EA037407B1 - Композиция на основе флагеллина и способ вакцинации с ее использованием - Google Patents

Композиция на основе флагеллина и способ вакцинации с ее использованием Download PDF

Info

Publication number
EA037407B1
EA037407B1 EA201790294A EA201790294A EA037407B1 EA 037407 B1 EA037407 B1 EA 037407B1 EA 201790294 A EA201790294 A EA 201790294A EA 201790294 A EA201790294 A EA 201790294A EA 037407 B1 EA037407 B1 EA 037407B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
flagellin
mutant
vaccine
vaccines
agent
Prior art date
Application number
EA201790294A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201790294A1 (ru
Inventor
Андрей В. Гудков
Вадим Метт
Вадим Кривокрысенко
Original Assignee
Джиноум Протекшн, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Джиноум Протекшн, Инк. filed Critical Джиноум Протекшн, Инк.
Publication of EA201790294A1 publication Critical patent/EA201790294A1/ru
Publication of EA037407B1 publication Critical patent/EA037407B1/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/164—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/0013—Therapeutic immunisation against small organic molecules, e.g. cocaine, nicotine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55516—Proteins; Peptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55583—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
    • A61K2039/55594—Adjuvants of undefined constitution from bacteria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A61K2039/575—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2 humoral response
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C07K2319/20—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand
    • C07K2319/21—Fusion polypeptide containing a tag with affinity for a non-protein ligand containing a His-tag
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Изобретение относится, в частности, к композициям, содержащим усовершенствованные конструкты производных флагеллина, и способам применения для вакцинации, включая адъюванты, содержащие средства на основе флагеллина.

Description

Перекрестная ссылка на родственные заявки
В заявке на данное изобретение заявляется приоритет по предварительным заявкам на патенты
США № 62/031116, поданной 30 июля 2014 г.; № 62/110744, поданной 2 февраля 2015 г.; и № 62/117366, поданной 17 февраля 2015 г., которые включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
Область изобретения
Настоящее изобретение относится, в частности, к новым композициям и способам вакцинации, включая адъюванты, содержащие средства на основе флагеллина.
Описание файла, представленного в электронном виде
Содержание файла, представленного в данном документе в электронном виде, включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме: Машиночитаемая копия Перечня последовательностей (название файла: CLE019PC SequenceListing.txt; дата записи: 24 июля 2015 г.; полный размер: 261 KB).
Уровень техники
Вакцины являются одним из наиболее эффективных профилактических средств здравоохранения против инфекционных заболеваний, рака и аллергии. Цели вакцинации - индуцировать сильный иммунный ответ на введенный антиген и обеспечить долгосрочную защиту против патологии. Часто, однако, одного антигена недостаточно, чтобы стимулировать защитный иммунитет.
Адъювантами вакцины являются соединения, которые усиливают специфические иммунные ответы против антигенов в вакцинах. В настоящее время известно несколько сотен природных и синтетических соединений, которые имеют адъювантную активность, но только соли квасцов и AS04 лицензированы для использования в организме человека в Соединенных Штатах. Этот ограниченный перечень адъювантов недостаточный для удовлетворения функциональных потребностей эффективной вакцинации. Например, хотя квасцы способны индуцировать хороший ответ TH2, они имеют небольшую способность стимулировать клеточные (TH1) иммунные ответы, которые так важны для защиты от многих патогенов.
Соответственно, существует потребность в улучшенных вакцинах и/или адъювантов, которые могут эффективно стимулировать иммунный ответ субъекта.
Сущность изобретения
Соответственно, в некоторых аспектах настоящее изобретение относится к усовершенствованным вакцинам и/или адъювантам.
В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к композиции вакцины, включая адъювант, содержащий средство на основе флагеллина, такое как, например, CBLB502 (также известный как энтолимод), а также любое из средств на основе флагеллина или производных, описанных в данном документе (например, табл. 1), и гель или соль алюминия, и антиген, и, необязательно, дополнительный адъювант. В некоторых аспектах настоящее изобретение относится к композиции адъюванта, включая адъювант, содержащий средство на основе флагеллина, включая CBLB502, а также любое из средств на основе флагеллина или производных, описанных в данном документе (например, табл. 1), и гель или соль алюминия. В различных вариантах реализации вакцина, описанная в данном документе, приводит к улучшению адъювантных свойств по сравнению с вакциной, содержащей только антиген и гель или соль алюминия. В различных вариантах реализации вакцина и/или адъювант, описанный в данном документе, вызывает более обширный, более разнообразный, более сильный и более продолжительный иммуностимулирующий эффект, чем вакцина, содержащая только антиген и гель или соль алюминия и/или адъювант, содержащий только гель или соль алюминия. В различных вариантах реализации вакцина и/или адъювант, описанный в данном документе, приводит к иммуностимуляции одного или нескольких из TH1- и Тн1-опосредованного иммунного ответа (например, обоих из TH1- и ТН2-опосредованных иммунных ответов) и/или вакцина и/или адъювант, описанный в данном документе, приводит к иммуностимуляции Тн1-опосредованного иммунного ответа на уровнях выше, чем вакцина, содержащая только антиген и гель или соль алюминия и/или адъювант, содержащий только гель или соль алюминия.
В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина может представлять собой молекулу флагеллина или средство на основе флагеллина или их варианты, которые имеют активность агониста TLR5. Средство на основе флагеллина может содержать одну или более из последовательностей, представленных в табл. 1 (SEQ ID NO: 1-252), или их варианты, которые имеют активность агониста TLR5, и может включать вариант флагеллина дикого типа Salmonella dublin (SEQ ID NO: 1), CBLB502 (SEQ ID NO: 2) или его варианты (включая близкородственные варианты, такие как S33ML (SEQ ID NO: 35), CBLB502-485CT (CBLB533, SEQ ID NO: 71) и CBLB502-S33MX (SEQ ID NO: 150)) и более отдаленно родственные варианты, такие как производные флагеллина из термофильных микроорганизмов или производные флагеллина из микроорганизма, хорошо переносимого человеком (например, SEQ ID NO: 243-252). В некоторых вариантах реализации гель или соль алюминия выбраны из гидрооксида алюминия, фосфата алюминия и калий сульфата алюминия и альгидрогеля.
В различных вариантах реализации настоящая композиция вакцины является частью следующих вакцин (например, антигены этих вакцин могут быть использованы в качестве антигена настоящих вакцин): КДС (вакцины дифтерия-столбняк-коклюш), АКДС (вакцины дифтерия-столбняк-ацеллюлярный коклюш), Хиб (гемофильной инфекции типа b) конъюгированных вакцин, пневмококковой конъюгиро- 1 037407 ванной вакцины, вакцин против гепатита А, вакцин против полиомиелита, вакцин против желтой лихорадки, вакцин против гепатита В, комбинированной вакцины против АКДС, КДС, Хиб, вируса папилломы человека (ВПЧ), вакцины против сибирской язвы и вакцины против бешенства.
В различных вариантах реализации вакцину, описанную в данном документе, создают, в частности, путем смешивания средства на основе флагеллина и геля или соли алюминия с образованием стабильного комплекса, при этом соотношение (мас./мас.) средства на основе флагеллина к гелю или соли алюминия составляет около 1:500 или менее (например, около 1: 500, или около от 1: 600 или 1: 700, или около от 1: 800, или около от 1: 900 или 1: 1000, или около от 1: 2000 или около 1: 5000). В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия смешивают в соотношении, которое значительно ниже нагрузочной емкости геля или соли алюминия. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина и антиген адсорбированы на геле или соли алюминия.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу вакцинации субъекта против патологии, включающему введение эффективного количества вакцины, содержащей адъювант, содержащий средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия, и антигена, связанного с патологией. В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу иммуностимуляции субъекта перед или одновременно с вакцинацией, включающему введение эффективного количества адъюванта, содержащего средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия, при этом оба TH1- и TH2-опосредованных иммунных ответа оказываются иммуностимулированными. В различных вариантах реализации патология выбрана из инфекционных заболеваний, рака, аллергии и аутоиммунных заболеваний (в качестве примера дифтерия, столбняк, коклюш, грипп, пневмония, гепатит А, гепатит В, полиомиелит, желтая лихорадка, инфекции вируса папилломы человека (ВПЧ), различные виды рака, сибирская язва, бешенство, японский энцефалит, менингит, корь, эпидемический паротит, краснуха, гастроэнтерит, оспа, тиф, ветряная оспа (ветрянка), ротавирус и опоясывающий лишай).
Детали настоящего изобретения изложены в прилагаемом описании ниже. Хотя способы и материалы, подобные или эквивалентные описанным в настоящем документе, могут быть использованы на практике или при испытании настоящего изобретения, на данный момент описаны иллюстративные способы и материалы. Другие особенности, объекты и преимущества настоящего изобретения будут очевидны из описания и формулы изобретения. В описании и прилагаемой формуле изобретения формы единственного числа включают также множественное число, если из контекста явно не следует иное. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют такое же значение, как общедоступное обычному специалисту в области техники, к которой принадлежит это изобретение.
Краткое описание графических материалов
На фиг. 1А и 1В проиллюстрированы 13 консервативных аминокислот флагеллина, которые могут иметь важное значение для активности TLR5. На фиг. 1А и 1В проиллюстрировано сравнение аминокислотных последовательностей консервативных амино- (фиг. 1А) и карбоксиконцов (фиг. 1В) из 21 видов бактерий. 13 консервативных аминокислот, важных для активности TLR5, обозначены штриховкой. Аминокислотные последовательности идентифицируются их номерами доступа из TrEMBL (первая буква = Q) или Swiss-Prot (первая буква = Р).
На фиг. 2 проиллюстрированы данные ELISA для среднего ответа пяти групп мышей для лечения в момент времени 1 недели после бустера. На панели А проиллюстрировано общее количество IgG, на панели В проиллюстрировано IgG1, на панели С проиллюстрировано IgG2a, на панели D проиллюстрировано IgG2b, и на панели Е проиллюстрировано IgG3. Группы 1-5 определены в табл. В (пример 2): группа 1 также называется Необработанные; группа 2 также называется OVA; группа 3 также называется OVA + Квасцы; группа 4 также называется SA 1 мкг, и группа 5 также называется SA 10 мкг.
На фиг. 3 проиллюстрированы данные ELISA для среднего ответа пяти групп мышей для лечения в момент времени 2 недель после бустера. На панели А проиллюстрировано общее количество IgG, на панели В проиллюстрировано IgG1, на панели С проиллюстрировано IgG2a, на панели D проиллюстрировано IgG2b и на панели Е проиллюстрировано IgG3. Группы 1-5 определены в табл. В (пример 2): группа 1 также называется Необработанные; группа 2 также называется OVA; группа 3 также называется OVA + Квасцы; группа 4 также называется SA 1 мкг, и группа 5 также называется SA 10 мкг .
На фиг. 4 проиллюстрированы данные ELISA для среднего ответа пяти групп мышей для лечения в момент времени 4 недель после бустера. На панели А проиллюстрировано общее количество IgG, на панели В проиллюстрировано IgG1, на панели С проиллюстрировано IgG2a, на панели D проиллюстрировано IgG2b и на панели Е проиллюстрировано IgG3. Группы 1-5 определены в табл. В (пример 2): группа 1 также называется Необработанные; группа 2 также называется OVA; группа 3 также называется OVA + Квасцы; группа 4 также называется SA 1 мкг, и группа 5 также называется SA 10 мкг.
На фиг. 5 проиллюстрировано определение активности CBLB502/альгидрогель с использованием анализа активации NF-кВ на основе клеток. Препарат CBLB502/альгидрогель (5 мкг/100 мкл) и контроль альгидрогеля серийно разводили в среднем от 2000 до 13122000 раза в среде для анализа (2,6-0,0004 мкг/мл алюминия) и инкубировали с 293-hTLR5-LacZ клетками в течение 20 ч. Активность
- 2 037407 β-галактозидазы измеряли после добавления буфера для лизиса клеток и ONPG субстрата и выражали в виде оптической плотности при 414 нм (OD414).
На фиг. 6 проиллюстрирована активность индуцирования NF-kB CBLB502/альгидрогеля, составленного с различными CBLB502 дозами. 293-hTLR5-LacZ клетки инкубировали с суспензиями CBLB502/альгидрогеля, приготовленными с дозами CBLB502 в пределах от 2,5 до 0,00015 мкг/100 мкл, и разводили в 200 раз со средой. Активность фермента-репортера β-галактозидазы измеряли через 20 ч инкубации.
На фиг. 7 проиллюстрированы кривые титрования доза-реакция CBLB502/альгидрогеля, полученные от 293-hTLR5-LacZ репортерных клеток. CBLB502 абсорбировали на альгидрогеле в указанных дозах (20 мкг/100 мкл: верхняя панель, 0,31 мкг/100 мкл: средняя панель и 0,078 мкг/100 мкл: нижняя панель), серийно разводили со средой и анализировали вместе с растворимыми CBLB502 стандартами.
На фиг. 8 проиллюстрирована активность CBLB502/альгидрогеля (1 мкг /100 мкл дозы), который хранился при 4°С в течение 2 и 6 дней. Активность индуцирования NF-кВ измеряли с использованием анализа 293-hTLR5-LacZ репортерных клеток.
На фиг. 9 проиллюстрирована фармакокинетика CBLB502 в сыворотке мышей после подкожной инъекции в дозе 1 мкг CBLB502, адсорбированного на альгидрогеле 2%. На графике проиллюстрированы средние концентрации CBLB502 в сыворотке на группу и СОС (стандартную ошибку среднего значения) для каждого момента времени.
На фиг. 10 проиллюстрирована индукция KC, G-CSF и ИЛ-6 после подкожного введения в дозе 1 мкг CBLB502, адсорбированного на альгидрогеле 2%. Концентрации сыворотки цитокинов определяли с использованием R&D Systems DuoSet наборов DY453 (KC, верхняя панель), DY414 (G-CSF, средняя панель) и DY406 (ИЛ-6, нижняя панель). Графики иллюстрируют средние концентрации цитокина в сыворотке на группу и СОС (стандартную ошибку среднего значения) для каждого момента времени.
На фиг. 11 проиллюстрированы иммуностимулирующие эффекты 502 адъюванта. Продемонстрирован анти-МА IgG (мкг/ мл) ответ (панель А) и ответ антител анти-502 (группа В) с помощью ELISA для вакцины TT-SMA в присутствии и в отсутствие квасцов или энтолимода (вариирующего в диапазоне от 0 до 20 мкг) в объединенных сыворотках собирали на неделе 2,4 и 6 после первичной вакцинации. Данные представляют собой уровни антител в объединенных пробах из каждой группы (n=5/группа).
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение также основано частично на неожиданном открытии того, что средства на основе флагеллина, включая CBLB502, и любое из средств на основе флагеллина (например, средства, содержащие последовательности табл. 1, включая МХ-33), описанных в данном документе, могут быть смешаны с гелями или солями алюминия (и, необязательно, антигенами), в соотношениях значительно ниже нагрузочной/адсорбирующей емкости геля или соли алюминия (например, 1:500), и вызывают более обширный, более разнообразный, более сильный и более продолжительный иммуностимулирующий эффект, чем вакцина, содержащая только антиген и гель или соль алюминия и/или адъювант, содержащий только гель или соль алюминия. Авторы настоящего изобретения также неожиданно обнаружили, что иммуностимулирующий эффект может влиять как на TH1, так и на TH2-опосредованные составляющие иммунного ответа. Авторы настоящего изобретения также неожиданно обнаружили, что малые количества средств на основе флагеллина, включая CBLB502 и любое из средств на основе флагеллина (например, средств, содержащих последовательности табл. 1, включая МХ-33), по отношению к антигену, являются эффективными для иммуностимуляции.
В одном из аспектов настоящее изобретение относится к композиции вакцины, содержащей адъювант, содержащий средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия, и антиген, и, необязательно, дополнительный адъювант. В одном из аспектов настоящее изобретение относится к адъюванту, содержащему средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия.
В некоторых вариантах реализации описанная вакцина приводит к улучшению адъювантных свойств применительно к вакцине, содержащей только антиген и гель или соль алюминия. В различных вариантах реализации вакцина и/или адъювант, описанный в данном документе, вызывает более обширный, более разнообразный, более сильный и более продолжительный иммуностимулирующий эффект, чем вакцина, содержащая только антиген и гель или соль алюминия (или если сравнивать с вакциной, содержащей только антиген и средство на основе флагеллина), и/или адъювант, содержащий только гель или соль алюминия (или если сравнивать с адъювантом, содержащим только средство на основе флагеллина).
В некоторых вариантах реализации описанная вакцина и/или описанный адъювант вызывают иммуностимуляцию одного или нескольких из TH1- и TH2-опосредованных иммунных ответов. В некоторых вариантах реализации описанная вакцина и/или описанный адъювант вызывают иммуностимуляцию обоих TH1- и TH2-опосредованных иммунных ответов. В некоторых вариантах реализации описанная вакцина и/или описанный адъювант вызывают иммуностимуляцию THi-опосредованного иммунного ответа на уровнях выше, чем вакцина, содержащая только антиген и гель или соль алюминия, или адъювант, содержащий только гель или соль алюминия.
- 3 037407
Тн1-опосредованный иммунный ответ (или ответ типа 1) в основном включает в себя взаимодействие с макрофагами и CD8+ Т-клетками и может быть связан с продукцией γ-интерферона, ФНО-β, интерлейкина-2 и интерлейкина-10. TH1-опосредовαнный иммунный ответ стимулирует клеточную иммунную систему и обеспечивает максимальную убивающую эффективность макрофагов и пролиферацию цитотоксических CD8 Т-клеток. TH1-опосредованный иммунный ответ также стимулирует выработку опсонизирующих антител (например, IgG, IgM и IgA).
Цитокин типа 1 ИФН-γ повышает выработку интерлейкина-12 дендритных клеток и макрофагов, а также с помощью положительной обратной связи, ИЛ-12 стимулирует выработку ИФН-γ в Т-хелперах, стимулируя тем самым профиль TH1. Интерферон-γ также ингибирует выработку цитокинов, таких как интерлейкин-4, цитокина, связанного с ответом типа 2, и, таким образом, он также действует, чтобы сохранить свой собственный ответ.
TH2-опосредованный иммунный ответ (или ответ типа 2) в основном включает в себя взаимодействие с В-клетками, эозинофилами и тучными клетками и может быть связан с интерлейкином-4, интерлейкином-5, интерлейкином-6, интерлейкином-9, интерлейкином-10 и интерлейкином-13. TH2-опосредовαнный иммунный ответ стимулирует гуморальную иммунную систему и может стимулировать В-клетки к пролиферации, индуцировать В-клеточное переключение класса антител и увеличить выработку нейтрализующих антител (например, IgG, IgM и IgA, а также IgE антител). Другие функции ответа типа 2 включают стимуляцию своего собственного профиля, используя два разных цитокина. Интерлейкин-4 действует на Т-хелперы, чтобы стимулировать выработку цитокинов TH2 (включая самого себя, он является автоматически регулируемым), в то время как интерлейкин-10 (ИЛ-10) ингибирует различные цитокины, включая интерлейкин-2 и ИФН-γ в Т-хелперах и ИЛ-12 в дендритных клеток и макрофагах. Совместное действие этих двух цитокинов позволяет предположить, что как только Т-клетка решила производить эти цитокины, это решение сохраняется (а также вовлекает другие Т-клетки делать то же самое).
Разделение с медицинской точки зрения, кроме всего прочего и без желания привязываться к теории, соответствует тому факту, что квасцовые адъюванты эффективны только при индукции TH2-оπосредовaнного ответа, а не TH1-опосредовaнного ответа (см., например, Smith Korsholm, et al. Immunology. Jan 2010; 129(1): 75-86, содержание которых включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме).
В различных вариантах реализации стимуляцию TH1- и TH2-опосредовaнных иммунных ответов можно измерить с помощью анализов, известных в данной области, включая суррогатные анализы количества антител (например, ELISA и т.п.). Например, без желания привязываться к теории, IgG1 связан с ТН2-подо6ным ответом, в то время как TH1 ответ связан с индукцией IgG2a, IgG2b и IgG3 антител.
В некоторых вариантах реализации описанная вакцина и/или описанный адъювант вызывают увеличение титра одного или нескольких из IgG1, IgG2a, IgG2b и IgG3 антител (например, сравнительно с адъювантом, содержащим только гель или соль алюминия или средство на основе флагеллина, или сравнительно с вакциной, содержащей только антиген и гель или соль алюминия (или средство на основе флагеллина)). В некоторых вариантах реализации описанная вакцина и/или описанный адъювант вызывают относительное увеличение титра всех IgG1, IgG2a, IgG2b и IgG3 антител. В некоторых вариантах реализации описанная вакцина и/или описанный адъювант вызывают относительное увеличение титра IgG3 антител более, чем описанная вакцина и/или описанный адъювант при отсутствии средства на основе флагеллина (или описанная вакцина и/или описанный адъювант при отсутствии только геля или соли алюминия).
Соответственно, в некоторых вариантах реализации описанная вакцина и/или описанный адъювант вызывают разнообразный иммунный ответ. Например, в некоторых вариантах реализации общее количество IgG, выработанного с помощью описанных вакцин и/или адъювантов, составляет больше, чем с помощью описанных вакцин и/или адъювантов без средства на основе флагеллина.
В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина может представлять собой молекулу флагеллина или полипептид, связанный с флагеллином, или их варианты, которые имеют активность агониста TLR5. Средство на основе флагеллина может быть из различных источников, включая различные грамположительные и грамотрицательные виды бактерий. В некоторых вариантах реализации средства на основе флагеллина могут иметь аминокислотную последовательность, которая получена от любого из флагеллинов из видов бактерий, которые описаны ниже, например на фиг. 7 публикации патента США № 2003/0044429, содержание которых включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме. Средство на основе флагеллина может иметь нуклеотидные последовательности, связанные с теми, которые кодируют полипептиды флагеллина, перечисленные, например, на фиг. 7 в публикации патента США № 2003/0044429, которые публично доступны в источниках, включая базу данных NCBI Genbank.
Средство на основе флагеллина может быть основным компонентом бактериального жгутика. Средства на основе флагеллина могут состоять из одного, или двух, или трех, или четырех, или пяти, или шести, или семи доменов или их фрагментов (см., например, фиг. 10 публикации патента США
- 4 037407 № 8324163, содержание которых включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме). Домены могут быть выбраны из ND0, ND1, ND2, D3, CD2, CD1 и CD0. Домены 0 (D0), 1 (D1) и 2 (D2) могут быть прерывистыми и могут быть образованы, когда в амино- и карбоксиконце остатки сопоставляются путем формирования шпилечной структуры. Амино- и карбоксиконец, содержащие домены D1 и D2, могут быть наиболее консервативными, в то время как средний гипервариабельный домен (D3) может сильно варьировать. Неконсервативный домен D3 может быть на поверхности флагеллярной нити и может содержать основные антигенные эпитопы. Мощная провоспалительная активность флагеллина может осуществляться высококонсервативными N и CD 1 и D2 участками.
Средства на основе флагеллина могут быть из видов сальмонеллы, представительными примерами которых являются S. Typhimurium и S. dublin (кодируемый номером доступа GenBank M84972). Полипептид, связанный с флагеллином, может быть фрагментом, вариантом, аналогом, гомологом или производным от флагеллина дикого типа (SEQ ID NO: 1) или их комбинацией. Фрагмент, вариант, аналог, гомолог или производное флагеллина могут быть получены с помощью рационального проектирования на основе доменной структуры флагеллина и консервативной структуры, которая узнается TLR5.
Средство на основе флагеллина может быть связано с полипептидом флагеллина из любых видов грамположительных или грамотрицательных бактерий, включая, но не ограничиваясь ими, полипептиды флагеллина, раскрытые в патенте США. Pub. 2003/0044429, содержание которого включено в данный документ, и пептиды флагеллина, соответствующие регистрационным номерам, перечисленным в результатах BLAST, проиллюстрированных на фиг. 7 (панели A-F) публикации патента США 2003/0044429, или их варианты.
В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина содержит или состоит из любых полипептидов или нуклеиновых кислот, кодирующих упомянутые полипептиды, перечисленные в табл. 1. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина кодируется последовательностями нуклеотидов, перечисленными в табл. 1. В дополнительном варианте реализации средство на основе флагеллина содержит полипептиды, перечисленные в табл. 1. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина содержит одну или несколько из SEQ ID NO: 1-252. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина содержит гибкий линкер. В дополнительном варианте реализации гибкий линкер содержит SEQ ID NO: 16. В еще одном дополнительном варианте реализации гибкий линкер содержит SEQ ID NO: 242.
В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина представляет собой вариант SEQ ID NO: 1. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина не является вариантом SEQ ID NO: 1.
В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина содержит или состоит из CBLB502 (SEQ ID NO: 2) или варианта CBLB502 (SEQ ID NO: 2). В различных вариантах реализации CBLB502 обеспечивает преимущество, в частности удаления эпитопов, которые приводят к генерации нейтрализирующих антител против флагеллина и, следовательно, предусматривают неожиданные свойства адъюванта, рассмотренные в данном документе в комбинации с квасцами.
В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина содержит мутации в эпитопах, распознаваемых нейтрализующими антителами против CBLB502. Средство на основе флагеллина может содержать одну или несколько мутаций в эпитопах, распознаваемых нейтрализующими антителами против CBLB502, которые ингибируют или аннулируют способность антител нейтрализовать композицию. В еще одном дополнительном варианте реализации средство на основе флагеллина содержит укорачивание и мутации в одном или нескольких эпитопах. В еще одном варианте реализации мутации содержат замену остатков эпитопа на аланин. В еще одном варианте реализации мутированные эпитопы содержат один или несколько из следующих остатков: Е153, S444, Т154, N440, Q142, F131, D443, N68, Т447, S110, Q117, R124, D113, Е120, N127 и Q128.
Средство на основе флагеллина может содержать инсерции, делеции, инсерции транспозона и изменения в любом одном из D0, D1, D2 и вариабельных доменов D3. Домен D3 может быть заменен частично или полностью с шарнирным или линкерным полипептидом, который позволяет доменам D1 и D2 правильно складываться таким образом, что вариант стимулирует TLR5 активность.
В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина может быть минимальным функциональным ядром флагеллина, например удаляя остатки по отношению к уже укороченной молекуле CBLB502. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина имеет измененную аминокислотную идентичность по сравнению с диким типом, включая делеции, вставки и замены, которые обеспечивают улучшенную активность. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина происходит от CBLB502 (SEQ ID NO: 2). В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина содержит укорачивание в одном или нескольких доменах.
В дополнительном варианте реализации средство на основе флагеллина содержит делецию в N-концевом домене. В еще одном дополнительном варианте реализации средство на основе флагеллина содержит делецию в домене ND0. В еще одном дополнительном варианте реализации средство на основе флагеллина содержит делецию целого домена ND0. В дополнительном варианте реализации средство на основе флагеллина содержит делецию в С-концевом домене. В еще одном другом варианте реализации
- 5 037407 средство на основе флагеллина содержит делецию в домене CD0. В еще одном другом варианте реализации в средстве на основе флагеллина остаются аминокислоты 470-485 домена CD0. В еще одном дополнительном варианте реализации средство на основе флагеллина представляет собой CBLB502-S33 (SEQ ID NO: 17).
Средство на основе флагеллина может содержать по меньшей мере 10, 11, 12 или 13 из 13 консервативных аминокислот, проиллюстрированных на фиг. 1А и 1В (позиции 89, 90, 91, 95, 98, 101, 115, 422, 423, 426, 431, 436 и 452). Флагеллин может быть по меньшей мере на 30-99% идентичным к аминокислотам 1-174 и 418-505 SEQ ID NO: 1.
В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина содержит метку. В еще одном дополнительном варианте реализации метка прикреплена к N-терминали средства на основе флагеллина. В еще одном дополнительном варианте реализации метка прикреплена к С-терминали средства на основе флагеллина.
В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина содержит гибкий линкер. В дополнительном варианте реализации гибкий линкер содержит SEQ ID NO: 16. В еще одном дополнительном варианте реализации гибкий линкер содержит SEQ ID NO: 242.
В различных вариантах реализации средство на основе флагеллина представляет собой одну или несколько из композиций, связанных с флагеллином, происходящих от SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина представляет собой один или несколько из CBLB502-S33ML (SEQ ID NO: 35), CBLB502-485СТ (CBLB533, SEQ ID NO: 71) и CBLB502-S33MX (SEQ ID NO: 150).
В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина представляет собой производное флагеллина из термофильного микроорганизма. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина представляет собой производное флагеллина из микроорганизма, хорошо переносимого человеком. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина представляет собой одну или несколько из SEQ ID NO: 243-252.
В некоторых вариантах реализации вариант включает молекулы, которые имеют активность агониста TLR5. В некоторых вариантах реализации вариант включает молекулы, содержащие аминокислотную последовательность по меньшей мере с около 70% (например, около 70%, или около 71%, или около 72%, или около 73%, или около 74%, или около 75%, или около 76%, или около 77%, или около 78%, или около 79%, или около 80%, или около 81%, или около 82%, или около 83%, или около 84%, или около 85%, или около 86%, или около 87%, или около 88%, или около 89%, или около 90%, или около 91%, или около 92%, или около 93%, или около 94%, или около 95%, или около 96%, или около 97%, или около 98%, или около 99%) идентичности последовательности с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2.
В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина содержит или состоит из любых полипептидов или нуклеиновых кислот, кодирующих упомянутые полипептиды, перечисленные в табл. 1. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина кодируется последовательностями нуклеотидов, перечисленными в табл. 1. В дополнительном варианте реализации средство на основе флагеллина содержит один или несколько полипептидов, перечисленных в табл. 1. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина содержит или состоит из полипептидов, кодируемых либо SEQ ID NO: 69 или 70. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина содержит или состоит из полипептидов SEQ ID NO: 71, CBLB543. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина содержит или состоит из полипептидов, кодируемых либо SEQ ID NO: 149, либо 151. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина содержит или состоит из полипептидов SEQ ID NO: 150, CBLB533.
- 6 037407
Иллюстративные средства на основе флагеллина
Таблица 1
SEQ ID NO Название конструкта ДНК/ Белок Виды Последовательность
0001 Дикий тип Белок Salmonella dublin MAQVINTNSLSLLTQNNLNKSQSSLSSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIA NRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATN GTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGAN DGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNGPKEATVGDLKSSFKNVTGYDTYAA GADKYRVDINSGAVVTDAAAPDKVYVNAANGQLTTDDAENNTAVDLF KTTKSTAGTAEAKAIAGAIKGGKEGDTFDYKGVTFTIDTKTGDDGNGKV STTINGEKVTLTVADIATGAADVNAATLQSSKNVYTSVVNGQFTFDDKT KNESAKLSDLEANNAVKGESKITVNGAEYTANATGDKITLAGKTMFIDK TASGVSTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSA ITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQ VPQNVLSLLR
0002 CBLB502 Белок Искусственн ая последовател ьность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDDDDKDPMAQVINTNSLSLLT QNNLNKSQSSLSSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQAS RNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEI QQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVK SLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSAL SKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNM SKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLR
0003 Промотор Т7 (прямой) ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGG
0004 FliC АА74-80 (прямой) ДНК Искусственн ая последовател ьность ATTGCGCAGACCACTGAAGG
0005 Сайт расщепления тромбина Белок Искусственн ая последовател ьность LVPRGS
0006 Сайт расщепления энтерокиназы Искусственн ая последовател ьность DDDDK
0007 NS (Nтерминальный участок-спица; Ser32 - А1а44) Белок Искусственн ая последовател ьность SSGLRINSAKDDA
0008 CS (Стерминальный участок-спица; от Glu464 до А1а469) Белок Искусственн ая последовател ьность EDADYA
0009 линкер Белок Искусственн ая последовател ьность AASAGAGQGGGGSG
0010 линкер Белок Искусственн ая последовател ьность EGKSSGSGSESKST
ООН линкер Белок Искусственн ая последовател ьность GGGRT S S S AASAGAGQGGGGSG
0012 линкер Белок Искусственн ая последовател ьность GPSG
- 7 037407
0013 линкер Белок Искусственн ая последовател ьность GSAGSAAGSGEF
0014 линкер Белок Искусственн ая последовател ьность GSPG
0015 линкер Белок Искусственн ая последовател ьность KESGSVSSEQLAQFRSLD
0016 линкер Белок Искусственн ая последовател ьность SPGISGGGGGILDSMG
0017 Мутант 33-485 Мутант S33 Белок Искусственн ая последовател ьность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPSGLRINSAKD DAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVR ELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQ MKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTL INEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTV TNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSL LR
0018 Мутант 33-485 Прямой праймер CBLB485 ДНК Искусственн ая последовател ьность GCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTTGATAATCTGGCGCAGGCTAACCAG G
0019 Мутант 33-485 502 матричная последовательност Днк Искусственн ая последовател ьность TCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAG GCTAACCAGGTT
0020 Мутант 33-485 ДНК Искусственн CCTGGTTAGCCTGCGCCAGATTATCAACCAGCCTGCTGCAGAATCTGC
0021 0022 Обратный праймер CBLB485 Мутант 33-485 последовательност ь ДНК мутанта 485 (промотор Т7 для остановки) Мутант 33-485 Экспрессированны й мутант 33-485 Днк Белок ая последовател ьность Искусственн ая последовател ьность Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAG CAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTCCGCGCGGTAGCGCGAA GGATCCGTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAG GCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTC AGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTG AAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAG TTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAA TCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTT TCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAAC CAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCAT CGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAA TGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTC CATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTA CCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACG CAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCAT TACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCG TATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGC GCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTTGATAA MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPSGLRINSAKD DAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVR ELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQ MKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTL INEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTV TNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAG
0023 Мутант 45СТ Мутант 506Т Белок Искусственн ая последовател MAQVINTNSLSLLTQNNLNKSQSSLSSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIA NRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATN GTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGAN
- 8 037407
ьность DGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAA KKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARS RIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHGMASMTGGQQMGRDLYDDDDKDP
0024 Мутант 45СТ Мутант 506Т ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCAGAAT AACCTGAACAAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGAGCGTCTG TCCTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTAT CCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGA TGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATC TGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTA ATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGG GTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCT AACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTT CGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACC AACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATC GAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCA GATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGT TCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCAT CATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCG GGATCTGTACGACGATGACGATAAGGATCCGTAAGTCGACAAGCTTG CG
0025 Мутант 45СТ Прямой F45CT ДНК Искусственн ая последовател ьность CGAAAGACCATATGGCAGGCCAGGCGATTGC
0026 Мутант 45СТ Обратный R45CT ДНК Искусственн ая CGCAAGCTTGTCGACTTACGGATCCTTATCGTC
последовател ьность
0027 Мутант 45СТ Последовательност ь конструкта 45СТ ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGGCAGG CCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCA GGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGA AGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGT TGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAAT CTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTT CTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACC AGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAAT GTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCC ATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTAC CGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGC AGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATT ACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGT ATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCG CAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAG GTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATC ATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTC GGGATCTGTACGACGATGACGATAAGGATCCGTAAGTCGAC
0028 Мутант 45СТ Экспрессированны й мутант 45СТ Белок Искусственн ая последовател ьность MAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRE LSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQM KIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLI NEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTV TNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSL LVPRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDDDDKDP
0029 Мутант 33GPS Экспрессированны й мутант 33 ML ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC
- 9 037407
TGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTAT CGGACCATCAGGTCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCG ATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTC AGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACC ATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGAT GGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCA ATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGG GCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACG GTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTAT GCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCT GGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTC TCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0030 Мутант 33GPS Экспрессированны й мутант 33 ML Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIGPSGQDEIQQRLEEIDRVSNQ TQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPG STANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIE DADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHH HHG
0031 Мутант 33GPS Прямой праймер FSY3CT ДНК Искусственн ая последовател ьность GATATACATATGAGCGGGTTACGGATCAACAG
0032 Мутант 33GPS Обратный праймер RMIMxN ДНК Искусственн ая последовател ьность AGATCTCCCGGGGAATTAACATTGAACCC
0033 Мутант 33GPS Последовательност ь ДНК мутанта 33GPS ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC
0034 0035 0036 Мутант 33GPS Экспрессированны й мутант 33GPS Мутант 33 ML Мутант 33 СТ (фиксированный А) Мутант 33 ML Мутант 33 СТ (фиксированный А) Белок Белок ДНК Искусственн ая последовател ьность Искусственн ая последовател ьность Искусственн ая последовател ьность CACTGGACCATCAGGTGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATC GCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGG ACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATT ACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGG TTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATT GATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCA ATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTA ACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCA ACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGT ACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCT TTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCG АС MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATGPSGEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDN QMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALS KVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMS KAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGG GGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNR FDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQ ANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTAT CCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGA TGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATC TGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTA
- 10 037407
ATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGG GTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCT AACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTT CGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACC AACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATC GAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCA GATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGT TCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCAT CATCATCATGGTTAA
0037 Мутант 33 ML Прямой праймер F502ML ДНК Искусственн ая последовател ьность TCTAGACCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTG
0038 Мутант 33 ML Обратный праймер R33CT ДНК Искусственн ая последовател ьность CCAGTCATGTCGACTTAACCATGATGATGATGATGATGAG
0039 Мутант 33 ML 502 матричная последовательност ь ДНК Искусственн ая последовател ьность CTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGACAAGCTTGCGGCCGCAG AGCTCGC
0040 Мутант 33 ML конструкт 33ML ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG
AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0041 Мутант 33 ML Экспрессированны й мутант 33 ML ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTAT CCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGA TGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATC TGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTA ATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCAT TGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACC GCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGA ACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTT CTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTC TGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTC CGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0042 Мутант 33 ML Мутант 33 ML Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0043 Мутант 37СТ дельта ND0 мутант на основе CBLB506T ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCAGAAT AACCTGAACAAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGAGCGTCTG TCCTCTGGTCTGCGTATCAACGGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC
- 11 037407
TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTAT CCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGA TGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATC TGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTA ATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGG GTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCT AACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTT CGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACC AACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATC GAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCA GATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGT TCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCAT CATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAGCAAATGGGTCG GGATCTGTACGACGATGACGATAAGGATCCGTAAGTCGACAAGCTTG CG
0044 Мутант 37СТ дельта ND0 мутант на основе CBLB506T Белок Искусственн ая последовател ьность MAQVINTNSLSLLTQNNLNKSQSSLSSAIERLSSGLRINGAKDDAAGQAIA NRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATN GTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGAN DGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAA KKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARS RIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHH HHHHGMASMTGGQQMGRDLYDDDDKDP
0045 Мутант 37СТ Прямой F37CT ДНК Искусственн ая последовател ьность CTCTGGTCATATGATCAACAGCGCGAAAGACGATGC
0046 Мутант 37СТ Обратный R37CT ДНК Искусственн ая последовател TCTAGAGTCGACTATTAAGCCATACCATGATGATGATGATGATGAG
ьность
0047 Мутант 37СТ конструкт 37СТ ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGATCAA CAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCA CTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACG GCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACA ACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGA CTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAAC GTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTG TTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTA ACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAA AGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGT GGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGAC GCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGAT TCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATT CAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACC AATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACG GAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACT TCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTA CTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTTAAT AGTCGAC
0048 Мутант 37СТ Мутант 37СТ Белок Искусственн ая последовател ьность MINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINN NLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKV LSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGIL DSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAIT NLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVP QNVLSLLVPRGSHHHHHHGMA
0049 Мутант 445 502-SY1 Белок Искусственн ая последовател ьность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPMAQVINTNSL SLLTQNNLNKSQS SLS S AIERLS SGLRINS AKDD AAGQ AIANRFTSNIKGLT QASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSI QDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQK IDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASI
- 12 037407
DSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYATE VSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLR
0050 Мутант 445 502-SY1 ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACT GGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTCCGCGCGG TAGCGCGAAGGATCCGATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGT CGCTGTTGACCCAGAATAACCTGAACAAATCTCAGTCCTCACTGAGTT CCGCTATTGAGCGTCTGTCCTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAG ACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCA AAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTG CGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAG CGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGAT TCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGA AATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCT GTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTG AAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCC TTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTG GAATTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAG CCAAGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGT CAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTT TTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACT CCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTA ATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGG CGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAA
0051 Мутант 445 Прямой праймер CBLB445 ДНК Искусственн ая последовател ьность GGCAATTCAAAACCGTTTTGATTAAGCCATTACCAACCTTGG
0052 Мутант 445 Обратный праймер CBLB445 ДНК Искусственн ая последовател ьность CCAAGGTTGGTAATGGCTTAATCAAAACGGTTTTGAATTGCC
0053 Мутант 445 ДНК Искусственн TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC
Мутант 445 ая последовател ьность TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAG CAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTCCGCGCGGTAGCGCGAA GGATCCGATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGAC CCAGAATAACCTGAACAAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGA GCGTCTGTCCTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGC AGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGAC TCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCAC TGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTG AGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGA AATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGC GTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGAC AACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTAC CATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTT CAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGA CTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAA GTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGG ACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTAA
0054 Мутант 445 Мутант 445 Белок Искусственн ая последовател ьность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPMAQVINTNSL SLLTQNNLNKSQSSLSSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLT QASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSI QDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQK IDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASI DSALSKVDAVRSSLGAIQNRFD
0055 Мутант 461 Прямой праймер CBLB461 ДНК Искусственн ая последовател ьность CAATCTGAACTCCGCGCGTTGACGTATCTAAGATGCTGACTATGC
0056 Мутант 461 Обратный праймер CBLB461 ДНК Искусственн ая последовател ьность GCATAGTCAGCATCTTAGATACGTCAACGCGCGGAGTTCAGATTG
- 13 037407
0057 0058 0059 0060 Мутант 461 Мутант 461 Мутант 461 Мутант 461 Мутант 467 Прямой праймер CBLB467 Мутант 467 ДНК Белок ДНК ДНК Искусственн ая последовател ьность Искусственн ая последовател ьность Искусственн ая последовател ьность Искусственн TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAG CAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTCCGCGCGGTAGCGCGAA GGATCCGATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGAC CCAGAATAACCTGAACAAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGA GCGTCTGTCCTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGC AGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGAC TCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCAC TGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTG AGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGA AATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGC GTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGAC AACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTAC CATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTT CAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGA CTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAA GTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGG ACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAG CCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTT GACGTATCTAA MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPMAQVINTNSL SLLTQNNLNKSQS SLS SAIERLS SGLRINSAKDDAAGQ AIANRFTSNIKGLT QASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSI QDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQK IDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASI DSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSAR CGTAGCCGTATCGAAGATGCTTAATAGGCAACGGAAGTTTCTAATATG CATATTAGAAACTTCCGTTGCCTATTAAGCATCTTCGATACGGCTACG
Обратный праймер CBLB467 ая последовател ьность
0061 Мутант 467 Мутант 467 ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAG CAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTCCGCGCGGTAGCGCGAA GGATCCGATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGAC CCAGAATAACCTGAACAAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGA GCGTCTGTCCTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGC AGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGAC TCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCAC TGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTG AGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGA AATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGC GTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGAC AACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTAC CATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTT CAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGA CTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAA GTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGG ACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAG CCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTA GCCGTATCGAAGATGCTTAATAG
0062 Мутант 467 Мутант 467 Белок Искусственн ая последовател ьность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPMAQVINTNSL SLLTQNNLNKSQSSLSSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQ AIANRFTSNIKGLT QASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSI QDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQK IDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASI DSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDA
0063 Мутант 470СТ CBLB502 ДНК Искусственн ая ATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACT GGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACGATGACGATAAGGA
- 14 037407
0064 0065 0066 Мутант 470СТ Прямой праймер F470CT Мутант 470СТ Обратный праймер R470CT Мутант 470СТ Мутант 470СТ ДНК ДНК ДНК последовател ьность Искусственн ая последовател ьность Искусственн ая последовател ьность Искусственн ая последовател ьность TCCGATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCA GAATAACCTGAACAAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGAGCG TCTGTCCTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGG CCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCA GGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGA AGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGT TGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAAT CTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTT CTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACC AGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAAT GTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCC ATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTAC CGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGC AGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATT ACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGT ATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCG CAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAG GTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAA CGATAAGGATCATATGGCACAAGTCATTAATAC AGATCTGTCGACTTAACCATGATGATGATGATGATGAGAACCCCGCG GAACCAGTGCATAGTCAGCATCTTCGATACG TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGGCACAA GTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCAGAATAACCTGAAC AAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGAGCGTCTGTCCTCTGGTC TGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCT
AACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAAC GCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAAT GAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCC ACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAA ATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAA TTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAG GTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATT GATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGA ATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGGGTACATTAATC AATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGC TTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTG GGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAAT ACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGA CTATGCACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTA AGTCGAC
0067 Мутант 470СТ Мутант 470СТ Белок Искусственн ая последовател ьность MAQVINTNSLSLLTQNNLNKSQSSLSSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIA NRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATN GTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGAN DGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAA KKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARS RIEDADYALVPRGSHHHHHHG
0068 Мутант 485СТ Обратный праймер R485MC ДНК Искусственн ая последовател ьность AGATCTCCGCGGAACCAGACCAGCCTGCTGCAGAATCTGC
0069 Мутант 485СТ Последовательност ь ДНК485СТ ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA
- 15 037407
0070 0071 0072 Мутант 485СТ Мутант 485СТ Мутант 485СТ Мутант 485СТ Мутант 485D Матричная ДНК ДНК Белок ДНК Искусственн ая последовател ьность Искусственн ая последовател ьность Искусственн ая AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGC AAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTCTGGTTCCGCGGGGTTCTCA TCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTAT CCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGA TGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATC TGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTA ATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCAT TGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACC GCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGA ACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTT CTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTCTGGTTCCGC GGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YATEVSNMSKAQILQQAGLVPRGSHHHHHHG AACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTT CGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACC
для мутаций делеций из варианта мутанта 485СТ последовател ьность GCCCTTGGCAATACGGTAACCAAT
0073 Мутант 485D Последовательност ь белка для мутаций делеций из варианта мутанта 485СТ Белок Искусственн ая последовател ьность NPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITALGNTVTN
0074 Мутант 485D Прямой праймер F485D ДНК Искусственн ая последовател ьность GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTGATTCAGCCATTACCGCCCTTG
0075 Мутант 485D Обратный праймер R485D ДНК Искусственн ая последовател ьность CAAGGGCGGTAATGGCTGAATCAATTGCCCCCAGAGAAGAACGAAC
0076 Мутант 485D Последовательност ь ДНК конструкта 485CT_Delta ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGC AAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTGATTCAGCCATTACCGC CCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGA
- 16 037407
AGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGAT TCTGCAGCAGGCTGGTCTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCA TCATGGTTAAGTCGAC
0077 Мутант 485D Мутант 485D (CT Delta 439-442) Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIDSAITALGNTVTNLNSARSRIEDADYATE VSNMSKAQILQQAGLVPRGSHHHHHHG
0078 Мутант CGD1 Мутант SY3CT ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTAT CCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGA TGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATC TGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTA ATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCAT TGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACC GCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGA ACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACTGGTTCCGC GGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0079 Мутант CGD1 Мутант SY3CT Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YALVPRGSHHHHHHG
0080 Мутант CGD1 GFPuv4 ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGTAAAGGAGAAGAACTTTTCACTGGAGTTGTCCCAATTCTTGTT GAATTAGATGGTGATGTTAATGGGCACAAATTTTCTGTCAGTGGAGAG GGTGAAGGTGATGCAACATACGGAAAACTTACCCTTAAATTTATTTGC ACTACTGGAAAACTACCTGTTCCATGGCCAACACTTGTCACTACTCTG ACGTATGGTGTTCAATGCTTTTCCCGTTATCCGGATCATATGAAACGG
CATGACTTTTTCAAGAGTGCCATGCCCGAAGGTTATGTACAGGAACGC ACTATATCTTTCAAAGATGACGGGAACTACAAGACGCGTGCTGAAGT CAAGTTTGAAGGTGATACCCTTGTTAATCGTATCGAGTTAAAAGGTAT TGATTTTAAAGAAGATGGAAACATTCTCGGACACAAACTCGAGTACA ACTATAACTCACACAATGTATACATCACGGCAGACAAACAAAAGAAT GGAATCAAAGCTAACTTCAAAATTCGCCACAACATTGAAGATGGATC CGTTCAACTAGCAGACCATTATCAACAAAATACTCCAATTGGCGATGG CCCTGTCCTTTTACCAGACAACCATTACCTGTCGACACAATCTGCCCTT TTGAAAGATCCCAACGAAAAGCGTGACCACATGGTCCTTCTTGAGTTT GTAACTGCTGCTGGGATTACACATGGCATGGATGAACTATACAAA
0081 Мутант CGD1 GFPuv4 Белок Искусственн ая последовател ьность MSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTT GKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKRHDFFKSAMPEGYVQERTIS FKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSH NVYITADKQKNGIKANFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDN HYLSTQSALLKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITHGMDELYK
0082 Мутант CGD1 Мутация GFPuv4 сайта Ndel дикого типа ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGTAAAGGAGAAGAACTTTTCACTGGAGTTGTCCCAATTCTTGTT GAATTAGATGGTGATGTTAATGGGCACAAATTTTCTGTCAGTGGAGAG GGTGAAGGTGATGCAACATACGGAAAACTTACCCTTAAATTTATTTGC ACTACTGGAAAACTACCTGTTCCATGGCCAACACTTGTCACTACTCTG ACGTATGGTGTTCAATGCTTTTCCCGTTATCCGGATCACATGAAACGG CATGACTTTTTCAAGAGTGCCATGCCCGAAGGTTATGTACAGGAACGC ACTATATCTTTCAAAGATGACGGGAACTACAAGACGCGTGCTGAAGT CAAGTTTGAAGGTGATACCCTTGTTAATCGTATCGAGTTAAAAGGTAT TGATTTTAAAGAAGATGGAAACATTCTCGGACACAAACTCGAGTACA ACTATAACTCACACAATGTATACATCACGGCAGACAAACAAAAGAAT GGAATCAAAGCTAACTTCAAAATTCGCCACAACATTGAAGATGGATC CGTTCAACTAGCAGACCATTATCAACAAAATACTCCAATTGGCGATGG CCCTGTCCTTTTACCAGACAACCATTACCTGTCGACACAATCTGCCCTT TTGAAAGATCCCAACGAAAAGCGTGACCACATGGTCCTTCTTGAGTTT GTAACTGCTGCTGGGATTACACATGGCATGGATGAACTATACAAATA А
0083 Мутант CGD1 ДНК Искусственн TCTAGACGGCCGATCTCAGGTAAGAATGGAATCAAAGCTAACTTCAA
- 17 037407
Прямой праймер FCGFP ая последовател ьность AATTCGC
0084 Мутант CGD1 Измененная белковая последовательност ь GFPuv4 Белок Искусственн ая последовател ьность NVYIPISGKNGIKANFKIRH
0085 Мутант CGD1 Обратный RCGFP ДНК Искусственн ая последовател ьность AGATCTCCGCGGTTTGTATAGTTCATCCATGCCATGTGTAATCCC
0086 Мутант CGD1 Последовательност ь ДНК конструкта CGD1 ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACTGGTTCCGCCGATCTCAGG TAAGAATGGAATCAAAGCTAACTTCAAAATTCGCCACAACATTGAAG ATGGATCCGTTCAACTAGCAGACCATTATCAACAAAATACTCCAATTG GCGATGGCCCTGTCCTTTTACCAGACAACCATTACCTGTCGACACAAT CTGCCCTTTTGAAAGATCCCAACGAAAAGCGTGACCACATGGTCCTTC TTGAGTTTGTAACTGCTGCTGGGATTACACATGGCATGGATGAACTAT
ACAAACCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0087 Мутант CGD1 Экспрессированны й мутант CGD1 ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTAT CCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGA TGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATC TGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTA ATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCAT TGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACC GCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGA ACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACTGGTTCCGC CGATCTCAGGTAAGAATGGAATCAAAGCTAACTTCAAAATTCGCCAC AACATTGAAGATGGATCCGTTCAACTAGCAGACCATTATCAACAAAA TACTCCAATTGGCGATGGCCCTGTCCTTTTACCAGACAACCATTACCT GTCGACACAATCTGCCCTTTTGAAAGATCCCAACGAAAAGCGTGACC ACATGGTCCTTCTTGAGTTTGTAACTGCTGCTGGGATTACACATGGCA TGGATGAACTATACAAACCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATG GTTAA
0088 Мутант CGD1 Экспрессированны й мутант CGD1 Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YALVPPISGKNGIKANFKIRHNIEDGSVQLADHYQQNTPIGDGPVLLPDNH YLSTQSALLKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITHGMDELYKPRGSHHHHH HG
0089 Мутант СРМ194 Мутант СРМ194 ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAA GTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGAT TCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCG CGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCATCCCCGGGAAGCGGGTT
- 18 037407
ACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTA ACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACG CTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATG AAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCA CTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAA TTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAAT TTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAG GTTGGTGCTAACGATGGTCTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCAT CATCATGGTTAA
0090 Мутант СРМ194 Мутант СРМ194 Белок Искусственн ая последовател ьность MSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSR IEDADYASPGSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISI AQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDR VSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGLVPRGSHHHHHHG
0091 Мутант СРМ194 Мутант СРМ194 ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGTACC GCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTA CCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTA TCGAAGATGCTGACTATGCATCCCCGGGAAGCGGGTTACGGATCAAC AGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCAC TTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGG CATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAA CAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGAC TAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACG TCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGT TAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTA ACGATGGTCTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTT AAGTCGAC
0092 Мутант СРМ194 Прямой праймер FCD1 Днк Искусственн ая последовател ьность TCTAGACATATGAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTG
0093 Мутант СРМ194 Обратный праймер RCD1J Днк Искусственн ая последовател ьность GCTTCCCGGGGATGCATAGTCAGCATCTTCGATACGGC
0094 Мутант СРМ194 Прямой праймер FND1J Днк Искусственн ая последовател ьность GCATCCCCGGGAAGCGGGTTACGGATCAACAGCG
0095 Мутант СРМ194 Обратный праймер RND1 Днк Искусственн ая последовател ьность AGATCTCCGCGGAACCAGACCATCGTTAGCACCAACCTGGATTTTCAT СТ
0096 Мутант СРМ217 Мутант СРМ217 Днк Искусственн ая последовател ьность ATGAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAA GTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGAT TCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCG CGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCATCCCCGGGAAGCGGGTT ACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTA ACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACG CTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATG AAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCA CTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAA TTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAAT TTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAG GTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATT GATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATCTGGTTCCG CGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0097 Мутант СРМ217 Мутант СРМ217 Белок Искусственн ая последовател ьность MSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSR IEDADYASPGSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISI AQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDR VSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFN VNLVPRGSHHHHHHG
0098 Мутант СРМ217 Днк Искусственн TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC
- 19 037407
0099 0100 0101 0102 0103 Мутант СРМ217 Мутант СРМ217 Обратный праймер RCPM217 Мутант GD1G Прямой праймер FGFP77 Мутант GD1G Обратный праймер RGFP77 Мутант GD1G FGFP54 Мутант GD1G ДНК ДНК ДНК ДНК ДНК ая последовател ьность Искусственн ая последовател ьность Искусственн ая последовател ьность Искусственн ая последовател ьность Искусственн ая последовател ьность Искусственн TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGTACC GCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCA GTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTA CCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTA TCGAAGATGCTGACTATGCATCCCCGGGAAGCGGGTTACGGATCAAC AGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCAC TTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGG CATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAA CAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGAC TAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACG TCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGT TAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTA ACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAA AGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATCTGGTTCCGCGGGGTTCT CATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC AGATCTCCGCGGAACCAGATTAACATTGAACCCATCAAGGCCAAG CCCGTTATCCGGATCACATGAAACGGCATGACTTTTTC GAAAAAGTCATGCCGTTTCATGTGATCCGGATAACGGG CTGTTCCATGGCCAACACTTG TCTAGACATATGAGTAAAGGAGAAGAACTTTTCACTGGAGTTGTCC
Прямой праймер FNGFP ая последовател ьность
0104 Мутант GD1G Измененная последовательност ь ДНКОРР ДНК Искусственн ая последовател ьность GGCCTATGCGGCCGCAGTAAAGGAGAAGAACTTTTCACTGGAGTTGT CCCAATTCTTGTTGAA
0105 Мутант GD1G Обратный RNGFP ДНК Искусственн ая последовател ьность AGATCTATTAATGCGGCCTGATAGGCCTTGTTTGTCTGCCGTGATGTA TACATTGTG
0106 Мутант GD1G Измененная последовательност ь белка GFP Белок Искусственн ая последовател ьность SHNVYITADKQGLSGRNM
0107 Мутант GD1G Последовательност ь ДНК конструкта GD1G ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGTAAA GGAGAAGAACTTTTCACTGGAGTTGTCCCAATTCTTGTTGAATTAGAT GGTGATGTTAATGGGCACAAATTTTCTGTCAGTGGAGAGGGTGAAGG TGATGCAACATACGGAAAACTTACCCTTAAATTTATTTGCACTACTGG AAAACTACCTGTTCCATGGCCAACACTTGTCACTACTCTGACGTATGG TGTTCAATGCTTTTCCCGTTATCCGGATCACATGAAACGGCATGACTTT TTCAAGAGTGCCATGCCCGAAGGTTATGTACAGGAACGCACTATATCT TTCAAAGATGACGGGAACTACAAGACGCGTGCTGAAGTCAAGTTTGA AGGTGATACCCTTGTTAATCGTATCGAGTTAAAAGGTATTGATTTTAA AGAAGATGGAAACATTCTCGGACACAAACTCGAGTACAACTATAACT CACACAATGTATACATCACGGCAGACAAACAAGGCCTATCAGGCCGC ATTATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGG CCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCA GGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGA AGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGT TGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAAT
- 20 037407
CTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTT CTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACC AGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAAT GTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCT GCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAA AACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAAT CTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACTGGTT CCGCCGATCTCAGGTAAGAATGGAATCAAAGCTAACTTCAAAATTCG CCACAACATTGAAGATGGATCCGTTCAACTAGCAGACCATTATCAACA AAATACTCCAATTGGCGATGGCCCTGTCCTTTTACCAGACAACCATTA CCTGTCGACACAATCTGCCCTTTTGAAAGATCCCAACGAAAAGCGTGA CCACATGGTCCTTCTTGAGTTTGTAACTGCTGCTGGGATTACACATGG CATGGATGAACTATACAAACCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCA TGGTTAAGTCGAC
0108 Мутант GD1G Экспрессированны й мутант GD1G ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGTAAAGGAGAAGAACTTTTCACTGGAGTTGTCCCAATTCTTGTT GAATTAGATGGTGATGTTAATGGGCACAAATTTTCTGTCAGTGGAGAG GGTGAAGGTGATGCAACATACGGAAAACTTACCCTTAAATTTATTTGC ACTACTGGAAAACTACCTGTTCCATGGCCAACACTTGTCACTACTCTG ACGTATGGTGTTCAATGCTTTTCCCGTTATCCGGATCACATGAAACGG CATGACTTTTTCAAGAGTGCCATGCCCGAAGGTTATGTACAGGAACGC ACTATATCTTTCAAAGATGACGGGAACTACAAGACGCGTGCTGAAGT CAAGTTTGAAGGTGATACCCTTGTTAATCGTATCGAGTTAAAAGGTAT TGATTTTAAAGAAGATGGAAACATTCTCGGACACAAACTCGAGTACA ACTATAACTCACACAATGTATACATCACGGCAGACAAACAAGGCCTA TCAGGCCGCATTATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGA TGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGG TCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCA GACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTG TGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCG ATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATC GATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCT
CAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAAC CATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGA TGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTC AATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGG GGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATAC GGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTA TGCACTGGTTCCGCCGATCTCAGGTAAGAATGGAATCAAAGCTAACTT CAAAATTCGCCACAACATTGAAGATGGATCCGTTCAACTAGCAGACC ATTATCAACAAAATACTCCAATTGGCGATGGCCCTGTCCTTTTACCAG ACAACCATTACCTGTCGACACAATCTGCCCTTTTGAAAGATCCCAACG AAAAGCGTGACCACATGGTCCTTCTTGAGTTTGTAACTGCTGCTGGGA TTACACATGGCATGGATGAACTATACAAACCGCGGGGTTCTCATCATC ATCATCATCATGGTTAA
0109 Мутант GD1G Экспрессированны й мутант GD1G Белок Искусственн ая последовател ьность MSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTT GKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKRHDFFKSAMPEGYVQERTIS FKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSH NVYITADKQGLSGRIMSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRN ANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQ RLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSL GLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNT VTNLNSARSRIEDADYALVPPISGKNGIKANFKIRHNIEDGSVQLADHYQ QNTPIGDGPVLLPDNHYLSTQSALLKDPNEKRDHMVLLEFVTAAGITHG MDELYKPRGSHHHHHHG
ОНО Мутант MF227C Матрица мутанта 470СТ ДНК Искусственн ая последовател ьность CTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGT GGTGGTGGAATTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAA AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTG
0111 Мутант MF227C Матрица мутанта 470СТ Белок Искусственн ая последовател ьность LGLDGFNVNSPGISGGGGGITLINEDAAAAKKSTANPLASI
0112 Мутант MF227C ДНК Искусственн AGATCTCCGCGGAACCAGTAAAGAGAGGACGTTTTGCGGAACCTGGT
- 21 037407
Обратный праймер R2YY ая последовател ьность TTGCATAGTCAGCATCTTCGATACG
0113 Мутант MF227C Последовательност ь ДНК мутанта MF227C ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAAACCAGGTTCCGCAAAACG TCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGG TTAAGTCGAC
0114 Мутант MF227C Мутант MF227C ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTAT CCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGA TGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATC TGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTA ATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCAT TGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACC GTTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGA
ACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAAACCAGGTTC CGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCA TCATCATGGTTAA
0115 Мутант MF227C Мутант MF227C Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0116 Мутант MF227N Обратный праймер RMF227N ДНК Искусственн ая последовател ьность AGATCTCCCGGGGAACCATCGTTAGCACCAACCTGGATTTTC
0117 Мутант MF227N Последовательност ь ДНК мутанта MF227N ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGC TTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTG GGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAAT ACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGA CTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCA GGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGT CCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGT TAAGTCGAC
0118 Мутант MF227N Мутант MF227N ДНК Искусственн ая последовател ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG
- 22 037407
0119 0120 0121 Мутант MF227N Мутант MF227N Мутант MF233 Обратный праймер RMF233 Мутант MF233 Последовательност ь ДНК конструкта MF233 Белок ДНК ДНК ьность Искусственн ая последовател ьность Искусственн ая последовател ьность Искусственн ая последовател ьность TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTAT CCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGA TGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTTCCCCGGGAAGTACCGCTA ACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTC GTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCA ACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCG AAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAG ATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTT CCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATC ATCATCATGGTTAA MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQ NRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVL AQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG AGATCTCCGCGGAACCAGCAGGTTATTCTGGGTCAACAGCGACAGGC TGTTTGTATTAATGACTTGTGCATAGTCAGCATCTTCGATACG TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG
AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACAAGTCATTAATACAAACA GCCTGTCGCTGTTGACCCAGAATAACCTGCTGGTTCCGCGGGGTTCTC ATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0122 Мутант MF233 MF233 ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTAT CCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGA TGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATC TGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTA ATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCAT TGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACC GCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGA ACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACAAGTCATTA ATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCAGAATAACCTGCTGGTTCCGC GGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0123 Мутант MF233 MF233 Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YAQVINTNSLSLLTQNNLLVPRGSHHHHHHG
0124 Мутант MF471 Прямой праймер F471-77 ДНК Искусственн ая последовател ьность GCTGACTATGCAACGGCAGTTTCTGCTATGTCTGCAGCGCAGATTCTG С
0125 Мутант MF471 Обратный праймер ДНК Искусственн ая GCAGAATCTGCGCTGCAGACATAGCAGAAACTGCCGTTGCATAGTCA GC
- 23 037407
R471-77 последовател ьность
0126 Мутант MF471 Последовательност ь ДНК конструкта MF471 ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGCAGTTTCTGCTATGTC TGCAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTCTGGTTCCGCGGGGTTCTCA TCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0127 Мутант MF471 MF471 ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTAT CCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGA TGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATC TGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTA ATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCAT TGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACC GCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGA ACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGCAGTTT
CTGCTATGTCTGCAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTCTGGTTCCGC GGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0128 Мутант MF471 MF471 Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YATAVSAMSAAQILQQAGLVPRGSHHHHHHG
0129 Мутант MF479 Прямой праймер F479-83 ДНК Искусственн ая последовател ьность GTTTCTAATATGTCTAAAGCGGCGATTCTGGGAGCGGCTGGTCTGGTT CCGCGG
0130 Мутант MF479 Обратный праймер R479-83 ДНК Искусственн ая последовател ьность CCGCGGAACCAGACCAGCCGCTCCCAGAATCGCCGCTTTAGACATATT AGAAAC
0131 Мутант MF479 Последовательност ь ДНК конструкта MF479 ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC TAAAGCGGCGATTCTGGGAGCGGCTGGTCTGGTTCCGCGGGGTTCTCA TCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
- 24 037407
0132 Мутант MF479 Мутант MF479 ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTAT CCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGA TGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATC TGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTA ATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCAT TGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACC GCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGA ACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTT CTAATATGTCTAAAGCGGCGATTCTGGGAGCGGCTGGTCTGGTTCCGC GGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0133 Мутант MF479 Мутант MF479 Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YATEVSNMSKAAILGAAGLVPRGSHHHHHHG
0134 Мутант N45 Прямой праймер N45_F ДНК Искусственн ая последовател ьность TCTAGAGGATCCGGCAGGCCAGGCG
0135 Мутант N45 Обратный R502D0 ДНК Искусственн ая последовател ьность CGCAAGCTTGTCGACTTAACGC
0136 Мутант N45 Последовательност ь ДНК мутанта N45 ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAG CAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTCCGCGCGGTAGCGCGAA
GGATCCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAA AGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGC GCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGC GTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATT CCGATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAA ATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTG TCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGA AACCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCT TGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGG AATTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGC CAAGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTC AAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTT TGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTC CGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAA TATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGC GCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAAGT CGACAAGCTTGCGG
0137 Мутант N45 Мутант N45 Белок Искусственн ая последовател ьность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPAGQAIANRFT SNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNS DSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGET ITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKST ANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIED ADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLR
0138 Мутант NGD1 Последовательност ь ДНК конструкта NGD1 ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGTAAA GGAGAAGAACTTTTCACTGGAGTTGTCCCAATTCTTGTTGAATTAGAT GGTGATGTTAATGGGCACAAATTTTCTGTCAGTGGAGAGGGTGAAGG TGATGCAACATACGGAAAACTTACCCTTAAATTTATTTGCACTACTGG AAAACTACCTGTTCCATGGCCAACACTTGTCACTACTCTGACGTATGG TGTTCAATGCTTTTCCCGTTATCCGGATCACATGAAACGGCATGACTTT TTCAAGAGTGCCATGCCCGAAGGTTATGTACAGGAACGCACTATATCT TTCAAAGATGACGGGAACTACAAGACGCGTGCTGAAGTCAAGTTTGA
- 25 037407
AGGTGATACCCTTGTTAATCGTATCGAGTTAAAAGGTATTGATTTTAA AGAAGATGGAAACATTCTCGGACACAAACTCGAGTACAACTATAACT CACACAATGTATACATCACGGCAGACAAACAAGGCCTATCAGGCCGC ATTATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGG CCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCA GGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGA AGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGT TGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAAT CTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTT CTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACC AGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAAT GTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCT GCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAA AACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAAT CTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACTGGTT CCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0139 Мутант NGD1 Экспрессированны й мутант SY3-GFP ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGTAAAGGAGAAGAACTTTTCACTGGAGTTGTCCCAATTCTTGTT GAATTAGATGGTGATGTTAATGGGCACAAATTTTCTGTCAGTGGAGAG GGTGAAGGTGATGCAACATACGGAAAACTTACCCTTAAATTTATTTGC ACTACTGGAAAACTACCTGTTCCATGGCCAACACTTGTCACTACTCTG ACGTATGGTGTTCAATGCTTTTCCCGTTATCCGGATCACATGAAACGG CATGACTTTTTCAAGAGTGCCATGCCCGAAGGTTATGTACAGGAACGC ACTATATCTTTCAAAGATGACGGGAACTACAAGACGCGTGCTGAAGT CAAGTTTGAAGGTGATACCCTTGTTAATCGTATCGAGTTAAAAGGTAT TGATTTTAAAGAAGATGGAAACATTCTCGGACACAAACTCGAGTACA ACTATAACTCACACAATGTATACATCACGGCAGACAAACAAGGCCTA TCAGGCCGCATTATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGA TGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGG TCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCA GACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTG TGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCG
ATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATC GATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCT CAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAAC CATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGA TGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTC AATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGG GGCAATTCAAAACCGCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATAC GGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTA TGCACTGGTTCCGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0140 Мутант NGD1 Экспрессированны й мутант SY3GFP/мутант NGD1 Белок Искусственн ая последовател ьность MSKGEELFTGVVPILVELDGDVNGHKFSVSGEGEGDATYGKLTLKFICTT GKLPVPWPTLVTTLTYGVQCFSRYPDHMKRHDFFKSAMPEGYVQERTIS FKDDGNYKTRAEVKFEGDTLVNRIELKGIDFKEDGNILGHKLEYNYNSH NVYITADKQGLSGRIMSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRN ANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQ RLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSL GLDGFNVNSPGSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNT VTNLNSARSRIEDADYALVPRGSHHHHHHG
0141 Мутант S33 Прямой F502 S33 ДНК Искусственн ая последовател ьность TCTAGAGGATCCGTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGC
0142 Мутант S33 Последовательност ь ДНК мутанта S33 ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAG CAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTCCGCGCGGTAGCGCGAA GGATCCGTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAG GCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTC AGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTG AAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAG TTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAA TCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTT TCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAAC
- 26 037407
CAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCAT CGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAA TGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTC CATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTA CCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACG CAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCAT TACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCG TATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGC GCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCA GGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAAGTCGAC
0143 Мутант S33 Мутант S33 ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACT GGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTCCGCGCGG TAGCGCGAAGGATCCGTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACG ATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAG GTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGC AGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGT GTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCC GATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAAT CGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACCAGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAA CCATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTG ATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAA TTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCA AGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAA AAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTG ATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCG CGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATA TGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGC AGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAA
0144 Мутант S33 Мутант S33 Белок Искусственн ая последовател MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPSGLRINSAKD DAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVR ELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQ
ьность MKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTL INEDAAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTV TNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSL LR
0145 Мутант SY3CT Обратный праймер RSY3CT ДНК Искусственн ая последовател ьность AGATCTCCGCGGAACCAGTGCATAGTCAGCATCTTCGATACGGC
0146 Мутант SY3CT Последовательност ь ДНК конструкта SY3CT ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACTGGTTCCGCGGGGTTCTCA TCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0147 Мутант SY3CT Экспрессированны й мутант SY3CT ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTAT CCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGA TGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATC
- 27 037407
TGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTA ATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCAT TGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACC GCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGA ACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCACTGGTTCCGC GGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0148 Мутант SY3CT Экспрессированны й мутант SY3CT Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YALVPRGSHHHHHHG
0149 Мутант 33 MX Мутант 33 MX ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTGCAGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTGCCGGGGCTAACGCTGATGCCGCTCTGAAAGCTAT CCAGGCTGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTCA GCAGACTCAAGCTGCCGCTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACGCAAT GGCAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGCCGCTATTACCATCGATCT GCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAA TTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATT GTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCG CTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAA CTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTC TCAAATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCT GGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCC GCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0150 Мутант 33 MX Мутант 33 MX Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNAADGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATAGANADAALKAIQAEIQQRLEEIDRVSQQTQA AAVKVLSQDNAMAIQVGANDGAAITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGST ANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIED ADYATEVSQMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHH
HG
0151 Мутант 33 MX Последовательност ь ДНК ЗЗМХ ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTGCAGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTGCCGGGGCTAACGCTGATGCCGCTCTGAAAGCTATCCAGGCTGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTCAGCAGACTCA AGCTGCCGCTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACGCAATGGCAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGCCGCTATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTCAAATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0152 Мутант 485МХ Последовательност ь ДНК конструкта 485МХ ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTGCAGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTGCCGGGGCTAACGCTGATGCCGCTCTGAAAGCTATCCAGGCTGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTCAGCAGACTCA AGCTGCCGCTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACGCAATGGCAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGCCGCTATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC
- 28 037407
AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTCAAATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTCTGGTTCCGCGGGGTTCTCA TCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0153 Мутант 485МХ конструкт 485МХ ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTGCAGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTGCCGGGGCTAACGCTGATGCCGCTCTGAAAGCTAT CCAGGCTGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTCA GCAGACTCAAGCTGCCGCTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACGCAAT GGCAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGCCGCTATTACCATCGATCT GCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAA TTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATT GTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCG CTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAA CTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTC TCAAATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTCTGGTTCCGCG GGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0154 Мутант 485МХ конструкт 485МХ Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNAADGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATAGANADAALKAIQAEIQQRLEEIDRVSQQTQA AAVKVLSQDNAMAIQVGANDGAAITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGST ANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIED ADYATEVSQMSKAQILQQAGLVPRGSHHHHHHG
0155 Мутант MIM4 Вариант CBLB502 ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACT GGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACGATGACGATAAGGA TCCGATGGCACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCA GAATAACCTGCAGAAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGAGCG TCTGTCCTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGG CCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCA GGCTTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGA AGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGT
TGTCTGTTCAGGCCACTCAAGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAAT CTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTT CTCAGCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACC AGATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAAT GTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCC ATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTAC CGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGC AGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATT ACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGT ATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTCAAATGTCTAAAGCG CAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAG GTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAA
0156 Мутант MIM4 Дизайн праймеров (для делеции Gln439; Asn440; Arg441; Phe442): Днк Искусственн ая последовател ьность AACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTT CGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACC GCCCTTGGCGCTACGGTAACCGCTCTGGCCTCCGCGCGTAGCGCTATC GAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTCAAATG
0157 Мутант MIM4 Дизайн праймеров (для делеции Gln439; Asn440; Arg441; Phe442): Белок Искусственн ая последовател ьность NPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITALGATVTALASARSAIEDA DYATEVSNM
0158 Мутант MIM4 Прямой праймер MIM4 Днк Искусственн ая последовател ьность GCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTGATTCAGCCATTACCGCCCTTG G
0159 Мутант MIM4 Обратный праймер MIM4 Днк Искусственн ая последовател ьность CCAAGGGCGGTAATGGCTGAATCAATTGCCCCCAGAGAAGAACGAAC TGC
0160 Мутант MIM4 Днк Искусственн TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC
- 29 037407
MIM4 ая последовател ьность TAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGG TTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACA GCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACGATGACGATAAGGATCCGATGG CACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCAGAATAACC TGAACAAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGAGCGTCTGTCCT CTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCG ATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCC CGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCG CTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTT CAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAG GATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAG ACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAA ATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAA AAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCC CCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGGGTACA TTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAACCC ACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTC TTCTCTGGGGGCAATTGATTCAGCCATTACCGCCCTTGGCGCTACGGT AACCGCTCTGGCCTCCGCGGCTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGC AACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGG TACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTC TTTACTGCGTTAA
0161 Мутант MIM4 MIM4 Белок Искусственн ая последовател ьность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDDDDKDPMAQVINTNSLSLLT QNNLNKSQSSLSSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQAS RNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEI QQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVK SLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSAL SKVDAVRSSLGAIDSAITALGATVTALASAASRIEDADYATEVSNMSKAQ ILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLR
0162 Мутант MIM5 Дизайн праймеров (мутации ДНК Искусственн ая последовател AACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTT CGTTCTTCTCTGGGGGCAATTGCAAAGGCTTTTGATTCAGCCATTACC GCCCTTGGCGCTACGGTAACCGCTCTGGCCTCCGCGCGTAGCGCTATC
Gln439Ala; Asn440Lys; Arg441Ala): ьность GAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTCAAATG
0163 Мутант MIM5 Дизайн праймеров (мутации Gln439Ala; Asn440Lys; Arg441Ala): Белок Искусственн ая последовател ьность NPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIAKAFDSAITALGATVTALASARSAIEDA DYATEVSNM
0164 Мутант MIM5 Прямой праймер MIM5 Днк Искусственн ая последовател ьность CGTTCTTCTCTGGGGGCAATTGCAAAGGCTTTTGATTCAGCCATTACC GC
0165 Мутант MIM5 Обратный праймер MIM5 Днк Искусственн ая последовател ьность GCGGTAATGGCTGAATCAAAAGCCTTTGCAATTGCCCCCAGAGAAGA ACG
0166 Мутант MIM5 MIM5 Днк Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGG TTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACA GCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACGATGACGATAAGGATCCGATGG CACAAGTCATTAATACAAACAGCCTGTCGCTGTTGACCCAGAATAACC TGAACAAATCTCAGTCCTCACTGAGTTCCGCTATTGAGCGTCTGTCCT CTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCG ATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCC CGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCG CTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTT CAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAG GATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAG ACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAA
- 30 037407
ATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAA AAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCC CCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCCATGGGTACA TTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTACCGCTAACCC ACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTC TTCTCTGGGGGCAATTGCAAAGGCTTTTGATTCAGCCATTACCGCCCT TGGCGCTACGGTAACCGCTCTGGCCTCCGCGGCTAGCCGTATCGAAGA TGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCT GCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCA AAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAA
0167 Мутант MIM5 MIM5 Белок Искусственн ая последовател ьность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDDDDKDPMAQVINTNSLSLLT QNNLNKSQSSLSSAIERLSSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQAS RNANDGISIAQTTEGALNEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEI QQRLEEIDRVSNQTQFNGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVK SLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGTLINEDAAAAKKSTANPLASIDSAL SKVDAVRSSLGAIAKAFDSAITALGATVTALASAASRIEDADYATEVSNM SKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLR
0168 Мутант MIMX Мутант 33MIMX ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACT GGTGGACAGCAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTCCGCGCGG TAGCGCGAAGGATCCGTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACG ATGCGGCAGGCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAG GTCTGACTCAGGCTTCCCGTAACGCTGCAGACGGCATTTCTATTGCGC AGACCACTGAAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGT GTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCC GATCTGAAATCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAAT CGATCGCGTTTCTAATCAGACTCAAGCTAACGGTGTTAAAGTCCTGTC TCAGGACAACGCAATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGCCG CTATTACCATCGATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTG ATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAA TTCTAGACTCCATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCA AGAAAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAA AAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAGCTCGTTTTG
CCGCGGCCATTGCTAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCG CGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATA TGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGC AGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAA
0169 Мутант MIMX MIMx Белок Искусственн ая последовател ьность MRGSHHHHHHGMASMTGGQQMGRDLYDLVPRGSAKDPSGLRINSAKD DAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNAADGISIAQTTEGALNEINNNLQRVR ELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQANGVKVLSQDNA MKIQVGANDGAAITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGISGGGGGILDSMGT LINED AAAAKKSTANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQARF AAAI ANLGN TVTNLNSARSRIEDADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVL SLLR
0170 Мутант MIMX Последовательност ь ДНК ЗЗМ1Мх ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGCGGGGT TCTCATCATCATCATCATCATGGTATGGCTAGCATGACTGGTGGACAG CAAATGGGTCGGGATCTGTACGACCTGGTTCCGCGCGGTAGCGCGAA GGATCCGTCTGGTCTGCGTATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAG GCCAGGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTC AGGCTTCCCGTAACGCTGCAGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTG AAGGTGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAG TTGTCTGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAA TCTATCCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTT TCTAATCAGACTCAAGCTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAAC GCAATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGCCGCTATTACCATC GATCTGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAAT GTTAATTCCCCGGGAATTTCCGGTGGTGGTGGTGGAATTCTAGACTCC ATGGGTACATTAATCAATGAAGACGCTGCCGCAGCCAAGAAAAGTAC CGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGC AGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAGCTCGTTTTGCCGCGGCCATT GCTAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGT ATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTCTAAAGCG CAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAG GTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAAGTCGAC
- 31 037407
0171 Мутант MIXC Обратный праймер RMIXC ДНК Искусственн ая последовател ьность AGATCTGTCGACTTAACCATGATGATGATGATGATGAGAACCCCGCG GAACCAGTAAAGAGAGGACGTTTTGCGGAACC
0172 Мутант MIXC Последовательност ь ДНК MIXC ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAGCTCGTTTTGCCGC GGCCATTGCTAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0173 Мутант MIXC MIXC Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQARFAAAIANLGNTVTNLNSARSRIEDAD YATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0174 Мутант MIXN Прямой праймер FMIMxN ДНК Искусственн ая последовател ьность AGATCTCATATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGC
0175 Мутант MIXN ДНК Искусственн TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC
Последовательност ь ДНК MIX.N ая последовател ьность TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTGCAGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA AGCTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACGCAATGAAAATCC AGGTTGGTGCTAACGATGGTGCCGCTATTACCATCGATCTGCAAAAAA TTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGG GAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAG TGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATT CAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGC GTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGT CTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGG CTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTT CTCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0176 Мутант MIXN Экспрессированны й мутант MIX.N Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNAADGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQA NGVKVLSQDNAMKIQVGANDGAAITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGST ANPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIED ADYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHH HG
0177 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 502 Мутанты М1М1;М1М2и MIM3 С-терминальная часть CBLB502 ДНК Искусственн ая последовател ьность AACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGTGGACGCAGTT CGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACC AACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGCCGTATC GAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTCAAATGTCTAAAGCGCA GATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGCTAACCAGGT TCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGCGTTAA
0178 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 ДНК Искусственн ая ATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCGTAGC CGTATCGAAGAT
- 32 037407
Дизайн праймеров (мутант MIM1) последовател ьность
0179 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 Дизайн праймеров (мутант MIM1) Белок Искусственн ая последовател ьность ITNLGNTVTNLNSARSRIED
0180 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 Прямой праймер 455-57 ДНК Искусственн ая последовател ьность CCTTGGCAATACGGTAACCGCTCTGGCCTCCGCGCGTAGCCGTATC
0181 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 Обратный праймер 455-57 ДНК Искусственн ая последовател ьность GATACGGCTACGCGCGGAGGCCAGAGCGGTTACCGTATTGCCAAGG
0182 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 Дизайн праймеров (мутант MIM2MIM1 плюс R460A) ДНК Искусственн ая последовател ьность ACGGTAACCGCTCTGGCCTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGAC TATGCAACGGAA
0183 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 Дизайн праймеров (мутант MIM2MIM1 плюс R460A) Белок Искусственн ая последовател ьность TVTALASARSRIEDADYATE
0184 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 Прямой праймер 460 ДНК Искусственн ая последовател ьность GCTCTGGCCTCCGCGGCTAGCCGTATCGAAGATG
0185 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 ДНК Искусственн ая CATCTTCGATACGGCTAGCCGCGGAGGCCAGAGC
Обратный праймер 460 последовател ьность
0186 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 Дизайн праймеров (мутант MIM3 MIM2 плюс N448A;N451A) ДНК Искусственн ая последовател ьность CAAAACCGTTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACC GCTCTGGCCTCC
0187 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 Дизайн праймеров (мутант MIM3 MIM2 плюс N448A;N451A) Белок Искусственн ая последовател ьность QNRFDSAITNLGNTVTALAS
0188 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 Прямой праймер 448-51 ДНК Искусственн ая последовател ьность GTTTTGATTCAGCCATTACCGCCCTTGGCGCTACGGTAACCGCTCTGG
0189 Мутанты MIM1; MIM2 и MIM3 Обратный праймер 448-51 ДНК Искусственн ая последовател ьность CCAGAGCGGTTACCGTAGCGCCAAGGGCGGTAATGGCTGAATCAAAA С
0190 Мутант МЕ42 Прямой праймер МЕ42 ДНК Искусственн ая последовател ьность CAACAGCGCGAAAGCCGATGCGGGAGGCCAGGCGATTGC
0191 Мутант МЕ42 обратный праймер МЕ42 ДНК Искусственн ая последовател ьность GCAATCGCCTGGCCTCCCGCATCGGCTTTCGCGCTGTTG
0192 Мутант МЕ42 Последовательност ДНК Искусственн ая TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG
- 33 037407
ь конструкта МЕ42 последовател ьность TTACGGATCAACAGCGCGAAAGCCGATGCGGGAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0193 Мутант МЕ42 Мутант МЕ42 Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKADAGGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0194 Мутант МЕНО Прямой праймер МЕ100 ДНК Искусственн ая последовател ьность GTCTGTTCAGGCCACTGCCGGGGCTAACTCTGATTCCGATCTG
0195 Мутант МЕНО Обратный праймер МЕ100 ДНК Искусственн ая последовател ьность CAGATCGGAATCAGAGTTAGCCCCGGCAGTGGCCTGAACAGAC
0196 Мутант МЕ110 Последовательност ь конструкта ДНК Искусственн ая последовател TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC
МЕ100 ьность TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTGCCGGGGCTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0197 Мутант МЕ110 Мутант МЕ110 Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATAGANSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0198 Мутант ME 100/110 Прямой праймер МЕНО ДНК Искусственн ая последовател ьность CTGATTCCGATCTGAAAGCTATCCAGGCTGAAATTCAGCAACGTC
0199 Мутант ME 100/110 Обратный праймер МЕНО ДНК Искусственн ая последовател ьность GACGTTGCTGAATTTCAGCCTGGATAGCTTTCAGATCGGAATCAG
0200 Мутант ME 100/110 Последовательност ь конструкта МЕ100/110 ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA
- 34 037407
CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTGCCGGGGCTAACTCTGATTCCGATCTGAAAGCTATCCAGGCTGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0201 Мутант ME104N Промежуточный Мутант ME 100/110 ДНК Искусственн ая последовател ьность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTGCCGGGGCTAACTCTGATTCCGATCTGAAAGCTAT CCAGGCTGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAA TCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGAT GAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCT GCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAA TTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATT GTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCG CTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAA CTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTC TAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCT GGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCC GCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0202 Мутант ME 100/110 Мутант МЕ110/110 Белок Искусственн ая MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATAGANSDSDLKAIQAEIQQRLEEIDRVSNQTQF
последовател ьность NGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTA NPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDA DYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHH G
0203 Мутант ME 104 Прямой праймер МЕ104 ДНК Искусственн ая последовател ьность GCCACTAACGGGACTAACGCTGATGCCGCTCTGAAATCTATCCAG
0204 Мутант ME 104 Обратный праймер МЕ104 ДНК Искусственн ая последовател ьность CTGGATAGATTTCAGAGCGGCATCAGCGTTAGTCCCGTTAGTGGC
0205 Мутант ME 104 Последовательност ь конструкта МЕ104 ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACGCTGATGCCGCTCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0206 Мутант ME 104 Мутант ME 104 Белок Искусственн ая MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNADAALKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQF
- 35 037407
последовател ьность NGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTA NPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDA DYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHH G
0207 Мутант ME104N Праймер FME104New ДНК Искусственн ая последовател ьность GCCACTGCCGGGGCTAACGCTGATGCCGCTCTGAAAGCTATCCAG
0208 Мутант ME104N Праймер RME104New ДНК Искусственн ая последовател ьность CTGGATAGCTTTCAGAGCGGCATCAGCGTTAGCCCCGGCAGTGGC
0209 Мутант ME104N Последовательност ь конструкта ME104New ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTGCCGGGGCTAACGCTGATGCCGCTCTGAAAGCTATCCAGGCTGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0210 Мутант ME104N Мутант ME104N Белок Искусственн ая MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATAGANADAALKAIQAEIQQRLEEIDRVSNQTQF
последовател ьность NGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTA NPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDA DYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHH G
0211 Мутант МЕНО Последовательност ь конструкта МЕНО ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAAGCTATCCAGGCTGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0212 Мутант МЕ110 Мутант МЕ110 Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKAIQAEIQQRLEEIDRVSNQTQF NGVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTA NPLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDA DYATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHH G
0213 Мутант МЕ117 Прямой праймер МЕ117 ДНК Искусственн ая последовател ьность CTATCCAGGATGAAATTCAGGCACGTCTGGCAGAAATCGATCGCG
- 36 037407
0214 Мутант MEI 17 Обратный праймер МЕ117 ДНК Искусственн ая последовател ьность CGCGATCGATTTCTGCCAGACGTGCCTGAATTTCATCCTGGATAG
0215 Мутант МЕ117 Последовательност ь конструкта 33 ML (Следует ли сказать МЕ117?) ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGGCACGTCTGGCAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0216 Мутант МЕ117 Мутант МЕ117 Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQARLAEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0217 Мутант ME 124 Прямой праймер МЕ104 ДНК Искусственн ая последовател ьность GGAAGAAATCGATGCCGTTTCTGCTGCGACTCAATTTAACGGTGTTAA AGTCCTGTCTC
0218 Мутант ME 124 Обратный праймер МЕ104 ДНК Искусственн ая последовател ьность GAGACAGGACTTTAACACCGTTAAATTGAGTCGCAGCAGAAACGGCA TCGATTTCTTCC
0219 Мутант ME 124 Последовательност ь конструкта МЕ124 ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATGCCGTTTCTGCTGCGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0220 Мутант ME 124 Мутант ME 124 Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDAVSAATQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0221 Мутант МЕ124Р Прямой праймер МЕ124Р ДНК Искусственн ая последовател ьность CAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATGCCGTTTCTAATCAGACTCAATTT AACGG
0222 Мутант МЕ124Р Обратный праймер ДНК Искусственн ая CCGTTAAATTGAGTCTGATTAGAAACGGCATCGATTTCTTCCAGACGT TGCTG
- 37 037407
ME124P последовател ьность
0223 Мутант ME 124 Экспрессированны й мутант МЕ124Р Днк Искусственн ая последовател ьность ATGAGCGGGTTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCA GGCGATTGCTAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGC TTCCCGTAACGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGG TGCGCTGAATGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTC TGTTCAGGCCACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTAT CCAGGATGAAATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATGCCGTTTCTA ATCAGACTCAATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGA TGAAAATCCAGGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATC TGCAAAAAATTGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTA ATTCCCCGGGAAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCAT TGTCAAAAGTGGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACC GCTTTGATTCAGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGA ACTCCGCGCGTAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTT CTAATATGTCTAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTC TGGCGCAGGCTAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTC CGCGGGGTTCTCATCATCATCATCATCATGGTTAA
0224 Мутант МЕ124Р МЕ124Р Днк Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATGCCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0225 Мутант МЕ124Р МЕ124Р Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDAVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0226 Мутант ME 132 Прямой праймер МЕ132 Днк Искусственн ая последовател ьность CGTTTCTAATCAGACTCAATTTGCCGCTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGA СААСС
0227 Мутант ME 132 Обратный праймер МЕ132 Днк Искусственн ая последовател ьность GGTTGTCCTGAGACAGGACTTTAACAGCGGCAAATTGAGTCTGATTAG AAACG
0228 Мутант ME 132 Последовательност ь конструкта МЕ132 Днк Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTGCCGCTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC
- 38 037407
TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0229 Мутант ME 132 Мутант MEI 17 (МЕ132?) Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFA AVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0230 Мутант ME 142 Прямой праймер МЕ142 ДНК Искусственн ая последовател ьность GTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACGCGATGGCAATCCAGGTTGGTGCT AACG
0231 Мутант ME 142 Обратный праймер МЕ142 Днк Искусственн ая последовател ьность CGTTAGCACCAACCTGGATTGCCATCGCGTTGTCCTGAGACAGGACTT ТААС
0232 Мутант ME 142 Последовательност ь конструкта МЕ142 Днк Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACGCGATGGCAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC
TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0233 Мутант ME 142 Мутант ME 142 Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNAMAIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0234 Мутант ME 150 Прямой праймер МЕ150 ДНК Искусственн ая последовател ьность GATGAAAATCCAGGTTGGTGCTAGCGCTGCTGAAACCATTACCATCGA TCTGC
0235 Мутант ME 150 Обратный праймер МЕ150 Днк Искусственн ая последовател ьность GCAGATCGATGGTAATGGTTTCAGCAGCGCTAGCACCAACCTGGATTT ТСАТС
0236 Мутант ME 150 Последовательност ь конструкта МЕ150 Днк Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAGCGCTGCTGAAACCATTACCATCGATCTGCAAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACTATGCAACGGAAGTTTCTAATATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC
- 39 037407
TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0237 Мутант MEI50 Мутант MEI50 Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGASAAETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD YATEVSNMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0238 Мутант МЕ468 Прямой праймер МЕ468 ДНК Искусственн ая последовател ьность GCCGTATCGAAGATGCTGACGCTGGAGCGGAAGTTGCTAATATGTCTA AAGCGCAG
0239 Мутант МЕ468 Обратный праймер МЕ468 ДНК Искусственн ая последовател ьность CTGCGCTTTAGACATATTAGCAACTTCCGCTCCAGCGTCAGCATCTTC GATACGGC
0240 Мутант МЕ468 Последовательност ь конструкта МЕ468 ДНК Искусственн ая последовател ьность TAATACGACTCACTATAGGGGAATTGTGAGCGGATAACAATTCCCCTC TAGAATAATTTTGTTTAACTTTAAGAAGGAGATATACATATGAGCGGG TTACGGATCAACAGCGCGAAAGACGATGCGGCAGGCCAGGCGATTGC TAACCGCTTCACTTCTAATATCAAAGGTCTGACTCAGGCTTCCCGTAA CGCTAACGACGGCATTTCTATTGCGCAGACCACTGAAGGTGCGCTGAA TGAAATCAACAACAACCTGCAGCGTGTGCGTGAGTTGTCTGTTCAGGC CACTAACGGGACTAACTCTGATTCCGATCTGAAATCTATCCAGGATGA AATTCAGCAACGTCTGGAAGAAATCGATCGCGTTTCTAATCAGACTCA ATTTAACGGTGTTAAAGTCCTGTCTCAGGACAACCAGATGAAAATCCA GGTTGGTGCTAACGATGGTGAAACCATTACCATCGATCTGC AAAAAAT TGATGTGAAAAGCCTTGGCCTTGATGGGTTCAATGTTAATTCCCCGGG AAGTACCGCTAACCCACTGGCTTCAATTGATTCTGCATTGTCAAAAGT GGACGCAGTTCGTTCTTCTCTGGGGGCAATTCAAAACCGCTTTGATTC AGCCATTACCAACCTTGGCAATACGGTAACCAATCTGAACTCCGCGCG TAGCCGTATCGAAGATGCTGACGCTGGAGCGGAAGTTGCTAATATGTC TAAAGCGCAGATTCTGCAGCAGGCTGGTACTTCCGTTCTGGCGCAGGC TAACCAGGTTCCGCAAAACGTCCTCTCTTTACTGGTTCCGCGGGGTTC TCATCATCATCATCATCATGGTTAAGTCGAC
0241 Мутант МЕ468 Мутант МЕ468 Белок Искусственн ая последовател ьность MSGLRINSAKDDAAGQAIANRFTSNIKGLTQASRNANDGISIAQTTEGAL NEINNNLQRVRELSVQATNGTNSDSDLKSIQDEIQQRLEEIDRVSNQTQFN GVKVLSQDNQMKIQVGANDGETITIDLQKIDVKSLGLDGFNVNSPGSTAN PLASIDSALSKVDAVRSSLGAIQNRFDSAITNLGNTVTNLNSARSRIEDAD AGAEV ANMSKAQILQQAGTSVLAQANQVPQNVLSLLVPRGSHHHHHHG
0242 линкер Белок Искусственн ая Последовате льность SPG
0243 Lru283 Белок Искусственн ая последовател ьность mghhhhhhsgMEEFNMRINTNVAAMNTYSRLTAANTAKSNSLAKLSSGLRI NKAGDDAAGLAISEKMKSQIGGLTQAKRNAQDGISLVQTAEGALNETHS ILERMRDLAVQGSNGTLTSSDRGSINKELKALHQELTRISNTTEFNTQKLF SQTKQKSVTFTFQIGANAGQTLSVAITAMSGEALLVSTDAKFSLNAAGTN AGAMIKSIDAAIAKVSDQRADLGAVQNRLEHTINNLTATNENLSDANSRI RDVDMAEEMMTFTKSNILSQAATSMLAQANAMPNSVLNLLQG
0244 Тре270 Белок Искусственн ая последовател ьность mghhhhhhsgMRINHNISALNAWRNIDQTQYSMSKTLERLSSGLRINRAGDD AAGLAISEKMRGQIKGLNMAIKNAQDAISLIQTAEGALTEVHSILQRMRE LAVQAASDTNTNVDREQIQKEIDQLREEIDRIARTTEFNTKKLLDGKLEGF RSQVDAKVVTGGNINVQLGTVSSKAVEGTYVIEVGaAERAIMVVDAAIH RVSTARAALGAIQNRLEHTISNLGVAAENLTAAESRIRDADMAKEMMEF TKQQILLQSSMAMLAQSNTLPQNVLQLMR
0245 Tpel59w Белок Искусственн ая последовател ьность mghhhhhhsGLNMAIKNAQDAISLIQTAEGALTEVHSILQRMRELAVQAASD TNTNVDREQIQKEIDQLREEIDRIARTTEFNTKKLLDGKLEGFRSQVDAKV VTGGNINVQLGTVSSKAVEGTYVIEVGaAERAIMVVDAAIHRVSTARAAL GAIQNRLEHTISNLG
0246 Chy275 Белок Искусственн ая последовател ьность mghhhhhhsgMSLRINNNIEALNAWRALNSTSNALQKSMEKLSSGLRINRAG DDAAGLAISEKLRAQIRGLNQAIRNAQDGISLIQTAEGGLSEIQNILQRMR ELGVQAANGTLNNQDISAITTELNQLFNEIDRIAGATEFNTKNLLAVSTGL VVTLQVGANAGQVIAFTIDNAGTASLGLSSADLAINDNASASAFISKVDS ALQKVSTYRANLGSIQNRLEHTIANLGIASENLSASESRIRDVDMAAEMM NFTKNQILQQAGVAILAQANQAPQAVLQLLR
0247 Chyl62w Белок Искусственн mghhhhhhsGLNQAIRNAQDGISLIQTAEGGLSEIQNILQRMRELGVQAANG
- 40 037407
ая последовател ьность TLNNQDISAITTELNQLFNEIDRIAGATEFNTKNLLAVSTGLVVTLQVGAN AGQVIAFTIDNAGTASLGLSSADLAINDNASASAFISKVDSALQKVSTYRA NLGSIQNRLEHTIANLG
0248 ChyU137 Белок Искусственн ая последовател ьность mghhhhhhsGLNQAIRNAQDGISLIQTAEGGLSEIQNILQRMRELGVQAANG TLNNQDISAITTELNQLFNEIDRIAGATEFNTKNLLAAGTASLGLSSADLAI NDNASASAFISKVDSALQKVSTYRANLGSIQNRLEHTIANLG
0249 ChyN108 Белок Искусственн ая последовател ьность mghhhhhhSASAFISKVDSALQKVSTYRANLGSIQNRLEHTIANLGpdGLNQ AIRNAQDGISLIQTAEGGLSEIQNILQRMRELGVQAANGTLNNQDISAITT ELNQLFNEIDRIA
0250 ChyZ94 Белок Искусственн ая последовател ьность mghhhhhhsNNQDISAITTELNQLFNEIDRIAGATgsGGLSEIQNILQRMRELG VQAANGTLNggSASAFISKVDSALQKVSTYRANLGSIQNRLEHTIANLG
0251 Firl61B Белок Искусственн ая последовател ьность mghhhhhhsGLAQASRNAQDAISIAQTAEGALDETQSILQRVRELGVQGAN GTLTADDINALQAEVDQLIAEIDRIAGATEFNTQNLLDGSFTTKAFQVGA NSGQNMTLTIGKMDTTTLGLSSADLAINDNAFANGAISTVDSALQKVSAE RAKLGAIQNRLEHTIANLG
0252 Firl61MNB Белок Искусственн ая последовател ьность mghhhhhhsGLAQASRQAQDAISIAQTAEGALDETQSILQRVRELGVQGAD GTLTADDIDALQAEVDQLIAEIDRIAGATEFATQKLLDGSFTTKAFQVGA ASGQDVTLTIGKVDTTTLGLSSADLAIDSAAFADGAISTVDSALQKVSAE RAKLGAIQNRLEHTIAQLG
В некоторых вариантах реализации гель или соль алюминия выбраны из гидрооксида алюминия, фосфата алюминия и калий сульфата алюминия, AS04 (который состоит из алюминия, соли алюминия и MPL) и альгидрогеля. В некоторых вариантах реализации гель или соль алюминия представляют собой препарат или смесь с любым из дополнительных адъювантов, описанных в данном документе.
В некоторых вариантах реализации адъюванты в дополнение к описанному средству на основе флагеллина и гелю или соли алюминия находят применение в настоящем изобретении. В некоторых вариантах реализации дополнительный адъювант выбран из препаратов эмульсий масло в воде, сапониновых адъювантов, авальбумина, адъюванта Фрейнда, цитокинов и хитозанов. Иллюстративные дополнительные адъюванты включают, но не ограничиваясь ими, (1) овальбумин (например, ENDOFIT), который часто используется для биохимических исследований; (2) эмульсионные препараты масло в воде (с или без других специфических иммуностимулирующих средств, таких как мурамилпептиды или компоненты бактериальной клеточной стенки), такие как, например, (a) MF59 (РСТ публикация WO 90/14837), содержащий 5% сквалена, 0,5% Tween 80 и 0,5% Span 85 (необязательно содержащий различные количества МТР-РЕ), изготовленный в виде субмикронных частиц с использованием микрофлюидизатора, такого как, например, модель Ноу Microfluidizer (Microfluidics, Ньютон, Массачусетс); (б) SAF, содержащий 10% сквалена, 0,4% Tween 80, 5% плуроник-блокированного полимера L121, и Thr-MDP либо микрофлуидизированный в субмикронной эмульсии, либо вортексированный до образования эмульсии с большим размером частиц; (с) система адъювант RIBI (РАС), (RIBI Immunochem, Гамильтон, Миссури), содержащая 2% сквален, 0,2% Tween 80 и, необязательно, один или более компонентов бактериальной клеточной стенки из группы монофосфориллипида A (MPL), трегалозы димиколат (TDM) и скелет клеточной стенки (CWS), в том числе MPL + CWS (DETOX™); и (d) ADDAVAX (Invitrogen); (3) сапониновые адъюванты, такие как STIMULON (Cambridge Bioscience, Вустер, Массачусетс), могут быть использованы или частицы, сформированные из них, такие как ISCOMs (иммуностимулирующие комплексы); (4) Полный адъювант Фрейнда (CFA) и неполный адъювант Фрейнда (IFA); (5) цитокины, такие как интерлейкины (в качестве не ограничивающего примера ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-4, ИЛ-5, ИЛ-6, ИЛ-7, ИЛ-12 и т.д.), интерфероны (например, гамма-интерферон), колониестимулирующий фактор макрофагов (M-CSF), фактор некроза опухолей (ФНО) и т.д.; (6) хитозан и другие производные хитина или поли-N-ацетил-D-глюкозамина, в которой большая часть N-ацетильных групп была удалена путем гидролиза (см., например, заявку на Европейский патент 460020, который включен в данном документе посредством ссылки в полном объеме, раскрывая фармацевтические препараты, включая хитозаны в качестве усилителей абсорбции через слизистую оболочку; и (7) другие вещества, которые действуют в качестве иммуностимулирующих средств, для повышения эффективности композиции, например монофосфориллипид А. В других вариантах реализации дополнительный адъювант представляет собой одно или более из средств на основе флагеллина (например, CBLB502 или любое из средств в табл. 1), соль или гель алюминия, агонист паттерн-распознающих рецепторов (PRR), CpG - ODN и имидазохинолины. В некоторых вариантах реализации дополнительный адъювант представляет собой один или несколько из циклического [G (3', 5') рА (3', 5') р] (например, 3'3'-цГАМФ VACCIGRADE); циклического [G (2', 5') рА (3', 5') р] 2'3' (например, 2'3' цГАМФ VACCIGRADE); циклического [G (2', 5') рА (2', 5') р] (например, 2'2'-цГАМФ VACCIGRADE), циклического диаденилат монофосфата (например, ц-ди-АМФ VACCIGRADE); циклического дигуанилат монофосфата (например, ц-ди-ГМФ VACCIGRADE); соединения TLR7 агонистов-имидазохинолинов (например, агонистов TLR7, таких как, например, Гардиквимод VACCIGRADE, Имиквимод VACCIGRADE, R848 VACCIGRADE); липополисахаридов (например, агонистов TLR4), как, например, из E.coli 0111: В4 штамма (например, ЛПС-ЕВ VACCIGRADE); монофосфориллипида А (например, МПЛА-СМ VACCIGRADE и МПЛА Синтетические VACCIGRADE);
- 41 037407
N-гликолилированных маримилдипептид (например, N-гликолил-МДП VACCIGRADE); CpG ODN, класс А и/или CpG ODN класса В и/или CpG - ODN, класс С (например, ОДН 1585 VACCIGrAdE, ODN 1826 VACCIGRADE, ODN 2006 VACCIGRADE, ODN 2395 VACCIGRADE), триацилированного липопротеина (например, Pam3CSK4 VACCIGRADE); полиинозин-полицитидиловой кислоты (например, поли (I: С) (HMW) VACCIGRADE); и фактора жгутообразования (т.е. компонента клеточной стенки микобактерий трегалозу 6,6 'димиколат (ТДМ)) или его аналога (например, TDB VACCIGRADE, TDB-HS15 VACCIGRADE). В некоторых вариантах реализации, дополнительный адъювант представляет собой агонист TLR (например, TLR1, и/или TLR2, и/или TLR3, и/или TLR4, и/или TLR5, и/или TLR6, и/или TLR7, и/или TLR8, и/или TLR9, и/или TLR10, и/или TLR11, и/или TLR12, и/или TLR13), агонист нуклеотид-связывающего домена олигомеризации (NOD), лиганд стимулятора генов интерферона (STING) или связанное с ними средство.
В некоторых вариантах реализации дополнительные адъюванты представляют собой один или более из минерального адъюванта, адъюванта на основе геля, тензоактивного средства, бактериального продукта, масляной эмульсии, гранулированного адъюванта, слитого белка и липопептида. Другие адъюванты минеральных солей, помимо алюминиевых адъювантов, описанных где-либо еще, включают соли кальция (например, фосфата кальция), железа и циркония. Другие адъюванты на основе геля, помимо адъювантов алюминия на основе геля, описанных где-либо еще, включают ацеманнан. Тензоактивные средства включают Quil A, сапонин, полученный из водного экстракта из коры Quillaja saponaria; сапонины, тензоактивные гликозиды, содержащие гидрофобное ядроструктуры тритерпеноидов с углеводных цепей, связанных с ядром, и QS-21. Бактериальные продукты включают пептидогликан клеточной стенки или липополисахарид грамотрицательных бактерий (например, из Mycobacterium spp., Corynebacterium parvum, C. granulosum, Bordetella pertussis и Neisseria meningitidis), N-ацетил-мурамил-L-аланил-Dизоглутамин (MDP), различные соединения, полученные из MDP (например, треонил-MDP), липополисахариды (J111C) (например, из клеточной стенки грамотрицательных бактерий), трегалозы димиколат (TDM) и ДНК, содержащие CpG мотивы. Масляные эмульсии включают FIA, Montanide, адъювант 65, Lipovant, семейство адъювантов монтанидов на основе масла, а также различные липосомы. Среди гранулированных и полимерных систем поли (DL-лактид-когликолид) микросферы были тщательно изучены и находят применение в данном документе.
Кроме того, в некоторых вариантах реализации цитокины представляют собой адъювант по настоящему изобретению (например, ИФН-γ и колониестимулирующий фактор гранулоцитов-макрофагов (GM-CSF)). Также углеводные адъюванты (например, адъюванты инулинового происхождения, такие как, гамма инулин, альгамулин (сочетание γ-инулина и гидроксида алюминия), а также полисахариды на основе глюкозы и маннозы, такие как глюканы, декстраны, лентинаны, глюкоманнаны и галактоманнаны) находят применение в настоящем изобретении. В некоторых вариантах реализации препараты адъювантов могут быть использованы в настоящем изобретении и включают соли квасцов в сочетании с другими адъювантами, такими как липид А, альгамулин, иммуностимулирующие комплексы (ISCOMS), которые являются вирус-подобными частицами размером 30-40 им и двенадцатигранной структуры, состоящие из Quil А, липидов и холестерина.
В некоторых вариантах реализации дополнительные адъюванты описаны в Jennings et al. Adjuvants and Delivery Systems for Viral Vaccines-Mechanisms and Potential. B: Brown F., Haaheim L.R., (eds). Modulation of the Immune Response to Vaccine Antigens. Dev. Biol. Stand, Vol. 92. Basel: Karger 1998; 19-28 and/or Sayers et al. J. Biomed. Biotechnol. 2012; 2012:831486, and/or Petrovsky and Aguilar, Immunology and Cell Biology (2004) 82, 488-496 содержание которых включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
В различных вариантах реализации настоящие адъюванты (например, средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия) могут быть частью живых и ослабленных, или убитых, или инактивированных или анатоксина или субъединичных, или конъюгированных вакцин.
В различных вариантах реализации настоящие адъюванты (например, средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия) могут быть частью одной или нескольких одобренных вакцин и/или антигены одной или нескольких одобренных вакцин могут быть анитигенами по настоящему изобретению. В некоторых вариантах реализации одобренные вакцины включают аденовирус; сибирскую язву (biothrax); БЦЖ (Tice); ДС (Sanofi); АКДС (Daptacel); АКДС (Infanrix); АКДС-гепатит В-ИпВ (Pediarix); АКДС-ИПВ (Kinrix); АКДС-ИПВ/Хиб (Pentacel); Хиб (ActHIB); Хиб (Hiberix); Хиб (PedvaxHIB); Хиб/гепатит В (Comvax); Хиб/менингит CY (MenHibrix); гепатит A (Havrix); гепатит A (Havrix); гепатит В (Engerix-B); гепатит В (Recombivax); гепатит А/гепатит В (Twinrix); вирус папилломы человека (ВПЧ) (Cerverix); вирус папилломы человека (ВПЧ) (Gardasil); грипп (Afluria); грипп (Agriflu); грипп (Fluarix); грипп (Flublok); грипп (Flucelvax); грипп (Fluvirin); грипп (Flulaval); грипп (Fluzone: стандарт, высокая доза & внутрикожная); грипп (FluMist); японский энцефалит (Ixiaro); менингококк (MCV4-Menactra); менингококк (MCV4-Menveo); менингококк (MPSV4-Menomune); КПК (MMR-II); КПКВ (ProQuad); пневмококк (PCV13 - Prevnar 13); пневмококк (PPSV-23 - Pneumovax); полиомиелит (IPV - Ipol); бешенство (Imovax); бешенство (RabAvert); ротавирус (RotaTeq); ротавирус (Rotarix); оспу (Vaccinia - 42 037407
АСАМ2000); СД (Decavac); СД (Tenivac); СД (Mass Biologies); КДС (Adacel); КДС (Boostrix); тиф (инактивированная - Typhim Vi); тиф (oral - Ту21а); ветряную оспу (Varivax); желтую лихорадку (YF-Vax) и опоясывающий лишай (Shingles - Zostavax).
В различных вариантах реализации настоящие адъюванты (например, средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия) могут быть частью одной или нескольких иллюстративных вакцин и/или антигены одной или нескольких иллюстративных вакцин могут быть анитигенами по настоящему изобретению. Иллюстративные вакцины включают в качестве примера субъединичную вакцину и инактивированную или убитую вакцину (например, инфанрикс-ИПВ/Хиб (Bordetella pertussis), инфанриксИПВ/Хиб (Haemophilus influenzae), инфанрикс-ИПВ/Хиб (Poliovirus), инфанрикс-ИПВ/Хиб (Clostridium tetani), инфанрикс-ИПВ/Хиб (Corynebacterium diphtheriae), инфанрикс-гекса (Bordetella pertussis), инфанрикс-гекса (Haemophilus influenzae), инфанрикс-гекса (полиовирус), инфанрикс-гекса (вирус гепатита В), инфанрикс-гекса (Clostridium tetani), инфанрикс-гекса (Corynebacterium diphtheriae), инфанрикс-ИПВ (Bordetella pertussis), инфанрикс-ИПВ (полиовирус), инфанрикс-ИПВ (Clostridium tetani), инфанриксИПВ (Corynebacterium diphtheriae), инфанрикс/Хиб (Corynebacterium diphtheriae), Pediarix (Clostridium tetani), Pediarix (полиовирус), Pediarix (вируса гепатита В), ViVaxim (Salmonella spp.), ViVaxim (вирус гепатита А); субъединичные вакцины (например, 5CVMB (Neisseria meningitidis), вакцину белка СуаА В. Pertussis (Bordetella pertussis), вакцину белка РТх В. Pertussis (Bordetella pertussis), вакцину белка рака VEGFA (рак), E.coli вакцину с использованием интимин полипептида (Escherichia coli), Engerix-B (вирус гепатита В), вакцину белка Н. Pylori VacA (Helicobacter pylori), НС типа С и D (Clostridium botulinum), инфанрикс/Хиб (Bordetella pertussis), инфанрикс/Хиб (Haemophilus influenzae), инфанрикс/Хиб (Clostridium tetani), M. gallisepticum TM-1 белковую субъединичную вакцину (Mycoplasma gallisepticum), MDA-модифицированную вакцину человеческого аро В-100 пептида (атеросклероз), MSP3-ЛСП с гидроксидом алюминия (Plasmodium spp.), субъединичную вакцину белка паротита HN (вирус эпидемического паротита), вакцину белка N. miningitidis TBP2, (Neisseria meningitidis), вакцину белка Р. aeruginosa Opri (Pseudomonas aeruginosa), вакцину белка субъединицы SE36 Р. falciparum (Plasmodium spp.), вакцину субъединицы Phleum pratense Phl p 12 аллергии (аллергия), Recombivax HB (вирус гепатита В), S.pneumoniae, ClpP белковую вакцину (Streptococcus pneumoniae); токсоид вакцину (например, BoNT/F (Hc) (Clostridium botulinum), DAPTACEL (Corynebacterium diphtheriae), инфанрикс (Bordetella pertussis), инфанрикс (Clostridium tetani), KINRIX (Clostridium tetani), PBT (Clostridium botulinum), Pediarix (Bordetella pertussis), инактивированные или убитые вакцины (например, Avaxim (вирус гепатита A), Avaxim-Pediatric (вирус гепатита A), FSME-IMMUN (вирус клещевого энцефалита (ВКЭ)), инфанрикс (Corynebacterium diphtheriae), Ixiaro (вирус японского энцефалита), KINRIX (Corynebacterium diphtheriae) и Pediarix (Corynebacterium diphtheriae)), а также конъюгированные вакцины (например, арабиноманнананатоксина токсоид конъюгат (Mycobacterium tuberculosis)), CCPS-P64kR (Neisseria meningitidis), COMVAX (Haemophilus influenzae), Menjugate (Neisseria meningitidis), NeisVac-C (Neisseria meningitidis) и PedvaxHIB (Haemophilus influenzae)).
В некоторых вариантах реализации настоящие адъюванты (например, средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия) объединены в вакцине, направленной на наркотическую зависимость. Например, в одном варианте реализации настоящие адъюванты используются в вакцинах против зависимости от фентанила, героина, морфина, опиума, оксикодона, гидрокодона, кетамина, РСР, барбитуратов, бензодиазепинов, флунитразепа, ГОМК, метаквалона, гашиша, марихуаны, ЛСД, мескалина, псилоцибина, амфетамина, кокаина, МДМА, метамфетамина, метилфенидата и никотина (например, TA-CD (Celtic Pharma), те, которые описаны в патентной публикации США № 2013/0011432, содержание которой включено в данный документ посредством ссылки (например, с использованием 6-(2R,3S)-3(бензоилокси)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1]октан-2-карбонилокси-капроновой кислоты (GNC) или 6-((2R,3S)-3-(бензоилокси)-8-метил-8-азабицикло[3.2.1]октан-2-карбоксамидо)капроновой кислоты) (GNE) в качестве антигена и TA-NIC (Celtic Pharma)).
В некоторых вариантах реализации настоящие адъюванты (например, средство на основе флагеллина и гель или соли алюминия) и/или настоящие вакцины могут содержать любой один из адъювантов или антигенов, аннотированных в базах данных VIOLIN или Vaxjo (как описано в Не et al. Nucleic Acids Research. 2014. 42 (D1):D1124-D1132 и Xiang et al. Nucleic Acids Res. 2008 Jan; 36:D923-8, содержание которых включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме).
В различных вариантах реализации настоящие адъюванты (например, средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия) могут быть частью одной или нескольких противораковых вакцин и/или антигены одной или нескольких противораковых вакцин могут быть анитигенами по настоящему изобретению. Иллюстративные противораковые вакцины включают терапевтические и профилактические вакцины. Например, противораковые вакцины включают ONCOPHAGE (ANTIGENICS INC., одобренные в России в 2008 году для рака почек), APC8015/Sipuleucel-T/PROVENGE (DENDREON, например, для метастатического гормонорезистентного рака предстательной железы), CANCERVAX (CANVAXIN), GENITOPE CORP (MYVAX персонализированная иммунотерапия) и FAVRILLE INC (FAVID), профилактические вакцины, которые атакуют онкогенные вирусы папилломы человека (например, CERVARIX (GSK) и GARDASIL (MERCK)), вирус гепатита А (например, CERVARIX (GSK) и GARDASIL
- 43 037407 (MERCK)) и вирус гепатита В (например, RECOMBIVAX HB (MERCK), ENGERIX-B (GSK), ELOVAC В (HUMAN BIOLOGICALS INSTITUTE), GENEVAC В (SERUM INSTITUTE), SHANVAC В и т.д.
В различных вариантах реализации настоящие адъюванты (например, средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия) могут быть частью одной или нескольких аллерговакцин и/или антигены одной или нескольких аллерговакцин могут быть анитигенами по настоящему изобретению. Например, противоаллергенные композиции для подкожной иммунотерапии (SCIT) и способы применимы к настоящему изобретению (например, уколы от аллергии). Например, прививки от аллергического ринита и конъюнктивита (например, от пыльцы (включая амброзию), пылевых клещей, шерсти животных и спор плесени в воздухе); аллергической или экзогенной бронхиальной астмы (например, от клещей домашней пыли, пыльцы, шерсти животных, плесени (Cladosporium), латекса) и гиперчувствительности к яду насекомых. Аллергены включают пыльцу (например, дерево, траву, сорняки), шерсть домашних животных (например, кошачью шкуру), пылевые клещи, плесень в воздухе, профессиональные аэроаллергены, яд медоносных пчел, яд складчатокрылых ос, яд шершня, яд осы и яд огненного муравья.
В некоторых вариантах реализации анитигены настоящих вакцин могут быть анитигенами живых и ослабленных, или убитых или инактивированных или анатоксина, или субъединичных или конъюгированных вакцин. В некоторых вариантах реализации анитиген настоящих вакцин представляет собой антиген любых вакцин, описанных в данном документе. Например, в некоторых вариантах реализации настоящий антиген представляет собой такой из одной или нескольких из следующих вакцин: КДС (вакцины дифтерия-столбняк-коклюш), АКДС (вакцины дифтерия-столбняк-ацеллюлярный коклюш), Хиб (гемофильной инфекции типа b) конъюгированных вакцин, пневмококковой конъюгированной вакцины, вакцин против гепатита А, вакцин против полиомиелита, вакцин против желтой лихорадки, вакцин против гепатита В, комбинированной вакцины против АКДС, КДС, Хиб, вируса папилломы человека (ВПЧ), вакцины против сибирской язвы, бациллы Кальметта-Г ерена и вакцины против бешенства.
В различных вариантах реализации средство на основе флагеллина и антиген адсорбированы на геле или соли алюминия. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия смешаны с образованием стабильного комплекса. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия смешивают в соотношении, которое значительно ниже нагрузочной емкости соли алюминия. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия присутствуют в соотношении, которое значительно ниже нагрузочной емкости соли алюминия. В различных вариантах реализации средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия смешаны или присутствуют в соотношении (мас./мас.) около 1:500, или около 1:600, или около 1:700, или около 1:800, или около 1:900, или около 1:1000, или около 1:2000, или около 1:5000, или около 1:6000, или около 1:7000, или около 1:8000, или около 1:9000, или около 1:10000. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия смешивают в соотношении (мас./мас.) около 1:500 или менее. В некоторых вариантах реализации средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия присутствуют в соотношении, которое значительно ниже нагрузочной емкости соли алюминия даже в присутствии антигена.
Нагрузочная способность (или адсорбция) адъюванта (например, геля или соли алюминия) могут быть измерены с помощью различных аналитических методов. В общем, это делается путем сравнения содержания белка в водной фазе средства, будучи загруженным или адсорбированным (например, средства на основе флагеллина и/или раствора антигена) до и после адсорбции на адъюванте. Например, может быть использован тест флокуляции Рамона (как используется для определения адсорбции дифтерийного и столбнячного анатоксина). Кроме того, нагрузка может быть измерена с помощью методов иммунопреципитации (например, количественного иммуноэлектрофореза или единичной радиальной иммунодиффузии) или спектрофотометрических методов (например, метод ВСА). Методы ELISA также могут быть использованы в качестве иммуноэлектрофореза или ВЭЖХ. Содержание алюминия в конечной вакцине можно контролировать с помощью множества известных технологий, включая спектрометрические методы, такие как, например, атомно-адсорбционная спектрометрия.
В некоторых вариантах реализации количество геля или соли алюминия в вакцинах и/или адъювантов, описанных в данном документе, составляет от около 0,05 до около 1,0 мг/дозу или около 0,125 до около 0,625 мг/дозу. В различных вариантах реализации количество геля или соли алюминия в вакцинах и/или адъювантов, описанных в данном документе, составляет от около 0,05, или около 0,10, или около 0,15, или около 0,20, или около 0,25, или около 0,30, или около 0,35, или около 0,40, или около 0,45, или около 0,50, или около 0,55, или около 0,60, или около 0,65, или около 0,70, или около 0,75, или около 0,80, или около 0,85, или около 0,90, или около 0,95, или около 1,0 мг/дозу.
В некоторых вариантах реализации количество средства на основе флагеллина составляет от около 0,03 до около 5 мкг/дозу (например, около 0,03 мкг/дозу, около 0,1 мкг/дозу, около 0,3 мкг/дозу, около 0,5 мкг/дозу около 1,0 мкг/дозу, около 1,5 мкг/дозу, около 2,0 мкг/дозу, около 2,5 мкг/дозу, около 3,0 мкг/дозу, около 4,0 мкг/дозу, около 4,5 мкг/дозу, около 5,0 мкг/дозу). В различных вариантах реализации композиции по настоящему изобретению и способы включают дозы средства на основе флагеллина, которые составляют менее чем около 5 мкг/дозу, или менее чем 4 мкг/дозу, или менее чем 3 мкг/дозу, или менее чем 2 мкг/дозу, или менее чем 1 мкг/дозу, или менее чем 0,5 мкг/дозу. В некоторых вариантах
- 44 037407 реализации композиции по настоящему изобретению и способы включают низкие дозы средства на основе флагеллина.
В различных вариантах реализации композиции по настоящему изобретению и способы не включают ковалентное присоединение антигена к средству на основе флагеллина либо в виде слитого белка или посредством химической конъюгации. В различных вариантах реализации композиции по настоящему изобретению не имеют ни эквимолярного соотношения количества антигена к средству на основе флагеллина (как в виде гибрида), ни нескольких молекул гаптена на одну молекулу средства на основе флагеллина (как в химических конъюгатах). В различных вариантах реализации количество средства на основе флагеллина в любой из присутствующих вакцин меньше, чем количество антигена. В различных вариантах реализации количество средства на основе флагеллина в любой из присутствующих вакцин меньше, чем количество антигена. В различных вариантах реализации количество средства на основе флагеллина в любой из присутствующих вакцин практически менее, чем количество антигена. В различных вариантах реализации количество средства на основе флагеллина в любой из существующих вакцин составляет около в 500 раз, или около в 450 раз, или около в 400 раз, или около в 350 раз, или около в 325 раз, или около в 300 раз, или около в 250 раз, или около в 200 раз, или около в 150 раз, или около в 100 раз, или около в 50 раз меньше, чем количество антигена.
В различных вариантах реализации комбинация средства на основе флагеллина и квасцов практически не оказывает влияния на взаимодействие средства на основе флагеллина с TLR5.
В различных вариантах реализации композиции по настоящему изобретению и способы не индуцируют выработку ФНО-α.
В различных вариантах реализации настоящее сочетание средства на основе флагеллина и квасцов практически стабильно при низких температурах в течение около одной недели (например, при температуре около 4°С в течение около 3 дней, или около 5 дней, или около 6 дней, или около 7 дней, или около 10 дней).
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу вакцинации субъекта против патологии, включающему введение эффективного количества вакцины, содержащей адъювант, содержащий средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия, и антигена, связанного с патологией. В другом своем аспекте настоящее изобретение относится к применению вакцины, содержащей адъювант, содержащий средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия, и антиген, связанный с патологией для вакцинации субъекта против патологии. В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению эффективного количества вакцины, содержащей адъювант, содержащий средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия, и антиген, связанный с патологией в производстве медикаментов для вакцинации субъекта против патологии.
В другом аспекте настоящее изобретение относится к способу иммуностимуляции субъекта перед или одновременно с вакцинацией, включающему введение эффективного количества адъюванта, содержащего средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия, при этом оба TH1- и TH2-опосредованных иммунных ответа оказываются иммуностимулированными. В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению эффективного количества адъюванта, содержащего средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия для иммуностимуляции субъекта перед или одновременно с вакцинацией. В другом аспекте настоящее изобретение относится к применению эффективного количества адъюванта, содержащего средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия в производстве медикаментов для иммуностимуляции субъекта перед или одновременно с вакцинацией.
В различных вариантах реализации вакцина, описанная в данном документе, приводит к улучшению адъювантных свойств по сравнению с вакциной, содержащей только антиген и гель или соль алюминия (или только средство на основе флагеллина и антиген). В различных вариантах реализации вакцина и/или адъювант, описанные в данном документе, вызывают более обширный, более разнообразный, более сильный и более продолжительный иммуностимулирующий эффект, чем вакцина, содержащая только антиген и гель или соль алюминия (или только средство на основе флагеллина и антиген), и/или адъювант, содержащий только гель или соль алюминия (или адъювант, содержащий только средство на основе флагеллина).
В некоторых вариантах реализации описанная вакцина и/или описанный адъювант вызывают увеличение титра 1 или нескольких из, или 2 или более из, или 3 или более из, или всех IgG1, IgG2a, IgG2b и IgG3 антител (например, сравнительно с адъювантом, содержащим только гель или соль алюминия или средство на основе флагеллина, или сравнительно с вакциной, содержащей только антиген и гель или соль алюминия или только средство на основе флагеллина)). В некоторых вариантах реализации описанная вакцина и/или описанный адъювант вызывают относительное увеличение титра всех IgG1, IgG2a, IgG2b и IgG3 антител. В некоторых вариантах реализации описанная вакцина и/или описанный адъювант вызывают относительное увеличение титра IgG3 антител более, чем описанная вакцина и/или описанный адъювант при отсутствии средства на основе флагеллина (или описанная вакцина и/или описанный адъювант при отсутствии только геля или соли алюминия).
В некоторых вариантах реализации антиген вводят одновременно с или последовательно за адъювантом.
- 45 037407
В некоторых вариантах реализации патология выбрана из инфекционных заболеваний, рака, аллергии и аутоиммунных заболеваний.
В некоторых вариантах реализации патология выбрана из дифтерии, столбняка, коклюша, гриппа, пневмонии, гепатита А, гепатита В, полиомиелита, желтой лихорадки, инфекции вируса папилломы человека (ВПЧ), сибирской язвы, бешенства, японского энцефалита, менингита, кори, эпидемического паротита, краснухи, гастроэнтерита, оспы, тифа, ветряной оспы (ветрянки), ротавируса и опоясывающего лишая.
В некоторых вариантах реализации патология представляет собой рак выбранный, но не ограничиваясь ими, из базально-клеточной карциномы, рака желчных путей; рака мочевого пузыря; рака кости; рака мозга и центральной нервной системы; рака молочной железы; рака брюшной полости; рака шейки матки; хориокарциному; рака толстой кишки и прямой кишки; рака соединительной ткани; рака пищеварительной системы; рака эндометрия; рака пищевода; рака глаз; рака головы и шеи; рака желудка (включая рак желудочно-кишечного тракта); глиобластомы; карциномы печени; гепатомы; интраэпителиального новообразования; рака почек или ренального рака; рака гортани; лейкемии; рака печени; рака легкого (например, мелкоклеточного рака легких, немелкоклеточного рака легких, аденокарциномы легких и плоскоклеточного рака легких); меланомы; миеломы; нейробластомы; рака ротовой полости (губ, языка, рта и глотки); рака яичников; панкреатического рака; рака простаты; ретинобластомы; рабдомиосаркомы; рака прямой кишки; рака дыхательной системы; рака слюнной железы; саркомы; рака кожи; плоскоклеточного рака; рака желудка; рака яичек; рака щитовидной железы; рака матки или рака эндометрия; рака мочеполовой системы; рака вульвы; лимфомы, включая лимфому Ходжкина и неходжкинскую лимфому, а также В-клеточной лимфомы (включая низкой степени злокачественности/ фолликулярную неходжкинскую лимфому (НХЛ), малую лимфоцитарную (МЛ) НХЛ, средней степени злокачественности/ фолликулярную НХЛ, средней степени злокачественности диффузную НХЛ; высшей степени злокачественности иммунобластную НХЛ, высшей степени злокачественности лимфобластную НХЛ, высшей степени злокачественности мелкоклеточную лимфому с нерассечёнными ядрами НХЛ, НХЛ с массивным поражением, лимфому клеток мантийной ткани, лимфому связанную со СПИДом и Макроглобулинемию Вальденстрема, хронический лимфолейкоз (ХЛЛ), острый лимфобластный лейкоз (ОЛЛ); волосатоклеточный лейкоз, хронический миелобластный лейкоз), а также других карцином и сарком, а также посттрансплантационного лимфопролиферативного синдрома (PTLD), а также ненормальной пролиферации сосудов, связанной с факоматозами, эдему (такую как связанную с опухолями головного мозга) и синдрома Мейгса.
В некоторых вариантах реализации патология представляет собой аллергию, выбранную в качестве неограничивающих примеров из аллергического ринита и конъюнктивита, аллергического или экзогенной бронхиальной астмы и гиперчувствительности к яду насекомых.
В некоторых вариантах реализации патология представляет собой патологию наркотической зависимости (например, от фентанила, героина, морфина, опиума, оксикодона, гидрокодона, кетамина, РСР, барбитуратов, бензодиазепинов, флунитразепа, ГОМК, метаквалона, гашиша, марихуаны, ЛСД, мескалина, псилоцибина, амфетамина, кокаина, МДМА, метамфетамина, метилфенидата и никотина).
В некоторых вариантах реализации композиции по настоящему изобретению (например, описанные адъюванты и вакцины) могут обладать достаточной основной функциональной группой, которая может вступать в реакцию с неорганической или органической кислотой, или карбоксильную группу, которая может вступать в реакцию с неорганическим или органическим основанием с образованием фармацевтически приемлемой соли. Фармацевтически приемлемая кислотно-аддитивная соль образуется из фармацевтически приемлемой кислоты, как хорошо известно в данной области техники. Такие соли включают фармацевтически приемлемые соли, перечисленные, например, в Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2-19 (1977) and The Handbook of Pharmaceutical Salts; Properties, Selection, and Use. P.H. Stahl and C.G. Wermuth (eds.), Verlag, Zurich (Switzerland) 2002, содержание которых включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
Фармацевтически приемлемые соли включают в качестве не ограничивающего примера сульфат, цитрат, ацетат, оксалат, хлорид, бромид, иодид, нитрат, бисульфат, фосфат, кислый фосфат, изоникотинат, лактат, салицилат, кислота цитрат, тартрат, олеат, таннат, пантотенат, битартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкаронат, сахарат, формиат, бензоат, глутамат, метансульфонат, этансульфонат, бензолсульфонат, п-толуолсульфонат, камфорасульфонат, памоат, фенилацетат, трифторацетат, акрилат, хлорбензоаты, динитробензоаты, гидроксибензоат, метоксибензоат, метилбензоат, о-ацетоксибензоат, нафталин-2-бензоат, изобутират, фенилбутират, α-гидроксибутират, бутин-1,4дикарбоновую кислоту, гексин-1,4-дикарбоновую кислоту, каприновую, каприловую кислоту, коричную кислоту, гликолевую кислоту, гептановую, гиппураты, малат, гидроксималеат, малонат, манделат, мезилат, никотинат, фталат, терефталат, пропионат, пропионат, фенилпропионат, себацат, пробковой, пбромбензолсульфонат, хлорбензолсульфонат, этилсульфонат, 2-гидроксиэтилсульфонат, метилсульфонат, нафталин-1-сульфонат, нафталин-2-сульфонат, нафталин-1,5-сульфонат, ксиленсульфонат и тартрат соли.
Термин фармацевтически приемлемая соль также относится к соли композиций по настоящему
- 46 037407 изобретению с кислотной функциональной группой, такой как функциональная группа карбоновой кислоты и основание. Подходящие основания включают, но не ограничиваясь ими, гидроксиды щелочных металлов, таких как натрий, калий и литий; гидроксиды щелочноземельных металлов, таких как кальций и магний; гидроксиды других металлов, таких как алюминий и цинк; аммиак и органические амины, такие как незамещенные или гидроксизамещенные моно-, ди- или триалкиламины, дициклогексиламин; трибутиламин; пиридин; N-метил, N-этиламин; диэтиламин; триэтиламин; моно-, ди- или три-(2-ОНнизшие алкиламины), такие как моно-; бис- или трис-(2-гидроксиэтил)амин, 2-гидрокси-трет-бутиламин или трис-(гидроксиметил)метиламин, Ν,Ν-ди-низший алкил-N-(гидроксил-низший алкил)амины, такие как N,N-диметил-N-(2-гидроксиэтил)амин или три-(2-гидроксиэтил)амин; N-метил-D-глюкамин; и аминокислоты, такие как аргинин, лизин и т.п.
В некоторых вариантах реализации композиции по настоящему изобретению (например, описанные адъюванты и вакцины), описанные в данном документе являются в форме фармацевтически приемлемой соли.
В некоторых вариантах реализации композиции по настоящему изобретению (например, описанные адъюванты и вакцины) могут содержать фармацевтически приемлемый носитель или несущую среду. Такие композиции могут необязательно содержать подходящее количество фармацевтически приемлемого наполнителя таким образом, чтобы обеспечить форму для надлежащего введения.
Фармацевтические наполнители могут быть жидкостями, такими как вода и масла, включая полученные из нефти, животного, растительного или синтетического происхождения, такие как арахисовое масло, соевое масло, минеральное масло, кунжутное масло и т.п. Фармацевтические наполнители могут быть, например, физиологическим раствором, аравийской камедью, желатином, крахмальной пастой, тальком, кератином, коллоидным диоксидом кремния, мочевиной и т.п. Кроме того, могут быть использованы вспомогательные, стабилизирующие, загущающие, смазывающие средства и красители. В одном из вариантов реализации фармацевтически приемлемые наполнители являются стерильными при введении субъекту. Вода является используемым наполнителем, когда любое средство, описанное в данном документе, вводят внутривенно. Солевые растворы и водные растворы декстрозы и глицерина также можно использовать в качестве жидких носителей, в частности для растворов для инъекций. Подходящие фармацевтические носители также включают крахмал, глюкозу, лактозу, сахарозу, желатин, солод, рис, муку, мел, силикагель, стеарат натрия, моностеарат глицерин, тальк, хлорид натрия, сухое обезжиренное молоко, глицерин, пропилен, гликоль, воду, этанол и т.п. Любая композиция, описанная в данном документе, при желании, может также содержать незначительные количества смачивающих или эмульгирующих средств или рН-буферные средства.
Настоящее изобретение включает композиции по настоящему изобретению (например, описанные адъюванты и вакцины) в различных препаратах. Любая композиция по настоящему изобретению может иметь форму растворов, суспензий, эмульсии, капель, таблеток, пилюль, гранул, капсул, капсул, содержащих жидкости, порошков, препаратов с замедленным высвобождением, суппозиториев, эмульсий, аэрозолей, спреев, суспензий или любой другой формы, подходящей для использования. В одном варианте реализации композиция является в форме капсулы (см., например, патент США № 5698155). Другие примеры подходящих фармацевтических наполнителей описаны в Remington's Pharmaceutical Sciences 1447-1676 (Alfonso R. Gennaro eds., 19th ed. 1995), включены в данный документ посредством ссылки.
Там, где это необходимо, композиции по настоящему изобретению могут также включать солюбилизирующее средство. Кроме того, средства могут быть доставлены с подходящим носителем или устройством доставки, как известно в данной области техники. Комбинированные терапии, изложенные в данном документе, могут быть совместно доставлены в одной доставке носителем или устройством доставки. Композиции для введения могут необязательно включать местный анестетик, такой как, например, лидокаин, для того, чтобы уменьшить боль в месте инъекции.
Препараты, содержащие композиции по настоящему изобретению, могут быть представлены в виде единичных дозированных форм и могут быть получены любым из способов, хорошо известных в области фармации. Такие методы, как правило, включают стадию приведения терапевтических средств в сочетании с носителем, который состоит из одного или нескольких вспомогательных ингредиентов. Как правило, препараты получают путем равномерного и тщательного приведения терапевтического средства в ассоциацию с жидким носителем, тонко измельченным твердым носителем или обоими, а затем, при необходимости, придания продукту формы в виде лекарственных форм желаемого препарата (например, влажное или сухое гранулирование, порошковые смеси и т.д., с последующим таблетированием с использованием общепринятых способов, известных в данной области техники).
В одном варианте реализации любую композиция по настоящему изобретению составляют в соответствии с рутинными процедурами в виде композиции, адаптированной для способа введения, описанного в данном документе.
Пути введения включают внутримышечный, например, с помощью инъекции или инфузии. В некоторых вариантах реализации описанный адъювант из средства на основе флагеллина (например, CBLB502) и гель или соль алюминия может предотвратить системную доставку средства на основе флагеллина и индуцируют локализованную доставку. В других вариантах реализации пути введения вклю
- 47 037407 чают назальный, пероральный и сублингвальную доставку.
Пути введения также могут быть внутрикожным, внутримышечным, внутривенным, подкожным, интраназальным, пероральным, сублингвальным, интраназальным, трансдермальным или путем ингаляции. В некоторых вариантах реализации введение осуществляют перорально или путем парентеральной инъекции. Способ введения остается на усмотрение практика и будет зависеть, в частности, от медицинского состояния. В большинстве случаев введение приводит к высвобождению любого средства, описанного в данном документе, в кровоток.
Любые композиции по настоящему изобретению (например, описанные адъюванты и вакцины) могут быть введены перорально. Такие композиции также могут быть введены любым другим удобным путем, например путем внутривенной инфузии или болюсной инъекции, путем абсорбции через эпителиальные или кожно-слизистые выстилающие ткани (например, слизистую оболочку полости рта, прямой кишки и слизистой оболочки кишечника и т.д.), и могут быть введены вместе с другим биологически активным средством. Введение может быть системным или локальным. Известны различные системы доставки, например инкапсулирование в липосомы, микрочастицы, микрокапсулы, капсулы и т.п., и могут быть использованы для введения.
Лекарственные формы, пригодные для парентерального введения (например, внутривенного, внутримышечного, внутрибрюшинного, подкожного и внутрисуставного введения и инфузионного), включают, например, растворы, суспензии, дисперсии, эмульсии и т.п. Они также могут быть изготовлены в виде стерильных твердых композиций (например, лиофилизированной композиции), которые могут быть растворены или суспендированы в стерильной среде для инъекций непосредственно перед использованием. Они могут содержать, например, суспендирующие или диспергирующие средства, известные в данной области техники.
Дозировка любой композиции по настоящему изобретению (например, описанных адъювантов и вакцин), а также режим дозирования могут зависеть от различных параметров, включая, но не ограничиваясь ими, патологию, подлежащую лечению, общее состояние здоровья субъекта, а также решение управляющего врача.
In vitro или in vivo анализы могут быть использованы для определения оптимальных диапазонов доз. Например, дозы могут быть определены со ссылкой на Physicians' Desk Reference, 66th Edition, PDR Network; 2012 Edition (December 27, 2011), содержание которого включено посредством ссылки в полном объеме.
Для введения композиции по настоящему изобретению (например, описанных адъювантов и вакцин) путем парентеральной инъекции доза обычно составляет от около 0,1 до около 250 мг в день, от около 1 до около 20 мг в день или от около 3 до около 5 мг в день. Инъекции могут быть даны до четырех раз в день. В общем случае при введении перорально или парентерально дозировка любого средства, описанного в данном описании, как правило, составляет от около 0,1 до около 1500 мг в день, или от около 0,5 до около 10 мг в день, или от около 0,5 мг до около 5 мг в день. Можно вводить дозировку до около 3000 мг в день.
В другом варианте реализации доставка может быть в везикуле, в липосомной частичке (см. Langer, 1990, Science, 249:1527-1533; Treat et a., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, p. 353-365 (1989).
Любые композиции по настоящему изобретению (например, описанные адъюванты и вакцины) могут быть введены путем контролируемого высвобождения активных веществ или замедленного высвобождения средств или устройств для доставки, которые хорошо известны обычным специалистам в данной области техники. Примеры включают, но не ограничиваясь ими, те, которые описаны в патентах США № 3845770; 3916899; 3536809; 3598123; 4008719; 5674533; 5059595; 5591767; 5120548; 5073543; 5639476; 5354556 и 5733556, каждый из которых включен в данный документ посредством ссылки в полном объеме. Такие лекарственные формы могут быть полезны для обеспечения контролируемого или замедленного высвобождения одного или более активных ингредиентов с использованием, например, гидропропилметилцеллюлозы, других полимерных матриц, гелей, проницаемых мембран, осмотических систем, многослойных покрытий, микрочастиц, липосом, микросфер или их комбинации для того, чтобы обеспечить желаемый профиль высвобождения в различных пропорциях. Подходящие препараты с регулируемым высвобождением или с замедленным высвобождением, известные специалистам в этой области техники, в том числе те, которые описаны в данном документе, могут быть легко выбраны для использования с активными ингредиентами средств, описанных в данном документе. Таким образом, настоящее изобретение обеспечивает единичные стандартные лекарственные формы, пригодные для перорального введения, такие как, но не ограничиваясь ими, таблетки, капсулы, желатиновые капсулы и капсуловидные таблетки, которые адаптированы для регулируемого или замедленного высвобождения.
Контролируемое или замедленное высвобождение активного ингредиента можно стимулировать различными условиями, в том числе, но не ограничиваясь ими, изменениями рН, изменениями температуры, стимуляцией с помощью соответствующей длины волны света, концентрацией или наличием ферментов, концентрацией или наличием воды или другими физиологическими условиями или соединениями.
- 48 037407
В другом варианте реализации могут использоваться полимерные материалы (см. Medical
Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled
Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984);
Ranger and Peppas, 1983, J. Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61; см. также Levy et al, 1985, Science,
228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 71:105).
В другом варианте реализации система с контролируемым высвобождением может быть размещена в непосредственной близости от целевой области, подлежащей обработке, при этом требуется только часть системной дозы (см., например, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, p. 115-138 (1984)). Могут быть использованы другие системы с контролируемым высвобождением, обсуждаемые в обзоре Langer, 1990, Science, 249:1527-1533.
Введение композиции по настоящему изобретению (например, описанных адъювантов и вакцин) может быть, независимо, однократным для одного пациента или может быть использовано в стратегии бустера. Введение может быть от около одного до четырех раз в день, или около одного до четырех раз в месяц, или около одного до около шести раз в год, или один раз в два, три, четыре или пять лет. Введение может быть осуществлено на протяжении около одного дня или около одного месяца, около двух месяцев, около трех месяцев, около шести месяцев, около года, около двух лет, около трех лет и может быть даже на протяжении всей жизни субъекта. Дозировка может быть введена в виде разовой дозы или разделенной на несколько доз.
Схема приема с использованием любой композиции, связанной с флагеллином (и/или дополнительных средств), описанной в данном документе, может быть выбрана в соответствии с различными факторами, включая тип, вид, возраст, вес, пол и медицинское состояние субъекта; тяжесть состояния, подлежащего лечению; путь введения; почечную или печеночную функцию субъекта; фармакогеномный характер индивида; и применяется специфическое соединение по настоящему изобретению. Любая композиция, связанная с флагеллином (и/или дополнительные средства), описанная в данном документе, может быть введена в виде одной суточной дозы или общая суточная доза может быть введена в виде разделенных доз на два, три или четыре раза в день. Кроме того, любая композиция, связанная с флагеллином (и/или дополнительные средства), описанная в данном документе, может быть введена непрерывно, чаще чем периодически на протяжении всей схемы приема.
В некоторых вариантах реализации композиции по настоящему изобретению (например, описанные адъюванты и вакцины) могут быть использованы в сочетании с одним или несколькими дополнительными средствами. В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к совместному введению и/или совместному формулированию. Любая из композиций, описанных в данном документе, может быть совместно сформулирована и/или совместно введена.
В некоторых вариантах реализации любая композиция, описанная в данном документе, действует синергически при совместном введении с другим средством, и вводится в дозах, которые ниже, чем дозы, обычно используемых, когда такие средства используются в качестве монотерапии. В различных вариантах реализации любое средство, упомянутое в данном документе, может быть использовано в комбинации с любой из композиций, описанной в данном документе.
В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к дополнительным средствам, описанным в данном документе в других местах. В одном варианте реализации любое средство, связанное с флагеллином, или композиция, содержащая то же самое, могут быть использованы со средствами, которые стимулируют NOD рецепторы (например, NOD1 и NOD2 агонисты, такие как пептидогликан, C12-iE-DAP и L18-MDP), и, как описано в Infect Immun. Oct 2013; 81(10):3855-3864, содержание которых включено в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
В некоторых вариантах реализации настоящее изобретение относится к химиотерапевтическим средствам в качестве дополнительных средств.
Примеры химиотерапевтических средств включают, но не ограничиваясь ими, алкилирующие средства, такие как тиотеп и цитоксан циклофосфамид; алкилсульфонаты, такие как бусульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая алтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилолмеламин; ацетогенины (например, буллатацин и буллатацинон); камптотецин (включая синтетический аналог топотекан); бриостатин; кэлистатин; СС-1065 (включая его адозелезин, карзелезин и бизелезин синтетические аналоги); криптофицины (например, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги, KW-2189 и СВ 1-ТМ1); элеутеробин; панкратистатин; саркодиктиин; спонгистатин; азота горчицы, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамид, эстрамустином, ифосфамид, мехлорэтамин, мехлорэтамин оксида гидрохлорид, мелфалан, novembichin, фенестерин, преднимустин, трофосфамид, урамустин; нитрозомочевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимнустин; антибиотики, такие как энедииновые антибиотики (например, калихеамицин, особенно калихеамицин гамма II и калихеамицин омега II (см., например, Agnew, Chem. Intl. Ed. Engl, 33: 183-186 (1994)); динемицин, включая динемицин А; бисфосфонаты, такие как клодронат; эсперамицин; а также неокарциностатиновый хромофор и родственные хромопротеиновые энедииновые антибиотические хромофоры), аклациномизины, актиномицин, аутра- 49 037407 мицин, азазерин, блеомицины, кактиномицин, карабицин, каминомицин, карцинофилин, хромомицин, дактиномицин, даунорубицин, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-Е-норлейцин, адриамицин доксорубицин (включая морфолино доксорубицина, цианоморфолино-доксорубицина, 2-пирролино-доксорубицин и дезокси доксорубицин), эпирубицин, эзорубицин, идаруцибин, марцеломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофенолокислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин, зорубицина; антиметаболиты, такие как метотрексат и 5-фторурацил (5-FU); аналоги фолиевой кислоты, такие как деноптерин, метотрексат, птероптерин, триметрексат; пуриновые аналоги, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн, тиогуанин; пиримидиновые аналоги, такие как анцитабин, азацитидин, 6азауридин, кармофур, цитарабин, дидеоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин, флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолона пропионат, эпитиостанол, мепитиостан, тестолактон; антинадпочечники, такие как миноглютетимид, митотан, трилостан; компенсатор фолиевой кислоты, такой как фолиновая кислота; ацеглатон; алдофосфамид гликозид; аминолевулиновая кислота; энилурацил; амсакрин; бестрабуцил; бизантрен; эдатраксат; дэф амина; демеколцин; диазиквон; элформитин; элиптиниум ацетат; эпотилон; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидаинид; мейтансиноиды, такие как маитанзин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопиданмол; нитраэрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; подофиллиновая кислота; 2-этилгидразид; прокарбазин; PSK полисахаридный комплекс (JHS Natural Products, Юджин, Орегон); разоксан; ризоксин; сизофуран; спирогерманиум; тенуазоновая кислота; триазиквон; 2,2',2трихлоротриэтиламин; трихотецины (например, Т-2 токсин, верракурин А, роридин А и ангуидин); уретан; виндезин; дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид (Ara-С); циклофосфамид; тиотеп; таксоиды, например таксол паклитаксел (Bristol-Myers Squibb Oncology, Принстон, Нью-Джерси), ABRAXANE без кремофора, альбумин-спроектированный препарат в виде наночастиц паклитаксела (American Pharmaceutical Partners, Шаумберг, 111), и таксотер доксетаксел (Rhone-Poulenc Rorer, Антони, Франция); хлорабуницил; GEMZAR гемцитабин; 6-тиогуанин; меркаптопурин; метотрексат; аналоги платины, такие как цисплатин, оксалиплатин и карбоплатин; винбластин; платина; этопозид (VP-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин; НЕВАЛБИН. винорелбин; новантрон; тенипозид; эдатрексат; дауномицин; аминоптерин; кселод; ибандронат; иринотекан (камптозар, СРТ-11) (в том числе схемы лечения иринотекана с 5-FU и лейковорином), ингибитор топоизомеразы RFS 2000; дифторметилорнитин (DMFO); ретиноиды, такие как ретиноевая кислота; капецитабин; комбретастатин; лейковорин (LV); оксалиплатин, в том числе схемы лечения оксалиплатином (FOLFOX); лапатиниб (Tykerb); ингибиторы PKC-α, Raf, H-Ras, EGFR (например, эрлотиниб (Tarceva)) и VEGF-A, которые уменьшают пролиферацию клеток и их фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из вышеперечисленных. Кроме того, способы лечения могут дополнительно включать применение радиации. Кроме того, способы лечения могут дополнительно включать применение фотодинамической терапии.
В некоторых вариантах реализации средства на основе флагеллина (и/или дополнительные средства), описанные в данном документе, включают производные, которые изменяются, т.е. путем ковалентного присоединения любого типа молекулы в композиции таким образом, что ковалентное присоединение не препятствует активности композиции. Например, но не в качестве ограничения, производные включают композиции, которые были модифицированы, в частности, гликозилированием, липидизацией, ацетилированием, пэгилированием, фосфорилированием, амидированием, дериватизацией известными защитными/блокирующими группами, протеолитическим расщеплением, связыванием с клеточным лигандом или другим белком и т.д. Любая из многочисленных химических модификаций может быть осуществлена известными методами, в том числе, но не ограничиваясь ими, специфическим химическим расщеплением, ацетилированием, формилированием, метаболическим синтезом турамицина и т.д. Кроме того, производное может содержать один или более неклассических аминокислот.
В других вариантах реализации настоящего изобретения средства на основе флагеллина (и/или дополнительные средства), описанные в данном документе, дополнительно содержат цитотоксическое средство, содержащее в иллюстративных вариантах реализации, токсин, химиотерапевтическое средство, радиоактивный изотоп и средство, которое вызывает апоптоз или клеточную смерть. Такие средства могут быть конъюгированы с композицией, описанной в данном документе.
Средства на основе флагеллина (и/или дополнительные средства), описанные в данном документе, могут быть, таким образом, модифицированы посттрансляционно для добавления эффекторных фрагментов, таких как химические линкеры, детектируемые остатки, такие как, например, флуоресцентные красители, ферменты, субстраты, светящиеся материалы, радиоактивные материалы, а также хемилюминесцентные фрагменты или функциональные остатки, такие как, например, стрептавидин, авидин, биотин, цитотоксин, цитотоксическое средство и радиоактивные материалы.
Иллюстративные цитотоксические средства включают, но не ограничиваясь ими, метотрексат, аминоптерин, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин, цитарабин, 5-фторурацил декарбазин; алкилирующие средства, такие как мехлорэтамин, тиоэпа хлорамбуцил, мелфалан, кармустин (BSNU), митомицин С, ломустин (CCNU), 1-метилнитрозомочевину, циклотосфамид, мехлорэтамин, бусульфана, дибромоманнитол,
- 50 037407 стрептозотоцин, митомицин С, цис-дихлородиамин платины(П), (ДДП) цисплатин и карбоплатин (параплатин); антрациклины включают даунорубицин (ранее дауномицин), доксорубицин (адриамицин), деторубицин, карминомицин, идаруцибин, эпирубицин, митоксантрон и бизантрен; антибиотики включают дактиномицином (актиномицин D), блеомицин, калихеамицин, митрамицин и антрамицин (АМС); и антимитотические средства, такие как алкалоиды барвинка, винкристин и винбластин. Другие цитотоксические средства включают паклитаксел (таксол), рицин, экзотоксин Pseudomonas, гемцитабин, цитохалазином В, грамицидин D, бромид этидия, эметин, этопозид, тенопозид, колхицин, дигидрокси антрацин дион, 1-дегидротестостерон, глюкокортикоиды, прокаин, тетракаина, лидокаин, пропранолол, пуромицин, прокарбазин, гидроксимочевину, аспарагиназу, кортикостероиды, митотан (O,P'-(DDD)), интерфероны и смеси этих цитостатических средств.
Дополнительные цитотоксические средства включают, но не ограничиваясь ими, химиотерапевтические средства, такие как карбоплатин, цисплатин, паклитаксел, гемцитабин, калихеамицин, доксорубицин, 5-фторурацил, митомицин С, актиномицин D, циклофосфамид, винкристин, блеомицин, антагонисты VEGF, антагонисты EGFR, Platins, таксолы, иринотекан, 5-фторурацил, гемцитабин, лейковорин, стероиды, циклофосфамид, мелфалан, алкалоиды барвинка (например, винбластин, винкристин, виндезин и винорелбин), мустины, ингибиторы тирозинкиназы, радиотерапия, антагонисты половых гормонов, селективные андрогенные модуляторы рецепторов, селективные модуляторы рецепторов эстрогена, антагонисты PDGF, антагонисты ФНО, ИЛ-1 антагонисты, интерлейкины (например, ИЛ-12 или ИЛ-2), антагонисты ИЛ-12R, токсин-конъюгированные моноклональные антитела, специфические моноклональные антитела с опухолевыми антигенами, Эрбитукс, Авастин, Пертузумаб, анти-СБ20-антитела, Ритуксан, окрелизумаб, офатумумаб, DXL625, HERCEPTIN®, или любую их комбинацию. Токсичные ферменты из растений и бактерий, такие как рицин, дифтерийный токсин и токсин Pseudomonas, могут быть конъюгированы с терапевтическими средствами (например, антителами) для создания средств, специфично убивающих клеточный тип (Youle, et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA, 77:5483 (1980); Gilliland, et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA, 77:4539 (1980); Krolick, et al., Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA, 77:5419 (1980)).
Другие цитотоксические средства включают цитотоксические рибонуклеазы, как описано Goldenberg в патенте США № 6653104. Варианты реализации настоящего изобретения также относятся к радиоиммуноконъюгатам, где радионуклид, который излучает альфа- или бета-частицы, является стабильным в сочетании с антителом, или их связывающим фрагментам, с использованием или без использования комплексообразующего средства. Такие радионуклиды включают бета-излучатели, такие как фосфор-32, скандий-47, медь-67, галлий-67, иттрий-88, иттрий-90, йод-125, йод-131, самарий-153, лютеций-177, рений- 186 или рений-188 и альфа-излучатели, такие как астатин-211, свинец-212, висмут-212, висмут-213 или актиний-225.
Иллюстративные детектируемые фрагменты дополнительно включают, но не ограничиваясь ими, пероксидазу хрена, ацетилхолинэстеразу, щелочную фосфатазу, бета-галактозидазу и люциферазу. Дополнительные иллюстративные флуоресцентные материалы включают, но не ограничиваясь ими, родамин, флуоресцеин, изотиоцианат флуоресцеина, умбеллиферон, дихлоротриазиниламин, фикоэритрин и дансилхлорид. Дополнительные иллюстративные хемилюминесцентные группы включают люминол, но не ограничиваясь им. Дополнительные иллюстративные биолюминесцентные материалы включают, но не ограничиваясь ими, люциферин и акворин. Дальнейшие иллюстративные радиоактивные материалы включают, но не ограничиваясь ими, йод-125, углерод-14, серу-35, тритий и фосфор-32.
В некоторых вариантах реализации субъект и/или животное представляет собой млекопитающее, например человек, мышь, крыса, морская свинка, собака, кошка, лошадь, корова, свинья, кролик, овца или не являющийся человеком примат, такой как обезьяна, шимпанзе или бабуин. В других вариантах реализации субъект и/или животное представляет собой не млекопитающее, такое как, например, даниорерио. В некоторых вариантах реализации субъект и/или животное может содержать флуоресцентно меченые клетки (например, с GFP). В некоторых вариантах реализации субъект и/или животное представляет собой трансгенное животное, содержащее флуоресцентную клетку.
В некоторых вариантах реализации субъектом и/или животным является человек. В некоторых вариантах реализации человеком является человеческий ребенок. В других вариантах реализации человеком является взрослый человек. В других вариантах реализации человеком является пожилой человек. В других вариантах реализации человеком может называться пациент.
В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения человек имеет возраст в диапазоне от около 0 до около 6 месяцев, от около 6 до около 12 месяцев, от около 6 до около 18 месяцев, от около 18 до около 36 месяцев, от около 1 до около 5 лет, от около 5 до около 10 лет, от около 10 до около 15 лет, от около 15 до около 20 лет, от около 20 до около 25 лет, от около 25 до около 30 лет, от около 30 до около 35 лет, от около 35 до около 40 лет, от около 40 до около 45 лет, от около 45 до около 50 лет, от около 50 до около 55 лет, из около от 55 до около 60 лет, от около 60 до около 65 лет, от около 65 до около 70 лет, от около 70 до около 75 лет, от около 75 до около 80 лет, от около 80 до около 85 лет, от около 85 до около 90 лет, от около 90 до около 95 лет или от около 95 до около 100 лет.
В других вариантах реализации субъект представляет собой не являющееся человеком животное, и, следовательно, данное изобретение относится к применению в ветеринарии. В конкретном варианте реа- 51 037407 лизации изобретения не являющееся человеком животное представляет собой домашнее животное. В другом конкретном варианте реализации изобретения не являющееся человеком животное представляет собой животное домашнего скота.
Изобретение относится к наборам, которые могут упростить введение любого средства, описанного в данном документе. Иллюстративный набор по изобретению включает любую композицию, описанную в данном документе, в виде стандартной лекарственной формы. В одном варианте реализации стандартная лекарственная форма представляет собой контейнер, такой как предварительно заполненный шприц, который может быть стерильным, содержащим любое средство, описанное в данном документе, и фармацевтически приемлемый носитель, растворитель, наполнитель или носитель. Набор может дополнительно содержать этикетку или напечатанные инструкции, дающие указания по использованию любого средства, описанного в данном документе. Набор может также включать векорасширитель, местный анестетик и чистящее средство для места введения. Набор может также дополнительно включать одно или несколько дополнительных средств, описанных в данном документе. В одном варианте реализации набор содержит контейнер, содержащий эффективное количество композиции по настоящему изобретению и эффективное количество другого состава, например, того, которое описано в данном документе.
Следующие определения используются в связи с изобретением, раскрытым в данном документе. Если не указано иное, все технические и научные термины, используемые в данном документе, имеют такое же значение, как общедоступное специалисту в области техники, к которой принадлежит данное изобретение.
Используемые в данном документе слова в единственном числе могут означать одно или более одного.
Кроме того, термин около при использовании в связи со ссылкой на цифровое обозначение означает ссылочное цифровое обозначение плюс или минус до 10% от этого ссылочного цифрового обозначения. Например, выражение около 50 охватывает диапазон от 45 до 55.
Термин эффективное количество при использовании в связи с медицинским применением представляет собой количество, которое является эффективным для обеспечения измеримого лечения, профилактики или снижения скорости патогенеза заболевания, представляющего интерес.
Используемое в данном документе, что-то уменьшилось, если считанная активность и/или эффект снижаются на значительную величину, например, по меньшей мере на около 10%, по меньшей мере на около 20%, по меньшей мере на около 30%, по крайней мере на около 40%, по меньшей мере на около 50%, по меньшей мере на около 60%, по меньшей мере на около 70%, по меньшей мере на около 80%, по меньшей мере на около 90%, по меньшей мере на около 95%, по меньшей мере на около 97%, по меньшей мере на около 98%, или более, вплоть до и включая по меньшей мере около 100%, в присутствии агента или стимула по сравнению с отсутствием такой модуляции. Как будет понятно специалисту с обычной квалификацией в данной области, в некоторых вариантах реализации активность снижается и некоторые последующие считывания значений будет уменьшаться, а другие могут увеличиваться.
С другой стороны, активность увеличивается, если считанная активность и/или эффект увеличиваются на значительную величину, например, по меньшей мере на около 10%, по меньшей мере на около 20%, по меньшей мере на около 30%, по меньшей мере на около 40%, по меньшей мере на около 50%, по меньшей мере на около 60%, по меньшей мере на около 70%, по меньшей мере на около 80%, по меньшей мере на около 90%, по меньшей мере на около 95%, по меньшей мере на около 97%, по меньшей мере на около 98%, или более, вплоть до и включая по меньшей мере около 100% или более, по меньшей мере, около в 2 раза, по меньшей мере, около в 3 раза, по меньшей мере, около в 4 раза, по меньшей мере, около в 5 раз, по меньшей мере, около в 6 раз, по меньшей мере, около 7 раз, по меньшей мере, около 8 раз, по меньшей мере, около в 9 раз, по меньшей мере, около в 10 раз, по меньшей мере, около в 50 раз, по меньшей мере, около в 100 раз, в присутствии средства или стимула, по сравнению с отсутствием такого средства или стимула.
Как упоминается в данном документе, все композиционные проценты даны по массе от общей массы композиции, если не указано иное. Используемое в данном документе слово включать и его варианты предназначено быть неограничивающим таким образом, что перечисление позиций в списке не является исключением других подобных элементов, которые также могут быть использованы в композициях и способах этой технологии. Аналогичным образом, термины могут и может и их варианты предназначены быть неограничивающими таким образом, что перечисление того, что вариант реализации может или могут содержать определенные элементы или функции не исключает другие варианты реализации настоящей технологии, которые не содержат те элементы или особенности.
Хотя неограничивающий термин содержащий, так же как и синоним таких терминов, как включающий, содержащий или имеющий, используется в данном документе для описания и заявления изобретения, настоящее изобретение или их варианты реализации могут в качестве альтернативы быть описаны с использованием альтернативных терминов, таких как состоящий из или практически состоящий из.
Используемые в настоящем документе слова предпочтительный и предпочтительно относятся к вариантам реализации технологии, которые предоставляют определенные выгоды при определенных
- 52 037407 обстоятельствах. Тем не менее, также могут быть предпочтительными и другие варианты реализации, при тех же самых или других обстоятельствах. Кроме того, перечисление одного или нескольких предпочтительных вариантов реализации не подразумевает, что другие варианты реализации не являются полезными и не предназначены для исключения других вариантов реализации из объема технологии.
Количество композиций, описанных в данном документе, необходимое для достижения терапевтического эффекта, может быть определено эмпирически в соответствии с обычными процедурами для конкретной цели. Как правило, для введения терапевтических средств (например, средств на основе флагеллина, средств на основе флагеллина (и/или дополнительных средств), описанных в данном документе) для терапевтических целей терапевтические средства приведены в фармакологически эффективной дозе. Термины фармакологически эффективное количество, фармакологически эффективная доза, терапевтически эффективное количество или эффективное количество относятся к количеству, достаточному для получения желаемого физиологического эффекта, или количеству, способному достичь желаемого результата, в частности, для лечения патологии или болезни. Эффективное количество, используемое в данном документе, будет включать количество, достаточное для того, чтобы, например, задержать развитие симптома патологии или заболевания, изменить ход симптома патологии или заболевания (например, замедлить прогрессирование симптом заболевания), уменьшить или устранить один или несколько симптомов или проявления патологии или заболевания и обратный симптом патологии или заболевания. Например, введение терапевтических средств для пациента, страдающего от рака, обеспечивает терапевтический эффект не только тогда, когда основное патологическое состояние ликвидируется или облегчается, но и тогда, когда пациент сообщает о снижении тяжести или продолжительности симптомов, связанных с этим заболеванием, например уменьшение опухолевой массы, уменьшение циркулирующих опухолевых клеток, увеличение выживаемости без прогрессирования заболевания. Терапевтическое преимущество также включает прекращение или замедление прогрессирования основного заболевания или патологии, независимо от того, наблюдается ли улучшение.
Эффективные количества, токсичность и терапевтическая эффективность могут быть определены с помощью стандартных фармацевтических процедур на клеточных культурах или на экспериментальных животных, например, для определения LD50 (дозы, летальной для 50% популяции) и ED50 (дозы, терапевтически эффективной у около 50% популяции). Дозировка может варьировать в зависимости от используемой лекарственной формы и способа введения. Соотношение дозы между токсическим и терапевтическим эффектами является терапевтическим индексом и может быть выражено как отношение LD50/ED50. В некоторых вариантах реализации являются предпочтительными композиции и способы, которые проявляют большие терапевтические индексы. Терапевтически эффективная доза может быть оценена первоначально из in vitro анализов, в том числе, например, анализов культуры клеток. Кроме того, доза может быть сформулирована на животных моделях для достижения диапазона концентраций циркулирующих в плазме, который включает IC50, как определено в клеточной культуре, или в соответствующей животной модели. Уровни описанных композиций в плазме могут быть измерены, например, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии. Эффекты любой конкретной дозировки можно контролировать с помощью подходящего биоанализа. Дозировка может быть определена лечащим врачом и модифицироваться при необходимости, чтобы удовлетворить наблюдаемые эффекты лечения.
В некоторых вариантах реализации эффект будет приводить к количественному изменению по меньшей мере на около 10%, по меньшей мере на около 20%, по меньшей мере на около 30%, по меньшей мере на около 50%, по меньшей мере на около 70% или по меньшей мере на около 90%. В некоторых вариантах реализации настоящего изобретения эффект будет приводить к количественному изменению на около 10%, около 20%, около 30%, около 50%, около 70%, или даже около 90% или более. Терапевтическое преимущество также включает прекращение или замедление прогрессирования основного заболевания или патологии, независимо от того, наблюдается ли улучшение.
В некоторых вариантах реализации фармакологически эффективное количество, которое будет лечить рак, будет модулировать симптомы, как правило, по меньшей мере на около 10%, по меньшей мере на около 20%, по меньшей мере на около 30%, по меньшей мере на около 40% или по меньшей мере на около 50%. В иллюстративных вариантах реализации такие модуляции приведут в результате, например, к статистически значимым и поддающимся количественному определению изменениям количества раковых клеток.
Настоящее изобретение дополнительно проиллюстрировано следующими не ограничивающими примерами.
- 53 037407
Примеры
Пример 1. Получение модельной вакцины.
Квасцы адъюванта (IMJECT ALUM, TEPMO) были использованы в сочетании с CBLB502 для заражения мышей с моделью антигена, овальбумина (OVA). Вакцина состояла из следующих компонентов, как показано в табл. А.
Таблица A
Компонент Количество (на мышь)
Овальбумин 10 мг
CBLB502 1 мкг/10 мкг
Адъювант квасцы 500 мкг
Для достижения превосходного поглощения CBLB502 (либо 1, либо 10 мкг) смешивали с 10 мг OVA и 500 мкг квасцов адъюванта в течение 30 мин при 300 об/мин при комнатной температуре.
Пример 2. Исследование иммунизации мышей.
C57BL/6 мыши-самцы (10-недельного возраста, n=6 для каждого эксперимента) были использованы для инъекций. Мыши были разделены на пять групп по шесть животных в каждой группе (n=6). Мышам вводили 100 мкл описанной выше вакцины в каждую из задних ног (200 мкл общего количества на мышь), как это показано в табл. В.
Таблица B
Овальбумин CBLB502 Адъювант квасцы
Группа 1
Группа 2 10 мг
Группа 3 10 мг 500 мкг
Группа 4 10 мг 1 мкг 500 мкг
Группа 5 10 мг 10 мкг 500 мкг
Через две недели после первоначальной иммунизации мышей заражали с дополнительным бустером, следуя той же установке, что и оригинальная инъекция. Плазму собирали одну, две и четыре недели после бустера через челюстную вену. Использованием анализа на основе ELISA было измерено общее количество IgG, IgG1, IgG2a, IgG2b и IgG3. Результаты показаны на фиг. 2, 3. На фигурах группа 1 также называется Необработанные; группа 2 также называется OVA, группа 3 также называется OVA + квасцы, группа 4 также называется SA 1 мкг, и группа 5 также называется SA 10 мкг .
На фиг. 2 проиллюстрированы данные ELISA для среднего ответа пяти вышеупомянутых групп мышей для лечения в момент времени 1 недели после бустера.
На фиг. 3 проиллюстрированы данные ELISA для среднего ответа пяти вышеупомянутых групп мышей для лечения в момент времени 2 недель после бустера.
На фиг. 4 проиллюстрированы данные ELISA для среднего ответа пяти вышеупомянутых групп мышей для лечения в момент времени 4 недель после бустера.
Пример 3. Оценка связывания CBLB502 с альгидрогелем.
Оценивали способность связывания CBLB502 с альгидрогелем. Альгидрогель адъювант 2%, суспензию влажного геля (коллоидный) гидроксида алюминия (INVIVIGEN Cat. # VAC-Alu-250), смешивали с CBLB502 при различных объемных соотношениях, в результате чего выходило от 10 до 52% суспензии альгидрогеля в реакции. Концентрацию CBLB502 поддерживали на уровне 10 мкг/мл, что соответствует 1 мкг/100 мкл дозы инокуляции (100 мкл объем инокуляции является рекомендуемым максимальным объемом для подкожной инъекции антигена/адъюванта смесей на участок инъекции для мышей). После инкубации в течение ночи при 4°С пробирки центрифугировали для осаждения альгидрогеля и несвязанного CBLB502, оставляя в растворе измеряли с помощью ELISA. Количества адсорбированного CBLB502 рассчитывали как разницу между общим белком добавленного к смеси и несвязанным CBLB502 (табл. С). Максимальная адсорбция CBLB502, более чем 99,9% связывания, наблюдалась, когда реакции были сформулированы с 40 до 52 мкл альгидрогеля/100 мкл; при более низких соотношениях эффективность связывания постепенно снижалась до около 83%, при 10 мкл/100 мкл суспензии аль гидрогеля.
- 54 037407
Таблица С
Адсорбция CBLB502 при разных соотношениях объема альгидрогеля 2%. Реакции связывания были составлены из CBLB502, PBS и указанных объемов адъюванта альгидрогеля 2%
Альгидрогель 2% мкл/100мкл Доза CBLB502 мкг/100мкл Общее количество CBLB502 нг/мл Несвязанный нг/мл Связанный нг/мл Связанный (%)
1 52 1 10000 2Д 9997,9 99,98
2 50 1 10000 1,6 9998,4 99,98
3 40 1 10000 2,9 9997,1 99,97
4 30 1 10000 22,7 9977,3 99,77
5 20 1 10000 173,4 9826,6 98,27
6 10 1 10000 1692,5 8307,5 83,07
Связывание CBLB502 с альгидрогелем также оценивали при различных дозах CBLB502. Адсорбцию CBLB502 к альгидрогелю (52 мкл/100 мкл адъюванта альгидрогеля 2%) определяли при дозах CBLB502 в диапазоне от приблизительно 0,02 до 20 мкг на 100 мкл. Реакции инкубировали, как описано выше, и несвязанный CBLB502 измеряли с помощью ELISA. Результаты (табл. D) демонстрируют, что почти полное связывание препарата с альгидрогелем, от 99,82 до 99,99% связывания было достигнуто при всех испытанных концентрациях CBLB502.
Таблица D
Эффективность CBLB502 связывания с альгидрогелем в PBS. Инкубацию проводили с CBLB502 в указанных дозах в PBS и 52 мкл/100 мкл адъюванта альгидрогеля 2%
Доза CBLB502 мкг/100мкл Общее количество CBLB502 нг/мл Несвязанный нг/мл Связанный нг/мл Связанный (%)
1 20 200000 199,3 199800,7 99,90
2 5 50000 90,6 49909,4 99,82
3 1,25 12500 0,79 12499,2 99,99
4 0,31 3125,0 0,029 3124,97 99,99
5 0,078 781,25 0,023 781,23 99,99
6 0,02 195,31 0,011 195,30 99,99
Связывание CBLB502 с альгидрогелем оценивали в присутствии вакцины ТТ-SMA. Эффективность связывания CBLB502 с альгидрогелем тестировали в присутствии испытуемой вакцины TT-SMA, гаптена сукцинил метамфетамина (SMA), конъюгированного со столбнячным анатоксином. В отдельном исследовании, как показано ниже, эту вакцину вводили мышам в дозе 32 мкг/100 мкл для сравнения эффективности с использованием и без CBLB502. Эта доза TT-SMA была совместно инкубирована с CBLB502 (от 0,02 до 20 мкг/100 мкл) и альгидрогелем (52 мкл/100 мкл) в стандартных условиях, и несвязанный CBLB502 измеряли с помощью ELISA. Эффективность связывания составляла от 99,7 до 99,9% при всех испытанных концентрациях CBLB502, что указывает на то, что адсорбция CBLB502 на альгидрогеле не подвергалась влиянию при добавлении TT-SMA к реакционной смеси
Таблица Е
Связывание CBLB502 с альгидрогелем в присутствии TT-SMA. Инкубацию проводили с CBLB502 в указанных дозах в PBS, 52 мкл/100 мкл адъюванта альгидрогеля 2% и 32 мкг/100 мкл конъюгата TT-SMA
Доза CBLB502 мкг/100мкл Общее количество CBLB502 нг/мл Несвязанный нг/мл Связанный нг/мл Связанный (%)
1 20 200000 668,88 199331,1 99,67
2 5 50000 50,21 49949,8 99,90
3 1,25 12500 11,44 12488,6 99,91
4 0,31 3125,0 1,65 3123,4 99,95
5 0,078 781,25 0,13 781,1 99,98
6 0,02 195,31 0,06 195,2 99,96
Пример 4. Анализ in vitro CBLB502 активности после адсорбции на альгидрогеле.
Был проведен анализ активности CBLB502/αльгидрогеля с использованием 293-hTLR5-LacZ репортерных клеток. Биологическую активность CBLB502 после адсорбции на альгидрогеле тестировали с использованием анализа in vitro, который измеряет активацию NF-кВ-контролируемого фермента - репортера, β-галактозидазы, в HEK293-hTLR5::NF-KB-LacZ (293-hTLR5-LacZ) клетках. Так как 293-hTLR5-LacZ клетки экспрессируют только один Toll-подобный рецептор, связанный с клеточной мембраной, человеческий TLR5, CBLB502 активность может быть определена без помех от других ли
- 55 037407 гандов Toll-подобных рецепторов, таких как LPS (эндотоксин).
Специфическая индукция β-галактозидазы репортера.
CBLB502/αльгидрогелем была продемонстрирована после инкубации клеток с серийно разведенным препаратом CBLB502/aльгидрогеля (5 мкг/100 мкл), начиная с 2000-кратного разведения в средах для роста клеток и приводит к концентрации альгидрогель-адсорбированного CBLB502 в диапазоне от 25 до 0,004 нг/мл (фиг. 5). Максимальная активность β-галактозидазы наблюдалась при 0,93 нг/мл альгидрогель-адсорбированного CBLB502; это значение согласуется с типичными результатами анализа с использованием растворимого CBLB502, где активность фермент-репортера, как правило, на пике около 1 нг/мл. Сам альгидрогель, испытанный при тех же разведениях, не индуцировал репортер. Таким образом, можно сделать вывод, в частности, что CBLB502 сохраняет свою биологическую активность после адсорбции на альгидрогеле и становится легко доступным для взаимодействия с целевым рецептором (TLR5) в обычных условиях культивирования клеток.
Затем готовили суспензии CBLB502/aльгидрогеля в инокуляции дозах для CBLB502 в пределах от 2,5 до 0,00015 мкг/100 мкл и добавляли в 293-hTLR5-LacZ клетки при 200-кратном разведении (фиг. 6). NF-кВ-индуцирующая активность следовала по типичной схеме реакции от дозы, и ее измеряли при субнанограммных дозах CBLB502/aльгидрогеля (менее 0,001 мкг/100 мкл), указывая, что при таких низких дозах CBLB502 не необратимо связывался с адъювантом квасцами и оставался активным.
Было проведено титрование активности CBLB502/aльгидрогеля при различных CBLB502 дозах. Суспензии CBLB502/aльгидрогеля титровали в среде для культивирования клеток и инкубировали с клетками 293-hTLR5-LacZ. Стандарты CBLB502 были включены в анализе для сравнения извлеченной активности. Полученный в результате активности фермент-репортера наносили на график против теоретической концентрации альгидрогель-связанного CBLB502, если предположить, что этот белок был полностью доступен (фиг. 7).
Результаты анализа титрования показали, что при дозе препарата 20 мкг/100 мкл активность CBLB502 следовала ожидаемым концентрациям, по существу соответствуя активности растворимых стандартов. Тем не менее, снижение дозы 64- и 256-кратного соответственно до около 0,31 и 0,078 мкг/100 мкл привело к снижению относительного восстановления NF-кВ-индуцирующей активности приблизительно на 15-30%. Эта очевидная потеря активности CBLB502 может быть связана с более сильным связыванием конкретных количеств белка относительно количества квасцов в композиции. Эти фиксированные количества могут представлять собой небольшую часть от общего CBLB502 при более высоких дозах, таких как 20 мкг/100 мкл, и не оказывать существенного влияния на измеренную активность. Тем не менее при более низких дозах эта сильно адсорбированная фракция может стать существенной по сравнению с общим белка, что приводит к более низкой измеримой активности CBLB502
Пример 5. Оценка Стабильности для кратковременного хранения CBLB502/aльгидрогеля при 4°С.
Препарат 1 мкг/100 мкл CBLB502 (52 мкл/100 мкл альгидрогеле 2%) готовили и испытывали на активность через 2 и 6 дней хранения при 4°С. Результаты анализа активности CBLB502 с использованием 293-hTLR5-LacZ репортерных клетки показаны на фиг. 8. На основе сравнения с растворимым стандартом CBLB502 можно сделать вывод, что NF-кВ, индуцирующая активность альгидрогельадсорбированного CBLB502, оставалась неизменной после 6 дней при условиях хранения.
Пример 6. Оценка CBLB502 диссоциации из альгидрогеля в PBS и клеточных средах.
Аликвоты CBLB502/альгидрогеля (1 мкг доза/100 мкл, 52 мкл/100 мкл альгидрогеля 2%) повторно суспендировали в PBS или клеточных средах (DMEM, дополнений с 10% FBS) и инкубировали в течение 3 ч при температуре 22°С и 37°С. После центрифугирования для удаления альгидрогеля измеряли диссоциированный CBLB502 в супернатантах с помощью ELISA. Подсчет количеств CBLB502, которые были восстановлены в процессе инкубации, продемонстрировал, что белок оставался стабильно связанным с альгидрогелем в PBS; однако в клеточной среде 28 и 53% CBLB502 было освобождено из комплекса при температуре 22 и 37°С соответственно (табл. F). Такая быстрая диссоциация от альгидрогеля в средах может быть облегчена с помощью сывороточных белков, которые могут вытеснить CBLB502 из комплекса с квасцами, объясняя, как белок становится легко доступным в анализе активности на основе клеток.
Таблица F
Восстановление CBLB502 из альгидрогеля после инкубации в PBS и клеточных средах
Условия инкубац ИИ Доза CBLB502 мкг/100мкл Общее количество CBLB502 нг/мл 22°С 37°С
Восстановлен ный нг/мл Десорбц ИЯ (%) Восстановлен ный нг/мл Десорбц ИЯ (%)
PBS 1 10000 2,3 0,02 33,2 0,33
Среды 1 10000 2807,6 28,1 5300,9 53,0
- 56 037407
Пример 7. Количественная оценка уровней CBLB502 и цитокинов в сыворотке мышей после подкожного введения CBLB502/альгидрогеля.
Исследование на животных было проведено с целью оценки целесообразности методов определения уровней CBLB502 и цитокинов в сыворотке после введения препарата CBLB502/альгидрогеля. Дизайн исследования представлен в табл. G. В этом исследовании мышам вводили CBLB502 подкожно с дозой 1 мкг, адсорбированного на 52 мкл/100 мкл альгидрогеле 2% и пробы сыворотки были отобраны от 0,5 до 24 ч после инокуляции.
Таблица G
Дизайн исследования
Номе Р групп ы Разме Р групп ы Возраст Линия Пол Лечение Объем инъекц ни μ L Момен т Времен и, сбор крови Оценка
1 3 8 недельн ые C57BL/6 самки Альгидрогель/РВ S, подкожно 100 1 час Сыворотку получали из собранной крови и анализирова ли на уровни концентрац ни энтолимода и цитокина с помощью ELISA
2 3 Альгидрогель/РВ S/CBL В502, (1 мкг/100 мкл CBLB502; 52 мкл/100 мкл альгидрогеля 2%) подкожно 100 30 мин
3 3 100 1 час
4 3 100 2 часа
5 3 100 4 часа
6 3 100 8 часа
7 3 100 24 часа
Концентрации CBLB502 в сыворотке определяли с помощью ELISA и были обнаружены на измеримых уровнях во всех группах животных, инокулированных CBLB502/альгидрогелем. Фармакокинетический профиль, представляющий средние концентрации CBLB502 в сыворотке на группу, проиллюстрирован на фиг. 9. Максимальная средняя концентрация CBLB502, 0,516 нг/мл, наблюдалась при первом же сборе крови в момент времени 0,5 ч после введения; минимальная концентрация составляла 0,012 нг/мл через 24 ч. Время полуэлиминации CBLB502 рассчитывали на 2,4 ч. Как обсуждалось выше, CBLB502 быстро диссоциирует из комплекса с альгидрогелем после инкубации в клеточной среде, содержащей 10% эмбриональной бычьей сыворотки. Таким образом, следует ожидать, что можно обнаружить белок, который высвобождается из квасцов в кровоток животного вскоре после инокуляции.
Концентрации трех цитокинов, KC, G-CSF и ИЛ-6, были измерены в собранных образцах сыворотки с помощью ELISA (фиг. 10). Быстрая индукция KC и ИЛ-6 была обнаружена через 1 ч после введения CBLB502/альгидрогеля; максимальные средние концентрации на группу, 29624 и 479 пг/мл соответственно были определены в момент времени 2 ч. После достижения максимума уровни содержания в крови этих цитокинов снизились до исходного уровня от 4 до 8 ч после инъекции. Концентрация G-CSF в сыворотке увеличилась примерно через 1 ч по сравнению с KC и ИЛ-6 и была максимальной между 2 и 4 ч после введения CBLB502/альгидрогеля (7141 и 7169 пг/мл средние концентрации на группу на 2 и 4 ч соответственно). Тем не менее CBLB502-индуцированный уровень G-CSF снижался более медленными темпами, оставаясь выше исходного уровня в момент времени 24 ч. В общем, кинетика индукции цитокина после введения CBLB502/альгидрогеле была сходной с кинетикой, наблюдаемой после инъекции растворимых препаратов CBLB502, предполагая последовательные эффекты этого лекарственного препарата.
Пример 8. Адъювант CBLB502 с метамфетаминовой вакциной.
В данном исследовании оценивали адъювант CBLB502 при дозе 32 мкг человеческой метамфетаминовой вакцины (SMA-TT) для достижения высоких и длительных уровней антител против МА у мышей. Был изучен диапазон от низкой к высокой дозе CBLB502 от 0,03 до 20 мкг с TT-SMA и квасцами. Десять групп (n=5) самок мышей BALB/C использовали для тестирования 0, 0,03, 0,1, 0,3, 1, 3, 10, 20 мкг 502 в комбинации с 32 мкг TT-SMA и 1,5 мг квасцов по сравнению с невакцинированными контролями и TT-SMA только с 502. Всем вакцинированным группам вводили два бустера, через 3 и 6 недель после первичной вакцинации. Уровни IgG против МА оценивали с помощью ELISA в суммарных образцах сывороток, собранных в возрасте 2, 4 и 6 недель после первичной вакцинации. Уровни антител были выше при 0,03 до 0,3 мкг 502 по сравнению с более высокими дозами (от 1 до 20 мкг) в 502. В этом эксперименте уровни антител были в 2 раза выше в группах с 0,1 мкг 502 в сочетании с TT-SMA и квасцами
- 57 037407 (группа 4), чем в группе сравнения только с TT-SMA и квасцами (группа 1), и приблизительно в 4 раза выше по сравнению с группой только с TT-SMA и 502 (группа 2), как проиллюстрировано на фиг. 11 (панель А). Анти-502 антитела в том же образце сыворотки были также оценены. Как проиллюстрировано на фиг. 11 (панель В), уровень анти-502 антител был минимальным при низком диапазоне доз 502 и увеличивался при более высоких дозах 502.
Пример 9. Получение вакцин с различными антигенами.
В этом примере композиция компонента адъюванта для адъювант-улучшенной вакцины устанавливается путем тестирования диапазона доз CBLB502 и CBLB502 необязательно в сочетании с антигеном, таким как, путем неограничения, Nod1 агониста C12-Ie-DAP. Кроме того, была проведена характеристика эффектов этих средств на гуморальный иммунный ответ на антигенной модели (овальбумина).
Как было показано выше, гидроксид алюминия и CBLB502 образуют комплекс, который, без желания привязываться к теории, стабилизирован с помощью электростатических сил, как веществ с противоположными зарядами в водной среде. Чтобы проверить относительную эффективность различных композиций в качестве адъювантного компонента вакцины, использовалась стандартная доза алюминия (1,5 мкг на инъекцию), загруженного с диапазоном доз CBLB502 (до 30 мкг, а в том числе 10, 3, 1, 0,3 и 0,1 мкг). CBLB502 в водном растворе добавляли к суспензии квасцов в PBS и перемешивали в течение 10 мин при комнатной температуре. Гидроксид алюминия затем осаждали центрифугированием и следы CBLB502 в супернатантах определяли с использованием двух количественных аналитических анализов: (i) на основе ELISA и (ii) на основе репортеров клеток (293 клеток TLR5-положительных, несущих NF-кВ отвечающий репортер и откалиброванных для обнаружения CBLB 502 в среде). В свете, в частности, вышеприведенных примеров, ожидается, что значительная доля CBLB 502 будет устойчиво связанной с квасцами в этих условиях и в пределах выбранного диапазона доз агонистов TLR5.
Для того чтобы определить, остается ли этот адъювант локализовано в месте инъекции вакцины, будут использоваться взрослые мыши самки BALB/C (n=10), несущие в своей зародышевой линии кДНК люциферазы светлячка под контролем NF-кВ отвечающего промотора. Эти NF-кВ репортерные мыши, являются чувствительным инструментом для обнаружения высвобождения CBLB502 из места инъекции путем мониторинга активности люциферазы в TLR5-позитивных тканях, таких как печень или тонкая кишка. Только одна доза CBLB502-содержащей адъювантной композиции будет использоваться, что соответствует самой высокой дозе, демонстрирующей стабильность в композиции с алюминиевыми квасцами in vitro (предположительно 30 мкг). Две дозы свободного CBLB502 (1 и 3 мкг в водном растворе, инъекции подкожно) будут использоваться для сравнения в качестве положительного контроля системно распределенного TLR5 агониста. Детекция люциферазы будет осуществляться с помощью люминесцентного визуализатора in vivo следующих инъекций люциферина на 2, 4, 6 и 18 ч после инъекции адъюванта. Для более точной и чувствительной детекции 3 животных из каждой группы умерщвляли через 6 ч после инъекции препарата адъюванта и ткани были собраны из места инъекции, лимфатические узлы возле укола и печень. Уровень активности люциферазы, свидетельствующий о наличии CBLB 502, подсчитывается в этих образцах тканей после лизиса ткани. В дополнение к функциональной детекции CBLB 502 на основе ожидаемой NF-кВ-индуцирующей активности, используется альтернативный аналитический способ установленного чувствительного анализа ELISA для прямого обнаружения CBLB502 в тканевых экстрактах.
Препараты адъювантов, содержащие описанный выше диапазон доз CBLB502, смешивают с 10 мг овальбумина и проводят вакцинацию, как описано в данном документе, с последующим ELISA определением титров различных классов противораковых антител против альбумина IgG (IgG1, IgG2a, IgG2b и IgG3). Результаты сравниваются с контролем только квасцы. Определение воздействия на различные типы IgG обеспечивает определение степени участия различных путей иммунизации (например, TH1- против ^^опосредованных путей) с помощью адъюванта.
После определения композиции адъюванта (относительно эффективности индуцирования антитела против овальбумина) дополнительное усиление иммунизации проверяется путем добавления в композицию агониста Nod1, C12-Ie-DAP.
Кроме того, на мышах проводится определение эффективности вакцины при различных дозах CBLB 502 для получения антител к антигену. Самок мышей выбирали по тому принципу, что они имеют более сильный иммунный ответ, чем самцы мышей, и мыши BALB/c являются широко используемой линией в иммунологических исследованиях вследствие их сильного иммунного ответа. В начале исследования мыши весом около 25 г помещены группами (5 на клетку) в стандартных акриловых клетках (7 X 11 X 5) с поликарбонатной подстилкой из кукурузных початков и верхних частей. Мыши будут иметь неограниченный доступ к пище (Harlan) и воде. Виварий будет поддерживаться на уровне 22±1°С и на 12:12 цикле свет/темнота (включение света в 6 ч утра). Все экспериментальные процедуры одобрены Комитетом по содержанию и использованию лабораторных животных (Institutional IACUC) и происходят в рамках принципов, очерченных в Руководстве по содержанию и использованию лабораторных животных.
Мышам проводили внутримышечные инъекции с вакциной в ягодичную мышцу. Каждую группу
- 58 037407 необязательно иммунизировали бустерной дозой с таким же составом вакцины через 3 и 6 недель после начальной иммунизации. Если устойчивые уровни антител не сохраняются в течение не менее 4 недель, будет проведена дополнительная иммунизация на 10 неделю.
Кровь собирается на 14-, 28-, 42-, 56- и 84-й день после начальной иммунизации, и ей давали свернуться при комнатной температуре в течение 2 ч. Сыворотку собирали центрифугированием при 4000 об/мин в течение 15 мин. Образцы хранятся при температуре -80°С до готовности, чтобы осуществить фермент-связанные иммуносорбентные анализы (ELISA). В контексте вакцины с антигеном X специфические антитела анти-антиген X оценивали с помощью анализов ELISA. Для измерения антител ELISA планшеты (Immulon 2HB, Daigger, Верной Хилс, Иллинойс) покрывали в течение ночи в карбонатном буфере (0,05 М, рН 9,6) с использованием рыбьего желатина, который является гетерологичным белковым носителем, в качестве сопряженного партнера для SMA. Объединенные или отдельные образцы сыворотки добавляют к пластинам в двукратных серийных разведениях, начиная с 1K в фосфатнобуферном солевом растворе (PBS)-Tween (0,1%), и инкубировали в течение 2 ч. Планшеты промывают PBS-Tween перед добавлением козьего антитела против мышиного IgG, конъюгированного с пероксидазой хрена (HRP) (Southern Biotech, Бирмингем, Алабама). Планшеты инкубируют в течение еще 30 мин и промывают перед добавлением субстрата (тетраметилбензидин, Sigma, Сент-Луис, Миссури). Планшеты инкубируют в течение 45 мин в темноте до остановки реакции 1 М HCl. Оптическая плотность (OD) полученных темных пятен на пластинах из антитела с антигеном X связывания используется для измерения уровней титра на микропланшете-ридере (iMARK Microplate Absorbance Reader) с использованием программного обеспечения Microplate Manager v 6.1.
Данные ELISA анализируют с помощью Sigmaplot (Systat Software Inc.), и фон связывания антител только с носителем будет вычитаться из каждого образца. Сравнения выполнены в каждой пластине со стандартной кривой очищенного мышиного IgG (Sigma), связанного непосредственно в лунках в серийном разведении.
Пример 10. Сравнение адъювантов/вакцин на основе CBLB502 с адъювантами/вакцинами на основе флагеллина.
Адъювант CBLB502/квасцы из приведенных выше примеров тестируется на равных против адъюванта флагеллин/квасцы с использованием способов и изучения по принципу, например, примера 9 (необязательно с антигеном). Кроме того, исследования связывания и диссоциации квасцов, а также исследования оценки на мышах, все описанные в приведенных выше примерах, являются повторимыми с адъювантом флагеллин/квасцы для сравнения с адъювантом CBLB502/квасцы. Также тестируется эффективность варианта CBLB502, т.е. CBLB502-S33MX.
В одном эксперименте сравнения группу мышей (n=6) иммунизируют TT-SMA, которая является метамфетаминовой вакциной и используется иллюстративно, совместно с адсорбированной на альгидрогеле либо с флагеллином, CBLB502 или CBLB502-S33MX. Иммунизация осуществляется в дни 0, 14 и 28 исследования. Каждая доза иммунизации включает 32 мкг TT-SMA и адъювантов следующим образом:
Группа 1: флагеллин 0,03 мкг,
Группа 2: флагеллин 0,1 мкг,
Группа 3: флагеллин 0,3 мкг,
Группа 4: флагеллин 1 мкг,
Группа 5: CBLB502 0,03 мкг,
Группа 6: CBLB502 0,1 мкг,
Группа 7: CBLB502 0,3 мкг,
Группа 8: CBLB502 1 мкг,
Группа 9: CBLB502-S33MX 0,03 мкг,
Группа 10: CBLB502-S33MX 0,1 мкг,
Группа 11: CBLB502-S33MX 0,3 мкг,
Группа 12: CBLB502-S33MX 1 мкг.
Образцы сыворотки собирали и анализировали в дни -1 (предварительно иммунизированная сыворотка), 14 (после прайма), 28 (после первого бустера) и 35 (пост второго бустера). Например, образцы сыворотки анализировали для определения уровней антител против метамфетамина и против энтолимода. Анализ указывает на то, что CBLB502/квасцы и CBLB502-S33МХ/квасцы вызывают более широкий, более разнообразный, более сильный и более продолжительный иммуностимулирующий эффект, чем флагеллин/квасцы. Кроме того, CBLB502/квасцы и CBLB502-S33МХ/квасцы активируют как TH1-, так и TH2-опосредованный иммунный ответ и больше THi-опосредованной иммунный ответ, чем флагеллин/квасцы.
Эквиваленты
В то время как настоящее изобретение было описано в связи с конкретными вариантами реализации, следует понимать, что возможны дополнительные модификации и данное изобретение охватывает любые вариации, применения или адаптации настоящего изобретения, следуя, в общем, принципам изобретения и включая такие отклонения от настоящего описания, которые приходят от известной или обычной практики в данной области, к которой относится изобретение, и которые могут быть применены
- 59 037407 к важным признакам, изложенным ранее в данном документе и следующим образом в объеме прилагаемой формулы изобретения.
Специалистам в данной области будет понятно или они смогут установить, используя не более чем рутинные эксперименты, многочисленные эквиваленты конкретных вариантов реализации, описанных конкретно в данном документе. Такие эквиваленты охватываются в объеме следующей формулы изобретения.
Включение в качестве ссылки
Все патенты и публикации, упомянутые в данном документе, включены в данный документ посредством ссылки в полном объеме.
Рассмотренные в настоящем документе публикации предоставлены исключительно для их раскрытия до даты подачи заявки на данное изобретения. Ничто в данном документе не должно быть истолковано как принятие того, что настоящее изобретение не имеет права датировать задним числом такую публикацию в силу предшествующего изобретения.
Как используется в настоящем документе, все заголовки представлены просто для организации и не предназначены для ограничения раскрытия каким-либо образом. Содержание любого отдельного раздела может быть в равной степени применимо ко всем разделам.
Ссылки
1. Yoon S.I., Kurnasov О., Natarajan V., Hong M., Gudkov A.V., Osterman A.L., Wilson I.A., 2012. Structural Basis of TLR5-Flagellin Recognition and Signaling. Science, 335:859-864 (PMID: 22344444).
2. Smith K.D., Andersen-Nissen E., Hayashi F., Strobe K., Bergman M.A., Barrett S.L., Cookson В.Т., Aderem A. 2003. Toll-like receptor 5 recognizes a conserved site on flagellin required for protofilament formation and bacterial motility. Nat. Immunol. 4:1247-53 (PMID: 14625549).
3. Mizel, S.В., A.P. West, R.R. Hantgan. 2003. Identification of a sequence in human Toll-like receptor 5 required for the binding of Gram-negative flagellin. J. Biol. Chem. 278:23624-23629 (PMID: 12711596).
4. Murthy, K.G., Deb, A., Goonesekera, S., Szabo, С. & Salzman, A.L. (2004), J. Biol. Chem. 279:56675675 (PMID: 14634022).
5. Andersen-Nissen E., Smith K.D., Strobe K.L., Barrett S.L., Cookson В.Т., Logan S.M., Aderem A. (2005), Evasion of Toll-like receptor 5 by flagellated bacteria. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 102:9247-9252 (PMID: 15956202).
6. Andersen-Nissen E., Smith K.D., Bonneau R., Strong R.K., Aderem A. 2007. A conserved surface on Toll-like receptor 5 recognizes bacterial flagellin. J. Exp. Med. 204:393-403 (PMID: 17283206).
7. Burdelya L.G., Krivokrysenko V.I., Tallant T.C., Strom E., Gleiberman A.S., Gupta D., Kurnasov O.V., Fort F.L., Osterman A.L., Didonato J.A., Feinstein E., Gudkov A.V., 2008. An agonist of Toll-like receptor 5 has radioprotective activity in mouse and primate models. Science, 320:226-230 (PMID: 18403709).
8. Huleatt J.W., Nakaar V., Desai P., Huang Y., Hewitt D., Jacobs A., Tang J., McDonald W., Song L., Evans R.K. et al. 2008. Potent immunogenicity and efficacy of a universal influenza vaccine candidate comprising a recombinant fusion protein linking influenza M2e to the TRL5 ligand flagellin. Vaccine. 26:201-214.

Claims (31)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Композиция вакцины, содержащая:
    (a) адъювант, содержащий средство на основе флагеллина, содержащее аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 98% идентичности с SEQ ID NO: 2, и гель или соль алюминия; и (b) антиген, стимулирующий защитный иммунитет против патологии, где антиген представляет собой часть инфекционного агента, выбранного из живых и ослабленных, убитых, инактивированных и анатоксиновых инфекционных агентов; и средство на основе флагеллина и антиген не являются ковалентно присоединенными в виде слитого белка.
  2. 2. Композиция вакцины по п.1, где патология выбрана из инфекционных заболеваний, рака и аллергий.
  3. 3. Композиция вакцины по п.2, где патология выбрана из дифтерии, столбняка, коклюша, гриппа, пневмонии, гепатита А, гепатита В, полиомиелита, желтой лихорадки, инфекции вируса папилломы человека (ВПЧ), сибирской язвы, бешенства, японского энцефалита, менингита, кори, эпидемического паротита, краснухи, гастроэнтерита, оспы, тифа, ветряной оспы (ветрянки), ротавируса и опоясывающего лишая.
  4. 4. Композиция вакцины по п.1, отличающаяся тем, что средство на основе флагеллина содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.
  5. 5. Композиция вакцины по п.1, где средство на основе флагеллина ингибирует и аннулирует способность нейтрализующих антител против флагеллина нейтрализовать адъювант.
  6. 6. Композиция вакцины по п.1, отличающаяся тем, что гель или соль алюминия выбраны из гидрооксида алюминия, фосфата алюминия и сульфата алюминия.
    - 60 037407
  7. 7. Композиция вакцины по п.1, отличающаяся тем, что одно или несколько из средства на основе флагеллина и/или антигена адсорбированы на геле или соли алюминия.
  8. 8. Композиция вакцины по п.1, отличающаяся тем, что средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия смешаны с образованием стабильного комплекса.
  9. 9. Композиция вакцины по п.1, отличающаяся тем, что средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия смешаны в соотношении, которое значительно ниже нагрузочной емкости соли алюминия.
  10. 10. Композиция вакцины по п.9, отличающаяся тем, что средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия смешаны в соотношении (мас./мас.) около 1:500, или около 1:600, или около 1:700, или около 1:800, или около 1:900, или около 1:1000, или около 1:2000, или около 1:5000, или около 1:10000.
  11. 11. Композиция вакцины по п.1, отличающаяся тем, что антиген соответствует одной или нескольким из следующих вакцин: КДС (вакцина дифтерия-столбняк-коклюш), АКДС (вакцина дифтериястолбняк-ацеллюлярный коклюш), Хиб (гемофильной инфекции типа b) конъюгированных вакцин, пневмококковой конъюгированной вакцины, вакцин против гепатита А, вакцин против полиомиелита, вакцин против желтой лихорадки, вакцин против гепатита В, комбинированной вакцины против АКДС, КДС, Хиб, вируса папилломы человека (ВПЧ), вакцины против сибирской язвы и вакцины против бешенства.
  12. 12. Композиция вакцины по п.1, отличающаяся тем, что вакцина дополнительно содержит дополнительный адъювант, выбранный из препаратов эмульсий масло в воде, сапониновых адъювантов, овальбумина, адъюванта Фрейнда, цитокинов и хитозанов.
  13. 13. Композиция вакцины по п.1, отличающаяся тем, что вакцина и/или адъювант вызывают иммуностимуляцию одного или нескольких из TH1- и TH2-опосредованных иммунных ответов.
  14. 14. Композиция вакцины по п.1, где вакцина представлена в виде, пригодном для введения перорально или путем парентеральной инъекции.
  15. 15. Композиция вакцины по п.1, где вакцина представлена в виде, пригодном для введения путем контролируемого высвобождения или замедленного высвобождения.
  16. 16. Композиция вакцины по п.1, где вакцина представлена в виде, пригодном для введения однократно для одного субъекта или для использования в стратегии бустера.
  17. 17. Способ вакцинации субъекта против патологии, включающий введение эффективного количества вакцины, содержащей:
    (a) адъювант, содержащий средство на основе флагеллина, содержащее аминокислотную последовательность, имеющую по меньшей мере 98% идентичности с SEQ ID NO: 2, и гель или соль алюминия, где соотношение (мас./мас.) средства на основе флагеллина и геля или соли алюминия составляет около 1:500 или менее; и (b) антиген, стимулирующий защитный иммунитет против патологии, где антиген представляет собой часть инфекционного агента, выбранного из живых и ослабленных, убитых, инактивированных и анатоксиновых инфекционных агентов; патология выбрана из инфекционных заболеваний, рака и аллергий; и средство на основе флагеллина и антиген не являются ковалентно присоединенными в виде слитого белка.
  18. 18. Способ по п.17, отличающаяся тем, что патология выбрана из дифтерии, столбняка, коклюша, гриппа, пневмонии, гепатита А, гепатита В, полиомиелита, желтой лихорадки, инфекции вируса папилломы человека (ВПЧ), сибирской язвы, бешенства, японского энцефалита, менингита, кори, эпидемического паротита, краснухи, гастроэнтерита, оспы, тифа, ветряной оспы (ветрянки), ротавируса и опоясывающего лишая.
  19. 19. Способ по п.17, отличающийся тем, что средство на основе флагеллина содержит аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 2.
  20. 20. Способ по п.17, где средство на основе флагеллина ингибирует и аннулирует способность нейтрализующих антител против флагеллина нейтрализовать адъювант.
  21. 21. Способ по п.17, где гель или соль алюминия выбраны из гидрооксида алюминия, фосфата алюминия и сульфата алюминия.
  22. 22. Способ по п.17, где одно или несколько из средства на основе флагеллина и/или антигена адсорбированы на геле или соли алюминия.
  23. 23. Способ по п.17, где средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия смешаны с образованием стабильного комплекса.
  24. 24. Способ по п.17, где средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия смешаны в соотношении, которое значительно ниже нагрузочной емкости соли алюминия.
  25. 25. Способ по п.24, где средство на основе флагеллина и гель или соль алюминия смешаны в соотношении (мас./мас.) около 1:500, или около 1:600, или около 1:700, или около 1:800, или около 1:900, или около 1:1000, или около 1:2000, или около 1:5000, или около 1:10000.
  26. 26. Способ по п.17, где антиген соответствует одной или нескольким из следующих вакцин: КДС (вакцина дифтерия-столбняк-коклюш), АКДС (вакцина дифтерия-столбняк-ацеллюлярный коклюш), Хиб
    - 61 037407 (гемофильной инфекции типа b) конъюгированных вакцин, пневмококковой конъюгированной вакцины, вакцин против гепатита А, вакцин против полиомиелита, вакцин против желтой лихорадки, вакцин против гепатита В, комбинированной вакцины против АКДС, КДС, Хиб, вируса папилломы человека (ВПЧ), вакцины против сибирской язвы и вакцины против бешенства.
  27. 27. Способ по п.17, где вакцина дополнительно содержит дополнительный адъювант, выбранный из препаратов эмульсий масло в воде, сапониновых адъювантов, овальбумина, адъюванта Фрейнда, цитокинов и хитозанов.
  28. 28. Способ по п.17, где вакцина и/или адъювант вызывают иммуностимуляцию одного или нескольких из ТН1- и ТН2-опосредованных иммунных ответов.
  29. 29. Способ по п.17, где введение является пероральным или путем парентеральной инъекции.
  30. 30. Способ по п.17, где введение происходит путем контролируемого высвобождения или замедленного высвобождения.
  31. 31. Способ по п.17, где вакцину вводят однократно для одного субъекта или используют в стратегии бустера.
EA201790294A 2014-07-30 2015-07-30 Композиция на основе флагеллина и способ вакцинации с ее использованием EA037407B1 (ru)

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462031116P 2014-07-30 2014-07-30
US201562110744P 2015-02-02 2015-02-02
US201562117366P 2015-02-17 2015-02-17
PCT/US2015/042887 WO2016019134A1 (en) 2014-07-30 2015-07-30 Flagellin-based agents and uses including effective vaccination

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201790294A1 EA201790294A1 (ru) 2017-08-31
EA037407B1 true EA037407B1 (ru) 2021-03-25

Family

ID=55218277

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201790273A EA035372B1 (ru) 2014-07-30 2015-07-29 Флагеллиновые композиции и их применение
EA201790294A EA037407B1 (ru) 2014-07-30 2015-07-30 Композиция на основе флагеллина и способ вакцинации с ее использованием

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201790273A EA035372B1 (ru) 2014-07-30 2015-07-29 Флагеллиновые композиции и их применение

Country Status (14)

Country Link
US (9) US10202426B2 (ru)
EP (2) EP3174893B1 (ru)
JP (3) JP6940916B2 (ru)
KR (1) KR20170031251A (ru)
CN (2) CN107087411B (ru)
AU (2) AU2015296555B2 (ru)
BR (1) BR112017001796A2 (ru)
CA (2) CA2994218A1 (ru)
EA (2) EA035372B1 (ru)
ES (1) ES2816630T3 (ru)
IL (2) IL250331B (ru)
MX (2) MX2017001279A (ru)
WO (2) WO2016019034A1 (ru)
ZA (1) ZA201701286B (ru)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107087411B (zh) * 2014-07-30 2021-06-29 基因组保护股份有限公司 鞭毛蛋白组合物及用途
JP6762030B2 (ja) * 2014-11-20 2020-09-30 国立研究開発法人医薬基盤・健康・栄養研究所 異なる核酸アジュバントの組み合わせによる、新規Ｔｈ１誘導性アジュバントおよびその用途
EP3668529A4 (en) 2017-07-20 2021-07-14 Spogen Biotech Inc. BIOACTIVE POLYPEPTIDES TO IMPROVE PLANT PROTECTION, GROWTH AND PRODUCTIVITY
GB2571696B (en) 2017-10-09 2020-05-27 Compass Pathways Ltd Large scale method for the preparation of Psilocybin and formulations of Psilocybin so produced
WO2019094528A1 (en) * 2017-11-09 2019-05-16 The Scripps Research Institute An improved heroin vaccine
JP7037930B2 (ja) * 2017-12-19 2022-03-17 株式会社小糸製作所 車両の運転支援装置、命令表示装置及び車両用灯具。
CN109879940A (zh) * 2017-12-25 2019-06-14 苏州和锐生物科技有限公司 鞭毛g多肽、抗体捕获器件及试剂盒
JP2021522271A (ja) * 2018-04-24 2021-08-30 ゲノム プロテクション，インコーポレイテッド 虚弱および加齢を改善するための方法
WO2020110154A1 (en) * 2018-11-30 2020-06-04 Bharat Biotech International Limited A chimeric therapeutic vaccine
CN113382742A (zh) * 2018-12-07 2021-09-10 基因组保护股份有限公司 工程化的鞭毛蛋白来源的组合物和用途
JP2022527697A (ja) * 2019-03-28 2022-06-03 ザ カトリック ユニバーシティ オブ コリア インダストリー－アカデミック コーオペレイション ファウンデーション フラジェリンから誘導されたｔｌｒ５作用剤を有効成分として含む移植片対宿主疾患の予防または治療用組成物
AU2020259406A1 (en) 2019-04-17 2021-11-04 Compass Pathfinder Limited Treatment of depression and other various disorders with psilocybin
CN110157655B (zh) * 2019-05-22 2021-06-01 中国兽医药品监察所 一种无毒性气肿疽梭菌基因工程亚单位疫苗用菌种及其应用
AU2020335893A1 (en) * 2019-08-30 2022-03-31 Genome Protection, Inc. Methods of increasing vaccine efficacy
EP4153564A4 (en) 2020-05-19 2024-06-19 Cybin IRL Limited DEUTERATED TRYPTAMINE DERIVATIVES AND METHODS OF USE
WO2021246666A1 (ko) * 2020-06-04 2021-12-09 가톨릭대학교 산학협력단 플라젤린으로부터 유도된 tlr5 작용제를 유효성분으로 포함하는 항암제 조성물
TWI746188B (zh) * 2020-09-28 2021-11-11 中山醫學大學 篩選治療腦炎藥物之平台及其方法
CA3208643A1 (en) 2021-01-18 2022-07-21 Conserv Bioscience Limited Coronavirus immunogenic compositions, methods and uses thereof
KR20240027752A (ko) * 2021-06-30 2024-03-04 인쎄름 (엥스띠뛰 나씨오날 드 라 쌍떼 에 드 라 흐쉐르슈 메디깔) 플라겔린의 폐 전달을 위한 에어로졸 조성물
KR102483177B1 (ko) * 2021-07-09 2022-12-29 전남대학교산학협력단 탈-면역 플라젤린 및 이를 포함하는 백신 조성물
KR102514849B1 (ko) * 2021-10-28 2023-03-28 전남대학교산학협력단 수지상 세포를 표적하는 신규한 펩타이드, 및 이를 포함하는 암 치료용 조성물
WO2023235749A2 (en) * 2022-06-01 2023-12-07 Flag Bio, Inc. Rna adjuvants, methods and uses thereof
KR20240022417A (ko) * 2022-08-10 2024-02-20 주식회사 메디스팬 바실러스 서브틸리스 플라젤린 변이체 및 이의 용도

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010040096A2 (en) * 2008-10-03 2010-04-08 Emory University Methods for the treatment of graft-versus-host disease
US20130004515A1 (en) * 2008-08-01 2013-01-03 Cleveland Clinic Foundation Methods for treating reperfusion injuries

Family Cites Families (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3007812A (en) 1957-02-11 1961-11-07 Allied Chem Water-repellent compositions, method of water-proofing porous surfaces therewith, and resulting water-repellent surfaces
US4554101A (en) 1981-01-09 1985-11-19 New York Blood Center, Inc. Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity
US5399494A (en) 1983-03-04 1995-03-21 The University Of Maryland System Vibrio cholerae strain CVD103Hgr, method of making same, and vaccines derived therefrom
US6130082A (en) 1988-05-05 2000-10-10 American Cyanamid Company Recombinant flagellin vaccines
EP0449958B9 (en) * 1988-12-19 2003-05-28 American Cyanamid Company Meningococcal class 1 outer-membrane protein vaccine
ES2088014T3 (es) 1990-09-28 1996-08-01 Sulzer Innotec Ag Aguja hueca para utilizacion medica y procedimiento para la fabricacion de este tipo de agujas huecas.
AU3630093A (en) 1992-03-02 1993-10-05 Biocine S.P.A. Helicobacter pylori proteins useful for vaccines and diagnostics
US5693476A (en) 1995-02-24 1997-12-02 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Methods of screening for compounds capable of modulating vesicular release
US20020009747A1 (en) 1997-08-25 2002-01-24 Freda Diane Miller Methods and reagents for identifying modulators of neuronal apoptosis
US5994409A (en) 1997-12-09 1999-11-30 U.S. Bioscience, Inc. Methods for treatment of neuro--and nephro--disorders and therapeutic toxicities using aminothiol compounds
US6586008B1 (en) * 1999-08-25 2003-07-01 Advanced Inhalation Research, Inc. Use of simple amino acids to form porous particles during spray drying
WO2001040280A2 (en) 1999-11-29 2001-06-07 Inotek Corporation Composition and method for treating a microbial infection
DE60128066T2 (de) 2000-01-31 2007-12-27 Munin Corporation, Chicago Humanes cyr61
US7300749B2 (en) 2000-02-17 2007-11-27 Millennium Pharmaceuticals, Inc. Molecules of the pyrin domain protein family and uses thereof
WO2002044363A1 (en) 2000-11-28 2002-06-06 Genesis Research And Development Corporation Limited Methods for modulating apoptotic cell death
US8703146B2 (en) 2001-04-20 2014-04-22 Institute For Systems Biology Toll-like receptor 5 ligands and methods of use
EP1379552B2 (en) 2001-04-20 2014-11-19 The Institute for Systems Biology Toll-like receptor 5 ligands and methods of use
CA2462638A1 (en) 2001-10-02 2003-04-10 University Of Chicago Methods and compositions for modulating apoptosis
US7078165B2 (en) 2003-03-27 2006-07-18 Institut Pasteur Method for modulating Nod1 activity, use of a MTP related molecule for modulating Nod1 activity, and therapeutic applications thereof
US7638485B2 (en) 2003-12-02 2009-12-29 Cleveland Biolabs, Inc. Modulating apoptosis
WO2005056041A2 (en) 2003-12-02 2005-06-23 Cleveland Clinic Foundation METHODS OF INHIBITING APOPTOSIS USING LATENT TGFβ
PT1706133E (pt) * 2003-12-02 2010-12-07 Cleveland Clinic Foundation Métodos para protecção contra radiação utilizando flagelina
US8580321B2 (en) 2003-12-02 2013-11-12 The Cleveland Clinic Foundation Method for reducing the effects of chemotherapy using flagellin related polypeptides
WO2005056054A2 (en) 2003-12-02 2005-06-23 Cleveland Clinic Foundation METHODS OF INHIBITING APOPTOSIS USING INDUCERS OF NF-κB
US20050266391A1 (en) 2004-01-15 2005-12-01 Bennett Brydon L Methods for preserving tissue
US7404963B2 (en) 2004-10-01 2008-07-29 The University Of South Florida Flagellin-based adjuvants and vaccines
EP1824510B1 (en) 2004-12-16 2012-10-31 Wake Forest University Health Sciences Use of flagellin in the immunotherapy of yersinia pestis
EP2460534A1 (en) * 2004-12-22 2012-06-06 Cleveland Clinic Foundation Flagellin related polypeptides and uses thereof
US20090306190A1 (en) 2005-09-09 2009-12-10 Mary Stenzel-Poore Neuroprotectants
US20070269406A1 (en) 2005-12-14 2007-11-22 Ichim Thomas E Transcatheter tumor immunoembolization
CA2636424A1 (en) 2006-01-09 2007-10-25 The Regents Of The University Of California Immunostimulatory combinations of tnfrsf, tlr, nlr, rhr, purinergic receptor, and cytokine receptor agonists for vaccines and tumor immunotherapy
WO2008094275A1 (en) 2007-01-30 2008-08-07 New York University Peptides for treatment of conditions associated with nitric oxide
US20110182847A1 (en) 2007-06-15 2011-07-28 Randolph Noelle Use of tlr agonists and/or type 1 interferons to alleviate toxicity of tnf-r agonist therapeutic regimens
EP2178896A1 (en) 2007-07-31 2010-04-28 The Johns Hopkins University Polypeptide-nucleic acid conjugate for immunoprophylaxis or immunotherapy for neoplastic or infectious disorders
ES2445755T3 (es) 2007-11-07 2014-03-05 Celldex Therapeutics, Inc. Anticuerpos que se unen a células dendríticas y epiteliales humanas 205 (DEC-205)
SG175796A1 (en) 2009-05-21 2011-12-29 Astrazeneca Ab Novel pyrimidine derivatives and their use in the treatment of cancer and further diseases
AU2010290896B2 (en) 2009-09-02 2014-07-03 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic compositions including TLR activity modulators
AU2010303464B2 (en) 2009-10-06 2014-05-01 Panacela Labs Llc Use of toll-like receptor and agonist for treating cancer
ES2887335T3 (es) * 2010-03-17 2021-12-22 Univ Cornell Vacuna contra las drogas de abuso basada en adenovirus alterado
CN103945863A (zh) * 2011-08-01 2014-07-23 爱默蕾大学 包含配体的vlp及其相关方法
CN102965386A (zh) * 2011-09-02 2013-03-13 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 一种重组细菌鞭毛蛋白衍生多肽的制备和活性鉴定方法
CN102772795B (zh) * 2012-08-06 2015-07-29 中国人民解放军疾病预防控制所 布鲁氏菌鞭毛蛋白bmeii1112在制备布鲁氏菌亚单位疫苗中的应用
CN107087411B (zh) * 2014-07-30 2021-06-29 基因组保护股份有限公司 鞭毛蛋白组合物及用途

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130004515A1 (en) * 2008-08-01 2013-01-03 Cleveland Clinic Foundation Methods for treating reperfusion injuries
WO2010040096A2 (en) * 2008-10-03 2010-04-08 Emory University Methods for the treatment of graft-versus-host disease

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ROBERT L. COFFMAN et al. Vaccine Adjuvants: Putting Innate Immunity to Work, Immunity, 2010 October 29, Vol. 33, no. 4, p. 492-503, DOI: 10.1016/jimmuni2010.10.002, p. 1-21 *

Also Published As

Publication number Publication date
JP2017523180A (ja) 2017-08-17
US20190315810A1 (en) 2019-10-17
MX2017001279A (es) 2017-08-07
CA2994289C (en) 2023-03-14
EA201790273A1 (ru) 2017-07-31
US20180354995A1 (en) 2018-12-13
AU2015296298B2 (en) 2020-05-21
US11542306B2 (en) 2023-01-03
WO2016019134A1 (en) 2016-02-04
US10202426B2 (en) 2019-02-12
ZA201701286B (en) 2018-04-25
IL250334B (en) 2021-09-30
EP3174552B1 (en) 2020-09-16
AU2015296555A1 (en) 2017-02-23
WO2016019134A8 (en) 2016-03-31
WO2016019034A1 (en) 2016-02-04
KR20170031251A (ko) 2017-03-20
JP2021191781A (ja) 2021-12-16
US20200392190A1 (en) 2020-12-17
EP3174552A1 (en) 2017-06-07
AU2015296555B2 (en) 2020-05-21
EP3174893A4 (en) 2018-01-03
IL250334A0 (en) 2017-03-30
BR112017001796A2 (pt) 2018-02-14
AU2015296298A1 (en) 2017-03-16
US20170266278A1 (en) 2017-09-21
US20200277339A1 (en) 2020-09-03
US10730915B2 (en) 2020-08-04
CA2994289A1 (en) 2016-02-04
US20190233478A1 (en) 2019-08-01
MX2017001406A (es) 2017-08-28
IL250331A0 (en) 2017-03-30
JP6940916B2 (ja) 2021-09-29
IL250331B (en) 2021-06-30
JP2017523184A (ja) 2017-08-17
EP3174893B1 (en) 2020-05-06
CN107087411A (zh) 2017-08-22
EA201790294A1 (ru) 2017-08-31
CA2994218A1 (en) 2016-02-04
US20210340190A1 (en) 2021-11-04
EA035372B1 (ru) 2020-06-03
US10669316B2 (en) 2020-06-02
US11034733B2 (en) 2021-06-15
AU2015296298A8 (en) 2017-03-23
JP6646039B2 (ja) 2020-02-14
US10975127B2 (en) 2021-04-13
CN107087411B (zh) 2021-06-29
US10336793B2 (en) 2019-07-02
EP3174893A1 (en) 2017-06-07
ES2816630T3 (es) 2021-04-05
US20210269491A1 (en) 2021-09-02
US20180251498A1 (en) 2018-09-06
CN107073092A (zh) 2017-08-18
EP3174552A4 (en) 2018-02-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10975127B2 (en) Flagellin-based agents and uses including effective vaccination
Duthie et al. Use of defined TLR ligands as adjuvants within human vaccines
Wilson-Welder et al. Vaccine adjuvants: current challenges and future approaches
ES2277413T3 (es) Formulacion que comprende un antigeno, un adyuvante inductor de una reaccion th-1 y un aminoacido poco soluble en agua, para uso en inmunizacion.
JP2006143729A (ja) 非毒性の粘膜アジュバント
KR20120059526A (ko) 항원성 ｓ．아우레우스 단백질을 포함하는 면역원성 조성물
US20150258190A1 (en) Nicotinamide as adjuvant
EP1791562A2 (en) Multivalent meningococcal derivatized polysaccharide-protein conjugates and vaccine
CA2912496C (en) Immunogenic composition for use in therapy
WO2006026689A2 (en) Multivalent meningococcal derivatized polysaccharide-protein conjugates and vaccine
EP1963522A2 (en) Multivalent meningococcal derivatized polysaccharide-protein conjugates and vaccine
Nikokar et al. Evaluation of the immune responses following co-administration of PilQ and type b-flagellin from Pseudomonas aeruginosa in the burn mouse model
CN114502573A (zh) 提高疫苗功效的方法
US20130011430A1 (en) HUMAN CHORIONIC GONADOTROPIN (hCG) BASED VACCINE FOR PREVENTION AND TREATMENT OF CANCER
JP5148577B2 (ja) 非毒性の粘膜アジュバント
RU2021816C1 (ru) Способ получения вакцины против холеры
US6562801B1 (en) PpGpp and pppGpp as immunomodulatory agents
CA2525615C (en) Vaccine composition comprising iron phosphate as a pharmaceutical aid to said vaccine
WO2024081929A1 (en) Multiple antigen presenting system (maps) cross-linked using a bifunctional fusion protein and its use in vaccines
Campana et al. CLINICAL THERAPY RESEARCH INALLERGIC DISEASES
Acevedo et al. Adjuvantes: Un componente esencial de las vacunas de Neisseria