EA024746B1 - Ингибитор регулирующей апоптотические сигналы киназы - Google Patents

Ингибитор регулирующей апоптотические сигналы киназы Download PDF

Info

Publication number
EA024746B1
EA024746B1 EA201491283A EA201491283A EA024746B1 EA 024746 B1 EA024746 B1 EA 024746B1 EA 201491283 A EA201491283 A EA 201491283A EA 201491283 A EA201491283 A EA 201491283A EA 024746 B1 EA024746 B1 EA 024746B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
compound
formula
analysis
dmso
compounds
Prior art date
Application number
EA201491283A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201491283A1 (ru
Inventor
Грегори Нотт
Original Assignee
Джилид Сайэнс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Джилид Сайэнс, Инк. filed Critical Джилид Сайэнс, Инк.
Publication of EA201491283A1 publication Critical patent/EA201491283A1/ru
Publication of EA024746B1 publication Critical patent/EA024746B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4436—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a heterocyclic ring having sulfur as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/4427—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/4439—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. omeprazole
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0053—Mouth and digestive tract, i.e. intraoral and peroral administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/20—Pills, tablets, discs, rods
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D213/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D213/04—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D213/24—Heterocyclic compounds containing six-membered rings, not condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom and three or more double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having three double bonds between ring members or between ring members and non-ring members having no bond between the ring nitrogen atom and a non-ring member or having only hydrogen or carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with substituted hydrocarbon radicals attached to ring carbon atoms
    • C07D213/54—Radicals substituted by carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals
    • C07D213/56—Amides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D233/00—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings
    • C07D233/54—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members
    • C07D233/56—Heterocyclic compounds containing 1,3-diazole or hydrogenated 1,3-diazole rings, not condensed with other rings having two double bonds between ring members or between ring members and non-ring members with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, attached to ring carbon atoms
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/04—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings directly linked by a ring-member-to-ring-member bond

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Emergency Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Pyridine Compounds (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

Изобретение относится к соединению формулы (I)Соединение обладает ингибирующей активностью в отношении регулирующей апоптотические сигналы киназы ("ASK1") и, таким образом, подходит для применения для лечения заболеваний, таких как заболевание почек, диабетическая нефропатия и фиброз почек.

Description

Настоящее изобретение относится к новому соединению для применения для лечения А8К1опосредованных заболеваний. Изобретение также относится к промежуточным соединениям для получения указанного нового соединения и содержащим его фармацевтическим композициям.
Уровень техники
Регулирующая апоптотические сигналы киназа 1 (А8К1) является членом семейства киназ киназ митоген-активируемых протеинкиназ (МАР3К), которые активируют с-Лт Ν-терминальную протеинкиназу (ΊΝΚ) и р38 МАР-киназу ДсНуо Н., №§Ыба Е., 1пе К., Эуке Р.Т., 8аНоН М., МойдисЫ Т., Майито(о К., Μίναζοηο К., Со(оН Υ. (1997) Зшеисе, 275, 90-94). Л8К1 активируются различными раздражителями, включая окислительный стресс, активные формы кислорода (АФК), ЛПС, ФНО-α, РакЬ, ЭР-стресс и повышенные концентрации внутриклеточного кальция (Найой К., №диго I., КипсНе1 С, КНуо Н. (2009) Се11 Сотт. 81дпа1. 7:1-10; Такеба К., №дис1и Т., №щиго I., КНуо Н. (2007) Аппи. Кеу. РНагтасо1. Тохюо1. 48: 1-8,27; №щ;и Н., ШдисЫ Т., Такеба К., КНуо I. (2007) 1. ВюсНет. Мо1. Бю1. 40:1-6). Фосфорилирование белка А8К1 может приводить к апоптозу или другим клеточным ответам в зависимости от типа клеток. Было показано, что активация и сигнальный путь А8К1 играют важную роль в широком спектре заболеваний, включая нейродегенеративные, сердечно-сосудистые, воспалительные, аутоиммунные и метаболические расстройства. Кроме того, было показано, что А8К1 принимает участие в опосредовании повреждения органов после ишемии и реперфузии сердца, мозга и почки (\Уа(апаЬе е( а1. (2005) ВВКС 333, 562-567; /Напу е! а1., (2003) ЬГе 8с1 74-37-43; Тегаба е! а1. (2007) ВВКС 364: 1043-49).
Показано, что АФК связаны с повышенной выработкой воспалительных цитокинов, фиброзом, апоптозом и некрозом в почке. (8шдН Э.К.. ХУиюсоиг Р., РагппуЮп К. Ох1байуе 81ге88 ίη еаг1у б1аЬеНс перНгора(Ну: ГиеПпд (Не йге. №ι( Кеу Епбосгто1 2011 Маг;7(3): 176-184; Вго\\п1ее М. ВюсНетМгу апб то1еси1аг се11 Ъю1оду оГ б1аЬеНс сотрПсаНощ. №-1(иге 2001 Эес 13; 414(6865):813-820; Митта I., №тдаки М. ТНе щГГосаОпу Юбпеу: Л1Ьи1от(ег5ОПа1 Нурох1а ш епб-Ладе гепа1 б18еа§е. №ι( Кеу №рНго1 2010 Ш; 6(11):667-678).
Более того, окислительный стресс способствует формированию конечных продуктов усиленного гликозилирования (АОЕ), которые вызывают дальнейшее повреждение почки и выработку АФК. (Нипд ΚΥ., е( а1. ^асе(у1су5(еп1е-теб1а(еб апбох1бабоп ргеуепй НурегдЛсепиа-тбисеб арор(оЛ5 апб со11адеп 5уп(НеЛ5 т га! те§апд1а1 се11к. Ат 1 №рНго1 2009; 29(3): 192-202).
Тубулоинтерстициальный фиброз в почке является сильным прогностическим фактором прогрессирования заболевания до почечной недостаточности у пациентов, страдающих хроническими заболеваниями почек (8сНашиск Ь.к, е( а1. 8(гис(ига1-Гипс(юпа1 соггекИюш, ш гепа1 б18еа§е. Рай II: ТНе соггеШюпк. Нит Ра(Но1 1970; 1: 631-641.). Односторонняя обструкция мочеточника (ООМ) у крыс является широко используемой моделью тубулоинтерстициального фиброза. ООМ вызывает тубулоинтерстициальное воспаление, повышенную экспрессию трансформирующего фактора роста бета (ТФР-β) и накопление миофибробластов, которые секретируют матриксные белки, такие как коллаген и фибронектин. Модель ООМ может использоваться для исследования потенциальной способности лекарственного средства лечить хроническую почечную недостаточность путем подавления фиброза почек (СНеуаЛег е( а1., иге(ега1 оЬйгисОоп а8 а тобе1 оГ гепа1 1йег8Ййа1 ПЬгоЛх апб оЬйгисНуе перНгораНу, Кабпеу !п1егпа11опа1 (2009) 75, 1145-1152).
Таким образом, терапевтические агенты, действующие в качестве ингибиторов сигналинга А8К1, имеют потенциал в отношении лечения или улучшения качества жизни пациентов, нуждающихся в лечении заболеваний или состояний, таких как нейродегенеративные, сердечно-сосудистые, воспалительные, аутоиммунные и метаболические расстройства. В частности, ингибиторы А8К1 имеют потенциал для лечения кардиоренальных заболеваний, включая заболевание почек, диабетическое заболевание почек, хроническую почечную недостаточность, фиброзные заболевания (включая фиброз легких и почек), респираторные заболевания (включая хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ) и острое повреждение легких), острые и хронические почечной недостаточности.
В публикации заявки на патент США № 2007/0276050 описаны способы идентификации ингибиторов А8К1, подходящих для предотвращения и/или лечения сердечно-сосудистого заболевания, и способы предотвращения и/или лечения указанного сердечно-сосудистого заболевания у животного.
В νθ 2009027283 описаны тиазолопиридиновые соединения, способы их получения и способы лечения аутоиммунных расстройств, воспалительных заболеваний, сердечно-сосудистых заболеваний и нейродегенеративных заболеваний.
В публикации заявки на патент США № 2001/00095410А1, опубликованной 13 января 2011 г., описаны соединения, подходящие для применения в качестве ингибиторов А8К-1. Публикация заявки на патент США № 2001/00095410А1 относится к соединениям формулы (I)
- 1 024746
где К1 представляет собой алкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, гетероарил или гетероциклил, каждый из которых необязательно содержит 1, 2, или 3 заместителя, выбранных из галогена, оксо, алкила, циклоалкила, гетероциклила, арила, арилокси, -ΝΟ2, К6, -С(О)-К6, -ОС(О)-К6 -С(О)-О-К6, -С(О)Ν(Κ6)(Κ7), -ОС(О)-Ы(К6)(К7), -8-К6, -8(=О)-К6, -3(=О)2К6, -8(=О)2-Ы(К6)(К7), -3(=О)2-О-К6, -Ν(Κ6)(Κ7), ^К6)-С(О)-К7, -Ы(К6)-С(О)-О-К7, -Ы(К6)-С(О)-Н(К6)(К7), -Ы(К6)-8(=О)2-К6, -СЫ и -О-К6, где указанные алкил, циклоалкил, гетероциклил, фенил и фенокси необязательно содержат 1, 2, или 3 заместителя, выбранных из алкила, циклоалкила, алкокси, гидроксила и галогена;
где К6 и К7 независимо выбраны из группы, состоящей из водорода, С1-С15 алкила, циклоалкила, гетероциклила, арила и гетероарила, каждый из которых необязательно содержит 1-3 заместителя, выбранных из галогена, алкила, моно- или диалкиламино, амида алкила или арила или гетероарила, -СЫ, низшего алкокси, -СР3, арила и гетероарила; или
К6 и К7 вместе с атомом азота, к которому они присоединены, образуют гетероцикл;
К2 представляет собой водород, галоген, циано, алкокси или алкил, необязательно содержащий в качестве заместителя галоген;
К3 представляет собой арил, гетероарил или гетероциклил, каждый из которых необязательно содержит один или более заместителей, выбранных из алкила, алкокси, циклоалкила, циклоалкилалкила, арила, арилалкила, гетероарила, гетероарилалкила, гетероциклила, гетероциклилалкила, галогена, оксо, NΟ2, галогеналкила, галогеналкокси, -СЫ, -О-К6, -О-С(О)-К6, -О-С(О)-Ы(К6)(К7), -8-К6, -Ы(К6)(К7), 8(=О)-К6, -8(=О)2К6, -8(=О)2-^К6)(К7), -8(=О)2-О-К6, -^К6)-С(О)-К7, -^К6)-С(О)-О-К7, -^К6)-С(О)^К6)(К7), -С(О)-К6, -С(О)-О-К6, -С(О)-Ы(К6)(К7) и -Ы(К6)-8(=О)2-К7, где указанный алкил, алкокси, циклоалкил, арил, гетероарил или гетероциклил также необязательно содержит один или более заместителей, выбранных из галогена, оксо, -ЫО2, алкила, галогеналкила, галогеналкокси,-Ы(К6)(К7), -С(О)-К6, С(О)-О-К6, -С(О)-Ы(К6)(К7), -СЫ, -О-К6, циклоалкила, арила, гетероарила и гетероциклила;
при условии, что гетероарильный или гетероциклильный фрагмент содержит по меньшей мере один атом азота в кольце;
X1, X2, X3, X4, X5, X6, X7 и X8 независимо представляют собой С(К4) или Ν, где каждый из К4 независимо представляет собой водород, алкил, алкокси, циклоалкил, арил, гетероарил, гетероциклил, галоген, -ЫО2, галогеналкил, галогеналкокси, -СИ, -О-К6, -8-К6, -Ы(К6)(К7), -8(=О)-К6, -8(=О)2К6, -8(=О)2^К6)(К7), -8(=О)2-О-К6,-И(К6)-С(О)-К7, -И(К6)-С(О)-О-К7, -И(К6)-С(О)-И(К6)(К7), -С(О)-К6, -С(О)-О-К6,С(О)-И(К6)(К7) или -И(К6)-8(=О)2-К7, где указанный алкил, циклоалкил, арил, гетероарил и гетероциклил также необязательно содержит один или более заместителей, выбранных из галогена, оксо, -ИО2, -СР3, О-СР3, -И(К6)(К7), -С(О)-К6, -С(О)-О-К7, -С(О)-И(К6)(К7), -СИ, -О-К6; или
X5 и X6 или X6 и X7 соединены с получением необязательно замещенного конденсированного арила или необязательно замещенного конденсированного гетероарила; и при условии, что по меньшей мере один из X2,X3, X4 представляет собой С(К4); по меньшей мере два из X5, X6, X7 и X8 представляют собой С(К4); и по меньшей мере один из X2, X3, X4, X5, X6, X7 и X8 представляет собой Ν.
Несмотря на описанные выше изобретения существует необходимость в соединениях, которые являются высокоактивными и проявляют улучшенные фармакокинетические и/или фармакодинамические свойства для лечения заболеваний, связанных с активацией А8К1.
Заявители неожиданно обнаружили в рамках патентной публикации США И8 2011/0009410А новое соединение, проявляющее хорошую активность и в целом улучшенные фармакокинетические и/или фармакодинамические свойства по сравнению с соединениями, предложенными в указанной публикации.
Краткое описание изобретения
Настоящее изобретение относится к соединению формулы
или его фармацевтически приемлемой соли.
Согласно одному варианту реализации настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) для лечения заболевания у пациента, нуждающегося в указанном лечении, с помощью ингибитора А8К1.
Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к фармацевтической
- 2 024746 композиции, содержащей соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или более фармацевтически приемлемых носителей.
Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение представляет собой способ лечения диабетической нефропатии или осложнений диабета, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом пациенту.
Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к способу лечения заболевания почек или диабетического заболевания почек, включающему введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом пациенту.
Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к способу лечения фиброза почек, фиброза легких или идиопатического легочного фиброза (ИЛФ), включающему введение терапевтически эффективного количества соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом пациенту.
Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к способу лечения диабетической почечной недостаточности, диабетической нефропатии, фиброза почек, фиброза печени или фиброза легких, включающему введение терапевтически эффективного количества соединения или соли формулы (I) нуждающемуся в этом пациенту.
Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к промежуточным соединениям, подходящим для применения для синтеза соединения формулы (I).
Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для лечения хронической почечной недостаточности.
Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для лечения диабетического почечной недостаточности.
Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления медикамента для лечения хронической почечной недостаточности.
Согласно другому варианту реализации настоящее изобретение относится к соединению формулы (I) для применения в терапии.
Подробное описание изобретения
Фигуры.
Фиг. 1 представляет собой гистограмму, показывающую уровни коллагена IV в корковом веществе почки крыс, подверженных семидневной односторонней обструкции мочеточника и получавших лечение носителем или соединением формулы (I) в концентрации 1, 3, 10 или 30 мг/кг два раза в день.
На фиг. 2 показаны типичные изображения срезов коркового вещества почки крыс, подверженных семидневной односторонней обструкции мочеточника и получавших лечение носителем или соединением формулы (I) в дозе 1, 3, 10 или 30 мг/кг два раза в день, окрашенных на альфа-гладкомышечный актин (маркер активированных миофибробластов).
Определения и общие характеристики
Предполагается, что при использовании в настоящей заявке приведенные далее слова и фразы имеют значения, указанные ниже, если иное не следует из контекста, в котором они используются. Если не приводится обозначение или определение слова или фразы, то подразумевается общепринятое значение указанного слова или фразы, которое можно обнаружить в соответствующем словаре или повсеместном использовании, известном специалисту в данной области техники.
Термин хроническая почечная недостаточность при использовании в настоящей заявке относится к прогрессирующей потере почечной функции в течение продолжительного периода, как правило, нескольких месяцев или даже лет. Хроническую почечную недостаточность (ХПН) диагностирует компетентный субъект, осуществляющий уход, с использованием соответствующей информации, тестов или маркеров, известных специалисту в данной области техники. Хроническая почечная недостаточность подразумевает почечную недостаточность.
Термин диабетическая почечная недостаточность при использовании в настоящей заявке относится к почечной недостаточности, вызванной диабетом, усугубляемой диабетом или присутствующей совместно с диабетом. Диабетическая почечная недостаточность представляет собой форму хронической почечной недостаточности, которая возникает приблизительно у 30% пациентов, страдающих диабетом. Она определяется как диабет с сопутствующей альбуминурией и/или нарушенной почечной функцией (т.е. сниженной скоростью клубочковой фильтрации (см. бе В, I, с1 а1. Тетрога1 (гспГО ίη 1Пс ргеуа1еисе о£ ФаЪеОс ктйиеу Фкеаке ίη (Не ИиНей 8(а(е5. БАМА 2011 Нт 22; 305(24):2532-2539).
Термин фармацевтически приемлемая соль относится к солям фармацевтических соединений, например соединения формулы (I), которые сохраняют биологическую эффективность и свойства исходного соединения и которые не являются нежелательными с биологической или другой точки зрения. Ука- 3 024746 занные соли представляют собой соли присоединения кислот и соли присоединения оснований. Фармацевтически приемлемые соли присоединения кислот могут быть получены из неорганических и органических кислот.
Кислоты и основания, применимые для реакции с исходным соединением с образованием фармацевтически приемлемых солей (солей присоединения кислоты или основания соответственно), известны специалисту в данной области техники. Подобным образом, способы получения фармацевтически приемлемых солей из исходного соединения (согласно изобретению) известны специалисту в данной области техники и описаны, например, в источнике Всгдс. с1 а1. 1оитиа1 о£ Рйагтасеибса1 Заспес. 1аи. 1977 νοί. 66, Νο. 1 и других источниках. Соли, полученные из неорганических кислот, включают, но не ограничиваются указанными, соли соляной кислоты, бромоводородной кислоты, серной кислоты, азотной кислоты, фосфорной кислоты и т. д. Соли, полученные из органических кислот, включают, но не ограничиваются указанными, малеиновую кислоту, фумаровую кислоту, винную кислоту, п-толуолсульфоновую кислоту и т. д. Основания, применимые для получения солей присоединения оснований, известны специалисту в данной области техники. Пример фармацевтически приемлемой соли соединения формулы (I) представляет собой гидрохлорид соединения формулы (I).
При использовании в настоящей заявке фармацевтически приемлемый носитель включает вспомогательные вещества или агенты, такие как растворители, разбавители, диспергирующие агенты, покрывающие агенты, антибактериальные и противогрибковые агенты, изотонические и замедляющие абсорбцию агенты и т. п., которые не оказывают неблагоприятного воздействия на соединение согласно изобретению или его применение. Применение указанных носителей и агентов для получения композиций фармацевтически активных веществ хорошо известно в данной области техники (см., например, КепипдЮпк Рйагтасеибса1 8с1еисе8, Масе РиЫЫйпд Со., РЫ1абе1рЫа, РА 17ΐΠ Еб. (1985); апб Мобегп Рйаттасеибск, Магсе1 Оеккет, 1пс. 3гб Еб. (0.8. Вапкег & С.Т. Кйобек, Ебк.)
Термин кардиоренальные заболевания при использовании в настоящей заявке относится к заболеваниям, связанным с почечной функцией, вызванным или усугубляемым сердечно-сосудистыми нарушениями, такими как, например, повышенное кровеносное давление или гипертензия. Считается, что гипертензия вносит важный вклад в почечную недостаточность.
Термин респираторные заболевания при использовании в настоящей заявке относится к заболеваниям, включающим хроническое обструктивное заболевание легких (ХОЗЛ) и идиопатический легочный фиброз (ИЛФ).
Термин терапевтически эффективное количество относится к количеству соединения формулы (I), которое является достаточным для осуществления лечения согласно приведенному ниже определению при введении пациенту (в частности, человеку), нуждающемуся в указанном лечении, в виде одной или более доз. Терапевтически эффективное количество варьирует в зависимости от пациента, заболевания, которое предполагается лечить, массы тела и/или возраста пациента, тяжести заболевания или способа введения и определяется квалифицированным медицинским работником или лицом, осуществляющим уход.
Термин лечение или проведение лечения означает введение соединения или фармацевтически приемлемой соли формулы (I) для (ί) задержки возникновения заболевания, т.е. препятствия развитию клинических симптомов заболевания или задержки их развития;
(тт) подавления заболевания, т.е. сдерживания развития клинических симптомов; и/или (ттт) облегчения заболевания, т.е. обеспечения регрессии клинических симптомов или их тяжести.
Согласно предпочтительному варианту реализации изобретение относится к применению соединения формулы (I) для лечения хронической почечной недостаточности, включающему введение терапевтически эффективного количества нуждающемуся в этом пациенту.
Согласно другому предпочтительному варианту реализации изобретение относится к применению соединения формулы (I) для лечения диабетической почечной недостаточности, включающему введение терапевтически эффективного количества нуждающемуся в этом пациенту.
Согласно другому предпочтительному варианту реализации изобретение относится к применению соединения формулы (I) для лечения фиброза легких или фиброза почек, включающему введение терапевтически эффективного количества нуждающемуся в этом пациенту.
Концентрация полумаксимального ингибирования ^С50) терапевтического агента представляет собой концентрацию указанного терапевтического агента, необходимую для обеспечения 50% максимального ингибирования в отношении фермента-мишени. Поставленной задачей является обеспечение терапевтического агента, например соединения, которое ингибирует регулирующую апоптотические сигналы киназу (А8К1) при низкой Σ0Ο. Таким образом, нежелательные побочные действия минимизируются благодаря возможности применения более низкой дозы терапевтического агента для подавления фермента А8К1.
Подобным образом, поставленной задачей является обеспечение терапевтического агента, имеющего низкую константу диссоциации (Кб). Кб используется для описания сродства между лигандом (таким как терапевтический агент) и соответствующей киназой или рецептором; т. е. меры того, насколько
- 4 024746 сильно терапевтический агент связывается с конкретной киназой, например регулирующей апоптотические сигналы киназой А8К1. Таким образом, более низкие значения Κ,ι в целом являются предпочтительным для разработки лекарственного средства.
Подобным образом, поставленной задачей является обеспечение соединения, имеющего низкую ЕС50. ЕС50 представляет собой концентрацию лекарственного средства, которая приводит к достижению 50%-ной максимальной эффективности в клетке. Значение ЕС50 выражается как концентрация соединения в аналитической среде, необходимая для достижения 50%-ной максимальной эффективности. Таким образом, более низкая ЕС50 в целом является предпочтительной для разработки лекарственного средства.
Применимая единица измерения, связанная с ЕС50, представляет собой скорректированную с учетом связывания с белком ЕС50 (РВ,,,ц ЕС50 при использовании в настоящей заявке). Указанное значение описывает количество лекарственного средства, например соединения формулы (I), соотнесенное с фракцией лекарственного средства, не связанной с белком, которое обеспечивает 50% максимальной эффективности. Указанное значение показывает эффективность лекарственного средства, коррелированную или скорректированную с учетом количества лекарственного средства, доступного в месте действия-мишени.
Другим желаемым свойством соединения является низкое отношение оттока через клеточную мембрану, определяемое с помощью исследований проницаемости на клетках линии САСО. Отношение оттока ((В/А)/(А/В)), составляющее менее 3,0, является предпочтительным. Ожидается, что соединение, отношение оттока которого составляет более 3, активно и быстро выходит из клетки и может не оказывать достаточно продолжительного воздействия в клетке для достижения максимальной эффективности.
Другой поставленной задачей является обеспечение лекарственного средства, которое проявляет минимальное нецелевое ингибирование, то есть лекарственное средство, которое минимально ингибирует ферменты Сур450 (цитохром р450). Более конкретно, желаемым является лекарственное средство, которое является слабым ингибитором сур3А4 - наиболее важного из ферментов Р450. Слабый ингибитор представляет собой соединение, которое вызывает по меньшей мере 1,25-кратное, но менее чем 2кратное повышение значений ППК в плазме крови или 20-50% снижение клиренса (сайт νίΐχίροЙ1а.огд/^|к|/еур3А4. посещенный 11/12/11). В целом, соединение, 1С50 которого в отношении Сур3А4 составляет более 10 мкМ, считается слабым ингибитором.
Измерение, применимое для сравнения ингибирования Сур3А4 между кандидатами лекарственных средств представляет собой отношение ингибирования Сур3А4 и скорректированной с учетом связывания с белком ЕС50. Указанное значение обеспечивает показатель относительной потенциальной способности ингибировать Сур с поправкой на ЕС50, скорректированную с учетом связывания с белком, специфичную для каждого лекарственного средства. Более высокое отношение для указанного измерения является предпочтительным как показатель более низкой потенциальной способности ингибировать сур3А4.
Неожиданно и удачно заявители обнаружили соединение (в настоящей заявке соединение формулы (I)) в пределах общего объема патентной публикации США № 2001/00095410А1, которое обеспечивает преимущества по сравнению со структурно близкими соединениями (которые в настоящей заявке обозначаются как соединения А и В), описанными в патентной публикации США № 2001/00095410А1
Таким образом, задача настоящего изобретения включает, но не ограничивается указанными, обеспечение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли и способы применения указанного соединения формулы (I) для лечения почечной недостаточности, хронической почечной недостаточности, диабетической почечной недостаточности, диабетической нефропатии, фиброза почек или фиброза легких.
Комбинированная терапия.
Пациенты, проходящие лечение кардиоренальных заболеваний, таких как хроническая почечная недостаточность, могут иметь положительный результат от комбинированного лекарственного лечения. Например, соединение согласно настоящему изобретения можно комбинировать с одним или более из ингибиторов ангиотензинпревращающих ферментов (АСЕ), такими как эналаприл, каптоприл, рамиприл, лизиноприл и хинаприл; или блокаторов рецептора II (АРВ), таких как лазартан, олмесартан и ирбесартан; или гипотензивными агентами, такими как амлодипин, нифедипин и фелодипин. Положительным результатом комбинирования может являться повышенная эффективность и/или уменьшение побочных
- 5 024746 эффектов компонента, так как доза указанного компонента может быть снижена для уменьшения его побочных эффектов, тогда как положительный результат от его эффективности повышает эффективность соединения формулы (I) и/или другого активного компонента (компонентов).
Пациенты, страдающие хронической почечной недостаточностью, поддающейся лечению с помощью ингибиторов ΆδΚΙ, таких как соединение формулы (I), также могут страдать состояниями, на лечение которых благоприятно влияет совместное введение терапевтического агента или агентов (по указанию квалифицированного лица, осуществляющего уход), которые представляют собой антибиотики, анальгетики, антидепрессанты и/или успокоительные средства в комбинации с соединением формулы (I). Комбинированные лекарственные средства можно вводить одновременно или последовательно с временными интервалами по указанию квалифицированного лица, осуществляющего уход, или с помощью лекарственной формы с фиксированными дозами двух или более активных агентов (все активные ингредиенты объединены в одну форму дозирования, например, таблетку).
Фармацевтические композиции и введение.
Соединение согласно настоящему изобретению можно вводить в форме фармацевтической композиции. В настоящем изобретении, таким образом, предложены фармацевтические композиции, которые содержат в качестве активного ингредиента соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и один или более фармацевтически приемлемых вспомогательных веществ и/или носителей, включая инертные твердые разбавители и наполнители, разбавители, включая стерильный водный раствор и различные органические растворители, усилители проникновения, солюбилизаторы и адъюванты. Фармацевтические композиции можно вводить отдельно или в комбинации с другими терапевтическими агентами. Композиции для доставки могут быть получены в виде твердых таблеток, капсул, каплетов, мазей, трасдермальных пластырей, форм с замедленным высвобождением, таблеток для рассасывания, лекарственных форм для ингаляции и т. д. Типичные фармацевтические композиции получают и/или вводят с использованием способов и/или процессов, хорошо известных в области фармацевтики (см., например, РепипдЮпЗ РЬагтасеийса1 §аспсс5. Масе РиЫЫйпд Со., РЫ1аДе1рЫа, РА 171П ЕД. (1985); апД МоДегп РЬагтасеийск, Магсе1 Эеккег, Шс. 3гД ЕД. (0.8. Вапкег & С.Т. Р1юДе5, ЕД§).
Лекарственные формы для комбинированной терапии, содержащие соединение формулы (I), могут быть представлены в виде лекарственных форм с фиксированной дозой, например таблеток, эликсиров, жидкостей, мазей, лекарственных форм для ингаляции, гелей и т. д., с помощью методов, известных специалисту в данной области техники.
Фармацевтические композиции соединения формулы (I) можно вводить либо в одной, либо в нескольких дозах с помощью способов, включая, например, ректальный, буккальный, интраназальный и трансдермальный способы введения; путем внутриартериальной инъекции, внутривенно, внутрибрюшинно, парентерально, внутримышечно, подкожно, перорально, местно, с помощью ингалятора или через пропитанное или покрытое соединением устройство, такое как, например, стент или вживляемый в артерию цилиндрический полимерный материал. Наиболее предпочтительные способы введения включают пероральное, парентеральное и внутривенное введение.
Соединение формулы (I) можно вводить в фармацевтически эффективном количестве. Каждая единица дозирования для перорального введения предпочтительно содержит от 1 до 500 мг соединения формулы (I). Более предпочтительно доза соединения формулы (I) составляет от 1 до 250 мг. Особо предпочтительно доза соединения формулы (I) варьирует от примерно 20 мг два раза в день до примерно 50 мг два раза в день. Однако необходимо понимать, что реальное вводимое количество соединения, как правило, определяется врачом с учетом соответствующих факторов, включая состояние, которое предполагается лечить, выбранный способ введения, совместное введение соединения, если применимо, возраста, массы тела и ответа на лечение конкретного пациента, тяжести симптомов пациента и т. д.
Номенклатура.
Соединение согласно настоящему изобретению имеет название, полученное с помощью программы СНетВюОппу ИНга 11
5-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-Н-(6-(4-изопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-2-ил)-2фтор-4-метилбензамид, также известное как 5-((4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-2-фтор-Л-(6-(4изопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-2-ил)-4-метилбензамид.
Синтез соединения формулы (I).
Соединение согласно изобретению может быть получено с использованием способов, описанных в настоящей заявке, или их модификаций, которые будут очевидны с учетом описанного в настоящей заявке изобретения. Синтез соединения согласно изобретению можно осуществлять, как описано в следующем примере. Реагенты могут быть получены коммерческим путем, если это доступно, например, из компании §1§та А1ДпсН или от других производителей химических веществ. Альтернативно, реагенты могут быть получены с использованием схем реакций и способов, известных специалисту в данной об- 6 024746 ласти техники.
Параметры реакций синтеза.
Термины растворитель, инертный органический растворитель или инертный растворитель относятся к растворителю, инертному в условиях связанным с ним реакции (включая, например, бензол, толуол, ацетонитрил, тетрагидрофуран (ТГФ), диметилформамид (ДМФА), хлороформ, метиленхлорид (или дихлорметан), диэтиловый эфир, петролейный эфир (ПЭ), метанол, пиридин, этилацетат (ЭА) и т. п. Если иное не указано, растворители, используемые в реакциях согласно настоящему изобретению, представляют собой инертные органические растворители, и реакции осуществляют в условиях инертного газа, предпочтительно азота.
Один из способов получения соединений формулы (I) показан на схемах реакций 1 и 2 ниже.
Схема 1
Получение соединения А.
К раствору метил 6-аминопиколината (432 г, 2,84 моль) в МеОН (5 л) добавляли ΝΗ2ΝΗ2.Η2Ο (284 г, 5,68 моль, 2,0 экв.). Реакционную смесь нагревали при температуре обратной конденсации в течение 3 ч и затем охлаждали до комнатной температуры. Образовавшийся в смеси осадок собирали посредством фильтрования, промывали ЭА (2 лх2) и затем сушили в вакууме с получением соединения А (405 г, выход 94%) в виде твердого вещества белого цвета.
Получение соединения В.
Смесь соединения А (405 г, 2,66 моль) в диметилформамиде-диметилацетале (ДМФА-ДМА) (3,54 л) нагревали при температуре обратной конденсации в течение 18 ч, охлаждали до комнатной температуры и затем концентрировали при пониженном давлении. Осадок отбирали в ЭА (700 мл) и нагревали при 50°С в течение 20 мин. После охлаждения до комнатной температуры твердое вещество собирали посредством фильтрования и сушили в вакууме с получением соединения В (572 г, выход 82%) в виде твердого вещества белого цвета.
Получение соединения С.
К раствору соединения В (572 г, 2,18 моль) в смеси СШСИ-АсОН (3,6 л, 4:1) добавляли пропан-2амин (646 г, 5,0 экв.). Реакционную смесь нагревали при температуре обратной конденсации в течение 24 ч и затем охлаждали до комнатной температуры, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Осадок растворяли в воде (2,8 л) и добавляли 1 н водный раствор ΝαΟΗ до достижения рН 8,0. Осадок собирали посредством фильтрования, и фильтрат экстрагировали ЭА (500 млх3). Объединенные органические слои сушили над безводным №2ЗО4 и затем концентрировали до достижения объема 150 мл. К указанной смеси при 0°С медленно добавляли ПЭ (400 мл), и полученную суспензию фильтровали. Объединенное твердое вещество перекристаллизовывали из ЭА-ПЭ с получением соединения С (253 г, выход 57%) в виде твердого вещества не совсем белого цвета.
Ή-ЯМР (400 МГц, СОС13): δ 8,24 (δ, 1Н), 7,52 (т, 2Н), 6,51 (άά, 1=1,6, 7,2 Гц, 1Н), 5,55 (т, 1Н), 4,46 (Ьз, 2Н), 1,45 (ά, 1=6,8 Гц, 6Н). МС (ИЭР+) т/ζ: 204 (М+1)+. Соединение С является основным промежуточным соединением для синтеза соединения формулы (I). Таким образом, задачей настоящего изобретения также является получение промежуточного соединения С
его солей или защищенных форм для получения соединения формулы (I). Пример соли соединения С представляет собой соль присоединения ИСТ Пример защищенной формы соединения С представляет собой карбаматное соединение, такое как соединение, полученное с помощью С^-С1. Защитные группы, способы их получения и применения описаны в источнике Рс1сг О.М. \\'ΤιΙδ, ΤΙιοοάοΓα Огеепе, Рго1есОус Огоирз ίη Огдашс Сйет1з1гу, 2ηά еά^ΐ^οη, 1991, \¥Пеу αηά Зопз, РиЬПзПегз.
- 7 024746
Схема 2
Получение соединения формулы (I) продолжали следующим образом:

Claims (12)

  1. Соединение 6 представляет собой основное промежуточное соединение для синтеза соединения формулы (I). Таким образом, задачей настоящего изобретения также является получение промежуточного соединения 6 е
    его солей или защищенных форм для получения соединения формулы (I). Пример соли соединения 6 представляет собой соль присоединения НС1. Пример защищенной формы соединения 6 представляет собой сложный эфир (например, метиловые, этиловые или бензиловые сложные эфиры) или карбаматное соединение, такое как соединение, полученное с помощью СШ-СТ Защитные группы, способы их получения и применения описаны в источнике Рс!сг О.М. \Уи1з апб Тйеобога А. Огеепе, Рго1есО\'е Огоирз ίη Огдашс Сйеш1з£гу, 2'к| еббюп, 1991, \УПеу апб 8опз, РиЬПзИегз.
    Этап 1. Получение 5-амино-2-фтор-4-метилбензонитрила - соединения (2).
    Исходное соединение 5-бром-4-фтор-2-метиланилин (1) (20 г, 98 ммоль) растворяли в безводном 1метилпирролидоне (100 мл) и добавляли цианид меди (I) (17,6 г, 196 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 180°С в течение 3 ч, охлаждали до комнатной температуры и добавляли воду (300 мл) и концентрированный раствор гидроксида аммония (300 мл). Смесь перемешивали в течение 30 мин и экстрагировали ЭА (3x200 мл). Объединенные экстракты сушили над сульфатом магния и растворитель удаляли при пониженном давлении. Маслянистый осадок промывали гексаном (2x100 мл), и твердое вещество растворяли в дихлорметане и наносили на колонку, заполненную силикагелем. В результате элюирования в градиенте от 0 до 25% ЭА в гексане получали 5-амино-2-фтор-4-метилбензонитрил (10,06 г, 67,1 ммоль). ЖХ/МС (μ/ζ:151 М+1).
    Этап 2. Получение 5-(2-циклопропил-2-оксоэтиламино)-2-фтор-4-метилбензонитрила - соединения (3).
    5-Амино-2-фтор-4-метилбензонитрил (12 г, 80 ммоль) растворяли в безводном Ν,Νдиметилформамиде (160 мл) в атмосфере азота и добавляли при перемешивании карбонат калия (13,27 г, 96 ммоль) и йодид калия (14,61 г, 88 ммоль) в виде твердого вещества. Реакционную смесь перемешивали в течение 5 мин при комнатной температуре и затем добавляли бромметилциклопропилкетон (20,24 мл, 180 ммоль). Реакционную смесь нагревали до 60°С в течение 3 ч, и затем растворители удаляли при пониженном давлении. Осадок растворяли в ЭА (400 мл) и промывали 400 мл воды. Органический слой сушили над сульфатом магния, и растворитель удаляли при пониженном давлении. Осадок повторно растворяли в минимальном количестве ЭА и добавляли гексан для достижения отношения гексан:ЭА в растворе 3:1 по объему. Продукт высаживали из раствора и собирали посредством фильтрования с получением 5-(2-циклопропил-2-оксоэтиламино)-2-фтор-4-метилбензонитрила (14,19 г, 61,2 ммоль). ЖХ/МС (т/ζ: 233, М+1).
    Этап 3. Получение 5 -(4-циклопропил-2-меркапто-1Н-имидазол-1-ил)-2-фтор-4-метилбензонитрила - соединения (4).
    5-(2-Циклопропил-2-оксоэтиламино)-2-фтор-4-метилбензонитрил (14,19 г, 61,2 ммоль) растворяли в ледяной уксусной кислоте (300 мл). Добавляли при перемешивании тиоцианат натрия (11,9 г, 122,4 ммоль) в виде твердого вещества. Реакционную смесь нагревали до 110°С в течение 4 ч, затем растворитель удаляли при пониженном давлении. Осадок отбирали в дихлорметане (200 мл) и промывали 200 мл воды. Водный экстракт экстрагировали дополнительной порцией дихлорметана (2x200 мл), органические экстракты объединяли и сушили над сульфатом магния. Растворитель удаляли при пониженном давлении, и полученный маслянистый осадок повторно растворяли в ЭА (50 мл) и добавляли 150 мл гексанов.
    - 8 024746
    Образовывался темный слой, и в колбу помещали магнитную мешалку. Интенсивное перемешивание приводило к осаждение продукта в виде твердого вещества персикового цвета. Продукт собирали посредством фильтрования с получением 5-(4-циклопропил-2-меркапто-1Н-имидазол-1-ил)-2-фтор-4метилбензонитрила (14,26 г, 52,23 ммоль). Аналитическая ЖХ/МС (т/ζ: 274, М+1).
    Этап 4. Получение 5-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-2-фтор-4-метилбензонитрила - соединения (5).
    В трехгорлую круглодонную колбу на 500 мл наливали уксусную кислоту (96 мл), воду (19 мл) и перекись водорода (30%, 7,47 мл, 65,88 ммоль). Смесь нагревали до 45°С при перемешивании в атмосфере азота и следили за внутренней температурой. Затем добавляли небольшими порциями 5-(4циклопропил-2-меркапто-1Н-имидазол-1-ил)-2-фтор-4-метилбензонитрил (6,00 г, 21,96 ммоль) в виде твердого вещества в течение 30 мин при поддержании внутренней температуры ниже 55°С. После завершения добавления тиоимидазола реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин при температуре 45°С и затем охлаждали до комнатной температуры и медленно добавляли 20 мас.% раствор сульфата натрия в воде (6 мл). Смесь перемешивали в течение 30 мин, и растворители удаляли при пониженном давлении. Осадок суспендировали в 250 мл воды и добавляли 4н водный раствор гидроксида аммония для доведения рН до ~10. Смесь экстрагировали дихлорметаном (3x200 мл), органические слои объединяли, сушили над сульфатом магния и удаляли растворитель при пониженном давлении. Осадок растворяли в 20 мл ЭА и добавляли 80 мл гексанов при перемешивании. Растворители сливали, оставляя маслянистый осадок. Указанный процесс повторяли и получали продукт, 5-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1ил)-2-фтор-4-метилбензонитрил, в виде вязкого масла (5,14 г, 21,33 ммоль). Аналитическая ЖХ/МС (т/ζ: 242, М+1).
    Этап 5. Получение гидрохлорида 5-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-2-фтор-4-метилбензойной кислоты (6).
    5-(4-Циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-2-фтор-4-метилбензонитрил (11,21 г, 46,50 ммоль) помещали в круглодонную колбу, снабженную обратным конденсатором, и суспендировали в 38%-ном растворе соляной кислоты (200 мл). Смесь нагревали до 100°С в течение 4,5 ч и затем охлаждали до комнатной температуры. Растворитель удаляли при пониженном давлении с получением твердого вещества розового цвета, к которому добавляли 100 мл ЭА. Твердый продукт собирали посредством фильтрования и промывали 3x100 мл ЭА. К полученному твердому продукту добавляли 100 мл 10%-ного метанола в дихлорметане, смесь перемешивали и собирали фильтрат. Указанную процедуру повторяли с использованием 2 дополнительных порций по 200 мл 10%-ного раствора метанола в дихлорметане. Фильтраты объединяли, и растворитель удаляли при пониженном давлении с получением неочищенного гидрохлорида 5-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-2-фтор-4-метилбензойной кислоты. Дополнительную очистку не проводили (11,13 г, 37,54 ммоль). Аналитическая ЖХ/МС (т/ζ: 261, М+1).
    Этап 6. Получение 5-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-2-фтор-Ы-(6-(4-изопропил-4Н-1,2,4триазол-3-ил)пиридин-2-ил)-4-метилбензамида - формулы (I).
    Гидрохлорид 5-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-2-фтор-4-метилбензойной кислоты (1,5 г, 5,07 ммоль) суспендировали в безводном 1,2-дихлорметане (25 мл) при комнатной температуре. Добавляли оксалилхлорид (0,575 мл, 6,59 ммоль) при перемешивании в атмосфере азота с последующим добавлением Ν,Ν-диметилформамида (0,044 мл, 0,507 ммоль). Смесь перемешивали в течение 4 ч при комнатной температуре и затем растворитель удаляли при пониженном давлении. Осадок растворяли в 25 мл безводного дихлорметана. Быстро добавляли 6-(4-изопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-2-амин (1,13 г, 5,58 ммоль) (соединение С) и 4-диметиламинопиридин (0,62 г, 5,07 ммоль) при перемешивании в атмосфере азота. Реакционную смесь перемешивали в течение 2 ч при комнатной температуре и добавляли водный насыщенный раствор ΝαΗί'Ό3, (15 мл). Смесь перемешивали в течение 10 мин, и слои разделяли и водный слой промывали 1x20 мл дихлорметана. Объединенные органические слои сушили (М§§04), фильтровали и концентрировали. Осадок растворяли в минимальном количестве ΟΗ3ΟΝ и медленно добавляли воду до тех пор, пока твердое вещество не осаждалось из смеси. Указанное твердое вещество собирали посредством фильтрования и сушили с получением 5-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-2фтор-Л-(6-(4-изопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин-2-ил)-4-метилбензамида с чистотой -96% (1,28 г, 2,88 ммоль). Аналитическая ЖХ/МС (т/ζ: 446, М+1). Материал дополнительно очищали с помощью ОФВЭЖХ (обращенно-фазовой ВЭЖХ) с получением образца в виде соли НС1, чистого для анализа.
    024Η24ΡΝ70-Η01. 446,2 (М+1). ’Н-ЯМР (ДМСО): δ 11,12 (5, 1Н), 9,41 (5, 1Н), 9,32 (5, 1Н), 8,20 (б, 1=8,4 Гц, 1Н), 8,07 (1, 1=8,4 Гц, 1Н), 7,95 (б, 1=6,4 Гц, 1Н), 7,92 (б, 1=7,6 Гц, 1Н), 7,79 (5, 1Н), 7,59 (б, 1=10,4 Гц, 1Н), 5,72 (5ер1, 1=6,8 Гц, 1Н), 2,29 (5, 3Н), 2,00-2,05 (т, 1Н), 1,44 (б, 1=6,8 Гц, 6Н), 1,01-1,06 (т, 2Н), 0,85-0,89 (т, 2Н).
    Биологические анализы.
    Анализ киназной активности А8К1 (регулирующей апоптотические сигналы киназы 1) с помощью
    - 9 024746
    ТК-РКЕТ (биохимическая 1С50).
    Способность соединений ингибировать киназную активность А§К1 определяли с использованием метода резонансного переноса энергии флуоресценции с временным разрешением [ТК-РКЕТ], в котором в качестве белкового субстрата используется биотинилированный основный миелиновый белок [биотинМВР]. Устройство регулирования подачи жидкости Весктап Вютек РХ использовали для нанесения в малообъемные 384-луночные полипропиленовые планшеты [Ыипс, #267460] соединения в концентрации 2 мкл/лунку в 2,44%-ном водном растворе ДМСО с получением конечной концентрации соединения, составляющей между 100 мкМ и 0,5 нМ, для анализа киназной активности. Прибор ЕсщаЮг (Эеетас Р1иЮюк) использовали для нанесения 0,667 нг/мкл в объеме 3 мкл/лунку |ирк1а1е ВюЮсйпо1од1ек, #14-606, или эквивалентный белок собственного производства] и 0,1665 нг/мл биотин-МВР [ЦрйаЮ Вю1есНпо1од1ек, #13-111] в буфере (85 мМ МОР§, рН 7,0, 8,5 мМ Мд-ацетат, 5% глицерин, 0,085% ΝΡ-40, 1,7 мМ ДТТ и 1,7 мг/мл БСА) в планшеты, содержащие нанесенные соединения.
    Фермент предварительно инкубировали с соединением в течение 20 мин до инициации киназной реакции путем добавления 5 мкл/лунку 300 мкМ АТФ в буфере (50 мМ МОР§, рН 7,0, 5 мМ Мд-ацетат, 1 мМ ДТТ, 5% ДМСО) с помощью прибора ЕсщаЮг (Эеегас Р1шФск). Киназным реакциям позволяли протекать в течение 20 мин при комнатной температуре и затем останавливали путем добавления 5 мкл/лунку 25 мМ ЭДТА с использованием прибора ЕсщаЮг (Эеетас Р1шФск). Затем использовали устройство Вютек РХ для переноса каждой завершенной киназной реакции в объеме 1 мкл/лунку в лунки белого полистиролового планшета ОрйР1аЮ-1536 [Ретк1пЕ1тет, #6004299], который содержал реагенты для выявления, по 5 мкл/лунку (1,11 нМ меченного Ен-А1024 антитела против фосфотреонина [Регк1пЕ1тет, #АЭ0094] и 55,56 нМ аллофикоцианина стрептавидина [Ретк1пЕ1тет, #СК130-100] в 1хбуфере для выявления ΕΑΝΟΕ [Ретк1пЕ1тет, #СК97-100]). Сигнал ТК-РКЕТ затем считывали на планшетном ридере Регкт Е1тег Епсакюп после инкубации планшетов при комнатной температуре в течение 2 ч.
    Лунки, содержащие положительный контроль, соответствующий 100% ингибированию, были получены путем изменения порядка добавления растворов ЭДТА и АТФ, описанных выше. Указанные лунки и лунки, соответствующие 0% ингибированию, содержащие капли 2,44% ДМСО в начале анализа использовали для расчета % ингибирования для исследуемых соединений.
    Результат.
    1С50 соединения формулы (I) для ингибирования А§К1 составляла 3,0 нМ. Указанные данные дают основания полагать, что соединение формулы (I) является активным ингибитором А§К1 в присутствии конкурентного лиганда АТФ.
    В усовершенствованном варианте указанного выше анализа ингибирующую активность соединения согласно изобретению в отношении А§К1 оценивали с использованием анализа А§К1 с помощью метода ТК-РКЕТ, определяющего количество фосфата, перенесенного на пептидный субстрат от АТФ.
    Материалы и способы.
    Реагенты.
    Дефосфорилированную рекомбинантную человеческую киназу А§К1 получали из компании СПеай Зшепсек. Низкомолекулярный ингибитор киназы стауроспорин (каталожный # §6942) и дитиотреитол (ДТТ, каталожный # 43815-50) были получены из компании §1дта Сйетюа1к (Сент-Луис, Миссури). АТФ (каталожный # 7724) был получен из компании АГГуте1п\ (Санта-Клара, Калифорния), и соединение формулы (I) было получено было из компании Ойеай Заепсек. Набор для анализа методом гомогенной разрешенной во времени флуоресценции К1пЕА§Е™-§ТК §3 получали из компании СакЬю (Бедфорд, Массочусетс). Все другие реагенты представляли собой коммерчески доступные реагенты высшего качества.
    Анализы.
    Анализ позволяет измерять уровень фосфорилирования биотинилированого пептидного субстрата киназой А§К1 путем выявления с помощью анализа методом гомогенной разрешенной во времени флуоресценции, НТКР (6,1). Указанный анализ представляет собой конкурентный иммунологический анализ резонансного переноса энергии флуоресценции с временным разрешением (ТК-РКЕТ), основанный на руководстве для анализа НТКР® КшЕА§Е™-§ТК от СакЬю (6,1). Исследуемое соединение, 1 мкМ пептидного субстрата §ТК3, 4 нМ киназы А§К1 инкубировали с 10 мМ МОР буфером, рН 7,0, содержащим 10 мМ Мд-ацетат, 0,025% №-40, 1 мМ ДТТ, 0,05% БСА и 1,5% глицерина, в течение 30 мин, затем добавляли 100 мкМ АТФ для начала киназной реакции и инкубировали в течение 3 ч. Добавляли пептидное антитело, меченное IX Еи3+ криптатным буфером, содержащим 10 мМ ЭДТА и 125 нМ стрептавидин ХЬ665, для остановки реакции, и фосфорилированный пептидный субстрат выявляли с использованием ридера для нескольких меток Епущюп 2103 от компании РеткшЕ1тег. Флуоресценцию измеряли при 615 нм (криптат) и 665 нм (ХЬ665) и отношение 665 нм/615 нм рассчитывали для каждой лунки. Полученный в результате уровень ТК-РКЕТ (отношение 665 нм/615 нм) пропорционален степени фосфорилирования. В указанных условиях анализа степень фосфорилирования пептидного субстрата линейно изменялась в зависимости от времени и концентрации фермента. С помощью аналитической системы были получены согласующиеся результаты в отношении Кт и специфичной активности для фермента. В случае экспери- 10 024746 ментов по ингибированию (значение 1С50) значения активности были представлены для постоянных концентраций АТФ, пептида и нескольких фиксированных концентраций ингибитора. Стауроспорин, неселективный киназный ингибитор, использовали в качестве положительного контроля. Все данные по ферментативной активности показаны как среднее четырех повторов измерений.
    Анализ данных.
    Значения 1С50 рассчитывали с помощью следующего уравнения:
    у=предел/{1+(х/1С50)8}+исходное значение, где х и у представляют собой концентрацию ингибитора и ферментативную активность соответственно. Ферментативную активность выражали как количество фосфата, включенного в пептидный субстрат из АТФ. Предел представляет собой максимальное значение у (отсутствие ингибитора, контроль ДМСО) и 8 представляет собой фактор наклона кривой (6,2).
    Результаты.
    1С50 соединения формулы (I) составляла 3,2 нМ при указанных условиях проведения анализа.
    Данные показали, что соединение формулы (I) является активным ингибитором рецептора А8К-1 1.
    Клеточный анализ А8К1 (регулирующей апоптотические сигналы киназы 1) на клетках линии 293 (клеточная ЕС50).
    Клеточную активность соединений оценивали на клетках, стабильно экспрессирующих АР1:репортерную конструкцию люциферазы (клетки 293/АР1-Бис, Рапотю8 1пс., 6519 ЭитЬаПоп Сис1е, Фримонт, Калифорния). Клетки инфицировали аденовирусом, экспрессирующим активную киназу А8К1 (631-1381 кДНК А8К1 крысы), которая активирует транскрипционный фактор АР-1 и повышает экспрессию люциферазы. Ингибиторы А8К1 снижают ферментативную активность А8К1 и, таким образом, снижают активность транскрипционного фактора АР-1 и экспрессию люциферазы.
    1. Материалы, необходимые для осуществления указанного протокола
    Среды и реагенты Поставляющая компания Каталожный номер Стабильная клеточная линия 293, экспрессирующая репортерный АР1 Рапописз Неизвестен ϋΜΕΜ (с высоким содержанием глюкозы, без Ь-глутамина, с пируватом, с НЕРЕЗ) МесПаТесЬ 15-018-СМ ϋΜΕΜ (с высоким содержанием глюкозы, без Ь-глутамина, без пирувата, без НЕРЕЗ, без фенолового красного) ΙηνίΐΓθ§βη 31053-028 НЕРЕЗ, 1 М ΙηνίΐΓθ§βη 15630-080 Пируват натрия, 100 мМ 1п\Цго§еп 11360-070 Эмбриональная бычья сыворотка, «ЭБС» Нус1опе ЗНЗОО88,ОЗ Пенициллин-стрептомицин-глутамин, «ПСГ» ΙηνίΐΓθ§βη 10378-016 Гигромицин В Са1ЬюсЬет 400052 ФСБ (фосфатно-солевой буфер) Дальбекко (стерильный) МесПаТесЬ 21-030-СМ Трипсин-ЭДТА (0,25%) 1п\Цго§еп 25200-056 Система анализа люциферазы 81еайу-С1о Рготеда Е2550 Лабораторная посуда Источник Каталожный № Флаконы (покрытые поли-О-лизином, 150 см2 3, с вентилируемой крышкой) Βϋ Вюзаепсез 356538 Планшеты (покрытые поли-Э-лизином, 384-луночные, белые/прозрачные, стерильные, ТСТ) Огешег (через \А\'К Заепййс) 781944 (82051-354) Белая фоновая лента Регк1пЕ1тег 6005199 Клеточные фильтры (40 мкм, нейлоновые, с синим кольцом, подходят для конических пробирок на 50 мл) У\¥К Заепййс 21008-949
  2. 2. Исходные материалы.
    Листок-вкладыш для стабильной клеточной линии 293/АР1-Бис, Рапотю8. Листок-вкладыш для системы анализа люциферазы 81еайу-С1о. Рготеда.
  3. 3. Необходимые среды.
    Полная питательная среда ППС
    ΌΜΕΜ (МеШаТесЬ)
    10% ЭБС 1% ПСГ
    100 мкг/мл гиграмицина В Аналитическая среда АС
    ΌΜΕΜ (1пуйгодеп)
    25 мМ НЕРЕ8
    1 мМ пируват натрия
    - 11 024746
    1% ПСГ
  4. 4. Способы.
    Поддержание.
    293/АР1-Ьис. Клетки линии 293/АР1 поддерживали в соответствии с инструкциями производителя; при ~80% монослоя клетки собирали во флаконы Т150, как следует далее: Отбирали среду, осторожно промывали ~12 мл стерильного Ό-ФСБ, жидкость отбирали. Добавляли 5 мл раствора трипсин-ЭДТА, осторожно наклоняли флакон, чтобы покрыть его поверхность, и инкубировали в течение ~5 мин при 37°С. Флакон не закрывали крышкой; добавляли 5 мл ППС, промывали флакон 4х суспензией клеток, переносили в коническую пробирку на 50 мл, центрифугировали в течение 5 мин при 1200 об/мин.
    Отбирали среду от клеточного осадка, добавляли 20-30 мл ППС, ресуспендировали осадок 6 раз путем пипетирования, пропускали через клеточный фильтр, чтобы разбить кластеры (при необходимости), и считали клетки с помощью гемоцитометра.
    1 день анализа.
    Собирали клетки, как описано выше, за исключением ресуспендирования клеточного осадка.
    Клетки считали и разводили до концентрации 1,5х105 клеток на мл; добавляли аденовирус для достижения отношения 5 инфекционных единиц на клетку. Отбирали (20-30 мл) и помещали клетки на покрытые поли-Э-лизином 384-луночные планшеты Огешег в концентрации 1,2х104 клеток на лунку с помощью прибора иИ11, ВюТек (80 мкл на лунку). Незамедлительно в планшеты вводили серии доз соединения по 0,4 мкл (в 100% ДМСО) и инкубировали 24 ч в инкубаторе с увлажнением (37°С, 5% СО2).
    2 день анализа.
    Планшеты обрабатывали (в соответствии с инструкциями производителя) как следует далее.
    Планшеты помещали в ламинарный бокс и оставляли без крышки на 30 мин при комнатной температуре для охлаждения. Удаляли 60 мкл АС из анализируемых лунок. Добавляли по 20 мкл на лунку субстрата 5>1еайу-О1о. НгеПу. оставляли на 10-20 мин при комнатной температуре. Дно аналитического планшета покрывали белой фоновой лентой. Данные получали с помощью флуоресцентного планшетного ридера. Лунки с положительным контролем, соответствующим 100% ингибированию, получали путем инфицирования клеток аденовирусом, экспрессирующим мутант А8К1 с инактивированной каталитической активностью, содержащий замену лизина на аргинин в положении остатка 709.
    Результат.
    ЕС50 соединения формулы (I) составляла 2,0 нМ.
    Определение Кй.
    Анализы киназной активности.
    Штаммы фага Т7 с киназной меткой получали в хозяине Е. сой, полученном из штамма ВЬ21. Е. сой растили до фазы логарифмического роста и инфицировали фагом Т7 и инкубировали при перемешивании при температуре 32°С до лизирования. Лизаты центрифугировали и фильтровали для удаления клеточных остатков. Остальные киназы продуцировали в клетках линии НЕК-293 и затем метили ДНК для выявления с помощью количественной ПЦР. Покрытые стрептавидином магнитные шарики обрабатывали биотинилированными низкомолекулярными лигандами в течение 30 мин при комнатной температуре для получения смол аффиности для анализа киназной активности.
    Покрытые лигандом гранулы блокировали с помощью избытка биотина и промывали блокирующим буфером (§еаВ1оск, Р1егсе), 1% БСА (бычий сывороточный альбумин), 0,05% Твин 20, 1 мМ ДТТ (дитиотреитол) для удаления несвязанного лиганда и снижения неспецифического связывания. Реакции связывания проводили путем объединения киназ, связанных с лигандом гранул для анализа аффинности и исследуемых соединений в 1х связывающем буфере (20% §еаВ1оск, 0,17хФСБ, 0,05% Твин 20, 6 мМ ДТТ). Все реакции проводили в полистироловых 96-луночных планшетах в конечном объеме 0,135 мл. Аналитические планшеты инкубировали при комнатной температуре при перемешивании в течение 1 ч и гранулы для анализа аффинности промывали промывочным буфером (1хФСБ, 0,05% Твин 20). Затем гранулы ресуспендировали в элюирующем буфере (1х ФСБ, 0,05% Твин 20, 0,5 мкМ небиотинилированный лиганд для анализа аффинности) и инкубировали при комнатной температуре при перемешивании в течение 30 мин. Концентрацию киназы в элюатах измеряли с помощью количественной ПЦР.
    Константы связывания (Кй) рассчитывали с помощью стандартной кривой зависимости эффекта от дозы с использованием уравнения Хилла.
    Результат.
    Кй для соединения формулы (I) составляла 0,24 нМ. Указанные данные дают основания полагать, что соединение формулы (I) активно связывается с рецептором А8К1 в отсутствии АТФ.
    Определение процентного количества соединения, связанного с плазмой крови.
    Схема эксперимента.
    В указанных экспериментах использовали 1 мл тефлоновых диализных ячеек от компании Нагуагй АррагаШх (Холлистон, Массачусетс, США). До начала проведения исследования диализную мембрану смачивали в течение примерно одного часа в 0,133М фосфатном буфере, рН 7,4. Соединение в малой концентрации 2 мкМ вводили в 1 мл плазмы или 1 мл клеточной питательной среды. Общий объем жид- 12 024746 кости с каждой стороны ячейки составлял 1 мл. Через 3 ч инкубации в равновесном состоянии на водяной бане при 37°С аликвоты образцов из каждой стороны ячейки помещали в подходящие пробирки, содержащие либо 1 мл человеческой плазмы (клеточная питательная среда), либо буфер. Пробирки с образцом взвешивали и данные фиксировали. Отбирали аликвоты по 100 мкл и добавляли к 400 мкл останавливающего реакцию раствора (50% метанол, 25% ацетонитрил, 25% вода и внутренний стандарт). Образцы перемешивали на вортексе и центрифугировали в течение 15 мин при 12000 О. 200 мкл супернатанта отбирали и помещали в новый 96-луночный планшет. Добавляли дополнительные 200 мкл смеси АСЫ:вода, 1:1. Затем содержимое планшета перемешивали на вортексе и подвергали ЖХ-МС анализу.
    Процент несвязанного анализируемого соединения в плазме рассчитывали с использованием следующего уравнения:
    % несвязанного соединения=100(Сг /С0, где Сг и С представляют собой концентрации в буфере и плазме после диализа соответственно.
    Результаты.
    Процент несвязанного соединения формулы (I), измеренного в плазме крови человека, составлял 11,94 %.
    Определение отношения оттока для клеток САСО-2.
    Экспериментальная часть.
    Клетки линии Сасо-2 поддерживали в модифицированной Дальбеко среде Игла (ЭМЕМ) с пируватом натрия, О1и1ашах с добавлением 1%-ного раствора пенициллин/стрептомицин, 1% ΝΕΑΑ и 10%-ной эмбриональной бычьей сыворотки в инкубаторе, для которого были установлены температура 37°С, влажность 90% и содержание СО2 5%. Клетки Сасо-2 на 62-72 пассаже высевали в концентрации 2100 клеток/лунку и растили до монослоя в течение по меньшей мере 21 дня на 24-луночных РЕТ (полиэтилен-терефталатных) планшетах (ВЭ Вюзиепсез). Акцепторная лунка содержала НВЗЗ-буфер (10 мМ НЕРЕЗ, 15 мМ глюкоза с рН, доведенным до рН 6,5) с добавлением 1% БСА, рН, доведенный до рН 7,4. После предварительного уравновешивания буфером переноса считывали значения ТЕЕР для исследования целостности исследуемой мембраны. Добавляли буферы, содержащие исследуемые соединения, и отбирали 100 мкл раствора через 1 и 2 ч из акцепторных камер. Удаленный буфер замещали на свежий буфер, и все расчеты корректировали с учетом удаленного материала. Эксперимент проводили в двух повторностях. Все образцы сразу собирали в 400 мкл 100% ацетонитриловой кислоты для осаждения белка и стабилизации исследуемых соединений. Дозу вводили к клеткам с апикальной или базолатеральной стороны для определения прямой (от А к В) и обратной (от В к А) проницаемости. Проницаемость через бесклеточный трансвелл также определяли как меру клеточной проницаемости через мембрану и неспецифического связывания. Для исследования неспецифического связывания и нестабильности соединения определяли процентное восстановление. Образцы анализировали с помощью ЖХ/МС/МС.
    Очевидную проницаемость, Рарр, и % восстановление рассчитывали, как следует далее: Ραρρ=(άΡ/άΐ)χν^(Αχϋ0) % восстановление=100х((^хР120)+(^хП120))/(^хП0) где άΡ/άΐ представляет собой снижение суммарной концентрации в акцепторной камере в зависимости от времени, мкМ/с, определенное на основе концентраций акцептора, измеренных через 60 и 120 мин.
    V и νά представляют собой объем в акцепторной и донорной камере в см3 соответственно.
    А представляет собой площадь клеточного монослоя (0,33 см2).
    Ό0 и Ώ120 представляют собой измеренную концентрацию в донорной камере в начале и конце эксперимента соответственно.
    Р120 представляет собой концентрацию в акцепторной камере в конце эксперимента (120 мин).
    Классификация абсорбции и оттока
    Рарр (А к В) > 1,0 х 106 см/с Высокая 1,0 х 10^ см/с > Рарр (А к В) > 0,5 х 10·6 см/с Средняя Рарр (от А к В) < 0,5 х 10·6 см/с Низкая Рарр (от В К А)/ Рарр (от А К В) > 3 Значительный отток % восстановление < 20% Может влиять на измеренную проницаемость Рарр в отсутствии клеток <15 Может влиять на измеренную проницаемость
    Результат.
    Наблюдали, что значение А^В соединения формулы (I) для клеток САСО составляло 27; и значение В^А для клеток САСО составляло 35, что приводило к значению отношения оттока (В^А)/(А^В) 1,3.
    Определение метаболической стабильности в микросомальной фракции печени.
    Экспериментальная часть.
    - 13 024746
    Метаболическую стабильность оценивали с использованием кофакторов для окислительного метаболизма (ΝΑΌΡΗ) и конъюгации (ЦЦР-глюкуроновая кислота ШОРСА)). По две аликвоты соединения формулы (I) (3 мкл 0,5 мМ исходного раствора ДМСО) или метаболически стабильных стандартов (буспирон) добавляли к исходному раствору микросом, разведенному калий-фосфатным буфером, рН 7,4, для получения концентрации белка 1,0 мг/ мл, и содержащим аламетицин в качестве пермеабилизирующего агента. Метаболические реакции инициировали путем добавления воспроизводящей системы ΝΑΏΡΗ и кофактора ЦОРСА. Конечный состав каждой реакции был следующим: 3 мкМ исследуемого соединения, 1 мг микросомального белка/мл, 5 мМ ЦОРСА, 23,4 мкг/мл аламетицина, 1,25 мМ NΑ^Ρ, 3,3 мМ глюкозо-6-фосфата, 0,4 ед/ мл глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы а и 3,3 мМ МдС12 в 50 мМ калийфосфатном буфере, рН 7,4. Через 0, 2, 5, 10, 15, 30, 45 и 60 мин аликвоты реакционной смеси по 25 мкл переносили в планшеты, содержащие 250 мкл ГО/Ц (останавливающего раствора, содержащего внутренний стандарт). После остановки реакций планшеты центрифугировали при 3000хд в течение 30 мин и аликвоты по 10 мкл супернатанта анализировали с использованием ЖХ/МС для получения отношений площади пика анализируемого соединения/внутреннего стандарта.
    Метаболическую стабильность в микросомальных фракциях печени определяли путем измерения скорости исчезновения соединения формулы (I). Данные (% сохранения исходного соединения) наносили на полулогарифмическую шкалу и приводили с помощью экспоненциального приближения
    С=Ш е-К1 и Тш=1п2/К, где С - % оставшегося исходного вещества на момент времени=1;
    С0 - % оставшегося исходного вещества на момент времени=0;
    1 - время (часов);
    К - константа скорости выведения первого порядка (ч-1);
    Т1/2 - время полувыведения ίη νίίτο (ч).
    Прогнозируемый печеночный клиренс рассчитывали, как следует далее (ссылка 1):
    К V Ур/ г'. К V Υ н/
    СЬйй = /р или СЬы = /н
    СЬь=(СЬт1 ОМСЬпт+О), где С’Ц - прогнозируемый печеночный клиренс (л/ч/кг массы тела);
    СЬт1 - внутренний печеночный клиренс (л/ч/кг массы тела);
    V - инкубационный объем (л);
    ΥΡ - выход микросомального белка (мг белка/кг массы тела);
    ΥΗ - выход гепатоцитов (миллионов клеток/кг массы тела);
    Р - масса белка в инкубационном объеме (мг);
    Н - количество гепатоцитов в инкубационном объеме (млн);
    Он - печеночный кровоток (л/ч/кг массы тела).
    Затем рассчитывали прогнозируемое печеночное выведение путем сравнения прогнозируемого печеночного клиренса с печеночным кровотоком. Соединение считали стабильным, если снижение концентрации субстрата было <10% в процессе инкубации (соответствует экстраполированному периоду полувыведения >395 мин в микросомальных фракциях и >39,5 ч в гепатоцитах).
    Значения, используемые для расчета прогнозируемого печеночного клиренса, показаны в таблицах ниже.
    Таблица 1
    Значения, полученные из анализа микросомальной стабильности, используемые для расчета прогнозируемого печеночного клиренса
    Вид Микросомы печени <3ь (л/кг) V (л) Р (мг) Υ (мг/кг) Крыса 0,001 1.0 1520 4,2 Яванский макак 0,001 1.0 684 1,6 Макак-резус 0,001 1,0 1170 2,3 Собака 0,001 1.0 1216 1,8 Человек 0,001 1,0 977 1,3
    Результат.
    Прогнозируемый печеночный клиренс у человека, определенный на основании экспериментов на микросомальных фракциях ίη νίίτο, составлял 0,1 л/ч/кг.
    Определение СЬ и V88 у крыс для исследуемого соединения.
    Фармакокинетика исследуемых соединений после ВВ инфузии дозы 1 мг/кг и пероральной дозы 5,0 мг/кг у крыс.
    Исследуемое изделие и лекарственная форма.
    Для ВВ введения исследуемое соединение готовили в смеси 60:40 РЕС 400:вода с 1 эквивалентом НС1 в концентрации 0,5 мг/ мл. Лекарственная форма представляла собой раствор.
    Для ПО (перорального) введения исследуемое соединение готовили в смеси 5/75/10/10 этанол/ПГ/солютол/вода в концентрации 2,5 мг/ мл. Лекарственная форма представляла собой раствор.
    - 14 024746
    Используемые животные.
    Каждая из групп внутривенного (ВВ) и перорального (ПО) введения дозы состояла из 3 самцов крыс линии 8Ό. На момент введения дозы масса животных, в целом, составляла между 0,317 и 0,355 кг. Животных не кормили в течение ночи до введения дозы и в течение до 4 ч после введения дозы.
    Дозирование.
    Для группы ВВ инфузии исследуемое соединение вводили путем инфузии в течение 30 мин. Скорость инфузии регулировали в соответствии с массой тела каждого животного для доставки дозы 1 мг/кг в объеме 2 мл/кг. Для группы перорального введения дозы исследуемое изделие вводили путем принудительного кормления в объеме 2 мл/кг для дозы 5,0 мг/кг.
    Сбор образца.
    Серии образцов венозной крови (примерно по 0,4 мл каждый) отбирали у каждого животного в определенные точки времени после введения дозы. Образцы крови собирали в ампулы Уаси1а1пег1М (Вес1оп-О1зсктзоп Согр, Нью-Джерси, США), содержащие ЭДТА в качестве антикоагулянта, и быстро подвергали центрифугированию на льду для получения плазмы.
    Определение концентрации соединения формулы (I) в плазме крови.
    Для измерения концентрации исследуемого соединения в плазме крови использовали метод ЖХ/МС/МС.
    Расчеты.
    Некомпартментный фармакокинетический анализ проводили на данных концентрация в плазме время.
    Результаты.
    Для соединение формулы (I) СЬ составляла 0,09 л/ч/кг; пероральная биодоступность составляла 75 %; 11/2 составлял 5,07 ч и Узз составлял 0,55 л/кг у крыс.
    Анализ ингибирования Сур.
    Цель: оценить потенциальную способность исследуемого соединения ингибировать основные изоформы цитохрома Р450, СУР1Л, СУР1Л2, СУР2В6, СУР2С8, СУР2С9, СУР2С19, СУР2У6 и СУР3Л4 (2 субстрата).
    Определение КУ, для ингибирования цитохрома Р450 (8 изоформ, 9 субстратов).
    Краткое описание протокола.
    Исследуемое соединение (0,1-25 мкМ) инкубировали с микросомами печени человека и NΑ^РΗ в присутствии маркерного субстрата, специфичного для изоформы цитохрома Р450. В случае реакций, специфичных для СУР2В6, СУР2С8, СУР2С9, СУР2С19, СУР2О6 и СУР3Л4, за метаболитами следили с помощью масс-спектрометрии.
    За активностью СУР1Л следили путем измерения образующегося флуоресцентного метаболита. Снижение образования метаболита по сравнению с носителем в качестве контроля использовали для расчета значения КУ, (концентрация исследуемого соединения, которая обеспечивает 50% ингибирование).
    Требования к проведению анализа.
    500 мкл 10 мМ раствора исследуемого соединения в ДМСО.
    Ход эксперимента.
    Ингибирование СУР1Л.
    Шесть концентраций исследуемого соединения (0,1, 0,25, 1, 2,5, 10, 25 мкМ в ДМСО; конечная концентрация ДМСО=0,3%) инкубировали с микросомами печени человека (0,25 мг/ мл) и NΑ^РΗ (1 мМ) в присутствии маркерного субстрата этоксирезоруфина (0,5 мкМ) в течение 5 мин при 37°С. Селективный ингибитор СУР1Л, альфа-нафтофлавон, использовали в скрининговом анализе вместе с исследуемыми соединениями в качестве положительного контроля.
    Ингибирование СУР2В6.
    Шесть концентраций исследуемого соединения (0,1, 0,25, 1, 2,5, 10, 25 мкМ в ДМСО; конечная концентрация ДМСО=0,3%) инкубировали с микросомами печени человека (0,1 мг/ мл) и NΑ^РΗ (1 мМ) в присутствии маркерного субстрата бупропиона (ПО мкМ) в течение 5 мин при 37°С. Селективный ингибитор СУР2В6, тиклопидин, использовали в скрининговом анализе вместе с исследуемыми соединениями в качестве положительного контроля.
    Ингибирование СУР2С8.
    Исследуемое соединение в шести концентрациях (0,1, 0,25, 1, 2,5, 10, 25 мкМ в ДМСО; конечная концентрация ДМСО=0,3%) инкубировали с микросомами печени человека (0,25 мг/ мл) и NΑ^РΗ (1 мМ) в присутствии маркерного субстрата паклитаксела (7,5 мкМ) в течение 30 мин при 37°С. Селективный ингибитор СУР2С8, монтелукаст, использовали в скрининговом анализе вместе с исследуемыми соединениями в качестве положительного контроля.
    Ингибирование СУР2С9.
    Исследуемое соединение в шести концентрациях (0,1, 0,25, 1, 2,5, 10, 25 мкМ в ДМСО; конечная концентрация ДМСО=0,25%) инкубировали с микросомами печени человека (1 мг/ мл) и NΑ^РΗ (1 мМ)
    - 15 024746 в присутствии маркерного субстрата толбутамида (120 мкМ) в течение 60 мин при 37°С. Селективный ингибитор СУР2С9, сульфафеназол, использовали в скрининговом анализе вместе с исследуемыми соединениями в качестве положительного контроля.
    Ингибирование СУР2С19.
    Исследуемое соединение в шести концентрациях (0,1, 0,25, 1, 2,5, 10, 25 мкМ в ДМСО; конечная концентрация ДМСО=0,25%) инкубировали с микросомами печени человека (0,5 мг/ мл) и ΝΆΌΡΗ (1 мМ) в присутствии маркерного субстрата мефенитоина (25 мкМ) в течение 60 мин при 37°С. Селективный ингибитор СУР2С19, транилципромин, использовали в скрининговом анализе вместе с исследуемыми соединениями в качестве положительного контроля.
    Ингибирование СУР2Э6.
    Исследуемое соединение в шести концентрациях (0,1, 0,25, 1, 2,5, 10, 25 мкМ в ДМСО; конечная концентрация ДМСО=0,25%) инкубировали с микросомами печени человека (0,5 мг/ мл) и ΝΆΌΡΗ (1 мМ) в присутствии маркерного субстрата декстрометорфаном (5 мкМ) в течение 5 мин при 37°С. Селективный ингибитор СУР2Э6. хинидин, использовали в скрининговом анализе вместе с исследуемыми соединениями в качестве положительного контроля.
    Ингибирование СУР3 А4 (мидазолам).
    Исследуемое соединение в шести концентрациях (0,1, 0,25, 1, 2,5, 10, 25 мкМ в ДМСО; конечная концентрация ДМСО=0,26%) инкубировали с микросомами печени человека (0,1 мг/ мл) и ΝΆΌΡΗ (1 мМ) в присутствии маркерного субстрата мидазолама (2,5 мкМ) в течение 5 мин при 37°С. Селективный ингибитор СУР3Л4, кетоконазол, использовали в скрининговом анализе вместе с исследуемыми соединениями в качестве положительного контроля.
    Ингибирование СУР3 А4 (тестостерон).
    Исследуемое соединение в шести концентрациях (0,1, 0,25, 1, 2,5, 10, 25 мкМ в ДМСО; конечная концентрация ДМСО=0,275%) инкубировали с микросомами печени человека (0,5 мг/ мл) и ΝΆΌΡΗ (1 мМ) в присутствии маркерного субстрата тестостерона (50 мкМ) в течение 5 мин при 37°С. Селективный СУР3Л4 ингибитор, кетоконазол, использовали в скрининговом анализе вместе с исследуемыми соединениями в качестве положительного контроля.
    В случае инкубации с СУР1А реакции останавливали метанолом и за образованием метаболита, резоруфина следили с помощью флуоресценции (длина волны возбуждения=535 нм, длина волны испускания=595 нм). В случае инкубации с СУР2В6, СУР2С9, СУР2С19, СУР2О6 и СУР3Л4 реакции останавливали с помощью метанола. Образцы затем центрифугировали и супернатанты объединяли для одновременного анализа 4-гидрокситолбутамида, 4-гидроксимефенитоина, декстрарфана и 1гидроксимидазолама с помощью ЖХ-МС/МС. Гидроксибупропион, 6а-гидроксипаклитаксел и 6βгидрокситестостерон анализировали раздельно с помощью ЖХ-МС/МС. К конечному образцу до начала проведения анализа добавляли муравьиную кислоту в деионизированной воде (конечная концентрация=0,1%), содержащую внутренний стандарт. Снижение образования метаболитов по сравнению с носителем в качестве контроля использовали для расчета значения Κ50 (концентрации исследуемого соединения, которая обеспечивает 50% ингибирование).
    Результаты.
    Изоформа СУР450 Субстрат Метаболит Рассчитанная 1С50 (мкМ) 1А Этоксирезоруфин Резоруфин > 25 мкМ 1А2 Фенацетин Ацетаминофен > 25 мкМ 2В6 Бупропион Г идроксибупропион 19,2 мкМ 2С8 Паклитаксел 6а-Г идроксипаклитаксел 21,6 мкМ 2С9 Толбутамид 4-Г идрокситолбутамид >25 мкМ 2С19 8-мефенитоин 4-Гидрокси мефенитоин > 25 мкМ 2ϋ6 Декстрометорфан Декстрорфан 17,7 мкМ ЗА4 Мидазолам Г идроксимидазолам 2,7 мкМ ЗА4 Тестостерон 6 β-Гидрокситестостерон 10,5 мкМ
    Общая схема исследования для модели фиброза почек, вызванного односторонней обструкцией мочеточника (ООМ), у крыс.
    Самцов крыс линии 8ргадие-Оате1еу обеспечивали нормальным кормом, содержали в стандартных условиях и позволяли акклиматизироваться в течение по меньшей мере 7 дней до проведения операции. В начале исследования крыс делили на группы на основе массы тела и вводили (2 мл/кг перорально два раза в день) носитель, соединение в одной из четырех дозы (1, 3, 10 или 30 мг/кг) путем принудительного кормления. Крыс подвергали анестезии с помощью изофлурана на носовой конус и проводили лапарото- 16 024746 мию. Крыс подвергали полной обструкции правого мочеточника (ООМ) с помощью стерилизованных нагревом инструментов и асептического хирургического метода. Крысам вводили 50 мкл пенициллина О (внутримышечно) непосредственно после операции. Крысам позволяли восстанавливаться в чистой клетке с подогревом до возвращения в нормальные условия вивария. Крысам вводили соединения в дозе, описанной выше, два раза в день (с 12-часовыми интервалами) в течение следующих друг за другом 7 дней. На 7 день после операции крыс подвергали анестезии с помощью изофлурана и собирали сыворотку, плазму и мочу. Затем животных усыпляли, извлекали почки и брали биопсии коркового вещества почки для морфологического, гистологического и биохимического анализа. Все ткани для биохимического анализа являлись быстрозамороженными в жидком азоте и хранились при -80°С, ткани для гистологического анализа фиксировали в 10%-ном нейтральном забуференном формалине.
    Фиброз почки оценивали путем измерения количества коллагена IV в почке с помощью метода ИФА и путем оценки накопления положительно окрашенных на альфа-гладкомышечный актин миофибробластов в почке с помощью иммуногистохимии. Для проведения первого анализа небольшую часть замороженного коркового вещества почки переносили и гомогенизировали в МРА-буфере, затем центрифугировали при 14000/β в течение 10 мин при 4°С. Супернатант собирали в предварительно охлажденные ампулы и определяли концентрацию белка. Эквивалентное количество общего белка подвергали ИФА-анализу на коллаген IV (Ехосе11) в соответствии с инструкциями производителя. Фиксированную формалином и залитую парафином ткань почки окрашивали на альфа-гладкомышечный актин, как описано ранее (§!атЬе е! а1, Тйе Ко1е о£ р38 Мйодеп-Асбуа1еб Рго!еш Кшаке АсИуаИои ίη Кеиа1 НЬго® I Ат §ос ЫерЬго1 15: 370-379, 2004).
    Результаты.
    Было обнаружено, что соединение формулы (I) в дозах от 3 до 30 мг/кг значительно снижает индукцию коллагена IV в почке (фиг. 1) и накопление положительно окрашенных на альфагладкомышечный актин миофибробластов (фиг. 2).
    Сравнительные данные для соединения формулы (I) и соединений сравнения.
    В следующей таблице представлены сравнительные результаты для соединения формулы (I) и соединений сравнения А и В, описанных в патентной публикации США № 2001/00095410А1, опубликованной 13 января 2011 г. Необходимо отметить, что эксперименты, сравнение результатов которых приведено ниже, проводили в сходных условиях, но необязательно одновременно.
    Таблица
    Соединение формулы (I) Соединение А Соединение В 1С50 (нМ) 3 5 6,5 ЕС50(нМ) 2 3,4 18 (9Х) РВад] ЕС5о (нМ) 17 71 (4Х) 563 (ЗЗХ) САСО (А/В, В/А) 27/35 3,1 /18,5 0,26/4 Отношение оттока (В/А)/(А/В) 1,3 6,0 15,4 ίίι 12 4,8 3,2 1С5о тестостерона (Т8Т) дл/ СурЗА4) (мкМ) 11 1,1 (ЮХ) 4 (2,8Х) 1С50 /РВАф.ЕСэоДЛя СурЗА4 647 15 (43Х) 7 (92Х) ν$5 (л/кг) у крыс 0,55 0,17 (3,2Х) 0,54 СЬ (л/ч/кг) у крыс о,н 0,30 (2,7Х) 0,39 (3,6Х) %Р у крыс 75 11 (6,8Х) 50 (1,5Х) [ */2 у крыс (ч) 5,07 0,59 (8,6Х) 1,3 (3,9Х)
    ( ) значения в круглых скобках показывают, во сколько раз соединение формулы (I) имеет преимущество по сравнению с указанным соединением для указанного параметра.
    Из описанных выше сравнительных данных можно вывести следующее: соединения формулы (I) сопоставима с соединения А. Функциональная соединения формулы (I) сопоставима с соединений А и В.
    Скорректированная с учетом связывания с белком соединения формулы (I) в 4 раза ниже по сравнению с соединением А и в 33 раз ниже по сравнению с соединением В.
    Соединение формулы (I) является более слабым ингибитором сур3А4 по сравнению с соединениями А и В.
    Значение Ш50 СУР3А4/ РВАбЦСщ соединения формулы (I) в 43 раза выше по сравнению с соединением формулы А и в 92 раза выше по сравнению с соединением формулы В.
    Значение СЬ соединения формулы (I) у крыс в 2,7 раз ниже по сравнению с соединением формулы А и в 3,6 раз ниже по сравнению с соединением формулы В.
    Процентная биодоступность соединения формулы (I) у крыс в 6,8 раз выше по сравнению с соединением А и в 1,5 раз выше по сравнению с соединением В.
    Период полувыведения соединения формулы (I) у крыс в 8,6 раз больше по сравнению с соединением А и в 3,9 раз больше по сравнению с соединением В.
    - 17 024746
    Приведенные выше данные дают достаточные основания полагать, что соединение формулы (I) обладает неожиданными и предпочтительными свойства по сравнению с соединениями формулы А и В; и что указанное соединение формулы (I), вероятно, является лучшим кандидатом для дальнейшей разработки средств для лечения хронической почечной недостаточности, фиброза легких и/или почек и/или кардиоренальных заболеваний.
    1. Соединение формулы (I) представляющее собой 5-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-^(6-(4-изопропил-4Н-1,2,4-триазол3-ил)пиридин-2-ил)-2-фтор-4-метилбензамид, или его фармацевтически приемлемая соль.
    2. Соединение формулы (I) представляющее собой 5-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-2-фтор-^(6-(4-изопропил-4Н-1,2,4триазол-3-ил)пиридин-2-ил)-4-метилбензамид.
    3. Фармацевтическая композиция для лечения хронической почечной недостаточности, диабетической нефропатии, фиброза почек, фиброза печени, фиброза легких и диабетической почечной недостаточности, содержащая терапевтически эффективное количество соединения или соли по п.1 и фармацевтически приемлемый носитель.
    4. Фармацевтическая композиция для лечения хронической почечной недостаточности, диабетической нефропатии, фиброза почек, фиброза печени, фиброза легких и диабетической почечной недостаточности, содержащая терапевтически эффективное количество соединения по п.2 и фармацевтически приемлемый носитель.
  5. 5. Способ лечения хронической почечной недостаточности, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения по п.2 или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом пациенту.
  6. 6. Способ лечения диабетической нефропатии, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения по п.2 или его фармацевтически приемлемой соли нуждающемуся в этом пациенту.
  7. 7. Способ лечения фиброза почек, фиброза печени или фиброза легких, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения или соли по п. 1 нуждающемуся в этом пациенту.
  8. 8. Способ лечения диабетического заболевания почек, включающий введение терапевтически эффективного количества соединения или соли по п. 1 нуждающемуся в этом пациенту.
  9. 9. Применение соединения или соли по п.1 для получения лекарственного средства для лечения хронической почечной недостаточности.
  10. 10. Применение соединения или соли по п.1 для лечения диабетической нефропатии, фиброза почек, фиброза печени, фиброза легких и диабетической почечной недостаточности.
  11. 11. Промежуточное соединение формулы представляющее собой 2-амино-5-(4-изопропил-4Н-1,2,4-триазол-3-ил)пиридин или его соль или защищенную форму.
  12. 12. Промежуточное соединение формулы представляющее собой 5-(4-циклопропил-1Н-имидазол-1-ил)-2-фтор-4-метилбензойную кислоту, его соль или защищенную форму.
    - 18 024746
    Фиг. 1
    Фиг. 2
EA201491283A 2012-01-27 2013-01-24 Ингибитор регулирующей апоптотические сигналы киназы EA024746B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201261591710P 2012-01-27 2012-01-27
PCT/US2013/022997 WO2013112741A1 (en) 2012-01-27 2013-01-24 Apoptosis signal-regulating kinase inhibitor

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201491283A1 EA201491283A1 (ru) 2014-12-30
EA024746B1 true EA024746B1 (ru) 2016-10-31

Family

ID=47684038

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201491283A EA024746B1 (ru) 2012-01-27 2013-01-24 Ингибитор регулирующей апоптотические сигналы киназы

Country Status (40)

Country Link
US (7) US8742126B2 (ru)
EP (1) EP2807151B1 (ru)
JP (1) JP5770950B2 (ru)
KR (5) KR101582065B1 (ru)
CN (2) CN104080771B (ru)
AP (1) AP2014007836A0 (ru)
AR (2) AR089818A1 (ru)
AU (1) AU2013201586C1 (ru)
BR (1) BR112014018355B1 (ru)
CA (3) CA2862030C (ru)
CL (1) CL2014001988A1 (ru)
CO (1) CO7061073A2 (ru)
CR (1) CR20140405A (ru)
CY (1) CY1117201T1 (ru)
DK (1) DK2807151T3 (ru)
EA (1) EA024746B1 (ru)
ES (1) ES2558203T3 (ru)
HK (1) HK1204324A1 (ru)
HR (1) HRP20151399T1 (ru)
HU (1) HUE028641T2 (ru)
IL (3) IL233598A (ru)
IN (1) IN2014DN06174A (ru)
MA (1) MA35861B1 (ru)
MD (1) MD4601B1 (ru)
ME (1) ME02322B (ru)
MX (3) MX365954B (ru)
NZ (1) NZ739339A (ru)
PE (1) PE20141822A1 (ru)
PH (1) PH12014501697A1 (ru)
PL (1) PL2807151T3 (ru)
PT (1) PT2807151E (ru)
RS (1) RS54492B1 (ru)
SG (1) SG11201404348UA (ru)
SI (1) SI2807151T1 (ru)
SM (1) SMT201600047B (ru)
TW (4) TW201916877A (ru)
UA (1) UA112098C2 (ru)
UY (1) UY34573A (ru)
WO (1) WO2013112741A1 (ru)
ZA (1) ZA201405260B (ru)

Families Citing this family (137)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI598347B (zh) 2009-07-13 2017-09-11 基利科學股份有限公司 調節細胞凋亡信號之激酶的抑制劑
EP2651417B1 (en) 2010-12-16 2016-11-30 Calchan Limited Ask1 inhibiting pyrrolopyrimidine derivatives
UY34573A (es) 2012-01-27 2013-06-28 Gilead Sciences Inc Inhibidor de la quinasa que regula la señal de la apoptosis
CA2931615A1 (en) 2013-11-26 2015-06-04 Gilead Sciences, Inc. Therapies for treating myeloproliferative disorders
CA2937320A1 (en) 2014-01-20 2015-07-23 Gilead Sciences, Inc. Therapies for treating cancers
WO2015187499A1 (en) 2014-06-03 2015-12-10 Gilead Sciences, Inc. Use of an ask1 inhibitor for the treatment of liver disease, optionally in combination with a loxl2 inhibitor
TW201618781A (zh) * 2014-08-13 2016-06-01 吉李德科學股份有限公司 治療肺高血壓之方法
NZ729678A (en) 2014-09-24 2018-07-27 Gilead Sciences Inc Methods of treating non-alcoholic steatohepatitis using ask1 inhibitor in combination with a fxr agonist
CA3202893A1 (en) * 2014-12-23 2016-06-30 Gilead Science, Inc. Processes for preparing ask1 inhibitors
MA41252A (fr) * 2014-12-23 2017-10-31 Gilead Sciences Inc Formes solides d'un inhibiteur d'ask 1
TW201639573A (zh) 2015-02-03 2016-11-16 吉李德科學股份有限公司 有關治療癌症之合併治療
KR101756050B1 (ko) 2015-03-04 2017-07-07 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 톨 유사 수용체 조정제 화합물
IL274568B (en) 2015-07-06 2022-07-01 Gilead Sciences Inc Modulators of cot and methods of using them
WO2017059224A2 (en) 2015-10-01 2017-04-06 Gilead Sciences, Inc. Combination of a btk inhibitor and a checkpoint inhibitor for treating cancers
CN108430993A (zh) 2015-12-17 2018-08-21 吉利德科学公司 Tank-结合激酶抑制剂化合物
JP2019510752A (ja) 2016-03-04 2019-04-18 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド オートタキシン阻害剤の組成物及び合剤
WO2017177179A1 (en) 2016-04-08 2017-10-12 Gilead Sciences, Inc. Compositions and methods for treating cancer, inflammatory diseases and autoimmune diseases
PE20190510A1 (es) 2016-06-13 2019-04-10 I Mab Anticuerpos anti-pd-l1 y usos de los mismos
JP6764017B2 (ja) 2016-08-04 2020-09-30 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド がんの処置での使用のためのコビシスタット
SI3507276T1 (sl) 2016-09-02 2022-01-31 Gilead Sciences, Inc. Spojine modulatorja toličnih receptorjev
US10640499B2 (en) 2016-09-02 2020-05-05 Gilead Sciences, Inc. Toll like receptor modulator compounds
WO2018085069A1 (en) 2016-11-03 2018-05-11 Gilead Sciences, Inc. Combination of a bcl-2 inhibitor and a bromodomain inhibitor for treating cancer
AU2017356160A1 (en) 2016-11-11 2019-05-23 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating liver disease
WO2018097977A1 (en) 2016-11-22 2018-05-31 Gilead Sciences, Inc. Crystalline forms of a phosphate complex of a bet inhibitor
AR110252A1 (es) 2016-11-30 2019-03-13 Gilead Sciences Inc Compuestos heterocíclicos fusionados como inhibidores de la quinasa cam
KR102089234B1 (ko) 2017-01-22 2020-05-15 푸젠 코선터 파마슈티컬 컴퍼니 리미티드 Ask1 억제제로서의 피리딘 유도체 및 이의 제조방법과 용도
US10787435B2 (en) 2017-01-22 2020-09-29 Fuijan Cosunter Pharmaceutical Co. Ltd. ASK1 inhibitor and preparation method and use thereof
AU2018213549B2 (en) 2017-01-24 2022-02-03 I-Mab Biopharma Co., Ltd. Anti-CD73 antibodies and uses thereof
TWI754011B (zh) 2017-02-24 2022-02-01 美商基利科學股份有限公司 布魯頓氏酪胺酸激酶之抑制劑
JP2020508326A (ja) 2017-02-24 2020-03-19 ギリアド サイエンシズ， インコーポレイテッド ブルトン型チロシンキナーゼの阻害剤
WO2018157277A1 (en) * 2017-02-28 2018-09-07 Eli Lilly And Company Isoquinolin and naphthydrin compounds
CN111094250B (zh) * 2017-03-03 2022-11-04 江苏豪森药业集团有限公司 凋亡信号调节激酶抑制剂及其制备方法和应用
JOP20180017A1 (ar) 2017-03-14 2019-01-30 Gilead Sciences Inc مثبط كيناز منظم لإشارة تلاشي خلايا
JP2020512342A (ja) 2017-03-28 2020-04-23 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 肝疾患を処置する方法
JP2020516627A (ja) 2017-04-12 2020-06-11 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 肝疾患を処置する方法
JOP20180040A1 (ar) 2017-04-20 2019-01-30 Gilead Sciences Inc مثبطات pd-1/pd-l1
WO2018209354A1 (en) 2017-05-12 2018-11-15 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
WO2018218044A2 (en) * 2017-05-25 2018-11-29 Enanta Pharmaceuticals Inc Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
US10450301B2 (en) 2017-05-25 2019-10-22 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
US10253018B2 (en) 2017-05-25 2019-04-09 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
WO2018231851A1 (en) 2017-06-13 2018-12-20 Gilead Sciences, Inc. Methods of treating liver fibrosis
TW201908306A (zh) * 2017-07-18 2019-03-01 大陸商南京聖和藥業股份有限公司 作為ask抑制劑的雜環化合物及其應用
WO2019046186A1 (en) 2017-08-28 2019-03-07 Enanta Pharmaceuticals, Inc. INHIBITORS OF KINASE 1 REGULATING THE APOPTOTIC SIGNAL CONTAINING TETRAZOLES AND METHODS OF USE THEREOF
CN109456308B (zh) * 2017-09-06 2022-11-29 南京圣和药业股份有限公司 作为ask抑制剂的杂环化合物及其应用
WO2019047094A1 (en) * 2017-09-07 2019-03-14 Eli Lilly And Company CYCLOBUTYL-IMIDAZOLIDINONE COMPOUNDS
US10370352B2 (en) 2017-09-07 2019-08-06 Eli Lilly And Company Cyclobutyl-imidazolidinone compounds
WO2019047161A1 (en) 2017-09-08 2019-03-14 Eli Lilly And Company IMIDAZOLIDINE COMPOUNDS
EP3678662A4 (en) 2017-09-08 2021-09-01 Fronthera U.S. Pharmaceuticals LLC APOPTOSIS SIGNAL REGULATION KINASE INHIBITORS AND THEIR USES
CN109232538B (zh) * 2017-10-12 2020-07-24 深圳市塔吉瑞生物医药有限公司 一种1,2,4-三氮唑类化合物
CN107793400B (zh) * 2017-10-31 2020-01-31 武汉九州钰民医药科技有限公司 吡啶类化合物及其在制备治疗肝脏疾病的药物中的应用
US20200340060A1 (en) 2017-11-13 2020-10-29 Gilead Sciences, Inc. Compositions and methods for identifying and treating liver diseases and monitoring treatment outcomes
CA3084582A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 2'3' cyclic dinucleotides with phosphonate bond activating the sting adaptor protein
WO2019123340A1 (en) 2017-12-20 2019-06-27 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3'3' cyclic dinucleotides with phosphonate bond activating the sting adaptor protein
CN111801314B (zh) 2018-01-02 2023-10-31 西尔洛克治疗公司 Ask1抑制剂化合物及其用途
TWI796596B (zh) 2018-02-13 2023-03-21 美商基利科學股份有限公司 Pd‐1/pd‐l1抑制劑
CN110294742B (zh) * 2018-03-21 2023-01-31 山东轩竹医药科技有限公司 并环类ask1抑制剂及其应用
TWI818007B (zh) 2018-04-06 2023-10-11 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 2'3'-環二核苷酸
JP7296398B2 (ja) 2018-04-06 2023-06-22 インスティチュート オブ オーガニック ケミストリー アンド バイオケミストリー エーエスシーアール，ヴイ．ヴイ．アイ． ３’３’－環状ジヌクレオチド
TW202005654A (zh) 2018-04-06 2020-02-01 捷克科學院有機化學與生物化學研究所 ２，２，─環二核苷酸
TW202012414A (zh) 2018-04-12 2020-04-01 美商拓臻股份有限公司 三環ask1抑制劑
CA3093130C (en) 2018-04-19 2023-10-17 Gilead Sciences, Inc. Pd-1/pd-l1 inhibitors
CN110407806B (zh) * 2018-04-28 2021-08-17 深圳微芯生物科技股份有限公司 甲酰胺类化合物、其制备方法及其应用
AU2019262016A1 (en) 2018-05-02 2020-11-19 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Tetrazole containing apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
US10683289B2 (en) 2018-05-02 2020-06-16 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
US20190359645A1 (en) 2018-05-03 2019-11-28 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 2'3'-cyclic dinucleotides comprising carbocyclic nucleotide
WO2019217780A1 (en) 2018-05-11 2019-11-14 Phosphorex, Inc. Microparticles and nanoparticles having negative surface charges
BR112020021648A2 (pt) 2018-05-14 2021-01-26 Gilead Sciences, Inc. inibidores de mcl-1
US10654833B2 (en) 2018-06-28 2020-05-19 Hepatikos Therapeutics, Llc ASK1 isoindolin-1-one inhibitors and methods of use thereof
KR20230159715A (ko) 2018-07-13 2023-11-21 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Pd-1/pd-l1 억제제
US11814382B2 (en) 2018-07-20 2023-11-14 Fujian Akeylink Biotechnology Co., Ltd. Crystal form as ASK1 inhibitor and preparation method and application thereof
WO2020041417A1 (en) 2018-08-22 2020-02-27 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Cycloalkyl-containing apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
US11179397B2 (en) 2018-10-03 2021-11-23 Gilead Sciences, Inc. Imidazopyrimidine derivatives
KR102298546B1 (ko) 2018-10-18 2021-09-08 에이치케이이노엔 주식회사 신규한 n-(이소프로필-트리아졸릴)피리디닐)-헤테로아릴-카르복사미드 유도체 및 이의 용도
KR102635333B1 (ko) 2018-10-24 2024-02-15 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Pd-1/pd-l1 억제제
US11203591B2 (en) 2018-10-31 2021-12-21 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds
WO2020092528A1 (en) 2018-10-31 2020-05-07 Gilead Sciences, Inc. Substituted 6-azabenzimidazole compounds having hpk1 inhibitory activity
CN111170995A (zh) * 2018-11-09 2020-05-19 山东轩竹医药科技有限公司 Ask1抑制剂及其应用
US11345699B2 (en) 2018-11-19 2022-05-31 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors and methods of use thereof
CN109608441A (zh) * 2018-12-26 2019-04-12 都创(上海)医药科技有限公司 一种ask1抑制剂的合成工艺
AU2020209564B2 (en) 2019-01-15 2022-12-01 Gilead Sciences, Inc. FXR (NR1H4) modulating compounds
CN109813915A (zh) * 2019-02-15 2019-05-28 浠思（上海）生物技术有限公司 利用htrf一步法筛选激酶抑制剂的方法
CA3233305A1 (en) 2019-02-19 2020-08-27 Gilead Sciences, Inc. Solid forms of fxr agonists
US20220143061A1 (en) 2019-03-07 2022-05-12 Institute Of Organic Chemistry And Biochemistry Ascr, V.V.I. 3'3'-cyclic dinucleotides and prodrugs thereof
EP3935065A1 (en) 2019-03-07 2022-01-12 Institute of Organic Chemistry and Biochemistry ASCR, V.V.I. 3'3'-cyclic dinucleotide analogue comprising a cyclopentanyl modified nucleotide as sting modulator
EP3934757B1 (en) 2019-03-07 2023-02-22 Institute of Organic Chemistry and Biochemistry ASCR, V.V.I. 2'3'-cyclic dinucleotides and prodrugs thereof
JP2022524398A (ja) 2019-03-11 2022-05-02 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド 化合物の製剤およびそれらの使用
US11466033B2 (en) 2019-03-25 2022-10-11 Enanta Pharmaceuticals, Inc. Substituted pyridines as apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors
TW202210480A (zh) 2019-04-17 2022-03-16 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
TWI751517B (zh) 2019-04-17 2022-01-01 美商基利科學股份有限公司 類鐸受體調節劑之固體形式
EP3972695A1 (en) 2019-05-23 2022-03-30 Gilead Sciences, Inc. Substituted exo-methylene-oxindoles which are hpk1/map4k1 inhibitors
TW202235416A (zh) 2019-06-14 2022-09-16 美商基利科學股份有限公司 Cot 調節劑及其使用方法
US20220305115A1 (en) 2019-06-18 2022-09-29 Janssen Sciences Ireland Unlimited Company Combination of hepatitis b virus (hbv) vaccines and pyridopyrimidine derivatives
CA3142513A1 (en) 2019-06-25 2020-12-30 Gilead Sciences, Inc. Flt3l-fc fusion proteins and methods of use
US20220332700A1 (en) * 2019-06-26 2022-10-20 Mankind Pharma Ltd Novel apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors
AR119594A1 (es) 2019-08-09 2021-12-29 Gilead Sciences Inc Derivados de tienopirimidina como inhibidores acc y usos de los mismos
AU2020365113A1 (en) 2019-10-18 2022-04-07 Forty Seven, Inc. Combination therapies for treating myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukemia
MX2022005123A (es) 2019-10-31 2022-05-30 Forty Seven Inc Tratamiento basado en anti-cd47 y anti-cd20 para cancer hematologico.
TWI778443B (zh) 2019-11-12 2022-09-21 美商基利科學股份有限公司 Mcl1抑制劑
AU2020384883B2 (en) 2019-11-15 2023-11-16 Gilead Sciences, Inc. Triazole carbamate pyridyl sulfonamides as LPA receptor antagonists and uses thereof
CN111018831B (zh) * 2019-11-21 2022-05-31 中国药科大学 细胞凋亡信号调节激酶抑制剂及其应用
US20230105984A1 (en) 2019-12-23 2023-04-06 Svetlana Marukian Compositions and methods for the treatment of liver diseases and disorders
CA3165735A1 (en) 2019-12-24 2021-07-01 Carna Biosciences, Inc. Diacylglycerol kinase modulating compounds
BR112022014623A2 (pt) 2020-02-14 2022-09-13 Jounce Therapeutics Inc Anticorpos e proteínas de fusão que se ligam a ccr8 e usos dos mesmos
JP2023520650A (ja) 2020-03-30 2023-05-18 ギリアード サイエンシーズ， インコーポレイテッド （Ｓ）－６－（（（１－（ビシクロ［１．１．１］ペンタン－１－イル）－１Ｈ－１，２，３－トリアゾール－４－イル）２－メチル－１－オキソ－１，２－ジヒドロイソキノリン－５－イル）メチル）））アミノ）８－クロロ－（ネオペンチルアミノ）キノリン－３－カルボニトリルＣｏｔ阻害剤化合物の固体形態
AU2021245924B2 (en) 2020-04-02 2024-02-29 Gilead Sciences, Inc. Process for preparing a Cot inhibitor compound
US20230039553A1 (en) 2020-05-01 2023-02-09 Gilead Sciences, Inc. Cd73 compounds
CN115867556A (zh) 2020-06-03 2023-03-28 吉利德科学公司 Lpa受体拮抗剂及其用途
CN111808079A (zh) * 2020-08-05 2020-10-23 中国药科大学 吲哚类ask1小分子抑制剂及其制备方法和应用
CN114470217B (zh) * 2020-11-24 2023-06-20 深圳微芯生物科技股份有限公司 预防和治疗代谢异常或炎症引起的组织损伤的药物组合物
WO2022192428A1 (en) 2021-03-11 2022-09-15 Gilead Sciences, Inc. Glp-1r modulating compounds
US20230079863A1 (en) 2021-03-29 2023-03-16 Gilead Sciences, Inc. Khk inhibitors
TW202302145A (zh) 2021-04-14 2023-01-16 美商基利科學股份有限公司 ＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合及ＮＥＤＤ８活化酶Ｅ１調節次單元之共抑制以用於治療癌症
CN114246866B (zh) * 2021-04-28 2023-09-12 深圳微芯生物科技股份有限公司 用于治疗慢性肾病的药物及其用途
TW202400561A (zh) 2021-05-11 2024-01-01 美商基利科學股份有限公司 Lpa受體拮抗劑及其用途
KR20240007233A (ko) 2021-05-13 2024-01-16 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 Lpa 수용체 길항제 및 이의 용도
TW202313094A (zh) 2021-05-18 2023-04-01 美商基利科學股份有限公司 使用ＦＬＴ３Ｌ—Ｆｃ融合蛋白之方法
TW202304435A (zh) 2021-06-04 2023-02-01 美商基利科學股份有限公司 治療ｎａｓｈ之方法
TW202311256A (zh) 2021-06-18 2023-03-16 美商基利科學股份有限公司 用於治療ｆｘｒ誘發之搔癢之ｉｌ－３１調節劑
CA3220923A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
US11926628B2 (en) 2021-06-23 2024-03-12 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
US11976072B2 (en) 2021-06-23 2024-05-07 Gilead Sciences, Inc. Diacylglycerol kinase modulating compounds
AU2022298639A1 (en) 2021-06-23 2023-12-07 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
WO2023076983A1 (en) 2021-10-28 2023-05-04 Gilead Sciences, Inc. Pyridizin-3(2h)-one derivatives
AU2022376954A1 (en) 2021-10-29 2024-05-02 Gilead Sciences, Inc. Cd73 compounds
WO2023107956A1 (en) 2021-12-08 2023-06-15 Dragonfly Therapeutics, Inc. Proteins binding nkg2d, cd16 and 5t4
US11939318B2 (en) 2021-12-08 2024-03-26 Gilead Sciences, Inc. LPA receptor antagonists and uses thereof
WO2023107954A1 (en) 2021-12-08 2023-06-15 Dragonfly Therapeutics, Inc. Antibodies targeting 5t4 and uses thereof
US20230242508A1 (en) 2021-12-22 2023-08-03 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
WO2023122581A2 (en) 2021-12-22 2023-06-29 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
TW202340168A (zh) 2022-01-28 2023-10-16 美商基利科學股份有限公司 Ｐａｒｐ７抑制劑
TW202346277A (zh) 2022-03-17 2023-12-01 美商基利科學股份有限公司 Ｉｋａｒｏｓ鋅指家族降解劑及其用途
US20230355796A1 (en) 2022-03-24 2023-11-09 Gilead Sciences, Inc. Combination therapy for treating trop-2 expressing cancers
TW202345901A (zh) 2022-04-05 2023-12-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療結腸直腸癌之組合療法
TW202400138A (zh) 2022-04-21 2024-01-01 美商基利科學股份有限公司 Ｋｒａｓ ｇ１２ｄ調節化合物
US20240116928A1 (en) 2022-07-01 2024-04-11 Gilead Sciences, Inc. Cd73 compounds
US20240091351A1 (en) 2022-09-21 2024-03-21 Gilead Sciences, Inc. FOCAL IONIZING RADIATION AND CD47/SIRPa DISRUPTION ANTICANCER COMBINATION THERAPY
CN115844887B (zh) * 2022-12-28 2023-09-08 中国人民解放军空军军医大学 Selonsertib在制备治疗癌症的药物中的用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011008709A1 (en) * 2009-07-13 2011-01-20 Gilead Sciences, Inc. Apoptosis signal-regulating kinase inhibitors
WO2012003387A1 (en) * 2010-07-02 2012-01-05 Gilead Sciences, Inc. Apoptosis signal-regulating kinase inhibitors

Family Cites Families (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6159731A (en) 1997-02-12 2000-12-12 Massachusetts Institute Of Technology Daxx, a Fas-binding protein that activates JNK and apoptosis
US6881555B2 (en) 1999-03-19 2005-04-19 Aventis Pharmaceuticals Inc. AKT nucleic acids, polypeptides, and uses thereof
BR0009170A (pt) 1999-03-19 2002-04-30 Aventis Pharm Prod Inc ácidos nucléicos akt, polipeptìdeos e uso dos mesmos
AU2001275330A1 (en) * 2000-06-07 2001-12-17 Marc D. Andelman Fluid and electrical connected flow-through electrochemical cells, system and method
US20070237770A1 (en) 2001-11-30 2007-10-11 Albert Lai Novel compositions and methods in cancer
WO2005009470A1 (ja) 2003-07-28 2005-02-03 Osaka Industrial Promotion Organization Ａｓｋ１阻害剤を有効成分とする心不全治療薬およびそのスクリーニング方法
EP1794137A4 (en) 2004-09-27 2009-12-02 Kosan Biosciences Inc SPECIFIC KINASE INHIBITORS
US7696202B2 (en) 2004-11-10 2010-04-13 Synta Pharmaceuticals Corp. IL-12 modulatory compounds
EP1677113A1 (en) 2004-12-29 2006-07-05 Max-Delbrück-Centrum für Molekulare Medizin (MDC) Method for the identification of protein-protein interactions in disease related protein networks
US20070276050A1 (en) 2006-02-27 2007-11-29 Gilead Sciences, Inc. Methods for identifying ASK1 inhibitors useful for preventing and/or treating cardiovascular diseases
US20100029619A1 (en) 2006-08-04 2010-02-04 Takeda Pharmaceutical Company Limted Fused heterocyclic compound
WO2008042867A2 (en) 2006-09-29 2008-04-10 Emiliem Inc. Modulators of multiple kinases
AU2007333106A1 (en) 2006-12-08 2008-06-19 Asuragen, Inc. miR-20 regulated genes and pathways as targets for therapeutic intervention
EP1942104A1 (en) 2006-12-20 2008-07-09 sanofi-aventis Heteroarylcyclopropanecarboxamides and their use as pharmaceuticals
US8104727B2 (en) 2007-03-12 2012-01-31 Denis Joanisse Adjustable article support
US20090069288A1 (en) 2007-07-16 2009-03-12 Breinlinger Eric C Novel therapeutic compounds
CA2691448A1 (en) 2007-08-31 2009-03-05 Dominique Swinnen Triazolopyridine compounds and their use as ask inhibitors
JP5432982B2 (ja) 2008-03-31 2014-03-05 武田薬品工業株式会社 アポトーシスシグナル調節キナーゼ１阻害剤
US8178555B2 (en) 2008-06-24 2012-05-15 Takeda Pharmaceutical Company Limited Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors
WO2010045470A2 (en) 2008-10-15 2010-04-22 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Compositions, kits, and methods for identification, assessment, prevention, and therapy of hepatic disorders
WO2010056982A2 (en) 2008-11-17 2010-05-20 The George Washington University Compositions and methods for identifying autism spectrum disorders
WO2010111464A1 (en) 2009-03-27 2010-09-30 Merck Sharp & Dohme Corp. RNA INTERFERENCE MEDIATED INHIBITION OF APOPTOSIS SIGNAL-REGULATING KINASE 1 (ASK1) GENE EXPRESSION USING SHORT INTERFERING NUCLEIC ACID (siNA)
WO2011041293A1 (en) 2009-09-30 2011-04-07 Takeda Pharmaceutical Company Limited Pyrazolo [1, 5-a] pyrimidine derivatives as apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors
WO2011097079A1 (en) 2010-02-03 2011-08-11 Takeda Pharmaceutical Company Limited Apoptosis signal-regulating kinase 1 inhibitors
JP2013518909A (ja) 2010-02-08 2013-05-23 キナゲン，インク． アロステリックキナーゼ阻害が関係する治療方法および組成物
WO2011119894A2 (en) 2010-03-24 2011-09-29 Kinagen, Inc Heterocyclic compounds useful for kinase inhibition
WO2012068464A2 (en) 2010-11-18 2012-05-24 University Of Delaware Methods of treating and preventing thrombotic diseases using ask1 inhibitors
EP2651417B1 (en) 2010-12-16 2016-11-30 Calchan Limited Ask1 inhibiting pyrrolopyrimidine derivatives
WO2012115885A1 (en) 2011-02-22 2012-08-30 Caris Life Sciences Luxembourg Holdings, S.A.R.L. Circulating biomarkers
JP2014526032A (ja) 2011-06-07 2014-10-02 カリス ライフ サイエンシズ ルクセンブルク ホールディングス エス．アー．エール．エル． 癌に対する循環バイオマーカー
TW201837023A (zh) 2011-07-01 2018-10-16 美商基利科學股份有限公司 作為離子通道調節劑之稠合雜環化合物
US8924765B2 (en) 2011-07-03 2014-12-30 Ambiq Micro, Inc. Method and apparatus for low jitter distributed clock calibration
UY34573A (es) 2012-01-27 2013-06-28 Gilead Sciences Inc Inhibidor de la quinasa que regula la señal de la apoptosis
MA41252A (fr) 2014-12-23 2017-10-31 Gilead Sciences Inc Formes solides d'un inhibiteur d'ask 1
CA3202893A1 (en) 2014-12-23 2016-06-30 Gilead Science, Inc. Processes for preparing ask1 inhibitors

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011008709A1 (en) * 2009-07-13 2011-01-20 Gilead Sciences, Inc. Apoptosis signal-regulating kinase inhibitors
WO2012003387A1 (en) * 2010-07-02 2012-01-05 Gilead Sciences, Inc. Apoptosis signal-regulating kinase inhibitors

Also Published As

Publication number Publication date
US20140228412A1 (en) 2014-08-14
TWI487523B (zh) 2015-06-11
US9254284B2 (en) 2016-02-09
US20160235728A1 (en) 2016-08-18
CA3026738C (en) 2020-12-15
UA112098C2 (uk) 2016-07-25
AU2013201586B2 (en) 2015-01-22
AR089818A1 (es) 2014-09-17
CR20140405A (es) 2014-11-27
HK1204324A1 (zh) 2015-11-13
UY34573A (es) 2013-06-28
US20180099950A1 (en) 2018-04-12
KR20170128622A (ko) 2017-11-22
CA3026700A1 (en) 2013-08-01
IL233598A0 (en) 2014-08-31
HUE028641T2 (en) 2016-12-28
PH12014501697B1 (en) 2014-10-20
MD4601B1 (ru) 2018-11-30
TWI634890B (zh) 2018-09-11
ME02322B (me) 2016-06-20
TW201711684A (zh) 2017-04-01
AU2013201586C1 (en) 2015-06-18
CA3026738A1 (en) 2013-08-01
BR112014018355B1 (pt) 2021-10-05
IL257965A (en) 2018-05-31
US9873682B2 (en) 2018-01-23
EA201491283A1 (ru) 2014-12-30
PE20141822A1 (es) 2014-11-27
WO2013112741A1 (en) 2013-08-01
MX2014009075A (es) 2014-09-01
IL239311A0 (en) 2015-07-30
SG11201404348UA (en) 2014-08-28
MA35861B1 (fr) 2014-12-01
SMT201600047B (it) 2016-02-25
TW201334782A (zh) 2013-09-01
CN109438418A (zh) 2019-03-08
IL233598A (en) 2015-06-30
KR101707764B1 (ko) 2017-02-16
NZ739339A (en) 2019-07-26
US20140228411A1 (en) 2014-08-14
KR20170018474A (ko) 2017-02-17
ZA201405260B (en) 2016-05-25
CA2862030C (en) 2019-10-29
CA2862030A1 (en) 2013-08-01
TW201441213A (zh) 2014-11-01
PT2807151E (pt) 2016-01-28
KR20160004401A (ko) 2016-01-12
JP5770950B2 (ja) 2015-08-26
AP2014007836A0 (en) 2014-07-31
CN104080771A (zh) 2014-10-01
US10508100B2 (en) 2019-12-17
US8742126B2 (en) 2014-06-03
BR112014018355A8 (pt) 2017-07-11
US9333197B2 (en) 2016-05-10
DK2807151T3 (en) 2016-02-22
MX365954B (es) 2019-06-20
MD20140082A2 (ru) 2015-01-31
ES2558203T3 (es) 2016-02-02
US20170217933A1 (en) 2017-08-03
AR117113A2 (es) 2021-07-14
NZ754169A (en) 2021-01-29
US20130197037A1 (en) 2013-08-01
KR20190000898A (ko) 2019-01-03
EP2807151B1 (en) 2015-11-18
CO7061073A2 (es) 2014-09-19
IN2014DN06174A (ru) 2015-08-21
HRP20151399T1 (hr) 2016-01-29
SI2807151T1 (sl) 2016-08-31
AU2013201586A1 (en) 2013-08-15
CY1117201T1 (el) 2017-04-05
CN104080771B (zh) 2018-11-09
MX2019007348A (es) 2019-09-05
PL2807151T3 (pl) 2016-05-31
RS54492B1 (en) 2016-06-30
IL239311B (en) 2018-03-29
JP2015508749A (ja) 2015-03-23
CA3026700C (en) 2020-12-15
US9750730B2 (en) 2017-09-05
BR112014018355A2 (ru) 2017-06-20
TW201916877A (zh) 2019-05-01
KR101799739B1 (ko) 2017-11-20
PH12014501697A1 (en) 2014-10-20
KR20140117609A (ko) 2014-10-07
KR101582065B1 (ko) 2015-12-31
TWI561514B (en) 2016-12-11
CL2014001988A1 (es) 2014-11-03
CN109438418B (zh) 2021-04-13
EP2807151A1 (en) 2014-12-03
US20190248762A1 (en) 2019-08-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EA024746B1 (ru) Ингибитор регулирующей апоптотические сигналы киназы
WO2012120195A1 (en) New pyridazinone and pyridone compounds
AU2017201650B2 (en) Apoptosis signal-regulating kinase inhibitor
NZ754169B2 (en) Apoptosis signal-regulating kinase inhibitor