EA029818B1 - Цитотоксические и антимитотические соединения и способы их применения - Google Patents

Цитотоксические и антимитотические соединения и способы их применения Download PDF

Info

Publication number
EA029818B1
EA029818B1 EA201591632A EA201591632A EA029818B1 EA 029818 B1 EA029818 B1 EA 029818B1 EA 201591632 A EA201591632 A EA 201591632A EA 201591632 A EA201591632 A EA 201591632A EA 029818 B1 EA029818 B1 EA 029818B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
substituted
unsubstituted
alkyl
group
cycloalkyl
Prior art date
Application number
EA201591632A
Other languages
English (en)
Other versions
EA029818B8 (ru
EA201591632A1 (ru
Inventor
Джофри С. Уинтерс
Александер Лоренс Мандел
Джеймс Р. Рич
Бредли Джон Хедберг
Том Хан Хсяо Хсих
Элис Мари Хосе Бурк
Джон Бабкук
Original Assignee
Займворкс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Займворкс, Инк. filed Critical Займворкс, Инк.
Publication of EA201591632A1 publication Critical patent/EA201591632A1/ru
Publication of EA029818B1 publication Critical patent/EA029818B1/ru
Publication of EA029818B8 publication Critical patent/EA029818B8/ru

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/06—Tripeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/6415—Toxins or lectins, e.g. clostridial toxins or Pseudomonas exotoxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6855—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from breast cancer cell
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C311/00—Amides of sulfonic acids, i.e. compounds having singly-bound oxygen atoms of sulfo groups replaced by nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C311/50—Compounds containing any of the groups, X being a hetero atom, Y being any atom
    • C07C311/51—Y being a hydrogen or a carbon atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/10—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/11—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C07C323/12—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and singly-bound oxygen atoms bound to the same carbon skeleton having the sulfur atoms of the thio groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton the carbon skeleton being acyclic and saturated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C323/00—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups
    • C07C323/64—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and sulfur atoms, not being part of thio groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C323/67—Thiols, sulfides, hydropolysulfides or polysulfides substituted by halogen, oxygen or nitrogen atoms, or by sulfur atoms not being part of thio groups containing thio groups and sulfur atoms, not being part of thio groups, bound to the same carbon skeleton containing sulfur atoms of sulfonamide groups, bound to the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C327/00—Thiocarboxylic acids
    • C07C327/02—Monothiocarboxylic acids
    • C07C327/04—Monothiocarboxylic acids having carbon atoms of thiocarboxyl groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms
    • C07C327/06—Monothiocarboxylic acids having carbon atoms of thiocarboxyl groups bound to hydrogen atoms or to acyclic carbon atoms to hydrogen atoms or to carbon atoms of an acyclic saturated carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C381/00—Compounds containing carbon and sulfur and having functional groups not covered by groups C07C301/00 - C07C337/00
    • C07C381/06—Compounds containing sulfur atoms only bound to two nitrogen atoms
    • C07C381/08—Compounds containing sulfur atoms only bound to two nitrogen atoms having at least one of the nitrogen atoms acylated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/08—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon radicals, substituted by hetero atoms, attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D207/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D207/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D207/44—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D207/444—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having two doubly-bound oxygen atoms directly attached in positions 2 and 5
    • C07D207/448—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having two doubly-bound oxygen atoms directly attached in positions 2 and 5 with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms, e.g. maleimide
    • C07D207/452—Heterocyclic compounds containing five-membered rings not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having two doubly-bound oxygen atoms directly attached in positions 2 and 5 with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms directly attached to other ring carbon atoms, e.g. maleimide with hydrocarbon radicals, substituted by hetero atoms, directly attached to the ring nitrogen atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/08—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/18—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D211/34—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to ring carbon atoms with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms with hydrocarbon radicals, substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D211/00—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings
    • C07D211/04—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D211/06—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D211/36—Heterocyclic compounds containing hydrogenated pyridine rings, not condensed with other rings with only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom having no double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D211/60—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/54—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/56—Amides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/60—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D213/62—Oxygen or sulfur atoms
    • C07D213/70—Sulfur atoms
    • C07D213/71—Sulfur atoms to which a second hetero atom is attached
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D333/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom
    • C07D333/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings
    • C07D333/04—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom
    • C07D333/26—Heterocyclic compounds containing five-membered rings having one sulfur atom as the only ring hetero atom not condensed with other rings not substituted on the ring sulphur atom with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to ring carbon atoms
    • C07D333/30—Hetero atoms other than halogen
    • C07D333/34—Sulfur atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0205—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-(X)3-C(=0)-, e.g. statine or derivatives thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/02—Systems containing only non-condensed rings with a three-membered ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/06—Systems containing only non-condensed rings with a five-membered ring
    • C07C2601/08—Systems containing only non-condensed rings with a five-membered ring the ring being saturated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C2601/00—Systems containing only non-condensed rings
    • C07C2601/12—Systems containing only non-condensed rings with a six-membered ring
    • C07C2601/14—The ring being saturated
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/26—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C317/28—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton with sulfone or sulfoxide groups bound to acyclic carbon atoms of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/26—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton
    • C07C317/32—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups, bound to the same carbon skeleton with sulfone or sulfoxide groups bound to carbon atoms of six-membered aromatic rings of the carbon skeleton
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C317/00—Sulfones; Sulfoxides
    • C07C317/44—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton
    • C07C317/48—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by singly-bound nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups
    • C07C317/50—Sulfones; Sulfoxides having sulfone or sulfoxide groups and carboxyl groups bound to the same carbon skeleton the carbon skeleton being further substituted by singly-bound nitrogen atoms, not being part of nitro or nitroso groups at least one of the nitrogen atoms being part of any of the groups, X being a hetero atom, Y being any atom
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/32—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against translation products of oncogenes
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

В изобретении представлены соединения, имеющие цитотоксическую и/или антимитотическую активность. Описываются способы, связанные с получением и применением таких соединений, так же как и фармацевтические композиции, содержащие такие соединения. Также описываются композиции, имеющие структуру (T)-(L)-(D), где (T) представляет собой нацеливающий фрагмент, (L) представляет собой необязательный линкер, и (D) представляет собой соединение, имеющее цитотоксическую и/или антимитотическую активность.

Description

Изобретение относится к биологически активным соединениям, композициям, содержащих их, и способам применения биологически активных соединений и композиций для лечения рака и других заболеваний.
Уровень техники
Та1р1г К. е! а1. (1994) ТеКакебгоп Бе!!. 35:4453-6 описал встречающееся в природе соединение - гемиастерлин, стабильный трипептид, полученный из морских губок, который вызывает деполимеризацию микротрубочек и задержку митоза в клетках. Гемиастерлин состоит из необычных и очень скрученных аминокислот, и эта особенность, как полагают, способствует его активности. Было модифицировано ряд групп отдельных структурных элементов гемиастерлина для оценки связи структура-активность и оценки активности аналогов гемиастерлина (см., например, Ζ;·ΐ5ΐ< е! а1., Вюогдашс & Мебюша1 Скет18!гу Бе!!ег8, 14:4353-4358, 2004; Ζа8к е! а1., 1 Меб Скет, 47:4774-4786, 2004; Уатаккка е! а1., Вюогдашс & Мебюша1 Скет18ку Бекеш, 14:5317-5322, 2004; РСТ/СВ 96/00942; АО 2004/026293; АО 96/33211 и И8 7579323).
Были описаны аналоги гемиастерлина с модификациями в А-сегменте или аминотерминальном сегменте (см., например, Ζа8к е! а1., 1 Меб Скет, 47:4774-4786, 2004; Уатазкка е! а1., Вюогдашс & Мебюша1 Скет18ку Бекеш. 14:5317-5322, 2004; И8 7579323). И8 7579323 описывает аналог гемиастерлина, упомянутый как НТ1-286, в котором индольный фрагмент заменен фенильной группой. НТ1-286 проявляет сильную антимитотическую активность и подвергнут клиническим исследованиям относительно лечения рака (Ка1аш е! а1., Ргос Ат 8ос С1ш Опсо1, 22:129, 2003).
Также были описаны аналоги гемиастерлина с модификациями в Ό-сегменте или карбокситерминальном сегменте (см., например, АО 2004/026293; Ζа8к е! а1., Вюогдашс & Мебюша1 Скет18ку Бекеш, 14:4353-4358, 2004; Ζа8к е! а1., 1 Меб Скет, 47:4774-4786, 2004). Основные модификации карбоксиконца привели к соединениям со значительно уменьшенной активностью по сравнению с исходными карбоновыми кислотами (см., например, АО 2004/026293, в частности, табл. 12. Ζа8к е! а1.,(1 Меб Скет, 47:47744786, 2004)), также сообщили, что амидные аналоги, полученные с использованием простых циклических и ациклических аминов, проявляют значительно пониженную активность (снижение на от одного до трех порядков). Среди нескольких толерантных модификаций, Ζа8к е! а1., (Вюогдашс & Мебюша1 Скет18ку Бекеш, 14:4353-4358, 2004) сообщили, что присоединение эстерифицированных циклических аминокислот к карбоксильному концу обеспечивает тетрапептидные аналоги с пролилподобным эфирсодержащим концом, некоторые из которых проявляют активность, сопоставимую с исходным соединением в тестах на раковой линии клеток.
Очень желательными являются сильные цитотоксические и антимитотические композиции для лечения ряда разрушительных расстройств, в том числе рака. В то время как было получено большое разнообразие аналогов гемиастерлина, многие, включая широкое разнообразие соединений с модификациями на карбокси-конце, демонстрируют снижение активности, что ограничивает их полезность в способах лечения.
По вышеуказанным причинам, в то время как был достигнут прогресс в этой области, существует необходимость в дополнительных сильных антимитотических и цитотоксических соединениях, имеющих предпочтительные характеристики, которые делают их пригодными для лечения самых разнообразных расстройств, включая рак. Настоящее изобретение удовлетворяет эти потребности и обеспечивает дополнительные связанные с этим преимущества.
Сущность изобретения
Вкратце, настоящее описание относится к биологически активным соединениям, композициям, содержащих их, и способам применения таких соединений и композиций.
В одном из вариантов реализации предлагаются соединения, имеющие следующую структуру (I):
где
Κι и К2 независимо выбраны из группы, состоящей из Н и насыщенного или ненасыщенного фрагмента, имеющего линейный, разветвленный или неароматический циклический скелет, содержащий от одного до десяти атомов углерода, и атомы углерода необязательно замещены -ОН, -I, -Вг, -С1, -Р, -СИ,
- 1 029818
-СО2Н, -СНО, -СО8Н или -ΝΟ2; или К2 и К5 конденсированы и образуют кольцо;
К3 и К4 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, К, АгК- или К3 и Кд связаны с образованием кольца;
К5 выбран из группы, состоящей из Н, К, АгК- и Аг; или К5 и К2 конденсированы и образуют кольцо;
К6 выбран из группы, состоящей из Н, К и АгК-;
К7 и К8 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, К и АгК-; и К9 представляет собой о о
II н II ννν>γ—с—N—5—Р14
II о · где
К определен как насыщенный или ненасыщенный фрагмент, имеющий линейный, разветвленный или неароматический циклический скелет, содержащий от одного до десяти атомов углерода, от нуля до четырех атомов азота, от нуля до четырех атомов кислорода и от нуля до четырех атомов серы, и атомы углерода необязательно замещены =О, =8, ОН, -ОК10, -О2СК10, -8Н, -8К10, -8ОСК10, -ΝΗ2, -МНК10, -МКюЕ -МНСОК-ю, -МКюСОКю, -I, -Вг, -С1, -Р, -СМ -СО2Н, -СО2К1О, -СНО, -СОКЮ, -СОМН -СОМТНКю, -СОШКАМ -СО8Н, -СО8К10, ШО2. -8О3Н, -8ОК1о, -§О2К10, где К10 является линейной, разветвленной или циклической, насыщенной или ненасыщенной алкильной группой, содержащей от нуля до десяти углеродов;
кольцо, образованное при соединении К3 и К4, имеет трех-семичленный неароматический циклический скелет в рамках определения К,
Υ определяется как фрагмент, выбранный из группы, состоящей из линейной, насыщенной или ненасыщенной, содержащей от одного до шести углеродов алкильной группы, необязательно замещенной К, АгК- или X; и
X определяется как фрагмент, выбранный из группы, состоящей из -ОН, -ОК, =О, =8, -О2СК, -8Н, -8К, -8ОСК, -МН2, -МНЕ, -М(К)2, -МНСОК, -М1К.СОК, -I, -Вг, -С1, -Р, -СМ -СО2Н, -СО2К, -СНО, -СОК, -СОМЩ, -СОМИК, -СОНК)2 -СО8Н, -СО8К, -МО, -8О3Н, -8ОК и -8О2К;
К|4 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила и необязательно замещенных гетероарилов, СОК24, -С8К24, -ОК24, и -МНК24, где каждый К24 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -8Н;
или их стереоизомер, пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль.
В одном из вариантов реализации Аг представляет собой ароматическое кольцо, выбранное из группы, состоящей из фенила, нафтила, антрацила, пирролила.
В одном из вариантов реализации предлагаются соединения, имеющие следующую структуру (1а): кзо
(1а) где
К|4 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила, необязательно замещенного гетероарила, -СОК24, -С8К24, -ОК24, и -М1НК24, где каждый К24 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -8Н;
К|5 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила и необязательно замещенного гетероарила;
К|6 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
К17 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
К|8 и К30 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С1-6 алкила и -8Н, при условии, что К18 и К30 не могут быть оба Н;
К19, К20, К21 и К22 представляют собой независимо Н и С1-6 алкил, по меньшей мере один из К19 и К20 представляет собой Н; или К20 и К21 образуют двойную связь, К19 представляет собой Н, и К22 представляет собой Н или С1-6 алкил; и
К23 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
- 2 029818 или их стереоизомер, пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль.
В дополнительном варианте реализации каждый необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный алкиламино, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный арил, необязательно замещенный гетероциклил и необязательно замещенный гетероарил независимо необязательно замещен =0, =8, -ОН, -ОК24, -О2СК24, -8Н, -ЗК24, -ЗОСК24, -ΝΗ2, -Ν3, -ΝΗΚ24, -Ν(Κ24)2, -ΝΗΟΘΚ24, -ΝΚ24ΟΘΚ24, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -ΟΝ, -СО2Н, -СО2К24, -СНО, -СОК24, <ΘΝΗ2, <ΘΝΗΚ24, -СО^К^Ъ, -СОЗН, -СОЗК24, -ЫО2, -ЗО3Н, -ЗОК24 или -ЗО2К24, где каждый К24 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -ЗН.
В другом дополнительном варианте реализации каждый необязательно замещенный арил и необязательно замещенный гетероарил независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного фенила, необязательно замещенного нафтила, необязательно замещенного антрацила, необязательно замещенного фенантрила, необязательно замещенного фурила, необязательно замещенного пирролила, необязательно замещенного тиофенила, необязательно замещенного бензофурила, необязательно замещенного бензотиофенила, необязательно замещенного хинолинила, необязательно замещенного изохинолинила, необязательно замещенного имидазолила, необязательно замещенного тиазолила, необязательно замещенного оксазолила и необязательно замещенного пиридинила.
В другом дополнительном варианте реализации К15 выбран из одной из следующих структур (II), (III), (IV), (V):
где
О представляет собой СК25 или Ν;
Ζ представляет собой С(К25)2, ΝΚ25, З или О;
каждый К25 независимо выбран из группы, состоящей из Н, -ОН, -К24,
-ЗОСК24, -ΝΗ2, -Ν3, -ΝΗΚ24, -Ν(Κ24)2, -ΝΗΌΚ24, -]\1К24СОК24, -Κ24ΝΗ2, -I,
-СО2К24, -СНО, -СОК24, -ί'.ΌΝΗ2. -ί'.ΌΝΗΚ2.·|. -СО^К24)2, -СОЗН, -СОЗК24
-ЗО2К24, где каждый К24 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном -ОН или -ЗН.
-ОК24, -О2СК24, -ЗН, -ЗК24, -Вг, -С1, -Ρ, -0Ν, -СО2Н, -ЫО2, -ЗО3Н, -ЗОК24 или
где каждый К25 независимо выбран из группы, состоящей из Н, -ОН, -К24, -ОК24, -О2СК24, -ЗН, -ЗК24, -ЗОСК24, -ΝΗ2, -Ν3, -ΝΗΚ24, -Ν(Κ24)2, -ХНСОК24, -МШСО!®. -Κ24ΝΗ2, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -0Ν, -СО2Н, -СО2К24, -СНО, -СОК24, -СОХИ, -СОМИКА, -СОВДКдЬ -СОЗН, -СОЗК24, -ИО2, -ЗО3Н, -ЗОК24 или -ЗО2К24, где каждый К24 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -ЗН.
В другом дополнительном варианте реализации К15 выбран из группы, состоящей из
- 3 029818
В другом дополнительном варианте реализации К45 представляет собой
В другом дополнительном варианте реализации Κ!6, Κ.ι7, Κ!8 и К30 каждый представляет собой метил.
В другом дополнительном варианте реализации Κ!6 представляет собой Н, Κ!7 представляет собой метил, Κι8 представляет собой метил, и К30 представляет собой метил.
Понятно, что любой вариант реализации соединений структуры (1а), как приведено выше, и любой отдельный заместитель, приведенный в данном документе для К44, Κι5, Κι6, Κ.ι7, Κι8, Κι9, Κ20 и Κ30 группы в соединениях структуры (1а), как приведено выше, может быть независимо объединен с другими вариантами реализации и/или заместителями соединений структуры (I) с образованием вариантов реализации настоящего описания, специально не раскрытых выше. В дополнение, в случае, когда приведен перечень заместителей для любого конкретного Κ!4, Κι5, Κ!6, Κ!7, Κι8, Κι9, Κ20, и Κ30 в конкретном варианте реализации и/или пункте формулы, понятно, что каждый отдельный заместитель может быть удален из определенного варианта реализации и/или пункта формулы, и что оставшийся перечень заместителей будет считаться находящимся в рамках настоящего описания.
В одном из вариантов реализации предлагаются соединения, имеющие следующую структуру (1Ъ):
где
К26 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила и необязательно замещенного гетероарила;
К27 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила и необязательно замещенного гетероарила;
Κι6 выбран из группы, состоящей из Н и Οι-6 алкила;
- 4 029818
К17 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила; и
К18 выбран из группы, состоящей из С1-6 алкила и -8Н, или их стереоизомер, пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль.
В дополнительном варианте реализации каждый необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный алкиламино, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный арил, необязательно замещенный гетероциклил и необязательно замещенный гетероарил независимо необязательно замещен =0, =8, -ОН, -ОК28, -О2СК28, -8Н, -8К28, -8ОСК28, -ΝΗ2, -Ν3, -ΝΗΚ28, -Ν(Κ28)2, -ИНСОК28, -ИК28СОК28, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -0Ν, -СО2Н, -СО2К28, -СНО, -СОК28, -СОЙТЩ, ^0ΝΗΚ28, -СО^К^Ц, -СО8Н, -СО8К28, -ЫО2, -8О3Н, -8ОК28 или -8О2К28, где каждый К28 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -8Н.
В другом дополнительном варианте реализации каждый необязательно замещенный арил и необязательно замещенный гетероарил независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного фенила, необязательно замещенного нафтила, необязательно замещенного антрацила, необязательно замещенного фенантрила, необязательно замещенного фурила, необязательно замещенного пирролила, необязательно замещенного тиофенила, необязательно замещенного бензофурила, необязательно замещенного бензотиофенила, необязательно замещенного хинолинила, необязательно замещенного изохинолинила, необязательно замещенного имидазолила, необязательно замещенного тиазолила, необязательно замещенного оксазолила и необязательно замещенного пиридинила.
В другом дополнительном варианте реализации К27 выбран из одной из следующих структур (II), (III), (IV), (V):
где представляет собой СК29 или Ν;
Ζ представляет собой С(К29)2, ΝΚ29, 8 или О;
каждый К29 независимо выбран из группы, состоящей из Н, -ОН, -ОК28, -О2СК28, -8Н, -8К28, -8ОСК28, -ЯН2, -Ν3, -МНК28, -Ν(Κ28)2, -]\1НСОК28, -]\1К28СОК28, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -0Ν, -СО2Н, -СО2К28, -СНО, -СОК28, -СОЯН2, -СОННК28. -ί'.ΌΝ(Κ28)2. -СО8Н, -СО8К28, -ЫО2, -8О3Н, -8ОК28 или -8О2К28, где каждый К28 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -8Н.
В другом дополнительном варианте реализации К27 выбран из группы, состоящей из
- 5 029818
В другом дополнительном варианте реализации К27 представляет собой
В другом дополнительном варианте реализации К16, К17 и К18 каждый представляет собой метил.
В другом дополнительном варианте реализации К16 представляет собой Н, К17 представляет собой метил, и К18 представляет собой метил.
Понятно, что любой вариант реализации соединений структуры (1Ь), как приведено выше, и любой отдельный заместитель, приведенный в данном документе для К25, К26, К16, К17, К18, К18 и К20 группы в соединениях структуры (1Ь), как приведено выше, может быть независимо объединен с другими вариантами реализации и/или заместителями соединений структуры (I) с образованием вариантов реализации настоящего описания, специально не раскрытых выше. В дополнение, в случае, когда приведен перечень заместителей для любого конкретного К25, К26, К16, К17, К18, К18 и К20 в конкретном варианте реализации и/или пункте формулы, понятно, что каждый отдельный заместитель может быть удален из определенного варианта реализации и/или пункта формулы, и что оставшийся перечень заместителей будет считаться находящимся в рамках настоящего описания.
В одном из вариантов реализации изобретение предлагает способ получения соединений, имеющих структуру (I), (1а) или (1Ь).
В другом варианте реализации предлагается фармацевтическая композиция, содержащая соединение, имеющее структуру (I), (1а) или (1Ь) или его стереоизомер, фармацевтически приемлемую соль или пролекарственную форму, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
В другом варианте реализации предлагается способ применения соединения, имеющего структуру (I), (1а) или (1Ь) или его стереоизомера, фармацевтически приемлемой соли или пролекарственной формы в терапии. В частности, настоящее описание предлагает способ лечения рака у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения, имеющего структуру (I), (Ш) или (ГЬ), или его стереоизомера, фармацевтически приемлемой соли или пролекарственной формы, или фармацевтической композиции, содержащей соединение, имеющее структуру (I), (Ш) или (Ш), или его стереоизомер, фармацевтически приемлемую соль или пролекарственную форму, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
В другом варианте реализации настоящее описание предлагает способ ингибирования роста опухоли у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения, имеющего структуру (I), (1а) или (ιό), или его стереоизомера, фармацевтически приемлемой соли или пролекарственной формы, или фармацевтической композиции, содержащей соединение, имеющее структуру (I), (Ш) или (ХЬ), или его стереоизомер, фармацевтически приемлемую соль или пролекарственную форму, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
В другом варианте реализации настоящее описание предлагает способ уничтожения раковых клеток ίη νίίτο, используя соединения, имеющие структуру (I), (Ш) или (ИЬ), или его стереоизомер, фармацевтически приемлемую соль или пролекарственную форму.
В другом варианте реализации настоящее описание предлагает способ уничтожения раковых клеток ίη νίνο у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения, имеющего структуру (I), (Ш) или (!Ь), или его стереоизомера, фармацевтически приемлемой соли или пролекарственной формы, или фармацевтической композиции, содержащей соединение, имеющее структуру (I), (Ш) или (ΣΕ), или его стереоизомер, фармацевтически приемлемую соль или пролекарственную форму, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
- 6 029818
В другом варианте реализации настоящее описание предлагает способ увеличения выживания млекопитающего, имеющего рак, включающий введение такому млекопитающему эффективного количества соединения, имеющего структуру (I), (1а) или (1Ь), или его стереоизомера, фармацевтически приемлемой соли или пролекарственной формы, или фармацевтической композиции, содержащей соединение, имеющее структуру (I), (1а) или (ЛЬ), или его стереоизомер, фармацевтически приемлемую соль или пролекарственную форму, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
В одном из вариантов реализации предлагаются композиции, содержащие биологически активные соединения, имеющие структуру или (I), (1а) или (1Ь), или их стереоизомер, фармацевтически приемлемую соль или пролекарственную форму, связанные непосредственно или опосредованно с нацеливающим фрагментом.
В одном из вариантов реализации изобретение предлагает композиции, имеющие следующую структуру:
(Т)-(Ь)-(О) (VI) где (Т) представляет собой нацеливающий фрагмент, (Ь) представляет собой необязательный линкер, и (Ό) представляет собой соединение, имеющее структуру (I), (1а) или (1Ь), или его стереоизомер, фармацевтически приемлемую соль или пролекарственную форму. (Ό) ковалентно присоединен к (Ь), если (Ь) присутствует, или (Т), если (Ь) отсутствует.
В особенном варианте реализации (Ό) представляет собой соединение, имеющее структуру (!Ь).
В одном из вариантов реализации нацеливающий фрагмент представляет собой антитело. Соответственно в одном из вариантов реализации предлагаются конъюгаты антитело-лекарственное средство (КАЛС), содержащие соединения, имеющие структуру (I), Ца) или (Ш), или их стереоизомер, фармацевтически приемлемую соль или пролекарственную форму.
В одном из вариантов реализации изобретение предлагает способ получения композиции, имеющей структуру (VI).
В другом варианте реализации предлагается фармацевтическая композиция, содержащая соединение, имеющее структуру (VI), или его стереоизомер, фармацевтически приемлемую соль или пролекарственную форму, и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
В другом варианте реализации предлагается способ применения композиции, имеющей структуру (VI), в терапии. В частности, настоящее описание предлагает способ лечения рака у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективного количества композиции, имеющей структуру (VI), или фармацевтической композиции, содержащей композицию, имеющую структуру (VI), и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
В другом варианте реализации настоящее описание предлагает способ ингибирования роста опухоли у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективного количества композиции, имеющей структуру (VI), или фармацевтической композиции, содержащей композицию, имеющую структуру (VI), и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
В другом варианте реализации настоящее описание предлагает способ уничтожения раковых клеток ίη νίίτο, используя композицию, имеющую структуру (VI). В другом варианте реализации настоящее описание предлагает способ уничтожения раковых клеток ίη νίνο у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективного количества композиции, имеющей структуру (VI), или фармацевтической композиции, содержащей композицию, имеющую структуру (VI), и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
В другом варианте реализации настоящее описание предлагает способ увеличения времени выживания млекопитающего, имеющего рак, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективного количества композиции, имеющей структуру (VI), или фармацевтической композиции, содержащей композицию, имеющую структуру (VI), и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
Эти и другие аспекты описания будут очевидны из следующего подробного описания.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1 иллюстрирует обобщенные данные цитотоксичности (ЕС50) для каждого из соединений А-Е для двух клеточных линий (НСС1954 и Джуркат).
Фиг. 2 иллюстрирует диаграмму данных цитотоксичности для соединения А для двух клеточных линий (НСС1954 и Джуркат).
Фиг. 3 иллюстрирует диаграмму данных цитотоксичности для соединения В для двух клеточных линий (НСС1954 и Джуркат).
Фиг. 4 иллюстрирует диаграмму данных цитотоксичности для соединения С для двух клеточных линий (НСС1954 и Джуркат).
Фиг. 5 иллюстрирует диаграмму данных цитотоксичности для соединения Ό для двух клеточных линий (НСС1954 и Джуркат).
- 7 029818
Фиг. 6 иллюстрирует диаграмму данных цитотоксичности для соединения Е для двух клеточных линий (НСС1954 и Джуркат).
Фиг. 7 иллюстрирует кривую гибели клеток на примере НСС 1954 клеток ίη νίίτο при использовании конъюгатов антитело-лекарственное средство Т-ЬС-δΡΌΡ-Α (Трастузумаб, ЬС-δΡΌΡ линкер, соединение А) и Т-8МСС-А (Трастузумаб, 8МСС линкер, соединение А). На фиг. проиллюстрированы значения ЕС5о.
Фиг. 8 иллюстрирует кривую гибели клеток на примере НСС 1954 клеток ίη νίίτο при использовании конъюгатов антитело-лекарственное средство Т- δΡΌΡ-Β (Трастузумаб, ЬС-δΡΌΡ линкер, соединение В) и Т-8МСС-А (Трастузумаб, 8МСС линкер, соединение В). На фиг. проиллюстрированы значения ЕС50.
Фиг. 9 иллюстрирует кривую гибели клеток на примере НСС 1954 клеток ίη νίίτο при использовании конъюгата антитело-лекарственное средство Τ-ΕΟ-δΡϋΡ-Ο (Трастузумаб, ЬС-δΡΌΡ линкер, соединение С). На фиг. проиллюстрированы значение ЕС50.
Фиг. 10 иллюстрирует кривую гибели клеток на примере НСС 1954 клеток ίη νίίτο при использовании конъюгатов антитело-лекарственное средство Т-МСνсΡАΒС-85 (Трастузумаб, МСус ΡАΒС линкер, соединение 85), Т-МСνсΡАΒС-77 (Трастузумаб, МСус ΡАΒС линкер, соединение 77) и Т-МСνсΡАΒС-80 (Трастузумаб, МСус ΡАΒС линкер, соединение 80). На фиг. проиллюстрированы значения ЕС50.
Фиг. 11 иллюстрирует кривую гибели клеток на примере ВхРС-3 клеток ίη νίίτο при использовании конъюгата антитело-лекарственное средство С-МСусΡАΒС-77 (Цетуксимаб, МСус ΡАΒС линкер, соединение 77) и кривую гибели клеток на примере ΗΡΑΕ-ΙΙ клеток ίη νίίτο при использовании конъюгата антитело-лекарственное средство С-МСусΡΑΒС-77 (Цетуксимаб, МСус ΡΑΒС линкер, соединение 77). На фиг. проиллюстрированы значения ЕС50.
Фиг. 12 иллюстрирует кривую гибели клеток на примере НСС1954 клеток ίη νίίτο при использовании конъюгатов антитело-лекарственное средство Т-МСνсΡΑΒС-77 (Трастузумаб, МСус ΡΑΒС линкер, соединение 77), Т-МСνсΡΑΒС-85 (Трастузумаб, МСус ΡΑΒС линкер, соединение 85), Т-МСνсΡΑΒС-58 (Трастузумаб, МСус ΡΑΒС линкер, соединение 58) и Т-МСνсΡΑΒС-63 (Трастузумаб, МСус ΡΑΒС линкер, соединение 63). На фиг. проиллюстрированы значения ЕС50.
Фиг. 13 иллюстрирует кривую гибели клеток на примере ΝΟ-Ν87 клеток ίη νίίτο при использовании конъюгатов антитело-лекарственное средство Т-МСνсΡΑΒС-77 (Трастузумаб, МСус ΡΑΒС линкер, соединение 77), Т-МСνсΡΑΒС-63 (Трастузумаб, МСус ΡΑΒС линкер, соединение 63), Т-МСνсΡΑΒС-85 (Трастузумаб, МСус ΡΑΒС линкер, соединение 85), Т-МСνсΡΑΒС-77 (Трастузумаб, МСус ΡΑΒС линкер, соединение 77) и Т-МСνсΡΑΒС-80 (Трастузумаб, МСус ΡΑΒС линкер, соединение 80). На фиг. проиллюстрированы значения ЕС50.
Фиг. 14 иллюстрирует ίη νίνο результаты введения соединения Р, соединения 14 или соединения 23 на объем опухоли у самок безтимусных голых мышей с развившимися опухолями.
Фиг. 15 иллюстрирует ίη νίνο результаты введения конъюгата антитело-лекарственное средство ТМСС-ЭМ1 (Трастузумаб, МСС линкер, майтансиноид ЭМ1) в разных дозах, как указано, или ТМСνсΡΑΒС-77 в разных дозах, как указано, на объем опухоли у самок ΝΘΩ/δΕΙΩ Сашша мышей с развившимися опухолями.
Фиг. 16 иллюстрирует ίη νίνο результаты введения конъюгата антитело-лекарственное средство ТМСνсΡΑΒС-63 при 3 мг/кг или Т-МСνсΡΑΒС-77 при 3 мг/кг на объем опухоли у самок ΝΘΩ/δΕΙΩ Сатта мышей с развившимися опухолями.
Фиг. 17 иллюстрирует кривую гибели клеток на примере НСС 1954 клеток ίη νίίτο при использовании конъюгатов антитело-лекарственное средство ^δΡΌΡ-ΜΟ (Трастузумаб, ЬС-δΡΌΡ линкер, соединение 140) и Т^МСС-140 (Трастузумаб, δМСС линкер, соединение 140). Соединение 140 присоединено через боковую цепь его Ν-терминальной аминокислоты. На фиг. проиллюстрированы значения ЕС50.
Фиг. 18 иллюстрирует кривую гибели клеток на примере НСС 1954 клеток ίη νίίτο при использовании конъюгатов антитело-лекарственное средство Т-δΡ^Ρ-142 (Трастузумаб, ЬС-δΡΌΡ линкер, соединение 142) и Т^МСС-142 (Трастузумаб, δМСС линкер, соединение 142). Соединение 142 присоединено через боковую цепь его Ν-терминальной аминокислоты. На фиг. проиллюстрированы значения ЕС50.
Фиг. 19 иллюстрирует кривую гибели клеток на примере НСС1954 клеток ίη νίίτο при использовании конъюгатов антитело-лекарственное средство Т-МСνсΡΑΒС-58 (Трастузумаб, МСус РАВС линкер, соединение 58) и Т-МСνсΡΑΒС-41 (Трастузумаб, МСус РАВС линкер, соединение 41), и иллюстрирует кривую гибели клеток на примере ΝΟ-Ν87 клеток ίη νίίτο при использовании конъюгатов антителолекарственное средство Т-МСνсΡАВС-58 (Трастузумаб, МСус РАВС линкер, соединение 58) и ТМСνсΡΑΒС-41 (Трастузумаб, МСус РАВС линкер, соединение 41). Соединение 41 присоединено через боковую цепь его Ν-терминальной аминокислоты. Соединение 58 присоединено через боковую цепь его Ν-терминальной аминокислоты. На фиг. проиллюстрированы значения ЕС50. На фиг. проиллюстрированы значения ЕС50.
Подробное описание изобретения
В нижеследующем описании изложены некоторые специфические детали для того, чтобы обеспечить полное понимание различных вариантов реализации описания. Тем не менее, специалисту в данной
- 8 029818 области техники будет понятно, что описание может быть осуществлено на практике без этих подробностей.
Если контекст не требует иного, во всем настоящем описании и формуле изобретения слово содержит и его вариации, такие как содержать и содержащий должны толковаться в открытом инклюзивном смысле, то есть как включает, но не ограничивается.
Ссылка в данном описании на один из вариантов реализации или вариант реализации означает, что конкретный признак, структура или характеристика, описанные в связи с вариантом реализации, включает по меньшей мере один вариант осуществления настоящего описания. Таким образом, формы фраз в одном из вариантов реализации или в варианте реализации в различных местах по всему данному описанию не обязательно относятся к тому же самому варианту реализации. Кроме того, конкретные признаки, структуры или характеристики могут быть объединены любым подходящим образом в одном или нескольких вариантах.
Если не указано иное, следующие термины и фразы, используемые в данном документе, предназначены для имеющих следующие значения. Когда в настоящем документе используются торговые названия, заявители намерены независимо включать рецептуру продукта, соответствующего торговому названию, генерическое лекарственное средство и активный фармацевтический ингредиент(ы) продукта с торговым названием.
Амино относится к -ΝΗ2 заместителю.
Циано относится к -ΟΝ заместителю.
Гидрокси или гидроксил относится к -ОН заместителю.
Имино относится к =ΝΗ заместителю.
Нитро относится к -ΝΟ2 заместителю.
Оксо относится к =0 заместителю.
Тиол относится к -8Η заместителю.
Тиоксо относится к =8 заместителю.
Алкил относится к заместителю с неразветвленной или разветвленной углеводородной цепью, содержащей исключительно атомы углерода и водорода, которая является насыщенной или ненасыщенной (то есть содержит одну или более двойных и/или тройных связей), имеющей от одного до двенадцати атомов углерода (С1-С12 алкил), предпочтительно от одного до восьми атомов углерода (С1-С8 алкил) или от одного до шести атомов углерода (С1-С6 алкил), и который присоединен к остатку молекулы с помощью простой связи, например метил, этил, н-пропил, 1-метилэтил (изо-пропил), н-бутил, н-пентил, 1,1диметилэтил (т-бутил), 3-метилгексил, 2-метилгексил, этенил, проп-1-енил, бут-1-енил, пент-1-енил, пента-1,4-диенил, этинил, пропинил, бутинил, пентинил, гексинил и тому подобное. Если в описании специально не указано иное, алкильная группа может быть необязательно замещена.
Алкилен или алкиленовая цепь относится к неразветвленной или разветвленной дивалентной углеводородной цепи, связывающей остаток молекулы с группой заместителем, содержащей исключительно углерод и водород, которая является насыщенной или ненасыщенной (то есть содержит одну или более двойных и/или тройных связей), и имеет от одного до двенадцати атомов углерода, например метилен, этилен, пропилен, н-бутилен, этенилен, пропенилен, н-бутенилен, пропинилен, н-бутинилен и тому подобное. Алкиленовая цепь присоединена к остатку молекулы через простую или двойную связь и к группе заместителю через простую или двойную связь. Точками присоединения алкиленовой цепи к остатку молекулы и группе заместителю могут быть один углерод или любые два углерода в рамках цепи. Если в описании специально не указано иное, алкиленовая цепь может быть необязательно замещена.
Алкокси относится к заместителю формулы -0Еа, где Еа представляет собой алкильный заместитель, как определено выше, содержащий от одного до двенадцати атомов углерода. Если в описании специально не указано иное, алкоксигруппа может быть необязательно замещена.
Алкиламино относится к заместителю формулы -ΝΗΕα или -ΝΚ,,,Κ,.,. где каждый Еа представляет собой независимо алкильный заместитель, как определено выше, содержащий от одного до двенадцати атомов углерода. Если в описании специально не указано иное, алкиламино группа может быть необязательно замещена.
Тиоалкил относится к заместителю формулы -8Еа, где Еа представляет собой алкильный заместитель, как определено выше, содержащий от одного до двенадцати атомов углерода. Если в описании специально не указано иное, тиоалкильная группа может быть необязательно замещена.
Арил относится к углеводородному циклическому заместителю, содержащему водород, 6-18 атомов углерода и по меньшей мере одно ароматическое кольцо. Для целей этого описания арильный заместитель может быть моноциклической, бициклической, трициклической или тетрациклической системой, которая может включать конденсированные или мостиковые циклические системы. Арильные заместители включают, но не ограничиваются ими, арильные заместители производные от ацеантрилена, аценафтилена, ацефенантрилена, антрацена, азулена, бензола, кризена, флуорантена, флуорена, а8-индацена, 8-индацена, индана, индена, нафталина, феналена, фенантрена, плеиадена, пирена и трифенилена. Если в описании специально не указано иное, термин арил или приставка ар- (так как в аралкил) означает включение арильных заместителей, который необязательно замещены.
- 9 029818
Аралкил относится к заместителю формулы -Кь-Кс, где Кь представляет собой алкиленовую цепь, как определено выше, и Кс представляет собой один или более арильных заместителей, как определено выше, например бензил, дифенилметил и тому подобное. Если в описании специально не указано иное, аралкильная группа может быть необязательно замещена.
Циклоалкил или карбоциклическое кольцо относится к стабильному неароматическому моноциклическому или полициклическому углеводородному заместителю, содержащему исключительно атомы углерода и водорода, который может включать конденсированные или мостиковые циклические системы, имеющие от трех до пятнадцати атомов углерода, предпочтительно имеющие от трех до десяти атомов углерода, и который является насыщенным или ненасыщенным и присоединен к остатку молекулы простой связью. Моноциклические заместители включают, например, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил, циклогептил и циклооктил. Полициклические заместители включают, например, адамантил, норборнил, декалинил, 7,7-диметил-бицикло[2.2.1]гептанил и тому подобное. Если в описании специально не указано иное, циклоалкильная группа может быть необязательно замещена.
Циклоалкилалкил относится к заместителю формулы -КьКн· где К| представляет собой алкиленовую цепь, как определено выше, и К, представляет собой циклоалкильный заместитель, как определено выше. Если в описании специально не указано иное, циклоалкилалкильная группа может быть необязательно замещена.
Конденсированный относится к любой циклической структуре, описанной в данном документе, которая приконденсирована к существующей циклической структуре в соединениях описания. Когда конденсированное кольцо представляет собой гетероциклическое кольцо или гетероарильное кольцо, любой атом углерода на существующей циклической структуре, которая становится частью приконденсированного гетероциклического кольца или приконденсированного гетероарильного кольца, может быть заменена атомом азота.
Гало или галоген относится к брому, хлору, фтору или йоду.
Галоалкил относится к алкильному заместителю, как определено выше, который замещен одним или более галогеновых заместителей, как определено выше, например, трифторметил, дифторметил, трихлорметил, 2,2,2-трифторэтил, 1,2-дифторэтил, 3-бром-2-фторпропил, 1,2-дибромэтил и тому подобное. Если в описании специально не указано иное, галоалкильная группа может быть необязательно замещена.
Гетероциклил или гетероцилическое кольцо относится к стабильному 3-18 членному неароматическому циклическому заместителю, который содержит от двух до двенадцати атомов углерода и от одного до шести гетероатомов, выбранных из группы, состоящей из азота, кислорода и серы. Если в описании специально не указано иное, гетероциклический заместитель может быть моноциклической, бициклической, трициклической или тетрациклической системой, которая может включать конденсированные или мостиковые циклические системы; и атомы азота, углерода или серы в гетероциклическом заместителе могут быть необязательно окислены; атом азота может быть необязательно кватернизирован; и гетероциклический заместитель может быть частично или полностью насыщен. Примеры таких гетероциклических заместителей включают, но не ограничиваются ими, диоксоланил, тиенил [1,3] дитианил, декагидроизохинолил, имидазолинил, имидазолидинил, изотиазолидинил, изоксазолидинил, морфолинил, октагидроиндолил, октагидроизоиндолил, 2-оксопиперазинил, 2-оксопиперидинил, 2оксопирролидинил, оксазолидинил, пиперидинил, пиперазинил, 4-пиперидонил, пирролидинил, пиразолидинил, хинуклидинил, тиазолидинил, тетрагидрофурил, тритианил, тетрагидропиранил, тиоморфолинил, тиаморфолинил, 1-оксо-тиоморфолинил и 1,1-диоксо-тиоморфолинил. Если в описании специально не указано иное, гетероциклическая группа может быть необязательно замещена.
Ν-гетероциклил относится к гетероциклическому заместителю, как определено выше, содержащему по меньше мере один азот, и где точка присоединения гетероциклического заместителя к остатку молекулы находится на атоме азота в гетероциклическом заместителе. Если в описании специально не указано иное, Ν-гетероциклическая группа может быть необязательно замещена.
Гетероциклилалкил относится к заместителю формулы -КьКе, где Кь представляет собой алкиленовую цепь, как определено выше, и Ке представляет собой гетероциклический заместитель, как определено выше, и если гетероциклил представляет собой азотсодержащий гетероциклил, гетероциклил может быть присоединен к алкильному заместителю по атому азота. Если в описании специально не указано иное, гетероциклилалкильная группа может быть необязательно замещена.
Гетероарил относится к 5-14 членной циклической системе, содержащей атомы водорода, от одного до трех атомов углерода, от одного до шести гетероатомов, выбранных из группы состоящей из азота, кислорода и серы, и по меньшей мере одно ароматическое кольцо. Для целей этого описания гетероарильный заместитель может быть моноциклической, бициклической, трициклической или тетрациклической системой, которая может включать конденсированные или мостиковые циклические системы; и атомы азота, углерода или серы в гетероарильном заместителе могут быть необязательно окислены; атом азота может быть необязательно кватернизирован. Примеры включают, но не ограничиваются ими, азепинил, акридинил, бензимидазолил, бензотиазолил, бензиндолил, бензодиоксолил, бензофуранил, бензоксазолил, бензотиазолил, бензотиадиазолил, бензо [Ь][1,4]диоксепинил, 1,4-бензодиоксанил, бензонаф- 10 029818 тофуранил, бензоксазолил, бензодиоксолил, бензодиоксинил, бензопиранил, бензопиранонил, бензофуранил, бензофуранонил, бензотиенил (бензотиофенил), бензотриазолил, бензо[4,6]имидазо[1,2а]пиридинил, карбазолил, циннолинил, дибензофуранил, дибензотиофенил, фуранил, фуранонил, изотиазолил, имидазолил, индазолил, индолил, индазолил, изоиндолил, индолинил, изоиндолинил, изохинолил, индолизинил, изоксазолил, нафтиридинил, оксадиазолил, 2-оксоазепинил, оксазолил, оксиранил, 1оксидопиридинил, 1-оксидопиримидинил, 1-оксидопиразинил, 1-оксидопиридазинил, 1-фенил-1Нпирролил, феназинил, фенотиазинил, феноксазинил, фталазинил, птеридинил, пуринил, пирролил, пиразолил, пиридинил, пиразинил, пиримидинил, пиридазинил, хиназолинил, хиноксалинил, хинолинил, хинуклидинил, изохинолинил, тетрагидрохинолинил, тиазолил, тиадиазолил, триазолил, тетразолил, триазинил и тиофенил (то есть тиенил). Если в описании специально не указано иное, гетероарильная группа может быть необязательно замещена.
Ν-гетероарил относится к гетероарильному заместителю, как определено выше, содержащему по меньше мере один азот, и где точка присоединения гетероарильного заместителя к остатку молекулы находится на атоме азота в гетероарильном заместителе. Если в описании специально не указано иное, Ν-гетероарильная группа может быть необязательно замещена.
Гетероарилалкил относится к заместителю формулы -КК, где Кь представляет собой алкиленовую цепь, как определено выше, и К представляет собой гетероарильный заместитель, как определено выше. Если в описании специально не указано иное, гетероарилалкильная группа может быть необязательно замещена.
Термин замещенный, использованный в данном документе, означает любую из упомянутых выше групп (то есть алкил, алкилен, алкокси, алкиламино, тиоалкил, арил, аралкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, галоалкил, гетероциклил, Ν-гетероциклил, гетероциклилалкил, гетероарил, Ν-гетероарил и/или гетероарилалкил), в которой по меньшей мере один атом водорода заменен связью с атомами, отличными от водорода, такими как, но не ограничиваются ими, атом галогена, такой как Р, С1, Вг и I; атом кислорода в группах, таких как гидроксильные группы, алкоксигруппы и сложноэфирные группы; атом серы в группах, таких как тиольные группы, тиоалкильные группы, сульфоновые группы, сульфонильные группы и сульфоксидные группы; атом азота в группах, таких как азиды, амины, амиды, алкиламины, диалкиламины, ариламины, алкилариламины, диариламины, Ν-оксиды, имиды и енамины; атом кремния в группах, таких как триалкилсилильные группы, диалкиларилсилильные группы, алкилдиарилсилильные группы и триарилсилильные группы; и другие гетероатомы в различных других группах. Замещенный также означает любую из выше упомянутых групп, в которой один или более атомов водорода заменен связью высшего порядка (например, двойная или тройная связь) с гетероатомом, таким как кислород в оксо, карбонильной, карбоксильной и сложноэфирной группах; и азот в группах, таких как имины, оксимы, гидразоны и нитрилы. Например, замещенный включает любую из упомянутых выше групп, в которых один или более атомов водорода заменен -ЫК6КЬ, -МК6С(=О)КЬ, -МК6С(=О)МК6КЬ, -ЫК8С(=О)ОКЬ, -МК6С(=МК8)МК,КЬ, -ЫК88О2Кь, -ОС(=О^К6Кь, -ОКд, -8Кд, -8ОКд, -8О2Кд, -О8О2Кд, -8О2ОКд, =Ν8Ο2Κβ, и -8Ο2ΝΚ?Κη. Замещенный также означает любую из упомянутых выше групп, в которой один или более атомов водорода заменен -С(=О)Кд, -С(=О)ОКд, -С(=О)МК6КЬ, -СН28О2Кд, -СН28О2МК6Кь В упомянутом выше К, и Кь являются одинаковыми или разными и независимо представляют собой водород, алкил, алкокси, алкиламино, тиоалкил, арил, аралкил, циклоалкил, циклоалкилалкил, галоалкил, гетероциклил, Ν-гетероциклил, гетероциклилалкил, гетероарил, Ν-гетероарил и/или гетероарилалкил. Замещенный также означает любую из упомянутых выше групп, в которой один или более атомов водорода заменен связью с амино, циано, гидроксильной, имино, нитро, оксо, тиоксо, гало, алкильной, алкокси, алкиламино, тиоалкильной, арильной, аралкильной, циклоалкильной, циклоалкилалкильной, галоалкильной, гетероциклильной, Ν-гетероциклильной, гетероциклилалкильной, гетероарильной, Ν-гетероарильной и/или гетероарилалкильной группой. В дополнение, каждый из упомянутых выше заместителей также может быть необязательно замещен одним или более упомянутых выше заместителей.
Термин защитная группа, как используется в данном документе, относится к лабильной химической группе, которая известна в области защиты реактивных групп, включая без ограничения, гидроксильную и аминогруппы, от нежелательных реакций во время проведения реакций синтеза. Гидроксильная и аминогруппы, которые защищены защитной группой, упоминаются в данном документе как защищенные гидроксильные группы и защищенные аминогруппы соответственно. Защитные группы обычно используют селективно и/или независимо для защиты мест во время реакций в других реакционных местах и могут быть затем удалены для получения незащищенных групп как есть или доступных для дальнейших реакций. Защитные группы, как известно в этой области, в общем описаны в Огеепе апб ХУиК Рго1ес11ме Огоирк ίη Огдашс 8уп1Ье818, 3г6 ебйюп, 1оЬп \УПеу & 8опк, №\ν Уогк (1999). Группы могут быть селективно включены в соединения настоящего описание как предшественники. Например, аминогруппа может быть заменена в соединении описания на азидогруппу, которая может быть химически превращена в аминогруппу в желаемой точке синтеза. Как правило, защищенные группы или присутствующие как предшественник инертны к реакциям, которые модифицируют другие области исходной молекулы для превращения в их конечные группы в приемлемое время. Дополнительные показа- 11 029818 тельные защитные группы или группы предшественники обговариваются в Л§та№а1, с1 а1., Ρτοΐοεοϊδ ίοτ О1щопис1соПйс СопщдаЮБ ЕЙ5, Нитапа Рге55; №\ν 1ет5еу, 1994; νοί. 26, рр. 1-72. Примеры гидроксилзащитных групп включают, но не ограничиваются ими, т-бутил, т-бутоксиметил, метоксиметил, тетрагидропиранил, 1-этоксиэтил, 1-(2-хлорэтокси)этил, 2-триметилсилилэтил, п-хлорфенил, 2,4динитрофенил, бензил, 2,6-дихлорбензил, дифенилметил, п-нитробензил, трифенилметил, триметилсилил, триэтилсилил, т-бутилдиметилсилил, т-бутилдифенилсилил (ΤΒΌΡδ), трифенилсилил, бензоилформиат, ацетат, хлорацетат, трихлорацетат, трифторацетат, пивалоат, бензоат, п-фенилбензоат, 9флуоренилметилкарбонат, мезилат и тозилат. Примеры аминозащитных групп включают, но не ограничиваются ими, карбаматзащитные группы, такие как 2-триметилсилилэтоксикарбонил (Теос), 1-метил1- (4-бифенилил)этоксикарбонил (Врос), т-бутоксикарбонил (ВОС), аллилоксикарбонил (Ά11ο^, 9флуоренилметилоксикарбонил (Ρтοс), и бензилоксикарбонил (СЬ/); амидзащитные группы, такие как формил, ацетил, тригалоацетил, бензоил и нитрофенилацетил; сульфонамидзащитные группы, такие как
2- нитробензолсульфонил; и имин- и циклический имидзащитные группы, такие как фталимидо и дитиасукциноил.
Пролекарственная форма предназначена для обозначения соединения, которое может превращаться под действием физиологических условий или сольволиза в биологически активное соединение описания. Таким образом, термин пролекарственная форма относится к метаболическому предшественнику соединения описания, которое является фармацевтически приемлемым. Пролекарственная форма может быть неактивной, когда вводится субъекту, требующему этого, но превращается ίη νίνο в активное соединение описания. В одном из вариантов реализации пролекарственная форма быстро превращается ίη νίνο с образованием исходного соединения описания, например, благодаря гидролизу в крови. В одном из вариантов реализации пролекарственная форма может быть стабильной в плазме или крови. В одном из вариантов реализации пролекарственная форма может быть целевой формой соединения изобретения. Пролекарственная форма соединения часто имеет преимущества в растворимости, тканевой совместимости или отсроченном высвобождении в организме млекопитающего (см., Випйдагй, Н., Ое5щп οί Ргойгид5 (1985), рр. 7-9, 21-24 (ЕРеу^ег, Лт51етйат)). Обсуждение пролекарственных форм предложено в ШдисЫ, Т., е1 а1., Л.С.8. δутрο5^ит §епе5, νο1. 14, и в ВюгеуегаЫе Сатег5 ίη Эгид Ое51дп, Ей. Ей\уагй В. КпсЬе, Лтепсап РЬагтасеийса1 Α55οα;·ιΙίοπ апй Ρе^датοη Рге55, 1987.
Термин пролекарственная форма предназначен для включения любых ковалетно связанных носителей, которые высвобождают активное соединение описания ш νίνο, когда такая пролекарственная форма вводится млекопитающему. Конъюгатами, включая КАЛС (конъюгаты антитело-лекарственное средство), как описано в данном документе, являются такие пролекарственные формы композиций, имеющих структуру (I), (1а) или (1Ь). Пролекарственные формы соединений описания могут быть получены путем модификации функциональных групп, присутствующих в соединении описания таким образом, что модификации расщепляются или при обычной манипуляции, или ш νίνο до исходного соединения описания. Пролекарственные формы включают соединения описания, в которых гидрокси-, амино- или меркаптогруппа связана с любой группой так что, когда пролекарственную форму соединения описания вводят млекопитающему, она расщепляется с образованием свободной гидрокси, свободной амино- или свободной меркаптогруппы соответственно. Примеры пролекарственных форм включают, но не ограничиваются ими, ацетатное, формиатное и бензоатное производные спирта или амидные производные амино функциональной группы в соединениях описания и тому подобное.
Настоящее описание также подразумевает охват всех фармацевтически приемлемых соединений формулы (I), (1а) или (1Ь), которые являются меченными изотопами при наличии одного или более атомов замененных атомами, имеющими другую атомную массу или массовое число. Примеры изотопов, которые могут быть включены в описанные соединения, включают изотопы водорода, углерода, азота, кислорода, фосфора, фтора, хлора и йода, такие как 2Н, 3Н, ПС, 13С, 14С, 13Ν, 15Ν, 15О, 17О, 18О, 31Р, 32Р, 35δ, Р, С1, I и I соответственно. Эти радиомеченые соединения могут быть полезны для определения или оценки эффективности соединений путем охарактеризования, например, места или способа действия, или сродства связывания с фармакологически важным местом действия. Некоторые меченные изотопами соединения структуры (I), Да) или (ГЬ), например, те, которые включают радиоактивный изотоп, полезны в лекарственном средстве и/или субстрате для исследования распределения в тканях. Радиоактивные изотопы трития, то есть 3Н, и углерод-14, то есть С, особенно полезны для этой цели ввиду легкости их введения и готовых средств обнаружения.
Замещение более тяжелыми изотопами, такими как дейтерий, то есть 2Н, может обеспечивать некоторые терапевтические преимущества, обусловленные большей метаболической стабильностью, например увеличение ш νίνο времени полураспада или снижение необходимой дозы, и, следовательно, это может быть предпочтительно при некоторых обстоятельствах.
Замещение позитрон испускающими изотопами, такими как ПС в исследованиях с использованием позитрон-эмиссионной томографии (ПЭТ) для изучения занятости рецептора субстратом. Меченные изотопами соединения структур (I), Да) или (ХЬ), как правило, могут быть получены обычными способами, известными специалистам в данной области техники, или способами, аналогичными тем, которые описаны в разделах Приготовления и примеры, как изложено ниже, с 18Р, 15О и 13Ν, может быть полезно
- 12 029818 использованием соответствующего меченного изотопом реагента вместо немеченого реагента, используемого ранее.
Настоящее описание также охватывает ίη νίνο метаболические продукты описанных соединений. Такие продукты могут быть результатом, например, окисления, восстановления, гидролиза, амидирования, этерификации и тому подобное введенного соединения, в первую очередь благодаря ферментативным процессам. Соответственно настоящее описание включает соединения, получаемые по способу, включающему введение соединения настоящего описания млекопитающему на период времени, достаточный для получения продукта его метаболизма. Такие продукты, как правило, определяются путем введения животному меченного изотопом соединения описания в детектируемой дозе, такому как крыса, мышь, морская свинка, обезьяна или человек, обеспечивая достаточно времени для метаболизма, и выделения продуктов его превращения из мочи, крови или других биологических образцов.
Стабильное соединение и стабильная структура предназначено для обозначения соединения, которое является достаточно прочным, чтобы выдержать выделение из реакционной смеси с полезной степенью чистоты и формулирование эффективного терапевтического агента.
Термин антитело, как используется в данном документе, в широчайшем смысле и специфично охватывает интактные моноклональные антитела, поликлональные антитела, мультиспецифические антитела (например, биспецифические антитела), образованные по меньшей мере из двух интактных антител, и фрагменты антител, при условии, что они проявляют желаемую биологическую активность. Термин антитело относится к молекуле непроцесированного иммуноглобулина или функционально активной части непроцесированной молекулы иммуноглобулина, то есть молекулы, которая содержит сайт связывания антигена, которая иммуноспецифически связывает антиген интересующей мишени или его часть. Иммуноглобулин, описанный в данном документе, может быть любого типа (например, 1§С, 1дЕ, 1дМ, 1§О и 1дА), класс (например, 1§С1, 1дС2, 1дС3, 1дС4, 1§Л1 и 1дА2) или подкласс молекулы иммуноглобулина. Иммуноглобулины могут быть производными любых видов. В одном из аспектов иммуноглобулин является человеческим, мышиным или кроличьим. В другом аспекте антитела являются поликлональными, моноклональными, мультиспецифическими (например, биспецифическими), человеческими, гуманизированными или химерными антителами, линейными антителами, одноцепочечными антителами, димерами, максителами, минителами, Εν, РаЬ фрагменты, Е(аЬ') фрагменты, Е(аЬ')2 фрагменты, фрагменты, продуцируемые ЕаЬ экспрессирующей библиотекой, антиидиотипические (анти-И) антитела, СОК и эпитопсвязывающие фрагменты любого из перечисленных выше, которые иммуноспецифично связываться с антигеном-мишенью.
Термин моноклональное антитело, как используется в данном документе, относится к антителу, полученному из популяции, по существу, гомогенных антител, то есть отдельные антитела, составляющие популяцию, являются идентичными, за исключением возможных встречающихся в природе мутаций, которые могут присутствовать в незначительных количествах. Моноклональные антитела включают химерные антитела, в которых часть тяжелой и/или легкой цепи идентична с или гомологична соответствующим последовательностям в антителах производных от конкретных видов или принадлежащих к конкретному классу или подклассу антитела, а остальная часть цепи(ей) идентична с или гомологична соответствующим последовательностям в антителах производных от другого вида или принадлежащих к другому классу или подклассу антитела, также как и фрагменты таких антител (см., например, патент И8 4816567; и Μοτήδοη е1 а1., 1984, Ргос. ЫаЙ. Асаб. 8с1. И8А 81:6851-6855). Моноклональные антитела также включают гуманизированные антитела, которые могут содержать полностью человеческую константную область и СОК из нечеловеческого источника.
Интактное антитело представляет собой антитело, которое содержит антигенсвязывающую вариабельную область, а также константный домен легкой цепи (СЬ) и константные домены тяжелой цепи, Сн1 С||2 и Сн3. Константные домены могут быть природной последовательностью константных доменов (например, константные домены человеческой природной последовательности) или их варианты аминокислотной последовательности.
Фрагменты антитела содержат часть интактного антитела, предпочтительно содержащую его антигенсвязывающий или вариабельный участок. Примеры фрагментов антитела включают ЕаЬ, ЕаЬ', Е(аЬ')2 и Εν фрагменты; диатела; линейные антитела; одноцепочечные молекулы антител; макситела; минитела и мультиспецифические антитела, образованные из фрагмента(ов) антител.
Выделенное антитело представляет собой антитело, которое было идентифицировано и отделено и/или извлечено из компонента его природного окружения. Загрязняющие компоненты его природной среды представляют собой вещества, которые будут мешать диагностическим или терапевтическим применениям антитела, и могут включать ферменты, гормоны и другие белковые или небелковые растворенные вещества. В некоторых вариантах реализации антитело будет очищено (1) до более чем 95 мас.% антитела, как определено по методу Лоури, и наиболее предпочтительно более чем 99 мас.%, (2) до степени, достаточной для получения по меньшей мере 15 остатков Ν-терминальной или внутренней аминокислотной последовательности при использованию секвенатора с вращающимся стаканом, или (3) до гомогенности по ДСН-ЭПААГ в восстанавливающих или невосстанавливающих условиях с использованием крашения Кумасси синим или предпочтительно серебром. Выделенное антитело включает антитело
- 13 029818 ίη δίΐη в рекомбинантных клетках, так как по меньшей мере один компонент природного окружения антитела не будет присутствовать. Однако обычно выделенное антитело будет получено с помощью по меньшей мере одной стадии очистки.
Антителом которое связывает интересующий антиген является антитело, способное связывать этот антиген с достаточным сродством, так что антитело полезно для нацеливания клетки, экспрессирующей антиген.
Природная последовательность полипептида представляет собой последовательность, которая имеет ту же аминокислотную последовательность, что и полипептид, полученный из природного источника. Такие полипептиды с природной последовательностью могут быть выделены из природного источника или могут быть получены с помощью рекомбинантных или синтетических средств. Таким образом, полипептид с природной последовательностью может иметь аминокислотную последовательность встречающегося в природе человеческого полипептида, мышиного полипептида или полипептида от любых других видов млекопитающих.
Термин внутриклеточный метаболит относится к соединению, полученному в результате метаболического процесса или реакции внутри клетки над композицией изобретения (например, конъюгат антитело-лекарственное средство (КАЛС)). Метаболическим процессом или реакцией может быть ферментативный процесс, такие как протеолитическое расщепление пептидного линкера целевой композиции или гидролиз функциональной группы, такой как гидразон, эфир или амид в рамках целевой композиции. В контексте конъюгатов, в том числе КАЛС, внутриклеточные метаболиты включают, но не ограничиваются ими, антитела и свободное лекарственное средство, которые были разделены внутри клетки, то есть после попадания, диффузии, поглощения или транспортировки в клетку (например, путем ферментативного расщепления КАЛС внутриклеточным ферментом).
В контексте конъюгатов, включающих КАЛС, термины внутриклеточно расщепленные и внутриклеточное расщепление относится к метаболическим процессам или реакциям внутри клетки относительно композиции изобретения, в результате чего ковалентное присоединение, например линкер (Ь), между молекулой лекарственного средства (Ό) и нацеливающим фрагментом (Т) (например, антитело) разрушается, в результате чего свободное лекарственное средство отделяется от (Т) внутри клетки. В одном из вариантов реализации расщепленные фрагменты целевой композиции являются, таким образом, внутриклеточными метаболитами (например, Т, Т-Ь фрагмент, Ό-Ь фрагмент, Ό). Соответственно в одном из вариантов реализации данное изобретение предлагает композиции, которые являются продуктами расщепления композиции, имеющей структуру (VI), в которой продукты расщепления включают композиции, содержащие структуру (I), (1а) или (1Ь) или их стереоизомеры. Аналогично, линкер (Ь) между пептидным токсином, разрушающим микротрубочки, (СТ) и нацеливающим фрагментом (Т) (например, антитело) может быть разрушен внутри клетки, в результате чего РТ отделяется от (Т) внутри клетки. Расщепленные фрагменты целевых композиций являются, таким образом, внутриклеточными метаболитами (например, Т, Т-Ь фрагмент, РТ-Ь фрагмент, РТ). Соответственно в одном из вариантов реализации данное изобретение предлагает композиции, которые представляют собой продукты расщепления композиции, имеющей структуру (VII), в которой продукты расщепления включают композиции структуры (I), Ца) или (ИЬ) или их стереоизомеры.
Термин внеклеточное расщепление относится к метаболическим процессам и реакциям вне клетки относительно композиции изобретения, в результате чего ковалентное присоединение, например линкер (Ь), между молекулой лекарственного средства (Ό) и нацеливающим фрагментом (Т) (например, антитело) разрушается, в результате чего свободное лекарственное средство отделяется от (Т) вне клетки. В одном из вариантов реализации расщепленные фрагменты целевой композиции являются, таким образом, внеклеточными метаболитами (например, Т, Т-Ь фрагмент, Ό-Ь фрагмент, Ό), которые могут двигаться внутрь клетки благодаря диффузии и клеточной проницаемости или транспорту. Соответственно в одном из вариантов реализации данное изобретение предлагает композиции, которые являются продуктами расщепления композиции, имеющей структуру (VI), в которой продукты расщепления включают композиции, содержащие структуру (I), Ца) или (ИЬ) или их стереоизомеры. Аналогично, линкер (Ъ) между пептидным токсином, разрушающим микротрубочки, (СТ) и нацеливающим фрагментом (Т) (например, антитело) может быть разрушен вне клетки, в результате чего РТ отделяется от (Т) вне клетки. Расщепленные фрагменты целевых композиций являются, таким образом, внеклеточными метаболитами (например, Т, Т-Ь фрагмент, РТ-Ь фрагмент, РТ). Соответственно в одном из вариантов реализации данное изобретение предлагает композиции, которые представляют собой продукты расщепления композиции, имеющей структуру (VII), в которой продукты расщепления включают композиции структуры (I), Ца) или (ГЬ) или их стереоизомеры.
Млекопитающее включает людей и домашних животных, таких как лабораторные животные и домашние животные (например, кошки, собаки, свиньи, крупный рогатый скот, овцы, козы, лошади, кролики), и недомашних животных, таких как дикие животные и тому подобное.
Необязательный или необязательно означает, что описанное далее событие или обстоятельство может иметь место, а может и не иметь место, и что описание включает случаи, когда указанное событие или обстоятельство имеет место и случаи, в которых это не так. Например, необязательно замещенный
- 14 029818 арил означает, что арильный заместитель может быть замещен или может быть незамещен, и что описание включает как замещенные арильные заместители, так и арильные заместители, не имеющие замещения.
Фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель включает в себя без ограничения любой адъювант, носитель, наполнитель, глидант, подсластитель, разбавитель, консервант, краситель/пигмент, усилитель вкуса, поверхностно-активное вещество, смачивающий агент, диспергирующий агент, суспендирующий агент, стабилизатор, изотонический агент, растворитель или эмульгатор, который был одобрен Администрацией Соединенных Штатов по продуктам питания и медикаментам (или другим аналогичным регулирующим органом в другой юрисдикции) как приемлемый для использования людьми или домашними животными.
Фармацевтически приемлемая соль включает и кислотно- и основно-аддитивные соли.
Фармацевтически приемлемая кислотно-аддитивная соль относится к тем солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства свободных оснований, которые не являются биологически или иным образом нежелательными и которые образованы неорганическими кислотами, такими как, но не ограничиваются ими, хлористо-водородная кислота, бромисто-водородная кислота, серная кислота, азотная кислота, фосфорная кислота и тому подобное, и органическими кислотами, такими как, но не ограничиваются ими, уксусная кислота, 2,2-дихлоруксусная кислота, адипиновая кислота, альгиновая кислота, аскорбиновая кислота, аспарагиновая кислота, бензолсульфоновая кислота, бензойная кислота, 4-ацетамидобензойная кислота, камфорная кислота, камфор-10-сульфоновая кислота, каприновая кислота, капроновая кислота, каприловая кислота, угольная кислота, коричная кислота, лимонная кислота, цикламиновая кислота, додецилсерная кислота, этан-1,2-дисульфоновая кислота, этансульфоновая кислота, 2-гидроксиэтансульфоновая кислота, муравьиная кислота, фумаровая кислота, галактаровая кислота, гентизиновая кислота, глюкогептоновая кислота, глюконовая кислота, глюкуроновая кислота, глутаминовая кислота, глутаровая кислота, 2-оксо-глутаровая кислота, глицерофосфорная кислота, гликолевая кислота, гиппуровая кислота, изомасляная кислота, молочная кислота, лактобионовая кислота, лауриновая кислота, малеиновая кислота, яблочная кислота, малоновая кислота, миндальная кислота, метансульфоновая кислота, слизевая кислота, нафталин-1,5-дисульфоновая кислота, нафталин-2-сульфоновая кислота, 1-гидрокси-2-нафтойная кислота, никотиновая кислота, олеиновая кислота, оротовая кислота, щавелевая кислота, пальмитиновая кислота, памовая кислота, пропионовая кислота, пироглутаминовая кислота, пировиноградная кислота, салициловая кислота, 4-аминосалициловая кислота, себациновая кислота, стеариновая кислота, янтарная кислота, винная кислота, тиоциановая кислота, птолуолсульфоновая кислота, трифторуксусная кислота, ундециленовая кислота и тому подобное.
Фармацевтически приемлемая основно-аддитивная соль относится к тем солям, которые сохраняют биологическую эффективность и свойства свободных кислот, которые не являются биологически или иным образом нежелательными. Эти соли получают добавлением неорганического основания или органического основания к свободной кислоте. Соли, производные от неорганических оснований, включают, но не ограничиваются ими, соли натрия, калия, лития, аммония, кальция, магния, железа, цинка, меди, марганца, алюминия и тому подобное. Предпочтительные неорганические соли представляют собой соли аммония, натрия, калия, кальция и магния. Соли, производные от органических оснований, включают, но не ограничиваются ими, соли первичных, вторичных и третичных аминов, замещенных аминов, включая природные замещенные амины, циклические амины и основные ионообменные смолы, таких как аммиак, изопропиламин, триметиламин, диэтиламин, триэтиламин, трипропиламин, диэтаноламин, этаноламин, деанол, 2-диметиламиноэтанол, 2-диэтиламиноэтанол, дициклогексиламин, лизин, аргинин, гистидин, кофеин, прокаин, гидрабамин, холин, бетаин, бенетамин, бензатин, этилендиамин, глюкозамин, метилглюкамин, теобромин, триэтаноламин, трометамин, пурины, пиперазин, пиперидин, Ν-этилпиперидин, полиаминовые смолы и тому подобное. Особенно предпочтительными являются органические основания: изопропиламин, диэтиламин, этаноламин, триметиламин, холин, дициклогексиламин и кофеин.
Часто кристаллизация дает сольваты соединения описания. Как используется в данном документе, термин сольват относится к агрегату, который содержит одну или более молекул соединения описания с одной или более молекул растворителя. Растворителем может быть вода, в этом случае сольват может быть гидратом. Альтернативно, растворителем может быть органический растворитель. Таким образом, соединения настоящего описания могут существовать в виде гидрата, в том числе моногидрата, дигидрата, полугидрата, сесквигидрата, тригидрата, тетрагидрата и тому подобное, а также соответствующих сольватированных форм. Соединение описания может быть истинным сольватом, а в других случаях соединение описания может просто удерживать воду или быть смесью с водой плюс некоторый случайный растворитель.
Фармацевтическая композиция относится к рецептуре соединения описания и среды, общепринятое в данной области техники, для доставки биологически активного соединения млекопитающим, например людям. Поэтому такая среда включает все фармацевтически приемлемые носители, разбавители или наполнители.
Неограничивающие примеры заболеваний, подлежащих лечению в данном документе, включают
- 15 029818 доброкачественные и злокачественные опухоли; лейкоз и лимфоидные злокачественные опухоли, в частности рак молочной железы, яичников, желудка, эндометрия, слюнной железы, легких, почек, толстой кишки, щитовидной железы, поджелудочной железы, предстательной железы или мочевого пузыря; нейрональные, глиальные, астроцитальные, гипоталамусные и другие железистые, макрофагиальные, эпителиальные, стромальные и бластоцельные расстройства, аутоиммунное заболевание, воспалительное заболевание, фиброз и инфекционное заболевание. С учетом особенностей и, в частности, активность целевых композиций, будет очевидно для специалиста в данной области техники, что соединения изобретения могут быть показаны для использования в лечении любого заболевания, когда желательно проявление цитотоксического или цитотоксического действия на клетки-мишени.
В одном из вариантов реализации композиции изобретения используются для лечения аутоиммунного заболевания. Антитела, иммуноспецифические к антигену клетки, которая отвечает за производство аутоиммунных антител, могут быть получены от любой организации (например, ученого университета или компании, такой как СспсШссН) или получены любым способом, известным специалисту в данной области техники, такими как, например, химический синтез или способы рекомбинантной экспрессии. В другом варианте реализации полезные антитела лиганда, которые являются иммуноспецифическими для лечения аутоиммунных заболеваний, включают, но не ограничиваются ими, антиядерное антитело; антитело к двуспиральной нативной ДНК; антитело к односпиральной нативной ДНК, антикардиолипиновое антитело 1дМ, 1§О; антифосфолипидное антитело 1дМ, 1§О; антитело к гладкой мускулатуре; антимитохондриальное антитело; тироидное антитело; микросомальное антитело; тироглобулиновое антитело; анти §СЬ-70; анти-ίο; анти-ШКХР; анти-Ьа/δδΒ; анти §§А; анти δδΒ; антитело к перитальным клеткам; антигистоны; анти ΚΝΡ; С-АЫСА; Р-АЫСА; антицентромер; антифибрилларин и анти ОВМ антитело. В некоторых предпочтительных вариантах реализации антитела, полезные в настоящих способах, могут связывать и рецептор, и комплекс рецептора, экспрессированный на активированном лимфоците.
Рецептор или комплекс рецептора может включать ген представителя суперсемейства иммуноглобулина, представителя суперсемейства рецептора ФНО, интегрин, рецептор цитокина, рецептор хемокина, главный белок гистосовместимости, лектин или белок контроля комплемента. Неограничивающие примеры пригодных представителей суперсемейства иммуноглобулинов представляют собой СБ2, СБ3, СБ4, СБ8, СБ19, СБ22, СБ28, СБ79, СБ90, СБ152/СТЬА-4, РБ-1 и 1СО8.
Неограничивающие примеры пригодных представителей суперсемейства рецептора ФНО представляют собой СБ27, СБ40, СБ95/Ра5, СБ134/ОХ40, СБ137/4-1ВВ, ΤΝΡ-Κ1, ΊΝΡΚ-2, ΚΛΝΚ, ТАС1, ВСМА, остеопротегерин, Аро2/ТКА1Ь-К1, ТКА1Ь-К2, ТКА1Ь-К3, ТКА1Ь-К4 и АРО-3. Неограничивающие примеры пригодных интегринов представляют собой СБ11а, СБ11Ь. СБ11с, СБ18, СБ29, СБ41, СБ49а, СБ49Ь. СБ49с, СБ49й, СБ49е, СБ49Г, СБ103 и СБ104. Неограничивающие примеры пригодных лектинов представляют собой лектин С-типа, δ-типа и 1-типа.
В одном из вариантов реализации лиганд представляет собой антитело, которое связывает активированный лимфоцит, связанный с аутоиммунным заболеванием.
Иммунологические заболевания, которые характеризуются неадекватной активацией иммунных клеток и которые можно лечить или предотвращать способами, описанными в данном документе, могут быть классифицированы, например, по типу(ам) реакции(й) гиперчувствительности, которые лежат в основе расстройства. Эти реакции обычно разделяют на четыре типа: анафилактические реакции, цитотоксические (цитолитические) реакции, иммунные комплексные реакции или клеточно-опосредованные иммунные (КОИ) реакции (также известны как реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ)) (см., например, Рипйатейа1 1ттипо1оду (ХУППат Е. Раи1 ей., Кауеп Рге88, Ν.Υ., 3гй ей. 1993).)
Специфические примеры таких иммунологических заболеваний включают следующие: ревматоидный артрит, аутоиммунные демиелинизирующие заболевания (например, рассеянный склероз, аллергический энцефаломиелит), эндокринная офтальмопатия, увеоретинит, системная красная волчанка, миастения гравис, болезнь Грейвса, гломерулонефрит, аутоиммунное гепатологическое расстройство, воспалительное заболевание кишечника (например, болезнь Крона), анафилаксия, аллергическая реакция, синдром Сегрена, сахарный диабет типа I, первичный билиарный цирроз, гранулематоз Вегенера, фибромиалгия, полимиозит, дерматомиозит, множественная эндокринная недостаточность, синдром Шмидта, аутоиммунный увеит, болезнь Аддисона, воспаление надпочечников, тиреоидит, тиреоидит Хашимото, аутоиммунное заболевание щитовидной железы, пернициозная анемия, атрофия желудка, хронический гепатит, волчаночный гепатит, атеросклероз, подострая кожная красная волчанка, гипопаратиреоз, синдром Дресслера, аутоиммунная тромбоцитопения, идиопатическая тромбоцитопеническая пурпура, гемолитическая анемия, пузырчатка обыкновенная, пузырчатка, герпетиформный дерматит, алопеция Арката, пемфигоид, склеродермия, прогрессирующий системный склероз, синдром СКЕ8Т (кальциноз, синдром Рейно, нарушение моторики пищевода, склеродактилия), и телеангиэктазия), мужское и женское аутоиммунное бесплодие, анкилозирующий спондилит, язвенный колит, смешанное заболевание соединительной ткани, нодозный полиартериит, системный некротизирующий васкулит, атопический дерматит, атопический ринит, синдром Гудпасчера, болезнь Чагаса, саркоидоз, ревматизм, астма, привычный выкидыш, антифосфолипидный синдром, легкое фермера, мультиформная эритема, синдром посткардиотомии, синдром Кушинга, аутоиммунный хронический активный гепатит, легкое любителя
- 16 029818 птиц, токсический эпидермальный некролиз, синдром Альпорта, альвеолит, аллергический альвеолит, фиброзирующий альвеолит, интерстициальная болезнь легких, нодозная эритема, гангренозная пиодермия, реакции на переливание, артериит Такаясу, ревматическая полимиалгия, височный артериит, шистосомоз, гигантоклеточный артериит, аскаридоз, аспергиллез, синдром Самптера, экзема, лимфоматоидный гранулематоз, болезнь Бехчета, синдром Каплана, болезнь Кавасаки, лихорадка денге, энцефаломиелит, эндокардит, эндомиокардиальный фиброз, эндофтальмит, стойкая возвышающаяся эритема, псориаз, эритробластоз плода, эозинофильный фасциит, синдром Шульмана, синдром Фелти, филяриоз, циклит, хронический циклит, гетерохронический циклит, циклит Фукса, 1дА нефропатия, болезнь ШенлейнГеноха, трансплантат против хозяина, отторжения пересаженного органа, кардиомиопатия, синдром Итона-Ламберта, рецидивирующий полихондрит, криоглобулинемия, макроглобулинемия Вальденстрема, синдром Эвана и аутоиммунная недостаточность половых желез. Соответственно способы, описанные в данном документе, включают лечение расстройств вызванных В-лимфоцитами (например, системная красная волчанка, синдром Гудпасчера, ревматоидный артрит и диабет типа I), ТЫ-лимфоцитами (например, ревматоидный артрит, рассеянный склероз, псориаз, синдром Сегрена, тиреоидит Хашимото, болезнь Грейвса, первичный билиарный цирроз, гранулематоз Вегенера, туберкулез или острая реакция трансплантат против хозяина) или ТЬ2-лимфоцитами (например, атопический дерматит, системная красная волчанка, атопическая астма, риноконъюнктивит, аллергический ринит, синдром Оменна, системный склероз или хроническая реакция трансплантат против хозяина). Как правило, нарушения, вовлекающие дендритные клетки, включают расстройства, вызванные ТЫ-лимфоцитами или ТЬ2-лимфоцитами.
В некоторых вариантах реализации иммунологические расстройства является опосредованными Т клетками, которые могут включать активированные Т клетки. КАЛС или производные КАЛС могут быть введены для истощения таких активированных Т клеток.
В одном из вариантов реализации композиции изобретения могут быть использованы для лечения фиброза. Фиброз может возникнуть во многих тканях в организме, как правило, в результате воспаления или повреждения, примеры включают, но не ограничиваются ими: легкие, легочный фиброз, идиопатический легочный фиброз, муковисцидоз; печень, цироз; сердце, эндомиокардиальный фиброз, инфаркт миокарда у пожилых, артериальный фиброз; другие, средостенный фиброз (мягкие ткани средостения), миелофиброз (костный мозг), забрюшинный фиброз (мягкие ткани забрюшинного пространства), прогрессивный массивный фиброз (легкие); осложнение работников угольной промышленности пневмокониозом, нефрогенный системный фиброз (кожа), болезнь Крона (кишечник), келоид (кожа), склеродермия/системный склероз (кожа, легкие), артрофиброз (колено, плечо, другие суставы), болезнь Пейрони (пенис), контрактура Дюпюитрена (руки, пальцы) и некоторые формы адгезивного капсулита (плечо).
В отношении инфекционных заболеваний композиции изобретения могут быть нанесены непосредственно на определенные инфекционные агенты или патогены или могут быть использованы, чтобы оказывать цитостатическое или цитотоксическое действие на клетку-хозяина, которая скрывает или иным образом взаимодействует с инфекционным агентом или патогеном.
Эффективное количество или терапевтически эффективное количество относится к такому количеству соединения описания, которое при введении млекопитающему, предпочтительно человеку, является достаточным для эффективного лечения, как определено ниже, в частности показания (например, рак или опухолевые клетки у млекопитающего, предпочтительно человека). Количество соединения описания, которое составляет терапевтически эффективное количество, будет варьироваться в зависимости от соединения, состояния и его тяжести, способа введения и возраста млекопитающего, подлежащего лечению, и может быть определено рутинным образом специалистом в данной области техники с учетом собственных знаний и этого описания.
Лечение, как используется в данном документе, охватывает лечение интересующего заболевания или состояния у млекопитающего, предпочтительно человека, который имеет интересующее заболевание или состояние, и включает:
(ί) предотвращения возникновение состояния или заболевания у млекопитающего, в частности, если такое млекопитающее предрасположено к состоянию, но оно еще не установлено, как таковое;
(тт) ингибирование заболевания или состояния, то есть прекращение его развития;
(ίίί) облегчение заболевания или состояния, то есть регрессию состояния или заболевания; или (ίν) облегчение симптомов в результате заболевания или состояния, то есть снятия боли без обращения к лежащему в основе заболеванию или состоянию.
Терапевтически эффективное количество соединения в отношении лечения рака может снизить количество раковых клеток; уменьшать размер опухоли; ингибировать (то есть замедлить в некоторой степени и предпочтительно остановить) инфильтрацию раковых клеток в периферические органы; ингибировать (то есть замедлить в некоторой степени и предпочтительно остановить) метастазирование опухоли; ингибировать до некоторой степени рост опухоли; увеличить время выживания и/или облегчить в некоторой степени один или более симптомов, связанных с раком. Насколько позволяют обстоятельства, лекарственное средство может предотвратить рост и/или уничтожить существующие раковые клетки, оно может быть цитостатическим и/или цитотоксическим. Соединения настоящего изобретения являются предпочтительно цитотоксическими. Для терапии рака эффективность можно, например, измерить
- 17 029818 путем оценки времени до прогрессирования заболевания (ВПЗ) и/или определить коэффициент ответа (КО).
Термин эффективное количество в отношении конкретного ожидаемого результата должно быть достаточным, чтобы достичь желаемого результата. Например, эффективное количество лекарственного средства, если речь идет об уничтожении раковых клеток, относится к количеству лекарственного средства, достаточному, чтобы обеспечить уничтожающее действие.
Солидные опухоли, предполагаемые для лечения с использованием описанных соединений, включают, но не ограничиваются ими: саркому, фибросаркому, миксосаркому, липосаркому, хондросаркому, остеогенную саркому, хордому, ангиосаркому, эндотелиосаркому, лимфангиосаркому, лимфангиоэндотелиосаркому, синовиому, мезотелиому, опухоль Юинга, лейомиосаркому, рабдомиосаркому, рак толстой кишки, колоректальный рак, рак почки, рак поджелудочной железы, рак кости, рак молочной железы, рак яичников, рак предстательной железы, рак пищевода, рак желудка (например, рак желудочнокишечного тракта), рак полости рта, назальный рак, рак горла, плоскоклеточный рак (например, легких), базально-клеточную карциному, аденокарциному (например, легких), карциному потовых желез, карциному сальных желез, папиллярную карциному, папиллярную аденокарциному, цистаденокарциному, медуллярный рак, бронхогенную карциному, почечно-клеточную карциному, гепатому желчных протоков, хориокарциному, семиному, эмбриональный рак, опухоль Вильмса, рак шейки матки, рак матки, рак яичка, мелкоклеточный рак легкого, рак мочевого пузыря, рак легкого, немелкоклеточный рак легкого, эпителиальный рак, глиому, глиобластому, мультиформную астроцитому, медуллобластому, краниофарингиому, эпендимому, пинеалому, гемангиобластому, невриному слухового нерва, олигодендроглиому, менингиому, рак кожи, меланому, нейробластому и ретинобластому. Переносимый с кровью рак, предполагаемый для лечения с использованием описанных в настоящей заявке соединений, включает, но не ограничиваются ими: острый лимфобластный лейкоз ОЛЛ, острый лимфобластный В-клеточной лейкоз, острый лимфобластный Т-клеточный лейкоз, острый миелобластный лейкоз ОМЛ, острый промиелолейкоз ОПЛ, острый монобластный лейкоз, острый эритролейкемический лейкоз, острый мегакариобластный лейкоз, острый миеломоноцитарный лейкоз, острый нелимфоцитный лейкоз, острый недифференцированный лейкоз, хронический миелолейкоза ХМЛ, хронический лимфоцитарный лейкоз ХЛЛ, лейкоз ворсистых клеток и множественную миелому. Острые и хронические лейкозы, предполагаемые для лечения с использованием описанных в настоящей заявке соединений, включают, но не ограничиваются ими: лимфобластный, миелобластный, лимфоцитарный и миелоцитарный лейкозы. Лимфомы, предполагаемые для лечения с использованием описанных в настоящей заявке соединений, включают, но не ограничиваются ими: болезнь Ходжкина, неходжкинскую лимфому, множественную миелому, макроглобулинемию Вальденстрема, болезнь тяжелых цепей и истинную полицитемию. Другие виды рака, предполагаемые для лечения с использованием описанных в настоящей заявке соединений, включают, но не ограничиваются ими: перитонеальный рак, гепатоцеллюлярный рак, гепатому, рак слюнных железы, рак вульвы, щитовидной железы, рак полового члена, рак анального отверстия, рак головы и шеи, почечно-клеточную карциному, острую анапластическую крупноклеточную карциному и кожную анапластическую крупноклеточную карциному.
Виды рака, включая, но не ограничиваются ими, опухоли, метастазы или другое заболевание или расстройство, характеризующееся неконтролируемым или нежелательным ростом клеток, можно лечить или предупредить путем введения описанных в данном документе соединений.
В других вариантах реализации предлагаются способы лечения или предупреждения рака, включающие введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения, описанного в данном документе, в комбинации с дополнительным способом лечения. В одном из вариантов реализации дополнительные способы лечения включают химиотерапевтический агент. В одном из вариантов реализации химиотерапевтический агент представляет собой агент, для которого была установлена его эффективность при лечении рака. В другом варианте реализации химиотерапевтический агент представляет собой агент, для которого была установлена резистентность рака к его использованию. Соединение настоящего изобретения можно вводить до, после или одновременно с химиотерапевтическим агентом.
В одном из вариантов реализации дополнительный способ лечения представляет собой лучевую терапию. Соединение настоящего изобретения можно вводить до, после или одновременно с лучевым облучением.
Соединения настоящего изобретения также можно вводить пациенту, подвергшемуся или который будет подвергнут хирургическому вмешательству на предмет лечения рака.
В особенном варианте реализации соединение изобретения вводят одновременно с химиотерапевтическим агентом или с лучевой терапией. В другом особенном варианте реализации химиотерапевтический агент или лучевую терапию применяют до или после введения соединения изобретения, в одном аспекте по меньшей мере час, 5 ч, 12 ч, день, неделю, месяц, в дальнейших аспектах несколько месяцев (например, до трех месяцев), до или после введения соединения изобретения.
Химиотерапевтический агент можно вводить в течение ряда сессий. Можно назначать любой или комбинацию химиотерапевтических агентов, перечисленных в данном документе или иначе известных в данной области. По отношению к излучению может быть использован любой протокол лучевой терапии
- 18 029818 в зависимости от типа рака, подлежащего лечению. Например, но не с целью ограничения, можно назначать рентгеновское излучение; в частности, может быть использовано высокоэнергетическое напряжение (излучение с энергией больше чем 1 МэВ) для глубоко расположенных опухолей, и электронный пучок и ортовольтажное рентгеновское излучение можно использовать для рака кожи. Также могут быть введены гамма-излучающие радиоактивные изотопы, такие как радиоактивные изотопы радия, кобальта и других элементов.
Кроме того, предлагаются способы лечения рака с помощью соединений изобретения в качестве альтернативы химиотерапии и лучевой терапии или когда доказано или может быть доказано, что химиотерапия или лучевая терапия являются слишком токсичными, например приводят к неприемлемым или недопустимым побочным эффектам, для субъекта, подвергаемого лечению. Кроме того, предлагаются способы лечения рака соединением изобретения в качестве альтернативы хирургии, когда доказано или может быть доказано, что операция может оказаться неприемлемой или невыносимой для пациента, подвергаемого лечению.
Соединения изобретения также могут быть использованы ίη νίΐτο или ех νίνο образом, например, для лечения некоторых видов рака, в том числе, но не ограничиваясь ими, лейкозы и лимфомы, такое лечение включает аутологичные трансплантаты стволовых клеток. Это может включать многоступенчатый процесс, в котором аутологичные гемопоэтические стволовые клетки животного собирают и очищают от всех раковых клеток, оставшуюся популяцию клеток костного мозга животного затем уничтожают с помощью введения высокой дозы соединения изобретения с или без сопровождающей высокой дозы лучевой терапии, а стволовые клетки трансплантата внедряют обратно в животное. Затем предоставляется поддерживающий уход, в то время как функция костного мозга восстанавливается и животное выздоравливает.
Способы лечения рака дополнительно включают введение пациенту, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения изобретения и другого терапевтического агента, который представляет собой противораковый агент. Подходящие противораковые агенты включают, но не ограничиваются ими, метотрексат, таксол, Ь-аспарагиназа, меркаптопурин, тиогуанин, гидроксимочевину, цитарабин, циклофосфамид, ифосфамид, нитрозомочевины, цисплатин, карбоплатин, митомицин, дакарбазин, прокарбазин, топотекан, азотистые иприты, цитоксан, этопозид, 5-фторурацил, ВСЫИ, иринотекан, камптотецины, блеомицин, доксорубицин, идарубицин, даунорубицин, актиномицин Ό, дактиномицин, пликамицин, митоксантрон, аспарагиназу, винбластин, винкристин, виндезин, винорелбин, паклитаксель и доцетаксель.
Другие примеры химиотерапевтических агентов включают алкилирующие агенты, такие как тиотепа и СУТОХЛЫ® циклофосфамид; алкилсульфонаты, такие как бусульфан, треосульфан, импросульфан и пипосульфан; азиридины, такие как бензодопа, карбоквон, метуредопа и уредопа; этиленимины и метиламеламины, включая альтретамин, триэтиленмеламин, триэтиленфосфорамид, триэтилентиофосфорамид и триметилоломеламин; ТЬК 286 (ТЕЬСУТЛ™); ацетогенины (особенно буллактин и буллатацинон); дельта-9-тетрагидроканнабынол (дронабинол, МАКГЫОЬ®); бета-лапакон; лапакол; колхицины; бетулиновая кислота; камптотецин (включая синтетический аналог топотекан (НУСАМТГЛ®), СРТ-11 (иринотекан, САМРТО8АК.®), ацетилкамптотецин, скополектин и 9-аминокамптотецин); бриостатин; каллистатин; СС-1065 (включая его адозелезиновый, карзелезиновый и бизелезиновый синтетические аналоги); подофиллотоксин; подофиллиновая кислота; тенипозид; криптофицины (в частности, криптофицин 1 и криптофицин 8); доластатин; дуокармицин (включая синтетические аналоги, К\У-2189 и СВ1ТМ1); элеуторобин; панкратистатин; саркодиктин; спонгистатин; азотичтые иприты, такие как хлорамбуцил, хлорнафазин, хлорфосфамид, эстрамустин, ифоссфамид, мехлоретамин, гидрохлорид оксида мехлоретамина, мелфалан, новембихин, фенестерин, преднимустин, трофосфамид и урациловый иприт; триазины, такие как декарбазин; нитрозомечевины, такие как кармустин, хлорозотоцин, фотемустин, ломустин, нимустин и ранимнустин; эпиподофиллины, такие как этопозид, тенипозид, топотекан, 9аминокамптотецин, камптотецин оркристанол; бисфосфонаты, такие как клодронат; антибиотики, такие как энедииновые антибиотики (например, калихеамицин, особенно калихеамицин гамма 11 и калихеамицин омегаП (см., например, Адпете, СНет. Ιηΐΐ. Еб. Еп§1., 33:183-186 (1994)) и антрациклины, такие как аннамицин, ΑΌ 32, алкарубицин, даунорубицин, дексразонан, ΌΧ-52-1, эпирубицин, СРХ-100, идарубицин, ΚΚΝ5500, меногарил, динемицин, включая динемицин А, эсперамицин, неокарзиностатин хромофор и подобные хромопротеиновые энедииновые хромофорные антибиотики, аклациномизины, актиномицины, аутрамицин, азасерин, блеомицины (например, А2 и В2), кактиномицин, карабицин, каминомицин, карзинофилин, хромомицины, дактиномицины, деторубицин, 6-диазо-5-оксо-Ь-норлейцин, ΑΌΚΙΑΜΥί','ΙΝ® доксорубицин (включая морфолино-доксорубицин, цианоморфолино-доксорубицин, 2пирролино-доксорубицин, липосомальный доксорубицин и деоксидоксорубицин), есорубицин, марцелломицин, митомицины, такие как митомицин С, микофенольная кислота, ногаламицин, оливомицины, пепломицин, потфиромицин, пуромицин, квеламицин, родорубицин, стрептонигрин, стрептозоцин, туберцидин, убенимекс, зиностатин и зорубицин; фотодинамические терапии, такие как вертопорфин (ВРЭ-МА), фталоцианин, фотосенсибилизатор Рс4 и деметоксигипокреллин А (2ВА-2-ЭМНА); аналоги
- 19 029818 фолиевой кислоты, такие как деноптерин, птероптерин и триметрексат; аналоги пурина, такие как флударабин, 6-меркаптопурин, тиамиприн и тиогуанин; аналоги пиримидина, такие как анцитабин, азацитидин, 6-азауридин, кармофур, цитарабин, цитозинарабинозид, дидеоксиуридин, доксифлуридин, эноцитабин и флоксуридин; андрогены, такие как калустерон, дромостанолон пропионат, эпитиостанол, мепитиостан и тестолактон; анти-адренергические агенты, такие как аминоглутетимид, митотан и трилостан; компенсаторы фолиевой кислоты, такие как фолиновая кислота (леуковорин); ацеглатон; антифолатные противоопухолевые агенты, такие как АЫМТА®, ЬУ231514 пеметрексед, ингибиторы дигидрофолатредуктазы, такие как метотрексат и триметрексат; антиметаболиты, такие как 5-фторурацил (5-РИ) и его пролекарственные формы, такие как ИРТ, §-1 и капецитабин, флоксуридин, доксифлуридин и ратитрексед; и ингибиторы тимидилатсинтазы и ингибиторы глицинамидрибонуклеотид формилтрансферазы, такие как ралтитрексед (ΤΟΜυΌΕΧ®, ТЭХ); ингибиторы дигидропиримидиндегидрогеназы, такие как энилурацил; альдофосфамидгликозид; аминолевулиновая кислота; амсакрин; бестабуцил; бисантрен; эдатраксат; дефофамин; демеколцин; диазиквон; элформитин; эллиптиния ацетат; эпотилон; этоглюцид; нитрат галлия; гидроксимочевина; лентинан; лонидаинин; майтансиноиды, такие как майтансин и ансамитоцины; митогуазон; митоксантрон; мопиданмол; нитраэрин; пентостатин; фенамет; пирарубицин; лозоксантрон; 2-этилгидразид; прокарбазин; полисахаридный комплекс Р8К® (Ш8 ИаШга1 РгойисК Еидепе, Огед.); разоксан; ризоксин; сизофиран; спирогерманий; тенуазоновая кислота; триазиквон; 2,2',2трихлортриэтиламин; трикотецены (особенно Т-2 токсин, верракурин А, роридин А и ингуидин); уретан; виндезин (ЕЬОАШЕ®. НЬОЕЧИ®); дакарбазин; манномустин; митобронитол; митолактол; пипоброман; гацитозин; арабинозид (Ага-С); циклофосфамид; тиотепа; таксоиды и таксаны, например, ТАХОЬ® паклитаксель (Вп51о1-Муег5 АцйЬЬ Опсо1оду, РгшсеЮп, Ν.Τ), ΑΒΚΑΧΑΝΕ™ Кремофор-свободный, альбуминовая наночастичковая рецептура паклитакселя (Атепсап РНагтасеи11са1 Райпегк, ЗсРаитЬегд, П1.), и ТАХОТЕКЕ® доцетаксель (КЬопе-Рои1епс Когег, Айопу, Ргапсе); хлоранбуцил; гемцитабин (0ЕМ2АК®); 6-тиогуанин; меркаптопурин; платина; аналоги платины или аналоги на основе платины, такие как цисплатин, оксалиплатин и карбоплатин; винбластин (УЕЬВАИ®); этопозид (УР-16); ифосфамид; митоксантрон; винкристин (ОИС’ОУШ®); алкалоид вьюнка; винорелбин (ЫАУЕРВкЫЕ®); велкад; ревлимид; талидомид; ΖΜίΌ3; ловастатин; верапамил; тапсигаргин; 1-метил-4-фенилпиридиний; ингибиторы клеточного цикла, такие как стауроспорин; новантрон; эдетрексат; дауномицин; мтоксантрон; аминоптерин; кселода; ибандронат; ингибиторы топоизомеразы КР§ 2000; дифторметилорнитин (ОМРО); аналоги витамина Ό3, такие как ЕВ 1089, СВ 1093 и КН 1060; ретиноиды, такие как ретиновая кислота; фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из упомянутых выше; также как и комбинации двух или более упомянутых выше, такие как СНОР, аббревиатура для комбинированного лечения циклофосфамид, доксорубицин, винкристин и преднизолон, и РОЬРОХ, аббревиатура для режима лечения с помощью оксалиплатины (ЕЬ-ОХАМИ1™) в комбинации с 5-Ри и леуковорином.
Антигормональные агенты, которые регулируют или ингибируют действие гормонов на опухоли, такие как антиэстрогены и селективные модуляторы рецептора эстрогена (СМРЭ), в том числе, например, тамоксифен (включая ИОЬУАОЕХ® тамоксифен), ралоксифен, мегастрол, дролоксифен, 4гидрокситамоксифен, триоксифен, кеоксифен, ΡΥ117018, онапристон и РАКЕ8ТОИ® торемифен; ингибиторы ароматазы, которые ингибируют фермент ароматазу, который регулирует выработку эстрогена в надпочечниках, такие как, например, 4(5)-имидазолы, аминоглутетимид, МЕОА8Е® мегестрола ацетат, АКОМАМИ® экземестан, форместан, фадрозол, ЫУКОК® ворозол, РЕМАКА® летрозол и АЫМГОЕХ® анастрозол; и антиандрогены, такие как флутамид, бикалутамид, нилутамид, бикалутамид, леупролид и госерелин; а также троксацитабин (1,3-диоксолановый нуклеозидный цитозиновый аналог); антисмысловые олигонуклеотиды, в частности те, которые ингибируют экспрессию генов в сигнальных путях, замешанных в абберантной пролиферации клеток, такие как, например, РКС-альфа, Как, Н-Ка8, и рецептор эпидермального фактора роста (ЕОР-К); вакцины, такие как вакцины для генной терапии, например вакцина АРЕОУЕСПИ®, вакцина РЕиУЕСТкИ® и вакцина УАХЮ®; РКОЬЕиКкИ® ιΊΡ-2; ингибитор топоизомеразы 1 ЬиКТОТЕСАИ®; АВАКЕиХ® гтКН; и фармацевтически приемлемые соли, кислоты или производные любого из указанных выше.
Соединения описания или их фармацевтически приемлемые соли могут содержать один или более асимметрических центров и, таким образом, могут обуславливать существование энантиомеров, диастереомеров и других стереоизомерных форм, которые могут быть определены в значениях абсолютной стереохимии, как (К)- или (§)- или как (Ό)- или (Ь)- для аминокислот. Настоящее описание предназначено, чтобы включить все такие возможные изомеры, а также их рацемические и оптически чистые формы. Оптически активные (+) и (-), (К)- и (§)-, или (Ό)- и (Ь)- изомеры могут быть получены с использованием хиральных синтонов или хиральных реагентов или разделены с использованием традиционных методик, например хроматографии и фракционной кристаллизации. Обычные способы получения/выделения индивидуальных энантиомеров включают хиральный синтез из пригодных оптически чистых предшественников или разделение рацемата (или соли рацемата или производного) с использованием, например, хиральной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ). Когда соединения, описанные в данном документе, содержат олефиновые двойные связи или другие центры геометрической асиммет- 20 029818 рии, и если не указано иное, предполагается, что соединения включают как Е и Ζ геометрические изомеры. Кроме того, все таутомерные формы также должны быть включены.
Стереоизомер относится к соединению из тех же атомов, соединенных одними и теми же связями, но имеющему различные трехмерные структуры, которые не являются взаимозаменяемыми. Настоящее описание предполагает различные стереоизомеры и их смеси и включает энантиомеры, которые относятся к двум стереоизомерам, молекулы которых являются неналагающимися зеркальными отражениями друг друга.
Таутомер относится к сдвигу протона от одного атома молекулы к другому атому той же молекулы. Настоящее описание включает таутомеры любых упомянутых соединений.
Новые соединения.
В одном из вариантов реализации предлагаются соединения, имеющие следующую структуру (I):
где
К1 и К2 независимо выбраны из группы, состоящей из Н и насыщенного или ненасыщенного фрагмента, имеющего линейный, разветвленный или неароматический циклический скелет, содержащий от одного до десяти атомов углерода, и атомы углерода необязательно замещены -ОН, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -СИ, -СО2Н, -СНО, -СО8Н или -ЫО2; или К2 и К5 конденсированы и образуют кольцо;
К3 и К4 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, К, АгК-, или К3 и К4 связаны с образованием кольца;
К5 выбран из группы, состоящей из Н, К, АгК- и Аг; или К5 и К2 конденсированы и образуют кольцо;
К6 выбран из группы, состоящей из Н, К и АгК-;
К7 и К8 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, К и АгК-; и К9 представляет собой о о
II н II ννυΎ—С—N—5—Р14 II о , где
К определен как насыщенный или ненасыщенный фрагмент, имеющий линейный, разветвленный или неароматический циклический скелет, содержащий от одного до десяти атомов углерода, от нуля до четырех атомов азота, от нуля до четырех атомов кислорода и от нуля до четырех атомов серы, и атомы углерода необязательно замещены =О, =8, ОН, -ОК10, -О2СК10, -8Н, -8К10, -8ОСК10, -ЫН2, -МНК10, -Ы(К1о)2, -КНСОКю, -МКюСОКю, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -СЦ -СО2Н, -СО2К10, -СНО, -СОКю, -СОМЩ, -СО^Кю, -СОМК10)2, -СО8Н, -СО8К10, -ЫО2, -8О3Н, -8ОК10, -8О2К10, где К10 является линейной, разветвленной или циклической, насыщенной или ненасыщенной алкильной группой, содержащей от нуля до десяти углеродов;
кольцо, образованное при соединении К3 и К4, имеет трех-семичленный неароматический циклический скелет в рамках определения К,
Υ определяется как фрагмент, выбранный из группы, состоящей из линейной, насыщенной или ненасыщенной, содержащей от одного до шести углеродов алкильной группы, необязательно замещенной К, АгК- или X; и,
X определяется как фрагмент, выбранный из группы, состоящей из -ОН, -ОК, =О, =8, -О2СК, -8Н, -8К, -8ОСК, -ХН2, -К1НК, -Ы(К)2, -ЫНСОК, -К1КСОК, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -€Ν, -СО2Н, -СО2К, -СНО, -СОК, -СО\11, -СО^К, -СО^КЦ, -СО8Н, -СО8К, -\О, -8О3Н, -8ОК и -8О2К;
К14 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила и необязательно замещенных гетероарилов, СОК24, -С8К24, -ОК24, и -ННК^, где каждый К24 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -8Н;
или их стереоизомер, пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль.
В одном из вариантов реализации Аг представляет собой ароматическое кольцо, выбранное из группы, состоящей из фенила, нафтила, антрацила, пирролила.
В одном из вариантов реализации предлагаются соединения, имеющие следующую структуру (Ш):
- 21 029818
где
К14 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила, необязательно замещенного гетероарила, -С0К24, -С8Е24, -0К24, и -ΝΗΕ24, где каждый К24 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -8Η;
К15 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила и необязательно замещенного гетероарила;
Е16 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
К17 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
К18 и Е30 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С1-6 алкила и -8Η, при условии, что К18 и Е30 не могут быть оба Н;
К19, К20, К21 и К22 представляют собой независимо Н и С1-6 алкил, по меньшей мере один из К19 и К20 представляет собой Н; или К20 и К21 образуют двойную связь, К19 представляет собой Н, и К22 представляет собой Н или С1-6 алкил; и
К23 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
или их стереоизомер, пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль.
В дополнительном варианте реализации каждый необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный алкиламино, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный арил, необязательно замещенный гетероциклил и необязательно замещенный гетероарил независимо необязательно замещен =0, =8, -ОН, -0К24, -02СК24, -8Η, -8Е24, -80СЕ24, -ΝΗ2, -Ν3, -ΝΗΕ24, -Ν(Ε24)2, -ΝΗ^Ε24, -ХК-.ГО1С, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -ΟΝ, -С0711, -С02К24, -СИ0, -С0К.24, -ϋ0ΝΗ2, -€0ΝΉΗ24, <0Ν(Κ24)2, -С08Ц -С08Е24, -Ν02, -803Η, -80Ε24 или -802Ε24, где каждый Κ24 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -8Η.
В другом дополнительном варианте реализации каждый необязательно замещенный арил и необязательно замещенный гетероарил независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного фенила, необязательно замещенного нафтила, необязательно замещенного антрацила, необязательно замещенного фенантрила, необязательно замещенного фурила, необязательно замещенного пирролила, необязательно замещенного тиофенила, необязательно замещенного бензофурила, необязательно замещенного бензотиофенила, необязательно замещенного хинолинила, необязательно замещенного изохинолинила, необязательно замещенного имидазолила, необязательно замещенного тиазолила, необязательно замещенного оксазолила и необязательно замещенного пиридинила.
В другом дополнительном варианте реализации К15 выбран из одной из следующих структур (II), (III), (IV), (V):
(П)
(Ш)
(IV)
(V)
- 22 029818 где
Р представляет собой СК25 или Ν;
Ζ представляет собой С(К25)2, ΝΒ25, δ или О;
каждый К25 независимо выбран из группы, состоящей из Н, -ОН, -К24, -ОК24, -О2СК24, -δΗ, ^К24, -8ОСК24, -ΝΗ2, -Ν3, -ΝΗ^μ, -Н(К24)2, ^НСОК24, -]\1К24СОК24, -К24]\1Н2, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -СЫ, -СО2Н, -СО2К24, -СНО, -СОК24, -СОМ1, -СОХНИ;,, -СО^К24)2, -Ο3δΗ, -СОЗКм, -ИО2, ^О3Н, ^ОК24 или ^О2К24, где каждый К24 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -δΗ.
В другом дополнительном варианте реализации К]5 выбран из группы, состоящей из
где каждый К25 независимо выбран из группы, состоящей из Н, -ОН, -К24, -ОК24, -О2СК24, -δΗ, -δ^, ^ОСК24, -ΝΗ2, -Ν3, -ΝΗ^, -ΝΗσΤ^, -МК24СОК24, -^4^2, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -ΟΝ, -00-11,
-СО2К24, -ОТО, -СОК24, -СОМЩ, -СОNΗК24, -СОМ(К24)2, -^δΗ, -СОЗКм, -ЦО2, ^ОЩ, ^ОК24 или ^О2К24, где каждый К24 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -δΗ.
В другом дополнительном варианте реализации К]5 выбран из группы, состоящей из
В другом дополнительном варианте реализации К!5 представляет собой
В другом дополнительном варианте реализации К16, К17, К18 и К30 каждый представляет собой метил.
В другом дополнительном варианте реализации К!6 представляет собой Н, Кп представляет собой метил, К18 представляет собой метил, и К30 представляет собой метил.
Понятно, что любой вариант реализации соединений структуры (1а), как приведено выше, и любой отдельный заместитель, приведенный в данном документе для Ки, К-5, К^, К.17, К^, К49, К20 и К30 группы в соединениях структуры (1а), как приведено выше, может быть независимо объединен с другими вариантами реализации и/или заместителями соединений структуры (I) с образованием вариантов реализации
- 23 029818 настоящего описания, специально не раскрытых выше. В дополнение, в случае, когда приведен перечень заместителей для любого конкретного К.14, К15, К16, К17, К18, К19, К20, и К30 в конкретном варианте реализации и/или пункте формулы, понятно, что каждый отдельный заместитель может быть удален из определенного варианта реализации и/или пункта формулы, и что оставшийся перечень заместителей будет считаться находящимся в рамках настоящего описания.
В одном из вариантов реализации предлагаются соединения, имеющие следующую структуру (!Ь):
(1Ь) где
К26 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила и необязательно замещенного гетероарила;
К27 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила и необязательно замещенного гетероарила;
К]6 выбран из группы, состоящей из Н и Οι_6 алкила;
К17 выбран из группы, состоящей из Н и С2.6 алкила; и
К18 выбран из группы, состоящей из С!-6 алкила и -8Н, или их стереоизомер, пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль.
В дополнительном варианте реализации каждый необязательно замещенный алкил, необязательно замещенный алкиламино, необязательно замещенный циклоалкил, необязательно замещенный арил, необязательно замещенный гетероциклил и необязательно замещенный гетероарил независимо необязательно замещен =0, =8, -ОН, -ОК28, -О2СК28, -8Н, -8К28, -8ОСК28, -ΝΗ2, -Ν3, -ΝΗΚ28, -Ν(Κ28)2, -ИНСОК28, -№К28СОК28, -I, -Вг, -С1, -Р, -0Ν, -СО2Н, -СО2К28, -СНО, -СОК28, -СОРТЩ, -€0ΝΗΚ2«, -СО^К^Ъ, -С08Н, -СО8К28, -ЫО2, -8О3Н, -§ОК28 или -§О2К28, где каждый К28 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -8Н.
В другом дополнительном варианте реализации каждый необязательно замещенный арил и необязательно замещенный гетероарил независимо выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного фенила, необязательно замещенного нафтила, необязательно замещенного антрацила, необязательно замещенного фенантрила, необязательно замещенного фурила, необязательно замещенного пирролила, необязательно замещенного тиофенила, необязательно замещенного бензофурила, необязательно замещенного бензотиофенила, необязательно замещенного хинолинила, необязательно замещенного изохинолинила, необязательно замещенного имидазолила, необязательно замещенного тиазолила, необязательно замещенного оксазолила и необязательно замещенного пиридинила.
В другом дополнительном варианте реализации К27 выбран из одной из следующих структур (II), (III), (IV), (V):
(П)
(III)
(IV)
(V) где
О представляет собой СК29 или Ν;
- 24 029818
Ζ представляет собой С(К29)2, ΝΚ29, δ или О;
каждый К29 независимо выбран из группы, состоящей из Н, -ОН, -ОК28, -О2СК28, -δΗ, -δΚ28, -δΘΟΚ28, -ΝΗ2, -Ν3, -ΝΗΚ28, -Ν(Κ28)2, -ΝΗΟΟΚ28, -ΝΚ28ΟΟΚ28, -I, -Вг, -С1, -Р, -ΟΝ, -СО2Н, -СО2К28, -СНО, -СОК28, -ί'.ΌΝΗ2. -ϋΘΝΗΚ28, -СОЫ(К28)2, -ί'.ΌδΗ. -ϋΘδΚ28, -ΝΘ2, -δΘ3Η, -δΘΚ28 или -δΘ2Κ28, где каждый Κ28 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -δΗ.
В другом дополнительном варианте реализации К27 выбран из группы, состоящей из
В другом дополнительном варианте реализации К27 представляет собой
В другом дополнительном варианте реализации Κι6, Κι7 и Κι8 каждый представляет собой метил.
В другом дополнительном варианте реализации К.16 представляет собой Н, К1- представляет собой метил, и Κι8 представляет собой метил.
Понятно, что любой вариант реализации соединений структуры (1Ь), как приведено выше, и любой отдельный заместитель, приведенный в данном документе для К25, К26, Κι6, К.17, Κι8, Κι8 и К20 группы в соединениях структуры (1Ь), как приведено выше, может быть независимо объединен с другими вариантами реализации и/или заместителями соединений структуры (Ι) с образованием вариантов реализации настоящего описания, специально не раскрытых выше. В дополнение, в случае, когда приведен перечень заместителей для любого конкретного К25, К26, Κι6, К.17, Κι8, К.18 и К20 в конкретном варианте реализации и/или пункте формулы, понятно, что каждый отдельный заместитель может быть удален из определенного варианта реализации и/или пункта формулы, и что оставшийся перечень заместителей будет считаться находящимся в рамках настоящего описания.
В одном из вариантов реализации изобретение предлагает способ получения соединений, имеющих структуру (I), (1а) или (1Ь).
Конъюгаты, содержащие новые соединения.
Соединения, имеющие структуру (I), (1а) или (1Ь), могут быть использованы для получения конъюгатов, например конъюгатов антитело-лекарственное средство (КАЛС). Соответственно в одном из вариантов реализации настоящего описания предлагаются конъюгатные композиции, имеющие следующую структуру:
(Τ)-(Ρ-(ϋ) (VI) где (Т) представляет собой нацеливающий фрагмент, (Ь) представляет собой необязательный линкер, и (Ό) представляет собой соединение, имеющее структуру (I), (1а) или (1Ь), ниже. В одном из вариантов реализации (Т) представляет собой антитело. Соответственно в одном из вариантов реализации предлагаются конъюгаты антитело-лекарственное средство (КАЛС), содержащие соединения (Ό), имеющие структуру (I), Ца) или (Ю).
Как будет понятно среднему специалисту, доступно большое разнообразие средств для ковалентного связывания (Т)-(Ь)-(О). Любой известный способ может быть использован для связывания компонентов конъюгата. Любая известная методика связывания может быть использована для связывания (Т) с (Ό). Кроме того, (Т), (Ь) и (Ό) могут быть модифицированы любым пригодным способом, как очевидно среднему специалисту, для того чтобы облегчить получение конъюгата.
- 25 029818
Нацеливающий фрагмент (Т).
Нацеливающий фрагмент (Т) рассматриваемых композиций включает в свои рамки любую единицу (Т), которая связывает или реактивно связывает или образует комплекс с рецептором, антигеном или другим восприимчивым фрагментом, связанным с данной целевой популяцией клеток. (Т) представляет собой молекулу, которая связывается с, образует комплекс с или вступает в реакцию с фрагментом клеточной популяции, искомой в качестве мишени. В одном из аспектов (Т) действует как средство доставки лекарственного средства (Ό) к конкретной популяции клеток-мишеней, с которыми (Т) реагирует. Такие (Т) включают, но не ограничиваются ими, белки с большой молекулярной массой, такие как, например, непроцесированные антитела, фрагменты антител, низкомолекулярные белки, полипептид или пептиды, лектины, гликопротеины, непептиды, витамины, молекулы, транспортирующие питательные вещества (такие как, но не ограничиваясь ими, трансферрин), или любая другая связанная с клеткой молекула или вещество.
(Т) может образовывать связь с линкером (Б) или с лекарственным средством (Ό). (Т) может образовывать связь с (Б) через гетероатом (Т). Гетероатомы, которые могут присутствовать на (Т), включают серу (в одном из вариантов реализации, из сульфгидрильной группы (Т)), кислород (в одном из вариантов реализации, из карбонильной, карбоксильной или гидроксильной группы (Т)) и азот (в одном из вариантов реализации, из первичной или вторичной аминогруппы (Т)). Эти гетероатомы могут присутствовать на (Т) в природном состоянии (Т), например, встречающееся в природе антитело, или могут быть введены в (Т) путем химической модификации.
В одном из вариантов реализации (Т) имеет сульфгидрильную группу и (Т) связывается с (Б) через атом серы сульфгидрильной группы. В другом варианте реализации (Т) имеет один или более остатков лизина, которые могут быть химически модифицированы, чтобы ввести одну или более сульфгидрильных групп. (Т) связывается с (Б) через сульфогидрильную группу. Реагенты, которые могут быть использованы для модификации лизинов, включают, но не ограничиваются ими, Ν-сукцинимидил 8ацетилтиоацетат (8АТА) и 2-иминотиолана гидрохлорид (реагент Траута).
В другом варианте реализации (Б) может иметь одну или более углеводных групп, которые могут быть химически модифицированы, чтобы иметь одну или более сульфгидрильных групп. (Т) связывается с (Б) через атом серы сульфгидрильной группы. В еще одном варианте реализации (Т) может иметь одну или более углеводных групп, которые могут быть окислены с получением альдегидной (-СНО) группы (см., например, Бади/ха е! а1., 1989, 1. Меб. СЬет. 32(3):548-55). Соответствующий альдегид может образовывать связь с реакционным сайтом на части (Б). Реакционные сайты, которые могут вступать в реакцию с карбонильной группой на (Т), включают, но не ограничиваются ими, гидразин и гидроксиламин. Другие протоколы для модификации белков для присоединения или ассоциации (Ό) описаны в Сойдап е! а1., Сиггеп! Рго!осо18 ίη Рго!еш 8с1епсе, νοί. 2, 1оЬп \УПеу & 8оп8 (2002), включенную в данный документ посредством ссылки.
(Т) может включать, например, белок, полипептид или пептид, но не ограничиваются ими, трансферрин, фактор эпидермального роста (БОР), бомбезин, гастрин, гастринвысвобождающий пептид, тромбоцитарный фактор роста, 1Б-2, 1Б-6, трансформирующий фактор роста (ТОР), такие как ТОР-а или ТОР-β, вакцина фактора роста (УОР), инсулин и инсулинподобный фактор роста I и II, лектины и апобелок из липопротеина низкой плотности.
(Т) также может включать в себя антитела, такие как поликлональные антитела или моноклональные антитела. Антитело может быть направлено на определенную антигенную детерминанту, включая, например, антиген раковой клетки, вирусный антиген, бактериальный антиген, белок, пептид, углевод, химикат, нуклеиновую кислоту или их фрагменты. Способы получения поликлональных антител известны в данной области техники. Моноклональные антитела (тАЬ) к интересующему антигену могут быть получены с использованием любых способов, известных в данной области. Они включают, но не ограничиваются ими, гибридомную технику, первоначально описанную КоЫег апб МЛйет (1975, №!иге 256, 495-497), гибридомную технику на человеческих В клетках (Ко/Ьог е! а1., 1983, 1ттипо1оду Тобау 4:72), и ЕВУ-гибридомную технику (Со1е е! а1., 1985, Мопос1опа1 АпйЬоб1е8 апб Сапсег ТЬегару, А1ап К. Б188, 1пс., рр. 77-96). Способ выбранного лимфоцитного антитела (8БАМ) (ВаЬсоок Ι.8., е! а1., А ηονе1 8!га!еду Юг депегайпд топос1опа1 апйЬоб1е8 Ггот 8тд1е, 18о1а!еб 1утрЬосу!е8 ргобисшд апйЬоб1е8 оГ бейпеб 8рес1йс1Йе8. Ргос №И1 Асаб 8а И8А, 1996. 93 (15): р. 7843-8.) и (МсБеап О.К., О18еп О.А., \Уа11 Ι.Ν., Ка!Ьапа8\уапи Р., Бе811е К.В., ВаЬсоок Ι.8., 8сЬгабег IV. Кесодтйоп оГ Ьитап суЮтеда1о\аги8 Ьу Ьитап рптагу 1ттипод1оЬи1т8 1бепййе8 ап шпа!е найдено айоп !о ап абарШе 1ттипе ге8роп8е. I 1ттипо1. 2005 Арг 15;174(8):4768-78. Такие антитела могут быть любого иммуноглобулинового класса, включая 1§О, 1дМ, 1дЕ, 1§А и Ι§Ό и любой их подкласс. Гибридомы, продуцирующие тАЬ и используемые в этом изобретении, могут культивироваться ш νίίΐΌ или ш νί\Ό.
Моноклональное антитело может быть, например, человеческим моноклональным антителом, гуманизированным моноклональным антителом, фрагментом антитела или химерным антителом (например, антитело человек-мышь). Человеческие моноклональные антитела могут быть получены любым из многочисленных способов, известных в данной области (например, Тепд е! а1., 1983, Ргос. №!1. Асаб. 8а.
- 26 029818 υδΑ 80:7308-7312; Ко/Ьог е! а1., 1983, Пптипсйоду Тойау 4:72-79; и О188оп е! а1., 1982, Ме!к. Еп/уто1. 92:3-16). См. также, Ниве е! а1., 1989, 8с1епсе 246:1275-1281 и МсЬеап е! а1. I Iттиηο1. 2005 Арг 15;174(8):4768-78.
Антитело может также быть биспецифическим антителом. Способы получения биспецифических антител известны в данной области техники. Традиционное получение непроцесированных биспецифических антител базируется на коэкспрессии двух пар иммуноглобулиновых тяжелой цепи-легкой цепи, где две цепи обладают различной специфичностью (см., например, МЙ8!ет е! а1., 1983, Ыа!иге 305:537539; Международная публикация \УО 93/08829, Тгаипескег е! а1., 1991, ЕМВО I. 10:3655-3659).
Согласно другому подходу вариабельные домены антител с желаемой специфичностью связывания (антитело-антигенсвязывающие участки) конденсируют с последовательностями константных доменов иммуноглобулинов. Место конденсации предпочтительно находится в константном домене тяжелой цепи иммуноглобулина, содержащей по меньшей мере часть шарнирной, СН2, и СН3 областей. Предпочтительно имеется константная область (СН1) первой тяжелой цепи, содержащая сайт, необходимый для связывания легкой цепи, присутствующей по меньшей мере в одном из гибридов. Нуклеиновые кислоты с последовательностями, кодирующими тяжелую цепь иммуноглобулина и, при желании, легкую цепь иммуноглобулина, встраивают в отдельные экспрессирующие векторы и котрансфицируют в подходящий организм-хозяин. Это обеспечивает гибкость при корректировке взаимных соотношений трех полипептидных фрагментов в вариантах реализации, когда неравные соотношения трех полипептидных цепей, используемых в конструкции, дают оптимальные выходы. Однако можно вставить кодирующие последовательности для двух или всех трех полипептидных цепей в один экспрессирующий вектор, когда экспрессия по меньшей мере двух полипептидных цепей в равных соотношениях приводит к высоким выходам или когда соотношения не имеют особого значения.
Например, биспецифические антитела могут иметь гибридную тяжелую цепь иммуноглобулина с первой специфичностью связывания в одной руке и пару гибридной тяжелой цепи-легкой цепи иммуноглобулина (обеспечивающую вторую специфичность связывания) в другой руке. Эта асимметричная структура облегчает отделение нужного биспецифического соединения от нежелательных комбинаций цепей иммуноглобулина, поскольку присутствие легкой цепи иммуноглобулина только в одной половине биспецифической молекулы обеспечивает легкий способ разделения (Международная публикация \УО 94/04690), которая включена в настоящее описание посредством ссылки во всей полноте.
Для дополнительных деталей для получения биспицефических антител см., например, διιΐΌβΙι е! а1., 1986, Ме!кой8 ίη Еп/уто1оду 121:210; Коййдие8 е! а1., 1993, ί. !ттипо1оду 151:6954-6961; Сайег е! а1., 1992, Вю/ТесЬпо1оду 10:163-167; Сайег е! а1., 1995, ί. НетаЮШегару 4:463-470; Мегскап! е! а1., 1998, Ыа!иге Вю!есЬпо1оду 16:677-681. Используя такие способы могут быть получены биспецифические антитела для использования в лечении или профилактике заболевания, как определено в данном документе.
Бифункциональные антитела также описаны в европейской патентной публикации № ЕРА 0105360. Как описано в этой ссылке, гибридные или бифункциональные антитела могут быть получены или биологически, то есть с помощью методик слияния клеток, или химически, особенно с помощью сшивающих агентов или реагентов, образующих дисульфидный мостик, и могут включать их целые антитела или фрагменты. Способы получения таких гибридных антител описаны, например, в Международной публикации \УО 83/03679 и Европейской патентной публикации № ЕРА 0217577, обе из которых включены в данный документ посредством ссылки.
Антителом также может быть функционально активный фрагмент, производное или аналог антитела, которые иммуноспецифично связываются с антигеном мишенью (например, раковый антиген, вирусный антиген, микробный антиген или другие антитела, связанные с клетками или матрицей). В связи с этим функционально активный означает, что фрагмент, производное или аналог способен распознавать тот же антиген, что и антитело, из которого получен распознающий фрагмент, производное или аналог. В частности, в примерном варианте реализации антигенность идиотипа молекулы иммуноглобулина может быть повышена путем делеции рамки и СОК последовательностей, которые являются С-концевой к СОК последовательности, которая специфически распознает антиген. Чтобы определить, какие последовательности СОК связывают антиген, синтетические пептиды, содержащие последовательности СОК, могут быть использованы в анализах связывания с антигеном, используя любой способ анализа связывания, известный в данной области (например, исследование ядра В!А) (см. например, КаЬа! е! а1., 1991, δе^иеηсе8 оГ Рго!еш8 оГ !ттипо1од1са1 !Шеге81. ΕίΓιΗ ЕШйоп, Ыайопа1 !п8И1и1е оГ Неа1!к, Ве!ке8йа, Мй.; КаЬа! е! а1., 1980, ί. !ттипо1оду 125(3):961-969).
Другие полезные антитела включают фрагменты антител, такие как, но не ограничиваясь ими, Р(аЬ')2 фрагменты, РаЬ фрагменты, РаЬ', Ρν фрагменты и димеры тяжелой цепи и легкой цепи антител или их любой минимальный фрагмент, такой как Ρν8 или одноцепочечные антитела (ОЦА) (например, как описано в патенте υδ 4946778; Вий, 1988, δ^ι^ 242:423-42; Ни8!оп е! а1., 1988, Ргос. Ыа!1. Асай. δα. υδΑ 85:5879-5883; и \\ агй е! а1., 1989, ХаПне 334:544-54).
Также могут быть использованы рекомбинантные антитела, такие как химерные и гуманизированные моноклональные антитела, содержащие и человеческие, и нечеловеческие части, которые могут быть получены с использованием стандартных способов рекомбинантной ДНК (см., например, патент υδ
- 27 029818
4816567 и патент И8 4816397). Гуманизированные антитела представляют собой молекулы антител из нечеловеческих видов, имеющих один или более гипервариабельных участков (СОК) из нечеловеческих видов, и каркасную область из молекулы иммуноглобулина человека (см., например, патент И8 5585089). Химерные моноклональные и гуманизированные антитела могут быть получены с помощью способов рекомбинантной ДНК, известных в данной области, например с использованием способов, описанных в Международной публикации № АО 87/02671; Европейской патентной публикации № 0184187; Европейской патентной публикации № 0171496; Европейской патентной публикации № 0173494; Международной публикации № АО 86/01533; патенте И8 4816567; Европейской патентной публикации № 012023; Вейег е! а1., 1988, 8аепсе 240:1041-1043; Ьш е! а1., 1987, Ргос. ИаН. Асаб. 8а. И8А 84:3439-3443; Ьш е! а1., 1987, 1. 1ттипо1. 139:3521-3526; 8ип е! а1., 1987, Ргос. Иа!1. Асаб. 8а. И8А 84:214-218; №8Ытцга е! а1., 1987, Сапсег. Ке8. 47:999-1005; Аооб е! а1., 1985, Иа!иге 314:446-449; 8кате е! а1., 1988, 1. Иа!1. Сапсег 1п8!. 80:1553-1559; Мот8оп, 1985, 8аепсе 229:1202-1207; О1 е! а1., 1986, ВюТесктдце8 4:214; патент И8 5225539; 1опе8 е! а1., 1986, Иа!иге 321:552-525; Уегкоеуап е! а1., 1988, 8аепсе 239:1534 и Ве1б1ег е! а1., 1988, 1. 1ттипо1. 141:4053-4060.
Могут быть использованы полностью человеческие антитела. Человеческие антитела могут быть получены, например, с использованием трансгенных мышей, которые не способны экспрессировать гены тяжелых и легких цепей эндогенного иммуноглобулина, но которые могут экспрессировать гены тяжелой и легкой цепи человека. Трансгенных мышей иммунизируют обычным образом выбранным антигеном, например, всем или частью полипептида изобретения. Моноклональные антитела, направленные против антигена, могут быть получены с использованием традиционной технологии гибридомы. Трансгены иммуноглобулина человека скрыты трансгенными мышами перегруппировкой во время дифференциации В-клеток и впоследствии подвергаются классу переключений и соматической мутации. Таким образом, с помощью такой методики можно получить терапевтически эффективные 1дО, 1дА, 1дМ и 1дЕ антитела. Для обзора этой технологии получения антител человека см. ЬопЬегд апб Ни8/аг (1995, 1п!. Кеу. 1ттипо1. 13:65-93). Для более подробного обсуждения этой технологии для получения антител человека и моноклональных антител человека и протоколы получения таких антител см., например, патенты И8 5625126; 5633425; 5569825; 5661016 и 5545806.
Человеческие антитела, которые распознают выбранный эпитоп, также могут быть получены с использованием техники, называемой как управляемая селекция. В этом подходе выбирается нечеловеческое моноклональное антитело, например используется антитело мыши, чтобы руководить отбором полностью человеческого антитела, распознающего тот же эпитоп (см., например, 1е8рег8 е! а1., 1994, Вю!ескпо1оду 12:899-903.) Человеческие антитела также могут быть получены с использованием различных способов, известных в данной области, в том числе библиотек фагового отображения (см., например, НоодепЬоот апб Ат!ег, 1991, 1. Мо1. Вю1. 227:381; Магк8 е! а1., 1991, 1. Мо1. Вю1. 222:581; Циап апб Сайег, 2002, Тке П8е оГ топос1опа1 апкЬоб1е8 а8 !кегареикс8, т Λπΐί-ΙβΕ апб А11егд1с О18еа8е, 1агб1еи Р.М. и Рюк 1г. К.В., еб8., Магсе1 Эеккег, Ие\у Уогк, Ν.Υ., Скар!ег 20, рр. 427-469).
В других вариантах реализации антитело представляет собой конденсированный белок антитела или его функционально активный фрагмент. Например, антитело может быть конденсировано с помощью ковалентной связи (например, пептидной связи) либо по Ν-концу, либо по С-концу с аминокислотной последовательностью другого белка (или его части, такой как по меньшей мере 10, 20 или 50 аминокислотной частью белка), который не является антителом.
Антитела также включают аналоги и производные, которые либо модифицированы, то есть с помощью ковалентного присоединения любого типа молекулы, пока такое ковалентное присоединение позволяет антителу сохранить свою антигенсвязывающую иммуноспецифичность. Например, но не в качестве ограничения, производные и аналоги антител включают те, которые были дополнительно модифицированы, например, путем гликозилирования, ацетилирования, пэгилирования, фосфорилирования, амидирования, дериватизации известными защитными/блокирующими группами, протеолитического расщепления, присоединения к блоку клеточного антитела или другого белка и т.д. Любая из многочисленных химических модификаций может быть осуществлена известными способами включая, но не ограничиваясь ими, специфическое химическое расщепление, ацетилирование, формилирование, метаболический синтез в присутствии туникамицина и т. д. Кроме того, аналог или производное может содержать одну или более неприродных аминокислот.
Антитела могут иметь модификации (например, замены, делеции или вставки) в аминокислотных остатках, которые взаимодействуют с Рс-рецепторами. В частности, антитела включают антитела, имеющие модификации в аминокислотных остатках, идентифицированных как вовлеченные во взаимодействие между доменом анти-Рс и РсКп-рецептор (см., например, Международную публикацию № АО 97/34631, которая включена в данный документ посредством ссылки во всей своей полноте). Иммуноспецифические антитела для антигена-мишени могут быть получены из коммерческих источников или другого источника или получены любым способом, известным специалисту в данной области техники, таким как, например, химический синтез или рекомбинантные методы экспрессии. Нуклеотидная последовательность, кодирующая иммуноспецифические антитела для антигена раковой клетки, может быть получена, например, из базы данных ОепВапк или подобной базы данных, литературных публикаций или
- 28 029818 с помощью рутинного клонирования и секвенирования.
Примеры антител, доступные для лечения рака, включают, но не ограничиваются ими, гуманизированное анти НЕК2 моноклональное антитело, НЕКСЕРТШ® (трастузумаб; СепеШесН); КIΤυXАN® (ритуксимаб; СепеШесН). который является анти СЭ20 химерным моноклональным антителом для лечения пациентов с неходжкинской лимфомой; ОваРекс (АНаКех СогрогаНоп, МА), который является мышиным антителом для лечения рака яичников; Панорекс (С1ахо ^е11соте, ΝΟ), который является мышиным 1дС2а антителом для лечения колоректального рака; Цетуксимаб Эрбитукс (1тС1опе 8ук1етк 1пс., ΝΥ), который является химерным антителом анти-ЕСЕК 1§С для лечения позитивного рака эпидермального фактора роста, такого как рак головы и шеи; Витаксин (Меб1ттипе, 1пс., МО), который является гуманизированным антителом для лечения саркомы; Кампат Ι/Н (ЬеикокНе, МА), который является гуманизированным антителом 1§С1 для лечения хронического лимфолейкоза (ХЛЛ); Смарт М195 (Рго1е1п Оекщп ЬаЬк, 1пс., СА), который является гуманизированным антителом анти-СО33 1§С для лечения острого миелоидного лейкоза (ОМЛ); ЛимфоЦид (1ттипотебюк, 1пс., N1), который является гуманизированным антителом анти-СО22 1§С для лечения неходжкинской лимфомы; Смарт ГО10 (Рго1е1п ОЕк1дп ЬаЬк, 1пс., СА), который является гуманизированным антителом анти-НЬА-ОК для лечения неходжкинской лимфомы; Онколим (ТесНтс1опе, 1пс., СА), который является меченным радиоактивным изотопом мышиным антителом анти-НЬА-ОК 10 для лечения неходжкинской лимфомы; Алломине (ВюТгапкр1ап!, СА), который является гуманизированным анти-СО2 тАЬ для лечения болезни Ходжкина или неходжкинской лимфомы; Авастин (СепеШесН, 1пс., СА), который является гуманизированным антителом анти-УЕСЕ для лечения колоректального рака легких, Эпратузамаб (1ттипотебюк, 1пс., N1 и Атдеп, СА), который представляет собой антитело анти-СО22 для лечения неходжкинской лимфомы; и ЦЕАсид (Нппшпотебюк, N1), который является гуманизированным анти-СЕА антителом для лечения колоректального рака.
Другие антитела, используемые в лечении рака, включают, но не ограничиваются ими, антитела против следующих антигенов (примеры видов рака указаны в скобках): СА125 (яичников), СА15-3 (карцинома), СА19-9 (карцинома), Ь6 (карцинома), Льюис Υ (карцинома), Льюис X (карцинома), альфа фетопротеин (карцинома), СА 242 (колоректальный), плацентарная щелочная фосфатаза (карцинома), мембранный антиген предстательной железы (простаты), предстатическая кислая фосфатаза (простаты), эпидермального фактора роста (карцинома), МАСЕ-1 (карцинома), МАСЕ-2 (рак), МАСЕ-3 (рак), МАСЕ-4 (карцинома), антитрансферриновый рецептор (карцинома), р97 (меланома), МИС1-КЬН (рак молочных желез), СЕА (колоректальный), др100 (меланома), МАКТ1 (меланома), простатический специфический антиген (ПСА) (простаты), 1Ь-2-рецептор (Т-клеточный лейкоз и лимфома), СЭ20 (неходжкинская лимфома), СЭ52 (лейкоз), СЭ33 (лейкоз), СЭ22 (лимфома), человеческий хорионический гонадотропин (карцинома), СЭ38 (множественная миелома), СЭ40 (лимфома), муцин (карцинома), Р21 (карцинома), МРС (меланома) и продукт онкогена Ноя (карцинома). Некоторые конкретные полезные антитела включают, но не ограничиваются ими, ВК96 тАЬ (ТгаП е! а1., 1993, 8с1епсе 261:212-215), ВК64 (ТгаП е! а1., 1997, Сапсег КекеагсН 57:100-105), моноклональные антитела против антигена СЭ40, такие как 82С6 тАЬ (Егапсгасо е! а1., 2000, Сапсег Кек. 60:3225-3231) и их химерные и гуманизированные варианты, моноклональные антитела против антигена сЭ33; моноклональные антитела против антигена ЕрНА2; моноклональные антитела против антигена СО70, такие как 1Е6 тАЬ и 2Е2 тАЬ и их химерные и гуманизированные варианты, и моноклональные антитела против антигена СО30, такие как АС10 (Во\уеп е! а1., 1993, I. 1ттипо1. 151:5896-5906; \УаН1 е! а1., 2002, Сапсег Кек. 62(13):3736-42) и их химерные и гуманизированные варианты. Могут быть использованы и были рассмотрены многие другие интернализирующие антитела, которые связываются с опухолевыми ассоциированными антигенами (см., например, Егапке е! а1., 2000, Сапсег Вюкег. КабюрНагт. 15:459 76; Мштау, 2000, 8етш. Опсо1. 27:64 70; ВгеИНпд е! а1., КесотЬшап! АпНЬоб1ек, 1оНп \УПеу апб 8опк, №\у Υο^к, 1998).
Антителом также может быть антитело, которое связывается с антигеном, который присутствует на клетке-мишени или популяции клеток-мишеней. Например, трансмембранные полипептиды и другие маркеры могут быть специфически экспрессированы на поверхности одной или более конкретных типов клеток-мишеней (например, раковая клетка) по сравнению с одной или более нормальных (например, нераковая(ые) клетка(и)). Часто такие маркеры с избытком экспрессируются на поверхности клетокмишеней или обладают большей иммуногенностью по сравнению с теми, что на поверхности нормальных клеток. Идентификация таких полипептидных антигенов клеточной поверхности повышает способность для специфичных клеток-мишеней для уничтожения с помощью терапии на основе антител. Таким образом, в некоторых вариантах реализации антитела включают, но не ограничиваются ими, антитела против опухоль-ассоциированных антигенов (ОАА). Такие ассоциированные с опухолью антигены известны в данной области и могут получаться для использования в генерации антител с использованием способов и информации, которые хорошо известны в данной области техники.
См. также ЕР 2552957, \\'О 2012/116453, \\'О 2012/032080. См. также 2уЬобу™,
1Шр://\\уу\у./упде1па.сот/1есНпо1о8у.1ит1. См. также технология человеческих антител только с тяжелой цепью, Нир://\у\у\у.сгексепбоЬю1о81ск.сот/. См. также \УО 2010001251, платформа человеческих антител, полученных из дрожжей 1Шр://\у\у\у.аб^таЬ.сοт/кс^еηсе-аηб-ιесНηο1ο8у/ιесНηο1ο8У-ονе^ν^е\у/. платформа
- 29 029818 моноклонального исследования АО 2013004842, АО 2012166560.
тАЪЬощх™ Ьйр://№№№.йпа.сотЛесйпо1оду, платформа
Ьйр://№№№лдетса.сотЛесйпо1оду/, АО 2009/157771, ЕР 2560993,
Линкерный фрагмент (Ь).
Рассматриваемые композиции необязательно дополнительно содержат линкерный фрагмент (Ь). (Ь) представляет собой бифункциональное соединение, которое может быть использовано, чтобы связать (Ό) и (Т) с образованием композиции конъюгата, Т-Ь-Ό. Такие конъюгаты позволяют селективную доставку лекарственных средств к клеткам-мишеням (например, опухолевым клеткам). (Ь) включают двухвалентный заместитель, такой как алкилдиил, арилдиил, гетероарилдиил, фрагменты, такие как: -(СК2)пО(СК2)п-, повторяющиеся алкилоксиблоки (например, полиэтиленокси, ПЭГ, полиметиленокси) и алкиламино (например, полиэтиленамино, .Тейаттте™); и сложные эфиры и амиды двухосновных кислот, включая сукцинат, сукцинамид, дигликолят, малонат и капроамид.
Рассматриваемые композиции могут быть получены с использованием (Ь) блока, имеющего реакционноспособный сайт для связывания с (Ό) и (Т). В некоторых вариантах реализации (Ь) имеет реактивный сайт, который имеет электрофильную группу, которая реагирует с нуклеофильной группой, присутствующей на (Т). Пригодные нуклеофильные группы на (Т) включают, но не ограничиваются ими, сульфгидрильную, гидроксильную и аминогруппы. Гетероатом нуклеофильной группы (Т) реагирует с электрофильной группой на (Ь) и образует ковалентную связь с (Ь). Пригодные электрофильные группы включают, но не ограничиваются ими, малеимидную и галоацетамидную группы. Нуклеофильная группа на (Т) обеспечивает удобный сайт для присоединения к (Ъ).
В другом варианте реализации (Ъ) имеет реактивный сайт, который имеет нуклеофильную группу, которая реагирует с электрофильной группой, присутствующей на (Т). Пригодные электрофильные группы на (Т) включают, но не ограничиваются ими, альдегидную и кетонкарбонильную группы. Гетероатом нуклеофильной группы (Ь) может реагировать с электрофильной группой на (Т) и образует ковалентную связь с (Т). Пригодные нуклеофильные группы на (Ь) включают, но не ограничиваются ими, гидразид, оксим, амино, гидразин, тиосемикарбазон, гидразинкарбоксилат и арилгидразид. Электрофильная группа на (Т) обеспечивает удобный сайт для присоединения к (Ь).
Карбоксильные функциональные группы и хлорформиатные функциональные группы также пригодны в качестве реактивных сайтов для (Ь), поскольку они могут реагировать с аминогруппами (Ό) с образованием амидной связи. Также пригодна в качестве реактивного сайта карбонатная функциональная группа на (Ь), такая как, но не ограничивается ими, п-нитрофенилкарбонат, которая может реагировать с аминогруппой (Ό) с образованием карбаматной связи.
Следует иметь в виду, что любые линкерные фрагменты, описанные в предшествующем уровне техники, и особенно те, которые используются в контексте доставки лекарственного средства, могут быть использованы в настоящем изобретении. Без ограничения рамок изложенного выше, в одном из вариантов реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в АО 2012/113847. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в И8 8288352. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в И8 5028697. В другом варианте реализации (Ъ) содержит линкерный фрагмент, описанный в И8 5006652. В другом варианте реализации (Ъ) содержит линкерный фрагмент, описанный в И8 5094849. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в И8 5053394. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в и8 5122368. В другом варианте реализации (Ъ) содержит линкерный фрагмент, описанный в и8 5387578. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в И8 5547667. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в И8 5622929. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в И8 5708146. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в И8 6468522. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в И8 6103236. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в И8 6638509. В другом варианте реализации (Ъ) содержит линкерный фрагмент, описанный в И8 6214345. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в И8 6759509. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в АО 2007/103288. В другом варианте реализации (Ъ) содержит линкерный фрагмент, описанный в АО 2008/083312. В другом варианте реализации (Ъ) содержит линкерный фрагмент, описанный в АО 2003/068144. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в АО
2004/016801 2009/134976 2009/134952 2009/134977 2002/08180. В 2004/043493 2007/018431 2003/026577 2005/077090 2005/082023 другом другом другом другом другом другом другом другом другом другом варианте варианте варианте варианте варианте варианте варианте варианте варианте варианте реализации реализации реализации реализации реализации реализации реализации реализации реализации реализации (Ъ) (Ъ) (Ъ) (Ъ) (Ь) (Ъ) (Ъ) (Ъ) (Ъ) (Ъ) содержит содержит содержит содержит содержит содержит содержит содержит содержит содержит линкерный линкерный линкерный линкерный линкерный линкерный линкерный линкерный линкерный линкерный фрагмент, фрагмент, фрагмент, фрагмент, фрагмент, фрагмент, фрагмент, фрагмент, фрагмент, фрагмент, описанный описанный описанный описанный описанный описанный описанный описанный описанный описанный
АО
АО
АО
АО
АО
АО
АО
АО
АО
АО
2007/011968. В другом варианте реализации (Ъ) содержит линкерный фрагмент, описанный в \УО
2007/038658. В другом варианте реализации (Ъ) содержит линкерный фрагмент, описанный в \УО
2007/059404. В другом варианте реализации (Ъ) содержит линкерный фрагмент, описанный в \УО
2006/110476. В другом варианте реализации (Ъ) содержит линкерный фрагмент, описанный в \УО
2005/112919. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в \УО
2008/103693. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в ИЗ 6756037. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в ИЗ 7087229. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в ИЗ 7122189. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в ИЗ 7332164. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в ИЗ 5556623. В другом варианте реализации (Ь) содержит линкерный фрагмент, описанный в ИЗ 5643573. В другом варианте реализации (Ъ) содержит линкерный фрагмент, описанный в ИЗ 5665358.
Также могут быть использованы линкеры (Ь), содержащие саморасщепляющийся компонент (например, см. патент ИЗ 6214345. Примером саморасщепляющегося компонента является паминобензилкарбамоил (РАВС)).
В изобретении могут быть использованы линкеры, доступные из коммерческих источников. Например, может быть использован коммерчески доступный расщепляемый линкер сульфосукцинимидил6-[3'(2-пиридилдитио)-пропионамидо]гексаноат (сульфо-ЬС-ЗРОР: ТНегто Иегсе Са1# 21650) и нерасщепляемый линкер сукцинимидил-4-[Н-малеимидометил]циклогексан-1-карбоксилат (ЗМСС: ТНегто Р1егсе Са1# 22360), как показано в данном документе.
См. также XVО 2012171020, XVО 2010138719, перечень коммерчески доступных линкеров, например, из Соисогйк 1Шр://\у\у\у.сопсогЦ5.сот/1юте. См. также Кгт е! а1., ВЮСОШИОАТЕ СНЕМ^ТКУ. 21 (8): 1513-1519 ЛИО 2010. См. также ЕР 2326349. См. также лишенную меди клик-химию линкеров Апдете. С1ет. И. Е6., 2010, 49, р. 9422-9425, СНетВюСНет, 2011, 12, р. 1309-1312, Ир ://№№№. купаТйх. сот/1есНпо1оду/.
Фрагмент лекарственного средства (Ό).
(Ό) представляет собой соединение, имеющее структуру (I), (Ш) или (ГЬ), как описано в данном документе. Специалисту в данной области техники должно быть понятно, что соединения структуры (I), (Ш) или (ТЬ) могут быть соответствующим образом изменены, чтобы облегчить реакцию конъюгации с (Ъ) или, если (Ь) нет, с (Т), и образование конъюгата (Т)-(Ь)-(О) или (Т)-(О). Может быть использована любая точка присоединения на (Ό). В одном из вариантов реализации С-конец (Ό) образует точку присоединения в конъюгате (Т)-(Ь)-(О). В другом варианте реализации Ν-конец (Ό) образует точку присоединения в конъюгате (Т)-(Ъ)-(П). В другом варианте реализации боковая цепь (Ό) образует точку присоединения в конъюгате (Т)-(Ь)-(О).
Новые конъюгаты, содержащие пептидные токсины, разрушающие микротрубочки.
В одном из вариантов реализации настоящего описания предлагаются конъюгаты, содержащие пептидные токсины, разрушающие микротрубочки, ковалентно связанные с конъюгатом через боковую цепь Ν-терминальной аминокислоты. В одном из вариантов реализации пептидным токсином, разрушающим микротрубочки, является гемиастерлин или его аналог, и токсин ковалентно связан с конъюгатом через индольный фрагмент в боковой цепи Ν-терминальной аминокислоты пептидного токсина. В другом варианте реализации пептидным токсином, разрушающим микротрубочки, является КП-286 или его аналог, и токсин ковалентно связан с конъюгатом через фенильную группу в боковой цепи Ν-терминальной аминокислоты пептидного токсина. В одном из вариантов реализации пептидным токсином, разрушающим микротрубочки, является соединение, имеющее структуру (I), (Ш) или ОТЬ), как описано в данном документе.
Рассматриваемые композиции имеют антимитотическую активность и следующую структуру: (Т)-(Ь)-(РТ) (VII) где (Т) представляет собой нацеливающий фрагмент, как описано в данном документе, (Ь) представляет собой необязательный линкер, как описано в данном документе, и (РТ) представляет собой пептидный токсин, разрушающий микротрубочки, который ковалентно связан с (Ь) через боковую цепь Νтерминальной аминокислоты (РТ) или, если (Ъ) отсутствует, (РТ) ковалентно связан с (Т) через боковую цепь Ν-терминальной аминокислоты (РТ).
В одном из вариантов реализации (Т) представляет собой антитело. Соответственно в одном из вариантов реализации конъюгаты антитело-лекарственное средство (КАЛС) содержат пептидные токсины, разрушающие микротрубочки, которые присоединены к конъюгату через боковую цепь Ν-терминальной аминокислоты.
В одном из вариантов реализации (Т)-(Ь)-(РТ) имеет следующую структуру:
- 31 029818
где
К1 и К2 независимо выбраны из группы, состоящей из Н и насыщенного или ненасыщенного фрагмента, имеющего линейный, разветвленный или неароматический циклический скелет, содержащий от одного до десяти атомов углерода, и атомы углерода необязательно замещены -ОН, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -ΟΝ, -СО2Н, -СНО, -СО8Н или -ΝΟ2;
К3 и Кд независимо выбраны из группы, состоящей из Н, К, АгК-, или К3 и Кд связаны с образованием кольца;
К31 выбран из группы, состоящей из Н, К', АгК-, Аг-К-Аг, К-Аг-Аг, Аг-Аг-К- и Аг, где каждый К и каждый Аг может быть замещен, и от нуля до десяти гетероатомов могут заменять атомы углерода в цепи, например О, или 8, или N могут быть включены в углеродную цепь; в одном из вариантов реализации, где К' представляет собой ^оЬ т
где т представляет собой целое число от одного до пятнадцати;
К6 выбран из группы, состоящей из Н, К и АгК-;
К7 и К8 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, К и АгК-; и
К32 выбран из оо о о
II нН II н II о ννν*ζ—С—N—δ—К14 ννν>γ—С—N—5—К14
II II II
Ζ-С-ΥΛΛΛ- о ; ИЛИ О где
Ζ определяется как фрагмент, выбранный из группы, состоящей из -ОН, -ОК; -8Н; -8К; -ΝΗ2; ^КСН(КП)СООН; и -ЖСН(КП)СООН, где К11 представляет собой фрагмент, имеющий формулу К или -(СН2)ηNК12К13, где п=1-4, и К12 и К13 независимо выбраны из группы, состоящей из Н; К; и -^Ν^Ν^),
Υ определяется как фрагмент, выбранный из группы, состоящей из линейной, насыщенной или ненасыщенной, содержащей от одного до шести углеродов алкильной группы, необязательно замещенной К, АгК- или X; и,
X определяется как фрагмент, выбранный из группы, состоящей из -ОН, -ОК, =О, =8, -О2СК, -8Н, -8К, -8ОСК, -ΝΉ2, -ХНК, -Ν(Ε)2, ^НСОК, -Б1КСОК, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -€Ν, -СО2Н, -СО2К, -СНО, -СОК, -СОБТЩ, -СО^К, -СОВДКЬ -СО8Н, -СО8К, ^О2 -8О3Н, -8ОК и -8О2К;
К14 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила и необязательно замещенных гетероарилов, СОК24, -С8К24, -ОК24, и -ХНК24, , где каждый К24 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -8Н,
К определен как насыщенный или ненасыщенный фрагмент, имеющий линейный, разветвленный или неароматический циклический скелет, содержащий от одного до десяти атомов углерода, от нуля до четырех атомов азота, от нуля до четырех атомов кислорода и от нуля до четырех атомов серы и атомы углерода необязательно замещены =О, =8, ОН, -ОК10, -О2СК10, -8Н, -8К10, -8ОСК10, -Ν42, -ХНК10, -Ν(Ειο)2, -ХНСОКю, -ИКюСОКю, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -ΌΝ, -СО2Н, -СО2К10, -СНО, -СОКю, -СОБТЩ, -СО^КШ -СО^К10)2, -СО8Н, -СО8К10, ^О2, -8О3Н, -8ОК10, -8О2К10, где К10 является линейной, разветвленной или циклической, насыщенной или ненасыщенной алкильной группой, содержащей от нуля до десяти углеродов;
кольцо, образованное при соединении К3 и К4, имеет трех-семичленный неароматический циклический скелет в рамках определения К,
Υ определяется как фрагмент, выбранный из группы, состоящей из линейной, насыщенной или ненасыщенной, содержащей от одного до шести углеродов алкильной группы, необязательно замещенной К, АгК- или X; и
X определяется как фрагмент, выбранный из группы, состоящей из -ОН, -ОК, =О, =8, -О2СК, -8Н, -8К, -8ОСК, -ΝΉ2, -ХНК, -Ν(Ε)2, ^НСОК, -Б1КСОК, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -€Ν, -СО2Н, -СО2К, -СНО, -СОК, -СОБТЩ, -СО^К, -СОВДКЬ -СО8Н, -СО8К, ^О2 -8О3Н, -8ОК и -8О2К;
или их стереоизомер, пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль.
В одном из вариантов реализации Аг представляет собой ароматическое кольцо, выбранное из группы, состоящей из фенила, нафтила, антрацила, пирролила.
В одном из вариантов реализации К32 представляет собой
- 32 029818
Ζ—С Υ-ллл где Ζ и Υ являются такими, как определено выше.
В одном из вариантов реализации К32 представляет собой
где Ζ и К14 являются такими, как определено выше.
В одном из вариантов реализации К32 представляет собой
где у и К14 являются такими, как определено выше.
В другом варианте реализации (Т)-(Ь)-(РТ) имеет следующую структуру:
где
К15 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила и необязательно замещенного гетероарила;
К16 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
К17 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
К18 и К30 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С1-6 алкила и -ЗН, при условии, что и К18, и К30 заместители не могут быть Н;
К32 выбран из
где
Ζ определяется как фрагмент, выбранный из группы, состоящей из -ОН, -ОК; -ЗН; -ЗК; -ΝΗ2; -МКСН(К11)СООН; и -МНСН(К.ц)СООН, где К11 представляет собой фрагмент, имеющий формулу К или -(СН2)пМК12К13, где п=1-4, и К12 и К13 независимо выбраны из группы, состоящей из Н; К; и -С(NН)(NН2);
К определен как насыщенный или ненасыщенный фрагмент, имеющий линейный, разветвленный или неароматический циклический скелет, содержащий от одного до десяти атомов углерода, от нуля до четырех атомов азота, от нуля до четырех атомов кислорода и от нуля до четырех атомов серы, и атомы углерода необязательно замещены =О, =З, ОН, -ОК10, -О2СК10, -ЗН, -ЗК10, -ЗОСК10, -М1Н2, -МНК10, -Ν(Κ10)2, -МНСОК10, -МК10СОК10, -I, -Вг, -С1, -Р, -СМ, -СО2Н, -СО2К10, -СНО, -СОК10, -СОМН2, -СОМНК10, -ί.ΌΝ(Κ|0)2. -СОЗН, -СОЗК10, -МО2, -ЗО3Н, -ЗОК10, -ЗО2К10, где К10 является линейной, разветвленной или циклической, насыщенной или ненасыщенной алкильной группой, содержащей от нуля до десяти углеродов;
кольцо, образованное при соединении К3 и К4, имеет трех-семичленный неароматический циклический скелет в рамках определения К,
Υ определяется как фрагмент, выбранный из группы, состоящей из линейной, насыщенной или ненасыщенной, содержащей от одного до шести углеродов алкильной группы, необязательно замещенной К, АгК- или X; и
X определяется как фрагмент, выбранный из группы, состоящей из -ОН, -ОК, =О, =З, -О2СК, -ЗН, -ЗК, -ЗОСК, -МЩ, -МНК, -М(К)2, -МНСОК, -МКСОК, -I, -Вг, -С1, -Р, -€Ν, -СО2Н, -СО2К, -СНО, -СОК, -СОМ11, -СОМНК, -СОМ(К)2, -СОЗН, -СОЗК, -МО2, -ЗО3Н, -ЗОК и -ЗО2К;
или их стереоизомер, пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль.
В другом варианте реализации (Т)-(Ь)-(РТ) имеет следующую структуру:
где
К15 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необяза- 33 029818 тельно замещенного гетероциклила и необязательно замещенного гетероарила;
К16 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
К17 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
К18 и К30 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С1-6 алкила и -8Н, при условии, что и К18, и К30 заместители не могут быть Н;
К33 представляет собой
где
Ζ является таким, как определено выше,
К определен как насыщенный или ненасыщенный фрагмент, имеющий линейный, разветвленный или неароматический циклический скелет, содержащий от одного до десяти атомов углерода, от нуля до четырех атомов азота, от нуля до четырех атомов кислорода и от нуля до четырех атомов серы, и атомы углерода необязательно замещены =О, =8, ОН, -ОК10, -О2СК10, -8Н, -8К10, -8ОСК10, -ΝΗ2, -ΝΗΚ10, -Ν(Κ1ο)2, -ХНСОКю, -НКюСОКЮ, -I, -Вг, -С1, -Р, -ΟΝ, -СО2Н, -СО2К1О, -СНО, -СОКШ -СОМ I, -СОХИКю, -СО^К10)2, -СО8Н, -СО8К10, -ЫО2, -8О3Н, -8ОК10, -8О2К10, где К10 является линейной, разветвленной или циклической, насыщенной или ненасыщенной алкильной группой, содержащей от нуля до десяти углеродов;
кольцо, образованное при соединении К3 и К4, имеет трех-семичленный неароматический циклический скелет в рамках определения К,
Υ определяется как фрагмент, выбранный из группы, состоящей из линейной, насыщенной или ненасыщенной, содержащей от одного до шести углеродов алкильной группы, необязательно замещенной К, АгК- или X; и,
X определяется как фрагмент, выбранный из группы, состоящей из -ОН, -ОК, =О, =8, -О2СК, -8Н, -8К, -8ОСК, -ΝΉ2, -ΝΉΚ, -Ν(Κ)2, АНСОК, АКСОН, -I, -Вг, -С1, -Р, -€Ν, -СО2Н, -СО2К, -СНО, -СОК, -СОХ1Н2, -^Ν^, -СОВДКЬ -СО8Н, -СО8К, АО2 -8О3Н, -8ОК и -8О2К;
или их стереоизомер, пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль.
В другом варианте реализации (Т)-(Ь)-(РТ) имеет следующую структуру:
где
К14 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила, необязательно замещенного гетероарила, -СОК24, -С8К24, -ОК24, -8К24 и -ННК24, где каждый К24 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -8Н;
К15 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила и необязательно замещенного гетероарила;
К16 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
К17 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
К18 и К30 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С1-6 алкила и -8Н, при условии, что и К18, и К30 заместители не могут быть Н;
или их стереоизомер, пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль.
В другом варианте реализации (Т)-(Ь)-(РТ) имеет следующую структуру:
где
К14 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила, необязательно замещенного гетероарила, -СОК24, -С8К24, -ОК24, -8К24 и -ННК24, где каждый К24 представляет собой независимо алкил, необязательно замещенный галогеном, -ОН или -8Н;
К15 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необяза- 34 029818 тельно замещенного гетероциклила и необязательно замещенного гетероарила;
К16 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
К17 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
К18 и К30 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С1-6 алкила и -8Н, при условии, что и К18, и К30 заместители не могут быть Н;
или их стереоизомер, пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль.
В другом варианте реализации (Т)-(Ь)-(РТ) имеет следующую структуру:
где
К15 выбран из группы, состоящей из необязательно замещенного алкила, необязательно замещенного алкиламино, необязательно замещенного циклоалкила, необязательно замещенного арила, необязательно замещенного гетероциклила и необязательно замещенного гетероарила;
или их стереоизомер, пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль.
В другом варианте реализации (Т)-(Ь)-(РТ) имеет следующую структуру:
где
К определен как насыщенный или ненасыщенный фрагмент, имеющий линейный, разветвленный или неароматический циклический скелет, содержащий от одного до десяти атомов углерода, от нуля до четырех атомов азота, от нуля до четырех атомов кислорода и от нуля до четырех атомов серы, и атомы углерода необязательно замещены =О, =8, ОН, -ОК10, -О2СК10, -8Н, -8К10, -8ОСК10, -ΝΗ2, -ΝΗΚ10, -Ν(Κ1ο)2, -МНСОКю, -ИКюСОКю, -I, -Вг, -С1, -Р, -СМ -СО2Н, -СО2К10, -СНО, -СОК10, <0ΝΗ, -СОМНКю, -ί'.ΌΝ(Ρι0)2. -СО8Н, -СО8К10, -МО2, -8О3Н, -8ОК10, -8О2К10, где К10 представляет собой линейную, разветвленную или циклическую, с одиним - десятью углеродами, насыщенную или ненасыщенную алкильную группу, или их стереоизомер, пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль.
В другом варианте реализации (Т)-(Ь)-(РТ) имеет следующую структуру:
где
К определен как насыщенный или ненасыщенный фрагмент, имеющий линейный, разветвленный или неароматический циклический скелет, содержащий от одного до десяти атомов углерода, от нуля до четырех атомов азота, от нуля до четырех атомов кислорода и от нуля до четырех атомов серы, и атомы углерода необязательно замещены =О, =8, ОН, -ОК10, -О2СК10, -8Н, -8К10, -ЗОСК10, -ЫН2, -МНК10, -Ν(Κ1ο)2, -МНСОКю, -МТКюСОКю, -I, -Вг, -С1, -Р, -СМ -СО2Н, -СО2К1О, -СНО, -СОКю, -СОМН -СОМИКю, -СОМ(К10)2, -СО8Н, -СО8К10, -МО2, -8О3Н, -8ОК10, -8О2К10, где К10 представляет собой линейную, разветвленную или циклическую, с одиним-десятью углеродами, насыщенную или ненасыщенную алкильную группу, или их стереоизомер, пролекарственная форма или фармацевтически приемлемая соль.
В дополнительном варианте реализации изобретения (РТ) представляет собой аналог гемистерлина, такой как описано в И8 7579323, который включен в данный документ посредством ссылки во всей его полноте для всех целей.
При синтезе конъюгатов, в том числе КАЛС, содержащих пептидные токсины, разрушающие микротрубочки, пептидная связь через боковую цепь Ν-терминальной аминокислоты имеет несколько преимуществ. Как показано в данном документе, боковые цепи таких пептидных токсинов ответственны за химические модификации и манипуляции, которые облегчают образование ковалентно связанных конъюгатов без ущерба активности. Как показано в данном документе, такие конъюгаты являются сильнодействующими цитотоксическими композициями, способными доставлять присутствующий в них пептидный токсин.
Введение
Для целей введения соединения настоящего описания могут быть введены в виде необработанного химического вещества или могут быть сформулированы в фармацевтические композиции. Фармацевтические композиции настоящего описания содержат соединение структуры (I), (1а) или (1Ь) и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель. Соединение структуры (I), (1а) или (1Ь) присутствует в композиции в количестве, которое является эффективным для лечения конкретного интере- 35 029818 сующего заболевания или состояния, например в количестве, достаточном для лечения рака или роста опухолевых клеток, и предпочтительно с приемлемой токсичностью по отношению к пациенту. Активность соединений структуры (I), (1а) или (1Ь) может быть определена специалистом в данной области, например, как описано в приведенных ниже примерах. Соответствующие концентрации и дозы могут быть легко определены специалистом в данной области техники.
Введение соединений описания или их фармацевтически приемлемых солей в чистом виде или в виде соответствующей фармацевтической композиции может быть осуществлено с помощью любых приемлемых способов введения агентов, служащих подобным целям. Фармацевтические композиции описания могут быть получены путем объединения соединения описания с соответствующим фармацевтически приемлемым носителем, разбавителем или наполнителем и могут быть сформулированы в рецептуры в твердой, полутвердой, жидкой или газообразной формах, такие как таблетки, капсулы, порошки, гранулы, мази, растворы, суппозитории, инъекции, ингаляции, гели, микросферы и аэрозоли. Типичные пути введения таких фармацевтических композиций включают, без ограничения, пероральный, местный, трансдермальный, ингаляционный, парентеральный, трансбуккальный, сублингвальный, вагинальный, ректальный и интраназальный. Термин парентеральный, как используется в данном документе, включает подкожные инъекции, внутривенные, внутримышечные, внутригрудинные инъекции или инфузии. Фармацевтические композиции описания сформулированы так, чтобы позволить активным ингредиентам, содержащимся в них, быть биологически доступными при введении композиции пациенту. Композиции, которые будут вводить субъекту или пациенту, принимают форму одной или более дозированных единиц, где, например, таблетка может быть разовой дозы, а контейнер, содержащий соединения в форме аэрозоля, может содержать множество дозированных единиц. Современные способы получения таких лекарственных форм известны или будут очевидны для специалистов в данной области техники; например, см. КепипДоп: ТЬе 8с1епсе апй Ргасйсе оГ РЬагтасу, 201Ь ЕйШоп (РЫ1айе1рЫа Со11еде оГ РЬагтасу апй ЗШепсе, 2000). Композиция для введения будет в любом случае содержать терапевтически эффективное количество соединения описания или его фармацевтически приемлемую соль для лечения интересующего заболевания или состояния в соответствии с наставлениями этого описания.
Фармацевтическая композиция описания может быть в твердой или жидкой форме. В одном из аспектов носитель(и) является частицей, так что композиции имеют, например, форму таблеток или порошка. Носитель(и) может быть жидким с композициями, например, являющимися пероральным сиропом, жидкостью для инъекций или аэрозолем, который полезен при, например, ингаляционном введении.
Когда предназначены для перорального введения, фармацевтические композиции настоящего описания, как правило, являются либо твердыми, либо жидкими, где полутвердые, полужидкие суспензии и гели включены в рамки форм, рассматриваемых в данном документе как твердые или жидкие.
В качестве твердой композиции для перорального введения фармацевтические композиции могут быть приготовлены в виде порошка, гранул, прессованных таблеток, пилюль, капсул, жевательной резинки, облатки и тому подобное. Такие твердые композиция, как правило, содержат один или более инертных разбавителей или съедобных носителей. В дополнение, может присутствовать один или более из следующих: связующие, такие как карбоксиметилцеллюлоза, этилцеллюлоза, микрокристаллическая целлюлоза, трагакантовая камедь или желатин; наполнители, такие как крахмал, лактоза или декстрины, дезинтегранты, такие как альгиновая кислота, альгинат натрия, примогель, кукурузный крахмал и тому подобное; смазочные материалы, такие как стеарат магния или стеротекс; глиданты, такие как коллоидный диоксид кремния; подсластители, такие как сахароза или сахарин; ароматизаторы, такие как мята перечная, метилсалицилат или апельсиновый ароматизатор; и краситель.
Когда фармацевтическая композиция находится в форме капсулы, например желатиновой капсулы, она может содержать в дополнение к материалам, указанным выше, жидкий носитель, такой как полиэтиленгликоль или масло.
Фармацевтические композиции описания могут быть в форме жидкости, например эликсир, сироп, раствор, эмульсия или суспензия. В виде двух примеров жидкость может быть для перорального введения или для доставки путем инъекции. Когда предназначены для перорального введения, фармацевтические композиции описания, как правило, в дополнение к представленным соединениям обычно содержат один или более подсластителей, консервантов, краситель/пигментов и усилителей вкуса. В композицию, предназначенную для введения путем инъекции, может быть включено одно или более поверхностноактивных веществ, консервантов, смачивающих агентов, диспергирующих агентов, суспендирующих агентов, буферов, стабилизаторов и изотонических агентов.
Жидкие фармацевтические композиции описания, будь то растворы, суспензии или другие подобные формы, могут включать один или более из следующих адъювантов: стерильные разбавители, такие как вода для инъекций, физиологический раствор, предпочтительно физиологический раствор, раствор Рингера, изотонический хлорид натрия, жирные масла, такие как синтетические моно- или диглицериды, которые могут служить в качестве растворителя или суспендирующей среды, полиэтиленгликоли, глицерин, пропиленгликоль или другие растворители; антибактериальные агенты, такие как бензиловый спирт или метилпарабен; антиоксиданты, такие как аскорбиновая кислота или бисульфит натрия; хелатирующие агенты, такие как этилендиаминтетрауксусная кислота; буферы, такие как ацетаты, цитраты или
- 36 029818 фосфаты, и агенты для регулирования тоничности, такие как хлорид натрия или декстроза. Парентеральные рецептуры могут быть заключены в ампулы, одноразовые шприцы или пузырьки, содержащие множество доз, изготовленные из стекла или пластика. Физиологический раствор является предпочтительным адъювантом. Фармацевтическая композиция для инъекций предпочтительно стерильна.
Жидкая фармацевтическая композиция описания, предназначенная либо для парентерального введения, либо для перорального введения, должна содержать такое количество соединения описания, что бы получалась подходящая доза.
Фармацевтические композиции описания могут быть предназначены для местного введения, в этом случае носитель может соответственно включать раствор, эмульсию, мазь или гелевую основу. Основа, например, может включать один или более из следующих: вазелин, ланолин, полиэтиленгликоль, пчелиный воск, минеральное масло, разбавители, такие как вода и спирт, и эмульгаторы и стабилизаторы. В фармацевтической композиции для местного применения могут присутствовать загустители. Если предназначена для трансдермального введения, композиция может содержать трансдермальный пластырь или устройство для ионтофореза.
Фармацевтические композиции описания могут быть предназначены для ректального введения, в виде, например, суппозитория, который будет плавиться в прямой кишке и высвобождать лекарственное средство. Композиции для ректального введения могут содержать масляную основу в качестве подходящего нераздражающего наполнителя. Такие основания включают, без ограничения, ланолин, масло какао и полиэтиленгликоль.
Фармацевтические композиции описания могут содержать различные материалы, которые модифицируют физическую форму твердой или жидкой дозированной единицы. Например, композиция может содержать материалы, которые образуют покрывающую оболочку вокруг активных ингредиентов. Материалы, которые образуют покрывающую оболочку, обычно инертны и могут быть выбраны из, например, сахара, шеллака и других кишечных покрывающих агентов. Альтернативно, активные ингредиенты могут быть заключены в желатиновую капсулу.
Фармацевтические композиции описания могут быть получены в форме дозированных единиц, которые могут быть введены в виде аэрозоля. Термин аэрозоль используют для обозначения различных систем, начиная с тех, которые являются коллоидными по природе, до систем, состоящих из герметичных упаковок. Доставка может быть осуществлена сжиженным или сжатым газом или с помощью пригодного насоса, который распределяет активные ингредиенты. Аэрозоли соединений описания могут быть доставлены в виде однофазной, бифазной или трифазной системы для того, чтобы доставить активный ингредиент(ы). Доставка аэрозоля включает в себя необходимые контейнер, активаторы, клапаны, субконтейнеры и тому подобное, которые вместе могут образовывать набор. Специалист в данной области техники без лишних экспериментов может определить предпочтительные аэрозоли.
Фармацевтические композиции описания могут быть получены в соответствии с методологией, хорошо известной в фармацевтической области. Например, фармацевтическая композиция, предназначенная для введения путем инъекции, может быть получена путем объединения соединения описания со стерильной дистиллированной водой с образованием раствора. Может быть добавлено поверхностноактивное вещество, чтобы облегчить образование гомогенного раствора или суспензии. Поверхностноактивными веществами являются соединения, которые не взаимодействуют ковалентно с соединением описания и облегчают растворение или гомогенизирование суспензии соединения в водной системе доставки.
Соединения описания или их фармацевтически приемлемые соли вводят в терапевтически эффективном количестве, которое будет варьироваться в зависимости от целого ряда факторов, включая активность конкретного используемого соединения; метаболическую стабильность и длительность действия соединения; возраст, вес тела, общее состояние здоровья, пол и диета пациента; режим и время введения; скорость выведения; сочетание лекарственных средств; тяжесть конкретного состояния или расстройства и субъекта, подвергаемого лечению.
Соединения описания или их фармацевтически приемлемые производные могут быть также введены одновременно с, до или после введения одного или более других терапевтических агентов. Такое комбинированное лечение включает введение одной фармацевтической дозированной рецептуры, которая содержит соединение описания и один или более дополнительных активных агентов, а также введение соединения описания и каждого активного агента в его собственной отдельной фармацевтической дозированной рецептуре. Например, соединение описания и другой активный агент могут быть введены пациенту вместе в одной пероральной дозированной композиции, такой как таблетка или капсула, или каждый агент вводят в отдельных пероральных дозированных рецептурах. При использовании раздельных дозированных рецептур соединения описания и один или более дополнительных активных агентов могут быть введены, по существу, в то же самое время, то есть одновременно, или в разные периоды времени, то есть последовательно; комбинированное лечение подразумевает все эти схемы.
Понятно, что в настоящем описании допустимы комбинации заместителей и/или переменных, изображенных формулами, только если такие вклады приводят к получению стабильных соединений.
Кроме того, должно быть понятно специалистам в данной области техники, что в процессах синте- 37 029818 за, описанных в данном документе, функциональные группы промежуточных соединений могут требовать защиты с помощью соответствующих защитных групп. Такие функциональные группы включают гидрокси, амино, меркапто и карбоксильную группу. Как описано выше, пригодные защитные группы для гидрокси включают триалкилсилил или диарилалкилсилил (например, т-бутилдиметилсилил, тбутилдифенилсилил или триметилсилил), тетрагидропиранил, бензил и тому подобное, и пригодные защитные группы для амино, амидино и гуанидино включают т-бутоксикарбонил, бензилоксикарбонил и тому подобное. Пригодные защитные группы для меркапто включают -С(0)-К (где К представляет собой алкил, арил или арилалкил), η-метоксибензил, тритил и тому подобное. Пригодные защитные группы для карбоксильной группы включают алкиловый, ариловый или арилалкиловые эфиры. Защитные группы могут вводиться или удаляться в соответствии со стандартными методиками, которые известны специалисту в данной области техники и описаны в данном документе. Применение защитных групп детально описано в Огееп Т.А. и Р.С.М. Α'ϊιΙζ, Ρτοΐβοΐίνβ Огоирз ΐη 0гдашс 8упШез1з (1999), 3гб Εά., АЧ1еу. Как должно быть понятно специалисту в данной области техники, защитная группа также может быть полимерной смолой, такой как смола Ванга, смола Ринка или 2-хлортритил-хлоридная смола.
Также будет понятно специалистам в данной области техники, хотя защищенные производные соединений данного описания могут не обладать фармакологической активностью как таковые, они могут быть введены млекопитающему и затем метаболизировать в организме с образованием соединений описания, которые являются фармакологически активными. Поэтому такие производные могут быть описаны как пролекарственные формы. Все пролекарственные формы соединений данного описания включены в рамки настоящего описания.
Кроме того, соединения описания, которые существуют в форме свободного основания или кислоты, могут быть превращены в их фармацевтически приемлемые соли путем обработки соответствующей неорганической или органической кислотой или основанием с помощью способов, известных специалистам в данной области техники. Соли соединений описания могут быть превращены в их свободное основание или кислоту с помощью стандартных методик.
Следующие примеры иллюстрируют различные способы получения соединений настоящего описания, то есть соединений структур (I), (Ы), (ГЪ), (VI) и (VII). Понятно, что специалист в данной области может быть в состоянии получить эти соединения аналогичными способами или путем объединения других способов, известных специалистам в данной области техники. Следует также понимать, что специалист в данной области техники может получить таким же образом, как описано ниже, другие соединения структуры (I), (Ш), (Ш), (VI) или (VII), специально не показанные ниже, с помощью соответствующих исходных компонентов и изменения параметров синтеза, если необходимо. В общем, исходные компоненты могут быть получены из источников, таких как 8ίρηκι ЛЫпсН, 1.апсаз1ег 8упШез1з, ^с., МауЪпбде, Майлх 8с1епЕЕс, ТС и Р1иогосНеш и8А, и т.д., или синтезировать в соответствии с источниками, известными специалистам в данной области техники (см., например, А^апсеб 0гдашс СНеш1зЕу: Кеасбопз, МесНашзшз, апб 81гпс1иге, 5Пл ебШоп (АПеу, ОесешЪег 2000)), или получить, как описано в данном документе.
Следующие примеры приведены с целью иллюстрации, но не ограничения.
Примеры
Общие схемы синтеза.
Общая схема
- 38 029818
Общая методика 1. Введение трифторацетамида.
К перемешиваемой суспензии амина в 1,4-диоксане добавляли трифторуксусный ангидрид (1,1 экв.). Реакционная смесь превращалась из суспензии в раствор и снова становилась суспензией. Протекание реакции контролировали с помощью ТСХ и/или ВЭЖХ-МС до завершения. После полного использования исходного материала реакцию разводили гексанами или диэтиловым эфиром, фильтровали на воронке Бюхнера, и полученные твердые вещества сушили при пониженном давлении, получая чистый трифторацетамид.
Общая методика 2. Получение ОСС/ОМАР, опосредованное Ν-ацилсульфонамидом.
К перемешиваемому раствору кислоты в дихлорметане добавляли раствор сульфонамид (1,3 экв., в дихлорметане, Ν,Ν-диметилформамиде или их смеси, если необходимо). Добавляли дициклогексилкарбодиимид (1,2 экв.) и затем Ν,Ν-диметиламинопиридин (1,2 экв.). Протекание реакции контролировали с помощью ВЭЖХ-МС (обычно 16 ч), и избыток побочных продуктов может быть осажден добавлением диэтилового эфира. Твердые вещества удаляли фильтрованием и промывали 1:1 диэтиловый эфир/дихлорметан. Объединенные органические слои концентрировали, и остаток очищали хроматографией на силикагеле или, необязательно, преп-ВЭЖХ, получая желаемый Ν-ацилсульфонамид.
Общая методика 3. Общее омыление.
К раствору трифторацетамида или эфира, содержащему конструкт в 1,4-диоксане или метаноле, добавляли гидроксид лития (10 экв.) и воду (10% об./об.). Реакцию оставляли перемешиваться при комнатной температуре или необязательно нагревали при 50°С. Протекание реакции контролировали с помощью ВЭЖХ-МС. После завершения летучие вещества удаляли при пониженном давлении, если необходимо, корректировали рН водного слоя и промывали последовательно дихлорметаном или этилацетатом. Органические фазы объединяли, сушили над Мд§О4, фильтровали и концентрировали. Продукт реакции использовали или как есть, или очищали хроматографией на силикагеле, если необходимо.
Общая методика 4. Опосредованное НАТИ образование пептидной связи.
К перемешиваемому раствору карбоновой кислоты в минимальном количестве дихлорметана или Ν,Ν-диметилформамида или их смеси при 0°С добавляли НАТИ (эквивалентов) и Ν,Νдиизопропилэтиламин (4 экв.). Перемешивание продолжали на протяжении непродолжительного периода времени (5-20 мин), после чего реакцию промывали раствором амином в дихлорметане. Реакцию оставляли нагреваться до комнатной температуры, и протекание реакции контролировали с помощью ВЭЖХ-МС. После завершения летучие вещества удаляли при пониженном давлении, и оставшийся материал очищали хроматографией на силикагеле или ВЭЖХ с обратной фазой с получением амида с адекватной чистотой.
Общая методика 7. Удаление Вос группы.
- 39 029818
К раствору Вос-защищенного конструкта в дихлорметане добавляли 10% об./об. трифторуксусную кислоту. Протекание реакции контролировали с помощью ВЭЖХ-МС. После завершения все летучие вещества удаляли при пониженном давлении. Оставшийся материал очищали или ВЭЖХ с обратной фазой, хроматографией на силикагеле или осаждением из смеси холодного метанол/дихлорметан/диэтиловый эфир.
Общая методика 8. Катализрованная Ρά реакция конденсации Сузуки.
Суспензию арилбромида, арил (или алкенил) бороновой кислоты (1,5 экв.), Рй(ОАс)2 (10 мол.%), 2(ди-трет-бутилфосфино)бифенил (20 мол.%) и К3РО4 (3 экв.) в ТГФ перемешивали под Ν2 при комнатной температуре 16 ч (или 50°С на протяжении 2 ч). Полученную коричневую реакционную смесь разводили эфиром и промывали 1М NаОΗ (3х). Водные промывные растворы объединяли и экстрагировали эфиром (2х). Органические растворы объединяли, сушили над М^О4, фильтровали, концентрировали в вакууме и очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюировали смесями МеОΗ/СΗ2С12), получая конденсированный продукт.
Общая методика 9. Катализированная Си реакция конденсации Улльмана (введение метокси).
Смесь арилбромида, СиВг (20 мол.%), №ЮМе (20 экв., 4,9М в МеОН) и ЕЮАс (1,5 экв.) перемешивали под Ν2 при 95°С на протяжении 16 ч. Полученную смесь разводили Н2О и выливали в холодную (0°С) перемешиваемую 1М лимонную кислоту. После перемешивания 10 мин смесь экстрагировали ЕЮАс (4х). Органические растворы объединяли, промывали Н2О (2х) и насыщенным раствором хлорида натрия (1х), сушили над М^О4, фильтровали и концентрировали в вакууме. Продукт использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Общая методика 10. Синтез винилогического аминоэфира.
Методика для синтеза амида Вейнреба, восстановления и его последующего олефинирования, как описано №ешаи 1. А. е1 а1. 1. Ναι. Ρτοά. 2003, 66, 183-199, была использована по отношению к желаемым коммерчески доступным аминокислотам без модификаций.
Общая методика 11. Получение Вос-т-лейцин-(Ме)-винилогической аминокислоты.
С винилогических аминоэфиров снимали защиту и конденсировали с Вос-т-лейцином согласно методикам, описанным №ешаи ТА. е1 а1. 1. Ναι. Ρτοά. 2003, 66, 183-199 без модификаций.
Общая методика 12. Получение сульфонамида из алкилгалоида.
К суспензии желаемого алкилгалоида в 2:1 Η2О/ЕЮΗ добавляли сульфит натрия (1,2 экв.). Полученную смесь нагревали с обратным холодильником 6-24 ч. Реакцию затем охлаждали до комнатной температуры, растворители удаляли при пониженном давлении до удаления этанола, и продукт осаждали. Алкилсульфонат натрия фильтровали, собирали и сушили в вакууме. Эти твердые вещества затем суспендировали в дихлорметане и добавляли пентахлорид фосфора (2 экв.) при перемешивании. Полученную суспензию нагревали с обратным холодильником 2 ч и оставляли охлаждаться до комнатной температуры. Реакции затем охлаждали до 0°С и по капле добавляли воду для разложения избытка пентахлорида фосфора. Смесь переносили в разделительную воронку, и органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над М^О4, фильтровали и концентрировали, получая желаемый сульфонилхлорид. Таким образом, модифицированный хлорид затем растворяли в ТГФ и по капле прибавляли к перемешиваемому водному раствору концентрированного гидроксида аммония при 0°С. После завершения добавления реакцию концентрировали при пониженном давлении и разводили водой и этилацетатом.
Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над М^О4, фильтровали и концентрировали, получая желаемый сульфонамид с достаточной чистотой для дальнейшего использования.
Общая методика 13. Получение сульфонамида из замещенных арилом соединений.
К перемешиваемой смеси желаемого арилзамещенного соединения в хлороформе добавляли хлорсульфоновую кислоту (4 экв.). Реакцию нагревали 70°С на протяжении 1 ч и оставляли охлаждаться до комнатной температуры. Добавляли тионилхлорид (2 экв.), и реакцию снова нагревали до 70°С на протяжении 1 ч. Содержимое реакционного сосуда концентрировали при пониженном давлении, получая масло, которое далее дважды растворяли в толуоле и концентрировали при пониженном давлении для удаления оставшейся кислоты. Оставшийся материал растворяли в ТГФ и добавляли по капле к концентрированному перемешиваемому раствору гидроксида аммония при 0°С. После завершения добавления реакцию концентрировали при пониженном давлении, и остаток разделяли между этилацетатом и водой. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над М^О4, фильтровали и концентрировали, получая желаемый фенилсульфонамид с адекватной чистотой для дальнейшего использования.
Общая методика 14. Получение сульфамамида.
Для получения желаемых сульфамамидов были адаптированы методики из νίηιιιη Т-У. е1 а1., Огд Ье«, 2001, 3(14), 2241-2243.
Общая методика 15. Получение МС-УС-РАВС-токсинов.
Пригодный промежуточный амин или анилин переносили в ДМФ (~90 мг/мл) и к нему добавляли
- 40 029818 гидрат 1-гидроксибензотриазола (0,3 экв.), затем полученный из коммерческого источника МС-УСРАВС-ΡΝΡ (4-((К)-2-((К)-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексанамидо)-3-метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензил 4-нитрофенилкарбонат) (1,3 экв.), как описано в РпеЧопе, е1 а1. И86214345, после чего добавляли пиридин (25 экв.). Реакцию накрывали для защиты от света и перемешивали при комнатной температуре от 24 до 48 ч. Реакционную смесь можно очистить путем концентрирования смеси и проведения флеш-хроматографии непосредственно неочищенного вещества, или альтернативно, оно может быть разведено в ДМСО до приемлемого объема и впрыснуто непосредственно в препаративную ВЭЖХ с получением чистого МС-УС-РАВС-К конструкта.
Все сульфонамиды и сульфамамиды или предшественники материалов, используемых в приведенных ниже методиках, получали из коммерческих источников и обрабатывали, если необходимо, так что они были пригодны к использованию. В особенности общие методики 1, 12, 13 и 14 использовали для обработки коммерчески доступных исходных материалов, если ниже не указано иное. Сульфамамидные аналоги Ν-ацилсульфонамида, содержащие соединения, описанные в данном документе, могут быть синтезированы средним специалистом в данной области, базируясь на руководствах, приведенных в данном документе и известных в данной области техники, и они включены в рамки изобретения.
Показательные соединения
Пример 1. 3-Бромпропан-1-сульфонамид
К перемешиваемой суспензии бромида калия (1,904 г) в воде (2,8 мл) добавляли 1,3пропансульфон. Реакцию нагревали 60°С при перемешивании на протяжении 1 ч и оставляли охлаждаться до комнатной температуры. При перемешивании добавляли этанол (~45 мл), и образовывался осадок. Суспензию фильтровали на воронке Бюхнера, и твердые вещества собирали и сушили в высоком вакууме на протяжении ночи, получая 3-бромпропан-1-сульфонат калия (2,90 г, 12,0 ммоль) как твердое вещество белого цвета.
Упомянутое выше твердое вещество добавляли в круглодонную колбу, оснащенную магнитной мешалкой. Одной порцией добавляли пентахлорид фосфора (3,22 г, 1,3 экв.), и колбу осторожно встряхивали для смешивания твердых веществ. Наблюдали образование газа, и твердые вещества слегка расплавлялись. К смеси добавляли одну каплю воды и наблюдали интенсивное выделение газа с более значительным расплавлением реакционной смеси. Колбу погружали в масляную баню при 70°С, и на расплавленную смесь воздействовали, пытаясь сделать ее по возможности однородной. Через 10 мин нагревания колбу оставляли охлаждаться до комнатной температуры, и загружали лед (~60 мл) и диэтиловый эфир (~80 мл) и интенсивно перемешивали. Бифазную смесь переносили в разделительную воронку, органический слой промывали насыщенным раствором хлорида натрия, затем сушили над М§8О4, фильтровали и концентрировали до общего объема ~25 мл. Эфирный слой добавляли в 100 мл круглодонную колбу, добавляли магнитную мешалку, и колбу охлаждали до 0°С на ледяной бане. Добавляли аммиак (МН4ОН, 28% вод., 5 мл) при интенсивном перемешивании, и образовывалась эмульсия. После оседания эмульсии добавляли насыщенный раствор хлорида натрия (~20 мл) и диэтиловый эфир (~20 мл), и смесь переносили в разделительную воронку. Органическую фазу отделяли, сушили над Мд8О4 и концентрировали, получая указанное в заголовке соединение как малоподвижный сироп, который твердел при стоянии (0,782 г).
'II ЯМР (400 МГц, ДМСО-66) δ (млн. ч.)=2,24 (п, 2Н, 1=6,5 Гц), 3,12 (т, 2Н, 1=6,5 Гц), 3,66 (т, 2Н, 1=6,5 Гц), 6,91 (с, 2Н).
Пример 2. 3-(Тритилтио)пропан-1-сульфонамид
К перемешиваемому раствору трифенилметантиола (0,276 г) в Ν,Ν-диметилформамиде при 0°С добавляли гидрид натрия (0,04 г, 1 экв.). После завершения бурного вспенивания одной порцией добавляли твердый 3-бромпропан-1-сульфонамид (0,100 г, 0,5 экв.), и реакцию оставляли нагреваться до комнатной температуры. Протекание реакции контролировали с помощью ВЭЖХ-МС и ТСХ (40% ЕЮАс в гексанах). Через 2 ч реакцию гасили водой (~0,5 мл) и концентрировали на роторном испарителе в высоком вакууме. Полученное масло разделяли между этилацетатом и насыщенным раствором хлорида натрия, переносили в разделительную воронку, и органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над М§8О4, концентрировали и очищали с помощью флеш-хроматографии (5-50% ЕЮАс в гексанах), получая указанное в заголовке соединение (0,135 г) как кристаллическое вещество белого цвета.
'II ЯМР (400 МГц, СЭзОЭ) δ (млн. ч.)=1,77-1,85 (м, 2Н), 2,35 (т, 2Н, 1=6,5 Гц), 2,95-2,99 (т, 2Н, 1=6,5 Гц), 7,22-7,33 (м, 9Н), 7,40-7,45 (м, 6Н).
- 41 029818
Пример 3. (68, 98, 128, Е)-9-трет-бутил-12-изопропил-2,2,5,11,14-пентаметил-4,7,10-триоксо-6-(2фенилпропан-2-ил)-3-окса-5,8,11-триазапентадец-13-ен-15-овая кислота
Синтезировали согласно №етап ГА. е1 а1. 1. Ναι. Ргоб. 2003, 66, 183-199.
Пример 4. (8,Е)-N-(3-Меркаптопропилсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-N,3,3-триметил-2-((8)-3метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид (соединение А)
Пример 4 синтезировали из примеров 2 и 3 согласно общим методикам 2 и 7 с добавлением триизопропилсилана (2 экв.) к методике 9.
1Н ЯМР (400 МГц, СИзОИ) δ (млн. ч.)=0,88 (3Н, д, 1=6,2 Гц), 0,94 (3Н, д, 1=6,2 Гц), 1,08 (с, 9Н), 1,40 (с, 3Н), 1,48 (с, 3Н), 1,94 (д, 3Н, 1=1,29 Гц), 2,03-2,16 (м, 3Н), 2,41 (с, 3Н), 2,67 (т, 2Н, 1=9,76 Гц), 3,16 (с, 3Н), 3,46-3,50 (м, 2Н), 4,08 (ш с, 1Н), 4,94 (с, 1Н), 5,07 (т, 1Н, 1=10,0 Гц), 6,59 (д, 1Н, 1=9,5 Гц), 7,32-7,37 (м, 1Н), 7,41-7,48 (м, 2Н), 7,50-7,57 (м, 2Н).
Способы, описанные выше, были использованы для получения следующих аналогичных соединений.
Пример 5. 2,2'-Дисульфандиилдиэтансульфонамид
Синтезировали, как описано Ьетапе Н. апб К1едег М. в 1. Огд. Сйет., 1961, 1330-1331.
Пример 6. (8,Е)-N-(2-Меркапτоэτилсульфонил)-2,5-димеτил-4-((8)-N,3,3-τримеτил-2-((8)-3-меτил-2(метиламино)3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид (соединение В)
К раствору (68,98,128,Е)-9-трет-бутил-12-изопропил-2,2,5,11,14-пентаметил-4,7,10-триоксо-6-(2фенилпропан-2-ил)-3-окса-5,8,11-триазапентадец-13 -ен-15-овой кислоты (0,138 г, 2,4 экв.) в дихлорметане (4 мл) добавляли 2,2'-дисульфандиилдиэтансульфонамид (0,028 г), ди-изопропилкарбодиимид (0,044 мл, 2,4 экв.) и Ν,Ν-диметилпиридин (0,034 г, 2,8 экв.). Перемешивание продолжали на протяжении 16 ч до тех пор, пока ТСХ анализ (5% МеОН (с 5% АсОН) в 70/30 СН2С12/гексаны) не показал полное использование дисульфандисульфонамида. Реакцию разводили гексанами (~5 мл), фильтровали для удаления твердых веществ, концентрировали, и полученное масло очищали с помощью флешхроматографии.
Хроматографически очищенные материалы затем растворяли в дихлорметане (3 мл), добавляли магнитную мешалку, затем трифторуксусную кислоту (0,60 мл) и три-изопропилсилан (0,20 мл). Смесь зразу же становилась желтой с обесцвечиванием на протяжении 5 мин, а превращение материала в желаемый продукт контролировали с помощью ВЭЖХ-МС. После завершения превращения реакцию концентрировали досуха, и остаток очищали с помощью флеш-хроматографии (0-15% МеОН (содержит 5% АсОН) в 80/20 СН2С12/гексаны). ВЭЖХ-МС показала, что этот изолят являлся смесью свободного тиола и дисульфида.
!Н ЯМР (400 МГц, СП3ОП) δ (млн. ч.)=0,88 (3Н, д, 1=6,2 Гц), 0,93 (3Н, д, 1=6,2 Гц), 1,07 (с, 9Н), 1,40 (с, 3Н), 1,47 (с, 3Н), 1,91-2,05 (м, 5Н), 2,32 (с, 3Н), 2,67 (т, 2Н, 1=9,76 Гц), 3,07-3,18 (м, 5Н), 3,52-3,59 (м, 2Н), 3,85 (с, 1Н), 4,08 (ш с, 1Н), 4,93 (с, 1Н), 5,09 (т, 1Н, 1=10,0 Гц), 6,76 (д, 1Н, 1=9,5 Гц), 7,29-7,35 (м, 1Н), 7,39-7,46 (м, 2Н), 7,49-7,55 (м, 2Н).
С29Η48N4О582 расч. [М+Н]+=598,15 аем; найдено т//=598,16.
Пример 7. 4-(Тритилтиометил)бензолсульфонамид
К перемешиваемому раствору трифенилметантиола (0,276 г, 2 экв.) в Ν,Ν-диметилформамиде (3 мл) при 0°С добавляли гидрид натрия (60% мас./мас., дисперсия в минеральном масле, 0,04 г, 2 экв.). После завершения бурного вспенивания одной порцией добавляли 4-(бромметил)бензолсульфонамид (0,125 г, 1 экв.), и реакцию оставляли нагреваться до комнатной температуры. ВЭЖХ-МС через 20 мин
- 42 029818 показала, что превращение завершилось. Реакцию гасили уксусной кислотой (~0,2 мл), концентрировали досуха в вакууме, и полученный осадок разделяли между этилацетатом и насыщенным раствором хлорида натрия. Органический слой отделяли, сушили над М^О4, фильтровали, концентрировали и очищали с помощью флеш-хроматографии (0-50% этилацетат в гексанах). Фракции, содержащие желаемый материал, концентрировали досуха для получения желаемого соединения как бесцветного твердого вещества (0,200 г).
ΊI ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ (млн. ч.)=3,38 (с, 2Н), 7,24-7,35 (м, 7Н), 7,36-7,44 (м, 12Н), 7,67-7,73 (м, 2Н).
Пример 8. ^,Е)-Ы-(4-(Меркаптометил)фенилсульфонил)-2,5-диметил-4-(^)-Н,3,3-триметил-2-(^)3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид (соединение С)
Указанное в заголовке соединение получали из примеров 3 и 7 согласно общим методикам 2 и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, СЩОЭ) δ (млн. ч.)=0,88 (д, 3Н, 1=6,2 Гц), 0,91 (д, 3Н, 1=6,2 Гц), 1,06 (с, 9Н), 1,38 (с, 3Н), 1,47 (с, 3Н), 1,86 (с, 3Н), 1,99-2,05 (м, 1Η), 2,41 (с, 3Н), 2,67 (т, 2Н, 1=9,76 Гц), 3,14 (с, 3Н), 3,80 (с, 2Н), НН 4,10 (ш с, 1Η), 4,93 (с, 1Η), 5,00 (т, 1Η, 1=10,0 Гц), 6,54 (д, 1Η, 1=9,5 Гц), 7,30-7,51 (м, 5Н), 7,527,58 (м, 2Н), 7,90-7,97 (м, 2Н).
€34Η50Ν4Θ5δ2 расч. [М+Н]+=659,25 аем; найдено т//=659,37.
Пример 9. ^,Е)-2,5-Диметил-М-тозил-4-(^)-Н,3,3-триметил-2-(^)-3-метил-2-(метиламино)-3фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид (соединение Ό)
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и тозилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
ΊI ЯМР (400МГц, С1);О1)) δ (млн. ч.)=0,88-0,94 (м, 6Н), 1,06 (с, 9Н), 1,35 (с, 3Н), 1,45 (с, 3Н), 1,86 (с, 3Н), 2,02-2,11 (м, 1Η), 2,44 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 3,17 (с, 3Н), НН 4,35 (с, 1Η), 4,89-4,99 (м, 2Н), 6,48 (д, 1Η, 1=9,5 Гц), 7,30-7,43 (м, 4Н), 7,43-7,50 (м, 2Н), 7,51-7,57 (м, 2Н).
€34Η50Ν4Θ5δ расч. [М+Н]+=627,15 аем; найдено т//=627,31.
Пример 10. ^,Е)-2,5-Диметил-М-(метилсульфонил)-4-(^)-Н,3,3-триметил-2-(^)-3-метил-2(метиламино)3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид (соединение Е)
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и метансульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, С1);О1)) δ (млн. ч.)=0,87-0,98 (3Н, м, 6Н), 1,09 (с, 9Н), 1,40 (с, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,97 (с, 3Н), 2,03-2,13 (м, 1Η), 2,52 (с, 3Н), 2,67 (т, 2Н, 1=9,76 Гц), 3,18 (с, 3Н), 3,31 (с, 3Н), 4,38 (с, 1Η),
4,94 (д, 1Η, 1=8,2 Гц), 5,07 (т, 1Η, 1=10,0 Гц), 6,54 (д, 1Η, 1=9,5 Гц), 7,30-7,40 (м, 1Η), 7,40-7,51 (м, 2Н), 7,51-7,59 (м, 2Н).
€28Η46Ν4Θ5δ расч. [М+Н]+=551,30 аем; найдено т//=551,34.
Пример 11. ^,Е)-2,5-Диметил-4-(^)-М,3,3-триметил-2-(^)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-еновая кислота (соединение Р)
Указанное в заголовке соединение синтезировали, используя способы, описанные №етаи с1 а1. в I. Ыа1. Ργο6. 2003, 66, 183-199.
Пример 12. ^,Е)-Ы-(Мезитилсульфонил)-2,5-диметил-4-(^)-Н,3,3-триметил-2-(^)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
- 43 029818
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и мезитилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,60-7,55 (м, 2Н), 7,47 (м, 2Н), 7,37 (м, 1Н), 7,03 (с, 2Н), 6,50 (д, 1=6 Гц, 1Н), 5,06-4,91 (м, 3Н), 4,34 (с, 1Н), 3,17 (с, 3Н), 2,68 (с, 6Н), 2,51 (с, 3Н), 2,31 (с, 3Н), 2,07 (м, 6,6 Гц, 2Н), 1,87 (с, 3Н), 1,48 (с, 3Н), 1,36 (с, 3Н), 1,09-1,04 (м, 1=16,8 Гц, 10Н), 0,92 (т, 1=6,3 Гц, 6Н).
С36Н54№О58 расч. ш//=654.38; найдено [М+Н]+=655,03.
Пример 13. (§,Е)-2,5-Диметил-Н-(4-(трифторметокси)фенилсульфонил)-4-((§)-Н,3,3-триметил-2((8)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 4-трифторметоксифенилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 8,16 (дд, 1=8,7, 1,4 Гц, 1Н), 7,69-7,28 (м, 4Н), 6,52 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,02-4,95 (м, 1Н), 4,92 (с, 0Н), 4,35 (с, 1Н), 3,17 (с, 1Н), 2,51 (с, 1Н), 2,05 (ддд, 1=15,9, 10,9, 3,7 Гц, 1Н), 1,87 (с, 1Н), 1,47 (с, 1Н), 1,36 (с, 1Н), 1,07 (с, 4Н), 0,91 (т, 1=6,1 Гц, 3Н).
С34Н47р3№О68 расч. ш//=696.32; найдено [М+Н]+=697,26.
Пример 14. (§,Е)-Н-(Бензилсульфонил)-2,5-диметил-4-((§)-Н,3,3-триметил-2-((§)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и бензилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,56 (д, 1=7,9 Гц, 2Н), 7,47 (т, 1=7,3 Гц, 2Н), 7,38 (шс, 6Н), 6,39 (д, 1=9,4 Гц, 1Н), 5,06 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,93 (с, 1Н), 4,75 (с, 2Н), 4,36 (с, 1Н), 3,13 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,061,95 (м, 4Н), 1,48 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,09 (с,9Н), 0,90 (т,1=6,2 Гц, 6Н).
С34Н47р3№О68 расч. ш//= 626,35; найдено [М+Н]+=626,99.
Пример 15. (§,Е)-2,5-Диметил-Н-(2,4,6-триизопропилфенилсульфонил)-4-((§)-Н,3,3-триметил-2((8)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Химическая формула: С42НееМ4О53 Точная масса: 738,48 (15)
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2,4,6-триизопропилфенилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,61-7,53 (м, 2Н), 7,47 (т, 1=7,8 Гц, 2Н), 7,41-7,33 (м, 1Н), 7,27 (с, 2Н), 6,50 (дд, 1=9,6, 1,8 Гц, 1Н), 5,05 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,92 (с, 1Н), 4,43-4,26 (м, 3Н), 3,16 (с, 3Н), 2,94 (дд, 1=14,3, 7,4 Гц, 1Н), 2,51 (с, 3Н), 2,07-1,99 (м, 2Н), 1,90 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,48 (с, 4Н), 1,39 (с, 3Н), 1,33-1,22 (м, 18Н), 1,11 (с, 2Н), 1,06 (с, 9Н), 0,91 (т, 1=6,0 Гц, 7Н).
С-|2Н66К|ОЯ расч. т//=738,48; найдено [М+Н]+=738,10.
Пример 16. (§,Е)-Н-(4-трет-бутилфенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((§)-Н,3,3-триметил-2-((§)-3метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
- 44 029818
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 4-третбутилфенилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 7,98 (д, 1=8,6 Гц, 2Н), 7,64 (д, 1=8,6 Гц, 2Н), 7,55 (д, 1=7,9 Гц, 2Н), 7,47 (т, 1=7,7 Гц, 3Н), 7,37 (т, 1=7,1 Гц, 1Н), 6,48 (дд, 1=9,6, 1,8 Гц, 1Н), 4,99 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,92 (с, 1Н), 4,35 (с, 1Н), 3,16 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 1,87 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,47 (с, 3Н), 1,38 (с, 10Н), 1,06 (с, 9Н), 0,91 (т, 1=6,2 Гц, 7Н).
С42Н6&Н4О58 расч. т//=668.40; найдено [М+Н|'=669.28.
Пример 17. (8,Е)-Х-(4-Хлорфенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-Х,3,3-триметил-2-((8)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Химическая формула: СззН^С^ОэЗ Точная масса: 646,30 (17)
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 4-хлорфенилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 8,03 (д, 1=8,7 Гц, 2Н), 7,60 (д, 1=8,7 Гц, 2Н), 7,57-7,51 (м, 2Н), 7,47 (дд, 1=8,6, 6,9 Гц, 2Н), 7,42-7,32 (м, 1Н), 6,50 (дд, 1=9,2, 1,7 Гц, 1Н), 4,96 (дд, 1=10,9, 9,1 Гц, 2Н), 4,92 (с, 1Н), 4,35 (с, 1Н), 3,17 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,14-2,03 (м, 1Н), 2,01 (с, 1Н), 1,87 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,36 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,91 (дд, 1=6,5, 4,6 Гц, 7Н).
С33Н47СШ4О58 расч. т//=646,30; найдено [М+Н]+=647,20.
Пример 18. (8,Е)-Х-(3-Цианофенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-Х,3,3-триметил-2-((8)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
-ΟΝ
Химическая формула: €μΗ47Ν$Ο$$
Точная масса: 637,33 (18)
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 3-цианофенилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
Ίί ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 8,38 (с, 1Н), 8,31 (дт, 1=8,0, 1,5 Гц, 1Н), 8,02-7,92 (м, 1Н), 7,75 (т, 1=7,9 Гц, 1Н), 7,53 (д, 1=1,2 Гц, 1Н), 7,48 (дд, 1=8,6, 6,9 Гц, 2Н), 7,43-7,33 (м, 1Н), 6,55 (дд, 1=9,3, 1,7 Гц, 1Н), 4,93 (д, 1=5,4 Гц, 2Н), 4,35 (с, 1Н), 3,18 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,15-1,98 (м, 2Н), 1,87 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,45 (с, 3Н), 1,32 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,92 (дд, 1=6,6, 3,9 Гц, 7Н).
С34Н47ЩО58 расч. т//=637,33; найдено [М+Н]+=638,00.
Пример 19 (8,Е)-2,5-Диметил-Х-(2-нитрофенилсульфонил)-4-((8)-Х,3,3-триметил-2-((8)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Химическая формула: С34Н47М5О75 Точная масса: 657,32 (19)
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2-нитрофенилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 8,36-8,27 (м, 1Н), 7,82 (дд, 1=5,9, 3,8 Гц, 3Н), 7,61-7,51 (м, 2Н), 7,47 (дд, 1=8,6, 6,9 Гц, 2Н), 7,42-7,31 (м, 1Н), 6,63 (дд, 1=9,5, 1,7 Гц, 1Н), 5,03 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,93 (с, 1Н),
4,36 (с, 1Н), 3,18 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,12-2,01 (м, 1Н), 1,88 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,48 (с, 3Н), 1,37 (с, 3Н), 1,06 (с, 9Н), 0,97-0,86 (м, 6Н).
С34Н47ЩО58 расч. т//=657,32; найдено [М+Н]+=658,21.
Пример 20. (8,Е)-Х-(4-Метокси-2-нитрофенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-Х,3,3-триметил-2-((8)3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Химическая формула: СзлНдэ^ОеЗ Точная масса: 687,33 (20)
- 45 029818
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2-нитро-4-метоксифенилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
’Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 8,24 (д, 1=8,9 Гц, 1Н), 7,59-7,51 (м, 2Н), 7,47 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,447,25 (м, 4Н), 6,60 (дд, 1=9,2, 1,7 Гц, 1Н), 5,03 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,93 (с, 1Н), 4,36 (с, 1Н), 3,97 (с, 3Н), 3,18 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,13-2,02 (м, 1Н), 1,89 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,48 (с, 3Н), 1,38 (с, 3Н), 1,11 (с, 2Н), 1,06 (с, 9Н), 0,99-0,88 (м, 6Н).
С.\-|Н49И5О88 расч. т//=687,33; найдено [М+Н]+=689,23.
Пример 21. 4-(И-((§,Е)-2,5-Диметил-4-((§)-И,3,3-триметил-2-((§)-3-метил-2-(метиламино)-3фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-еноил)сульфамоил)-3-нитробензамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 3-нитро-4-сульфамоилбензамида, используя общие методики 2 и 7.
’Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 8,35 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,22 (д, 1=8,0 Гц, 2Н), 7,59-7,51 (м, 2Н), 7,47 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 6,70-6,57 (м, 1Н), 5,04 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,94 (с, 1Н), 4,37 (с, 1Н), 3,17 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,05 (ддд, 1=10,3, 7,4, 5,5 Гц, 1Н), 1,87 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,48 (с, 3Н), 1,38 (с, 3Н), 1,06 (с, 9Н), 0,92 (дд, 1=14,7, 6,8 Гц, 6Н).
С34Н48И6О8§ расч. т//=700,33; найдено [М+Н]+=701,28.
Пример 22. (§,Е)-И-(4-Метоксифенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((§)-И,3,3-триметил-2-((§)-3-метил2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 4-метоксифенилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
’Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,97 (д, 1=9,0 Гц, 2Н), 7,54 (д, 1=7,5 Гц, 2Н), 7,46 (т, 1=7,6 Гц, 2Н),
7.36 (т, 1=7,2 Гц, 1Н), 7,06 (д, 1=9,0 Гц, 2Н), 6,48 (дд, 1=9,3, 1,9 Гц, 1Н), 4,97 (т, 1=9,9 Гц, 1Н), 4,92 (с, 1Н),
4,22 (с, 1Н), 3,89 (с, 3Н), 3,15 (с, 3Н), 2,46 (с, 3Н), 2,10-1,99 (м, 2Н), 1,86 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н),
1.36 (с, 3Н), 1,06 (с, 9Н), 0,94-0,84 (м, 6Н).
С34Н50И4О68 расч. т//=642,35; найдено [М+Н]+=643,31.
Пример 23. (§,Е)-2,5-Диметил-И-(4-(2,2,2-трифторацетамидо)фенилсульфонил)-4-((§)-И,3,3триметил-2-((§)-3 -метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2,2,2-трифтор-И-(4сульфамоилфенил)ацетамида, используя общие методики 2 и 7.
’Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 8,06 (д, 1=8,9 Гц, 2Н), 7,88 (д, 1=8,9 Гц, 2Н), 7,52 (д, 1=7,1 Гц, 2Н), 7,49-7,40 (м, 3Н), 7,35 (дд, 1=8,1, 6,1 Гц, 1Н), 6,47 (дд, 1=9,2, 1,8 Гц, 1Н), 4,33 (с, 1Н), 3,15 (с, 3Н), 2,48 (с, 3Н), 2,13-1,96 (м, 2Н), 1,85 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,43 (с, 3Н), 1,33 (с, 3Н), 1,04 (с, 9Н), 0,89 (дд, 1=6,8, 4,7 Гц, 6Н).
С35Н48Р3И5О68 расч. т//=723,33; найдено [М+Н]+=724,08.
Пример 24. (§,Е)-И-(4-Аминофенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((§)-И,3,3-триметил-2-((§)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
- 46 029818
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2,2,2-трифтор-^(4сульфамоилфенил)ацетамида, используя общие методики 2, 3 и 7
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,71 (д, Д=8,8 Гц, 2Н), 7,55 (д, >7,6 Гц, 2Н), 7,47 (д, Д=6,9 Гц, 2Н),
7,37 (т, >6,8 Гц, 1Н), 6,67 (д, Л=8,8 Гц, 2Н), 6,44 (дд, ί=9,2, 1,6 Гц, 1Н), 4,97 (т, >9,7 Гц, 1Н), 4,92 (с, 1Н), 4,36 (с, 1Н), 3,16 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,16-2,00 (м, 1Н), 1,87 (д, >1,4 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,37 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,92 (д, >6,4 Гц, 3Н), 0,91 (д, 1=6,3 Гц, 3Н).
СНЛД.З расч. т//=627,35; найдено [М+Н]+=628,35.
Пример 25. (З,Е)-2,5-Диметил-^(фенилсульфонил)-4-((З)-^3,3-триметил-2-((З)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и фенилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 8,06-7,95 (м, 2Н), 7,63-7,40 (м, 8Н), 7,40-7,30 (м, 1Н), 6,53 (дд, >9,3, 1,6 Гц, 1Н), 5,05-4,95 (м, 1Н), 4,22 (с, 1Н), 3,14 (с, 3Н), 2,45 (с, 3Н), 2,09-1,95 (м, 1Н), 1,85 (д, >1,4 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,36 (с, 3Н), 1,06 (с, 9Н), 0,89 (дд, ί=11,9, 6,5 Гц, 7Н).
СззН4^4О5З расч. т//=612,33; найдено [М+Н]+=613,06.
Пример 26. (З,Е)-^Щ-(2-Фторбензил)сульфамоил)-2,5-диметил-4-((З)-^3,3-триметил-2-((З)-3метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
2-Фторбензилсульфамамид получали из 2-фторбензиламина согласно общей методике 14; указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2-фторбензилсульфамамида, используя общие методики 2 и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,63-7,41 (м, 6Н), 7,41-7,26 (м, 3Н), 7,14 (тд, ί=7,5, 1,2 Гц, 1Н), 7,07 (ддд, >9,5, 8,2, 1,1 Гц, 1Н), 6,37 (дд, ί=9,4, 1,7 Гц, 1Н), 5,07-4,97 (м, 1Н), 4,37 (с, 1Н), 4,33 (с, 2Н), 3,15 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,10-1,97 (м, 1Н), 1,83 (д, ί=1,4 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,97-0,84 (м, 6Н).
С34Н50Р^О5З расч. т//=659,35; найдено [М+Н]+=660,28.
Пример 27. (З,Е)-2,5-Диметил-^(пиперидин-1-илсульфонил)-4-((З)-^3,3-триметил-2-((З)-3-метил2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Пиперидин-1-сульфонамид синтезировали из пиперидина согласно общей методике 14; указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и пиперидин-1-сульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,55 (д, >1,2 Гц, 1Н), 7,47 (т, >7,6 Гц, 3Н), 7,42-7,29 (м, 1Н), 6,48 (дд, >9,7, 1,8 Гц, 1Н), 5,05 (т, ί=10,0 Гц, 1Н), 4,39 (с, 1Н), 3,18 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,07 (д, ί=10,5 Гц, 1Н),
1,96 (д, >1,4 Гц, 3Н), 1,61 (ддд, 1=20,0, 10,3, 5,4 Гц, 9Н), 1,49 (с, 4Н), 1,39 (с, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,99-0,84 (м, 9Н).
С32Н53^О5З расч. т//=619,38; найдено [М+Н]+=620,38.
Пример 28. (З,Е)-2,5-Диметил-^(о-толилсульфонил)-4-((З)-^3,3-триметил-2-((З)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
- 47 029818
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2-толуолсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
'II ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 8,10 (дд, ί=8,0, 1,4 Гц, 1Н), 7,60-7,33 (м, 11Н), 6,52 (дд, ί=9,6, 1,7 Гц, 1Н), 5,04-4,90 (м, 2Н), 4,35 (с, 1Н), 3,18 (с, 3Н), 2,67 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,15-2,03 (м, 2Н), 2,01 (с, 1Н), 1,87 (д, ί=1,4 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,35 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,92 (т, 1=6,3 Гц, 6Н).
Сз4Н50N4О5δ расч. т//=626,35; найдено [М+Н]+=627,05.
Пример 29. ^,Е)-М-(4-Бромфенилсульфонил)-2,5-диметил-4-(^)-Н,3,3-триметил-2-(^)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 4-бромфенилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
'Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,95 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,76 (д, >8,0 Гц, 2Н), 7,55 (д, >7,5 Гц, 2Н), 7,47 (дд, >8,6, 6,9 Гц, 2Н), 7,41-7,29 (м, 1Н), 6,51 (д, >9,0 Гц, 1Н), 4,35 (с, 1Н), 3,16 (с, 3Н), 2,50 (с, 3Н), 2,06 (дт, >10,7, 6,3 Гц, 1Н), 1,87 (с, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,36 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,91 (дд, ί=6,9, 4,9 Гц, 8Н).
СззН^ВгЫ^ расч. тА=690,25; найдено [М+Н]+=691,17, 693,18.
Пример 30. ^,Е)-2,5-Диметил-М-(нафталин-2-илсульфонил)-4-(^)-Н,3,3-триметил-2-(^)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2-нафтилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
'II ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 8,69-8,62 (м, 1Н), 8,47 (д, >8,2 Гц, 1Н), 8,14-7,95 (м, 5Н), 7,71 (дддд, >18,4, 8,2, 6,9, 1,4 Гц, 2Н), 7,57-7,50 (м, 2Н), 7,46 (дд, ί=8,6, 6,9 Гц, 2Н), 7,42-7,33 (м, 1Н), 6,50 (дд, >9,3, 1,5 Гц, 1Н), 4,92-4,87 (м, 1Н), 4,34 (с, 1Н), 3,16 (с, 3Н), 2,50 (с, 3Н), 2,13-1,99 (м, 1Н), 1,85 (д, >1,4 Гц, 3Н), 1,44 (с, 3Н), 1,34 (с, 3Н), 1,04 (с, 9Н), 0,90 (дд, ί=6,6, 4,0 Гц, 6Н).
С37Н50N4О5δ расч. т//=662,35; найдено [М+Н]+=663,32.
Пример 31. Метил-4-(Ы-(^,Е)-2,5-диметил-4-(^)-Н,3,3-триметил-2-(^)-3-метил-2-(метиламино)-3фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-еноил)сульфамоил)бензоат
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 4-карбоксиметилфенилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
'II ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 8,24-8,10 (м, 4Н), 7,58-7,50 (м, 2Н), 7,47 (дд, ί=8,6, 6,9 Гц, 2Н), 7,41-7,33 (м, 1Н), 6,52 (дд, ί=9,2, 1,6 Гц, 1Н), 4,35 (с, 1Н), 3,97 (с, 3Н), 3,18 (с, 3Н), 2,50 (с, 3Н), 2,15-2,00 (м, 1Н), 1,86 (д, >1,4 Гц, 3Н), 1,45 (с, 3Н), 1,35 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,91 (дд, ί=6,7, 3,8 Гц, 6Н).
С35Н50N4О7δ расч. т//=670,34; найдено [М+Н]+=671,10.
Пример 32. ^,Е)-2,5-Диметил-Н-(Ы-(2-(трифторметил)бензил)сульфамоил)-4-(^)-Н,3,3-триметил2-(^)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2-трифторметилбензилсульфонамида,
- 48 029818 используя общие методики 2 и 7.
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,78 (д, 1=7,9 Гц, 1Н), 7,74-7,67 (м, 1Н), 7,64 (дд, 1=8,1, 6,7 Гц, 1Н), 7,60-7,52 (м, 2Н), 7,48 (дд, 1=8,5, 6,8 Гц, 4Н), 7,42-7,33 (м, 1Н), 6,48-6,40 (м, 1Н), 5,11-5,02 (м, 1Н), 4,45 (с, 2Н), 4,37 (с, 1Н), 3,17 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,11-1,99 (м, 2Н), 1,92 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,40 (с, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,92 (дд, 1=9,3, 6,7 Гц, 6Н).
Сз5Н50РзN5О58 расч. т//=709,35; найдено [М+Н]+=710,02.
Пример 33. (48,Е)-N-(Гексан-2-илсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-N,3,3-триметил-2-((8)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и гексан-2-сульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,56-7,48 (м, 2Н), 7,42 (т, 1=7,8 Гц, 2Н), 7,31 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 6,586,50 (м, 1Н), 5,05 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,92 (с, 1Н), 3,84 (с, 1Н), 3,65 (дт, 1=10,8, 4,3 Гц, 1Н), 3,14 (с, 3Н), 2,32 (с, 3Н), 2,09-1,96 (м, 2Н), 1,93 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,61-1,27 (м, 3Н), 1,06 (с, 9Н), 0,98-0,90 (м, 6Н), 0,87 (д, 1=6,5 Гц, 3Н).
СззН56N4О58 расч. т//=620,40; найдено [М+Н]+=621,55.
Пример 34. (8,Е)-N-(2-Метоксиэтилсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-N,3,3-триметил-2-((8)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2-метоксиэтансульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
!Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,56 (д, 1=7,8 Гц, 2Н), 7,47 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 6,51 (д, 1=9,4 Гц, 1Н), 5,07 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,95 (с, 1Н), 4,33 (с, 1Н), 3,82 (т, 1=5,8 Гц, 2Н), 3,70 (к, 1=5,2 Гц, 2Н), 3,18 (с, 3Н), 2,50 (с, 3Н), 2,18-2,00 (м, 1Н), 1,95 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,93 (дд, 1=14,8, 6,6 Гц, 6Н).
СзЩо^О^ расч. т//=594,35; найдено [М+Н]+=595,44.
Пример 35. (8,Е)-N-(Циклопентилметилсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-N,3,3-триметил-2-((8)-3метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и циклопентилметансульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
!Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,61-7,52 (м, 2Н), 7,48 (дд, 1=8,6, 6,9 Гц, 2Н), 7,38 (т, 1=7,4 Гц, 1Н), 6,54 (дд, 1=9,4, 1,7 Гц, 1Н), 5,06 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,94 (с, 1Н), 4,37 (с, 1Н), 3,52 (дд, 1=7,0, 5,4 Гц, 3Н), 3,18 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,35 (п, 1=8,1 Гц, 1Н), 2,16-1,89 (м, 6Н), 1,77-1,53 (м, 4Н), 1,49 (с, 3Н), 1,45-1,26 (м, 5Н), 1,09 (с, 9Н), 0,93 (дд, 1=11,3, 6,7 Гц, 6Н).
СйНздЩОзЗ расч. т//=618,38; найдено [М+Н]+=619,54.
Пример 36. (8)-Метил-2-(трет-бутоксикарбонил(метил)амино)-3-(4-цианофенил)-3-метилбутаноат
К смеси метилового эфира примера 38 (0,06 г, 0,15 ммоль), трис(дибензилиденацетон)дипалладия (0) (0,014 г, 0,015 ммоль), 1,1'-бис-(дифенилфосфино)ферроцена (0,02 г, 0,25 экв.), ацетата магния (0,013
- 49 029818 г, 0,06 ммоль), цинковой пыли (0,004 г, 0,06 ммоль) и цианида цинка (0,0264 г, 0,225 ммоль) на бане с азотом добавляли Ν,Ν-диметилформамид/вода (0,8/0,08 мл). Реакцию промывали азотом, затем сосуд закрывали и опускали в масляную баню при 105°С. Реакцию оставляли перемешиваться на протяжении ночи и оставляли охлаждаться до комнатной температуры. ВЭЖХ-МС анализ показал хорошее превращение в желаемый продукт. Реакцию концентрировали при пониженном давлении, суспендировали в СН2С12, и полученную суспензию очищали хроматографией на силикагеле (15-25% Е!ОАс в гексанах), получая конечное соединение как бесцветное масло (0,036 г, 69%).
ΊI ЯМР (400 МГц, хлороформ-б) δ 7,69-7,35 (м, 4Н), 5,24 (с, 1Н), 3,54 (с, 3Н), 2,74 (с, 3Н), 1,51 (с, 3Н), 1,45-1,25 (м, 12Н).
Пример 37. (8)-Метил 2-(трет-бутоксикарбонил(метил)амино)-3-(4-((трет-бутоксикарбониламино)метил)фенил)-3 -метилбутаноат
К раствору бензонитрила (0,300 г, 0,87 ммоль) в метанол/уксусной кислоте (10:1, 9 мл) в колбе для шейкера добавили черный палладий. Колбу промывали водородом при 60 фунтов на квадратный дюйм, и шейкер вращали на протяжении 24 ч. В это время колбу промывали Н2 при пониженном давлении. Реакцию разводили метанолом и суспензию фильтровали через слой целлита. Фильтрат концентрировали до слегка-желтого масла и повторно растворяли в дихлорметане (5 мл). К раствору при 0°С при перемешивании добавляли т-бутилдикарбонат (0,524 г, 2,0 экв.) и триэтиламин (0,846 мл, 5 экв.). Реакцию оставляли перемешиваться на протяжении 3 ч, после чего ВЭЖХ-МС показала полное использование амина. Реакцию концентрировали при пониженном давлении и очищали хроматографией на силикагеле (диэтиловый эфир в гексанах, 15-30%), получая указанное в заголовке соединение как бесцветное масло (0,232г, 60%).
ΊI ЯМР (400 МГц, хлороформ-б) δ 7,38 (дд, 1=16,6, 8,0 Гц, 2Н), 7,23 (д, 1=7,7 Гц, 2Н), 5,27 (с, 1Н), 4,31 (с, 2Н), 3,61 (с, 3Н), 2,78 (с, 3Н), 1,50-1,61 (м,6Н), 1,47 (д, 1=15,2 Гц, 18Н).
Пример 38. (8)-3-(4-Бромфенил)-2-(трет-бутоксикарбонил(метил)амино)-3-метилбутановая кислота
К перемешиваемому раствору (8)-метил 3-(4-бромфенил)-2-(трет-бутоксикарбонил(метил)амино)-3метилбутаноата (0,710 г, 1,77 ммоль) в 1,4 диоксане (4 мл) добавляли воду (1 мл, 2 мл) и моногидрат гидроксида лития (0,367 г, 8,9 ммоль). Реакцию нагревали 50°С и контролировали ВЭЖХ до завершения. Реакцию охлаждали до комнатной температуры, подкисляли до рН 3 1М лимонной кислотой и концентрировали почти досуха при пониженном давлении. Остаток переносили в ~20 мл этилацетата, промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над М§8О4, фильтровали и концентрировали, получая аналитически чистый материал, который использовали без дополнительной манипуляции.
ΊI ЯМР (400 МГц, хлороформ-б) δ 7,44 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,33 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 5,18 (с, 1Н), 2,71 (с, 3Н), 1,60-1,42 (м, 15Н).
Пример 39. (8)-3-(4-Азидофенил)-2-(трет-бутоксикарбонил(метил)амино)-3-метилбутановая кислота
В открытую пробирку, содержащую магнитную мешалку, добавляли пример 38 (0,690 г, 1,8 ммоль), йодид меди (I) (0,034 г, 0,18 ммоль), азид натрия (0,350 г, 5,4 ммоль), И1,И2-диметилэтан-1,2-диамин (0,029 мл, 0,27 ммоль), аскорбат натрия (0,036 г, 0,18 ммоль), гидроксид натрия (0,072г, 1,8 ммоль), этанол (6 мл) и воду (1 мл). Суспензию промывали азотом, сосуд закрывали и погружали в масляную баню при 105°С при интенсивном перемешивании. Протекание реакции контролировали с помощью ВЭЖХМС на протяжении 24 ч после чего оставалось немного исходного материала. Реакцию разводили этилацетатом (~20мл) и промывали насыщенным раствором хлорида натрия. Водный слой экстрагировали 2х ~20 мл этилацетата. Органические слои объединяли, сушили над М§8О4, фильтровали и концентрировали при пониженном давлении. Остаток очищали хроматографией на силикагеле (20-65% Е!ОАс (содержит 2% об./об. АсОН) в гексанах), получая указанное в заголовке соединение как бесцветное масло (0,475г, 75%).
ΊI ЯМР (400 МГц, хлороформ-б) δ 7,44 (д, 1=8,6 Гц, 2Н), 6,99 (дд, 1=9,0, 3,4 Гц, 2Н), 5,24 (с, 1Н), 2,71 (с, 3Н), 1,63-1,38 (м, 18Н).
- 50 029818
Пример 40. (8,Е)-Ы-(Бензилсульфонил)-4-((8)-2-((8)-3-(4-цианофенил)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)-Н,3,3-триметилбутанамидо)-2,5-диметилгекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 36 и (8,Е)-4-((8)-2-амино-Ы,3,3триметилбутанамидо)-Н-(бензилсульфонил)-2,5-диметилгекс-2-енамида, используя общие методики 3, 4 и 7.
1Η ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 7,83 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,73 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,38 (д, 1=2,6 Гц, 5Н),
6,39 (дд, 1=9,2, 1,8 Гц, 1Η), 5,04 (т, 1=10,1 Гц, 1Η), 4,91 (с, 1Η), 4,75 (с, 2Н), 4,34 (с, 1Η), 3,12 (с, 3Н), 2,54 (с, 3Н), 2,05-1,97 (м, 2Н), 1,95 (д, 1=1,5 Гц, 3Н), 1,52 (с, 3Н), 1,41 (с, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,91 (дд, 1=11,2, 4,8 Гц, 6Н).
Сз5Η49N5Ο58 расч. т/=651,35; найдено [М+Н]+=652,4.
Пример 41. (8,Е)-4-((8)-2-((8)-3-(4-(аминометил)фенил)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)-Н,3,3триметилбутанамидо)-Ы-(бензилсульфонил)-2,5-диметилгекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 37 и (8,Е)-4-((8)-2-амино-Ы,3,3триметилбутанамидо)-Н-(бензилсульфонил)-2,5-диметилгекс-2-енамида, используя общие методики 3, 4 и 7.
1Η ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 7,63 (т, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,54 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,49-7,43 (м, 3Н), 7,39 (м, 2Н), 6,39 (д, 1=9,4 Гц, 1Η), 5,05-4,97 (м, 1Η), 4,75 (с, 2Н), 4,35 (с, 3Н), 4,16 (с, 2Н), 3,14 (с, 3Н), 2,54 (с, 3Н), 2,03 (м, 1Η), 1,95 (с, 3Н), 1,51 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,31 (с, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,98-0,81 (м, 6Н).
Пример 42. (8,Е)-4-((8)-2-((8)-3-(4-азидофенил)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)-Н,3,3триметилбутанамидо)-Ы-(бензилсульфонил)-2,5-диметилгекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 39 и (8,Е)-4-((8)-2-амино-Ы,3,3триметилбутанамидо)-Н-(бензилсульфонил)-2,5-диметилгекс-2-енамида, используя общие методики 4 и 7.
Сз4Η49N7Ο58 расч. ιη/ζ=667„35 аем; найдено [М+Н]+=668,4.
Пример 43. (8,Е)-4-((8)-2-((8)-3-(4-аминофенил)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)-Н,3,3триметилбутанамидо)-Ы-(бензилсульфонил)-2,5-диметилгекс-2-енамид
К перемешиваемому раствору Вос-защищенного примера 42 (0,035 г, 0,046 ммоль) в этаноле (1,6 мл) и воде (0,5 мл) добавляли цинковую пыль (0,015 г, 0,23 ммоль) и хлорид аммония (0,025 г, 0,46 ммоль). Через 1 ч ВЭЖХ-МС показала полное использование исходного материала. Реакцию гасили гидроксидом аммония (~0,1 мл) и разводили этилацетатом (5 мл). Реакцию фильтровали, твердые вещества промывали этилацетатом (5 мл), и бифазный фильтрат переносили в разделительную воронку. Водную фазу дважды промывали этилацетатом (5 мл), и органические фазы объединяли, промывали насыщен- 51 029818 ным раствором хлорида натрия, сушили над МдЗО4, фильтровали и концентрировали. Продукт реакции очищали хроматографией на силикагеле (5-15% МеОН в СН2С12), получая Вос-защищенное промежуточное соединение как бесцветное стеклоподобное вещество (0,027 г, 66%). С промежуточного соединения снимали защиту согласно общей методике 7, получая указанное в заголовке соединение.
Сз^НОзЗ расч. 111//=641,36 аем; найдено [М+Н]+=642,4.
Пример 44. (З,Е)-Н-(Циклогексилсульфонил)-2,5-диметил-4-((З)-Н,3,3-триметил-2-((З)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и циклогексилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
'П ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 7,61-7,52 (м, 2Н), 7,47 (дд, Σ=8,6, 6,9 Гц, 2Н), 7,36 (т, >7,5 Гц, 1Н), 6,61-6,50 (м, 1Н), 5,11-4,99 (м, 1Н), 4,94 (с, 1Н), 4,28 (с, 1Н), 3,59-3,51 (м, 1Н), 3,18 (с, 3Н), 2,48 (с, 3Н), 2,20-2,00 (м, 4Н), 1,97-1,87 (м, 6Н), 1,78-1,69 (м, 1Н), 1,60 (тд, >14,2, 10,9 Гц, 2Н), 1,48 (с, 3Н), 1,44-1,23 (м, 6Н), 1,09 (с, 9Н), 0,93 (дд, 1=13,7, 6,6 Гц, 7Н).
С33Н5.-Д-|О5З расч. т//=618,38; найдено [М+Н]+=619,47.
Пример 45. (З,Е)-2,5-Диметил-Н-(пиридин-3-илметилсульфонил)-4-((З)-Н,3,3-триметил-2-((З)-3метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и пиридин-3-илметансульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
'Н ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 8,55 (д, Д=1,7 Гц, 1Н), 8,48 (дд, 1=5,0, 1,6 Гц, 1Н), 7,89 (д, 1=8,0 Гц, 0Н), 7,55 (д, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,50-7,39 (м, 2Н), 7,35 (с, 1Н), 6,52 (дд, 1=9,6, 2,0 Гц, 1Н), 5,05 (с, 0Н), 4,94 (с, 1Н), 4,64 (с, 2Н), 4,19 (с, 1Н), 3,11 (с, 3Н), 2,45 (с, 3Н), 1,91 (д, 1=1,5 Гц, 3Н), 1,48 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,07 (с, 8Н), 0,89 (дд, 1=15,1, 6,5 Гц, 6Н).
СуК.-Д-ОЯ расч. т//=627,35; найдено [М+Н]+=628,35.
Пример 46. 4-(N-((З,Е)-2,5-Диметил-4-((З)-N,3,3-триметил-2-((З)-3-метил-2-(метиламино)-3фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-еноил)сульфамоил)бензовая кислота
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и метил-4-сульфамоилбензоата, используя общие методики 2, 3 и 7.
'II ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 8,25-8,07 (м, 4Н), 7,54 (д, >7,8 Гц, 2Н), 7,47 (т, >7,6 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 6,55 (д, 1=9,3 Гц, 1Н), 4,98 (т, >9,9 Гц, 1Н), 4,92 (с, 1Н), 4,36 (с, 1Н), 3,16 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,06 (к, 1=9,0, 7,7 Гц, 1Н), 1,88 (с, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,36 (с, 3Н), 1,06 (с, 9Н), 0,91 (т, 1=6,0 Гц, 6Н).
Пример 47. (З,Е)-2,5-Диметил-N-(3-(2,2,2-трифторацетамидо)фенилсульфонил)-4-((З)-N,3,3триметил-2-((З)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо) бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2,2,2-трифтор-N-(3- 52 029818 сульфамоилфенил)ацетамида, используя общие методики 2 и 7.
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 8,49 (п, 1=2,2 Гц, 1Н), 7,90 (дтд, 1=6,0, 4,8, 2,9 Гц, 2Н), 7,64-7,56 (м, 1Н), 7,53 (тт, 1=5,4, 4,3, 1,8 Гц, 2Н), 7,51-7,42 (м, 2Н), 7,41-7,28 (м, 1Н), 6,56-6,38 (м, 1Н), 4,97 (с, 1Н), 4,90 (д, 1=3,3 Гц, 1Н), 4,35 (с, 1Н), 3,16 (д, 1=15,5 Гц, 3Н), 2,49 (д, 1=14,2 Гц, 3Н), 2,14-2,01 (м, 1Н), 1,89-1,83 (м, 3Н), 1,57-1,28 (м, 6Н), 1,14-0,94 (м, 9Н), 0,95-0,85 (м, 6Н).
13С ЯМР (101 МГц, метанол-б4) δ 172,26, 168,81, 167,10, 167,00, 144,95, 141,82, 138,82, 138,47, 135,31, 130,71, 130,38, 128,91, 127,36, 126,65, 126,32, 121,39, 71,20, 66,92, 57,87, 57,78, 42,05, 35,83, 34,15, 32,66, 30,84, 29,79, 26,95, 21,39, 19,84, 19,82, 15,45, 14,03.
19Р ЯМР (377 МГц, метанол-б4) δ -76,96, -77,07.
С35Н48Р3М5О6З расч. т0=723,33; найдено [М+Н]+=724,30, [М+Ма]+=746,30.
Пример 48. (З,Е)-М-(3-Аминофенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((З)-М,3,3-триметил-2-((З)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2,2,2-трифтор-М-(3сульфамоилфенил)ацетамида, используя общие методики 2, 3 и 7.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,55 (д, 1=7,5 Гц, 2Н), 7,51-7,45 (м, 2Н), 7,43-7,20 (м, 4Н), 6,97 (д, 1=8,1 Гц, 1Н), 6,48 (д, 1=9,4 Гц, 1Н), 5,02-4,89 (м, 2Н), 4,36 (с, 1Н), 3,17 (с, 3Н), 2,50 (с, 3Н), 2,14-2,00 (м, 1Н), 1,88 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,35 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,92 (д, 1=6,3 Гц, 3Н), 0,90 (с, 3Н).
С33Н49М5О5З расч. т0=627,35; найдено [М+Н]+=628,36.
Пример 49. (З,Е)-2,5-Диметил-М-(пиридин-3-илсульфонил)-4-((З)-М,3,3-триметил-2-((З)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и пиридин-3-сульфонамида, используя общие методики 2, и 7.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 9,18 (с, 1Н), 8,80 (с, 1Н), 8,46 (дт, 1=8,2, 1,8 Гц, 1Н), 7,65 (дд, 1=8,1, 4,9 Гц, 1Н), 7,54 (д, 1=7,3 Гц, 2Н), 7,47 (т, 1=7,8 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 6,54 (д, 1=9,3 Гц, 1Н), 5,014,88 (м, 2Н), 4,36 (с, 1Н), 3,18 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,15-2,01 (м, 1Н), 1,86 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н),
1,33 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,92 (д, 1=3,3 Гц, 3Н), 0,91 (д, 1=3,5 Гц, 3Н).
С32Н47М5О5З расч. т0=613,33; найдено [М+Н]+=614,23.
Пример 50. (З,Е)-2,5-Диметил-М-(тиофен-2-илсульфонил)-4-((З)-М,3,3-триметил-2-((З)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и тиофен-2-сульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,93-7,82 (м, 2Н), 7,55 (д, 1=8,3 Гц, 1Н), 7,48 (т, 1=7,8 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,2 Гц, 1Н), 7,15 (дд, 1=5,0, 3,8 Гц, 1Н), 6,51 (д, 1=9,1 Гц, 1Н), 5,02-4,93 (м, 2Н), 4,36 (с, 1Н), 3,18 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,15-2,01 (м, 1Н), 1,89 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,34 (с, 3Н), 1,08 (с, 9Н), 0,93 (д, 1=4,8 Гц, 3Н), 0,91 (д, 1=4,7 Гц, 3Н).
С31Н46М4О5З2 расч. т0=618,29; найдено [М+Н]+=619,24.
Пример 51. (З,Е)-М-(4-Гидроксифенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((З)-М,3,3-триметил-2-((З)-3метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
- 53 029818
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 4-(третбутилдиметилсилилокси)бензолсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-а4) δ 7,89 (д, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,55 (д, 1=7,0 Гц, 1Η), 7,47 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,3 Гц, 1Η), 6,91 (д, 1=8,9 Гц, 2Н), 6,46 (д, 1=9,2 Гц, 1Η), 4,97 (д, 1=10,2 Гц, 1Η), 4,92 (с, 1Η),
4,33 (с, 1Η), 3,16 (с, 3Н), 2,50 (с, 3Н), 2,11 -2,00 (м, 1Η), 1,87 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,36 (с, 3Н),
1,07 (с, 9Н), 0,92 (д, 1=6,5 Гц, 4Η),0,89(λ 1=6,7 Гц, 3Η).
СззΗ48N4О6δ расч. т//=628,33; найдено [М+Н]+=629,38.
Пример 52. 4-(Тритилтиометил)бензонитрил
(52)
Тритилмеркаптан (1,48 г, 5,36 ммоль, 1,05 экв.) в ТГФ (5 мл) по капле добавляли к перемешиваемой суспензии гидрида натрия (60% дисперсия в минеральном масле, 214 мг, 5,36 ммоль, 1,05 экв.) в ТГФ (5 мл) под Ν2 при 0°С. Через 15 мин добавляли 4-(бромметил)бензонитрил (1,00 г, 5,10 ммоль, 1,0 экв.) в ТГФ (5 мл), и реакцию оставляли при кт. Через 1 ч ТСХ показала полное превращение исходного материала. Реакцию гасили, добавляя насыщенный хлорид аммония, затем немного дН2О. Смесь три раза экстрагировали эфиром, промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия и концентрировали до вязкого желтого масла. Очистка флеш-хроматографией обеспечивала указанное в заголовке соединение (1,76 г, 88%) как светло-белый порошок.
Ή ЯМР (400 МГц, хлороформ-ά) δ 7,52 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,47 (д, 1=7,1 Гц, 6Н), 7,33 (т, 1=7,5 Гц, 6Н), 7,26 (т, 1=7,2 Гц, 3Н), 7,19 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 3,40 (с, 2Н).
т/ζ расч. для €27Η21Ν8=391,14. Найдено [М+№]+=414,13. К£=0,32 (10% ЕЮАсШех).
Пример 53. 1-(4-(Тритилтиометил)фенил)циклопропанамин
4-(Тритилтиометил)бензонитрил (1,47 г, 3,75 ммоль, 1,0 экв.) переносили в 40 мл ТГФ в атмосфере Ν2, затем охлаждали до -78°С. К этому раствору добавляли Т1(О-1Рг)4 (1,21 мл, 4,13 ммоль, 1,1 экв.), затем по капле 5 мин добавляли этилмагнийбромид (3М, 2,75 мл, 8,26 ммоль, 2,2 экв.). Баню с сухим льдом удаляли, и оставляли раствор нагреваться до кт. Через 45 мин при кт к очень темной реакционной смеси добавляли ВР3-Е12О (0,93 мл, 7,51 ммоль, 2,0 экв.). После перемешивания еще 2,5 ч реакцию гасили 5 мл 2М ΗίΤ после чего рН корегировали сильным основанием, используя около 15 мл 2М №ОШ К смеси добавляли воду, затем ее три раза экстрагировали 75 мл ЕЮАс, один раз промывали дН2О, один раз насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия и концентрировали до прозрачного масла. Материал очищали с помощью флеш-хроматографии, получая указанное в заголовке соединение (680 мг, 36%) как прозрачное масло.
Ή ЯМР (400 МГц, хлороформ-ά) δ 7,49 (д, 1=7,8 Гц, 6Н), 7,33 (т, 1=7,7 Гц, 6Н), 7,26 (т, 1=7,2 Гц, 3Н), 7,20 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,11 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 3,32 (с, 2Н), 1,06 (дд, 1=7,9, 5,0 Гц, 2Н), 0,95 (дд, 1=7,9, 4,7 Гц, 2Н).
т/ζ расч. для €29Η27Ν8=421,19. Найдено [М+Н]+=422,19. К(=0,21 (50% ЕЮАсШех).
Пример 54. 2,2,2-Трифтор-N-(1-(4-(тритилтиометил)фенил)циклопропил)ацетамид
К перемешиваемому раствору 1-(4-(тритилтиометил)фенил)циклопропанамина (680 мг, 1,61 ммоль, 1,0 экв.) в СИ2С12 добавляли трифторуксусный ангидрид (0,448 мл, 3,22 ммоль, 2,0 экв.) и триэтиламин (0,45 мл, 3,22 ммоль, 2,0 экв.). Через два часа ТСХ и ВЭЖХ показала полное превращение исходного материала. Реакцию гасили, добавляя 3 мл NаΗСО3, затем добавляли немного дН2О, и смесь экстрагировали три раза СИ2С12. Объединенные органические растворы промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия и концентрировали до желтой пены, получая указанное в заголовке соединение (715 мг, 86%) с достаточной чистотой для перенесения на следующую стадию.
- 54 029818 !Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-б) δ 7,48 (д, 1=7,7 Гц, 6Н), 7,32 (т, 1=7,6 Гц, 6Н), 7,25 (т, 1=7,2 Гц, 3Н), 7,19 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,10 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 6,83 (с, 1Н), 3,31 (с, 2Н), 1,40-1,24 (м, 4Н).
т/ζ расч. для С31Η26Ρ3NО8=517,17. Найдено [М+№]+=540,25. К(=0,71 (50% ЕЮАс/Нех).
Пример 55. 2,2,2-Трифтор-N-( 1-(4-(меркаптометил)фенил)циклопропил)ацетамид
2,2,2-Трифтор-N-(1-(4-(тритилтиометил)фенил)циклопропил)ацетамид (715 мг, 1,38 ммоль, 1,0 экв.) в 5 мл СН2С12 обрабатывали 2,5 мл ТФУ. Через 1 мин добавляли 'ПР8Н (0,42 мл, 2,1 ммоль, 1,5 экв.), вызывая появление желтого цвета. Через 30 мин ТСХ показала, что реакция завершилась. Смесь концентрировали, затем один раз упаривали с СН2С12 и дважды с толуолом. Остаток очищали с помощью флешхроматографии, получая указанное в заголовке соединение (261 мг, 69%) как твердое вещество белого цвета.
!Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-б) δ 7,35-7,23 (м, 4Н), 6,87 (с, 1Н), 3,74 (д, 1=7,6 Гц, 2Н), 1,77 (т, 1=7,6 Гц, 1Н), 1,36 (с, 4Н).
К(=0,47 (20% ЕЮАс/Нех).
Пример 56. 2,2,2-Трифтор-N-(1-(4-(сульфамоилметил)фенил)циклопропил)ацетамид
К перемешиваемому раствору 2,2,2-трифтор-N-(1-(4-(меркаптометил)фенил)циклопропил)ацетамида (220 мг, 0,799 ммоль, 1,0 экв.) в ацетонитриле добавляли дН2О (0,029 мл, 1,6 ммоль, 2,0 экв.), тетрабутилхлорид аммония (110 мг, 0,40 ммоль, 0,5 экв.), затем Ν-хлорсукцинимид (320 мг, 2,40 ммоль, 3,0 экв.). Через 20 мин в ТСХ не наблюдался исходный материал. Через 90 мин добавляли концентрированный ЯЩОН (0,18 мл, 3,2 ммоль, 4,0 экв.). Через 10 мин добавляли 1 мл и смесь экстрагировали три раза ЕЮАс. Объединенные органические растворы дважды промывали дН2О, один раз насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия и концентрировали до прозрачного масла. Остаток очищали с помощью флеш-хроматографии, получая указанное в заголовке соединение (192 мг, 74%) как твердое вещество белого цвета.
!Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-б4) δ 10,21 (с, 1Н), 7,31 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,16 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 6,85 (с, 2Н), 4,23 (с, 2Н), 1,27 (дт, 1=6,1, 2,3 Гц, 4Н).
К(=0,26 (50% ЕЮАс/Нех).
Пример 57. (8,Е)-2,5-Диметил-N-(4-(1-(2,2,2-трифторацетамидо)циклопропил)бензилсульфонил)-4((8)-Ы,3,3-триметил-2-((8)-3 -метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и примера 56, используя общие методики и 7.
!Н ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,56 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,48 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,4 Гц, 1Н), 7,32 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 7,28 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 6,37 (д, 1=9,6 Гц, 1Н), 5,07 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,94 (с, 1Н), 4,72 (с, 2Н), 4,37 (с, 1Н), 3,13 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,08-1,96 (м, 1Н), 1,96 (д, 1=1,5 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н),
1,40 (с, 3Н), 1,35-1,27 (м, 4Н), 1,10 (с, 9Н), 0,92 (д, 1=7,1 Гц, 3Н), 0,89 (д, 1=6,8 Гц, 3Н).
13С ЯМР (101 МГц, МеОЭ) δ 170,93, 168,81, 165,64, 143,58, 142,24, 136,87, 134,19, 130,64, 129,00, 127,63, 127,53, 125,95, 125,61, 69,90, 57,10, 57,02, 56,39, 40,73, 34,55, 34,25, 32,80, 30,60, 29,33, 28,39, 25,57, 20,11, 18,38, 18,34, 16,21, 16,15, 14,04, 12,85.
Сз9Η54рзN5О68 расч. т^=777,37; найдено [М+Н]+=778,55.
Пример 58. (8,Е)-N-(4-(1-Аминоциклопропил)бензилсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-N,3,3триметил-2-((8)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
- 55 029818
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и примера 56, используя общие методики 2, 3 и 7.
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,56 (д, 1=8,7 Гц, 2Н), 7,51 (с, 4Н), 7,47 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 6,49 (д, 1=9,5 Гц, 1Н), 5,07 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,94 (с, 1Н), 4,81 (д, 1=14,0 Гц, 1Н), 4,77 (д, 1=13,8 Гц, 1Н), 4,39 (с, 1Н), 3,16 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,11-1,99 (м, 1Н), 1,97 (д, 1=1,5 Гц, 3Н), 1,49 (с, 8Н), 1,45-1,41 (м, 2Н), 1,40 (с, 3Н), 1,34-1,26 (м, 2Н), 1,10 (с, 9Н), 0,93 (д, 1=6,2 Гц, 3Н), 0,90 (д, 1=6,3 Гц, 3Н).
13С ЯМР (101 МГц, МеОЭ) δ 170,94, 169,00, 165,69, 143,57, 137,54, 137,12, 134,38, 131,43, 129,66, 128,98, 127,51, 125,98, 69,85, 65,51, 57,68, 57,15, 56,39, 40,72, 36,16, 34,51, 32,80, 30,68, 29,42, 28,40, 25,61, 20,14, 18,42, 18,39, 14,05, 12,86, 11,80.
С3-Н4^Ю58 расч. т//=681.39; найдено [М+Н]+=682,49.
Пример 59. 1-Фенилциклопропанамин
Указанное в заголовке соединение получали, как описано в Вейик Р., 8/утошак 1.1. Огд. СЬет., 2003, 68, 7133-7136, из бензонитрила (1,0 мл, 9,7 ммоль), получая 270 мг (21%).
!Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-й) δ 7,44-7,28 (м, 4Н), 7,27-7,15 (м, 1Н), 1,18-1,06 (м, 2Н), 1,07-0,95 (м, 2Н).
К(=0,28 (5% (5% ЫН4ОН/МеОН)/СН2С12).
Пример 60. 2,2,2-Трифтор-^(1-фенилциклопропил)ацетамид
К перемешиваемому раствору 1-фенилциклопропанамина (270 мг, 2,03 ммоль, 1,0 экв.) в диоксане (5 мл) добавляли трифторуксусный ангидрид (0,310 мл, 2,23 ммоль, 1,1 экв.). Через 5 мин ТСХ показала полное превращение исходного материала. Смесь концентрировали, затем упаривали один раз с СН2С12 и один раз с толуолом, получая указанное в заголовке соединение (453 мг, 97%) как хлопьевидный белый порошок.
!Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-й) δ 7,47-7,15 (м, 5Н), 6,88 (с, 1Н), 1,65 (с, 4Н).
т/ζ расч. для СпН10Р^О=229,07. Найдено [М+Н]+=230,14. К(=0,82 (5% (5%
ЫЩОН/МеОНуСЩСу.
Пример 61. 2,2,2-Трифтор-^( 1-(4-сульфамоилфенил)циклопропил)ацетамид
К перемешиваемой хлорсульфоновой кислоте (0,78 мл, 11,8 ммоль, 6,0 экв.) при 0°С порциями добавляли твердый 2,2,2-трифтор^-(1-фенилциклопропил)ацетамид (450 мг, 1,96 ммоль, 1,0 экв.), поддерживая низкую температуру. После завершения добавления смесь нагревали до 50°С. Через 10 мин выделение газа прекращалось, и реакцию оставляли охлаждаться. Смесь медленно добавляли в стакан со льдом, помня о разбрызгивании. Образовавшееся на льду твердое вещество отфильтровывали. Это твердое вещество сушили в вакууме и затем переносили в ТГФ (4 мл). Добавляли концентрированный NН4ΟН (0,44 мл, 7,85 ммоль, 4,0 экв.), и раствор становился зелено-черным. Через 2 мин ТСХ показал полное использование сульфонилхлоридного промежуточного. Добавляли 2М НС1 до обесцвечивания, затем смесь экстрагировали три раза ЕЮАс, промывали один раз насыщенным №-1НСО3. один раз насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом натрия и концентрировали до хлопьевидного твердого вещества. Неочищенный материал очищали с помощью флеш-хроматографии, получая указанное в заголовке соединение (235 мг, 39%) как твердое вещество белого цвета.
!Н ЯМР (400 МГц, ДМСО-й6) δ 10,28 (с, 1Н), 7,76 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 7,32 (д, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,31 (с, 2Н), 1,42-1,35 (м, 2Н), 1,35-1,27 (м, 2Н).
т/ζ расч. для С11Н11Р^2Оз8=308,04. Найдено [М+Н]+=309,07. К(=0,27 (50% ЕЮАс/Нех).
- 56 029818
Пример 62. (8,Е)-2,5-Диметил-Н-(4-(1-(2,2,2-трифторацетамидо)циклопропил) фенилсульфонил)-4-
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и примера 61, используя общие методики и 7.
'II ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 8,00 (д, 1=8,6 Гц, 2Н), 7,55 (д, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,48 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,48-7,33 (м, 4Н), 6,47 (дд, 1=9,4, 1,6 Гц, 1Н), 5,00 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,92 (с, 1Н), 4,35 (с, 1Н), 3,15 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,11-2,00 (м, 1Н), 1,86 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,47 (д, 1=6,2 Гц, 3Н), 1,45 (с, 2Н), 1,43 (с, 2Н), 1,38 (с, 3Н), 1,06 (с, 9Н), 0,91 (д, 1=6,1 Гц, 3Н), 0,89 (д, 1=6,2 Гц, 3Н).
С^ЩоР^ОбЗ расч. т//=763,36; найдено [М+Н]+=764,45.
Пример 63. (8,Е)-Ы-(4-(1-Аминоциклопропил)фенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-Н,3,3-триметил2-((8)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2,2,2-трифтор-Ы-(1-(4сульфамоилфенил)циклопропил)ацетамида, используя общие методики 2, 3 и 7.
'II ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 8,13 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 7,66 (д, 1=8,6 Гц, 2Н), 7,55 (д, 1=7,2 Гц, 2Н), 7,47 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,2 Гц, 1Н), 6,50 (дд, 1=9,4, 1,7 Гц, 1Н), 5,02 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,93 (д, 7=4,9 Гц, 1Н), 4,38 (с, 1Н), 3,16 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,12-1,99 (м, 1Н), 1,84 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,51-1,46 (м, 5Н), 1,46-1,42 (м, 2Н), 1,38 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,91 (дд, 1=6,7, 1,7 Гц, 6Н).
С36Н53К5О58 расч. т//=667,38; найдено [М+Н]+=668,40.
Пример 64. (8,Е)-2,5-Диметил-Н-(2-метилбензилсульфонил)-4-((8)-Н,3,3-триметил-2-((8)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2-метилбензилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
'ΐ I ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 7,61-7,52 (м, 2Н), 7,48 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 7,307,23 (м, 3Н), 7,22-7,14 (м, 1Н), 6,48 (дд, 1=9,3, 1,7 Гц, 1Н), 5,08 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,94 (с, 1Н), 4,81 (с, 2Н),
4,34 (с, 1Н), 3,15 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,48 (с, 3Н), 2,08-2,00 (м, 1Н), 1,98 (д, 1=1,1 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н),
1,40 (с, 3Н), 1,10 (с, 9Н), 0,93 (д, 1=6,6 Гц, 3Н), 0,91 (д, 1=6,6 Гц, 3Н).
С35Н52ЩО58 расч. т//=640,37; найдено [М+Н]+=641,41.
Пример 65. (8,Е)-2,5-Диметил-Н-(4-нитробензилсульфонил)-4-((8)-Н,3,3-триметил-2-((8)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 4-нитробензилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
'II ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 8,18 (д, 1=8,7 Гц, 2Н), 7,64 (д, 1=8,7 Гц, 2Н), 7,52 (д, 1=7,5 Гц, 2Н), 7,42 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,31 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 6,55 (д, 1=9,4 Гц, 1Н), 5,04 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,92 (с, 1Н), 4,63 (с, 2Н), 3,08 (с, 3Н), 2,32 (с, 3Н), 1,95 (дт, 1=11,4, 6,6 Гц, 4Н), 1,89 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,38 (с,
- 57 029818
3Н), 1,05 (с, 9Н), 0,89 (д, 1=6,5 Гц, 3Н), 0,85 (д, 1=6,5 Гц, 3Н).
(XI ΚΝ,Θ δ расч. т//=671,34; найдено [М+Н]+=672,36.
Пример 66. ^,Е)-Ы-(4-Хлорбензилсульфонил)-2,5-диметил-4-(^)-Н,3,3-триметил-2-(^)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 4-хлорбензилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
'Η ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,56 (д, 1=7,9 Гц, 2Н), 7,48 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,44-7,34 (м, 5Н), 6,39 (д, 1=9,5 Гц, 1Η), 5,06 (т, 1=10,0 Гц, 1Η), 4,94 (с, 1Η), 4,75 (с, 2Н), 4,35 (с, 1Η), 3,13 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,06-1,95 (м, 1Η), 1,95 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,91 (д, 1=6,1 Гц, 3Н), 0,89 (д, 1=5,9 Гц, 3Н).
ϋ^Η^ϋΙΝ^δ расч. т//=660,31; найдено [М+Н]+=661,32.
Пример 67. ^,Е)-2,5-Диметил-Х-(фенетилсульфонил)-4-(^)-Х,3,3-триметил-2-(^)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и гомобензилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
'Η ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,56 (д, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,48 (т, 1=7,5 Гц, 2Н), 7,38 (т, 1=7,4 Гц, 1Η), 7,34-7,28 (м, 2Н), 7,28-7,20 (м, 3Н), 6,47 (дд, 1=9,2, 1,7 Гц, 1Η), 5,03 (т, 1=10,0 Гц, 1Η), 4,94 (с, 1Η), 4,36 (д, 1=2,3 Гц, 2Н), 3,78 (тд, 1=7,5, 4,1 Гц, 2Н), 3,17 (с, 3Н), 3,12 (т, 1=7,8 Гц, 2Н), 2,51 (с, 3Н), 2,14-2,01 (м, 1Η), 1,89 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,94 (д, 1=6,6 Гц, 3Н), 0,91 (д, 1=6,6 Гц, 3Н).
СМ ЬХОЬ расч. т//=640,37; найдено [М+Н]+=641,36.
Пример 68. ^,Е)-Х-(4-Бромбензилсульфонил)-2,5-диметил-4-(^)-Х,3,3-триметил-2-(^)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 4-бромбензилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
'II ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,60-7,51 (м, 4Н), 7,48 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,39 (с, 1Η), 7,31 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 6,38 (д, 1=9,3 Гц, 1Η), 5,06 (т, 1=10,0 Гц, 1Η), 4,93 (с, 1Η), 4,74 (с, 2Н), 4,36 (с, 1Η), 3,13 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,03-1,98 (м, 1Η), 1,95 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,91 (д, 1=6,1 Гц, 3Н), 0,89 (д, 1=6,3 Гц, 3Н).
ί.’3.·|Η.·ΐ9ΒΓΝ.·|Θ5δ расч. т//=704,26; найдено [М+Н]+=705,23.
Пример 69. ^,Е)-Х-(4-Цианобензилсульфонил)-2,5-диметил-4-(^)-Х,3,3-триметил-2-(^)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 4-цианобензилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
- 58 029818 1Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,77 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,64-7,53 (м, 4Н), 7,48 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,38 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 6,41 (дд, 1=9,3, 1,7 Гц, 1Н), 5,05 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,94 (с, 1Н), 4,87 (с, 2Н), 4,36 (с, 1Н), 3,14 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,06-1,98 (м, 1Н), 1,95 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,91 (д, 1=4,0 Гц, 3Н), 0,90 (д, 1=4,0 Гц, 3Н).
Сз5Н49М5О58 расч. т//=651,35; найдено [М+Н]+=652,38.
Пример 70. (8,Е)-2,5-Диметил-М-(3-нитробензилсульфонил)-4-((8)-М,3,3-триметил-2-((8)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 3-нитробензилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 8,29 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 8,26 (с, 1Н), 7,83 (д, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,67 (т, 1=8,0 Гц, 1Н), 7,56 (д, 1=7,2 Гц, 2Н), 7,48 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,38 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 6,43 (дд, 1=9,4, 1,7 Гц, 1Н), 5,05 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,93 (с, 2Н), 4,93 (с, 1Н), 4,36 (с, 1Н), 3,13 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,08 - 1,98 (м, 1Н), 1,96 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,48 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,89 (д, 1=6,6 Гц, 3Н), 0,88 (д, 1=6,6 Гц, 3Н).
С34Н49М5О78 расч. т//=671,34; найдено [М+Н]+=672,39.
Пример 71. (8,Е)-М-(4-трет-бутилбензилсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-М,3,3-триметил-2-((8)-3метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 4-т-бутилбензилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
' Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,56 (д, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,48 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,43 (д, 1=8,2 Гц, 2Н),
7,38 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 7,30 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 6,39 (дд, 1=9,4, 1,6 Гц, 1Н), 5,07 (Т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,93 (с, 1Н), 4,72 (с, 2Н), 4,37 (с, 1Н), 3,13 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,06-1,98 (м, 1Н), 1,96 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,33 (с, 9Н), 1,10 (с, 9Н), 0,92 (д, 1=6,6 Гц, 3Н), 0,89 (д, 1=6,5 Гц, 3Н).
С38Н58М4О58 расч. т//=682,41; найдено [М+Н]+=683,47.
Пример 72. (8,Е)-2,5-Диметил-М-(2-нитробензилсульфонил)-4-((8)-М,3,3-триметил-2-((8)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2-нитробензилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 8,03 (дд, 1=8,0, 1,4 Гц, 1Н), 7,72 (тд, 1=7,5, 1,5 Гц, 1Н), 7,65 (тд, 1=7,7, 1,6 Гц, 1Н), 7,60 (дд, 1=7,6, 1,6 Гц, 1Н), 7,56 (д, 1=7,2 Гц, 2Н), 7,48 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,38 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 6,43 (дд, 1=9,4, 1,6 Гц, 1Н), 5,31 (д, 1=14,2 Гц, 1Н), 5,26 (д, 1=15,3 Гц, 1Н), 5,06 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,94 (с, 1Н), 4,37 (с, 1Н), 3,15 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,08-1,98 (м, 1Н), 1,96 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н),
1,39 (с, 3Н), 1,10 (с, 9Н), 0,92 (д, 1=6,6 Гц, 3Н), 0,90 (д, 1=6,6 Гц, 3Н).
С34Н49МО78 расч. т//=671,34; найдено [М+Н]+=672,39.
Пример 73. (8,Е)-2,5-Диметил-М-(4-нитрофенетилсульфонил)-4-((8)-М,3,3-триметил-2-((8)-3-метил2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
- 59 029818
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 4-нитро-гомобензилсульфонамида, используя общие методики 2 и 7.
Ίΐ ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 8,19 (д, 1=8,7 Гц, 2Н), 7,58-7,51 (м, 4Н), 7,47 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 6,47 (дд, 1=9,5, 1,7 Гц, 1Н), 5,00 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,93 (с, 1Н), 4,36 (с, 1Н), 3,91 (дд, 1=14,9, 8,5 Гц, 1Н), 3,84 (дд, 1=12,9, 8,5 Гц, 1Н), 3,28 (т, 1=7,5 Гц, 2Н), 3,16 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,12-1,98 (м, 1Н), 1,87 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,48 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,08 (с, 9Н), 0,91 (д, 1=6,6 Гц, 3Н), 0,91 (д, 1=6,6 Гц, 3Н).
С;,11,-\,О 8 расч. т//=685.35; найдено [М+Н]+=686,38.
Пример 74. Метил-4-хлор-3-Ш-((8,Е)-2,5-диметил-4-((8)-у3,3-триметил-2-((8)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-еноил)сульфамоил)бензоат
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и метил-4-хлор-3-сульфамоилбензоат, используя общие методики 2 и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 8,80 (д, 1=2,1 Гц, 1Н), 8,20 (дд, 1=8,3, 2,1 Гц, 1Н), 7,71 (д, 1=8,3 Гц, 1Н), 7,59-7,52 (м, 2Н), 7,47 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,40-7,32 (м, 1Н), 6,63-6,56 (м, 1Н), 5,02 (т, 7=10,0 Гц, 1Н),
4.37 (с, 1Н), 3,98 (с, 3Н), 3,18 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,13-2,00 (м, 1Н), 1,86 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,47 (с, 3Н),
1.37 (с, 3Н), 1,06 (с, 9Н), 0,96-0,87 (м, 6Н).
13С ЯМР (101 МГц, метанол-б4) δ 170,87, 165,65, 164,87, 143,61, 137,01, 136,04, 134,29, 133,23, 131,81, 129,16, 128,98, 128,88, 127,50, 125,98, 69,81, 65,53, 57,39, 56,35, 56,15, 55,37, 51,86, 40,70, 34,51, 32,77, 30,80, 29,39, 28,44, 26,18, 25,56, 20,06, 18,40, 14,06, 12,74.
С35Н49СШ4О78 расч. тА=704,30; найдено [М+Н]+=705,25, [М+№]+=727,25.
Пример 75. 2,2,2-Трифтор-^(4-(сульфамоилметил)бензил)ацетамид
Указанное в заголовке соединение синтезировали из коммерчески доступного (4(аминометил)фенил)метансульфонамида и ТРАА, используя общую методику 1.
ΊI ЯМР (400 МГц, ацетон-б6) δ 9,05 (с, 1Н), 7,48-7,40 (м, 2Н), 7,40-7,32 (м, 2Н), 6,17 (с, 1Н), 4,56 (д, 1=6,1 Гц, 2Н), 4,35 (с, 2Н).
Пример 76. (8,Е)-2,5-Диметил-^(4-((2,2,2-трифторацетамидо)метил) бензилсульфонил)-4-((8)^3,3-триметил-2-((8)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и примера 75, используя общие методики и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,57-7,49 (м, 2Н), 7,45 (т, 1=7,5 Гц, 2Н), 7,33 (п, 1=8,8, 7,9 Гц, 5Н),
6,37 (д, 1=9,7 Гц, 1Н), 5,09-5,00 (м, 1Н), 4,69 (с, 2Н), 4,44 (с, 2Н), 4,30 (с, 1Н), 3,10 (с, 3Н), 2,45 (д, 1=17,5 Гц, 3Н), 2,02-1,87 (м, 4Н), 1,46 (с, 3Н), 1,37 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,95-0,81 (м, 6Н).
19Р ЯМР (377 МГц, метанол-б4) δ -76,94, -77,24.
С3,Н52ВДО68 расч. тА=751,36 аем; найдено [М+Н]+=752,46, [М+№]+=774,38.
Пример 77. (8,Е)-^(4-(Аминометил)бензилсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-у3,3-триметил-2-((8)-3метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Получали из примера 3 и примера 75, используя общие методики 2, 3 и 7.
- 60 029818
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,60-7,54 (м, 2Н), 7,54-7,50 (м, 4Н), 7,47 (д, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,4 Гц, 1Н), 6,49 (дд, 1=9,5, 1,5 Гц, 1Н), 5,07 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,94 (с, 1Н), 4,83 (д, 1=14,3 Гц, 1Н), 4,79 (д, 1=13,9 Гц, 1Н), 4,38 (с, 1Н), 4,16 (с, 2Н), 3,16 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,10-2,00 (м, 1Н), 1,97 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,40 (с, 3Н), 1,10 (с, 9Н), 0,93 (д, 1=6,9 Гц, 3Н), 0,91 (д, 1=7,0 Гц, 3Н).
С35Н53ЩО58 расч. μ/ζ=655,4; найдено [М+Н]+=656,3, [М+2Н]2+=328,8.
Пример 78. 2,2,2-Трифтор-^(4-(сульфамоилметил)фенил)ацетамид
Указанное в заголовке соединение синтезировали из коммерчески доступного (4аминофенил)метансульфонамида и ТЕАА, используя общую методику 1.
Ίΐ ЯМР (400 МГц, ДМСО-бе) δ 11,31 (с, 1Н), 7,79-7,51 (м, 2Н), 7,51-7,23 (м, 2Н), 6,85 (с, 2Н), 4,27 (с, 2Н).
Пример 79. (8,Е)-2,5-Диметил-^(4-(2,2,2-трифторацетамидо)бензилсульфонил)-4-((8)-Ц3,3триметил-2-((8)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо) бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и примера 78, используя общие методики и 7.
'Н ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,68 (д, 1=8,6 Гц, 2Н), 7,54 (д, 1=7,1 Гц, 2Н), 7,45 (т, 1=7,6 Гц, 2Н),
7,37 (дд, 1=10,6, 5,0 Гц, 3Н), 6,34 (д, 1=9,4 Гц, 1Н), 5,04 (т, 1=10,1 Гц, 2Н), 4,74 (с, 2Н), 4,35 (с, 1Н), 3,10 (с, 3Н), 2,49 (с, 3Н), 2,02-1,94 (м, 1Н), 1,93 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,37 (с, 3Н), 1,06 (с, 9Н), 0,88 (д, 1=6,3 Гц, 3Н), 0,86 (с, 3Н).
19Е ЯМР (377 МГц, метанол-б4) δ -76,97, -77,05.
С36Н50Е3ЩО68 расч. μ/ζ=737,34; найдено [М+Н]+=738,38, [М+№]+=760,35.
Пример 80. (8,Е)-^(4-Аминобензилсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-Ц3,3-триметил-2-((8)-3-метил2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и примера 78, используя общие методики 2, 3 и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,56 (д, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,48 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 7,20 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 6,87 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 6,39 (д, 1=9,4 Гц, 1Н), 5,07 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,95 (с, 1Н), 4,64 (с, 2Н), 4,38 (с, 1Н), 3,14 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,07-1,98 (м, 1Н), 1,96 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н),
1,39 (с, 3Н), 1,10 (с, 9Н), 0,92 (д, 1=6,7 Гц, 3Н), 0,90 (д, 1=6,4 Гц, 3Н).
С34Н51ЩО58 расч. тА=641,4; найдено [М+Н]+=642,3.
Пример 81. 4-(Азидометил)бензолсульфонамид
К перемешиваемому раствору 4-(бромметил)бензолсульфонамида (0,50 г) в Ν,Ν-диметилформамид (1мл) добавляли азид натрия (0,20 г). Суспензию нагревали до 50°С на протяжении 3 ч, после чего растворитель удаляли при пониженном давлении. Остаток разделяли между этилацетатом и водой. Органическую фазу промывали насыщенным раствором хлорида натрия, сушили над сульфатом магния, фильтровали и концентрировали досуха, получая указанное в заголовке соединение как сироп, который твердел при стоянии.
'Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-б) δ 8,06-7,91 (м, 2Н), 7,58-7,44 (м, 2Н), 4,96 (с, 2Н), 4,48 (с, 2Н).
Пример 82. 4-(Аминометил)бензолсульфонамид Η,Ν <\ /)— 3Ο2ΝΗ2
- 61 029818
К раствору 4-(азидометил)бензолсульфонамида (0,354 г) в метаноле (10 мл) в круглодонной колбе, оснащенной магнитной мешалкой, добавляли 10% Рб/С (~0,05г). Колбу вакуумировали при пониженном давлении и наполняли водородом. Это вакуумирование и наполнение повторяли три раза, после чего суспензию оставляли стоять на протяжении ночи. Через 16 ч ТСХ анализ показал полное использование исходного материала. Реакцию разводили метанолом (40 мл), добавляли целлит, и смесь фильтровали через стеклянный фильтр. Полученный раствор концентрировали досуха. 1Н ЯМР показал, что материал был достаточно чистым после этой стадии для дальнейшего использования без очистки.
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 7,77 (м, 2Н), 7,53 (м, 2Н), 5,76 (с, 2Н), 3,76 (д, 6=11,9 Гц, 2Н).
Пример 83. 2,2,2-Трифтор-Н-(4-сульфамоилбензил)ацетамид
Указанное в заголовке соединение синтезировали с помощью реакции 4(аминометил)бензолсульфонамида с ТРАА согласно общей методике 1 с 1Н ЯМР-спектром, который усложнен ротамерами.
Ή ЯМР (400 МГц, ДМСО-б6) δ 7,91-7,75 (м, 2Н), 7,55-7,31 (м, 4Н), 4,72 (м, 2Н), 4,47 (д, 1=6,0 Гц, 1Н), 3,18 (с, 2Н).
Пример 84. (§,Е)-2,5-Диметил-Н-(4-((2,2,2-трифторацетамидо)метил) фенилсульфонил)-4-((§)N,3,3-триметил-2-((§)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и примера 83, используя общие методики и 7.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 8,02 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 7,58-7,42 (м, 7Н), 7,35 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 6,46 (д, 1=8,5 Гц, 1Н), 4,97 (д, 1=10,4 Гц, 1Н), 4,54 (с, 2Н), 4,33 (с, 1Н), 3,14 (с, 3Н), 2,48 (с, 3Н), 2,11-1,97 (м, 1Н), 1,83 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,53 (с, 1Н), 1,44 (с, 3Н), 1,34 (с, 3Н), 1,04 (с, 9Н), 0,89 (д, 1=3,9 Гц, 3Н), 0,88 (д, 1=4,1 Гц, 3Н).
19Р ЯМР (377 МГц, метанол-б4) δ -76,94, -77,26.
СЩзоР^О^ расч. т//=737,34; найдено [М+Н]+=738,39, [М+№]+=760,41.
Пример 85. (§,Е)-Н-(4-(Аминометил)фенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((§)-Н,3,3-триметил-2-((§)-3метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Получали из примера 3 и примера 83, используя общие методики 2, 3 и 7.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 8,13 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,68 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,55 (д, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,47 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 6,51 (дд, 1=9,2, 1,8 Гц, 1Н), 5,01 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,37 (с, 1Н), 4,24 (с, 2Н), 3,17 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,13-1,97 (м, 1Н), 1,84 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,47 (с, 3Н), 1,37 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,91 (дд ,1=6,7, 2,0 Гц, 7Н).
СА.-ЦяУОЗ расч. т//=641,36; найдено [М+Н]+=642,4.
Пример 86. (§,Е)-И-(Бензилсульфонил)-4-((§)-2-((§)-3-(4-бромфенил)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)-Н,3,3-триметилбутанамидо)-2,5-диметилгекс-2-енамид
- 62 029818
Указанное в заголовке соединение получали из примера 38 и (8,Ε)-4-((8)-2-амино-N,3,3триметилбутанамидо)-N-(бензилсульфонил)-2,5-диметилгекс-2-енамида, используя общие методики 4 и 7.
!Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,62 (т, 1=9,2 Гц, 2Н), 7,50-7,43 (м, 2Н), 7,38 (д, 1=2,2 Гц, 5Н), 6,38 (дд, 1=9,5, 1,8 Гц, 1Н), 5,05 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,92 (с, 1Н), 4,75 (д, 1=2,2 Гц, 2Н), 4,30 (с, 1Н), 3,12 (с, 3Н), 2,53 (с, 3Н), 2,06-1,97 (м, 1Н), 1,95 (д, 1=1,5 Гц, 3Н), 1,47 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,94-0,86 (м, 6Н).
С;1 ΚΒιΝ2ί),8 расч. ι/ζ=704,26 аем; найдено [М+Н]+=705,29, [Μ+№]+=727,36.
Пример 87. (8,Е)-4-((8)-2-((8)-3-(4'-ацетилбифенил-4-ил)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)N,3,3-триметилбутанамидо)-N-(бензилсульфонил)-2,5-диметилгекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали согласно общей методике 8 из Вос-защищенного примера 86 и 4-ацетилфенилбороновой кислоты.
!Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 8,15-8,08 (м, 2Н), 7,86 - 7,76 (м, 4Н), 7,66 (дд, 7=14,7, 8,4 Гц, 2Н),
7,38 (д, 1=4,9 Гц, 5Н), 6,39 (д, 1=9,3 Гц, 1Н), 5,05 (т, 1=10,1 Гц, 1Н), 4,94 (с, 1Н), 4,75 (д, 1=4,1 Гц, 2Н),
4,37 (д, 1=16,1 Гц, 1Н), 3,13 (д, 1=3,4 Гц, 3Н), 2,67 (с, 3Н), 2,53 (д, 1=11,6 Гц, 3Н), 2,01 (с, 1Н), 1,96 (д, 1=1,5 Гц, 3Н), 1,54 (д, 1=3,7 Гц, 3Н), 1,44 (с, 3Н), 1,09 (д, 1=2,7 Гц, 9Н), 0,96-0,83 (м, 6Н).
С^Щ^О^ расч. 111//744,39 аем; найдено [М+Н]+=745,42, (Μ+№Γ=767,36.
Пример 88. (8,Ε)-N-(Бензилсульфонил)-4-((8)-2-((8)-3-(4'-метоксибифенил-4-ил)-3-метил-2(метиламино)бутанамидо)-N,3,3-триметилбутанамидо)-2,5-диметилгекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали согласно общей методике 8 из Вос-защищенного примера 86 и 4-метоксифенилбороновой кислоты.
!Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,74-7,53 (м, 6Н), 7,38 (д, 1=4,7 Гц, 5Н), 7,08-6,99 (м, 2Н), 6,43-6,35 (м, 1Н), 5,06 (с, 1Н), 4,94 (с, 1Н), 4,75 (д, 1=4,1 Гц, 2Н), 4,38 (с, 1Н), 3,86 (с, 3Н), 3,13 (с, 3Н), 2,54 (с, 3Н), 1,99 (д, 1=11,0 Гц, 1Н), 1,96 (д, 1=1,5 Гц, 3Н), 1,51 (с, 3Н), 1,43 (с, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,96-0,85 (м, 1=6,0, 5,1 Гц, 6Н).
С^Щ^О^ расч. ι/ζ=732,39 аем; найдено [М+Н]+=733,41, [Μ+№Γ=755,40.
Пример 89. (8,Ε)-N-(Бензилсульфонил)-4-((8)-2-((8)-3-(бифенил-4-ил)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)-N,3,3-триметилбутанамидо)-2,5-диметилгекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали согласно общей методике 8 из Вос-защищенного примера 86 и фенилбороновой кислоты.
!Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,86-7,51 (м, 6Н), 7,48 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,43-7,33 (м, 6Н), 6,39 (д, 1=9,5 Гц, 1Н), 5,06 (т, 1=10,1 Гц, 1Н), 4,94 (с, 1Н), 4,75 (д, 1=3,3 Гц, 2Н), 4,37 (д, 1=14,4 Гц, 1Н), 3,13 (д, 1=3,7 Гц, 3Н), 2,55 (д, 1=4,5 Гц, 3Н), 2,06-1,97 (м, 1Н), 1,96 (д, 1=1,5 Гц, 3Н), 1,52 (с, 3Н), 1,44 (д, 1=4,5 Гц, 3Н), 1,09 (д, 1=5,6 Гц, 9Н), 0,96-0,83 (м, 6Н).
С40Н54N4О58 расч. ι/ζ=702,38 аем; найдено [М+Н]+=703,40, (Μ+№Γ=725,45.
Пример 90. (8,Ε)-N-(Бензилсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-N,3,3-триметил-2-((8)-3-метил-2(метиламино)-3-(4-(4-метилстирил)фенил)бутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
- 63 029818
Указанное в заголовке соединение получали согласно общей методике 8 из Вос-защищенного примера 86 и (Е)-4-метилстирилбороновой кислоты.
' Н ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,65 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,54 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,47 (д, 1=7,8 Гц, 2Н),
7,38 (с, 5Н), 7,26-7,11 (м, 4Н), 6,39 (д, 1=9,3 Гц, 1Н), 5,06 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,97-4,91 (м, 1Н), 4,76 (с, 2Н), 4,36 (с, 1Н), 3,12 (д, 1=8,9 Гц, 3Н), 2,54 (с, 3Н), 2,37 (с, 3Н), 2,05-1,97 (м, 1Н), 1,97-1,93 (м, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,41 (с, 3Н), 1,09 (д, 1=3,5 Гц, 9Н), 0,91 (тк, 1=10,8, 4,9 Гц, 6Н).
С43Н58И4О58 расч. μ/ζ=742,41 аем; найдено [М+Н]+=743,44, [М+Иа]+=765,41.
Пример 91. (8,Е)-И-(Бензилсульфонил)-4-((8)-2-((8)-3-(4-метоксифенил)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)-И,3,3-триметилбутанамидо)-2,5-диметилгекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали согласно общей методике 9 из Вос-защищенного примера 86.
Основной диастереомер:
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,44 (дд, 1=12,9, 8,6 Гц, 2Н), 7,40-7,34 (м, 5Н), 7,00 (т, 1=8,4 Гц, 2Н), 6,38 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 5,05 (т, 1=9,9 Гц, 1Н), 4,93 (с, 1Н), 4,75 (д, 1=1,8 Гц, 2Н), 4,29 (с, 1Н), 3,84 (с,
3Н), 3,12 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,04 - 1,98 (м, 1Н), 1,95 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,45 (с, 3Н), 1,37 (с, 3Н), 1,09 (с,
9Н), 0,92-0,86 (м, 6Н).
Неосновной диастереомер:
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,44 (дд, 1=12,9, 8,6 Гц, 2Н), 7,40-7,34 (м, 5Н), 7,00 (т, 1=8,4 Гц, 2Н), 6,38 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 4,99 (т, 1=10,1 Гц, 1Н), 4,93 (с, 1Н), 4,75 (д, 1=1,8 Гц, 2Н), 4,26 (с, 1Н), 3,82 (с, 3Н), 3,11 (с, 3Н), 2,47 (с, 3Н), 2,04-1,98 (м, 1Н), 1,92 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,53 (с, 3Н), 1,48 (с, 3Н), 0,94 (с, 9Н), 0,92-0,86 (м, 6Н).
С35Н52И4О68 расч. μ/ζ=656,36 аем; найдено [М+Н]+=657,35, [М+Иа]+=679,25.
Пример 92. (8,Е)-И-(Бензилсульфонил)-4-((8)-2-((К)-3-(3-метоксифенил)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)-И,3,3-триметилбутанамидо)-2,5-диметилгекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали согласно общей методике 9 из Вос-защищенного (8,Е)И-(бензилсульфонил)-4-((8)-2-((8)-3-(3-бромфенил)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)-И,3,3-триметилбутанамидо)-2,5 -диметилгекс-2-енамида. Два диастереомерных продукта получали из диастереомерно загрязненного исходного материала и разделяли с помощью препаративной ВЭЖХ.
Основной диастереомер:
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,51-7,32 (м, 6Н), 7,14-7,07 (м, 1Н), 7,06 (т, 1=2,2 Гц, 1Н), 6,98-6,90 (м, 1Н), 6,38 (дд, 1=9,6, 1,7 Гц, 1Н), 4,99 (т, 1=10,3 Гц, 1Н), 4,93 (с, 1Н), 4,75 (д, 1=1,8 Гц, 2Н), 4,32 (с, 1Н), 3,85 (с, 3Н), 3,11 (с, 3Н), 2,47 (с, 3Н), 2,04-1,96 (м, 1Н), 1,93 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,54 (с, 3Н), 1,47 (с, 3Н), 0,96 (с, 9Н), 0,89 (дд, 1=6,6, 3,4 Гц, 6Н).
Неосновной диастереомер относится к примеру 93 (следующему далее) для 1Н ЯМР спектральных данных.
С35Н52И4О68 расч. т^=656,36 аем; найдено [М+Н]+=657,36, [М+Иа]+=679,29.
Пример 93. (8,Е)-И-(Бензилсульфонил)-4-((8)-2-((8)-3-(3-метоксифенил)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)-И,3,3-триметилбутанамидо)-2,5-диметилгекс-2-енамид
- 64 029818
Указанное в заголовке соединение получали согласно примеру 92. Два диастереомерных продукта получали из диастереомерно загрязненного исходного материала и разделяли с помощью препаративной ВЭЖХ.
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,39 (д, 1=5,5 Гц, 6Н), 7,11 (дд, 1=4,9, 2,8 Гц, 3Н), 6,38 (д, 1=9,4 Гц, 1Н), 5,06 (д, 1=9,5 Гц, 1Н), 4,93 (с, 1Н), 4,76 (с, 2Н), 4,35 (с, 1Н), 3,86 (с, 3Н), 3,13 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,05-1,97 (м, 1Н), 1,95 (д, 1=1,6 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,38 (с, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,90 (т, 1=6,6 Гц, 6Н).
С35Н52М4О68 расч. ι/ζ=656,36 аем; найдено [М+Н]+=657,36, [М+Ма]+=679,32.
Пример 94. (8,Е)-М-(Бензилсульфонил)-4-((8)-2-((8)-3-(4-(2-гидроксиэтокси)фенил)-3-метил-2(метиламино)бутанамидо)-М,3,3-триметилбутанамидо)-2,5-диметилгекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали следующим образом: смесь Вос-защищенного примера 86, Си1 (10 мол.%), 3,4,7,8-тетраметил-1,10-фенантролина (20 мол.%), С§2СО3 (2,5 экв.) и этиленгликоля (90 экв.) перемешивали под Ν2 при 130°С на протяжении 20 ч. Полученную смесь разводили Н2О, осторожно подкисляли 1М лимонной кислотой и экстрагировали СН2С12 (5х). Органические растворы объединяли, промывали насыщенным раствором хлорида натрия (1х), сушили над М§8О4, фильтровали, концентрировали в вакууме и очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюировали смесями АсОН/ЕЮАс/гексаны), получая конденсированный продукт, с которого в последствии снимали защиту и очищали согласно общей методике 7.
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-а4) δ 7,46 (д, 1=8,8 Гц, 2Н), 7,38 (д, 1=2,5 Гц, 5Н), 7,05 (д, 1=8,4 Гц, 2Н),
6,38 (д, 1=9,5 Гц, 1Н), 5,05 (т, 1=10,1 Гц, 1Н), 4,93 (с, 1Н), 4,76 (с, 2Н), 4,28 (д, 1=11,0 Гц, 1Н), 4,13-4,04 (м, 2Н), 3,90 (т, 1=4,6 Гц, 2Н), 3,12 (д, 1=6,2 Гц, 3Н), 2,50 (д, 1=16,9 Гц, 3Н), 2,05-1,97 (м, 1Н), 1,94 (д, 1=11,0 Гц, 3Н), 1,56-1,34 (м, 6Н), 1,09 (с, 9Н), 0,90 (т, 1=6,4 Гц, 6Н).
С36Н54М4О78 расч. ι/ζ=686,37 аем; найдено [М+Н]+=687,42, [М+Ма]+=709,37.
Пример 95. 8-2-(4-((8)-4-((8)-1-(((8,Е)-2,5-диметил-6-оксо-6-(бензилсульфонамидо)гекс-4-ен-3ил)(метил)амино)-3,3-диметил-1-оксобутан-2-иламино)-2-метил-3-(метиламино)-4-оксобутан-2ил)фенокси)этилэтантиоат
Указанное в заголовке соединение получали следующим образом: трибутилфосфин (6 экв.) добавляли к охлажденному (0°С) перемешиваемому раствору ди-трет-бутилазодикарбоксилата (6 экв.) в ТГФ. Через 0,5 ч добавляли раствор Вос защищенного пример 94 (1 экв.) в ТГФ, после чего раствор Ас8Н (4,5 экв.) в ТГФ. Бледно-желтую смесь перемешивали при 0°С на протяжении 1 ч и затем при комнатной температуре 23 ч. Полученную смесь концентрировали в вакууме, растворяли в ЕЮАс и последовательно промывали 1М НС1 (2х), нас. МН4С1 (1х) и насыщенным раствором хлорида натрия (1х). Органические растворы сушили над М§8О4, фильтровали, концентрировали в вакууме и очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюировали смесями АсОН/ЕЮАс/гексаны), получая Восзащищенный тиоацетатный продукт (ВЭЖХ/МС - [М+Ма]+=867,47).
Тиоацетат растворяли в СН2С12 и обрабатывали ТФУ. После перемешивания 1 ч реакционную смесь концентрировали в вакууме. Желтый/коричневый остаток растворяли в минимальном количестве СН2С12, охлаждали до 0°С и обрабатывали эфиром до осаждения желаемого аминотиоацетата как почти-белого твердого вещества с 10%-ным выходом после двух стадий синтеза.
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-а4) δ 7,46 (д, 1=8,7 Гц, 2Н), 7,38 (д, 1=2,4 Гц, 5Н), 7,03 (д, 1=8,6 Гц, 2Н),
- 65 029818
6,38 (д, 1=9,5 Гц, 1Н), 5,05 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,93 (с, 1Н), 4,75 (с, 2Н), 4,27 (д, 1=11,4 Гц, 1Н), 4,14 (т, 1=6,6 Гц, 2Н), 3,28 (т, 1=6,6 Гц, 2Н), 3,11 (д, 1=6,6 Гц, 3Н), 2,49 (д, 1=15,5 Гц, 3Н), 2,38 (с, 3Н), 2,05-1,97 (м, 1Н), 1,95 (с, 3Н), 1,45 (с, 3Н), 1,37 (с, 3Н), 1,08 (с, 9Н), 0,96-0,85 (м, 6Н).
С38Н5(^4О7З2 расч. ι/ζ=744,36 аем; найдено [М+Н]+=745,39, [М+№]+=777,32.
Пример 96. (З,Е)-4-((З)-2-((З)-3-(4-(2-аминоэтокси)фенил)-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)^3,3-триметилбутанамидо)-^(бензилсульфонил)-2,5-диметилгекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали следующим образом: Εΐ3Ν (4 экв.) добавляли к охлажденному (0°С) перемешиваемому раствору М§С1 (3,7 экв.) в СН2С12. Через 2 мин добавляли раствор Восзащищенного примера 94 в СН2С12. Бледно-желтую смесь перемешивали холодной 5 мин и затем при комнатной температуре 72 ч. Полученную смесь разводили ЕЮАс и последовательно промывали 1М лимонной кислотой (1х), 1М №НСО3 (1х) и насыщенным раствором хлорида натрия (1х). Органические растворы сушили над М§ЗО4, фильтровали и концентрировали в вакууме, получая мезилированный спирт (ВЭЖХ/МС - [М+№]+=887,42), который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Мезилат растворяли в ДМФ и обрабатывали №ιΝ3 (7 экв.). Полученную суспензию перемешивали при комнатной температуре 18 ч и затем при 60°С на протяжении 5 ч. Реакционную смесь разводили Н2О, подкисляли 1М НС1 и экстрагировали СН2С12 (4х). Объединенные органические растворы сушили над М§ЗО4, фильтровали и концентрировали в вакууме, получая азидопродукт (ВЭЖХ/МС [М+№]+=834,44), который использовали на следующей стадии без дополнительной очистки.
Азид растворяли в ТГФ/Н2О (10:1) и обрабатывали трибутилфосфином (3,5 экв.). Смесь перемешивали при комнатной температуре 21 ч и затем концентрировали в вакууме. Полученный остаток растворяли в ЕЮАс и последовательно промывали 1М НС1 (3х), 1М №НСО3 (3х), Н2О (2х) и насыщенным раствором хлорида натрия (2х). Органические растворы сушили над М§ЗО4, фильтровали, концентрировали в вакууме и очищали с помощью колоночной хроматографии на силикагеле (элюировали смесями МеОН/СН2С12), получая первичный амин как твердое вещество белого цвета (ВЭЖХ/МС [М+Н]+=786,45).
Амин растворяли в СН2С12 и обрабатывали ТФУ. После перемешивания 1 ч реакционную смесь концентрировали в вакууме. Почти белый твердый остаток растворяли в минимальном количестве МеОН, охлаждали до 0°С и обрабатывали эфиром для осаждения желаемого диаминового продукта как почти белого твердого вещества с 6%-ным выходом после четырех стадий синтеза.
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,50 (д, 1=8,6 Гц, 2Н), 7,37 (с, 5Н), 7,09 (д, 1=8,6 Гц, 2Н), 6,41 (д, 1=9,4 Гц, 1Н), 5,02 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,91 (с, 1Н), 4,70 (с, 2Н), 4,27 (т, 1=5,0 Гц, 2Н), 3,40 (т, 1=5,0 Гц, 2Н),
3,37 (с, 1Н), 3,12 (с, 3Н), 2,47 (с, 3Н), 2,06-1,95 (м, 1Н), 1,94 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,45 (с, 3Н), 1,37 (с, 3Н), 1,08 (с, 9Н), 0,89 (дд, 1=9,7, 6,6 Гц, 6Н).
С38Н55^О6З расч. 111//685,39 аем; найдено [М+Н]+=686,32, [М+№]+=708,27, [(М+2Н)/2]2+=343,77.
Пример 97. (З,Е)-2,5-Диметил-^(2-(2,2,2-трифторацетамидо)фенилсульфонил)-4-((З)-Н3,3триметил-2-((З)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2,2,2-трифтор-^(2сульфамоилфенил)ацетамида согласно общим методикам 2 и 7.
' Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 8,27 (д, 1=8,4 Гц, 1Н), 8,05 (д, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,67 (т, 1=7,9 Гц, 1Н), 7,54 (д, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,48 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,40 (дт, 1=13,3, 7,4 Гц, 2Н), 6,57 (д, 1=9,2 Гц, 1Н), 4,92 (с, 2Н), 4,34 (с, 1Н), 3,17 (с, 3Н), 2,50 (с, 3Н), 2,06 (м, 1Н), 1,87 (д, 1=1,3 Гц, 3Н), 1,45 (с, 3Н), 1,33 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,91 (дд, 1=6,6, 3,5 Гц, 6Н).
19Р ЯМР (377 МГц, метанол-й4) δ -76,96, -77,73.
С;,1 ΚΙΥΝ,Ο.δ расч. ι/ζ=723,33 аем; найдено [М+Н]+=723,34, [М+№]+=746,23.
Пример 98. (З,Е)-^(2-Аминофенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((З)-^3,3-триметил-2-((З)-3-метил-2- 66 029818 (метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2,2,2-трифтор-Ы-(2сульфамоилфенил)ацетамида согласно общим методикам 2, 3 и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 7,75 (дд, 1=8,2, 1,5 Гц, 1Н), 7,55 (д, 1=7,8 Гц, 2Н), 7,48 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,38 (т, 1=7,4 Гц, 1Н), 7,33-7,27 (м, 1Н), 6,81 (д, 1=8,2 Гц, 1Н), 6,69 (т, 1=7,5 Гц, 1Н), 6,49 (дд, 1=9,1,
1,5 Гц, 1Н), 4,97 (т, 1=10,1 Гц, 1Н), 4,92 (с, 1Н), 4,35 (с, 1Н), 3,17 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,07 (м, 1Н), 1,88 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,36 (с, 3Н), 1,06 (с, 9Н), 0,92 (т, 1=6,8 Гц, 6Н).
СззН49ЩО58 расч. ι/ζ=627,35 аем; найдено [М+Н]+=628,36, [М+№]+=650,37, [(М+2Н)/2]2+=314,76.
Пример 99. (8,Е)-Н-(Бифенил-4-илсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-Н,3,3-триметил-2-((8)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из Вос-защищенного примера 56 и фенилбороновой кислоты согласно общим методикам 8 и 7.
Ίί ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 8,12 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 7,83 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 7,71 (д, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,52 (дд, 1=11,6, 7,6 Гц, 4Н), 7,45 (т, 1=7,3 Гц, 3Н), 7,36 (т, 1=7,2 Гц, 1Н), 6,52 (д, 1=9,4 Гц, 1Н), 4,96 (т, I =
9,5 Гц, 1Н), 4,92 (с, 1Н), 4,33 (с, 1Н), 3,18 (с, 3Н), 2,50 (с, 3Н), 2,14-2,03 (м, 1Н), 1,88 (с, 3Н), 1,45 (с, 3Н), 1,35 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,92 (т, 1=6,9 Гц, 6Н).
С39Н52ЩО58 расч. ι/ζ=688,37 аем; найдено [М+Н]+=689,10, [М+№]+=711,32.
Пример 100. (8,Е)-Н-(4'-Аминобифенил-4-илсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-Н,3,3-триметил-2-((8)3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из Вос-защищенного примера 68 и 4-(третбутоксикарбониламино)фенилбороновой кислоты согласно общим методикам 8 и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 8,05 (д, 1=8,6 Гц, 2Н), 7,75 (д, 1=8,6 Гц, 2Н), 7,59-7,51 (м, 4Н), 7,45 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,36 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 6,91 (д, 1=8,3 Гц, 2Н), 6,50 (д, 1=9,1 Гц, 1Н), 4,98-4,92 (м, 1Н), 4,91 (с, 1Н), 4,34 (с, 1Н), 3,18 (с, 3Н), 2,50 (с, 3Н), 2,13-2,03 (м, 1Н), 1,88 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,45 (с, 3Н), 1,35 (с, 3Н), 1,06 (с, 9Н), 0,92 (т, 1=6,2 Гц, 6Н).
С39Н53ЩО58 расч. ι/ζ=703,38 аем; найдено [М+Н]+=704,26, [М+№]+=726,41, [(М+2Н)/2]2+=352,77.
Пример 101. (8,Е)-Н-(4-Фторбензилсульфонил)-2,5-диметил-4-((8)-Н,3,3-триметил-2-((8)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 4-фторбензилсульфонамида согласно общим методикам 2 и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 7,60-7,52 (м, 2Н), 7,48 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,44-7,34 (м, 3Н), 7,18-7,05 (м, 2Н), 6,41 (дд, 1=9,5, 1,7 Гц, 1Н), 5,06 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,94 (с, 1Н), 4,74 (с, 2Н), 4,35 (с, 1Н), 3,13 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,07 - 1,97 (м, 1Н), 1,95 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,48 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,90 (т,
- 67 029818
1=6,3 Гц, 6Н).
^^ΡΝ^δ расч. т//=644,34, найдено [М+Н]+=645,32.
Пример 102. ^,Е)-2,5-Диметил-Ы-(3-(трифторметил)бензилсульфонил)-4-(^)-Ы,3,3-триметил-2(^)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо) бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 3-трифторбензилсульфонамида согласно общим методикам 2 и 7.
'Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,74-7,64 (м, 3Н), 7,61 (д, >7,7 Гц, 1Н), 7,60-7,54 (м, 2Н), 7,48 (т, >7,7 Гц, 2Н), 7,38 (т, >7,3 Гц, 1Н), 6,42 (дд, >9,4, 1,7 Гц, 1Н), 5,06 (т, >10,0 Гц, 1Н), 4,93 (с, 1Н), 4,36 (с, 1Н), 3,13 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,07-1,97 (м, 1Н), 1,95 (д, >1,4 Гц, 3Н), 1,48 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,08 (с, 9Н), 0,89 (д, >6,5 Гц, 6Н).
^^^Ν^δ расч. т//=694,34; найдено [М+Н]+=695,38.
Пример 103. ^,Е)-2,5-Диметил-Ы-(3-(трифторметокси)бензилсульфонил)-4-(^)-Ы,3,3-триметил-2(^)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 3-трифторметоксибензилсульфонамида согласно общим методикам 2 и 7.
'Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,56 (д, >7,8 Гц, 2Н), 7,48 (т, >7,9 Гц, 3Н), 7,43-7,36 (м, 2Н), 7,32 (д, 1=9,3 Гц, 2Н), 6,43 (дд, >9,4, 1,7 Гц, 1Н), 5,06 (т, >10,0 Гц, 1Н), 4,93 (с, 1Н), 4,82 (с, 2Н), 4,35 (с, 1Н), 3,13 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,07-1,97 (м, 1Н), 1,95 (д, >1,4 Гц, 3Н), 1,48 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,08 (с, 9Н), 0,90 (дд, >6,6, 4,3 Гц, 6Н).
С35Н49Р3Ы4О^ расч. т//=710,33; найдено [М+Н]+=711,38.
Пример 104. ^,Е)-Ы-(3,4-Дихлорбензилсульфонил)-2,5-диметил-4-(^)-Ы,3,3-триметил-2-(^)-3метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 3,4-дихлорбензилсульфонамида согласно общим методикам 2 и 7.
'Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,56 (тд, >5,2, 4,5, 1,9 Гц, 4Н), 7,48 (т, >7,7 Гц, 2Н), 7,38 (т, >7,3 Гц, 1Н), 7,33 (дд, >8,4, 2,1 Гц, 1Н), 6,41 (дд, >9,5, 1,8 Гц, 1Н), 5,06 (т, >10,0 Гц, 1Н), 4,93 (с, 1Н), 4,77 (с, 2Н), 4,36 (с, 1Н), 3,14 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,07-1,97 (м, 1Н), 1,95 (д, >1,4 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,08 (с, 9Н), 0,90 (дд, >6,6,4,9 Гц, 6Н).
^^^Ν^δ расч. т//=694,27; найдено [М+Н]+=695,32.
Пример 105. ^,Е)-Ы-(2-Цианобензилсульфонил)-2,5-диметил-4-(^)-Ы,3,3-триметил-2-(^)-3-метил2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2-цианобензилсульфонамида согласно общим методикам 2 и 7.
'II ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,81 (дд, >7,7, 1,3 Гц, 1Н), 7,72 (тд, >7,7, 1,3 Гц, 1Н), 7,66 (д, >7,7 Гц, 1Н), 7,62-7,59 (м, 1Н), 7,58-7,53 (м, 2Н), 7,48 (т, >7,7 Гц, 2Н), 7,38 (т, >7,3 Гц, 1Н), 6,50 (д, >9,4 Гц, 1Н), 5,08 (дд, >10,6, 9,3 Гц, 1Н), 4,99 (с, 2Н), 4,95 (с, 1Н), 4,36 (с, 1Н), 3,16 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,09-1,99 (м, 1Н), 1,98 (д, >1,4 Гц, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,10 (с, 9Н), 0,94 (д, >6,6 Гц, 3Н), 0,91 (д, >6,6 Гц, 3Н).
С35Н49N5О5δ расч. т//=651,35; найдено [М+Н]+=652,38.
Пример 106. ^,Е)-Ы-(3-Хлорбензилсульфонил)-2,5-диметил-4-(^)-Ы,3,3-триметил-2-(^)-3-метил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
- 68 029818
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 3-хлорбензилсульфонамида согласно общим методикам 2 и 7.
’Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,58-7,53 (м, 2Н), 7,48 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,43-7,34 (м, 4Н), 7,32 (д, 1=7,5 Гц, 1Н), 6,42 (д, 1=9,5 Гц, 1Н), 5,06 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,94 (с, 1Н), 4,74 (с, 2Н), 4,33 (с, 1Н), 3,13 (с, 3Н), 2,50 (с, 3Н), 2,07-1,97 (м, 1Н), 1,95 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,48 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,08 (с, 9Н), 0,90 (т, 1=7,2 Гц, 6Н).
С34Н49С1И4О58 расч. т//=660,31; найдено [М+Н]+=661,32.
Пример 107. (§,Е)-И-(4-Амино-2-этилфенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((§)-И,3,3-триметил-2-((§)-3метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2-этилбензилсульфонамида согласно общим методикам 2 и 7.
’Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,79 (д, 1=8,7 Гц, 1Н), 7,55 (д, 1=7,9 Гц, 2Н), 7,48 (т, 1=7,6 Гц, 2Н),
7,37 (т, 1=7,4 Гц, 1Н), 6,57 (д, 1=2,3 Гц, 1Н), 6,54 (дд, 1=8,8, 2,4 Гц, 1Н), 6,46 (д, 1=9,4 Гц, 1Н), 5,01 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,92 (с, 1Н), 4,34 (с, 1Н), 3,16 (с, 3Н), 2,99-2,90 (м, 2Н), 2,50 (с, 3Н), 2,11-2,00 (м, 1Н), 1,87 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,47 (с, 3Н), 1,38 (с, 3Н), 1,22 (т, 1=7,5 Гц, 3Н), 1,06 (с, 9Н), 0,91 (дд, 1=6,6 Гц, 6Н).
С35Н53И5ОА расч. т//=655,38; найдено [М+Н]+=656,4.
Пример 108. (§,Е)-И-(4-Амино-3-(трифторметокси)фенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((§)-И,3,3триметил-2-((§)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо) бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2,2,2-трифтор-И-(4-сульфамоил-2(трифторметокси)фенил)ацетамида согласно общим методикам 2, 3 и 7.
’Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,81-7,75 (м, 1Н), 7,71 (дд, 1=8,7, 2,1 Гц, 1Н), 7,55 (д, 1=7,9 Гц, 2Н),
7.47 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,1 Гц, 1Н), 6,89 (д, 1=8,7 Гц, 1Н), 6,51-6,42 (м, 1Н), 4,98 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,92 (т, 1=4,1 Гц, 1Н), 4,37 (с, 1Н), 3,16 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,12-2,01 (м, 1Н), 1,88 (д, 1=1,4 Гц, 3Н),
1.47 (с, 3Н), 1,37 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,92 (дд, 1=6,6 Гц, 6Н).
С34Н48Р3И5О68 расч. т//=711,33; найдено [М+Н]+=712,4.
Пример 109. (§,Е)-И-(4-Амино-2,3-диметилфенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((§)-И,3,3-триметил-2((8)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо) гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2,2,2-трифтор-И-(4-сульфамоил-2,3диметилфенил)ацетамида согласно общим методикам 2, 3 и 7.
’Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,75 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 7,55 (д, 1=7,9 Гц, 2Н), 7,47 (т, 1=7,7 Гц, 2Н),
7,37 (т, 1=6,9 Гц, 1Н), 6,63 (д, 1=8,8 Гц, 1Н), 6,46 (д, 1=9,7 Гц, 1Н), 5,00 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,93 (с, 1Н), 4,32 (с, 1Н), 3,17 (с, 3Н), 2,54 (с, 3Н), 2,49 (с, 3Н), 2,09 (с, 3Н), 2,08-2,02 (м, 1Н), 1,87 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,47 (с, 3Н), 1,37 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,92 (дд, 1=6,8, 6,5 Гц, 6Н).
С35Н53И5ОА расч. т//=655,38; найдено [М+Н]+=656,4.
Пример 110. (§,Е)-И-(4-Амино-5,6,7,8-тетрагидронафталин-1-илсульфонил)-2,5-диметил-4-((§)И,3,3-триметил-2-((§)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
- 69 029818
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2,2,2-трифтор-N-(4-сульфамоил-5,6,7,8тетрагидронафталин-1-ил)ацетамида согласно общим методикам 2, 3 и 7.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-άά δ 7,74 (д, 1=8,7 Гц, 1Η), 7,55 (д, 1=7,9 Гц, 2Н), 7,48 (т, 1=7,6 Гц, 2Н),
7,38 (т, 1=7,2 Гц, 1Η), 6,60 (д, 1=8,7 Гц, 1Η), 6,46 (д, 1=9,2 Гц, 1Η), 5,00 (т, 1=10,0 Гц, 1Η), 4,95-4,91 (м, 1Η), 4,36 (с, 1Η), 3,17 (с, 3Н), 3,10-3,05 (м, 2Н), 2,51 (с, 3Н), 2,46 (т, 1=6,5 Гц, 2Н), 2,10-2,02 (м, 1Η), 1,88 (с, 3Н), 1,87-1,75 (м, 4Н), 1,47 (с, 3Н), 1,38 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,92 (дд, 1=7,1 Гц, 6Н).
Сз7Η55N5О5δ расч. тЕ=681,39; найдено [М+Н]+=682,4.
Пример 111. (δ,Е)-N-(4-Амино-3-метилфенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((δ)-N,3,3-триметил-2-((δ)3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2,2,2-трифтор-N-(2-метил-4сульфамоилфенил)ацетамида согласно общим методикам 2, 3 и 7.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-άά δ 7,64 (с, 1Η), 7,61 (дд, 1=8,5, 2,3 Гц, 1Η), 7,57-7,51 (м, 2Н), 7,48 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,41-7,35 (м, 1Η), 6,71 (д, 1=8,5 Гц, 1Η), 6,43 (дд, 1=9,3, 1,6 Гц, 1Η), 4,96 (т, 1=10,0 Гц, 1Η), 4,92 (с, 1Η), 4,35 (с, 1Η), 3,16 (с, 3Н), 2,51 (с, 3Н), 2,17 (с, 3Н), 2,10-2,01 (м, 1Η), 1,87 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,36 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,91 (дд, 1=6,3 Гц, 6Н).
Сз4Η51N5О5δ расч. тЕ=641,36; найдено [М+Н]+=642,4.
Пример 112. (δ,Е)-N-(4-Амино-3-фторфенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((δ)-N,3,3-триметил-2-((δ)-3метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2,2,2-трифтор-N-(2-фтор-4сульфамоилфенил)ацетамида согласно общим методикам 2, 3 и 7.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-άά δ 7,62-7,55 (м, 3Н), 7,54 (с, 1Η), 7,48 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,3 Гц, 1Η), 6,85 (т, 1=8,6 Гц, 1Η), 6,45 (д, 1=9,3 Гц, 1Η), 4,98 (т, 1=9,9 Гц, 1Η), 4,92 (с, 1Η), 4,34 (с, 1Η), 3,16 (с, 3Н), 2,50 (с, 3Н), 2,12 - 2,00 (м, 1Η), 1,88 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,37 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,91 (дд, 1=6,8 Гц, 6Н).
СззΗ48ΡN5О5δ расч. тЕ=645,34; найдено [М+Н]+=646,4.
Пример 113. (δ,Е)-N-(4-Амино-3-этилфенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((δ)-N,3,3-триметил-2-((δ)-3метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2,2,2-трифтор-N-(2-этил-4сульфамоилфенил)ацетамида согласно общим методикам 2, 3 и 7.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-άά δ 7,66 (д, 1=2,3 Гц, 1Η), 7,61 (дд, 1=8,6, 2,3 Гц, 1Η), 7,55 (д, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,48 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,3 Гц, 1Η), 6,71 (д, 1=8,5 Гц, 1Η), 6,43 (дд, 1=9,3, 1,7 Гц, 1Η), 4,96 (т, 1=9,9 Гц, 1Η), 4,92 (с, 1Η), 4,35 (с, 1Η), 3,16 (с, 3Н), 2,54 (дд, 1=7,4, 2,2 Гц, 2Н), 2,51 (с, 3Н), 2,12-1,99 (м,
1Η), 1,87 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,36 (с, 3Н), 1,27 (т, 1=7,5 Гц, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,91 (дд, 1=6,4 Гц,
6Н)
Сз5Η5зN5О5δ расч. тЕ=655,38; найдено [М+Н]+=656,5.
Пример 114. (δ,Е)-N-(4-Амино-3-(трифторметил)фенилсульфонил)-2,5-диметил-4-((δ)-N,3,3триметил-2-((δ)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо) бутанамидо)гекс-2-енамид
Указанное в заголовке соединение получали из примера 3 и 2,2,2-трифтор-N-(2-трифторметил-4сульфамоилфенил)ацетамида согласно общим методикам 2, 3 и 7.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-άά δ 8,04 (с, 1Η), 7,87 (д, 1=8,8 Гц, 1Η), 7,55 (д, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,48 (т,
- 70 029818
1=7,3 Гц, 2Н), 7,36 (дд, 1=14,5, 7,4 Гц, 1Н), 6,89 (д, 1=8,9 Гц, 1Н), 6,47 (д, 1=9,3 Гц, 1Н), 4,99 (т, 1=10,2 Гц, 1Н), 4,92 (с, 1Н), 4,33 (с, 1Н), 3,16 (с, 3Н), 2,50 (с, 3Н), 2,11-2,00 (м, 1Н), 1,88 (с, 3Н), 1,47 (с, 3Н), 1,37 (с, 3Н), 1,07 (с, 9Н), 0,91(дд, 1=7,0 Гц, 6Н).
С34Н48Р3М5О5З расч. т0=695,33; найдено [М+Н]+=696,4.
Пример 115. (З)-1-Изопропил-М-((З)-1-(((З,Е)-6-(3-меркаптопропилсульфонамидо)-2,5-диметил-6оксогекс-4-ен-3-ил)(метил)амино)-3,3-диметил-1-оксобутан-2-ил)пиперидин-2-карбоксамид
К раствору (З,Е)-этил 4-((З)-2-(трет-бутоксикарбониламино)-М,3,3-триметилбутанамидо)-2,5диметилгекс-2-еноата (0,373 г, 0,905 ммоль) в СН2С12 (5мл) добавляли трифторуксусную кислоту (2 мл). Реакцию контролировали с помощью ВЭЖХ и после завершения превращения исходного материала концентрировали при пониженном давлении. Ν-изопропил-пипеколиновую кислоту (0,200 г, 1,3 экв.) растворяли в СН2С12 (5 мл), перемешивали при 0°С и добавляли НВТИ (0,450 г, 1,3 экв.) и Ν,Ν-диизопропилэтиламин (0,400 мкл, 2,5 экв.). Через 10 мин добавляли упомянутый выше дипептид, лишенный защиты как раствор в СН2С12 (~1мл). Реакцию контролировали с помощью ВЭЖХ для полного использования дипептида, после чего реакцию концентрировали при пониженном давлении. Неочищенную реакционную смесь растворяли в СН2С12 и очищали хроматографией на силикагеле (1-20% МеОН (5% МНО11) в СН2С12).
Полученный сложный эфир омыляли ЫОН в 1,4-диоксане. Полученную карбоновую кислоту (0,128 г, 0,29 ммоль) растворяли в СН2С12 (5мл), и к перемешиваемому раствору добавляли дициклогексилкарбодиимид (0,084 г, 1,4 экв.), Ν,Ν-диметиламинопиридин (0,05 г, 1,4 экв.) и 3-(тритилтио)пропан-1сульфонамид (0,174 г, 1,5 экв.). Полученную смесь перемешивали на протяжении ночи, и контролировали протекание реакции с помощью ВЭЖХ-МС. Когда реакция завершилась, смесь концентрировали при пониженном давлении, и остаток очищали хроматографией на силикагеле (5-30% МеОН в СН2С12), получая З-тритильное производное родительского соединения как бесцветное масло (0,056 г).
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,44-7,35 (м, 6Н), 7,36-7,15 (м, 9Н), 6,56 (дд, 1=9,1, 1,7 Гц, 1Н), 5,03 (дд, 1=10,6, 9,3 Гц, 1Н), 4,73 (с, 1Н), 4,05 (дд, 1=11,5, 3,3 Гц, 1Н), 3,51-3,37 (м, 2Н), 3,25-3,15 (м, 2Н), 3,09 (с, 3Н), 2,92 (тд, 1=12,5, 2,9 Гц, 1Н), 2,31 (т, 1=7,2 Гц, 2Н), 2,18-1,70 (м, 15Н), 1,61 (ддт, 1=12,8, 8,4, 4,9 Гц, 1Н), 1,28 (дд, 1=30,1, 6,7 Гц, 7Н), 1,04 (с, 9Н), 0,88 (дд, 1=37,3, 6,5 Гц, 6Н).
В конце концов тритилзащищенный тиол растворяли в СН2С12 (3 мл), и добавляли трифторуксусную кислоту (0,6 мл) с триизопропилсиланом (0,1 мл). Реакцию контролировали с помощью ВЭЖХ-МС и после завершения концентрировали досуха при пониженном давлении. Остаток переносили в СН2С12 (~0,8мл) с парой капель этанола и охлаждали до 0°С на ледяной бане. Добавляли холодный диэтиловый эфир (~3мл) при интенсивном перемешивании до получения белого осадка, который собирали фильтрованием на воронке Бюхнера и сушили при высоком вакууме, получая родительское соединение как аморфное белое вещество.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 6,52 (д, 1=9,0 Гц, 1Н), 5,06 (дд, 1=10,7, 8,8 Гц, 1Н), 4,73 (с, 1Н), 4,16-4,04 (м, 1Н), 3,69-3,56 (м, 2Н), 3,48 (дд, 1=13,3, 7,2 Гц, 2Н), 3,15 (с, 3Н), 3,03-2,94 (м, 1Н), 2,68 (т, 1=6,9 Гц, 1Н), 2,24-1,77 (м, 11Н), 1,61 (с, 1Н), 1,31 (дд, 1=27,2, 6,7 Гц, 6Н), 1,06 (с, 9Н), 0,91 (дд, 1=34,1,
6,6 Гц, 6Н).
Пример 116. (З)-N-((З)-1-((З)-2-((Ε)-3-(3-меркаптопропилсульфонамидо)-2-метил-3-оксопроп-1енил)пирролидин-1-ил)-3,3-диметил-1-оксобутан-2-ил)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамид
Указанное в заголовке соединение синтезировали из Вос-пролина и примера 2 согласно общим методикам 10, 11, 2, 3, 7 и другим из №етап 1.А. е! а1. 1. Ναι. Ргоб. 2003, 66, 183-199. Соединение выделяли как два диастереоизомера с приблизительным соотношением 1:1.
Ή ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,57-7,12 (м, 5Н), 6,39 (дд, 1=9,4, 1,6 Гц, 0,5Н), 6,31 (дд, 1=8,2, 1,5 Гц, 0,5Н), 4,72 (к, 1=7,5 Гц, 0,5Н), 4,66-4,56 (м, 0,5Н), 4,40 (с, 0,5Н), 4,28 (д, 1=11,9 Гц, 1Н), 3,81 (м, 0,5Н), 3,76-3,56 (м, 3Н), 2,77-2,64 (м, 2Н), 2,59 (м, 3Н), 2,39-2,22 (м, 1Н), 2,18-1,72 (м, 7Н), 1,61-1,33 (м, 6Н), 1,15-0,85 (м, 11Н).
С29Η46N4Ο5З2 расч. т0=594,35; найдено [М+Н]+=595,3.
- 71 029818
Пример 117. (8)-Ы-((8)-1-(2-(3-(3-меркаптопропилсульфонамидо)-2-метил-3-оксопроп-1-енил)пиперидин-1-ил)-3,3-диметил-1-оксобутан-2-ил)-3-метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамид
Указанное в заголовке соединение синтезировали из Вос-гомопролина и примера 2 согласно общим методикам 10, 11, 2, 3, 7 и другим из №етап 1. А. е! а1. 1. Ν;·ιΙ. Ргоб. 2003, 66, 183-199. Соединение выделяли как два диастереоизомера с приблизительным соотношением 2:3.
1Η ЯМР (600 МГц, метанол-64) δ 7,55 (д, 1=7,8 Гц, 1Η), 7,46 (м, 3Н), 7,38 (м, 1Η), 6,81 (д, 1=8,3 Гц, 0,6Н), 6,79 (д, 1=7,8 Гц, 0,4Н), 5,66 (м, 0,6Н), 5,12 (м, 0,4Н), 5,05 (с, 0,6Н), 4,86 (с, 0,4Н), 4,42 (д, 1=14,9 Гц, 0,4Н), 4,35 (с, 0,6Н), 4,26 (с, 0,4Н), 4,12 (д, 1=13,8 Гц, 0,6Н), 3,64 (д, 1=7,6 Гц, 1Η), 3,63 (д, 1=7,4 Гц, 1Η), 3,39 (м, 0,6Н), 2,94 (тд, 1=13,8, 2,6 Гц, 0,4Н), 2,68 (т, 1=6,7 Гц, 2Н), 2,56 (м, 3Н), 2,10 (м, 3,5Н), 1,97 (с, 1,5Н), 1,90-1,70 (м, 7Н), 1,65-1,29 (м, 6Н), 1,07 (с, 3,5Н), 1,04 (с, 4,5Н) млн. ч.
Сз0Η47N4Ο582 расч. т^=608,31; найдено [М+Н]+=609,32.
Пример 118. (8)-Ы-((8)-1-(2-(3-(4-(меркаптометил)фенилсульфонамидо)-2-метил-3-оксопроп-1енил)пиперидин-1-ил)-3,3-диметил-1-оксобутан-2-ил)-3 -метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамид
Указанное в заголовке соединение синтезировали из Вос-гомопролина и примера 7 согласно общим методикам 10, 11, 2, 3, 7 и другим из №етап 1. А. е! а1. 1. Ν;·ιΙ. Ргоб. 2003, 66, 183-199. Соединение выделяли как два диастереоизомера с приблизительным соотношением 2:3.
1Η ЯМР (600 МГц, метанол-64) δ 8,02 (д, 1=8,4 Гц, 0,8Н), 8,00 (д, 1=8,5 Гц, 1,2Н), 7,58 (д, 1=8,5 Гц, 1Η), 7,54 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 7,45 (т, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,40 (д, 1=7,2 Гц, 0,6Н), 7,36 (м, 1Η), 7,31 (т, 1=7,1 Гц, 0,4Н), 6,74 (д, 1=8,2 Гц, 1Η), 5,59 (м, 0,6Н), 5,06 (м, 0,4Н), 5,02 (с, 0,6Н), 4,84 (с, 0,4Н), 4,39 (д, 1=12,5 Гц, 0,4Н), 4,34 (с, 0,6Н), 4,20 (с, 0,4Н), 4,08 (д, 1=12,0 Гц, 0,6Н), 3,83 (с, 1,2Н), 3,73 (с, 0,8Н), 3,35 (м, 0,6Н), 2,93 (тд, 1=13,6, 3,0 Гц, 0,4Н), 2,55 (м, 3Н), 2,00 (с, 1Η), 1,90-1,51 (м, 7Н), 1,51-1,30 (м, 4Н), 1,30 (с, 1Η), 1,15 (с, 1Η), 1,04 (с, 3,5Н), 1,01 (с, 4,5Н) млн. ч.
Сз4Η47N4Ο582 расч. т^=656,31; найдено [М+Н]+=657,30.
Пример 119. МС-УС-РАВС-77
Указанное в заголовке соединение получали используя общие методики 15 и 7 из Вос-защищенного примера 77.
1Η ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 7,58 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,49 (д, 1=7,5 Гц, 2Н), 7,38 (т, 1=7,7 Гц, 2Н), 7,36-7,24 (м, 6Н), 7,22 (д, 1=7,8 Гц, 2Н), 6,81 (с, 2Н), 6,57 (д, 1=9,1 Гц, 1Η), 5,08 (с, 2Н), 5,04 (т, 1=10,0 Гц, 1Η), 4,91 (с, 1Η), 4,53 (дд, 1=9,0, 5,1 Гц, 1Η), 4,40 (с, 2Н), 4,28 (с, 2Н), 4,19 (д, 1=7,4 Гц, 1Η), 3,49 (т, 1=7,1 Гц, 2Н), 3,26-3,11 (м, 2Н), 3,07-2,93 (м, 3Н), 2,30 (т, 1=7,4 Гц, 2Н), 2,18 (с, 3Н), 2,15-2,05 (м, 1Η), 1,99-1,91 (м, 1Η), 1,89 (с, 3Н), 1,83-1,72 (м, 1Η), 1,72-1,53 (м, 7Н), 1,44 (с, 3Н), 1,37 (с, 3Н), 1,35-1,27 (м, 2Н), 1,03 (с, 9Н), 1,00 (д, 1=6,8 Гц, 3Н), 0,99 (д, 1=6,7 Гц, 3Н), 0,88 (д, 1=6,5 Гц, 3Н), 0,82 (д, 1=6,6 Гц, 3Н).
С64И91К110138 расч. т^=1253,7; найдено [М+Н]+=1254,8.
Пример 120. 4-((К)-2-((К)-2-(6-(2,5-диоксо-2,5-дигидро-1Н-пиррол-1-ил)гексанамидо)-3метилбутанамидо)-5-уреидопентанамидо)бензил 4-(Ы-((8,Е)-2,5-диметил-4-((8)-М,3,3-триметил-2-((8)-3метил-2-(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гекс-2-еноил)сульфамоил)бензилкарбамат,
МС-УС-РАВС-85
- 72 029818
Указанное в заголовке соединение получали, используя общие методики 15 и 7 к Вос-защищенному примеру 85.
^Н^пОиЗ расч. т//=1239,6; найдено [М+Н]+=1240,9.
Пример 121. МСДС-РАВС-80
Указанное в заголовке соединение получали, используя общие методики 15 и 7 к Вос-защищенному примеру 80.
^Н^пОиЗ расч. т//=1239,6; найдено [М+Н]+=1240,9.
Пример 122. МСДС-РАВС-41
Указанное в заголовке соединение получали, используя общую методику 15 к примеру 41. СмНэДпОиЗ расч. ι/ζ=1253,65; найдено [М+Н]+=1254,75, [М+2Н]2+=628,20.
Пример 123. (К)-N-(Бензилсульфонил)-2,5-димеτил-4-((З)-N,3,3-τримеτил-2-((З)-3-меτил-2(метиламино)-3-фенилбутанамидо)бутанамидо)гексанамид
Суспензию примера 14 и 10% палладия на угле (25 моль % Р6) в ледяной уксусной кислоте перемешивали под Н2 (1 атм) при комнатной температуре. Через 142 ч реакционную суспензию пропускали через слой целлита, промывали МеОН (5х) и концентрировали в вакууме. Оставшуюся светлокоричневую неочищенную пленку растворяли и очищали препаративной ВЭЖХ (30-70% МеСН/КО с 0,1% ТФУ) и лиофилизировали, получая один диастереомер восстановленного продукта как бледножелтое твердое вещество с выходом 15%.
'II ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ 7,55 (д, 1=7,2 Гц, 2Н), 7,46 (т, 1=7,8 Гц, 2Н), 7,43-7,31 (м, 6Н), 5,01 (с, 1Н), 4,79 (д, 1=14,1 Гц, 1Н), 4,65 (д, 1=14,1 Гц, 1Н), 4,35 (с, 1Н), 4,24 (с, 1Н), 3,07 (с, 3Н), 2,52 (с, 3Н), 2,27 (м, 1=10,3, 7,0, 3,2 Гц, 1Н), 2,14 (ддд, 1=13,5, 10,6, 2,7 Гц, 2Н), 1,78 (д, 1=8,6 Гц, 1Н), 1,47 (с, 3Н), 1,34 (с, 3Н), 1,15 (д, 1=6,9 Гц, 3Н), 1,14 (с, 9Н), 1,04 (д, 1=6,6 Гц, 3Н), 0,82 (д, 1=6,6 Гц, 3Н).
С^Щ^ЮзЗ расч. ι/ζ=628,37 аем; найдено [М+Н]+=629,6, |Μ+Να|'=651,6.
Общие схемы синтеза для (Т)-(Ь)-(Э) использования линкеров ЬС-ЗРЭР и ЗМСС.
- 73 029818
Композицию получали, используя способ связывания 8ΡΌΡ, описанный ниже. Приметка, К2', отличный от К2, как К2 включает К2'-8.
Композицию получали, используя способ связывания 8МСС, описанный ниже. Приметка, К2', отличный от К2, как К2 включает К2'-8.
Композицию получали, используя способ связывания 8ΡΌΡ, описанный ниже. Приметка, К1', отличный от К1, как К1 включает К/-8.
Композицию получали, используя способ связывания 8МСС, описанный ниже. Приметка, К1', отличный от К1, как К1 включает КЦ-8.
Пример 124.
Соединение А - 8РЭР-тЛЬ получали, используя способ синтеза соединения А, выше, и способ связывания 8ΡΌΡ, описанный ниже.
Пример 125.
- 74 029818
Соединение В - δΡΌΡ-тАЬ получали, используя способ синтеза соединения В, выше, и способ связывания δΡΌΡ, описанный ниже.
Пример 126.
Соединение С - δΡΌΡ-тАЬ получали, используя способ синтеза соединения С, выше, и способ связывания δΡΌΡ, описанный ниже.
Пример 127.
Соединение В - δМСС-тΑЬ получали, используя способ синтеза соединения В, выше, и способ связывания δМСС, описанный ниже.
Пример 128.
Соединение А - δМСС-тΑЬ получали, используя способ синтеза соединения А, выше, и способ связывания δМСС, описанный ниже.
Пример 129.
Соединение С - δМСС-тΑЬ получали, используя способ синтеза соединения С, выше, и способ связывания δМСС, описанный ниже.
Пример 130. 3-Метил-3-(4-бромфенил)-бутановая кислота
К интенсивно перемешиваемому раствору бромбензола (4,70 г, 30,0 ммоль) и 3,3-диметилакриловой кислоты (1,00 г, 10,0 ммоль) в 20 мл СЩС12, охлажденному до -10°С на бане НЩСЦод/лед, порциями добавляли твердый А1С13, поддерживая внутреннюю температуру ниже -5°С. Раствор превращался в желтый, затем в коричневый после добавления. Через один час анализ ЖХ и ТСХ показал полное использование ключевого реагента. Реакцию затем гасили, добавляя 1М лимонную кислоту, вызывая изменение коричневого цвета в желтый. Полученную водянистую суспензию экстрагировали четыре раза 20 мл Εί2Θ, объединенные органические растворы промывали ЫаС1(нас), сушили над Ыа^О^) и концентрировали в вакууме при нагревании 45°С до удаления растворителя и остаточного бромбензола. Полученное масло медленно твердело. Перекристализация нечищенного твердого вещества в гексанах обеспечивала указанное в заголовке соединение (1,29 г, 50%) как кластеры из белых призм.
' Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-ά) δ (млн. ч.) 7,42 (д, 1=8,6 Гц, 2Н), 7,23 (д, 1=8,6 Гц, 2Н), 2,63 (с, 2Н), 1,43 (с, 6Н).
ε11Η13ΒΓθ2 расч. [М+Н]+=257,02 аем; найдено т//=257,03. К{=0,21 (20% (2% ΑсОΗ/ΕίОΑс)/Ηеx).
Пример 131. 3-Метил-3-(3-бромфенил)-бутановая кислота
- 75 029818
Указанное в заголовке соединение получали таким же самым образом как 3-метил-3фенилбутановую кислоту в №етап 1.А., е! а1. 1. Ναι. Ргой. 2003, 66, 183-199, используя бромбензол вместо бензола как растворитель и заменяя кислотно-основную обработку простой экстракцией реакционной смеси 1М лимонной кислотой и тремя последующими перекристаллизациями из гексанов. Из неочищенного продукта, обогащенного желаемым мета-изомером как 2:1 смеси, может быть получено указанное в заголовке соединение как белые плотные иглы с чистотой более 95%.
!Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-й) δ (млн. ч.) 7,49 (т, 1=1,9 Гц, 1Н), 7,34 (ддд, 1=7,9, 1,9, 1,0 Гц, 1Н), 7,29 (ддд, 1=7,9, 1,9, 1,0 Гц, 1Н), 7,18 (т, 1=7,9 Гц, 1Н), 2,64 (с, 2Н), 1,44 (с, 6Н).
С11Н13ВгО2 расч. [М+Н]+=257,02 аем; найдено тА=257,01. К=0,21 (20% (2% АсОН/Е!ОАс)/Нех).
Пример 132. (8)-Метил 3-(4-бромфенил)-2-(трет-бутоксикарбонил(метил)амино)-3-метилбутаноат
Указанное в заголовке соединение синтезировали из примера 130 согласно последовательности методик, описанных №етап е! а1. для синтеза (8)-метил 2-(трет-бутоксикарбонил(метил)амино)-3-метил-3фенилбутаноата.
Пример 133. (8)-2-((трет-Бутоксикарбонил)(метил)амино)-3-(4-((14-гидрокси-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)фенил)-3 -метилбутановая кислота
К перемешиваемому раствору пример 68 (157 мг, 0,405 ммоль) в пентаэтиленгликоля (1,5 мл) добавляли СкСО3 (330 мг, 1,01 ммоль), 3,4,7,8-тетраметил-1,10-фенантролин (57 мг, 0,24 ммоль) и Сай (23 мг, 0,12 ммоль). Колбу наполняли азотом, затем закрывали и нагревали до 130°С, раствор быстро превращался из красного в коричневый и черный. Через 40 ч реакция почти завершилась, что определяли с помощью ВЭЖХ анализа. Таким образом, смесь оставляли охлаждаться до комнатной температуры, разводили Н2О и переносили в большую колбу Эрленмеера с магнитной мешалкой. Эту смесь осторожно подкисляли до рН~3 с помощью 1М лимонной кислотой, обратите внимание, не позволяйте смеси вспениваться с выплескиванием. Смесь затем экстрагировали пять раз СН2С12, объединенные органические экстракты промывали №С1(нас), сушили над №28О4(та) и концентрировали в вакууме, получая около 300 мг неочищенного масла. Очистка флеш-хроматографией (1-10% МеОН/(2% АсОН/ЕЮАс)) обеспечивала указанное в заголовке соединение (66 мг, 30%) как прозрачную пленку, которая была смесью Ν-Вос ротамеров с соотношением около 2:1.
!Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-й) δ (млн. ч.) 7,35 (д, 1=7,8 Гц, 1,3Н), 7,30 (д, 1=7,6 Гц, 0,7Н), 6,87 (д, 1=7,1 Гц, 2Н), 5,07 (с, 0,7Н), 4,93 (с, 0,3Н), 4,14 (м, 2Н), 3,86 (м, 2Н), 3,70 (м, 16Н), 2,83 (с, 1Н), 2,72 (с, 2Н), 1,54 (с, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,45 (с, 9Н).
С^Н^Ою расч. [М+Н]+=544,31 аем; найдено тА=544,36. К(=0,36 (5% МеОН/(2% АсОН/ЕЮАс)).
Пример 134. (8)-2-((трет-Бутоксикарбонил)(метил)амино)-3-(4-(2-(2-(2-(2-гидроксиэтокси)этокси)этокси)этокси)фенил)-3-метилбутановая кислота
Указанное в заголовке соединение получали согласно приведенному выше способу из примера 68 (132 мг, 0,341 ммоль), СкСО3 (278 мг, 0,853 ммоль), 3,4,7,8-тетраметил-1,10-фенантролина (24 мг, 0,10 ммоль) и Сай (10 мг, 0,051 ммоль). Флеш-хроматография (1-10% МеОН/(2% АсОН/ЕЮАс)) обеспечивала указанное в заголовке соединение (66 мг, 38%) как прозрачное масло с соотношением около 2:1 Ν-Вос ротамеров.
!Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-й) δ (млн. ч.) 7,34 (д, 1=8,4 Гц, 1, 3Н), 7,29 (д, 1=8,1 Гц, 0,7Н), 6,85 (д, 1=8,4 Гц, 2Н), 5,05 (с, 0,7Н), 4,91 (с, 0,3Н), 4,13 (т, 1=4,6 Гц, 2Н), 3,87-3,79 (м, 2Н), 3,76-3,60 (м, 10Н), 3,59 (т, 1=4,1 Гц, 2Н), 2,80 (с, 1Н), 2,69 (с, 2Н), 1,53 (с, 3Н), 1,48 (с, 3Н), 1,44 (с, 9Н).
- 76 029818
СйЩМОэ расч. [М+Н]+=500,29 аем; найдено т//=500,36. К(=0,46 (5% МеОН/(2% АсОН/ЕЮАс)). Пример 135. (8)-3-(3-((14-Гидрокси-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)фенил)-3-метил-2(метиламино)бутановая кислота
Предшественник указанного в заголовке соединения, (8)-3-(3-бромфенил)-2-((третбутоксикарбонил)(метил)амино)-3-метилбутановую кислоту, получали из примера 131 согласно методикам в №1тап е! а1.
Таким образом, согласно методикам выше (8)-3-(3-бромфенил)-2-((третбутоксикарбонил)(метил)амино)-3-метилбутановую кислоту (166 мг, 0,43 ммоль), С§СО3 (330 мг, 1,01 ммоль), 3,4,7,8-тетраметил-1,10-фенантролин (31 мг, 0,13 ммоль) и Си! (12,3, 0,060 ммоль) в 1,5 мл пентаэтиленгликоле нагревали до 130°С на протяжении двух дней, получая указанное в заголовке соединение (73 мг, 31%) как прозрачное масло после флеш-хроматографии (1-10% МеОН/(2% АсОН/ЕЮЛс)) с приблизительно 2:1 соотношением Ν-Вос ротамеров.
'II ЯМР (400 МГц, хлороформ-й) δ (млн. ч.) 7,17 (т, 1=7,8 Гц, 1Н), 7,14-7,07 (м, 1Н), 7,07-6,93 (м, 2Н), 6,74 (д, 1=8,0 Гц, 1Н), 5,11 (с, 0,7Н), 4,93 (с, 0,ЗН), 4,25-4,03 (м, 2Н), 3,91-3,77 (м, 2Н), 3,78-3,66 (м, 2Н), 3,69-3,43 (с, 14Н), 2,72 (с, 1Н), 2,65 (с, 1Н), 1,51 (с, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,45 (с, 9Н).
С27Н45МО1О расч. [М+Н]+=544,31 аем; найдено т//=544,34.
Пример 136. (68, 98, 128, Е)-Этил-9-(трет-бутил)-12-изопропил-2,2,5,11,14-пентаметил-4,7,10триоксо-6-(2-(4-((16-оксо-3,6,9,12-тетраокса-15-тиагептадецил)окси)фенил)пропан-2-ил)-3-окса-5,8,11триазапентадец-13-ен-15-оат
(8)-2-((трет-Бутоксикарбонил)(метил)амино)-3-(4-((14-гидрокси-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)фенил)-3-метилбутановую кислоту (65 мг, 0,120 ммоль) конденсировали с (8,Е)-этил-4-((8)-2амино-М,3,3-триметилбутанамидо)-2,5-диметилгекс-2-еноатом, используя НАТи и ОГРЕЛ, согласно той же самой стехиометрии и методике, как описано в общих методиках конденсирования в №етап е! а1., получая промежуточный свободный спирт после очистки с помощью флеш-хроматографии (1-10% МеОН/(2% АсОН/ЕЮЛс)). Далее, к трифенилфосфину (40 мг, 0,15 ммоль) в 0,75 мл ТГФ под Ν2 при 0°С одной порцией добавляли ди-трет-бутилазодикарбоксилат (35 мг, 0,15 ммоль). Через 35 мин образовывался белый осадок, и реакция становилась трудно перемешиваемой. К этой суспензии добавляли раствор промежуточного спирта (42 мг, 0,050 ммоль) в 0,75 мл ТГФ, достаточно разбавляя осадок для возобновления перемешивания. Через пять минут добавляли тиоуксусную кислоту (5,7 мг, 0,075 ммоль) в 0,05 мл ТГФ, что вызывало обесцвечивание желтой смеси. Через 30 мин реакцию оставляли нагреваться до комнтаной температуры. Осадок исчезал через еще 15 мин, и анализ ТСХ и ЖХМС показал почти полное превращение. Через еще 40 мин реакционную смесь концентрировали в вакууме, затем непосредственно подвергали флеш-хроматографии (40-100% ЕЮАс/Нех, затем до 10% МеОН/ЕЮАс), получая указанное в заголовке соединение (26 мг, 57%) как прозрачную пленку.
'II ЯМР (400 МГц, хлороформ-й) δ (млн. ч.) 7,43 (д, 1=8,4 Гц, 1,3Н), 7,31 (д, 1=8,3 Гц, 0,7Н), 6,976,72 (м, 2Н), 6,62 (дд, 1=9,3, 1,6 Гц, 1Н), 6,14 (д, 1=9,6 Гц, 1Н), 5,22 (с, 0,7Н), 5,12-4,99 (м, 1Н), 4,84 (с, 0,3Н), 4,69 (д, 1=9,3 Гц, 0,3Н), 4,60 (д, 1=8,9 Гц, 0,7Н), 4,19 (к, 1=7,2 Гц, 2Н), 4,09 (тд, 1=4,6, 2,3 Гц, 2Н), 3,84 (т, 1=4,9 Гц, 2Н), 3,77-3,70 (м, 2Н), 3,70-3,61 (м, 10Н), 3,59 (т, 1=6,4 Гц, 2Н), 3,07 (т, 1=6,4 Гц, 2Н), 2,97 - 2,91 (м, 3Н), 2,84 (с, 3Н), 2,32 (с, 3Н), 1,87 (с, 3Н), 1,49 (с, 3Н), 1,43 (с, 9Н), 1,35 (с, 3Н), 1,30 (т, 1=7,1 Гц, 3Н), 0,87 (д, 1=6,6 Гц, 3Н), 0,80 (д, 1=16,6 Гц, 3Н), 0,77 (с, 9Н).
С46Н77МзО128 расч. [М+Н]+=896,53 аем; найдено т//=896,77. К(=0,56 (80% ЕЮАс/Нех).
Пример 137. (68,98,128,Е)-Этил-9-(трет-бутил)-12-изопропил-2,2,5,11,14-пентаметил-4,7,10триоксо-6-(2-(4-((13-оксо-3,6,9-триокса-12-тиатетрадецил)окси)фенил)пропан-2-ил)-3-окса-5,8,11триазапентадец-13-ен-15-оат
Указанное в заголовке соединение получали из (8)-2-((трет-бутоксикарбонил)(метил)амино)-3-(4- 77 029818 (2-(2-(2-(2-гидроксиэтокси)этокси)этокси)этокси)фенил)-3-метилбутановой кислоты (66 мг, 0,065 ммоль) согласно той же самой методике, что описана выше, получая 32 мг (57%) как прозрачную пленку после флеш-хроматографии (20-100% ЕЮАс/Нех).
'ΐ I ЯМР (400 МГц, хлороформ-6) δ (млн. ч.) 7,44 (д, 1=8,5 Гц, 1,3Н), 7,32 (д, 1=8,5 Гц, 0,7Н), 6,956,77 (м, 2Н), 6,62 (дд, 1=9,2, 1,7 Гц, 1Н), 6,09 (д, 1=9,1 Гц, 1Н), 5,24 (с, 0,7Н), 5,13-4,95 (м, 1Н), 4,84 (с, 0,3Н), 4,69 (д, 1=9,6 Гц, 0,3Н), 4,60 (д, 1=9,0 Гц, 0,7Н), 4,19 (к, 1=7,1 Гц, 2Н), 4,09 (тд, 1=4,7, 2,4 Гц, 2Н), 3,84 (т, 1=4,9 Гц, 2Н), 3,72 (дд, 1=5,7, 3,2 Гц, 2Н), 3,70-3,65 (м, 2Н), 3,66-3,62 (м, 4Н), 3,60 (т, 1=6,5 Гц, 2Н), 3,09 (т, 1=6,5 Гц, 2Н), 2,96-2,88 (м, 3Н), 2,84 (с, 3Н), 2,33 (с, 3Н), 1,88 (д, 1=3,5 Гц, 3Н), 1,49 (с, 2Н), 1,43 (д, 1=5,5 Гц, 11Н), 1,35 (с, 2Н), 1,30 (т, 1=7,1 Гц, 2Н), 0,87 (д, 1=6,6 Гц, 3Н), 0,80 (д, 1=15,9 Гц, 3Н), 0,76 (с, 9Н).
С44Н73Ы3Оц8 расч. [М+Н]+=852,51 аем; найдено т//=852,79. К(=0,60 (60% ЕЮАс/Нех).
Пример 138. (68,98,128,Е)-Этил-9-(трет-бутил)-12-изопропил-2,2,5,11,14-пентаметил-4,7,10триоксо-6-(2-(3-((16-оксо-3,6,9-триокса-12-тиатетрадецил)окси)фенил)пропан-2-ил)-3-окса-5,8,11триазапентадец-13-ен-15-оат
Указанное в заголовке соединение получали из (8)-3-(3-((14-гидрокси-3,6,9,12тетраоксатетрадецил)окси)фенил)-3-метил-2-(метиламино)бутановой кислоты (73 мг, 0,080 ммоль) согласно той же самой методике, что описана выше, получая 66 мг (47%) как прозрачную пленку после флеш-хроматографии (20-100% ЕЮАс/Нех).
'Н ЯМР (400 МГц, хлороформ-6) δ (млн. ч.) 7,25-6,92 (м, 3Н), 6,78-6,70 (м, 1Н), 6,62 (д, 1=8,9 Гц, 1Н), 6,12 (д, 1=8,9 Гц, 1Н), 5,26 (с, 0,7Н), 5,12-4,99 (м, 1Н), 4,89 (с, 0,3Н), 4,74-4,56 (м, 1Н), 4,19 (к, 1=7,2 Гц, 1Н), 4,16-4,03 (м, 2Н), 3,84 (тд, 1=5,0, 3,2 Гц, 2Н), 3,77-3,61 (м, 14Н), 3,60 (т, 1=6,4 Гц, 2Н), 3,09 (т, 1=6,5 Гц, 2Н), 2,97-2,75 (м, 6Н), 2,33 (с, 3Н), 1,91-1,83 (м, 3Н), 1,52-1,35 (м, 16Н), 1,26 (т, 1=7,1 Гц, 3Н), 0,87 (д, 1=6,0 Гц, 3Н), 0,81 (д, 1=12,9 Гц, 3Н), 0,77 (с, 9Н).
С46Н77ЩО128 расч. [М+Н]+=896,53 аем; найдено т//=896,68. К(=0,61 (75% ЕЮАс/Нех).
Пример 139. (8,Е)-4-((8)-2-((8)-3-(4-((14-меркапто-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)фенил)-3метил-2-(метиламино)бутанамидо)-Н,3,3-триметилбутанамидо)-2,5-диметилгекс-2-еновой кислоты дисульфид
Указанное в заголовке соединение получали омылением с последующим ТФУ промотированным удалением Вос согласно с точными методами, описанными в №етап е1 а1. из (68,98,128,Е)-этил-9-(третбутил)-12-изопропил-2,2,5,11,14-пентаметил-4,7,10-триоксо-6-(2-(4-((16-оксо-3,6,9,12-тетраокса-15тиагептадецил)окси)фенил)пропан-2-ил)-3-окса-5,8,11-триазапентадец-13-ен-15-оата (26 мг, 0,029 ммоль), получая указанное в заголовке соединение (16 мг, 90%) как прозрачного стеклоподобного вещества после полного удаления избытка ТФУ.
'Н ЯМР (400 МГц, метанол-64) δ (млн. ч.) 8,43 (д, 1=8,1 Гц, 1Н), 7,47 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 7,08-6,94 (м, 2Н), 6,80 (дк, 1=9,9, 1,5 Гц, 1Н), 5,08 (т, 1=10,1 Гц, 1Н), 4,94 (д, 1=8,1 Гц, 1Н), 4,32 (с, 1Н), 4,21-4,12 (м, 2Н), 3,93-3,81 (м, 3Н), 3,76 (т, 1=6,4 Гц, 2Н), 3,76-3,72 (м, 2Н), 3,72-3,62 (м, 10Н), 3,17 (с, 3Н), 2,92 (т, 1=6,4 Гц, 2Н), 2,61-2,47 (м, 3Н), 2,14-2,00 (м, 1Н), 1,94 (д, 1=1,5 Гц, 3Н), 1,46 (с, 3Н), 1,40 (д, 1=7,7 Гц, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,94 (д, 1=5,0 Гц, 3Н), 0,92 (д, 1=4,8 Гц, 3Н).
С74Н124Ы6О1882 расч. [М+Н]+=1449,85 аем; найдено т//=1450,49.
Пример 140.
Соединение примера 139 восстанавливали согласно с методиками, описанными ниже для получения целевого соединения.
Пример 141. (8,Е)-4-((8)-2-((8)-3-(4-(2-(2-(2-(2-меркаптоэтокси)этокси)этокси)этокси)фенил)-3метил-2-(метиламино)бутанамидо)-Ы,3,3 -триметилбутанамидо)-2,5-диметилгекс-2-еновой кислоты дисульфид
- 78 029818
Указанное в заголовке соединение получали омылением с последующим ТФУ промотированным удалением Вос, точно следуя методикам, описанным в №етап е1 а1. из (68,98,128,Е)-этил-9-(трет-бутил)12-изопропил-2,2,5,11,14-пентаметил-4,7,10-триоксо-6-(2-(4-((13-оксо-3,6,9-триокса-12-тиатетрадецил)окси)фенил)пропан-2-ил)-3-окса-5,8,11-триазапентадец-13-ен-15-оата (32 мг, 0,037 ммоль), получая указанное в заголовке соединение (29 мг, 86%) как прозрачное стеклоподобное вещество после полного удаления избытка ТФУ.
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ (млн. час.) 8,39 (д, 1=8,2 Гц, 1Н), 7,44 (д, 1=8,9 Гц, 2Н), 7,01 (д, 1=8,5 Гц, 2Н), 6,77 (д, 1=7,9 Гц, 1Н), 5,05 (т, 1=10,1 Гц, 1Н), 4,92 (д, 1=8,3 Гц, 1Н), 4,28 (с, 1Н), 4,15 (дд, 1=5,8, 3,4 Гц, 2Н), 3,89-3,80 (м, 2Н), 3,73 (т, 1=6,4 Гц, 2Н), 3,72-3,69 (м, 2Н), 3,69-3,60 (м, 6Н), 3,14 (с, 3Н), 2,89 (т, 1=6,4 Гц, 2Н), 2,50 (с, 3Н), 2,11-1,97 (м, 1Н), 1,91 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,43 (с, 3Н), 1,36 (с, 3Н), 1,06 (с, 9Н), 0,92-0,87 (м, 6Н).
расч. [М+Н]+=1361,80 аем; найдено т^=1362,26.
Пример 142.
Соединение примера 141 восстанавливали согласно с методиками, описанными ниже, для получения целевого соединения.
Пример 143. (8,Е)-4-((8)-2-((8)-3-(3-((14-меркапто-3,6,9,12-тетраоксатетрадецил)окси)фенил)-3метил-2-(метиламино)бутанамидо)-N,3,3-триметилбутанамидо)-2,5-диметилгекс-2-еновая кислота
Указанное в заголовке соединение получали омылением с последующим ТФУ промотированным удалением Вос согласно с точными методами, описанными в №етап е1 а1. из (68,98,128,Е)-этил 9-(третбутил)-12-изопропил-2,2,5,11,14-пентаметил-4,7,10-триоксо-6-(2-(3-((16-оксо-3,6,9,12-тетраокса-15тиагептадецил)окси)фенил)пропан-2-ил)-3-окса-5,8,11-триазапентадец-13-ен-15-оата (56 мг, 0,029 ммоль), получая указанное в заголовке соединение (43 мг, 82%) как почти-белую пену после полного удаления избытка ТФУ.
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ (млн. ч.) 8,48 (д, 1=8,3 Гц, 1Н), 7,47-7,29 (м, 1Н), 7,21-7,04 (м, 1Н), 6,95 (т, 1=9,4 Гц, 1Н), 6,80 (д, 1=9,7 Гц, 1Н), 5,08 (т, 1=10,1 Гц, 1Н), 4,97-4,94 (м, 1Н), 4,38 (с, 1Н), 4,244,13 (м, 2Н), 3,95-3,82 (м, 2Н), 3,80-3,58 (м, 14Н), 3,17 (с, 3Н), 2,92 (т, 1=6,4 Гц, 2Н), 2,53 (с, 3Н), 2,11-2,03 (м, 1Н), 1,94 (д, 1=1,4 Гц, 3Н), 1,47 (с, 3Н), 1,40 (с, 3Н), 1,09 (с, 9Н), 0,93 (дт, 1=11,2, 3,4 Гц, 15Н).
расч. [М+Н]+=1449,85 аем; найдено т^=1450,06.
Пример 144.
Соединение примера 143 восстанавливали согласно с методиками, описанными ниже, для получения целевого соединения.
Пример 145.
тАЬ-8Ρ^Ρ - соединение 142 получали, используя способ синтеза соединения 142, описанный выше,
- 79 029818 и способ связывания 8ΡΌΡ, описанный ниже. Пример 146.
тАЬ-8РОР - соединение 140 получали, используя способ синтеза соединения 140, описанный выше, и способ связывания 8РОР, описанный ниже.
Пример 147.
тАЬ-8РОР - соединение 144 получали, используя способ синтеза соединения 144, описанный выше, и способ связывания 8РОР, описанный ниже.
ше, и способ связывания 8МСС, описанный ниже. Пример 149.
вы-
тАЬ-8МСС - соединение 142 получали, используя способ синтеза соединения 142, описанный ше, и способ связывания 8МСС, описанный ниже.
Пример 150.
вы-
тАЬ-8МСС - соединение 144 получали, используя способ синтеза соединения 144, описанный выше, и способ связывания 8МСС, описанный ниже.
Другие примеры.
Пример 151. (8,Е)-^(Бензилсульфонил)-4-((8)-2-((8)-3-циклогексил-3-метил-2-(метиламино)бутанамидо)-Ц 3,3 -триметилбутанамидо)-2,5-диметилгекс -2 -енамид
- 80 029818
Указанное в заголовке соединение синтезировали из (8)-2-(трет-бутоксикарбонил(метил)амино)-3циклогексил-3-метилбутановой кислоты, как получено 2а8к е! а1., I. Меб. СЬет. 2004, 47, (19), 4774-4786 и (8,Е)-4-((8)-2-амино-у3,3-триметилбутанамидо)-^(бензилсульфонил)-2,5-диметилгекс-2-енамида, полученного используя общие методики 10, 11, 3 и 2 и используя общие методики 4 и 7.
ΊI ЯМР (400 МГц, метанол-б4) δ 7,38 (с, 5Н), 6,37 (дд, 1=9,4, 1,7 Гц, 1Н), 5,01 (т, 1=10,0 Гц, 1Н), 4,91 (с, 1Н), 4,75 (с, 2Н), 4,01 (с, 1Н), 3,10 (с, 3Н), 2,66 (с, 3Н), 2,05-1,91 (м, 4Н), 1,91-1,67 (м, 6Н), 1,45-1,28 (м, 3Н), 1,29-1,01 (м, 17Н), 0,95-0,75 (м, 9Н).
С34Н5бШО58 расч. ιη/ζ=632.40; найдено [М+Н]+=633,35.
Пример 152
тЛЬ-МСАсРАВС - соединение 85 получали, используя соединение примера 120, описанное выше, и общий способ конъюгации МСусРАВС, описанный ниже.
Пример 153
тЛЬ-МСνсРЛВС - соединение 77 получали, используя соединение примера 119, описанное выше, и общий способ конъюгации МСусРАВС, описанный ниже.
Пример 154
тЛЬ-МСνсРЛВС - соединение 80 получали, используя соединение примера 121, описанное выше, и способ конъюгации МСусРАВС, описанный ниже.
Пример 155
(155) тЛЬ-МСνсРЛВС - соединение 58 получали, используя соединение примера 158 (МСусРАВС58), описанное ниже, и способ конъюгации МСусРАВС, описанный ниже.
Пример 156
- 81 029818 шАЬ-МСусРАВС - соединение 41 получали, используя соединение примера 122, описанное выше, и способ конъюгации МСусРАВС, описанный ниже.
Пример 157
тАЬ-МСусРАВС - соединение 63 получали, используя соединение примера 159 (МСусРАВС830),описанное ниже, и способ конъюгации МСусРАВС, описанный ниже.
защищенному примеру 58.
1Н ЯМР (400 МГц, метанол-й4) δ 7,60 (д, 1=8,1 Гц, 2Н), 7,56 (д, 1=7,8 Гц, 2Н), 7,47 (т, 1=7,6 Гц, 2Н), 7,37 (т, 1=7,3 Гц, 1Н), 7,33 (д, 1=8,2 Гц, 2Н), 7,26 (д, 1=8,0 Гц, 2Н), 7,22 (д, 1=7,9 Гц, 2Н), 6,81 (с, 2Н), 6,37 (д, 1=9,3 Гц, 1Н), 5,13-5,01 (м, 3Н), 4,96 (с, 1Н), 4,70 (с, 2Н), 4,56-4,51 (м, 1Н), 4,38 (с, 1Н), 4,23-4,16 (м, 1Н), 3,50 (т, 1=7,1 Гц, 2Н), 3,27-3,19 (м, 1Н), 3,18-3,04 (м, 4Н), 2,52 (с, 3Н), 2,30 (т, 1=7,4 Гц, 2Н), 2,15-2,05 (м, 1Н), 1,96 (с, 3Н), 1,98-1,88 (м, 1Н), 1,83-1,73 (м, 1Н), 1,64 (дк, 1=23,1, 7,3 Гц, 7Н), 1,48 (с, 3Н), 1,39 (с, 3Н), 1,37-1,30 (м, 2Н), 1,27 (с, 2Н), 1,21 (с, 2Н), 1,08 (с, 9Н), 1,00 (д, 1=6,7 Гц, 3Н), 0,99 (д, 1=6,8 Гц, 3Н), 0,91 (д, 1=6,6 Гц, 3Н), 0,88 (д, 1=6,5 Гц, 3Н).
С^Н^пО^ расч. ι/ζ=1279,7, найдено [М+Н]+=1281,0.
Указанное в заголовке соединение получали используя общие методики 15 и 7 к Вос-защищенному примеру 63.
расч. ι/ζ=1265,7; найдено [М+Н]+=1266,7.
Специалисту в этой области техники должно быть понятно, что возможно проведение химических превращений, показанных на схемах выше, с модификацией одного или более параметров. Например, для химии могут быть пригодны альтернативные ненуклеофильные растворители, такие как ТГФ, ДМФ, толуол и т.д. Температуры реакций могут изменяться. Альтернативные реагенты могут быть пригодны для действия как дегидратирующие или кислото-активирующие агенты, которые обычно используются в рекциях образования амидов, такие как пентафторфениловые эфиры, ΝΉ8 эфиры, ЕЭАС, НВТИ, НОВТ и т.д.
Другие показательные соединения.
Следующие показательные соединения могут быть получены согласно приведенным выше методикам. Как очевидно среднему специалисту в данной области техники, следующие соединения являются синтетически доступными при использовании описания XVО 2004/026293 для получения реагентов предшественников и используя общие методики с пригодным сульфонамидом.
- 82 029818
- 83 029818
- 84 029818
- 85 029818
Пример 1. Биологические исследования.
В табл. 1-8 сведены данные цитотоксической активности целевых соединений по отношению к линиям клеток. На фиг. 1 показаны данные для соединений А, В, С, Ό и Е, когда тестировались с использованием линии клеток карциномы молочной железы человека НСС1954 или линии лейкемических Тлимфоцитов человека. Фиг. 2-6 показывают графики данных цитотоксичности для отдельных соединений А-Е. В табл. 2-6 сведены результаты дополнительных исследований цитотоксичности.
Использованные линии клеток: линия лейкемических Т-лимфоцитов человека (клетки Джурката) (АТСС: Т1В-152); НСС1954 (АТСС: СКЬ. 2338); линии клеток поджелудочной железы человека: АкРС-1 (АТСС: СКЬ-1682), ВхРС-3 (АТСС: СКЬ,1687), НРАР-ΙΙ (АТСС: СКЬ,1997), М1аРаСа2 (АТСС: СКЬ, 1420), РАИС-1 (АТСС: СКЬ, 1469), Сарап-1 (АТСС: НТВ-79), Сарап-2 (АТСС: НТВ-80) и линия клеток карциномы желудка человека ΝΌΙ-Ν87 (АТСС: СКЬ. 5822); АМЬ-193 (АТСС: СКЬ,9589), ССКР-СЕМ (АТСС: ССЬ-119), Όυ145 (АТСС: НТВ-81), РС-3 (АТСС: СКЬ,1435), А-431 (АТСС: СКЬ,1555), НТ-29 (АТСС: НТВ-38), А-172 (АТСС: СКЬ,1620), ΝΠΉ358 (АТСС: СКЬ,5807), А549 (АТСС: ССЬ-185), Сок205 (АТСС: ССЬ-222), МПА-МВ-231 (АТСС: НТВ-26), ОУСАК-3 (АТСС: НТВ-161), ОУ-90 (АТСС: СКЬ, 11732), ОЕ19 (§1§та: 96071721), КТ112/84 (81§та: 85061106).
За день до добавления соединений: НСС1954 АкРС-1, ВхРС-3, НРАР-ΙΙ, М1аРаСа2, РΑNС-1, Сарап1, Сарап-2 и ΝΟΙ-Ν87 клетки добавляли в 96-луночный микротитрационный планшет с непрозрачными стенками обработанный культурой ткани, используя готовую питательную среду с плотностью 2500 клеток/100 мкл среды. Эти сросшиеся линии клеток инкубировали одну ночь при 37°С/5% СО2, позволяя клеткам присоединится к поверхности микротитрационных планшетов. В день добавления соединений клетки Джурката добавляли в отдельные 96-луночные микротитрационные планшеты в количестве 2500 клеток/100 мкл, используя ту же самую питательную среду как для НСС1954. Соединение сначала серийно разводили, используя диметилсульфоксид, и затем полученные разведения добавляли в готовую питательную среду в пятикратной конечной концентрации - соединения затем титровали 1:3, восемь стадий. Контроль, не содержащий соединение (только питательную среду), включали в каждый микротитрационный планшет в шести экземплярах. Добавляли полученные титрованные соединения (25 мкл/лунку) в трех экземплярах. Клетки и титрованные соединения инкубировали при 37°С/5% СО2 на протяжении трех ночей. После инкубации измеряли жизнеспособность клеток, используя реагент Се11ТНег-О1о®, путем добавления 30 мкл, полученного Се11ТПег-О1о® к каждой исследуемой лунке. Исследование инкубировали на протяжении по меньшей мере 20 мин в темноте, и затем измеряли излучаемую люминисценцию, используя микропланшетный люминометр (время интегрирования 500 мс). Полученные единицы относительной люминисценции (ЕОЛ) конвертировали в % цитотоксичности, используя контроль, содержащий только питательную среду, определенный выше (% цитотоксичности=1-[ЕОЛ лунки/среднее ЕОЛ контроля, содержащее только среду]).
ОгарНРаб Ргйт использовали для получения значений ЕС50, используя построение кривой по трехпараметрической нелинейной регрессии.
- 86 029818
Цитотоксичность соединений
Таблица 1
НСС1954 клетки (НЕК2+) клетки Джурката (НЕК2-)
СОЕДИНЕНИЕ ЕСьо (нМ) ЕС',0 святей (нМ) ЕС50 (нМ) ЕС50 связей (нМ)
А 0,86 0,3765 - 1,966 0,78 0,5970- 1,013
В 8,1 4,778 - 13,56 10,5 6,221 - 17,70
С 0,67 0,3738 - 1,186 0,57 0,4088 - 0,8085
Ώ 0,061 0,04550 - 0,08050 0,043 0,03127-0,05921
Е 0,79 0,5418-1,140 1,67 1,223 - 2,268
Цитотоксичность соединений
Таблица 2
НСС1954 Джуркат
ЕСзо (нМ) ЕС50 связей (нМ) К квадрат ЕС» (нМ) ЕС 50 связей (нМ) К квадрат
А 3 1,582- 5,228 0,9158 5 3,1276,641 0,9647
В 13 10,50- 16,27 0,9878 59 33,41 104,5 0,9257
С 1,3 0,7970- 1,977 0,9493 1,9 1,248 2,896 0,9562
ϋ 0,06 0,04550 0,08050 0,9656 0,04 0,031270,05921 0,9497
Е 0,79 0,5418 - 1,140 0,9314 1,67 1,223 2,268 0,9518
Таблица 3
Цитотоксичность соединений по отношению к клеткам Джурката
Соединение ЕСяДнМ)
А 4,5
В 59
115 36
с 1,9
118 13
ϋ 0,033
Е 1,67
12 0,030
13 0,038
14 0,007
14 0,015
15 7,604
16 0,041
17 0,325
18 1,358
19 0,152
22 0,021
47 0,261
24 0,070
48 0,208
23 0,031
28 0,021
29 0,121
39 0,109
31 0,094
74 0,087
25 0,050
26 0,105
49 2,5
- 87 029818
Таблица 4
Цитотоксичность соединений по отношению к клеткам НСС-1954
Соединение ЕСЩнМ)
А 2,1
В 13
115 172
с 1,3
ϋ 0,06
Е 0,79
79 0,241
80 0,207
Таблица 5
Цитотоксичность (ЕС50) соединений по отношению к клеточным линиям разных опухолей (нМ)
- 88 029818
Таблица 6
Цитотоксичность соединений по отношению к клеткам Джурката
Соединение ЕС50(нМ)
108 0,017
110 0,031
107 0,043
114 0,056
112 0,064
98 0,077
109 0,087
91 0,109
64 0,138
66 0,145
93 0,196
103 0,209
104 0,272
95 0,288
102 0,289
97 0,307
68 0,337
45 0,373
92 0,485
72 0,531
67 0,562
33 0,636
88 0,641
105 0,731
105 0,753
35 0,832
70 0,856
71 1,021
62 1,195
44 1,479
13 1,515
69 1,564
94 1,673
73 2,684
96 10,260
111 — 0,1178
91 0,109
93 0,196
95 0,288
97 0,307
92 0,485
88 0,641
62 1,195
94 1,673
96 10,260
64 0,138
66 0,145
103 0,209
104 0,272
102 0,289
68 0,337
72 0,531
105 0,731
105 0,753
70 0,856
- 89 029818
Таблица 7
Цитотоксичность по отношению к клеткам Джурката
Таблица 8
Цитотоксичность по отношению к разным линиям клеток
Линия клеток опухоли Соединение-14 (ЕС^п)
(нМ)
АМЬ-193 0,191
ССКР-СЕМ 0,130
ОЫ145 0,649
РС-3 0,455
А-431 0,191
НТ-29 0,167
НСС-1954 0,131
А-172 0,598
Ν01-Ν87 0,325
Джуркат 0,068
ВхРС-З 0,196
ΝΟΙ-Η358 0,311
\Па РаСа-2 0,332
А549 0,860
Со1о-205 -0,3168
ΡΑΝ0-1 0,759
МОА-МВ-231 1,242
АзРС-1 0,334
ΗΡΑΡ-ΙΙ - 0,3850
ОУСАК.-3 0,090
ОУ-90 0,515
ОЕ19 0,210
КТ112/84 0,178
- 90 029818
Пример 2. Примеры конъюгатов антитело-лекарственное средство. Конъюгаты антителолекарственное средство - примеры линкеров.
Как понятно специалисту в данной области техники, природа линкера, используемого для образования конъюгата, будет зависеть от реактивной группы соединения реагента, используемого для образования связи. В качестве примера и в пределах рамок настоящего изобретения соединения, имеющие тиольный фрагмент, могут быть использованы для образования конъюгата. В некоторых из представленных примеров коммерчески доступный расщепляемый линкер сульфосукцинимидил-6-[3'(2пиридилдитио)-пропионамидо]гексаноат (сульфо-ЬС-δΡΌΡ: ТЬегшо Р1егсе Са1# 21650) и нерасщепляемый линкер сукцинимидил-4-[N-малеимидометил]циклогексан-1-карбоксилат (8МСС: ТЬегто Г1егсе Са1# 22360) были использованы для реакций конъюгации антитело-лекарственное средство. Методика конденсации осуществляется в две основные стадии: 1) включение линкеров в антитело с помощью реакции с первичными аминогруппами антитела (остатки лизина) и Ν-гидроксисукцинимид (ΝΗδ) эфирным фрагментом линкеров, и 2) реакцию включенной малеимидной группы (8МСС) или 2пиридилдитиогруппы (ЬС-δΡΌΡ) с тиолсодержащими соединениями.
Активация антитела расщепляемыми (ЪС-δΡΌΡ) или нерасщепляемыми (8МСС) линкерами.
Антитело (херцептин) разводили в или фосфате калия рН 8 (сульфо-ЪС-δΡΌΡ), или Ω-ΡΕδ (Ιηνίίτοдеп) рН 7,4 (8МСС) до 5 мг/мл. К разведенному антителу добавляли свежерастворенный линкер, используя ультрачистую воду для сульфо-ЪС-δΡΌΡ или безводный Ν,Ν-диметилацетамид (ОМА) для 8МСС. Получали 10-14-кратный молярный избыток δМСС:антитело или сульфо-^С-δΡ^Ρ:антитело при включении 5-7 линкеров/антитело. Реакцию активации линкер-антитело инкубировали при 28°С на протяжении 2 ч. После инкубации непрореагировавший линкер удаляли из каждого образца антитела, используя колонки 40 кДа ΖеЬа для эксклюзионной хроматографии/высаливания (ТЬегто Ρ^е^се Са1# 87771 или 87772 в зависимости от масштаба). Во время этой стадии хроматографии буфер меняли при подготовке к следующей реакции: или на фосфатный буфер/ЭДТА рН 6,5 (ЪС-δΡΌΡ), или на цитратный буфер/ЭДТА рН 5 (8МСС). Очищенные рецептуры затем исследовали на общее содержание белка по отношению к стандартной кривой антитела, используя микропланшет, адаптироанный для ВСА исследования (ТЬегто Ρ^е^се Са1# 23225). Для оценки степени включения линкера проводили реакцию в малом масштабе с избытком (~10-кратный по сравнению с концентрацией белка) цистеина. После 10-минутной инкубации определяли непрореагироваший цистеин, используя 5,5-дитио-бис-(2-нитробензойную кислоту) (реагент Эллмана, ТЬегто Ρ^е^се Са1# 22582). Путем интерполяции концентрации стандартной кривой цистеина была определена концентрация линкера после вычитания определенного значения из известной концентрации используемого цистеина.
Реакция тиолсодержащих соединений с линкер-активированным антителом.
На второй стадии реакции конденсации использовали активированное антитело путем разведения рецептуры до 2 мг/мл, используя или фосфатный буфер/ЭДТА рН 6,5 (ЪС-δΡΌΡ), или цитратный буфер/ЭДТА рН 5 (8МСС). Перед использованием тиолсодержащие η-ацилсульфонамидные соединения или майтансиноид ЭМ 1 восстанавливали, используя ТСЕР-агарозные шарики, для обеспечения доступности тиольной группы для реакции с включенными линкерами. Коротко, соединения разводили до 5 мМ, используя фосфатный буфер/ЭДТА рН 6,5. В случаях, когда растворимость в воде была проблемой, добавляли небольшой объем 37% ΗΟ (1:300) и этого было достаточно для растворения соединений с 5 мМ. ТСЕР-агарозные шарики (ТЬегто Ρ^е^се Са1# 77712) уравновешивали фосфатный буфер/ЭДТА/10% ОМА перед использованием. Разведенные соединения взбалтывали с ТСЕР-агарозными шариками по меньшей мере 0,5 ч или до 3 ч. Восстановленные соединения собирали центрифугированием через фильтр, который исключал ТСЕР-агарозу. Измеряли степень восстановления и концентрацию тиола, используя реагент Эллмана (по сравнению со стандартной кривой цистеина). Восстановленные тиолсодержащие соединения затем добавляли к образцам активированного антитела с ~2-кратным молярным избытком по сравнению с предварительно определенными концентрациями линкера. Для того чтобы контролировать эффективность реакции конденсации, получали ночной контроль конъюгации путем разведения каждого соединения в фосфатный буфер/ЭДТА рН 6,5 или цитратный буфер/ЭДТА рН 5 с тем же самым фактором разведения, что использовали в реакции конъюгации. Оставшиеся готовые соединения замораживали при -80°С. Реакции и ночные контроли инкубировали при комнатной температуре на протяжении ночи. На следующее утро замороженные готовые соединения размораживали, и получали другой контроль для каждого соединения точно так же как ночной контроль - это свежий контроль. Небольшой объем каждой реакции конъюгации сравнивали с ночными и свежими контролями соединения, используя реагент Эллмана. Непрореагировавшие соединения очищали от КАЛС, используя колонки 40 кДа ΖеЬа для эксклюзионной хроматографии/высаливания; и во время этой стадии буфер заменяли на Ω-Ρβδ рН 7,4 (1п\а1годеп).
Очищенные КАЛС затем анализировали на общее содержание белка (исследование ВСА, протокол Ρ^е^се тюгоВСА), относительное сродство связывания с антигеном (равновесное природное связывание) и селективное цитотоксическое уничтожение ИЕК2-позитивных клеток (НСС1954) по сравнению с ИЕК2-негативными клетками (Джуркат).
- 91 029818
Исследование цитотоксичности.
В табл. 9 и 10 сведены данные цитотоксической активности КАЛС, содержащих соединения А, В или С, когда тестировались с использованием линии клеток карциномы молочной железы человека НСС1954 или линии лейкемических Т-лимфоцитов человека. На фиг. 7-9 показаны графики данных цитотоксичности для отдельных композиций, как указано.
За день до добавления тестируемых продуктов НСС1954 клетки добавляли в 96-луночный микротитрационный планшет с непрозрачными стенками, обработанный культурой ткани, используя готовую питательную среду с плотностью 2500 клеток/100 мкл среды. НСС1954 клетки инкубировали на протяжении одной ночи при 37°С/5% СО2, позволяя клеткам присоединится к поверхности микротитрационных планшетов. В день добавления тестируемых продуктов клетки Джурката добавляли в отдельные 96луночные микротитрационные планшеты в количестве 2500 клеток/100 мкл, используя ту же самую питательную среду как для НСС1954. Для сравнения уничтожения КАЛС, полученных из свободных соединений, п-ацилсульфонамидные соединения сначала серийно разводили, используя диметилсульфоксид или ОМА, и затем полученные разведения добавляли в готовую питательную среду в пятикратной конечной концентрации - соединения затем титровали 1:3, восемь стадий. Для тестирования КАЛС их непосредственно разводили в питательной среде в пятикратной конечной концентрации - КАЛС, затем титровали 1:3, восемь стадий. Контроль без тестируемого продукта (только питательная среда) включали в каждый микротитрационный планшет в шести экземплярах. Добавляли полученные титры соединение/КАЛС (25 мкл/лунку) в трех экземплярах и к НСС1954 клеткам, и к клеткам Джурката. Клетки и титры инкубировали при 37°С/5% СО2 на протяжении трех ночей. После инкубации измеряли жизнеспособность клеток, используя реагент Се11Тйег-С1о®, путем добавления 30 мкл, полученного СеИТНегС1о®, к каждой исследуемой лунке. Исследование инкубировали на протяжении по меньшей мере 20 мин в темноте, и затем измеряли излучаемую люминисценцию, используя микропланшетный люминометр (время интегрирования 500 мс). Полученные единицы относительной люминисценции (ЕОЛ) конвертировали в % цитотоксичности, используя контроль, содержащий только питательную среду, определенный выше (% цитотоксичности=1-[ЕОЛ лунки/среднее ЕОЛ контроля, содержащее только среду]).
Данные показывают, что рассматриваемые соединения являются активными цитотоксинами по отношению к обеим использованным линиям клеток. Конъюгаты ЬС-8РОР-связанного соединения демонстрируют эффективное уничтожение НЕК2-позитивных НСС1954 клеток. Уничтожение клеток Джурката наблюдается при высоких дозах КАЛС вследствие присутствия Р-меркаптоэтанола в культуральной среде клеток, что приводит к высвобождению свободного соединения (данные не показаны).
Таблица 9
Цитотоксичность - конденсация #1
НСС1954 Джуркат
Оптимальная подгонка Пределы Оптимальная подгонка Пределы
ЕС,„ (нМ) ЕС,о (нМ) ЕС,о (нМ) ЕС» (нМ)
змсссвязанный Херцептин-ЗМСССоединение А 6,5 2,740- 15,22 332 134,6-819,0
Херцептин-ЗМСССоединение В 66 26,48- 165,1 83 48,29 - 144,0
Херцептин-ЗМСССоединение С 6 2,966- 12,79 12 6,594 - 20,26
ЬС-8РОРСвязанный Херцептин-ЬС- 8ΡΌΡСоединениеА 0,86 0,6660 - 1,121 21 13,74-32,68
Херцептин-ЬС- 8ΡϋΡСоединение В 0,068 0,02234 - 0,2093 11 7,028 - 15,91
Херцептин-ЬС- 3ΡϋΡСоединениеС 0,070 0,02590-0,1914 2 1,521 -3,613
Свободные Соединения Соединение А 2,1 1,352- 3,280 1,1 0,7580- 1,473
Соединение В 8Д 4,778- 13,56 10 6,221 - 17,70
Соединение С - - - -
- 92 029818
Таблица 10
Цитотоксичность - конденсация #2
НСС1954 Джуркат
Оптимальная подгонка Пределы Оптимальная подгонка Пределы
ЕС50 (нМ) ЕС50 (нМ) ЕС50 (нМ) ЕС50 (нМ)
8МССсвязанный Херцептин8МСССоединение А 15 8,266-27,50 50 28,62 - 87,34
Херцептин8МСССоединение В не сделано
Херцептин8МСССоединение С
ЬС-δΡϋΡсвязанный Херцептин-ЬСδΡϋΡСоединение А 0,061 0,01410-0,2672 8,7 5,852- 12,96
Херцептин-ЬСδΡϋΡСоединение В 0,22 0,1381 -0,3441 14 9,469-21,41
Херцептин-ЬСδΡϋΡСоединение С 0,042 0,01371 -0,1275 1,6 1,160-2,110
Свободные Соединения Соединение А 0,86 0,3765- 1,966 0,78 0,5970- 1,013
Соединение В 9,2 5,300- 15,98 36 20,52 - 64,36
Соединение С 0,67 0,3738- 1,186 0,57 0,4088-0,8085
Анализ конъюгата антитело-лекарственное средство (КАЛС) с помощью Е81ТоР масспеткрометрии.
Использовали времяпролетный масспектрометр с электроспрейионизацией (Е81ТоР) ^8!аг XI. НуЬпб диабгаро1е-ТОР ЖХ/МСМС- (АВ 8с1ех) для определения молекулярной массы КАЛС и для оценки соотношения лекарственное средство-к-антителу (СЛСА). МС устройство Е81ТоР снаряжали источником турбоспрей электроспрей ионизации. Сбор данных проводили в режиме позитивного иона и получали общий ток ионов образца, превышающего диапазон массы от 2000 до 4000 т/ζ, используя программное обеспечение Апа1у8! ^8 1.1. Источник иона работал с напряжением иглы распыления иона 5,2 КВ и распылением (газ 1) 25 (случайных единиц), газовая завеса 30 (случайных единиц), потенциал декластеризации 150 В и температура 150°С. Растворы тестируемых образов КАЛС вводили со скоростью 5 мкл/мин в источник иона путем непосредственной инфузии через приваренный кварцевый капилляр с помощью шприца и шприцевого насоса.
Получение образца КАЛС для МС анализа Е81-ТоР.
Все образцы КАЛС дегликозилировали, используя эндогликозидазу Εηάо8(IдОΖΕΚО)™, и буфер заменяли водой перед Е81ТоР-МС анализом. Коротко, оригинальный образец КАЛС пропускали через концентратор 100К МАСО Атгсоп для замены буфера на фосфатно-натриевый буфер. Образец с замененным буфером затем обрабатывали ЦОМЕКО (1 единица/1 мкг антитела) в фосфатно-натриевый буфер расщепления, содержащий 150 мМ ИаС1, и инкубировали 30 мин при 37°С. Полученный дегликозилированный КАЛС снова подвергали замене буфера на воду, используя концентратор 100К МАСО Ат1соп, и разводили перед анализом 0,1% муравьиной кислотой в ацетонитрил/вода (50/50 об./об.%) до концентрации 3,0 мкг/мкл.
Анализы показали, что антитело имеет нагрузку с дипазаном СЛСА в интервале 4-7 (данные не показаны).
Пример 3. Примеры конъюгатов антитело-лекарственное средство.
Получение конъюгатов антитело-лекарственное средство из МСусРАВС-токсинов, общие способы.
К раствору антитела (1-10 мг/мл) в 25 мМ борате натрия, 25 мМ хлориде натрия, 1 мМ ДТПК (рН 8,0) добавляли ТСЕР из свежеполученного готового раствора (1-10 мМ) в том же самом буфере (2,0-3,0 молярных экв.). Раствор тщательно перемешивали и инкубировали при 37°С на протяжении двух часов перед охлаждением на льду. В некоторых случаях раствор восстановленного антитела дополнительно разводили или охлажденным льдом физиологическим раствором забуференным фосфатом, содержащим 1 мМ ДТПК (конечная концентрация белка 2,0 мг/мл) или охлажденным льдом 25 мМ боратом натрия, 25 мМ хлоридом натрия, 1 мМ ДТПК (рН 8,0), с получением раствора с конечной концентрацией белка от 1 до 4 мг/мл. К восстановленному раствору белка, хранимому на льду, добавляли малеимид функционализированный токсин (10-12 мол. экв.) из 10 мМ готового раствора в ДМСО. Реакцию конъюгата немедленно тщательно перемешивали с помощью инверсии и обеспечивали протекание конъюгации на льду на протяжении около 1 ч и затем очищали путем пропускания через ΖеЬа 8рт Ре8а1!тд Со1итп8 (40 КЭа МАСО; Рейсе) предварительно уравновешенные физиологическим раствором забуференным фосфатом или 10 мМ цитратом натрия, 150 мМ хлорида натрия, рН 5,5. Элюат объединяли, фильтр стерилизовали (8!епГНр, МПНроге) и хранили при 4°С.
Очищенные КАЛС анализировали на общее содержание белка (исследование бикинхоновой кислоты, протокол Р1егсе тгсгоВСА, каталожный #23225). КАЛС продукт характеризовали с помощью восстанавливаемого и ^восстанавливаемого ЭПААГ, ВЭЖХ-ХГВ, ЭХ и ОФ-СВЭЖХ-МС. Среднее СЛСА и распределение лекарственного средства были производными интерпретации данных ХГВ и ЖХ-МС со
- 93 029818 ссылкой на невосстанавливаемый ЭПААГ. Оценки среднего СЛСА были нормальными в диапазоне 3,54,5. Определение относительного сродства КАЛС для связывания антигена (уравновешенное природное связывание) проводили как описано (выше/ниже). Оценивали селективную цитотоксичность конъюгатов антитело лекарственное средство путем тестирования уничтожения и антиген позитивных, и антиген негативных линий клеток.
Исследование селективной ίη νίίτο цитотоксичности конъюгатов антитело-лекарственное средство по отношению к антигенпозитивным клеткам.
Селективное уничтожение антигенпозитивной линии клеток (включая линии клеток НСС1954, ΝΟΝ87, НРЛР-П и ВхРС-3) по сравнению с антигеннегативными клетками Джурката было продемонстрировано для каждого полученного конъюгата. Цитотоксичность примеров КАЛС на нескольких антигенпозитивных линиях клеток сведена в идентифицированных фиг. и табл. 9-13. В дополнение, тестировали конъюгаты, обозначенные (*) в табл. 11, и была показана сильная активность по уничтожению клеток, таких как линия клеток рака молочной железы человека (данные не показаны). Вкратце, клетки получали от АТСС и выращивали, как описано в листке, приложенном к продукту. Клетки высевали в количестве 25000 клеток/мл (2500 клеток/лунку) в 96-луночных планшетах с черными стенками и плоским дном Сок1аг 3904. Сросшиеся линии клеток инкубировали на протяжении одной ночи при 37°С в атмосфере 5% СО2, позволяя клеткам присоединится в поверхности микротитрационных планшетов, в то время как суспензию (Джурката) клеток помещали в планшеты непосредственно перед использованием. КАЛС непосредственно разводили в пригодной клеточной питательной среде с пятикратной желаемой конечной концентрацией. Эти КАЛС затем титровали, обычно 1:3, более восьми стадий. Контроль без тестируемого продукта (только питательная среда) включали в каждый микротитрационный планшет в шести экземплярах. Добавляли полученные титры КАЛС (25 мкл/лунку) в трех экземплярах к каждой исследуемой линии клеток. Клетки и титры инкубировали при 37°С/5% СО2 на протяжении трех ночей (Джуркат) и пяти ночей (все другие линии клеток). После инкубации измеряли жизнеспособность клеток, используя реагент Се11ТЬег-01о®, путем добавления 30 мкл полученного Се11ТЬег-01о® к каждой исследуемой лунке. Смеси инкубировали на протяжении по меньшей мере 20 мин в темноте, и затем измеряли излучаемую люминесценцию, используя микропланшетный люменометр (время интегрирования 500 мс). Полученные единицы относительной люминесценции (ЕОЛ) конвертировали в % цитотоксичности, используя контроль, содержащий только питательную среду, определенный выше (% цитотоксичности=1[ЕОЛ лунки/среднее ЕОЛ контроля, содержащее только среду]). Данные (% цитотоксичности от концентрации КАЛС (1од10(НМ)) переносили на график и анализировали способами нелинейной регрессии, используя программное обеспечение ОгарЬРаб Рпкт ν. 5.02, для оценки ЕС50.
Оценка соотношения лекарственного средства к антителу (СЛСА).
Оценивали среднюю степень конъюгации токсин-линкер с антителом с помощью хроматографии с гидрофобным взаимодействием и высокоэффективной жидкостной хроматографии-масспектрометрии. Эти методики описаны в АпбЬобу Игид СонщдаЗек, МеШобк ίη Мо1еси1аг Вю1оду νο1. 1045, 2013. рр 275284. Ь. Иисгу, Е6., ηηά Λκίκΐι В. СЬакгаЬойу, 8сой ί. Вегдег и ίοΐιη С. ОеЬ1ег, СЬа^асίе^^ζаί^οη о£ аη ЩО1 Мопос1ош1 ΑηΙίόοάν ηηά ге1а1е6 8иЬк1гис1иге5 Ьу ЬС/Е8!-ТОР/МС: Арр^аНом моЩ \Уа1егк СогрогаПогг МагсЬ 2007. 720002107ЕЮ
Способ 1. Хроматография с гидрофобным взаимодействием.
Конъюгаты антитело-лекарственное средство подвергали хроматография с гидрофобным взаимодействием (ХГВ) на колонке Т8Кде1 ВиЮ-ЖК (ТокоЬ Вюкаемсе; 4,6x35 мм в.д.; размер частичек 2,5 мкм), присоединенной к АдПеШ 1100 модификации ВЭЖХ. Образцы инъецировали (5 мкл) при или выше 4 мг/мл. Когда необходимо, КАЛС концентрировали перед инъекцией, используя устройства для концентрации центрифугированием РАЬЬ Шмокер Отеда (часть # ОЭ010С34). Использовали линейный градиент элюирования, начиная с 95% подвижной фазы А/5% подвижной фазы В, переходя к 5% подвижной фазы А/95% подвижной фазы В за 12 мин (подвижная фаза А: 1,5М сульфат аммония+25 мМ фосфат натрия при рН 6,95 и подвижная фаза В: 25% изопропанол, 75% 25 мМ фосфата натрия при рН 6,95). Предлагается инъекция немодифицированного антитела как средства идентификации пика СЛСА=0. Антитела детектировали на основе абсорбции при 280 нм.
Способ 2. Сверхвысокоэффективная жидкостная хроматография-масспектрометрия для оценки СЛСА.
Тандем сверхвысокоэффективной жидкостной хроматографии с обращенной фазой с Е8!-0ТоРмасспектрометрией (СВЭЖХ-Е8!-ОТоР-МС) использовали для охарактеризования конъюгатов антителолекарственное средство через степень конъюгации лекарственного средства после восстановления дитиотреитолом. Охарактеризована проводили, используя Асс|иПу-СВЭЖХ (Н-класс) Вю, соединенный с Оиа1го-Ргепнег ЦТоР масспектрометром с источником электроспрей иона (^АТЕК8 СогрогаЬоц). СВЭЖХ анализ восстановленного образца КАЛС проводили при 70°С с помощью Ро1утегХ 5и РК-1 100А, колонка 50x2,0 мм (РИе^те^х, Шс.) и с подвижной фазой, состоящей из растворителя А: ацетонитрил/вода/трифторуксусная кислота/муравьиная кислота (10/90/0,1/0,1, об./об.%), и растворителя В: ацетонитрил/муравьиная кислота (100/0,1, об./об.%). Компоненты восстановленного образца КАЛС элю- 94 029818 ировали линейным градиентом, начиная с растворитель А/растворитель В (80/20 об./об. и скорости потока 0,3 мл/мин до растворитель А/растворитель В (40/60, об./об.%) на протяжении 25 мин, и затем до растворитель А/растворитель В (10/90, об./об.%) на протяжении 2 мин перед уравновешиванием назад до начальных условий. Общее время прогона было 30 мин. Данные ЕδI-ТοΓ МС общего ионного тока (ОИТ) получали в диапазоне 500-4500 т/ζ, используя программное обеспечение для сбора данных Ма88Ьупх (^а!ег8 Согрогайоп). Данные массы компонента образца получали в V-режиме позитивного иона, и источник ЭСИ работал при температуре источника: 150°С, температура десольватации 350°С, газ десольватации 800 л/ч, напряжение конуса образца 60 В, напряжение капилляра 3,0 кВ, газ десольватации азот и газ столкновения аргон. Общий масспектр ОИТ для каждого пика развертывали с помощью алгоритма МахЕп!1 для получения данных нейтральной массы пика компонента.
Получение восстановленных образцов КАЛС для СВЭЖХ/ЕδI-ТοΡ МС анализа.
Проводили восстановление дисульфидных связей в антителе КАЛС (~1 мкг/мкл раствора) для получения легкой и тяжелой цепей, используя 20 мМ ДТТ при 60°С на протяжении 20 мин. Для СВЭЖХ/ЕδI-ТοΡ-МС анализа использовали объем инъекции 5-10 мкл восстановленного образца КАЛС.
Пример КАЛС (РАВС) для иллюстративных целей
Обратите внимание, что Т - трастузумаб, который использовали взаимозаменяемо в данном документе с херцептин; VС - валин-цитрулин; С - цетуксимаб (эрбитукс).
Таблица 11
Цитотоксичность КАЛС (ЕС50, нМ)
КАЛС ЛМТ-1 УС1-И87 НСС1954
*Т-УС-Р АВС-80 - - 0,021
*Т-УС-Р АВС-77 0,046 0,002 0,069
*Т-УС-Р АВС-77 - - 0,023
С-УС-РАВС 77
*Т-УС-Р АВС-80 - - 0,018
*Т-УС-Р АВС-58 - - 0,030
*Т-УС-Р АВС-63 - - -
Таблица 12
Цитотоксичность КАЛС (ЕС50, нМ)
Цитотоксичность КАЛС (ЕС50, нМ)
КАЛС САРАИ-1 САРАИ-2
Т-УС-Р АВС-77 2,035 -
С-УС-РАВС - 77 - 0,115
Пример 4. Исследование эффективности токсинов на мышах, имеющих опухоль РС-3.
Тестируемые продукты вводили ВВ. Доза была такой, как указано на фиг. 14, каждая вводимая доза приближалась к максимальной толерантной дозе. Одну инъекцию тестируемого продукта вводили каждые семь дней для четырех повторов/инъекций (соединение Ό) или одну инъекцию каждые семь дней для трех повторов/инъекций (соединение 23). Растворитель: 6,3% трегалооза, 0,05% Т^ееп20, 20 мМ нитратный буфер, рН 5,0, 4°С.
Обзор методики.
- 95 029818 самкам безтимусных голых мышей, полученных от Наг1ап ЬаЬогаФпек в возрасте 7-8 недель, подкожно на спине вводили 5х106 опухолевых клеток РС-3 в экспериментальный день 0. Опухоли измеряли каждый понедельник, среду и пятницу. Когда размер опухоли достигал размера 150-200 мм3 (экспериментальный день 27-34), животных определяли в одну из 4 групп лечения путем уравновешивания среднего размера опухоли по группам. Животных лечили соответствующим соединением, как указано, и измерение опухоли проводили каждый понедельник, среду и пятницу. Данные показывают результаты животных до экспериментального дня 54 или до увеличения размеров опухолей до 800 мм3.
РС-3 клетки.
Получение клеток - культура ткани.
Линию клеток аденокарциномы простаты человека РС-3 получали от АТСС (Каталожный # СКЪ1435) в 2002.
Клетки получали из замороженной готовой лабораторной бутылочки, которые замораживали из оригинальной бутылочки АТСС, тестировали на негативную реакцию на микоплазмы и хранили в лаборатории в танках с жидким азотом. Культуры клеток с пассажем #3 - #10 и слиянием 80-90% собирали для ίη νί\Ό исследований. Клетки выращивали в среде Хама Ρ12, дополненной 2 мМ Ь-глутамина и 10% ФБС при 37°С в атмосфере 5% СО2. Клетки субкультировали одну неделю с индексом разведения от 1:3 до 1:6 и расширением. Среду обновляли один раз в неделю.
Получение клеток - сбор для имплантации.
Клетки быстро промывали один раз 2 мл свежего раствора трипсин/ЭДТА (0,25% трипсина с ЭДТА 4Ν), затем избыток трипсин/ЭДТА отсасывали. Затем добавляли 1,5 мл трипсин/ЭДТА, колбу располагали горизонтально, для того чтобы клетки гарантировано были покрыты трипсин/ЭДТА. Клетки затем инкубировали при 37°С на протяжении нескольких минут. Клетки контролировали под инвертированным микроскопом для гарантирования того, что слой клеток был диспергирован, затем добавляли свежую среду и отбирали 50 мкл образец клеточной суспензии и смешивали с трипаном голубым (1:1), и подсчитывали количество клеток и оценивали жизнеспособность клеток, используя Се11оте1ег Аи1о Т4. Клетки центрифугировали при 1000 об/мин на протяжении 7 мин, и надосадочную жидкость отсасывали. Клетки затем ресуспендировали в питательной среде до концентрации приемлемой для инокуляции. Объем инъекции был 100 мкл на животное.
Имплантация опухолевых клеток - ПК спина.
В день 0 5,0х106 опухолевых клеток имплантировали подкожно на спине мышей в объеме 100 мкл, используя иглу номер 27/28, при анестезии изофлураном.
Содержание животных.
Животных содержали в вентилируемых клетках, 2-5 животных в клетке, с 12-часов циклом день/ночь. Животные получали стерильную пищу и воду по желанию, а содержание и использование животных проводились согласно руководствам Канадского совета по содержанию животных. Животных обслуживали асептически, и клетки меняли каждые 10-14 дней.
Сбор данных (размер опухоли).
Мышей проверяли каждый понедельник, среду и пятницу относительно развития опухоли. Измеряли размеры стабильных опухолей с помощью штангенциркуля. Объемы опухолей рассчитывали по уравнению ДхШ2/2 с длиной в (мм), являющейся самой длинной осью опухоли. Животных также взвешивали во время измерения опухоли. Опухолям позволяли расти до максимума 800 мм3.
Институциональный комитет по уходу за животными.
Используемая методология была рассмотрена и утверждена Комитетом по уходу за животными (КУЖ) Университета Британской Колумбии до проведения исследования, для гарантирования того, что исследование запланировано в соответствии с Канадским советом по содержанию животных. Во время проведения исследования содержание и использование животных проводилось согласно руководствам Канадского совета по содержанию животных.
Способы анализа.
Кривые объем опухолихэкспериментальный день роста.
На график наносили объемы опухоли каждой группы в каждый день лечения. Построение кривых роста прекращали для каждой группы в момент времени, когда первое животное достигало размера опухоли конечной точки эксперимента (800 мм3) или в последний день исследования. Любое животное, которое выпадало с исследования до прекращения построения кривой роста группы, полностью удаляли из исследования.
Животные исключения.
Любые животные с язвенными опухолями требуют эвтаназии животного, с объемом опухоли 700 мм3 или менее удаляли из исследования и не вносили вклад в анализ данных (за исключением дней рецидива, если конечный объем опухоли был >2,0 раза выше, чем на день лечения).
Пример 5. Нахождение диапазона эффективности дозы конъюгатов антитело-лекарственное средство в модели опухоли ΝΟ-Ν87, используя мышей ИОО ЗСШ Оатта.
Тестируемые продукты вводили ВВ только один раз. Т относится к трастузумабу. Дозы были та- 96 029818 кими, как указано на фиг. 15. Растворитель: 20 мМ цитрат натрия, 6,3% трегалоза, 0,02% Ттееп-20, рН 5, 4°С.
Обзор методики.
самкам мышей ΝΟΌ/ЗСГО Оатта (N30), полученных от ТЬе 1аск§оп ЬаЬогаШгу (1АХ® М1се) в возрасте 7-8 недель, подкожно в нижней части спины вводили 5х106 опухолевых клеток ΝΟΙ-Ν87 в матригеле в экспериментальный день 0. Опухоли измеряли каждый понедельник, среду и пятницу. Когда размер опухоли достигал размера 150-200 мм3 (экспериментальный день 27), животных определяли в одну из 10 групп лечения путем уравновешивания среднего размера опухоли по группам. Животных лечили соответствующим соединением как указано, и измерение опухоли проводили каждый понедельник, среду и пятницу. Данные показывают результаты животных до экспериментального дня 50 или до увеличения размеров опухолей до 800 мм3.
Получение клеток - кулътура ткани.
ΝΟΙ-Ν87 клетки.
Перед цитотоксическим лечением отбирали клетки карциномы желудка человека ΝΟΙ-Ν87 производные от метастазов печени хорошо дифференцированной карциномы желудка. Клетки прививали как ксенотрансплантат безтимусным голым мышам на протяжении трех пересадок перед укоренением клеточной линии. ΝΟΙ-Ν87 клетки получали согласно МТА из АТСС (каталожный # СКЬ-5822) в 2013 и тестировали на негативную реакцию в КАБГЬ на микоплазмы и патогены мышей (сертификат КАБГЬ #: 10556-2013).
Клетки получали из замороженной готовой лабораторной бутылочки, которую замораживали из оригинальной бутылочки АТСС, и хранили в лаборатории в танках с жидким азотом. Культуры клеток с пассажем #3 - #10 и слиянием 80-90% собирали для ш У1уо исследований. ΝΟΙ-Ν87 клетки выращивали в среде КРМ1 1640 с 1,0 мМ Ь-глутамина и 10% ФБС при 37°С в атмосфере 5% СО2. Клетки субкультировали одну или две недели с индексом разведения 1:3 или 1:4 и расширением. Среду обновляли один раз в неделю. Клетки замораживали с 5% ДМСО.
Получение клеток - сбор для имплантации.
Клетки быстро промывали один раз сбалансированным солевым раствором Хенка без Са, Мд. Добавляли свежий раствор трипсин/ЭДТА (0,25% трипсина с ЭДТА 4№), колбу располагали горизонтально, для того чтобы клетки гарантировано были покрыты трипсин/ЭДТА и затем отсасывали избыток трипсин/ЭДТА. Клетки инкубировали при 37°С на протяжении нескольких минут. Клетки контролировали под инвертированным микроскопом для гарантирования того, что слой клеток был диспергирован, затем добавляли свежую среду. Затем отбирали 50 мкл образец клеточной суспензии и смешивали с трипаном голубым (1:1), и подсчитывали количество клеток и оценивали жизнеспособность клеток на гемоцитометре. Жизнеспособность должна быть >90%. Клетки центрифугировали при 125 КСР (1000 об/мин) на протяжении 7 мин, и надосадочную жидкость отсасывали. Клетки ресуспендировали в холодной питательной среде до двукратной желаемой конечной концентрации (100х10/мл). Суспензию смешивали (на льду) с матригелем (1:1). Использовали полученные клеточные суспензии (50х106 клеток/мл) для доставки 5х106 клеток в объеме инъекции 100 мкл на животное. Все оборудование, вступавшее в контакт с матригелем (иглы, шприцы, кончики пипеток), охлаждали перед инъекцией.
Имплантация опухолевых клеток - подкожно (ΝΟΙ-Ν87).
Перед инокуляцией брили около 2х2 см участок на нижней части спины каждой мыши, и очищали спиртом. В день 0, 5,0х106 опухолевых клеток имплантировали подкожно на спине мышей в объеме 100 мкл, используя иглу номер 27/28 при анестезии изофлураном.
Содержание животных.
Животных содержали в вентилируемых клетках, 2-5 животных в клетке, с 12-часовым циклом день/ночь. Животные получали стерильную пищу и воду по желанию, а содержание и использование животных проводилось согласно руководствам Канадского совета по содержанию животных. Животных обслуживали асептически, и клетки меняли каждые 10-14 дней.
Сбор данных (размер опухоли).
Мышей проверяли каждый понедельник, среду и пятницу относительно развития опухоли. Измеряли размеры стабильных опухолей с помощью штангенциркуля. Объемы опухолей рассчитывали по уравнению Д х Ш2/2 с длиной в (мм), являющейся самой длинной осью опухоли. Животных также взвешивали во время измерения опухоли. Опухолям позволяли расти до максимума 800 мм3.
Институциональный комитет по уходу за животными.
Используемая методология была рассмотрена и утверждена Комитетом по уходу за животными (КУЖ) Университета Британской Колумбии до проведения исследования, для гарантирования того, что исследование запланировано в соответствии с Канадским советом по содержанию животных. Во время проведения исследования содержание и использование животных проводилось согласно руководствам Канадского совета по содержанию животных.
Способы анализа.
Кривые объем опухолихэкспериментальный день роста.
- 97 029818
На график наносили объемы опухоли каждой группы в каждый день лечения. Построение кривых роста прекращали для каждой группы в момент времени, когда первое животное достигало размера опухоли конечной точки эксперимента (800 мм3) или в последний день исследования. Любое животное, которое выпадало с исследования до прекращения построения кривой роста группы, полностью удаляли из исследования.
Животные исключения.
Любые животные с язвенными опухолями требуют эвтаназии животного, с объемом опухоли 700 мм3 или менее удаляли из исследования и не вносили вклад в анализ данных (за исключением дней рецидива, если конечный объем опухоли был >2,0 раза выше, чем на день лечения).
Пример 6. Сравнение эффективности конъюгатов антитело-лекарственное средство в модели опухоли ΝΟ-Ν87, используя мышей ХОЭ 8СГО.
Тестируемые продукты вводили ВВ только один раз. Дозы были такими, как указано на фиг. 16. Т относится к трастузумабу. Растворитель: 20 мМ цитрат натрия, 6,3% трегалоза, 0,02% Т\уееп-20, рН 5, 4°С.
Обзор методики.
самкам мышей ХООАСГО Оатта (Ν8Ο), полученных от ТЬе 1;κ1<5οπ ^аЬο^аΐο^у (1АХ® М1се) в возрасте 7-8 недель, подкожно в нижней части спины вводили 5x10 опухолевых клеток ΝΟ-Ν87 в матригеле в экспериментальный день 0. Опухоли измеряли каждый понедельник, среду и пятницу. Когда размер опухоли достигал размера 150-200 мм3 (экспериментальный день 27), животных определяли в одну из 3 групп лечения путем уравновешивания среднего размера опухоли по группам. Животных лечили соответствующим соединением как указано, и измерение опухоли проводили каждый понедельник, среду и пятницу. Данные показывают результаты животных до экспериментального дня 88 или до увеличения размеров опухолей до 800 мм3.
Получение клеток-кулътура ткани.
ΝΟ-Ν87 клетки.
Перед цитотоксическим лечением отбирали клетки карциномы желудка человека ΝΟ-Ν87 производные от метастазов печени хорошо дифференцированной карциномы желудка. Клетки прививали как ксенотрансплантат безтимусным голым мышам на протяжении трех пересадок перед укоренением клеточной линии. ΝΟ-Ν87 клетки получали согласно МТА из АТСС (каталожный # СКЬ-5822) в 2013 и тестировали на негативную реакцию в КАЭГО на микоплазмы и патогены мышей (сертификат КАЭГО #: 10556-2013).
Клетки получали из замороженной готовой лабораторной бутылочки, которую замораживали из оригинальной бутылочки АТСС, и хранили в лаборатории в танках с жидким азотом. Культуры клеток с пассажем #3 - #10 и слиянием 80-90% собирали для ш νίνο исследований. ΝΟ-Ν87 клетки выращивали в среде КΡΜI 1640 с 1,0 мМ Ь-глутамина и 10% ФБС при 37°С в атмосфере 5% СО2. Клетки субкультировали одну или две недели с индексом разведения 1:3 или 1:4 и расширением. Среду обновляли один раз в неделю. Клетки замораживали с 5% ДМСО.
Получение клеток - сбор для имплантации.
Клетки быстро промывали один раз сбалансированным солевым раствором Хенка без Са, Мд. Добавляли свежий раствор трипсин/ЭДТА (0,25% трипсина с ЭДТА 4Ν;·ι), колбу располагали горизонтально, для того чтобы клетки гарантировано были покрыты трипсин/ЭДТА, и затем отсасывали избыток трипсин/ЭДТА. Клетки инкубировали при 37°С на протяжении нескольких минут. Клетки контролировали под инвертированным микроскопом для гарантирования того, что слой клеток был диспергирован, затем добавляли свежую среду. Затем отбирали 50 мкл образец клеточной суспензии и смешивали с трипаном голубым (1:1), и подсчитывали количество клеток и оценивали жизнеспособность клеток на гемоцитометре. Жизнеспособность должна быть >90%. Клетки центрифугировали при 125 КСР (1000 об/мин) на протяжении 7 мин, и надосадочную жидкость отсасывали. Клетки ресуспендировали в холодной питательной среде до двукратной желаемой конечной концентрации (100х106/мл). Суспензию смешивали (на льду) с матригелем (1:1). Использовали полученные клеточные суспензии (50х106 клеток/мл) для доставки 5х106 клеток в объеме инъекции 100 мкл на животное. Все оборудование, вступавшее в контакт с матригелем (иглы, шприцы, кончики пипеток), охлаждали перед инъекцией.
Имплантация опухолевых клеток - подкожно (ΝΟ-Ν87).
Перед инокуляцией брили около 2х2 см участок на нижней части спины каждой мыши и очищали спиртом. В день 0 5,0х106 опухолевых клеток имплантировали подкожно на спине мышей в объеме 100 мкл, используя иглу номер 27/28 при анестезии изофлураном.
Содержание животных.
Животных содержали в вентилируемых клетках, 2-5 животных в клетке, с 12-часовым циклом день/ночь. Животные получали стерильную пищу и воду по желанию, а содержание и использование животных проводилось согласно руководствам Канадского совета по содержанию животных. Животных обслуживали асептически, и клетки меняли каждые 10-14 дней.
Сбор данных (размер опухоли).
- 98 029818
Мышей проверяли каждый понедельник, среду и пятницу относительно развития опухоли. Измеряли размеры стабильных опухолей с помощью штангенциркуля. Объемы опухолей рассчитывали по уравнению Д х Ш2 /2 с длиной в (мм), являющейся самой длинной осью опухоли. Животных также взвешивали во время измерения опухоли. Опухолям позволяли расти до максимума 800 мм3.
Институциональный комитет по уходу за животными.
Используемая методология была рассмотрена и утверждена Комитетом по уходу за животными (КУЖ) Университета Британской Колумбии до проведения исследования, для гарантирования того, что исследование запланировано в соответствии с Канадским советом по содержанию животных. Во время проведения исследования содержание и использование животных проводилось согласно руководствам Канадского совета по содержанию животных.
Способы анализа.
Кривые объем опухолихэкспериментальный день роста.
На график наносили объемы опухоли каждой группы в каждый день лечения. Построение кривых роста прекращали для каждой группы в момент времени, когда первое животное достигало размера опухоли конечной точки эксперимента (800 мм3) или в последний день исследования. Любое животное, которое выпадало с исследования до прекращения построения кривой роста группы, полностью удаляли из исследования.
Животные исключения.
Любые животные с язвенными опухолями требуют эвтаназии животного, с объемом опухоли 700 мм3 или менее удаляли из исследования и не вносили вклад в анализ данных (за исключением дней рецидива, если конечный объем опухоли был >2,0 раза выше, чем на день лечения).
Все патенты И8, публикации патентных заявок И8, патентные заявки И8, иностранные патенты, иностранные патентные заявки и непатентные публикации, упомянутые в этом описании, включены в данный документ посредством ссылки, во всей их полноте в объеме, не противоречащем настоящему описанию.
Из всего вышесказанного следует понимать, что, хотя в данном документе с целью иллюстрации были описаны конкретные варианты реализации изобретения, могут быть сделаны различные модификации без отхода от сущности и рамок изобретения. Соответственно описание не ограничивается исключительно приложенной формулой изобретения.

Claims (46)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ или его фармацевтически приемлемая соль, где Κι и К2 независимо представляют собой Н или С2-6 алкил; или К2 и К5 конденсированы и образуют кольцо;
    К3 и К4 независимо представляют собой Н или К либо К3 и К4 связаны с образованием кольца;
    К5 представляет собой К или Аг;
    или К5 и К2 конденсированы и образуют кольцо;
    К6 представляет собой Н или К;
    К7 и К8 независимо представляют собой Н или К;
    К9 представляет собой
    К представляет собой насыщенный или ненасыщенный, линейный или разветвленный алкил, содержащий от одного десяти атомов углерода, или циклоалкил или гетероциклил, содержащий от трех до десяти атомов углерода и от нуля до четырех атомов азота, и атомы углерода являются незамещенными или замещенными =О, =8, ОН, -ОК!0, -О2СК!0, -8Н, -8К10, -8ОСК!0, -ΝΉ2, -ΝΉΚι0, -Ν(Κ10)2, -ЖСОК10, -БТКюСОКю, -I, -Вг, -С1, -Р, -ΌΝ, -СО2Н, -СО2К10, -СНО, -СОКШ -СОМН2 -СОЖКШ -СО^Кю)2 -СО8Н, -СО8К20, -ЫО2, -8ОзН, -8ОК]0 или -8О2К!0, где К10 является линейной или разветвленной, насыщенной или ненасыщенной алкильной группой, содержащей от нуля до десяти углеродов, или циклоалкильной группой, содержащей от трех до десяти углеродов;
    - 99 029818 кольцо, образованное при соединении К3 и К4, имеет трех-семичленный циклоалкил в рамках определения К;
    Υ представляет собой линейную, насыщенную или ненасыщенную алкильную группу, содержащую от одного до шести углеродов, причем алкильная группа является незамещенной или замещенной К или X;
    X выбран из группы, состоящей из -ОН, -0К, =0, =8, -02СК, -8Η, -8К, -80СК, -ΝΗ2, -ΝΗΚ, -Ν(Κ)2, -ΝΗ^Ε, -ИКС0К, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -СИ, -С0Щ, -С02К, -(410, -С0К, -С0ИИ2, -ΓΌΝΗΕ -ϋ0Ν(Ε)2, -С08Ц -С08К, -Ν02, -80βΗ, -80Η и -802Η;
    Η14 выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного алкиламино, замещенного или незамещенного циклоалкила, замещенного или незамещенного арила, замещенного или незамещенного гетероциклила и замещенного или незамещенного гетероарила;
    каждый алкил представляет собой линейную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную углеводородную цепь, имеющую между одним и двенадцатью атомов углерода;
    каждый алкиламино имеет структуру -ΝΗΕ. или -ХНаНа, причем каждый На независимо представляет собой С1-С12 алкил;
    каждый циклоалкил представляет собой неароматический моноциклический углеводород, имеющий между тремя и десятью атомов углерода;
    каждый арил представляет собой углеводородную кольцевую систему, содержащую между шестью и восемнадцатью атомов углерода и по меньшей мере одно ароматическое кольцо;
    каждый гетероциклил представляет собой 3-18-членное кольцо, содержащее между двумя и двенадцатью атомов углерода и между одним и шестью гетероатомов, выбранных из Ν, О и 8; и каждый гетероарил представляет собой 5-14-членную кольцевую систему, содержащую от одного до тринадцати атомов углерода, от одного до шести гетероатомов, выбранных из Ν, О и 8, и по меньшей мере одно ароматическое кольцо; и каждый алкил, алкиламино, циклоалкил, арил, гетероциклил и гетероарил, когда замещен, независимо замещен одним или более из алкила, арила, циклоалкила, гетероарила, =0, =8, -ОН, -0Η24, -02СК24, -8Η, -8К24, -80СК24, -ΝΗ2, -Ν3, -ΝΗΚ24, -Ν(Κ24)2, -ΝΗ^Η^, Α'ΚΗΌΚ^ -I, -Вг, -С1, -Ρ, -СЫ, -С0.41, -С02К24, -СИ0, -С0К24, -С0NΗ2, -СΟNΗΚ24, -(Ό\(Κ;4, -С08Ц -С08К24, -Ν02, -802Η, -80Η24 или -802Η24, причем каждый Η24 независимо представляет собой незамещенный алкил или алкил, замещенный галогеном, -ОН, -ΝΗ2 или -8Η, и где каждый алкил, арил, циклоалкил или гетероарил замещен или незамещен.
  2. 2. Соединение, имеющее следующую структуру Да):
    Кзо или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль, где Η14 выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного алкиламино, замещенного или незамещенного циклоалкила, замещенного или незамещенного арила, замещенного или незамещенного гетероциклила и замещенного или незамещенного гетероарила;
    Η15 выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного циклоалкила, замещенного или незамещенного арила, замещенного или незамещенного гетероциклила и замещенного или незамещенного гетероарила;
    Η16 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
    Η17 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
    Η18 и Η30 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С1-6 алкила и -8Η, при условии, что Η18 и Η30 не могут быть оба Н;
    Η19, Η20, Η21 и Η22 представляют собой независимо Н или С1-6 алкил, где по меньшей мере один из Η19 и Η20 представляет собой Н; или Η20 и Η21 образуют двойную связь, Η19 представляет собой Н, и Η22 представляет собой Н или С1-6 алкил; и
    Η23 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
    каждый алкил представляет собой линейную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную углеводородную цепь, имеющую между одним и двенадцатью атомов углерода;
    каждый алкиламино имеет структуру -ΝΗΚ,., или -ΝΚΗΚΗ, причем каждый На независимо представляет собой С1-С12 алкил;
    каждый циклоалкил представляет собой неароматический моноциклический углеводород, имеющий между тремя и десятью атомов углерода;
    - 100 029818 каждый арил представляет собой углеводородную кольцевую систему, содержащую между шестью и восемнадцатью атомов углерода и по меньшей мере одно ароматическое кольцо;
    каждый гетероциклил представляет собой 3-18-членное кольцо, содержащее между двумя и двенадцатью атомов углерода и между одним и шестью гетероатомов, выбранных из Ν, О и 8; и каждый гетероарил представляет собой 5-14-членную кольцевую систему, содержащую от одного до тринадцати атомов углерода, от одного до шести гетероатомов, выбранных из Ν, О и 8, и по меньшей мере одно ароматическое кольцо; и каждый алкил, алкиламино, циклоалкил, арил, гетероциклил и гетероарил, когда замещен, независимо замещен одним или более из алкила, арила, циклоалкила, гетероарила, =О, =8, -ОН, -ОК24, -О2СК24, -8Н, -8К24, -8ОСК24, -ИН2, -N3, -ИНК24, -И(К24)2, -ИНСОК24, -ИК24СОК24, -I, -Вг, -С1, -Р, -СИ, -СО2Н, -СО2К24, -СНО, -СОК24, -СОИН2, -СОИНК24, -СОИ(К24)2, -СО8Н, -СО8К24, -ИО2, -8О3Н, -8ОК24 или -8О2К24, причем каждый К24 независимо представляет собой незамещенный алкил или алкил, замещенный галогеном, -ОН, -ИН2 или -8Н, и где каждый алкил, арил, циклоалкил или гетероарил замещен или незамещен.
  3. 3. Соединение по п.2, имеющее следующую структуру (!Ь):
    (1Ь) или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль, где К26 выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного алкиламино, замещенного или незамещенного циклоалкила, замещенного или незамещенного арила, замещенного или незамещенного гетероциклила и замещенного или незамещенного гетероарила;
    К27 выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного циклоалкила, замещенного или незамещенного арила, замещенного или незамещенного гетероциклила и замещенного или незамещенного гетероарила;
    К16 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила;
    К17 выбран из группы, состоящей из Н и С1-6 алкила; и
    К18 выбран из группы, состоящей из С1-6 алкила и -8Н.
  4. 4. Соединение по любому из пп.1-3, где каждый замещенный или незамещенный арил и замещенный или незамещенный гетероарил независимо выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного фенила, замещенного или незамещенного нафтила, замещенного или незамещенного антрацила, замещенного или незамещенного фенантрила, замещенного или незамещенного фурила, замещенного или незамещенного пирролила, замещенного или незамещенного тиофенила, замещенного или незамещенного бензофурила, замещенного или незамещенного бензотиофенила, замещенного или незамещенного хинолинила, замещенного или незамещенного изохинолинила, замещенного или незамещенного имидазолила, замещенного или незамещенного тиазолила, замещенного или незамещенного оксазолила и замещенного или незамещенного пиридинила.
  5. 5. Соединение по п.2, где К15 представляет собой замещенный или незамещенный арил или замещенный или незамещенный циклоалкил.
  6. 6. Соединение по п.2, где К15 выбран из одной из следующих структур (II), (III), (IV), (У):
    - 101 029818 где О представляет собой СК25 или Ν;
    Ζ представляет собой С(К25)2, ΝΉ^, 8 или О;
    где в структуре (V) один Ζ представляет собой СК25 или Ν, а другой Ζ представляет собой (СК25)2, ХК^, 8 или О; и каждый К25 независимо выбран из группы, состоящей из Н, -ОН, -К24, -ОК24, -О2СК24, -8Н, -8К24, -8ОСК24, -Ν^, -Ν3, -ХНК24, -Н(К24)2, -ЫНСОК24, -НК24СОК24, -ЮН-, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -0Ν, -СО2Н, -СО2К24, -СНО, -СОК24, -СО\Н, -СОХНК24, -СО^^Ъ, -СО8Н, -СО8К24, -КО2, -8О3Н, -8ОК24 и -8О2К24, где каждый К24 представляет собой независимо незамещенный алкил или алкил, замещенный галогеном, -ОН или -8Н.
  7. 7. Соединение по п.6, где К15 выбран из группы, состоящей из
  8. 8. Соединение по п.7, где К15 представляет собой
  9. 9. Соединение по п.3, где К27 представляет собой замещенный или незамещенный арил или заме- 102 029818 щенный или незамещенный циклоалкил.
  10. 10. Соединение по п.3, где К27 выбран из одной из следующих структур (II), (III), (IV), (V):
    где О представляет собой СК29 или Ν;
    Ζ представляет собой С(К29)2, ΝΕ^, З или О;
    где в структуре (V) один Ζ представляет собой СК25 или Ν, а другой Ζ представляет собой (СК25)2,
    З или О; и каждый К29 независимо выбран из группы, состоящей из Н, -ОН, -ОК28, -О2СК28, -ЗН, -ЗК28, -ЗОСК28, -Ν^, -Ν3, ^28, -ВДКяЬ -КИСО^, -БЕК^СО^, -I, -ВГ, -С1, -Р, -ΟΝ, -СО2Н, -СО2К28, -СНО, -СОК28, -СОХИ;, -СО]\1НК28, -СОВДКвЕ -СОЗН, -СОЗК28, -Юз, -ЗО3Н, -ЗОК28 и -ЗО2К28, где каждый К28 представляет собой независимо незамещенный алкил или алкил, замещенный галогеном, -ОН или -ЗН.
  11. 11. Соединение по п.10, где К27 выбран из группы, состоящей из
  12. 12. Соединение по п.11, где К27 представляет собой
  13. 13. Соединение по любому из пп.2 и 5-8, где Ки представляет собой замещенный или незамещенный алкил или замещенный или незамещенный арил.
  14. 14. Соединение по любому из пп.2 и 5-8, где Ки представляет собой замещенный или незамещенный аралкил или замещенный или незамещенный фенил, где аралкил имеет структуру -Кь-Кс, где Кь представляет собой алкиленовую группу, имеющую между одним и двенадцатью атомов углерода, и Кс представляет собой арильную группу.
  15. 15. Соединение по любому из пп.3 и 9-12, где К26 представляет собой замещенный или незамещен- 103 029818 ный алкил или замещенный или незамещенный арил.
  16. 16. Соединение по любому из пп.3 и 9-12, где К26 представляет собой замещенный или незамещенный аралкил или замещенный или незамещенный фенил, где аралкил имеет структуру -Кь-Кс, где Кь представляет собой алкиленовую группу, имеющую между одним и двенадцатью атомов углерода, и Кс представляет собой арильную группу.
  17. 17. Соединение по любому из пп.2-16, где К16, Кп и К18 каждый представляет собой метил.
  18. 18. Соединение по любому из пп.2-16, где К16 представляет собой Н, Кп представляет собой метил, и К18 представляет собой метил.
  19. 19. Соединение, имеющее одну из следующих структур:
    - 104 029818
    - 105 029818 или его стереоизомер, или фармацевтически приемлемая соль.
  20. 20. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая соединение по любому из пп.1-19 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
  21. 21. Способ лечения рака у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения по любому из пп.1-19.
  22. 22. Способ ингибирования роста опухоли у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективного количества соединения по любому из пп.1-19.
  23. 23. Конъюгат линкер-лекарственное средство, имеющий одну из следующих структур:
    - 106 029818
  24. 24. Конъюгат, имеющий следующую структуру (УГ):
    (Т)-(Ю-(О) (VI) где (Т) представляет собой нацеливающий фрагмент, (Ь) представляет собой линкер, и (Ό) представляет собой соединение по любому из пп.1-19, где нацеливающий фрагмент представляет собой белок, пептид, лектин или витамин, способный к связыванию с клеткой-мишенью, и где линкер представляет собой бифункциональное соединение, способное к связыванию (Т) и (Ό).
  25. 25. Конъюгат по п.24, где (Т) представляет собой антитело или фрагмент антитела.
  26. 26. Конъюгат по п.25, где антитело или фрагмент антитела представляет собой моноклональное антитело, биспецифическое антитело, или мультиспецифическое антитело, или их фрагмент.
  27. 27. Конъюгат по любому из пп.24-26, где (Ь) представляет собой расщепляемый линкер.
  28. 28. Конъюгат по п.27, где расщепляемый линкер содержит саморасщепляющийся компонент.
  29. 29. Конъюгат по любому из пп.24-26, где (Ь) представляет собой нерасщепляемый линкер.
  30. 30. Конъюгат по любому из пп.24-26, где (Ь) содержит сульфосукцинимидил 6-[3'(2пиридилдитио)пропионамидо]гексаноат (сульфо-ЬС-8РПР), сукцинимидил 4-[Νмалеимидометил]циклогексан-1-карбоксилат (§МСС), р-аминобензилкарбамоил (РАВС) или малеимидокапроил-валин-цитруллин-РАВС (МС-УС-РАВС).
  31. 31. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая конъюгат по любому из пп.24-30 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
  32. 32. Способ лечения рака у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата по любому из пп.24-30.
  33. 33. Способ ингибирования роста опухоли у млекопитающего, включающий введение млекопитаю- 107 029818 щему, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата по любому из пп.24-30.
  34. 34. Конъюгат по любому из пп.24-26, где (Т)-(Ь)-(О) имеет одну из следующих структур:
  35. 35. Конъюгат, имеющий следующую структуру:
    - 108 029818 (тнь)-(РТ) (VII) где (Т) представляет собой нацеливающий фрагмент, (Ъ) представляет собой линкер, и (РТ) представляет собой пептидный токсин, разрушающий микротрубочки, где (РТ) ковалентно связан с (Ь) через боковую цепь Ν-терминальной аминокислоты (РТ), где нацеливающий фрагмент представляет собой белок, пептид, лектин или витамин, способный к связыванию с клеткой-мишенью, где линкер представляет собой бифункциональное соединение, способное к связыванию (Т) и (РТ), и где (Т)-(Ъ)-(РТ) имеет следующую структуру:
    где К1 и К2 независимо представляют собой Н или С1-С6 алкил;
    К3 и К4 независимо представляют собой Н или К либо К3 и К4 связаны с образованием кольца;
    К31 выбран из группы, состоящей из АгК-, Аг-К-Аг, К-Аг-Аг, Аг-Аг-К- и Аг, где каждый К и каждый Аг является замещенным или незамещенным, и каждый Аг независимо представляет собой арил или гетероарил;
    К6 представляет собой Н или К;
    К7 и К8 независимо представляют собой Н или К;
    К32 представляет собой о о
    II н II
    О νννΎ—С—N—5—К14
    II II
    Ζ С ΥκΛΛΛ {щи О ;
    Ζ выбран из группы, состоящей из -ОН, -ОК, -8Н, -8К, -МН2, -МКСН(Кп)СООН и -МНСН(КП)СООН, где Кп представляет собой К или -(СН2)пМК12К13, где п=1-4, и К12 и К13 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, К и -С(МН)(ЫН2);
    Υ представляет собой линейную, насыщенную или ненасыщенную алкильную группу, содержащую от одного до шести углеродов, причем алкильная группа является незамещенной либо замещенной заместителем К или X;
    X выбран из группы, состоящей из -ОН, -ОК, =О, =8, -О2СК, -8Н, -8К, -8ОСК, -МН2, -МНК, -И(К)2, -М1НСОК, -МКСОК, -I, -Вг, -С1, -Р, -СМ, -СО2Н, -СО2К, -СНО, -СОК, -СОХИ;, -СОМИК, -СОМ(К)2, -СО8Н, -СО8К, -МЮ2, -8О3Н, -8ОК и -8О2К;
    К14 выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного алкиламино, замещенного или незамещенного циклоалкила, замещенного или незамещенного арила, замещенного или незамещенного гетероциклила и замещенного или незамещенного гетероарила, где каждый алкил представляет собой линейную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную углеводородную цепь, имеющую между одним и двенадцатью атомов углерода;
    каждый алкиламино имеет структуру -МНКа или -МКаКа, причем каждый Ка независимо представляет собой С1-С12 алкил;
    каждый циклоалкил представляет собой неароматический моноциклический углеводород, имеющий между тремя и десятью атомов углерода;
    каждый арил представляет собой углеводородную кольцевую систему, содержащую между шестью и восемнадцатью атомов углерода и по меньшей мере одно ароматическое кольцо;
    каждый гетероциклил представляет собой 3-18-членное кольцо, содержащее между двумя и двенадцатью атомов углерода и между одним и шестью гетероатомов, выбранных из Ν, О и 8; и каждый гетероарил представляет собой 5-14-членную кольцевую систему, содержащую от одного до тринадцати атомов углерода, от одного до шести гетероатомов, выбранных из Ν, О и 8, и по меньшей мере одно ароматическое кольцо; и каждый алкил, алкиламино, циклоалкил, арил, гетероциклил и гетероарил, когда замещен, независимо замещен одним или более из алкила, арила, циклоалкила, гетероарила, =О, =8, -ОН, -ОК24, -О2СК24, -8Н, -8К24, -8ОСК24, -МЩ -N3, -М1НК24, -МКмЕ -М1НСОК24, -МК24СОК24, -I, -Вг, -С1, -Р, -СМ, -СО2Н, -СО2К24, -СНО, -СОК24, -СОМ С -СОМ1НК24, -СОМ(К24)2, -СО8Н, -СО8К24, -МО2, -8О3Н, -8ОК24 или -8О2К24, причем каждый К24 независимо представляет собой незамещенный алкил или алкил, замещенный галогеном, -ОН, -М1Н2 или -8Н, и где каждый алкил, арил, циклоалкил или гетероарил замещен или незамещен;
    К представляет собой насыщенный или ненасыщенный, линейный или разветвленный алкил, содержащий от одного до десяти атомов углерода, или циклоалкил или гетероциклил, содержащий от трех
    - 109 029818 до десяти атомов углерода и от нуля до четырех атомов азота, и атомы углерода являются незамещенными или замещены =О, =8, ОН, -ОК10, -О2СК10, -8Н, -8К10, -8ОСК10, -ΝΉ2, -ΝΉΚ10, -Ν(Κ10)2, -ХНСОК10, -ХК10СОК10, -I, -Вг, -С1, -Ρ, <Ν, -СО2Н, -СО2К10, -СНО, -СОК10, -СО:ХН2, -СО^К10, -СО^К10)2, -СО8Н, -СО8К10, ^О2, -8ОзН, -8ОК10 или -8О2К10, где К10 представляет собой линейную или разветвленную, насыщеную или ненасыщенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти углеродов, или циклоалкильную группу, содержащую от трех до десяти углеродов; и кольцо, образованное соединением К3 и К4, представляет собой трех-семичленный циклоалкил в рамках определения К.
  36. 36. Конъюгат по п.35, где (Т)-(Ь)-(РТ) имеет одну из следующих структур:
    где К15 выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного циклоалкила, замещенного или незамещенного арила и замещенного или незамещенного гетероарила;
    К16 и К17 независимо представляют собой Н или С1-6 алкил;
    К18 и К30 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, С1-6 алкила и -8Н, при условии, что К18 и К30 не могут быть оба Н;
    К32 представляет собой о о II н II
    О υυνγ—С—N—3— 11 А
    Ζ С Υ ΆΑΛ иди О ;
    Ζ выбран из группы, состоящей из -ОН, -ОК; -8Н; -8К; -ΝΉ2; -ХКСН(КП)СООН и -ХНСН(Кц)СООН, где Кп представляет собой К или -(СН2)п:ХК12К13, где п=1-4, и К12 и К13 независимо выбраны из группы, состоящей из Н, К и -СЩН)ЩН2);
    К представляет собой насыщенный или ненасыщенный, линейный или разветвленный алкил, содержащий от одного до десяти атомов углерода, либо циклоалкил или гетероциклил, содержащий от трех до десяти атомов углерода и от нуля до четырех атомов азота, и атомы углерода являются незамещенными или замещенными =О, =8, ОН, -ОК10, -О2Ск10, -8Н, -8К10, -8ОСК10, -ΝΉ2, -ΝΉΚ10, -Ν(Κ10)2, -ХНСОК10, -ХК10СОК10, -I, -Вг, -С1, -Ρ, <Ν, -СО2Н, -СО2К10, -СНО, -СОК10, -СО:ХН2, -СО^К10, -СО^К10)2, -СО8Н, -СО8К10, ^О2, -8ОзН, -8ОК10 или -8О2К10, где К10 представляет собой линейную или разветвленную, насыщенную или ненасыщенную алкильную группу, содержащую от одного до десяти углеродов, или циклоалкил, содержащий от трех до десяти углеродов;
    Υ представляет собой линейную, насыщенную или ненасыщенную алкильную группу, содержащую от одного до шести углеродов, причем алкильная группа является незамещенной или замещенной заместителем К или X;
    X выбран из группы, состоящей из -ОН, -ОК, =О, =8, -О2СК, -8Н, -8К, -8ОСК, -ΝΉ2, -ΝΉΚ, -Ν(Κ)2, -ХНСОК, -ХКСОК, -I, -Вг, -С1, -Ρ, -СЧ -СО2Н, -СО2К, -СНО, -СОК, -СО^ХН2, -СО^ХНК, -СОЧК)2, -СО8Н, -СО8К, -\О;, -8О3Н, -8ОК и -8О2К; и
    К14 выбран из группы, состоящей из замещенного или незамещенного алкила, замещенного или незамещенного алкиламино, замещенного или незамещенного циклоалкила, замещенного или незамещенного арила, замещенного или незамещенного гетероциклила и замещенного или незамещенного гетероарила; или где К15, К!6, К17, Κι8 и Κ30 являются такими, как определено в части (а); К33 представляет собой где Ζ и Υ являются такими, как определено в части (а); или
    - 110 029818 где К14, К15, Κι6, К17, Κι8 и К30 являются такими, как определено в части (а).
  37. 37. Конъюгат по п.35, где (Т)-(Ь)-(РТ) имеет одну из следующих структур:
  38. 38. Конъюгат по п.35 или 36, где (Ь) представляет собой расщепляемый линкер.
  39. 39. Конъюгат по п.38, где расщепляемый линкер содержит саморасщепляющийся компонент.
  40. 40. Конъюгат по п.35 или 36, где (Ь) представляет собой нерасщепляемый линкер.
  41. 41. Конъюгат по п.35 или 36, где (Ь) содержит сульфосукцинимидил 6-[3'(2пиридилдитио)пропионамидо]гексаноат (сульфо-ЬС-ЗРБР), сукцинимидил 4-[Νмалеимидометил]циклогексан-1-карбоксилат (ЗМСС), р-аминобензилкарбамоил (РАВС) или малеимидокапроил-валин-цитруллин-РАВС (МС-УС-РАВС).
  42. 42. Конъюгат по любому из пп.35-41, где (Т) представляет собой антитело или фрагмент антитела.
  43. 43. Конъюгат по п.42, где антитело или фрагмент антитела представляет собой моноклональное антитело, биспецифическое антитело, или мультиспецифическое антитело, или их фрагмент.
  44. 44. Фармацевтическая композиция для лечения рака, содержащая конъюгат по любому из пп.35-43 и фармацевтически приемлемый носитель, разбавитель или наполнитель.
  45. 45. Способ лечения рака у млекопитающего, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата по любому из пп.35-43.
  46. 46. Способ ингибирования роста опухоли у млекопитающего, включающий введение млекопитаю- 111 029818 щему, нуждающемуся в этом, эффективного количества конъюгата по любому из пп.35-43.
EA201591632A 2013-03-15 2014-03-14 Цитотоксические и антимитотические соединения и способы их применения EA029818B8 (ru)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201361792066P 2013-03-15 2013-03-15
US201361792020P 2013-03-15 2013-03-15
PCT/US2014/029463 WO2014144871A1 (en) 2013-03-15 2014-03-14 Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same

Publications (3)

Publication Number Publication Date
EA201591632A1 EA201591632A1 (ru) 2016-04-29
EA029818B1 true EA029818B1 (ru) 2018-05-31
EA029818B8 EA029818B8 (ru) 2018-09-28

Family

ID=51537820

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201591632A EA029818B8 (ru) 2013-03-15 2014-03-14 Цитотоксические и антимитотические соединения и способы их применения

Country Status (21)

Country Link
US (4) US9522876B2 (ru)
EP (2) EP2968440B1 (ru)
JP (1) JP6431038B2 (ru)
KR (1) KR102178606B1 (ru)
CN (2) CN105358174B (ru)
AU (1) AU2014228489B2 (ru)
CA (1) CA2906784C (ru)
DK (1) DK2968440T3 (ru)
EA (1) EA029818B8 (ru)
ES (1) ES2741207T3 (ru)
HK (2) HK1220140A1 (ru)
IL (1) IL241524B (ru)
MX (1) MX368258B (ru)
MY (1) MY174813A (ru)
NZ (1) NZ711982A (ru)
PL (1) PL2968440T3 (ru)
PT (1) PT2968440T (ru)
SG (1) SG11201507619PA (ru)
TR (1) TR201911139T4 (ru)
WO (1) WO2014144871A1 (ru)
ZA (1) ZA201506918B (ru)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MX368258B (es) 2013-03-15 2019-09-25 Zymeworks Inc Compuestos citotoxicos y antimitoticos y metodos de uso de los mismos.
CA2935064C (en) 2013-12-27 2023-06-27 Zymeworks Inc. Var2csa-drug conjugates
CN106255513B (zh) * 2013-12-27 2022-01-14 酵活有限公司 用于药物偶联物的含磺酰胺连接系统
IL287645B2 (en) 2014-09-17 2024-04-01 Zymeworks Bc Inc Cytotoxic and anti-mitotic compounds and methods for their use
GB201416960D0 (en) * 2014-09-25 2014-11-12 Antikor Biopharma Ltd Biological materials and uses thereof
EP3598983A1 (en) * 2014-10-03 2020-01-29 Synaffix B.V. Sulfamide linker, conjugates thereof, and methods of preparation
PL3240785T3 (pl) 2014-12-29 2021-12-06 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Inhibitory drobnocząsteczkowe dehydrogenazy mleczanowej i sposoby ich wykorzystania
US10844090B2 (en) * 2015-01-30 2020-11-24 Sutro Biopharma, Inc. Hemiasterlin derivatives for conjugation and therapy
EP3370518B1 (en) 2015-10-14 2023-08-23 X-Therma, Inc. Compositions and methods for reducing ice crystal formation
JP2017197512A (ja) * 2016-02-08 2017-11-02 シンアフィックス ビー．ブイ． Ｃｄ３０腫瘍を標的化するための改善された治療指数を有する新規な抗体−コンジュゲート及び抗体−コンジュゲートの治療指数を改善するための方法
JP2017200902A (ja) * 2016-02-08 2017-11-09 シンアフィックス ビー．ブイ． Ｈｅｒ２腫瘍を標的化するための改善された治療指数を有する新規な抗体−コンジュゲート及び抗体−コンジュゲートの治療指数を改善するための方法
PE20231050A1 (es) 2016-03-02 2023-07-11 Eisai Randd Man Co Ltd Conjugados de anticuerpo y farmaco basados en eribulina y metodos para su uso
MX2018011453A (es) 2016-03-22 2019-01-10 Merck Sharp & Dohme Moduladores alostericos de receptores de acetilcolina nicotinicos.
US10517958B2 (en) 2016-10-04 2019-12-31 Zymeworks Inc. Compositions and methods for the treatment of platinum-drug resistant cancer
CN110691835B (zh) 2017-04-06 2022-12-09 日产化学美国公司 耐盐水性二氧化硅溶胶
EP3666788A4 (en) * 2017-08-10 2021-05-05 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. HEMIASTERLIN DERIVATIVES AND ANTIBODY-ACTIVE INGREDIENT CONJUGATES CONTAINING THESE
CA3072153A1 (en) * 2017-08-10 2019-02-14 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Antibody-drug conjugates including hemiasterlin derivative
JP2021006595A (ja) 2017-09-13 2021-01-21 日産化学株式会社 原油回収用薬液
MX2020004470A (es) 2017-11-03 2020-09-03 Nissan Chemical America Corp Uso de dispersiones de nanoparticulas de dioxido de silicio resistentes a la salmuera para mejorar la recuperacion de petroleo.
MX2020013236A (es) 2018-06-06 2021-02-22 Massachusetts Inst Technology Acido ribonucleico (arn) circular para traduccion en celulas eucariotas.
RU2695787C1 (ru) * 2018-11-07 2019-07-26 Федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный медицинский исследовательский центр онкологии имени Н.Н. Петрова" Министерства здравоохранения Российской Федерации Применение соединения 2-[3-(2-хлорэтил)-3-нитрозоуреидо]-1,3-пропандиол для лечения her2-положительных опухолей в эксперименте
WO2020166592A1 (ja) * 2019-02-13 2020-08-20 大日本住友製薬株式会社 ヘミアスタリン誘導体とその抗体薬物複合体
JP7560255B2 (ja) * 2019-02-13 2024-10-02 住友ファーマ株式会社 ヘミアスタリン誘導体を含む抗体薬物複合体を含有する医薬
CA3127312A1 (en) 2019-02-13 2020-08-20 Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. Hemiasterlin derivative having cysteine residue
IL310266A (en) 2019-05-22 2024-03-01 Massachusetts Inst Technology Circular Rana preparations and methods
JP2023504568A (ja) 2019-12-04 2023-02-03 オルナ セラピューティクス インコーポレイテッド 環状ｒｎａ組成物及び方法

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080305044A1 (en) * 2004-11-29 2008-12-11 Seattle Genetics, Inc. Engineered Antibodies and Immunoconjugates
US7528152B2 (en) * 2002-03-22 2009-05-05 Eisai Co., Ltd. Hemiasterlin derivatives and uses thereof in the treatment of cancer

Family Cites Families (135)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2036891B (en) 1978-12-05 1983-05-05 Windsor Smith C Change speed gear
CA1213229A (en) 1982-04-12 1986-10-28 Gary S. David Antibodies having dual specificities, their preparation and uses therefor
GB8308235D0 (en) 1983-03-25 1983-05-05 Celltech Ltd Polypeptides
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
JPS6147500A (ja) 1984-08-15 1986-03-07 Res Dev Corp Of Japan キメラモノクロ−ナル抗体及びその製造法
EP0173494A3 (en) 1984-08-27 1987-11-25 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Chimeric receptors by dna splicing and expression
GB8422238D0 (en) 1984-09-03 1984-10-10 Neuberger M S Chimeric proteins
JPS61134325A (ja) 1984-12-04 1986-06-21 Teijin Ltd ハイブリツド抗体遺伝子の発現方法
CA1282069C (en) 1985-09-12 1991-03-26 Damon L. Meyer Antibody complexes of hapten-modified diagnostic or therapeutic agents
AU606320B2 (en) 1985-11-01 1991-02-07 International Genetic Engineering, Inc. Modular assembly of antibody genes, antibodies prepared thereby and use
US5225539A (en) 1986-03-27 1993-07-06 Medical Research Council Recombinant altered antibodies and methods of making altered antibodies
US4946778A (en) 1987-09-21 1990-08-07 Genex Corporation Single polypeptide chain binding molecules
US5053394A (en) 1988-09-21 1991-10-01 American Cyanamid Company Targeted forms of methyltrithio antitumor agents
FI102355B1 (fi) 1988-02-11 1998-11-30 Bristol Myers Squibb Co Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjugaattien valmistamiseksi
US5028697A (en) 1988-08-08 1991-07-02 Eli Lilly And Company Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized methotrexate analogs via simple organic linkers
US5094849A (en) 1988-08-08 1992-03-10 Eli Lilly And Company Cytotoxic antibody conjugates of hydrazide derivatized vinca analogs via simple organic linkers
US5006652A (en) 1988-08-08 1991-04-09 Eli Lilly And Company Intermediates for antibody-vinca drug conjugates
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US5137877B1 (en) 1990-05-14 1996-01-30 Bristol Myers Squibb Co Bifunctional linking compounds conjugates and methods for their production
GB9017024D0 (en) 1990-08-03 1990-09-19 Erba Carlo Spa New linker for bioactive agents
US5625126A (en) 1990-08-29 1997-04-29 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5661016A (en) 1990-08-29 1997-08-26 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5633425A (en) 1990-08-29 1997-05-27 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
ATE158021T1 (de) 1990-08-29 1997-09-15 Genpharm Int Produktion und nützung nicht-menschliche transgentiere zur produktion heterologe antikörper
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
WO1994004690A1 (en) 1992-08-17 1994-03-03 Genentech, Inc. Bispecific immunoadhesins
US5635483A (en) 1992-12-03 1997-06-03 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Tumor inhibiting tetrapeptide bearing modified phenethyl amides
US6569834B1 (en) 1992-12-03 2003-05-27 George R. Pettit Elucidation and synthesis of antineoplastic tetrapeptide w-aminoalkyl-amides
HUT72067A (en) 1992-12-16 1996-03-28 Basf Ag Dolostatin analog
US5780588A (en) 1993-01-26 1998-07-14 Arizona Board Of Regents Elucidation and synthesis of selected pentapeptides
US5556623A (en) 1993-03-30 1996-09-17 Eli Lilly And Company Antibody-drug conjugates
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
AU689131B2 (en) 1993-10-01 1998-03-26 Teikoku Hormone Mfg. Co., Ltd. Novel peptide derivative
US5599902A (en) 1994-11-10 1997-02-04 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Cancer inhibitory peptides
US5663149A (en) 1994-12-13 1997-09-02 Arizona Board Of Regents Acting On Behalf Of Arizona State University Human cancer inhibitory pentapeptide heterocyclic and halophenyl amides
GB9508195D0 (en) 1995-04-20 1995-06-07 Univ British Columbia Novel biologically active compounds and compositions,their use and derivation
JP3871713B2 (ja) 1995-05-10 2007-01-24 協和醗酵工業株式会社 新規毒素複合体
EP0904107B1 (en) 1996-03-18 2004-10-20 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoglobin-like domains with increased half lives
US6759509B1 (en) 1996-11-05 2004-07-06 Bristol-Myers Squibb Company Branched peptide linkers
CA2225325A1 (en) * 1997-12-19 1999-06-19 The University Of British Columbia Hemiasterlin analogs
US8097648B2 (en) 1998-06-17 2012-01-17 Eisai R&D Management Co., Ltd. Methods and compositions for use in treating cancer
KR100440643B1 (ko) 1999-01-28 2004-07-21 쥬가이 세이야쿠 가부시키가이샤 치환 페네틸아민 유도체
US6468522B1 (en) 1999-07-22 2002-10-22 University Of Medicine And Dentistry Of New Jersey Controlled release of thioamide moiety-containing therapeutic agents
US6323315B1 (en) 1999-09-10 2001-11-27 Basf Aktiengesellschaft Dolastatin peptides
US6756037B2 (en) 2000-03-31 2004-06-29 Enzon, Inc. Polymer conjugates of biologically active agents and extension moieties for facilitating conjugation of biologically active agents to polymeric terminal groups
TWI245034B (en) 2000-07-24 2005-12-11 Matsushita Electric Ind Co Ltd Capacitor
US6884869B2 (en) 2001-04-30 2005-04-26 Seattle Genetics, Inc. Pentapeptide compounds and uses related thereto
WO2003026577A2 (en) 2001-09-24 2003-04-03 Seattle Genetics, Inc. P-amidobenzylethers in drug delivery agents
US6716821B2 (en) 2001-12-21 2004-04-06 Immunogen Inc. Cytotoxic agents bearing a reactive polyethylene glycol moiety, cytotoxic conjugates comprising polyethylene glycol linking groups, and methods of making and using the same
WO2003072754A2 (en) 2002-02-27 2003-09-04 The Government Of The United States Of America, Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Conjugates of ligand, linker and cytotoxic agent and related compositions and methods of use
US7064211B2 (en) 2002-03-22 2006-06-20 Eisai Co., Ltd. Hemiasterlin derivatives and uses thereof
WO2003090678A2 (en) 2002-04-23 2003-11-06 Ohio State University Antileishmanial dinitroaniline sulfonamides with activity against parasite tubulin
ITMI20021391A1 (it) 2002-06-25 2003-12-29 Nicox Sa Nitroderivati di inibitori della cicloossigenasi-2
US20050180972A1 (en) 2002-07-31 2005-08-18 Wahl Alan F. Anti-CD20 antibody-drug conjugates for the treatment of cancer and immune disorders
US7659241B2 (en) 2002-07-31 2010-02-09 Seattle Genetics, Inc. Drug conjugates and their use for treating cancer, an autoimmune disease or an infectious disease
US7087229B2 (en) 2003-05-30 2006-08-08 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
US7122189B2 (en) 2002-08-13 2006-10-17 Enzon, Inc. Releasable polymeric conjugates based on aliphatic biodegradable linkers
AU2003259163B2 (en) 2002-08-16 2008-07-03 Immunogen, Inc. Cross-linkers with high reactivity and solubility and their use in the preparation of conjugates for targeted delivery of small molecule drugs
KR20050054951A (ko) 2002-09-20 2005-06-10 와이어쓰 홀딩스 코포레이션 튜불린 억제제의 합성에 유용한 중간체의 합성방법
US20040121965A1 (en) 2002-09-20 2004-06-24 Wyeth Holdings Corporation Method of treating resistant tumors
JP2006507322A (ja) 2002-11-14 2006-03-02 シンタルガ・ビーブイ 多重自己脱離放出スペーサーとして構築されたプロドラッグ
US20070026478A1 (en) 2002-11-21 2007-02-01 Wyeth Hemiasterlin affinity probes and their uses
US7332164B2 (en) 2003-03-21 2008-02-19 Enzon Pharmaceuticals, Inc. Heterobifunctional polymeric bioconjugates
US7390910B2 (en) 2003-08-08 2008-06-24 Wyeth Compounds for treating tumors
US7576206B2 (en) 2003-08-14 2009-08-18 Cephalon, Inc. Proteasome inhibitors and methods of using the same
NZ546417A (en) 2003-09-15 2009-09-25 Univ British Columbia Ceratamines A and B, and analogues, syntheses and pharmaceutical compositions thereof
DE602004025834D1 (de) 2003-10-22 2010-04-15 Univ Johns Hopkins Die behandlung von tumoren
US7078562B2 (en) 2004-01-19 2006-07-18 Mitsubishi Gas Chemical Company, Inc. Adamantane derivatives and resin compositions using the same as raw material
US20050175619A1 (en) 2004-02-05 2005-08-11 Robert Duffy Methods of producing antibody conjugates
JP5064037B2 (ja) 2004-02-23 2012-10-31 ジェネンテック， インコーポレイテッド 複素環式自壊的リンカーおよび結合体
JP4806680B2 (ja) 2004-05-19 2011-11-02 メダレックス インコーポレイテッド 自己犠牲リンカー及び薬剤複合体
CN101039701A (zh) 2004-08-26 2007-09-19 尼古拉斯皮拉马尔印度有限公司 含有生物可裂解二硫化物连接物的前药和共药
WO2006027711A2 (en) 2004-08-26 2006-03-16 Nicholas Piramal India Limited Prodrugs and codrugs containing bio- cleavable disulfide linkers
JP2008519863A (ja) 2004-11-12 2008-06-12 シアトル ジェネティクス インコーポレイティッド Ｎ末端にアミノ安息香酸単位を有するオーリスタチン
US7714016B2 (en) 2005-04-08 2010-05-11 Medarex, Inc. Cytotoxic compounds and conjugates with cleavable substrates
WO2007008848A2 (en) 2005-07-07 2007-01-18 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine carboxy modifications at the c-terminus
CA2614436C (en) 2005-07-07 2016-05-17 Seattle Genetics, Inc. Monomethylvaline compounds having phenylalanine side-chain modifications at the c-terminus
PT3248613T (pt) 2005-07-18 2022-03-16 Seagen Inc Conjugados de ligante de fármaco e beta-glucuronida
AU2006277117B2 (en) 2005-08-05 2013-01-10 Syntarga B.V. Triazole-containing releasable linkers and conjugates comprising the same
AU2006294554B2 (en) 2005-09-26 2013-03-21 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Antibody-drug conjugates and methods of use
CA2627190A1 (en) 2005-11-10 2007-05-24 Medarex, Inc. Duocarmycin derivatives as novel cytotoxic compounds and conjugates
WO2007103288A2 (en) 2006-03-02 2007-09-13 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibody drug conjugates
TWI412367B (zh) 2006-12-28 2013-10-21 Medarex Llc 化學鏈接劑與可裂解基質以及其之綴合物
EP2121667B1 (en) 2007-02-21 2016-06-08 E. R. Squibb & Sons, L.L.C. Chemical linkers with single amino acids and conjugates thereof
MX2010003916A (es) 2007-10-10 2010-05-05 Novartis Ag Espiro-pirrolidinas y su uso contra infeccion por el virus de hepatitis c (hcv) y por el virus de inmunodeficiencia humana (vih).
US20090155289A1 (en) 2007-11-01 2009-06-18 Steve Roberts Furin-cleavable peptide linkers for drug-ligand conjugates
CN101932598B (zh) 2008-01-30 2016-12-21 皮里斯股份公司 具有对人c-met受体酪氨酸激酶的亲和性的泪脂质运载蛋白的突变蛋白及其获得方法
AR072657A1 (es) * 2008-02-29 2010-09-15 Genentech Inc Compuestos inhibidores de raf y metodos para su uso
US8609105B2 (en) 2008-03-18 2013-12-17 Seattle Genetics, Inc. Auristatin drug linker conjugates
EP2276506A4 (en) 2008-04-30 2014-05-07 Immunogen Inc EFFICIENT CONJUGATES AND HYDROPHILIC BINDER
US8236319B2 (en) 2008-04-30 2012-08-07 Immunogen, Inc. Cross-linkers and their uses
ES2906344T3 (es) 2008-06-27 2022-04-18 Merus Nv Animal murino transgénico productor de anticuerpos
GB2461546B (en) 2008-07-02 2010-07-07 Argen X Bv Antigen binding polypeptides
AU2009275358C1 (en) 2008-07-21 2015-09-24 Polytherics Limited Novel reagents and method for conjugating biological molecules
WO2010033240A2 (en) * 2008-09-19 2010-03-25 Nektar Therapeutics Carbohydrate-based drug delivery polymers and conjugates thereof
PL2865387T3 (pl) 2008-11-21 2019-12-31 Københavns Universitet (University Of Copenhagen) Pobudzenie odpowiedzi odpornościowej
US20110182850A1 (en) 2009-04-10 2011-07-28 Trixi Brandl Organic compounds and their uses
KR20120057588A (ko) 2009-05-28 2012-06-05 메르사나 테라퓨틱스, 인코포레이티드 가변 속도 방출 링커를 포함하는 폴리알 약물 접합체
US8394922B2 (en) 2009-08-03 2013-03-12 Medarex, Inc. Antiproliferative compounds, conjugates thereof, methods therefor, and uses thereof
ES2532866T3 (es) 2009-09-25 2015-04-01 Astellas Pharma Inc. Compuesto amida sustituida
JP2013523098A (ja) 2010-03-29 2013-06-17 ザイムワークス，インコーポレイテッド 強化又は抑制されたエフェクター機能を有する抗体
PT2560993T (pt) 2010-04-20 2024-09-16 Genmab As Proteínas contendo anticorpo heterodimérico fc e métodos para a produção das mesmas
ES2528956T3 (es) 2010-06-10 2015-02-13 Seattle Genetics, Inc. Nuevos derivados de auristatina y su uso
WO2012032080A1 (en) 2010-09-07 2012-03-15 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges.M.B.H Stabilised human fc
KR101769654B1 (ko) 2010-09-24 2017-08-18 아스텔라스세이야쿠 가부시키가이샤 치환 아미드 화합물
CA2813411C (en) 2010-11-05 2016-08-02 Rinat Neuroscience Corporation Engineered polypeptide conjugates and methods for making thereof using transglutaminase
WO2012113847A1 (en) 2011-02-25 2012-08-30 Lonza Ltd Branched linker for protein drug conjugates
JP6101638B2 (ja) 2011-03-03 2017-03-22 ザイムワークス，インコーポレイテッド 多価ヘテロマルチマー足場設計及び構築物
WO2012123957A1 (en) 2011-03-16 2012-09-20 Council Of Scientific & Industrial Research Oligopeptides and process for preparation thereof
CA2831307A1 (en) 2011-03-30 2012-10-04 Arizona Board Of Regents, For And On Behalf Of, Arizona State Universi Auristatin tyramine phosphate salts and auristatin aminoquinoline derivatives and prodrugs thereof
RU2610336C2 (ru) 2011-04-21 2017-02-09 Сиэтл Дженетикс, Инк. Новые конъюгаты связывающее соединение - активное соединение (adc) и их применение
EA201391756A1 (ru) 2011-05-27 2014-05-30 Амбркс, Инк. Композиции, содержащие, способы, включающие, и применение производных доластатина, связанных с неприродными аминокислотами
WO2012171020A1 (en) 2011-06-10 2012-12-13 Mersana Therapeutics, Inc. Protein-polymer-drug conjugates
UA117901C2 (uk) 2011-07-06 2018-10-25 Ґенмаб Б.В. Спосіб посилення ефекторної функції вихідного поліпептиду, його варіанти та їх застосування
US20130190248A1 (en) 2011-07-26 2013-07-25 Agensys, Inc. Substituted peptide analogs
US20140309265A1 (en) 2011-11-09 2014-10-16 Ensemble Therapeutics Macrocyclic compounds for inhibition of inhibitors of apoptosis
WO2013068874A1 (en) 2011-11-11 2013-05-16 Pfizer Inc. Antibody-drug conjugates
JP6192233B2 (ja) 2011-11-17 2017-09-06 ファイザー・インク 細胞毒性ペプチドおよびその抗体薬物コンジュゲート
EP2812024B1 (en) 2012-02-09 2018-04-11 Var2 Pharmaceuticals ApS Targeting of chondroitin sulfate glycans
CN104640572B (zh) 2012-05-15 2018-04-27 索伦托医疗有限公司 药物偶联物，偶联方法，及其用途
US10800856B2 (en) 2012-06-07 2020-10-13 Ambrx, Inc. Prostate-specific membrane antigen antibody drug conjugates
EP2861262B1 (en) 2012-06-19 2018-11-28 Ambrx, Inc. Anti-cd70 antibody drug conjugates
CA2880896C (en) 2012-06-26 2021-11-16 Del Mar Pharmaceuticals Methods for treating tyrosine-kinase-inhibitor-resistant malignancies in patients with genetic polymorphisms or ahi1 dysregulations or mutations employing dianhydrogalactitol, diacetyldianhydrogalactitol, dibromodulcitol, or analogs or derivatives thereof
TW201428002A (zh) * 2012-11-09 2014-07-16 必治妥美雅史谷比公司 用於抑制細胞凋亡抑制劑之巨環化合物
WO2014080251A1 (en) 2012-11-24 2014-05-30 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Hydrophilic linkers and their uses for conjugation of drugs to cell binding molecules
SG10201705150RA (en) 2012-12-21 2017-07-28 Bioalliance Cv Hydrophilic self-immolative linkers and conjugates thereof
MX368258B (es) 2013-03-15 2019-09-25 Zymeworks Inc Compuestos citotoxicos y antimitoticos y metodos de uso de los mismos.
WO2015057876A1 (en) 2013-10-15 2015-04-23 Sorrento Therapeutics Inc. Drug-conjugates with a targeting molecule and two different drugs
MX2016007865A (es) 2013-12-17 2017-01-11 Novartis Ag Peptidos citotoxicos y conjugados de los mismos.
CA2935064C (en) 2013-12-27 2023-06-27 Zymeworks Inc. Var2csa-drug conjugates
CN106255513B (zh) * 2013-12-27 2022-01-14 酵活有限公司 用于药物偶联物的含磺酰胺连接系统
IL287645B2 (en) 2014-09-17 2024-04-01 Zymeworks Bc Inc Cytotoxic and anti-mitotic compounds and methods for their use
US10975112B2 (en) 2015-06-16 2021-04-13 Hangzhou Dac Biotech Co., Ltd. Linkers for conjugation of cell-binding molecules

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7528152B2 (en) * 2002-03-22 2009-05-05 Eisai Co., Ltd. Hemiasterlin derivatives and uses thereof in the treatment of cancer
US20080305044A1 (en) * 2004-11-29 2008-12-11 Seattle Genetics, Inc. Engineered Antibodies and Immunoconjugates

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
WERBOVETZ et al. 'Selective Antimicrotubule Activity of N1-Phenyl-3,5-dinitro-4,N-4-di-n-propylsulfanilamide (GB-II-5) against Kinetoplastid Parasites', Mol Pharmacol, 2003, vol. 64, pp 1325-1333, pg 1325, abstract; pg 1328, Table 1 *

Also Published As

Publication number Publication date
EP2968440B1 (en) 2019-06-05
HK1220626A1 (zh) 2017-05-12
AU2014228489B2 (en) 2018-11-15
US20140315954A1 (en) 2014-10-23
HK1220140A1 (zh) 2017-04-28
US20160038606A1 (en) 2016-02-11
ES2741207T3 (es) 2020-02-10
CN110143999A (zh) 2019-08-20
EA029818B8 (ru) 2018-09-28
EP2968440A4 (en) 2016-08-17
MX2015012868A (es) 2016-05-09
JP6431038B2 (ja) 2018-11-28
CN110143999B (zh) 2023-12-05
IL241524B (en) 2019-10-31
MX368258B (es) 2019-09-25
US9522876B2 (en) 2016-12-20
KR20160009019A (ko) 2016-01-25
CA2906784C (en) 2023-02-28
AU2014228489A1 (en) 2015-09-24
US20230390354A1 (en) 2023-12-07
SG11201507619PA (en) 2015-10-29
BR112015023415A2 (pt) 2017-07-18
PT2968440T (pt) 2019-07-31
BR112015023415A8 (pt) 2018-01-23
PL2968440T3 (pl) 2019-12-31
ZA201506918B (en) 2018-11-28
NZ711982A (en) 2019-11-29
KR102178606B1 (ko) 2020-11-13
CN105358174A (zh) 2016-02-24
CN105358174B (zh) 2019-03-15
WO2014144871A1 (en) 2014-09-18
US11617777B2 (en) 2023-04-04
US10201614B2 (en) 2019-02-12
EP2968440A1 (en) 2016-01-20
EP3590922A1 (en) 2020-01-08
CA2906784A1 (en) 2014-09-18
JP2016516063A (ja) 2016-06-02
EA201591632A1 (ru) 2016-04-29
DK2968440T3 (da) 2019-07-22
US20190269785A1 (en) 2019-09-05
TR201911139T4 (tr) 2019-08-21
MY174813A (en) 2020-05-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20230390354A1 (en) Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
JP6908656B2 (ja) 薬物結合体のためのスルホンアミド含有連結系
AU2020230264B2 (en) Cytotoxic and anti-mitotic compounds, and methods of using the same
BR112015023415B1 (pt) Compostos citotóxicos e anti-mitóticos, composição, composição farmacêutica e uso dos mesmos