorpión relacionadas incluyen, pero no se limitan a, neurotoxina CT de Mesobuthus martensii (No. de Acceso de GenBank AAD47373) , Neurotoxina BmK 41-2 de Buthus martensii kaxsch (No. de Acceso de GenBank A59356) , Neurotoxina Bml2-b de Buthus martensii (No. de acceso de GenBank AAK16444], Toxina Probable LQH 8/16 de Leiurus quinquestriatus hebraeu (No. de acceso de GenBank P55966) , Toxina pequeña de Mesobuthus tamulus sindicus (No. de Acceso de GenBank P15229}, las secuencias de las cuales se incorporan integramente a la presente como referencia. El nivel de homología o identidad de secuencia a la secuencia de aminoácidos o de nucleótidos se determina por el análisis por BLAST (Basic Local Search Tool) usando el algoritmo empleado por los programas blastp, blastn, blastx, tblastn y tblastx (Altschul y colaboradores (1997) Nucleic Acids Res. 25, 3389-3402 y Karlin y colaboradores (1990) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 87, 2264- 2268, ambos incorporados completamente como referencia) que están adaptados para la búsqueda de similaridad de secuencia. El procedimiento usado por el programa B1AST es considerar primero segmentos similares, con espacios (no contiguos) y sin espacios (contiguos) , entre una secuencia consultada y una secuencia de base de datos y finalmente resumen solamente aquellas parejas que satisfacen un umbral preseleccionado de significado. Para una discusión de procedimientos básicos en la búsqueda de similaridad de bases de datos de secuencias ver Atschul y colaboradores (1994) Nature Genetics 6, 119-129 que se incorpora totalmente como referencia. Los parámetros de búsqueda para histogramas, descripciones, alineaciones, expectativas (es decir, el umbral de significado estadístico esperado para reportar parejas contra secuencias de bases de datos), cortes, matriz y filtros (baja complejidad) están en las adaptaciones de defectos. La matriz de calificación de defectos usada por blastp, blastx, tblastn, y blastx es la matriz de BL0SUM62 (Henikoff y colaboradores (1992) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 89, 10915-10919, incorporada totalmente como referencia) , recomendada pata consulta de secuencias sobre ochenta y cinco micleótidos o aminoácidos de extensión. Para blastn, la matriz de calificación es adaptada por las proporciones de M (es decir, la calificación de gratificación para un par de residuos emparejados) a N (es decir, la calificación de penalización para residuos disparejos) en donde los valores defectuosos para M y N son +5 y -4 , respectivamente. Cuatro parámetros de blastn fueron ajustados como sigue: Q = 10 (penalización por creación de espacios) ; R = 10 (penalización por extensión de espacios) ; intermitencia = 1 (generan palabras de impacto en cada posición de intermitencia en el transcurso de la consulta) ; y gapw= 16 (ajusta el ancho de la ventana en la cual se generaron alineaciones espaciadas) . El ajuste de parámetros de Blastp equivalentes fueron Q = 9; R = 2; intermitencia = 1; gapw = 32. Una comparación de Bestfit entre secuencias, disponible en el paquete GCG versión 10.0, usa los parámetros de DNA GAP = 50 (penalización por creación de espacios) y LEN = 3 (penalización por extensión de espacios) y los ajustes equivalentes en las comparaciones de proteínas son GAP = 8 y LEN = 2. La presente invención abarca las variantes' alélicas, variantes de substitución conservadora, y los miembros de la familia de péptidos de toxina de escorpión, que tiene una secuencia de aminoácidos de al menos aproximadamente setenta y cinco por ciento, al menos aproximadamente ochenta y cinco por ciento, al menos aproximadamente noventa por ciento de identidad de secuencia, al menos aproximadamente noventa y cinco por ciento, o al menos aproximadamente noventa y cinco por ciento de identidad de secuencia con la secuencia de clorotoxina completa expuesta en la SEC ID NO: 1. La identidad u homología con respecto a dichas secuencias se define en la presente como el porcentaje de residuos de aminoácidos en la secuencia candidata que sean idénticos con péptidos conocidos, después de alineación de secuencias. Proteínas de fusión, o extensiones N- terminal, extermina! o internas, eliminaciones, o inserciones en la secuencia peptídica no deberán construirse como afectando la homología. Ejemplos de dichas extensiones incluyen, pero no se limitan a, las siguientes secuencias : HHHHHH CMPCFTTDHQ ARKCDDCCGG GRGKCYGPQCLCR SBC ID NO: 2 ) , YMC PCFTTDHQMARKCDDCCGG GRGKCYGPQCLGR (SEC ID NO: 3} , YSYMC PCFTTDHQMARKCDDCCGG GRGKCYGPQCLCR (SEC ID NO: 4) .

Las variantes peptídicas de clorotoxina incluyen péptidos que tienen un fragmento de la secuencia de aminoácidos expuesta en la SEC ID NO: 1; que tiene al menos aproximadamente 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30 o 35 residuos de aminoácidos contiguos. Las variantes peptidicas incluyen aquellos fragmentos asociados con la actividad de la clorotoxina. Dichos fragmentos, también mencionados como polipéptidos pueden contener regiones funcionales del péptido de la clorotoxina identificado como regiones de . la secuencia de aminoácidos que corresponden a regiones peptidicas conocidas, asi como también regiones de pronunciada hidrofilicidad. Las variantes pueden también incluir el péptido con al menos dos secuencias centrales unidas entre si, en cualquier orden, con intervención de los aminoácidos removidos o reemplazados por un una secuencia enlazadora. Las regiones son todas fácilmente identificables por medio del uso del programa para análisis de secuencias de proteínas disponible comúnmente tal como Mac Vector (Oxford Molecular) . Las variantes peptidicas contempladas , incluyen adicionalmente aquellas que contienen mutaciones predeterminadas, por ejemplo, por recombinación homologa, mutagénesis por PCR o especifica puntual, y los alelos u otras variantes como se encuentran de manera natural de la familia de péptidos; y derivados en donde el péptido ha sido modificado covalentemente por substitución, quimica, enzimática u otros medios apropiados con una porción diferente a aminoácidos como se encuentran de manera natural (por ejemplo una porción detectable tal como una enzima o radioisótopo) . Ejemplos de variantes peptidicos de clorotoxinas incluyen, pero no se limitan a las siguientes secuencias: CMPCFTTDHQ i CDDCCGGKGRG CFGPQCLCR (SEC ID NO: 5) , C PCFTTDPQMS KCADCCGG GKG CYGPQCLC (SEC ID ETOi 6) , RCSPCFTTDQQMTK CYDCGGGKG G CYGPQCICAPY (SEC ID NO: 7) .

Péptidos miméticos En otra clase de derivados de clorotoxina, la presente invención incluye péptidos miméticos que simulan la estructura tridimensional de la clorotoxina. Dichos péptidos miméticos pueden tener ventajas significativas sobre péptidos que se encuentran de manera natural que incluyen, por ejemplo, la producción más económica, mayor estabilidad química, propiedades farmacológicas mejoradas (vida media, absorción, potencia, eficiencia, etc.) especificidad alterada (por ejemplo, un amplio espectro de actividades biológicas), antigenicidad reducida y otras. En una forma, miméticos son moléculas que contienen péptido que simulan elementos de la estructura secundaria del péptido de clorotoxina. El señalamiento racional detrás del uso de péptidos miméticos es que la estructura peptídica principal de proteínas existen principalmente para orientar cadenas laterales de aminoácidos de una manera tal para facilitar interacciones moleculares, tales como las de anticuerpo y antígeno. Se espera que un péptido mimético permita interacciones moleculares similares a la molécula natural. En otra forma, se usan análogos peptidicos en la industria farmacéutica como fármacos no peptidicos con propiedades análogas a las del péptido molde. Estos tipos de compuestos no peptidicos son también mencionados como péptidos miméticos o peptidomiméticos (Fauchere (1986) Adv. Drug Res. 15, 29-69; Veber & Freidinger (1985) Trends Neurosci. 8, 392-396; Evans y colaboradores (1987) J. Med. C em. 30, 1229-1239 que se incorporan a la presente como referencia) y usualmente son desarrollados con la ayuda de modelaje molecular computarizado . Los péptidos miméticos que son estructuralmente similares a péptidos útiles terapéuticamente pueden ser usados para producir un efecto terapéutico o profiláctico. Generalmente, los péptidos miméticos son similares estructuralmente a un polipéptido paradigma (es decir, un polipéptido que tiene una propiedad bioquímica o actividad farmacológica) , pero tiene uno o más enlaces peptidicos opcionalmente reemplazados por un enlace por medios conocidos en el arte. El marcado de péptidos miméticos usualmente involucra la fijación covalente de una o más marcas, directamente o a través de un espaciador (por ejemplo, un grupo amida), en posiciones que no interfieran en el péptido mimético que sean predichas por datos de actividad-estructura cuantitativa y modelaje molecular. Dichas posiciones de no interferencia generalmente son posiciones que no forman contactos directos con las macromoléculas a las cuales el péptido mimético enlaza para producir el efecto terapéutico. La derivatización (por ejemplo, el marcado) de péptidos miméticos no interferirán substancialmente con la actividad biológica o farmacológica deseada del péptido mimético. El uso de péptidos miméticos puede mejorarse a través del uso de química combinatoria para crear bibliotecas de fármacos. El diseño de péptidos miméticos puede ser auxiliado por identificación de mutaciones de aminoácidos que incrementan o disminuyen el enlace de un péptido a, por ejemplo, una célula tumoral. Los procedimientos que pueden ser usados incluyen el método de dos levaduras híbridas (ver Chien y colaboradores (1991) Proc. Nati. Acad. Sci. USA 88, 9578-9582) y usar el método de exposición de fago. El método de dos híbridos detecta interacciones proteína-proteína en levaduras (Fields y colaboradores (1989) Nature 340, 245-246) . El método de exposición del fago detecta la interacción entre una proteína inmovilizada- y una proteína que es expresada sobre la superficie de fagos tales como lambda y M13 (Amberg y colaboradores (1993) Strategies 6, 2 - 4; Hogrefe y colaboradores (1993) Gene 128, 119-126) . Estos métodos permiten la selección positiva y negativa para interacciones proteina-péptido y la identificación de las secuencias que determinan estas interacciones. Composiciones Farmacéuticas Las composiciones farmacéuticas de la presente invención pueden ser administradas via las rutas parenteral, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, transdérmica o bucal. Por ejemplo, un agente puede ser administrado localmente a un tumor via microinfusión. Alternativa o concurrentemente, la administración puede ser por la ruta oral. Por ejemplo, la clorotoxina o un derivado de ésta podría ser administrada localmente en el sitio de un tumor, seguido por administración oral de al menos un agente quimioterapéutico . La administración previa de clorotoxina puede tener el efecto de reducir la cantidad de agente quimioterapéutico necesario para el tratamiento exitoso reduciendo asi los efectos colaterales severos asociados con los agentes quimioterapéuticos . La dosificación administrada será dependiente de la edad, salud, y peso del recipiente, clase de tratamiento concurrente, si hay alguno, frecuencia del tratamiento, y la naturaleza del efecto deseado . La presente invención incluye adicionalmente composiciones que contienen clorotoxina o derivados de la misma y uno o más agentes quimioterapéuticos que son útiles en el tratamiento de cáncer. Mientras que las necesidades individuales varían, la determinación de intervalos óptimos de cantidades efectivas de cada componente está en la experiencia en el arte. Las dosificaciones típicas comprenden 1.0 pg/kg de peso corporal a 100 mg/kg de peso corporal. Las dosificaciones preferidas para administración generalizada comprende 100.0 mg/kg de peso corporal a 10.0 mg/kg de peso corporal. Las dosificaciones preferidas para administración directa en un sitio vía microinfusión comprende 1 ng/kg de peso corporal a 1 mg/kg de peso corporal . Además de la clorotoxina y los agentes quimioterapéuticos, las composiciones de la presente invención pueden contener portadores aceptables farmacéuticamente adecuados que comprenden excipientes y auxiliares que facilitan el procesamiento de los compuestos activos en preparaciones que pueden ser usadas farmacéuticamente para liberación en el sitio de acción. Formulaciones adecuadas para administración parenteral incluyen soluciones acuosas de los compuestos activos en forma acuosoluble, por ejemplo, sales acuosolubles . Además, suspensiones de los compuestos activos como suspensiones inyectables oleosas apropiadas pueden ser administradas. Los solventes o vehículos lipofilicos adecuados incluyen aceites grasos, por ejemplo, aceite de sésamo o ésteres de ácidos grasos sintéticos, por ejemplo, oleato de etilo o triglicéridos . Las suspensiones inyectables acuosas que pueden contener substancias que aumenten la viscosidad de la suspensión incluyen, por ejemplo, carboximetil celulosa sódica, sorbitol o dextrano. Opcionalmente, la suspensión puede también contener estabilizantes. Los liposomas pueden también ser usados para encapsular el agente para liberación en la célula. La formulación farmacéutica para administración generalizada de conformidad con la invención puede ser formulada para administración enteral, parenteral o tópica. Realmente, los tres tipos de formulaciones pueden usarse simultáneamente para lograr administración generalizada del ingrediente activo. Como se mencionó anteriormente, puede usarse la administración tópica. Puede emplearse cualquier formulación tópica común tal como una solución, suspensión, gel, ungüento o salvo y los similares. La preparación de dichas formulaciones tópicas se describe en el arte de las formulaciones farmacéuticas como se ejemplifica, por ejemplo, por Genaro y colaboradores (1995) Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing. Para aplicación tópica, las composiciones podrían también ser administradas como un polvo o un rocío, particul rmente en forma de aerosol. En algunas modalidades, las composiciones de esta invención pueden ser administradas por inhalación. Para terapia por inhalación los ingredientes activos pueden estar en una solución útil para administración por medio de inhaladores de dosis medida o en una forma adecuada para inhalador de polvo seco. En otras modalidades, las composiciones son adecuadas para administración por medio de lavado bronquial . Las formulaciones adecuadas para administración oral incluyen cápsulas de gelatina blanda y dura, pildoras, tabletas, incluyendo tabletas recubiertas, elíxires, suspensiones, jarabes o inhalaciones y formas de liberación controlada de los mismos. En otra modalidad, la composición farmacéutica comprende clorotoxina o derivados de la misma en combinación con al menos una forma de liberación sostenida del agente quimioterapéutica . En dichas formulaciones, la clorotoxina o derivados de la misma serán distribuidas en todo el cuerpo, antes de la liberación de los agentes quimioterapéuticos, considerando el enlace de la clorotoxina a las células de cáncer antes del enlace del agente quimioterapéutico a las células cancerosas. A partir de la liberación retardada del agente quimioterapéutico de dicha formulación, y de la distribución subsecuente en el sitio de las células cancerosas, los efectos del agente quimioterapéutico pueden ser mejorados por el enlace precoz de la clorotoxina a las células cancerosas . Dicha forma de liberación retardada puede tener el mismo efecto que la administración secuencial de clorotoxina seguida por uno o más agentes quimioterapéuticos . Clorotoxina y Derivados de Clorotoxina Marcados La invención también incluye clorotoxinas o derivados de la misma marcadas isotópicamente, en los que uno o más átomos han sido ' reemplazados por un átomo que tiene un número atómico o masa atómica diferentes de la masa atómica o número atómico encontrado usualmente en la naturaleza. Ejemplos de isótopos . que se incorporan en los compuestos de la invención incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, flúor, fósforo, yodo, cobre, renio, indio, itrio, tecnecio y lutectio (es decir, 3H, 1C, iaF,19F, 31P, 32P, 131I, 125I, 123I, 64Cu, 18¾e, lxlIn, 90Y, 99mTc, 177Lu) . En algunas modalidades, isótopos que son metales (por ejemplo, cobre, renio, indio, itrio, tecnecio y lutectio) están fijados no covalentemente a la clorotoxina o derivados de la misma por quelación. Ejemplos de quelación incluidos en la invención son, la quelación de un isótopo metálico en una región polyHis fusionada a clorotoxina o a un derivado de la misma. Isótopos no metálicos pueden ser fijados covalentemente a clorotoxina o a derivados de la misma usando cualquier medio aceptable. La invención también incluye clorotoxina o derivados de la misma marcada con un metal tal como gadolinio (Gd) . En algunas modalidades, un metal tal como gadolinio es fijado covalentemente a clorotoxina o derivados de la misma por quelación. Ejemplos de quelación incluidos en la invención son la quelación de un metal tal como gadolinio a una región polyHis fusionada a clorotoxina o a derivados de la misma. La clorotoxina y derivados de la misma marcados proporcionados por esta invención son también útiles como radioindicadores para formación de imágenes por tomografia de emisión positrónica (PET) o para tomografia computarizada de emisión de fotones únicos [SPECT) . Los agentes de la presente invención, profármacos de los mismos, y sales de dichos agentes o de dichos fármacos aceptables farmacéuticamente que contienen los isótopos antes mencionados y/o otros isótopos de otros átomos están en el alcance de esta invención. Los isótopos de tritio y carbono-14, son particularmente preferidos por su facilidad de preparación y detectabilidad. Además, la substitución con isótopos más pesados tales como deuterio pueden producir ciertas ventajas terapéuticas que resultan de mayor estabilidad metabólica, por ejemplo vida media in vivo incrementada o requerimientos de dosificación reducida y, por consiguiente pueden ser preferidos en algunas circunstancias. Métodos de Tratamiento Usando la Qumioterapia en Combinación con Clorotoxina Esta invención también incluye métodos para el tratamiento de crecimientos celulares anormales en un mamífero, incluyendo un humano, que comprende administrar al mamífero una cantidad de clorotoxina o derivado de la misma, o una composición farmacéutica que comprende una cantidad de clorotoxina o de un derivado de la misma, que sea efectiva el mejoramiento del efecto de un agente quimioterapéutico (es decir, actúa como un adyuvante para el agente quimioterapéutico) cuando se administra antes de, o subsecuentemente a, un agente quimioterapéutico. En una modalidad de este método, el crecimiento celular anormal es cáncer, incluyendo, pero no limitándose a, cáncer del pulmón, cáncer óseo, cáncer de hígado, cáncer pancreático, cáncer de la piel, cáncer de la cabeza o cuello, melanoma intraocular o cutáneo, cáncer uterino, cáncer ovárico, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de seno, cáncer uterino, carcinoma de las trompas de falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cérvix, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, Enfermedad de Hodgkin, cáncer del esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma del tejido blando, cáncer de la uretra, cáncer del pene, cáncer de la próstata, leucemia aguda o crónica, linfornas linfociticos, cáncer de la vejiga, cáncer del riñon, o uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal, neoplasmas del sistema nervioso central (CNS) , cáncer neuroectodérmico, tumores del eje espinal, glioma, meningioma y adenoma pituitario, o una combinación de uno o más de los cánceres antes mencionados. En otra modalidad de dicho método, el crecimiento celular anormal es una enfermedad proliferativa benigna, incluyendo pero no limitándose a, psoriasis, hiperplasia prostática benigna, hipertrofia o restinosis . Esta invención también incluye métodos para el tratamiento del crecimiento celular anormal en un mamífero que comprende administrar al mamífero, incluyendo un humano, una composición farmacéutica que comprende una cantidad de clorotoxina o de un derivado de clorotoxina y uno o más agentes quimioterapéuticos, que sea efectiva para mejorar los efectos del agente quimioterapéutico en la inhibición del crecimiento celular anormal. Esto incluye el crecimiento y/o la proliferación anormal de células de cáncer que incluyen células benignas y malignas de enfermedades neoplásticas. La inhibición del crecimiento celular anormal puede tener lugar por medio de una variedad de mecanismos que incluyen, pero no se limitan a, muerte celular, apoptosis, inhibición de la división celular, transcripción, traslación, transducción, etc. Como se discutió anteriormente, la clorotoxina y derivados de la misma pueden ser suministrados en combinación, o en combinación secuencial con otros agentes quimioterapéuticos que sean útiles para el tratamiento del crecimiento celular anormal (por ejemplo, cáncer) . Como se usa en la presente, se dice que dos agentes son para se administrados en combinación cuando los dos agentes son administrados simultáneamente o son administrados independientemente en un estilo tal que los agentes actuarán al mismos tiempo. Por ejemplo, la clorotoxina o derivados de clorotoxina pueden ser usados en combinación con uno o más agentes quimioterapéuticos seleccionados de los siguientes tipos de agentes quimioterapéuticos que incluyen pero no se limitan a, inhibidores mitóticos, agentes alquilantes, anti-metabolitos , antibióticos intercalantes, inhibidores del factor del crecimiento, inhibidores del ciclo celular, enzimas, inhibidores de topoisomerasa, modificadores de la respuesta biológica, anti-hormonas, y anti-andrógenos. Los ejemplos de agentes alquilamtes incluyen, pero no se limitan a, carmustlna, lomustina, ciclofosfamida, ifosfamida, mecloretamina y estreptoxotocina. Ejemplos de antibióticos incluyen, pero no se limitan a, bleomicina, dactinomicina, daunorubicina, doxorubicina, idarubicina y plicamisina. Ejemplos de anti-metabolitos incluyen, pero no se limitan a, citarabina, fludarabina, 5-fluorouracilo, 6- mercaptopurina, metotrexato y 6- tioguanina. Ejemplos de inhibidores mitóticos incluyen, pero no se limitan a, navelbina, paclitaxel, vinblastina y vincristina. Ejemplos de hormonas esteroides y anti-andrógenos incluyen, pero no se limitan a, aminoglutetimidas, estrógenos, flutamida, goserelina, leuprolida, prednisona y tamoxifeno. Ejemplos de formulaciones farmacéuticas de los agentes quimioterapéuticos anteriores incluyen, pero no se limitan a BC U (es decir, carmustina, 1, 3- bis (2-cloroetil)- 1- nitrosurea, BiC U®, cisplatina (cis-platinum, cis- diaminadicloroplatino, Platinol®) , doxorubicina, (hidroxil daunorubicina, Adriamicina®) , gemcitabina (difluorodesoxicitidina, Gemzar®) , hidroxiurea (hidroxicarbamida, Hydrea®) , paclitaxel (Taxol®, temozolomida (TMZ, Temodar®, topotecano (Hycamtin®, fluorouracilo (5- fluorouracil, 5-FU, Adrucil®, vincristina (VCR, Oncovin y vinblastina (Velbe o VeIban®) . En la práctica de los métodos de esta invención, la clorotoxina o derivados de la misma pueden ser usados solos o en combinación con otros agentes terapéuticos o de diagnóstico. En ciertas modalidades preferidas, la clorotoxina o derivados de la misma pueden ser coadministrados junto con otros agentes quimioterapéuticos típicamente prescritos para varios tipos de cáncer de conformidad con la práctica médica de oncología aceptada generalmente. Las composiciones de esta invención pueden ser utilizadas in vivo, ordinariamente en mamíferos, tales como humanos, ovejas, caballos, vacas, cerdos, perros, gatos, ratas y ratones o in vltro. La invención es particularmente útil en el tratamiento de sujetos humanos.

Métodos de Tratamiento Usando Clorotoxina en Combinación con Radiación La invención incluye un método terapéutico que comprende la administración de clorotoxina o de un derivado de la misma en combinación con la terapia de radiación para el tratamiento de enfermedades asociadas con el crecimiento celular anormal, tal como cáncer. En particular, la terapia está diseñada para inducir apoptosis (muerte celular) en células de cáncer, aunque se contempla también reducir la incidencia o el número de metástasis, y reducir el tamaño del tumor. La resistencia de las células tumorales a los agentes radioterapéuticos representa un problema importante en oncología clínica. Así, en el contexto de la presente invención, se contempla también que la terapia en combinación con clorotoxina, podría usarse sobre tumores resistentes a la radiación para mejorar la eficiencia de la terapia de radiación. Como se discutió anteriormente, la invención incluye un método de tratar cáncer que comprende administrar a un mamífero con cáncer una cantidad de clorotoxina o de un derivado de la misma en combinación con radiación ionizante, ambos en dosis suficiente que, cuando se combinan, se induce la muerte de células cancerosas . En una modalidad, la presencia de clorotoxina reduce la cantidad de radiación requerida para tratar el cáncer cuando se compara con el tratamiento de radiación solo. La clorotoxina o derivados de la misma pueden ser suministradas antes de la radiación, después de la radiación o concurrentemente con ésta. La radiación que causa daño al DNA se ha usado extensivamente e incluye medios que son comúnmente conocidos como rayos gama, rayos X, (por ejemplo, radiación de haz externo generada por un acelerador lineal) , y la liberación de radioisótopos dirigida a células tumorales. Es más probable que todos estos factores efectúen un amplio intervalo de daños sobre el DNA, sobre los precursores de DNA, sobre la replicación del DNA, y sobre el montaje y el mantenimiento de los cromosomas. Para el tratamiento de radiación de haz externo en combinación con clorotoxina, el tratamiento se da usualmente como un tratamiento por dia. Ocasionalmente se darán dos tratamientos por dia, cuando se ha omitido un dia, o con ciertas indicaciones para la terapia del cáncer. Los intervalos de dosificación estándares de aproximadamente 1.8 Gy a aproximadamente 2.0 Gy por dia, con dosis semanales que varían desde aproximadamente 9 Gy a aproximadamente 10 Gy por semana. El tratamiento se da usualmente cinco días por semana con dos días de suspensión para recuperar el tiempo de la semana precedente de tratamiento. Métodos de Diagnóstico Usando Clorotoxina La invención incluye métodos de diagnóstico para la determinación de la presencia y la localización de crecimiento celular anormal en un órgano o área corporal de un paciente. En una modalidad de este método, el crecimiento celular anormal es cáncer, que incluye, pero no se limita a, cáncer del pulmón, cáncer óseo, cáncer de hígado, cáncer pancreático, cáncer de la piel, cáncer de la cabeza o cuello, melanoma intraocular o cutáneo, cáncer uterino, cáncer ovárico, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de seno, cáncer uterino, carcinoma de las trompas de falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cérvix, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, Enfermedad de Hodgkin, cáncer del esófago,, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma del tejido blando, cáncer de la uretra, cáncer del pene, cáncer de la próstata, leucemia aguda o crónica, linfornas linfociticos, cáncer ' de la vejiga, cáncer del riñon o uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal, neoplasmas del sistema nervioso central (CNS) , cáncer neuroectodérmico, tumores del eje espinal, glioma, meningioma y adenoma pituitario, o una combinación de uno o más de los cánceres anteriormente mencionados . Los métodos de la presente comprenden la administración de una cantidad detectable de una composición que comprende una cantidad detectable de clorotoxina o de un derivado de la misma a un paciente. Como se usa en la presente, el término "cantidad detectable", se refiere a la cantidad de clorotoxina o derivado de la misma marcada administrada a un paciente que sea suficiente para facilitar la detección del enlace de la clorotoxina o derivado de la misma marcada a una o más células anormales incluyendo células de cáncer maligno en un tumor. Como se usa en la presente, el término "cantidad efectiva para la formación de imágenes", se refiere a la cantidad de la clorotoxina o derivados de la misma marcada, administrada a un paciente, que sea suficiente para facilitar la formación de imágenes de enlace del a clorotoxina marcada o derivados d ela misma a una o más células anormales incluyendo células de cáncer maligno en un tumor. La invención emplea clorotoxinas o derivados de la misma marcados isotópicamente, los cuales conjuntamente con técnicas de formación de imágenes neuronales no invasivas tales como la espectroscopia de resonancia magnética nuclear (MRS) o de formación de imágenes (MRI) , o formación de imágenes gama tal es como tomografia de emisión de positrón (PET) o tomografia computarizada de emisión de fotones únicos (SPECT) , se usan para identificar y cuantificar células anormales in vivo incluyendo células malignas en tumores. El término "in vitro imaging" se refiere a cualquier método que permita la detección de clorotoxina o de un derivado de la misma marcada como se describió posteriormente. Para la formación de imágenes gama, la radiación emitida desde el tumor o área que es examinada es medida y expresada ya sea como enlace total, o como una proporción en la cual el enlace total en un tejido es normalizado a (por ejemplo, dividido entre) el enlace total en otro tejido o el cuerpo completo del mismo sujeto durante el mismos procedimiento de formación de imágenes in vivo. El enlace total in vivo se define como la señal completa detectada en un tumor o tejido por medio de una técnica de formación de imágenes in vivo sin la necesidad de corrección por medio de una segunda inyección de una cantidad idéntica de compuesto marcado junto con un gran exceso de compuesto idéntico químicamente pero sin marcar. Como se usa en la presente, el término "sujeto" o "paciente" se refiere a un mamífero, preferiblemente un humano, y más preferiblemente un humano sospechoso de tener células anormales, incluyendo células malignas en un tumor. Para propósitos de formación de imágenes in vivo, el tipo de instrumento de detección disponible es un factor importante al seleccionar un marcador dado. Por ejemplo, isótopos radioactivos son particularmente adecuados para formar imágenes in vivo en los métodos de la presente invención. El tipo de instrumento usado dirigirá la selección del radioisótopo. Por ejemplo, el radioisótopo seleccionado debe de tener un tipo de decadencia detectable por un tipo de instrumento dado. Otra consideración concierne a la vida media del radioisótopo. La vida media sería suficientemente prolongada de modo que sea aún detectable en el momento de la captación máxima por el objetivo, pero suficientemente corto de modo que el huésped no sostenga radiación perjudicial. La clorotoxina o el derivado de la misma marcada isotópicamente, puede ser detectada usando la formación de imágenes gama en donde es detectada la irradiación gama emitida de la longitud de onda apropiada. Los métodos de formación de imágenes gama incluyen, pero no se limitan a, formación de imágenes tomografia de emisión de positrones (PET) o por tomografia computerizada por emisión de fotones únicos (SPECT) . Preferiblemente, para detección por SPECT, el radiomarcador seleccionado carecerá de emisión en forma de partículas, pero producirá un gran número de fotones. Para detección por PET, el radiomarcador será un radioisótopo emisor de positrones el cual será detectado por la cámara de PET. En la presente invención, la clorotoxina o los derivados de la misma son elaborados de modo que sean útiles para la detección y la formación de imágenes de tumores in vivo. Estos compuestos son para ser usados conjuntamente con técnicas de neuro formación de imágenes no invasivas tal como espectroscopia de resonancia magnética nuclear (MRS) o formación de imágenes (MRI) , tomografia de emisión de positrones (PET) , y tomografia computarizada de emisión de fotones únicos (SPECT) . De conformidad con esta invención, la clorotoxina o los derivados de la misma pueden ser marcados con un radioisótopo aceptable descrito anteriormente por medio de técnicas de química orgánica general conocidas en el arte (ver Marc (1992) Advanced. Organic Chemistry: Reactions, Mechanismos & Structure, Wiley) . La clorotoxina y los derivados de la misma también pueden ser radiomarcados con isótopos de cobre, flúor, carbono, bromo, etc. Para PET por técnicas bien conocidas en el arte y se describen (ver Phelps (1986) Positrón Emission Tomography and Autoradiography, Raven Press páginas 391-450) . La clorotoxina y los derivados de la misma también pueden ser radiomarcados con isótopos aceptables tales como yodo para SPECT por varias técnicas conocidas en el arte (ver ulkarni (1991) Int. J. Rad. Appl. Inst. 18, 647-648) . Por ejemplo, la clorotoxina y los derivados de la misma pueden ser marcados con cualquier isótopo de yodo radioactivo, tal como, pero no se limitan a 131I o 123I por iodación de un derivado amino diazotizado directamente vía ioduro de diazonio (ver Greenbaum (1936) Am. J. Phar . 108, 17- 18), o por conversión de la amina diazotizada inestable al triazeno estable, o por conversión de un precursor halogenado no radioactivo a un derivado de trialquil estaño estable, el cual entonces puede ser convertido al compuesto de iodo por medio de varios métodos bien conocidos en el arte (ver Chumpradit y colaboradores (1991) J. Med. Chem. 34, 877-878 y Zhuang y colaboradores (1994) J. Med. Chem. 37, 1406-1407) . La clorotoxina y los derivados de la misma pueden también ser radiomarcados con radiomarcadores metálicos conocidos, tales como 6Cu o 99mTc. La modificación de los substituyentes para introducir ligandos que enlacen a dichos iones metálicos puede ser efectuada por un experto en el arte de radiomarcado sin experimentación indebida incluyendo fijación covalente a una región polyHis en un péptido de clorotoxina modificado o derivado de la misma. La clorotoxina o derivados de la misma radiomarcados con metal pueden entonces ser usados para detectar y formar imágenes de tumores. Los métodos de diagnóstico de la presente invención pueden usar isótopos detectables por espectroscopia de resonancia magnética nuclear para propósitos de formación de imágenes in vivo y espectroscopia. Elementos particularmente útiles en espectroscopia de resonancia magnética incluyen, pero no se limitan a 19F y 13C. Radioisótopos adecuados para propósitos de esta invención incluyen emisores-beta, emisores-gama, emisores de positrones y emisores de rayos-X. Estos radioisótopos incluyen, pero no se limitan a, 131I, 123I, 18F, C, 75Br y 6Br.

Isótopos estables adecuados para uso en Formación de Imágenes por Resonancia Magnética (MRI) o Espectroscopia (MRS) , de conformidad con esta invención incluye, pero no se limita a, 19F y 13C. Radioisótopos adecuados para identificación in vitro y cuantificación de células anormales que incluyen células tumorales, en una biopsia de tejido o de tejido post-morten incluyen 125I, 14C y 3H. Los radiomarcado es preferidos son 64Cu o 18F para uso en la formación de imágenes in vivo por PET, 123I o 131I para uso en formación de imágenes por SPECT in vivo, 19F para MRS y MRI y 3H o 1 C para métodos in vitro. No obstante, cualquier método convencional para visualizar sondas de diagnóstico puede ser utilizado de conformidad con esta invención. Generalmente, la dosificación de la clorotoxina y derivados de la misma marcados isotópicamente, variará dependiendo de consideraciones tales como la edad, condición, sexo, y extensión de la enfermedad en el paciente, contra indicaciones, si las hay, terapias concomitantes y otras variables, a ser ajustadas por los expertos en la materia. La dosificación puede variar desde 0.001 mg/kg a 1000 mg/kg, preferiblemente de 0.1 mg/kg a 100 mg/kg. La administración al paciente puede ser local o generalizada y lograda, intravenosa, intra-arterial, intra raquídea (vía el fluido espinal) , intra-craneal o los similares. La administración puede también ser intra-dérmica o intra-cavitaria, dependiendo del sitio del cuerpo bajo examen. Después de transcurrido un tiempo suficiente para que la clorotoxina o derivados de la misma enlacen con las células anormales, por ejemplo treinta minutos a cuarenta y ocho horas, el área del sujeto bajo investigación es examinada por medio de técnicas de formación de imágenes de rutina tales como MRS/MRI, SPECT, formación de imágenes por centelleo planar, PET, y técnicas de formación de imágenes emergentes, también. El protocolo exacto necesariamente variará dependiendo de factores específicos al paciente, como * se hizo notar anteriormente, y dependiendo del sitio corporal bajo examen, método de administración y tipo de marcador usado; la determinación de procedimientos específicos seria de rutina para los expertos en la materia. Para formación de imágenes cerebrales, preferiblemente la cantidad (enlace específico o total) de la clorotoxina o derivados de la misma marcados isotópicamente enlazados se mide y se compara (como una proporción) con la cantidad de clorotoxina o derivados de la misma marcados isotópicamente enlazados al cerebelo del paciente. Esta proporción es entonces comparada a la misma proporción en cerebro normal de edad pareja.

Sin descripción adicional, se cree que un experto en la materia puede, usando la descripción precedente y los siguientes ejemplos ilustrativos, elaborar y utilizar los compuestos de la presente invención y practicar los métodos reclamados. Los siguientes ejemplos de trabajo describen modalidades de la presente invención, y no fueron construidos como limitantes en manera alguna del resto de la descripción Ejemplo 1 Determinación de la Actividad del Agente Qumioterapéutico in vitro Se optimizó un método de cultivo de tejido para probar los efectos de varios agentes quimioterapéuticos sobre múltiples lineas celulares de cáncer (ver la Tabla 1) . Se plaquearon las células en placas de cultivo de tejido para microtitulo de 96 pocilios a una densidad de aproximadamente 1000-2000 células por pocilio, dependiendo de la linea celular especifica. Las células se dejaron adherir veinticuatro horas en una incubadora para cultivo celular humidificada, a 37 °C, provisto con cinco por ciento de dióxido de carbono . A fin de lograr una curva de respuesta a la dosis para cada fármaco en cada linea celular, las células se trataron con concentraciones decrecientes de un compuesto citotóxico especifico por dos a cinco dias. Después de tratamiento, se cuantificó el efecto citotóxico del fármaco usando el Equipo de Conteo Celular (Cell ' Counting Kit-8 (CC -8)} [Dojindo Inc.) de conformidad con las instrucciones del fabricante. En resumen, siguiendo el ' periodo de tratamiento con el fármaco citotóxico, las células fueron incubadas con el reactivo del CCK-8 y se incubaron a 37 °C por una a 4 horas, dependiendo del tipo celular especifico. Después de incubación, se leyeron las placas en un lector de microplacas a una longitud de onda de 490 nM. Se calculó el IC50 de cada fármaco desde una gráfica de dispersión X-Y de la concentración logarítmica negativa del fármaco versus la densidad óptica media (Tabla 2) Tabla 2. Designación, Fuente y Origen del Tejido de la Linea Celular Designación Fuente de la Origen del Tejido celular Línea Celular D54-MG Glioblastoma multiforme humano U251-MG Glioblastoma multiforme humano SKMEL28 ATCC (HTB-72) Melanoma maligno humano SKMEL31 ATCC (HTB-73} Melanoma maligno humano PC-3 ATCC (CRIi- Tumor de próstata 1435) humano LNCaP ATCC (CRL-- Tumor de próstata 1740) humano NCI-H187 ATCC (CRL- Carcinoma de pulmón 5804) de células pequeñas humano Tabla 3. ICso de Agentes Quimioterapéuticos en Múltiples Lineas Celulares Ejemplo 2 Efecto de Clorotoxina sobre la Actividad del Agente Qumioterapéutico in vitro Para la medición del efecto farmacológico de clorotoxina sobre agentes quimioterapéuticos, se empleó la metodología de cultivo celular del Ejemplo 1 con las modificaciones siguientes: una concentración del agente quimioterapéutico próximo al IC50 pero justamente inferior que el usado en cada ensayo. Varias cantidades de clorotoxina fueron entonces tituladas en combinación con una concentración de agente quimioterapéutico cerca o inferior a su IC50 y el efecto de clorotoxina sobre los efectos citotóxicos del agente quimioterapéutico medido dos a tres días después de la administración. La concentración de clorotoxina empleada en este ensayo varió de concentraciones micromolares descencentemente a nanomolares . El efecto de añadir clorotoxina en combinación con Temodar sobre la proliferación de células D54-MG se muestra en la Figura 1. El nivel de Temodar usado en este experimento (0.050 mM) es aproximadamente treinta veces inferior a la concentración necesaria para matar estas células y producir un valor de densidad óptica inferior (ver la Tabla 2) . La clorotoxina sola (TM-601) sola no tuvo efecto sobre el crecimiento celular. La clorotoxina cuando se añadió al mismo tiempo que el Temodar no produjo algún efecto pero cuando la clorotoxina se añadió veinticuatro horas antes de Temodar, una concentración de 0.050 mM de Temodar redujo la proliferación celular equivalente a un nivel usualmente observado con una concentración de treinta veces más alta de Temodar. Estos resultados demuestran que la administración de clorotoxina, antes de administración de Temodar, sensibilizó células cancerosas a los efectos de Temodar. Ejemplo 3 Efecto de la Clorotoxina sobre la Actividad del Agente Terapútico in vivo El propósito de este estudio fue determinar si hidroxiurea o Temodar combinados con clorotoxina fueron suficientes para inhibir el crecimiento de tumor como se indica desde estudios in vitro con lineas celulares de glioma. Otros estudios indicaron que la clorotoxina, pre-incubada con lineas celulares de cáncer humano, muy sensibilizadas las células al Temodar, un quimioterapéutico, agente letal para las células tumorales. El tratamiento en combinación con clorotoxina con hidroxiurea o temodar en ratones con tumor lateral en glioma se comparó con el grupo de tratamiento de hidroxiurea o temodar solos y solución salina sola. La dosificación de hidroxiurea y temodar se basó en la dosificación inferior (10 mg/kg de peso corporal) usada en estudios previos para determinar la eliminación del cuerpo en el tratamiento de modelos de enfermedades por células falciformes en ratones desnudos (Iyamu y colaboradores (2001) Chemotherapy 47, 270-278) . Ratones desnudos que fueron marcados en la oreja y a los que se les dio un número de identificación, fueron inoculados con cinco millones de células de glioma TJ251 en 0.10 mi de mezcla con cinco por ciento de metil celulosa bajo ligera anestesia de conformidad con procedimientos de operación estándares para inoculaciones en tumor lateral (Iyamu y colaboradores (2001) Chemotherapy 47, 270-278) . Los tumores laterales se desarrollaron y estuvieron bien establecidos aproximadamente treinta días después de inoculación. Los ratones con tumores laterales establecidos fueron tratados cada uno con 0.100 mi de inyección (i.p.) de soluciones esterilizadas que consistieron ya sea de solución salina, solución salida y Temodar (13.2 mg/kg de peso corporal) , o solución salina, hidroxiurea o Temodar (13.2 mg/kg) y clorotoxina (0.080 mg/kg de peso corporal). Se calculó el volumen del tumor con base en las mediciones con el mismo grupo de calibradores en los días indicados para determinar el largo x el ancho x la altura del tumor de ratones no anestesiados. Como cada animal tuvo tumores de tamaño diferentes al comienzo del experimento, los datos se presentan en la forma final como cambio en porcentaje del crecimiento de tumor desde la fecha inicial del protocolo de inyección. Se determinó el significado estadístico de conformidad con una prueba AOVA de una sola via. A un nivel en donde el Temodar solo tuvo poco efecto sobre el crecimiento del tumor xenoinjertado, el Temodar combinado con clorotoxina disminuyó dramáticamente el crecimiento del tumor (Figura 2) . Como se mencionó anteriormente, la eficiencia de la hidroxiurea combinada con clorotoxina fue también evaluada en el mismo modelo de tumor lateral de ratón con la excepción de que las células de glioma D54 fueron usadas para establecer el tumor lateral del glioma. Los ratones tratados con clorotoxina en combinación con hidroxiurea tuvieron tumores significativamente (p = 0.01 en el dia 29 y p = 0.005 en el dia 32) más pequeños de tamaño que los ratones tratados con ya sea hidroxiurea sola o solución salina sola lo que indica que la clorotoxina en combinación con hidroxiurea redujo el crecimiento del tumor significativamente más que la hidroxiurea sola (Figura 3) . Ejemplo 4 Estudios de Formación de Imágenes con Clorotoxina Marcada El siguiente procedimiento ilustrativo puede ser utilizado cuando se efectúan estudios de formación de imágenes por PET en pacientes en la clínica. Se deja al paciente en ayunas por al menos 20 horas, dejándolo ingerir agua ad libitum y es premedicado con 0.3 - 0.4 mi de Acepromazina inyectada intra muscularmente en el dia del experimento. Para las mediciones día 20, se insertó un catéter intravenoso de 5.08 cía (2 pulgadas) en la vena cubital contra lateral para administración de clorotoxina radiomarcada. Se colocaron los pacientes en la cámara de PET y una dosis de indicador de [1S0]¾0 es administrada vía el catéter intravenoso . La imagen asi obtenida es usada para asegurar que el paciente sea colocado correctamente para incluir la imagen completa de las áreas que incluyen el tumor deseadas. Después de la adquisición de la imagen con radioindicador total, se comenzó una infusión de la clorotoxina radiomarcada, la cual es evaluada a velocidades de dosis múltiples (0.1, 1.0 o 10 mpk/dia) . Después de infusión por dos horas, la clorotoxina radiomarcada con [64Cu] se comenzó a inyectar vía el catéter. Se comenzó a adquirir imágenes por hasta noventa minutos. En diez minutos de la inyección de radioindicador y al final de la sesión de formación de imágenes, se obtuvieron muestras de 1.0 mi para determinar la concentración plasmática de la clorotoxina radiomarcada. Ejemplo 5 Se plaquearon células de glioblastoma D54 a una densidad de aproximadamente 1000 células/pocilio en una placa.de fondo plano de 96 pocilios y se incubaron en C02 al 5 % a 37 °C. Después de veinticuatro horas se añadió clorotoxina a diluciones limitantes de 1:4 hasta una concentración final de 20, 5, 1.25, 0.313, 0.078, 0.0195, 0.0049, 0.0012, 0.00031 o 0.00008 nM. Las células control recibieron solamente el vehículo. Veinticuatro horas después del tratamiento, se cuantificó el efecto de la clorotoxina usando substrato enzimático mitocondrial MTT con el Equipo-8 para Conteo Celular (CC -8) (Dojindo Inc.) de conformidad con las instrucciones del fabricante. Resumiendo, después del período de tratamiento con clorotoxina, se incubaron las células con el reactivo CCK-8. Después de incubación, se leyeron las placas en un lector para microplacas a una longitud de onda de 490 nm, con la mayor absorbancia que indica la mayor viabilidad celular. La Figura 4 muestra que la incubación con clorotoxina inhibió la proliferación de las células D54 a todas las concentraciones probadas bajando hasta 0.00120 nM como se pone en evidencia por el número más bajo de células viables/pocilio versus control con PBS. Ejemplo 6 Se plaquearon células de glioblastona D54 a una densidad de aproximadamente 1000 células/pocilio en una placa de fondo plano de 96 pocilios y se incubaron en C02 al 5 % a 37 °C. Después de veinticuatro horas se añadió la clorotoxina a diluciones limitantes de 1:4 hasta una concentración final (en nM) de 20, 5, 1.25, 0.313, 0.78, 0.02, 0.0049, 0.0012, 0.0003, o 0.00008. Las células control recibieron solamente el vehículo. Después de veinticuatro horas, la mitad de las células fueron liberadas de la clorotoxina por lavado, el medio se reemplazó con medio recientemente preparado. Las células en ambas condiciones, dejadas con clorotoxina y con la clorotoxina removida, fueron incubadas por cuatro dias adicionales . Después de incubación, el efecto de la clorotoxina fue cuantificado usando el substrato enzimático mitocondrial MTT con el CCK-8 como en el Ejemplo 1. La Figura 5, muestra que el periodo prolongado de incubación permitió que las células superaran los efectos de la clorotoxina con los dias adicionales de proliferación y la clorotoxina no pareció inhibir la proliferación celular en este caso. Ejemplo 7 Se plaquearon células de cáncer de próstata a una densidad de aproximadamente 1000 células/pocilio en una placa de fondo plano de 96 pocilios y se incubaron en C02 al 5 % a 37 °C. después de veinticuatro horas se añadió la clorotoxina a diluciones limitantes de 1:2 hasta una concentración final (nM] de 20, 10, 5, 2.5, 1.25, 0.625, 0.313, 0.156, 0.078, y 0.039. Las células control recibieron solamente PBS como vehículo . Veinticuatro horas después del tratamiento, se cuantificó el efecto de la clorotoxina usando el substrato enzimático mitocondrial MTT con el CCK-8 del Ejemplo 1. La Figura 6, muestra que la incubación de la clorotoxina inhibió la proliferación de las células D54 a todas las concentraciones probadas como se pone en evidencia por el número más bajo de células viables versus el control con PBS. Ejemplo 8 Tres grupos de ocho ratones atimicos recibieron una inyección subcutánea de 5 x 107 células de glioblastoma D54 humanas en su lado derecho para producir xenoinj ertos laterales de glioma humano en estos ratones. Los animales de los Grupos I y III recibieron 2.6 g de clorotoxina (SEC ID NO: 1) en 100 µ? de solución salina regulada con fosfato intravenosamente a 14, 21, 28, 35, 42 y 49 días después de la inyección de D54. Los animales en los Grupos II y III recibieron irradiación de cuerpo completo de 2 Gy de S0C a 15, 22, 29, 36, 43 y 50 dias después de la inyección de D5 . El tamaño del tumor se medió tres veces por semana y se expone en la Figura 7. Ejemplo 9 Se establecieron xenoin ertos de glioma D54MG intracraneales en ratones desnudos atimicos por medio de la implantación de 1 X 106 células de D54MG en el cerebro de cada sujeto. Se comenzó un régimen de tratamiento 14 dias post implantación con inyección intravenosa en la nena de la cola dos veces por semana. Al grupo control de siete ratones se les administró solamente el vehículo de solución salina. A un segundo grupo de ratones, que comprende ocho animales, se les administró a cada uno una dosis baja de clorotoxina de 0.2 pg/dosis y a un tercer grupo de ratones, que comprende ocho animales, se les administró una dosis alta de clorotoxina de 2.0 pg/dosis. Se siguió a los animales hasta la muerte y el tiempo de superviviencia fue grafxcado sobre una gráfica de Kaplan-Meier, indicando la superviviencia media (Figura 8) . Estos resultados indican que el tratamiento con clorotoxina sola extendió substancialmente la vida de un sujeto en un modelo intracraneal y que esta supervivencia mejorada puede ser dependiente de la dosis. Es notable que la administración de clorotoxina fue intravenosa, demostrando que la clorotoxina atraviesa la barrera sangre-cerebro para ejercer su efecto. Ejemplo 10 En una investigación separada, se establecieron periféricamente xenoinjertos de glioma D54MG por implantación de 10 x 106 células D54MG en los flancos de ratones desnudos atímicos. Los tumores fueron palpables en 14 días, con volúmenes individuales de tumor de aproximadamente 43 mm3. De nuevo, el régimen de tratamiento se comenzó 14 días post implantación con inyecciones intravenosas en la vena de la cola dos veces por semana. Al grupo control de siete ratones se les administró solamente el vehículo de solución salina. A un segundo grupo de ratones, que comprende 8 animales, se les administró a cada uno una dosis baja de clorotoxina de 0.2 µg/dosis . Se midió el tamaño del tumor en el momento de cada inyección, y se gráfico como un por ciento del tamaño original del tumor (Figura 9) . Se finalizó el tratamiento intravenoso a los 42 dias y las mediciones de los tumores se continuaron por varias semanas. Estos resultados demuestran que la clorotoxina sola a bajas dosis puede disminuir dramáticamente el crecimiento del tumor en este modelo de flanco . Ejemplo 11 Para identificar secuencias de clorotoxina de sitio de enlace central veintisiete derivadas de la SEC ID NO: 1 de 10-mers sobrepuestas, fueron sintetizadas, iniciadas desde el C-terminus del péptido como se indica en la Figura 10. Cada péptido tuvo una biotina fijada en el terminus amino para facilitar la detección y cada residuo cisterna fue reemplazado con uno serina a fin de prevenir la reticulación. El enlace de los péptidos de 10-mers a células de cáncer de próstata PC3 in vitro se midió por incubación de células PC3 cultivadas con péptidos individuales . Se detectó el enlace y se cuantificó por incubación de las células expuestas al péptido con HRP-avidina usando un equipo comercial de conformidad con las instrucciones del fabricante. La Figura 11 muestra que el péptido 4 de 10-itier de la SEC ID NO: 1 no enlazó a PC3, lo que indica que el residuo lisina que inicia el péptido 5 debe de ser el inicio del sitio de enlace. Los péptidos 5 - 8 enlazaron, pero el enlace se perdió en el péptido 9. Esto sugiere que el residuo tirosina es otro clave, ya que está presente en el péptido 8 pero se perdió en el péptido 9. Esto indica que una primera región de enlace de clorotoxina reside en la secuencia de 7-mer KGRG SY (SEC ID NO: 8) residiendo en los residuos de los aminoácidos 23-29 de la SEC ID NO: 1 que son comunes en los péptidos 5 - 8. La Figura 12, muestra que el péptido 19 de la SEC ID NO: 1 no enlaza a células PC3 pero el péptido 20 lo hace, indicando que el residuo treonina que inicia el péptido 20 puede ser el inicio de un segundo sitio de enlace porque los péptidos 20 - 24 enlazan más fuertemente. El enlace disminuye otra vez en el péptido 25, lo que sugiere que el residuo arginina terminal del péptido 24 es otro clave, ya que éste está presente en el péptido 24 pero perdido en el péptido 25. Esto indica que una segunda región de enlace de clorotoxina reside en la secuencia de 9-mer TDHQM¾R (SEC ID NO: 9) residiendo en los residuos de los aminoácidos 8 - 14 de la SEC ID NO: 1 mientras que son comunes en los péptidos 20-2 . el enlace en esta segunda secuencia central es más amplio, lo cual puede ser un reflejo de aminoácidos muy similares presentes en los extremos de la región. Por ejemplo, hay dos residuos treonina en los péptidos 20 y 21, y hay uno lisina en el extremo del péptido 22 próximo al residuo arginina. Ejemplo 12 Para determinar la actividad ín vivo de estas regiones de enlace identificadas, loa péptidos de 10-mer 5 (residuos de los aminoácidos 23-32), 12 (residuos de aminoácidos 16-25; como un control negativo) y 21 (residuos de los aminoácidos 7 - 16) de la SEC ID NO: 1, fueron usados en ensayo de parálisis de cangrejos, un ensayo en el cual comúnmente se usa la clorotoxina para determinar la bioactividad de la clorotoxina (ver DeBin y colaboradores (1993) . J. Physiol. 264, C361-369) . Los péptidos 5 y 12 fallaron en paralizar cangrejos, mientras que el péptido 21 fue efectivo indicando que el sitio que es responsable del efecto paralitico de la clorotoxina es la región definida por el péptido 21. Adicionalmente, varios de los derivados de clorotoxina fueron cada uno analizado en el ensayo de cangrejos y se compararon con los de clorotoxina (Tabla 4) . Cada uno de estos derivados comprende los aminoácidos finales putativos, el T y el R en la secuencia, correspondientes al péptido 21. Tabla 4 La clorotoxina es un péptido de 36 aminoácidos con 8 cisteinasr expuesto posteriormente en tipo negrilla con las secuencias del péptido número 8 (péptido de región beta) y del péptido número 21 (péptido de región alfa) identificado usando los 10-mer sobrepuestos en el Ejemplo 12 subrayado a continuación: MCMPCFTTDHQMAR CDDCCGG-KGRCKCYGPQOLC (SEC ID NO: 1) A fin de confirmar la identificación de las secuencias de enlace minimo en los péptidos alfa y beta, los péptidos completos se sintetizaron como uno de 10-mer con una bioteina en el termxnus amino asi como también secuencias más cortas que reducen el tamaño del péptido por un aminoácido en el termxnus amino cada vez. Para el péptido beta, las secuencias del péptido 8 observado en la Tabla 5, se evaluaron y sondearon para enlace a células de glioma U251 : Para el péptido alfa, las secuencias del péptido 21 observadas en la Tabla 6, fueron evaluadas y sondeadas para enlace a células de glioma U251: Tabla 6 Péptido Secuencia 21 Biotina -TTDHQMARKS (SEC ID NO : 82 } 21a Biotina -TDHQ ARKS (SEC ID NO : 10) 21b Biotina -DHQM&RKS (SEC ID NO: 83 ) 21c Biotina - HQ ARKS (SBC ID NO : 84) 21d Biotina -QMARKS (SEC ID NO: 85) Los resultados demostraron que el residuo treonina inicial del péptido de región alfa es perjudicial al enlace pero que la segunda treonina es crucial para el enlace. Se descubrió también que ninguno de los péptidos más pequeños exhibe enlace tan fuerte como el de 9-mer del péptido 21a. Ejemplo 14 Para determinar la contribución de cada residuo a las propiedades de enlace del péptido alfa, las variantes de exploración de alanina fueron sintetizadas por reemplazo de cada aminoácido del otro péptido de 9-mer TDHQMARKS (SEC ID NO: 10) secuencialmente como se expone en la Tabla 7. El péptido 21, el de 9-mer central nativo, y cada péptido de 9-mer substituido con alanina fue sintetizado con una biotina en el terminus amino y se evaluó por su enlace versus células U251 y PC3 (Figura 13) .

Tabla 7 Péptido Secuencia 21 Biotina -TTDHQ AR S (SEC ID NO: 82) 21a Biotina -TDHQMARKS (SEC ID NO: 10) 21a-Al Biotina -ADHQMARKS (SEO ID NO: 86) 21a-A2 : Biotina -T IQ ARKS (SEC ID NO: 87} 21a-A3 Biotina -TDAQMARKS (SEC ID NO: 88.) 21a-A4 Biotina -TDHAMAR S {SBC ID NO: 89) 21a-A5 Biotina -TDHQAARKS (SEC ID NO: 90} 21a-A6 Biotina -TDHQMARKS (SEC ID NO: 10} 21a-A7 Biotina -TDHQ AAKS (SEC ID NO: 91} 21a-A8 Biotina -TDHQMARAS (SEC ID NO: 92) 21a-A9 Biotina -TDHQMARKA {SEC ID NO: 93} Los patrones para el enlace de U251 y PC3 son generalmente similares. El reemplazo del residuo de ácido aspártico (D) en la segunda posición del de 9-mer incrementó el enlace del péptido a las células . Por consiguiente, el péptido TMffiM2¾RKS (SEC ID NO: 11) seria más activo que el péptido progenitor TDHQMARKS (SEC ID NO: 10) . Con base en el enlace del péptido TDHAMARKS, este enlace puede ser igual o mayor que la clorotoxxna misma. Con base en este descubrimiento/ se esperó que un péptido variante de clorotoxxna de la secuencia siguiente pueda ser más fuerte al enlazar que el polipéptido de clorotoxina nativa.

MC PCFTTAHA 2¾-SKCDDCCGG- GRCKCYGPQCliCR (SEC ID NO: 12) Ejemplo 15 A fin de comparar el enlace de toxinas de escorpión corto, las regiones homologas al péptido 21 de toxina pequeña y toxina LQH-8/6 probable fueron sintetizadas y biotiniladas por análisis en el ensayo de enlace de clorotoxina (ver la Tabla 8 para secuencias de aminoácidos de los péptidos) .

Tabla 8 Toxina de Escorpión Péptido 21 Clorotoxina TTDHQMARKS ( SEC ID NO : 82 ) ' Toxina Pequeña TTDPQMSKK (SEC ID NO i 94 ) Toxina LQH-8/6 Probable TTDQQMTK (SEC ID NO : 95 ) Como se muestra en la Figura 14, y de conformidad con resultados previos, la clorotoxina exhibió enlace significativo en células de cáncer de próstata humano PC3 (221.93 % de niveles de fondo] y el péptido 21 enlaza en paralelo que el de la clorotoxina (232.50 % de niveles de fondo) . Adicionalmente, el péptido 21 del péptido de toxina pequeña (21ST) y el péptido 21 de la toxina LQH-8/6 probable (21LQ) demostraron niveles de enlace equivalentes al de la clorotoxina de extensión total y el péptido 21 de la clorotoxina (225.26 % y 242.32 %, respectivamente) . Además, un péptido negativo que contiene los aminoácidos 26-35 de clorotoxina (SEC ID NO: 1) exhibió niveles de enlace comparables a los de fondo (110 %) . Se obtuvieron resultados similares en células de glioblastoma D54 (no se muestran los datos) . Los resultados de este estudio usando el ensayo de enlace de clorotoxina indican que la clorotoxina, el péptido de toxina pequeña, y la toxina LQH-8/6 probable enlazan de manera similar a células de cáncer humano in vitro. La Tabla 9 siguiente resalta los aminoácidos conservados en la región de enlace primario putat (aminoácidos 7- 16) de los tres péptidos de la toxina.

Ejemplo 16 El propósito de este experimento fue determinar si la proliferación de células de Glioblastoma D54MG, que se midió por captación de 3H~timidina/ es efectuada por el Péptido 21, un segmento de la secuencia de clorotoxxna de extensión total. La secuencia del péptido 21 y su relación con la clorotoxxna se muestran en la secuencia siguiente: Cloroíoxina: MCMPCFTTDHQ A CDDCCGGKGRGKCYGPQCLCR Péptido 21: TTDHQMAR {SEC ID NO: 82) Se ha identificado el péptido 21 en otros varios reportes que tienen enlace y actividad biológica comparable a la clorotoxina de extensión total. Células D54MG fueron plaqueadas en una placa de 24 pocilios a 100,000 células /mi/ pocilio usando cinco filas de cuatro pocilios por cada concentración. Se dejaron adherir las células en medio normal por veinticuatro horas a 37 °C y dióxido de carbono al 5 %. Se diluyó TM-701 en una solución madre de 1 nM y se añadió a cada fila a las concentraciones de 0, 20, 80, 160 y 320 nM. Las células y el péptido 21 se dejaron incubar por 24 horas a 37 °C y dióxido de carbono al 5 . Después de veinticuatro horas, se enjuagaron las células dos veces con PBS caliente. Se añadió medio normal a las células a 1 ml/pocillo. Se añadió un µ? de ¾-timidina a cada pocilio (1 µ? de 1 mCi/ml de 3H- timidina a cada pocilio) . La placa se incubó por dos horas a 37 °C. El medio y la timidina se removieron y los pocilios fueron enjuagados tres veces con solución salina regulada con fosfato enfriado sobre hielo. A cada pocilio se añadió 1 mi de NaOH 0.3 N. Se incubó la placa a 37 °C en la incubadora por treinta minutos. Cada pocilio de NaOH 0.3 N se pipeteó y se dejó caer tres a cuatro veces y se removió de la placa y la solución se colocó en frasquitos de centelleo para conteo. Se añadió el fluido de centelleo a cuatro veces la cantidad de muestra a los frasquitos (4 mi) . Cada frasquito se contó sobre el contador por centelleo por un minuto. Los resultados se muestran en la Tabla 10 y la Figura 15. Los datos demuestran que el péptido 21 se comportó similar a la clorotoxina, porque la captación de 3H-timidina disminuye de una manera dependiente de la dosis. Estos datos también indican que el péptido 21 tiene un efecto sobre la síntesis de DNA en estas células.

Tabla 10 [Péptido 21 ] (DM) Captación de 3H-Timidina ± SD (CPM) 0 8645 ± 1218 1218 20 7795 ± 634 634 80 7412 ± 630 630 160 6983 ± 329 329 320 5782 ± 886 ¦ 886 Aunque la presente invención ha sido descrita en detalle con referencia a los ejemplos anteriores, se comprende que pueden hacerse carias modificaciones sin alejarse del espíritu de la invención. Por consiguiente, la invención está limitada solamente por medio de las reivindicaciones. Todas las patentes citadas, solicitudes de patentes y publicaciones mencionadas en esta solicitud se incorporan íntegramente a la presente como referencia.

LISTADO DE SECUENCIAS <110> ALVARE , Vernon L. GRIMES, Carol A. GONDA, Matthew A. <120> QUMIOTERAPIA EN COMBINACIÓN CON CLOROTOXINA <130> 51530-5006-WO <150> ÜS 60/406, 033 <151> 2002-08-27 <150> US 60/384,171 <151> 2002-05-31 <160> 95 <170> Patentin versión 3.2 <210> 1 <211> 36 <212> PRT <213> Lexrurus quinquéstriatus <220> <221> aspecto_misc <223> Clorotoxina <400> 1 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Asp His Gln Met Ala Arg Lys Cys 1 5 10 15 Asp Asp Cys Cys Gly Gly Lys Gly Arg Gly Lys Cys Tyr Gly Pro Gln 20 25 30 Cys Leu Cys Arg 35 <210> 2 <211> 42 <212> PRT <213> Leirurus quinquestriatus <400> 2 His His His His His His Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Asp His 1 5 10 15 Gln Met Ala Arg Lys Cys Asp Asp Cys Cys Gly Gly Lys Gly Arg Gly 20 25 30 Lys Cys Tyr Gly Pro Gln Cys Leu Cys Arg 35 40 <210> 3 <211> 37 <212> PRT <213> Leirurus quinquestriatus <400> 3 Tyr Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Asp His Gln Met Ala Arg Lys 1 5 10 15 Cys Asp Asp Cys Cys Gly Gly Lys Gly Arg Gly Lys Cys Tyr Gly Pro 20 25 30 Gln Cys Leu Cys Arg 35 <210> 4 <211> 39 <212> PRT <213> Leirurus quinquestriatus <400> 4 Tyr Ser Tyr Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Asp His Gln Met Ala 1 5 10 15 Arg Lys Cys Asp Asp Cys Cys Gly Gly Lys Gly Arg Gly Lys Cys Tyr 20 25 30 Gly Pro Gln Cys Leu Cys Arg 35 <210> 5 <211> 36 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Clorotoxina variante <400> 5 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Asp His Gln Met Ala Arg lys Cys 1 . 5 10 15 Asp Asp Cys Cys Gly Gly Lys Gly Arg Gly Lys Cys Phe Gly Pro Gln 20 25 30 Cys Leu Cys Arg 35 <210> 6 <211> 35 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Clorotoxina variante <400> 6 Arg Cys Lys Pro Cys Phe Thr Thr Asp Pro Gln Met Ser Lys Lys Cys 1 5 10 15 Ala Asp Cys Cys Gly Gly Lys Gly Lys Gly lys Cys Tyr Gly Pro Gln 20 25 30 Cys Leu Cys 35 <210> 7 <211> 38 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Clorotoxina variante <400> 7 Arg Cys Ser Pro Cys Phe Thr Thr Asp Gln Gln Met Thr Lys Lys Cys 1 5 10 15 Tyr Asp Cys Cys Gly Gly Lys Gly Lys Gly Lys Cys Tyr Gly Pro Gln 20 25 30 Cys lie Cys Ala Pro Tyr 35 <210> 8 <211> 7 <212> PRT <213> Leiurus quinquestriatus <220> <221> aspecto_misc <223> Derivado de Clorotoxina: residuos de aminoácidos 23-39 <400> 8 Lys Gly Arg Gly Lys Ser Tyr 1 5 <210> 9 <211> 7 <212> PRT <213> Leiurus quinquestriatus <220> <221> aspecto_misc <223> Derivado de Clorotoxina : residuos de aminoácidos 8-14 <400> 9 Thr Asp His Gln Met Ala Arg 1 5 <210> 10 <211> 9 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Péptido alfa de clorotoxina <400> 10 Thr Asp His Gln Met Ala Arg Lys Ser 1 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Variante del péptido alfa de clorotoxina <400> 11 Thr Ala His Ala Met Ala Arg Lys Ser 1 5 <210> 12 <211> 36 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Variante de péptido de clorotoxina <400> 12 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Ala His Ala Met Ala Arg Lys Cys 1 5 10 15 Asp Asp Cys Cys Gly Gly Lys Gly Arg Cys Lys Cys Tyr Gly Pro Gln 20 25 30 Cys Leu Cys Arg 35 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> motivo para derivado de clorotoxina <220> <221> aspecto_misc <222> (1) .. (9) <223> Xaa en posición 3 = Asn o Glu; Xaa en posición 4 = Ala, Arg, Asn, Asp, Cys, Gln, Gly, His, lie, Leu, Lys, Met, Phe, Ser, Thr, Trp, Tyr, o Val; Xaa en posición 5 = Asn o Gln; Xaa en posición 7 = Ser o Thr; Xaa en posición 8 = His, Lys o Arg. <400> 13 Thr Thr Xaa Xaa Xaa Met Xaa Xaa Lys 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Leirurus quinquéstriatus <400> 14 Thr Thr Asp His Gln Met Ala Arg Lys 1 5 <210> 15 <211> 35 <212> PRT <213> Mesobuthus tamulus <400> 15 Arg Cys Lys Pro Cys Phe Thr Thr Asp Pro Gln Met Ser Lys Lys Cys 1 5 10 15 Ala Asp Cys Cys Gly Gly Lys Gly Lys Gly Lys Cys Tyr Gly Pr 20 25 30 Cys Leu Cys 35 <210> 16 <211> 34 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus de Toxina Pequeña <220> <221> aspecto_misc <222> (2) .. (2) <223> Xaa puede ser Met o Lys <220> <221> aspecto_misc <222> (9) .. (9) <223> Xaa puede ser His o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (16) .. (16) <223> Xaa puede ser Asp o Ala <400> 16 Cys Xaa Pro Cys Phe Thr Thr Asp Xaa Gln Met Ala Lys Lys Cys Xaa 1 5 10 15 Asp Cys Cys Gly Gly Lys Gly Lys Gly Lys Cys Tyr Gly Pro Gln Cys 20 25 30 Leu Cys <210> 17 <211> 38 <212> PRT <213> Leiurus quinquéstriatus <400> 17 Arg Cys Ser Pro Cys Phe Thr Thr Asp Gln Gln Met Thr Lys Lys Cys 1 5 10 15 Tyr Asp Cys Cys Gly Gly Lys Gly Lys Gly Lys Cys Tyr Gly Pro Gln 20 25 30 Cys lie Cys Ala Pro Tyr 35 <210> 18 <211> 34 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus de Toxina LQH 8/6 Probable <220> <221> aspecto_misc <222> (2) .. (2) <223> Xaa puede ser Met o Ser <220> <221> aspecto_misc <222> (9) .. (9) <223> Xaa puede ser His o Gln <220> <221> aspecto_misc <222> (12) .. (12) <223> Xaa puede ser Ala o Thr <220> <221> aspecto_misc <222> (16) .. (16) <223> Xaa puede ser Asp o Tyr <400> 18 Cys Xaa Pro Cys Phe Thr Thr Asp Xaa Gln Met Xaa Lys Lys Cys Xaa 1 5 10 15 Asp Cys Cys Gly Gly Lys Gly Lys Gly Lys Cys Tyr Gly Pro Gln Cys 20 25 30 lie Cys <210> 19 <211> 61 <212> PRT <213> Mesobuthus martensii <220> <221> aspecto_misc <222> (1) .. (61) <223> Xaa puede ser aminoácido <400> 19 Met Lys Phe Leu Tyr Gly lie Val Phe lie Ala Leu Phe Leu Thr Val 1 5 10 15 Met Phe Ala Thr Gln Thr Asp Gly Cys Gly Pro Cys Phe Thr Thr Asp 20 25 30 Ala Asn Met Ala Arg Lys Cys Arg Glu Cys Cys Gly Gly lie Gly Xaa 35 40 45 Xaa Lys Cys Phe Gly Pro Gln Cys Leu Cys Asn Arg lie 50 55 60 <210> 20 <211> 34 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus de Escorpión Chino <220> <221> aspecto_misc <222> (2) .. (2) <223> Xaa puede ser Met o Gly <220> <221> aspecto_misc <222> (9) .. (9) <223> Xaa puede ser His o Ala <220> <221> aspecto_misc <222> (16) .. (16) <223> Xaa puede ser Asp o Arg <220> <221> aspecto_misc <222> (22) .. (22) <223> Xaa puede ser Lys o lie <220> <221> aspecto__misc <222> (24) .. (25) <223> Xaa puede ser aminoácido <400> 20 Cys Xaa Pro Cys Phe Thr Thr Asp Xaa Asn Met Ala Arg Lys Cys Xaa 1 5 10 15 Asp Cys Cys Gly Gly Xaa Gly Xaa Xaa Lys Cys Phe Gly Pro Gln Cys 20 25 30 Leu Cys <210> 21 <211> 59 <212> PRT <213> Mesobut us martensii <400> 21 Met Lys Phe Leu Tyr Gly lie Val Phe lie Ala Leu Phe Leu Thr Val 1 5 10 15 Met Phe Ala Thr Gln Thr Asp Gly Cys Gly Pro Cys Phe Thr Thr Asp 20 25 30 Ala Asn Met Ala Arg Lys Cys Arg Glu Cys Cys Gly Gly lie Gly Lys 35 40 45 Cys Phe Gly Pro Gln Cys Leu Cys Asn Arg lie 50 55 <210> 22 <211> 32 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Secuencia consensus de Escorpión Chino <220> <221> aspecto_misc <222> (2) .. (2) <223> Xaa puede ser Met o Gly <220> <221> aspecto_misc <222> (9) .. (9) <223> Xaa puede ser His o Ala <220> <221> aspecto_misc <222> (16) .. (16) <223> Xaa puede ser Asp o Arg <220> <221> aspecto_misc <222> (22) .. (22) <223> Xaa puede ser Lys o lie <220> <221> aspecto_misc <222> (25) .. (25) <223> Xaa puede ser Gly o Cys <220> <221> aspecto_misc <222> (26) .. (26) <223> Xaa puede ser Lys o Phe <220> <221> aspecto_misc <222> (27) .. (27) <223> Xaa puede ser Cys o Gly <220> <221> aspecto_misc <222> (28) .. (28) <223> Xaa puede ser Tyr o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (29) .. (29) <223> Xaa puede ser Gly o Gln <220> <221> aspecto_misc <222> (30) .. (30) <223> Xaa puede ser Pro o Cys <220> <221> aspecto_misc <222> (31) .. (31) <223> Xaa puede ser Gln o Leu <400> 22 Cys Xaa Pro Cys Phe Thr Thr As Xaa Asn Mefc Ala Arg Lys Cys Xaa l" 5 10 15 Asp Cys Cys Gly Gly Xaa Gly Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 20 25 30 <210> 23 <211> 37 <212> PRT <213> Mesobuthus eupeus <220> <221> aspecto_misc <223> Xaa puede ser cualquier aminoácido <400> 23 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Met Ala Asn Lys Cys 1 5 10 15 Arg Asp Cys Cys Gly Gly Xaa Gly Lys Xaa Lys Cys Phe Gly Pro Gln 20 25 30 Cys Leu Cys Asn Arg 35 <210> 24 <211> 35 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Secuencia consensus de la toxina 15 de insecto <220> <221> aspecto mise <222> (10) .. (10) <223> Xaa puede ser His o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (14) .. (14) <223> Xaa puede ser Arg o Asn <220> <221> aspecto_misc <222> (17) .. (17) <223> Xaa puede ser Asp o Arg <220> <221> aspecto_misc <222> (23) .. (26) <223> Xaa puede ser cualquier aminoácido <400> 24 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Asp Xaa Asn Met Ala Xaa Lys Cys 1 5 10 15 Xaa Asp Cys Cys Gly Gly Xaa Gly Lys Xaa Lys Cys Phe Gly Pro Gln 20 25 30 Cys Leu Cys 35 <210> 25 <211> 35 <212> PRT <213> Meso uthus eupeus <400> 25 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Met Ala Asn Lys Cys 1 5 10 15 Arg Asp Cys Cys Gly Gly Gly Lys Lys Cys Phe Gly Pro Gln Cys Leu 20 25 30 Cys Asn Arg 35 <210> 26 <211> 33 <212> PRT <213> Secuencia Artificial <220> <223> Secuencia consensus de toxina 15 de insecto <220> <221> aspecto_misc <222> (10) .. (10) <223> Xaa puede ser His o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (14) .. (14) <223> Xaa puede ser Arg o Asn <220> <221> aspecto_misc <222> (17) .. (17) <223> Xaa puede ser Asp o Arg <220> <221> aspecto_misc <222> (23) .. (24) <223> Xaa puede ser Lys o Gly <220> <221> aspecto_misc <222> (26) .. (26) <223> Xaa puede ser Gly o Cys <220> <221> aspecto_misc <222> (27) .. (27) <223> Xaa puede ser Lys o Phe <220> <221> aspecto_misc <222> (28) .. (28) <223> Xaa puede ser Cys o Gly <220> <221> aspecto__misc <222> (29) .. (29) <223> Xaa puede ser Tyr o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (30) .. (30) <223> Xaa puede ser Gly o Gln <220> <221> aspecto__misc <222> (31) .. (31) <223> Xaa puede Pro o Cys <220> <221> aspecto_misc <222> (32) .. (32) <223> Xaa puede ser Gln o Leu <400> 26 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Asp Xaa Asn Met Ala Xaa Lys Cys 1 5 10 15 Xaa Asp Cys Cys Gly Gly Xaa Xaa I,ys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Cys <210> 27 <211> 38 <212> PRT <213> Mesobut us eupeus <220> <221> aspecto_misc <222> (1) .. (38) <223> Xaa puede ser cualquier aminoácido <400> 27 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Arg Pro Asp Met Ala Gln Gln Cys 1 5 10 15 Arg Ala Cys Cys Lys Gly Xaa Xaa Arg Gly Lys Cys Phe Gly Pro Gln 20 25 30 Cys Leu Cys Gly Tyr Asp 35 <210> 28 <211> 35 <212> PRT <213> Secuecnia artificial <220> <223> Secuencia consensus de Insectotoxina II <220> <221> aspecto_misc <222> (9) .. (9) <223> Xaa puede ser Asp o Arg <220> <221> aspecto_misc <222> (10) .. (10) <223> Xaa puede ser His o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (11) .. (11) <223> Xaa puede ser Gln o Asp <220> <221> aspectojnisc <222> (14) .. (14) <223> Xaa puede ser Arg o Gln <220> <221> aspecto_misc <222> (15) .. (15) <223> Xaa puede ser Lys o Gln <220> <221> aspecto_misc <222> (17) .. (17) <223> Xaa puede ser Asp o Arg <220> <221> aspecto_misc <222> (18) .. (18) <223> Xaa puede ser Asp o Ala <220> <221> aspecto_misc <222> (21) .. (21) <223> Xaa puede ser Gly o Lys <220> <221> aspecto_misc <222> (23) .. (24) <223> Xaa puede ser cualquier aminoácido <400> 28 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Xaa Xaa Xaa Met Ala Xaa Xaa Cys 1 5 10 15 Xaa Xaa Cys Cys Xaa Gly Xaa Xaa Arg Gly Lys Cys Phe Gly Pro Gln 20 25 30 Cys Leu Cys 35 <210> 29 <211> 36 <212> PRT <213> Mesobuthus eupeus <400> 29 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Arg Pro Asp Met Ala Gln Gln Cys 1 5 10 15 Arg Ala Cys Cys Lys Gly Arg Gly iys Cys Phe Gly Pro Gln Cys Leu 20 25 30 Cys Gly Tyr Asp 35 <210> 30 <211> 33 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus de insectotoxina II <220> <221> aspecto_misc <222> (9) .. (9) <223> Xaa puede ser Asp o Arg <220> <221> aspecto_misc <222> (10) .. (10) <223> Xaa puede ser His o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (11) .. (11) <223> Xaa puede ser Gln o Asp <220> <221> aspecto_misc <222> (14) .. (14) <223> Xaa puede ser Arg o Gln <220> <221> aspecto__misc <222> (15) .. (15) <223> Xaa puede ser Lys o Gln <220> <221> aspecto_misc <222> (17) .. (17) <223> Xaa puede ser Asp o Arg <220> <221> aspecto_misc <222> (18) .. (18) <223> Xaa puede ser Asp o Arg <220> <221> aspectojnisc <222> (21) .. (21) <223> Xaa puede ser Gly o Lys <220> <221> aspecto_misc <222> (26) .. (26) <223> Xaa puede ser Gly o Cys <220> <221> aspecto_misc <222> (27) .. (27) <223> Xaa puede ser Lys o Phe <220> <221> aspecto_misc <222> (28) .. (28) <223> Xaa puede ser Cys o Gly <220> <221> aspecto_misc <222> (29) .. (29) <223> Xaa puede ser Tyr o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (30) .. (30) <223> Xaa puede ser Gly o Gln <220> <221> aspecto_misc <222> (31) .. (31) <223> Xaa puede ser Pro o Cys <220> <221> aspecto_misc <222> (32) .. (32) <223> Xaa puede ser Gln o Leu <400> 30 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Xaa Xaa Xaa Met Ala Xaa Xaa Cys 1 5 10 15 Xaa Xaa Cys Cys Xaa Gly Lys Gly Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Cys <210> 31 <211> 37 <212> PRT <213> Mesobuthus eupeus <220> <221> aspecto_misc <222> (1) .. (37) <223> Xaa puede ser cualquier aminoácido <400> 31 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Met Ala Lys Lys Cys 1 5 10 15 Arg Asp Cys Cys Gly Gly Asn Gly Xaa Xaa Lys Cys Phe Gly Ero Gln 20 25 30 Cys Leu Cys Asn Arg 35 <210> 32 <211> 35 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus de insectotoxina 15A <220> <221> aspecto_misc <222> (10) .. (10) <223> Xaa puede ser His o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (17) .. (17) <223> Xaa puede ser Asp o Arg <220> <221> aspecto_misc <222> (23) .. (23) <223> Xaa puede ser Lys o Asn <220> <221> aspecto_misc <222> (25) .. (26) <223> Xaa puede ser cualquier aminoácido <400> 32 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Asp Xaa Asn Met Ala Lys Lys Cys 1 5 10 15 Xaa Asp Cys Cys Gly Gly Xaa Gly Xaa Xaa Lys Cys Phe Gly Pro Gln 20 25 30 Cys Leu Cys 35 <210> 33 <211> 35 <212> PRT <213> Mesobuthus eupeus <400> 33 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Met Ala Lys Lys Cys 1 5 10 15 Arg Asp Cys Cys Gly Gly Asn Gly Lys Cys Phe Gly Pro Gln Cys Leu 20 25 30 Cys Asn Arg 35 <210> 34 <211> 33 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus de insectotoxina 15A <220> <221> aspecto_misc <222> (10) .. (10) <223> Xaa puede ser His o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (17) .. (17) <223> Xaa puede ser Asp o Arg <220> <221> aspecto_misc <222> (23) .. (23) <223> Xaa puede ser Lys o Asn <220> <221> aspecto_misc <222> (26) .. (26) <223> Xaa puede ser Gly o Cys <220> <221> aspecto_misc <222> (27) .. (27) <223> Xaa puede ser Lys o Phe <220> <221> aspecto_misc <222> (28) .. (28) <223> Xaa puede ser Cys o Gly <220> <221> aspecto_misc <222> (29) .. (29) <223> Xaa puede ser Tyr o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (30) .. (30) <223> Xaa puede ser Gly o Gln <220> <221> aspecto_misc <222> (31) .. (31) <223> Xaa puede ser Pro o Cys <220> <221> aspecto_misc <222> (32) .. (32) <223> Xaa puede ser Gln o Leu <400> 34 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Asp Xaa Asn Met Ala Lys Lys Cys 1 5 10 15 Xaa Asp Cys Cys Gly Gly Xaa Gly Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30 Cys <210> 35 <211> 37 <212> PRT <213> Androctonus mauretanicus <220> <221> aspecto_misc <222> (1) .. (37) <223> Xaa puede ser cualquier aminoácido <400> 35 Cys Gly Pro Cys Phe Thr Thr Asp Pro Tyr Thr Glu Ser Lys Cys Ala 1 5 10 15 Thr Cys Cys Gly Gly Xaa Xaa Arg Gly L s Cys Val Gly Pro Gln Cys 20 25 30 Leu Cys Asn Arg 35 <210> 36 <211> 34 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus de neurotoxina P2 <220> <221> aspecto_misc <222> (2) .. (2) <223> Xaa puede ser Met o Gly <220> <221> aspecto_misc <222> (9) .. (9) <223> Xaa puede ser His o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (10) .. (10) <223> Xaa puede ser Gln o Tyr <220> <221> aspecto_misc <222> (11) .. (11) <223> Xaa puede ser Met ¦ <220> <221> aspecto_misc <222> (12) .. (12) <223> Xaa puede ser Ala o Glu <220> <221> aspecto_misc <222> (13) .. (13) <223> Xaa puede ser Arg o Ser <220> <221> aspecto_misc <222> (16) .. (16) <223> Xaa puede ser Asp o Ala <220> <221> aspecto_misc <222> (17) .. (17) <223> Xaa puede ser Asp o Thr <220> <221> aspecto_misc <222> (22) .. (23) <223> Xaa puede ser cualquier aminoácido <220> <221> aspecto__misc <222> (28) .. (28) <223> Xaa puede ser Tyr o Val <400> 36 Cys Xaa Pro Cys Phe Thr Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Cys Xaa 1 5 10 15 Xaa Cys Cys Gly Gly Xaa Xaa Arg Gly Lys Cys Xaa Gly Pro Gln Cys 20 25 30 Leu Cys <210> 37 <211> 35 <212> PRT <213> Aadroctonus mauretanacus <400> 37 Cys Gly Pro Cys Phe Thr Thr Asp Pro Tyr Thr Glu Ser Lys Cys Ala 1 5 10 15 Thr Cys Cys Gly Gly Arg Gly Lys Cys Val Gly Pro Gln Cys Leu Cys 20 25 30 Asn Arg lie 35 <210> 38 <211> 32 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus de neurotoxina P2 <220> <221> aspecto mise <222> (2) .. (2) <223> Xaa puede ser Met o Gly <220> <221> aspecto_misc <222> (9) .. (9) <223> Xaa puede ser His o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (10) .. (10) <223> Xaa puede ser Gln o Tyr <220> <221> aspecto_misc <222> (11) .. (11) <223> Xaa puede ser Met o Thr <220> <221> aspecto_misc <222> (12) .. (12) <223> Xaa puede ser Ala o Glu <220> <221> aspecto mise <222> (13) .. (13) <223> Xaa puede ser Arg o Ser <220> <221> aspecto_misc <222> (16) .. (16) <223> Xaa puede ser Asp o Ala <220> <221> aspecto_misc <222> (17) .. (17) <223> Xaa puede ser Asp o Thr <220> <221> aspecto_misc <222> (25) .. (25) <223> Xaa puede ser Gly o Cys <220> <221> aspecto_misc <222> (26) .. (26) <223> Xaa puede ser Lys o Val <220> <221> aspecto mise <222> (27) .. (27) <223> Xaa puede ser Cys o Gly <220> <221> aspecto_misc <222> (28) .. (28) <223> Xaa puede ser Tyr o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (29) .. (29) <223> Xaa puede ser Gly o Gln <220> <221> aspecto_misc <222> (30) .. (30) <223> Xaa puede ser Pro o Cys <220> <221> aspecto_misc <222> (31) .. (31) <223> Xaa puede ser Gln o Leu <400> 38 Cys Xaa Pro Cys Phe Thr Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Cys Xaa 1 5 10 15 Xaa Cys Cys Gly Gly Lys Gly Lys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys 20 25 30 <210> 39 <211> 37 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus de toxina <220> <221> aspecto_misc <222> (1) .. (37) <223> Xaa puede ser cualquier aminoácido <400> 39 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Met Ala Lys Lys Cys 1 5 10 15 Arg Asp Cys Cys Gly Gly Lys Gly Xaa Xaa Lys Cys Phe Gly Pro Gln 20 25 30 Cys Leu Cys Asn Arg 35 <210> 40 <211> 35 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus de toxina <220> <221> aspecto_misc <222> (3) .. (3) <223> Xaa puede ser Met, Lys o Ser <220> <221> aspecto_misc <222> (10) .. (10) <223> Xaa puede ser His, Pro, o Gln <220> <221> aspecto_misc <222> (17) .. (17) <223> Xaa puede ser Asp, Ala, o Tyr <400> 40 Arg Cys Xaa Pro Cys Phe Thr Thr Asp Xaa Gln Met Ser Lys Lys Cys 1 5 10 15 Xaa Asp Cys Cys Gly Gly Lys Gly Lys Gly Lys Cys Tyr Gly Pro Gln 20 25 30 Cys Leu Cys 35 <210> 41 <211> 35 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus de toxina <400> 41 Met Cys Met Pro Cys Phe Thr Thr Asp Pro Asn Met Ala Arg Lys Cys 1 5 10 15 Arg Asp Cys Cys Gly Gly Arg Gly Lys Cys Phe Gly Pro Gln Cys Leu 20 25 30 Cys Asn Arg 35 <210> 42 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Pep8-Ctlx <400> 42 Cys Gly Gly Lys Gly Arg Gly Lys Cys Tyr 1 5 10 <210> 43 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Pep8-SCX1_BUTSI <400> 43 Gly Gly Lys Gly Lys Gly Lys Cys Tyr 5 10 <210> 44 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Pep8-AF079059_2 <400> 44 Gly Gly lie Gly Lys Cys Phe Gly Pro 5 10 <210> 45 <211> 12 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus del péptido clorotoxina <220> <221> aspecto_misc <222> (4) .. (4) <223> Xaa puede ser Lys o lie <400> 45 Cys Gly Gly Xaa Gly Arg Gly Lys Cys Phe Gly Pro 1 - 5 10 <210> 46 <211> 6 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del péptido 8 de clorotoxina <220> <221> aspecto_misc <222> (4) .. (4) <223> Xaa puede ser Lys o lie <400> 46 Cys Gly Gly Xaa Gly Lys 1 5 <210> 47 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia de Pep8-NJ0361 <400> 47 Cys Gly Gly Gly lys Lys Cys Phe Gly Pro 1 5 10 <210> 48 <211> 12 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus del péptido clorotoxina <400> 48 Cys Gly Gly Lys Gly Lys Gly Lys Cys Phe Gly Pro 1 5 10 <210> 49 <211> 6 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus del péptido clorotoxina <220> <221> aspecto_misc <222> (4) .. (5) <223> Xaa puede ser Lys o Gly <400> 49 Cys Gly Gly Xaa Xaa Lys 1 5 <210> 50 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia de Pep8-SCXl BUTEÜ <400> 50 Cys Lys Gly Arg Gly Lys Cys Phe Gly Pro 1 5 10 <210> 51 <211> 12 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus del péptido clorotoxina <220> <221> aspecto_misc <222> (3) .. (3) <223> Xaa puede ser Gly o Cys <400> 51 Cys Gly Xaa Lys Gly Arg Gly Lys Cys Phe Gly Pro 1 5 10 <210> 52 <211> 6 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus del péptido clorotoxina <220> <221> aspecto_misc <222> (2) .. (2) <223> Xaa puede ser Gly o Lys <400> 52 Xaa Gly Lys Gly Lys 5 <210> 53 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia de Pep8-SCX5 BUTEU <400> 53 Cys Gly Gly Asn Gly Lys Cys Phe Gly Pro 1 5 10 <210> 54 <211> 12 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del péptido 8 de clorotoxina <220> <221> aspecto_misc <222> (4) .. (4) <223> Xaa puede ser Lys o Asn <400> 54 Cys Gly Gly Xaa Gly Arg Gly Lys Cys Phe Gly Pro 1 5 10 <210> 55 <211> 6 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del péptido 8 de clorotoxxna <220> <22l> aspecto_misc <222> (4) .. (4) <223> Xaa puede ser Lys o Asn <400> 55 Cys Gly Gly Xaa Gly Lys 1 5 <210> 56 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia de Pep8-SCXP_ANDMA <400> 56 Gly Gly Arg Gly Lys Cys Val Gly Pro 5 10 <210> 57 <211> 12 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus del péptido clorotoxina <220> <221> aspecto_misc <222> (10) .. (10) <223> Xaa puede ser Tyr o Val <400> 57 Cys Gly Gly Lys Gly Arg Gly Lys Cys Xaa Gly Pro 1 5 10 <210> 58 <211> 6 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del péptido 8 de clorotoxina <400> 58 Cys Gly Gly Lys Gly Lys 1 5 <210> 59 <211> 12 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus del péptido clorotoxina <220> <221> aspecto_misc <222> (4) .. (5) <223> Xaa puede ser Lys o Gly <400> 59 Cys Gly Gly Xaa Xaa Arg Gly Lys Cys Phe Gly Pro 1 5 10 <210> 60 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <2"20> <223> Secuencia consensus del péptido clorotoxina <400> 60 Cys Gly Gly Lys Gly Lys Cys Phe Gly Pro 1 5 10 <210> 61 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artifi <220> · <223> Secuencia del péptido 21 de clorotoxina <400> 61 Thr Thr Asp His Gln Met Ala Arg Lys Cys 1 5 10 <210> 62 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia de Pep21-SCXl-BUTSI <400> 62 Thr Thr Asp Pro Gln Met Ser Lys Lys Cys 1 5 10 <210> 63 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus del péptido <220> <221> aspecto_misc <222> (4) .. (4) <223> Xaa puede ser His o Pro <400> 63 Thr Thr Asp Xaa Gln Met Ala Lys Lys Cys 1 5 10 <210> 64 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia de Pep21-SCX8 LEIQH <400> 64 Thr Thr Asp Gln Gln Met Thr Lys Lys Cys 1 5 10 <210> 65 <21l> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus del péptido clorotoxina <220> <221> aspecto_misc <222> (4) .. (4) <223> Xaa puede ser His o Gln <220> <22l> aspecto_misc <222> (7) .. (7) <223> Xaa puede ser Ala o Thr <400> 65 Thr Thr Asp Xaa Gln Met Xaa Lys Lys Cys 1 5 10 <210> 66 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del peptido Pep21-AF079059_2 <400> 66 Thr Thr Asp Ala Asn Met Ala Arg Lys Cys 1 5 10 <210> 67 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> secuencia consensus del péptido clorotoxina <220> <221> aspecto_misc <222> (4) .. (4) <223> Xaa puede ser His o Ala <400> 67 Thr Thr Asp Xaa Asn Met Ala Arg Lys Cys 1 5 10 <210> 68 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia de Pep21-JN0 <400> 68 Thr Thr Asp Pro Asn Met Ala Asn Lys Cys 1 5 10 <210> 69 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus del péptido clore-toxina <220> <221> aspecto_misc <222> (4) .. (4) <223> Xaa puede ser ya sea His o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (8) .. (8) <223> Xaa puede ser Arg o Asn <400> 69 Thr Thr Asp Xaa Asn Met Ala Xaa Lys Cys 1 5 10 <210> 70 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia de Pep21-SCXl BUTEU <400> 70 Thr Thr Arg Pro Asp Met Ala Gln Gln Cys 1 5 10 <210> 71 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del peptido 21 de clorotoxina <220> <221> aspectojnisc <222> (3) .. (3) <223> Xaa puede ser Asp o Arg <220> <221> aspecto_misc <222> (4) .. (4) <223> Xaa puede ser His o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (5) .. (5) <223> Xaa puede ser Gln o Asp <220> <221> aspecto_misc <222> (8) .. (8) <223> Xaa puede ser Arg o Gln <220> <221> aspecto <222> (9) .. (9) <223> Xaa puede ser Lys o Gln <400> 71 Thr Thr Xaa Xaa Xaa Met Ala Xaa Xaa Cys 1 5 10 <210> 72 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <223> Secuencia de Pep21-SCX5 BUTEU <400> 72 Thr Thr Asp Pro Asn Met Ala Lys Lys Cys 1 5 10 <210> 73 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del péptido 21 de clorotoxina <220> <221> aspecto_misc <222> (4) .. (4) <223> Xaa puede ser His o Pro <400> 73 Thr Thr Asp Xaa Asn Met Ala lys Lys Cys 1 5 10 <210> 74 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuecnia de Pep21-SCXP_ANDMA <400> 74 Thr Thr Asp Pro Tyr Thr Glu Ser Lys Cys 1 5 10 <210> 75 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus del péptido 21 de clorotoxina <220> <221> aspecto_misc <222> (4) .. (4) <223> Xaa puede ser His o Pro <220> <221> aspecto_misc <222> (5) , . (5) <223> Xaa puede ser Gln o Tyr <220> <221> aspecto_misc <222> (6) .. (6) <223> Xaa puede ser Met o Thr <220> <221> aspecto_misc <222> (7) .. (7) <223> Xaa puede ser Ala o Glu <220> <221> aspecto mise <222> (8) .. (8) <223> Xaa puede ser Arg o Ser <400> 75 Thr Thr Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Lys Cys 1 5 10 <210> 76 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia consensus del péptido clorotoxina <400> 76 Thr Thr Asp Pro Asn Met Ala Lys Lys Cys 1 5 10 <210> 77 <211> 7 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> STP-1 derivado de clorotoxina <400> 77 Thr Asp Pro Gln Met Ser Arg 1 5 <210> 78 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del péptido 8 <400> 78 Gly Gly Lys Gly Arg Gly Lys Ser Tyr Gly 1 5 10 <210> 79 <211> 9 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del peptido 8a <400> 79 Gly Lys Gly Arg Gly Lys Ser Tyr Gly 1 5 <210> 80 <211> 8 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del peptido <400> 80 Lys Gly Arg Gly Lys Ser Tyr Gly 1 5 <210> 81 <211> 7 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del peptido <400> 81 Gly Arg Gly Lys Ser Tyr Gly 1 5 <210> 82 <211> 10 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del peptido 21 <400> 82 Thr Thr Asp His Gln Met Ala Arg Lys Ser 1 5 10 <210> 83 <211> 8 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del peptido 21b <400> 83 Asp His Gln Met Ala Arg Lys Ser 1 5 <210> 84 <211> 7 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del péptido 21c <400> 84 His Gln Met Ala Arg Lys i 5 <210> 85 <211> 6 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del péptido 21d <400> 85 Gln Met Ala Arg Lys Ser 1 5 <210> 86 <211> 9 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del péptido 2la-Al <400> 86 Ala Asp His Gln Met Ala Arg Lys 1 5 <210> 87 <211> 9 <212> PRT <213> Secuencia artifi <220> <223> Secuencia del péptido 21a-A2 <400> 87 Thr Ala His Gln Met Ala Arg Lys Ser 1 5 <210> 88 <211> 9 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del péptido 21a-A3 <400> 88 Thr Asp Ala Gln Met Ala Arg Lys Ser 1 5 <210> 89 <211> 9 <212> PRT <213> Secuencxa artificial <220> <223> Secuencia del péptido 21a-A4 <400> 89 Thr Asp His Ala Met Ala Arg lys Ser 1 5 <210> 90 <211> 9 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del péptido 21a-A5 <400> 90 Thr Asp His Gln Ala Ala Arg Lys 1 5 <210> 91 <211> 9 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del péptido 21a-A7 <400> 91 Thr Asp His Gln Met Ala Ala Lys Ser 1 5 <210> 92 <211> 9 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del péptido 21a-A8 <400> 92 Thr Asp His Gln Mét Ala Arg Ala Ser 1 5 <210> 93 <211> 9 <212> PRT <213> Secuencia artificial <220> <223> Secuencia del péptido 21a-A9 <400> 93 Thr Asp His Gln Met Ala Arg lys Ala 1 5 <210> 94 <211> 9 <212> PRT <213> Mesobuthus tamulus sindicus <220> <223> No. de acceso de GenBank: P15229, toxina pequeña <400> 94 Thr Thr Asp Gln Gln Met Ser Lys Lys 1 5 <210> 95 <211> 9 <212> PRT <213> Leiurus quinquestriatus ebraeu <220> <223> No. de Acceso de GenBank: P55966, toxina probable <400> 95 Thr Thr Asp Pro Gln Met Ser Lys Lys 1 5

Claims

NOVEDAD DE LA. INVENCION Habiendo descrito la presente invención, se considera como novedad, y por lo tanto se reclama como propiedad lo contenido en las siguientes reivindicaciones :

1. Un método para tratar cáncer caracterizado porque comprende administrar clorotoxina o un derivado de clorotoxina en combinación con al menos un agente quimioterapéutico .

2. Un método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la clorotoxina o derivado de clorotoxina es administrado antes de la administración del agente quimioterapéutico .

3. Un método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la clorotoxina o el derivado de clorotoxina es administrada subsecuentemente a la administración del agente quimioterapéutico.

4. Un método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque la clorotoxina o el derivado de clorotoxina es administrado simultáneamente con el agente quimioterapéutico.

5. Un método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el agente quimioterapéutico es seleccionado del grupo que consiste de agentes alquilantes, antagonistas de purina, antagonistas de pirimidina, alcaloides vegetales, antibióticos intercalantes, inhibidores de aromatasa, anti-metabolitos, inhibidores mitóticos, inhibidores del factor de crecimiento, inhibidores del ciclo celular, enzimas, inhibidores de topoisomerasa, modificadores de la respuesta biológica, anti-hormonas y anti-andrógenos .

6. Método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el agente quimioterapéutico es seleccionado del grupo que consiste de BCNU, cisplatina, gemcitabina, hidroxiurea, paclitaxel, temozomida, topotecano, fluorouracilo, vincristina, vinblastina, procarbazina, dacarbacina, altretamina, cisplatina, metotrexato, mercaptopurina, tioguanina, fosfato de fludarabina, cladribina, pentostatina, fluorouracilo, citarabina, azacitidina, vinblastina, vincristina, etoposida, teniposida, irinotecano, docetaxel, doxorubicina, daunorubicina, dactinomicina, idarubicina, plicamicina, mitomicina, bleomicina, tamoxifeno, flutamida, leuprolida, goserelin, aminoglutetimida, anastrozol, amsacrina, asparaginasa, mitoxantrona, mitotano y amifostina.

7. ün método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el cáncer es un cáncer neuroectodérmico .

8. Un método de conformidad con la reivindicación 1, caracterizado porque el cáncer es seleccionado del grupo que consiste de cáncer del pulmón, cáncer óseo, cáncer de hígado, cáncer pancreático, cáncer de la piel, cáncer de la cabeza o cuello, melanoma intraocular o cutáneo, cáncer uterino, cáncer ovárico, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de seno, cáncer uterino, carcinoma de las trompas de falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cérvix, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, Enfermedad de Hodgkin, cáncer del esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma del tejido blando, cáncer de la uretra, cáncer del pene, cáncer de la próstata, leucemia aguda o crónica, linfornas linfocíticos, cáncer de la vejiga, cáncer del riñon o uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal, neoplasmas del sistema nervioso central (CNS) , cáncer neuroectodérmico, tumores del eje espinal, glioma, meningioma y adenoma pituitario .

9. Una composición para tratar cáncer caracterizada porque comprende clorotoxina o un derivado de clorotoxina y al menos un agente quimioterapéutico.

10. üna composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el agente quimioterapéutico es seleccionado del grupo que consiste de agentes alquilantes, antagonistas de purina, antagonistas de pirimidina, alcaloides vegetales, antibióticos intercalantes, inhibidores de aromatasa, anti-metabolitos, inhibidores mitóticos, inhibidores del factor de crecimiento, inhibidores del ciclo celular, enzimas, inhibidores de topoisomerasa, modificadores de la respuesta biológica anti-hormonas y anti-andrógenos .

11. Una composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el agente quimioterapéutico es seleccionado del grupo que consiste de BC U, cisplatina, gemcitabina, hidroxiurea, paclitaxel, temozomida, topotecano, fluorouracilo, vincristina, vinblastina, procarbazina, dacarbacina, altretamina, cisplatina, metotrexato, mercaptopurina, tioguanina, fosfato de fludarabina, cladribina, pentostatina, fluorouracilo, citarabina, azacitidina, vinblastina, vincristina, etoposida, teniposida, irinotecano, docetaxel, doxorubicina, daunorubíciña, dactinomicina, idarubicina, plicamicina, mitomicina, bleomicina, tamoxifeno, flutamida, leuprolida, goserelin, aminoglutetimida, anastrozol, amsacrina, asparaginasa, mitoxantrona, mitotano y amifostina.

12. Una composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el cáncer es un cáncer neuroectodérmico .

13. Una composición de conformidad con la reivindicación 9, caracterizada porque el cáncer es seleccionado del grupo que consiste de cáncer del pulmón, cáncer óseo, cáncer de hígado, cáncer pancreático, cáncer de la piel, cáncer de la cabeza o cuello, melanoma intraocular o cutáneo, cáncer uterino, cáncer ovárico, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de seno, cáncer uterino, carcinoma de las trompas de falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cérvix, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, Enfermedad de Hodgkin, cáncer del esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma del tejido blando, cáncer de la uretra, cáncer del pene, cáncer de la próstata, leucemia aguda y crónica, linfornas linfocíticos, cáncer de la vejiga, cáncer del riñon o uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal, neoplasmas del sistema nervioso central (CNS), cáncer neuroectodérmico, tumores del eje espinal, glioma, meningioma y adenoma pituitario.

14. Un método de detectar la presencia de cáncer en un paciente caracterizado porque comprende administrar una cantidad detectable de clorotoxina o derivado de clorotoxina marcados.

15. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque el cáncer es seleccionado del grupo que consiste de cáncer del pulmón, cáncer óseo, cáncer de hígado, cáncer pancreático, cáncer de la piel, cáncer de la cabeza o cuello, melanoma intraocular o cutáneo, cáncer uterino, cáncer ovárico, cáncer rectal, cáncer de la región anal, cáncer de estómago, cáncer de colon, cáncer de seno, cáncer uterino, carcinoma de las trompas de falopio, carcinoma del endometrio, carcinoma del cérvix, carcinoma de la vagina, carcinoma de la vulva, Enfermedad de Hodgkin, cáncer del esófago, cáncer de intestino delgado, cáncer del sistema endocrino, cáncer de la glándula tiroides, cáncer de la glándula paratiroides, cáncer de la glándula adrenal, sarcoma del tejido blando, cáncer de la uretra, cáncer del pene, cáncer de la próstata, leucemia aguda y crónica, linfornas linfociticos, cáncer de la vejiga, cáncer del riñon o uréter, carcinoma de células renales, carcinoma de la pelvis renal, neoplasmas del sistema nervioso central (CNS) , cáncer neuroectodérmico, tumores del eje espinal, glioma, meningioma y adenoma pituitario.

16. El método de conformidad con la reivindicación 14, caracterizado porque la marca es un radiomarcador.

17. El método de conformidad con la reivindicación 16, caracterizado porque el radiomarcador es seleccionado del grupo que consiste de ¾, 1C, 18F, 19F, 31P, 32P, 35S, 131I 125ZI 123LF 64^ 1S7RQ¡ 111-^ 90y^ 99^ y 177^ _